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Caracterização da Leishmania infantum e Leishmania (Viannia) braziliensis em cães provenientes da Região Metropolitana do Recife, PernambucoMEDEIROS, Rafael Acioli 31 January 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013 / CAPES / As Leishmanioses são uma antropozoonose com ampla distribuição geográfica e ocorrência em torno de 88 países. Na Leishmaniose visceral americana (LVA), os cães domésticos são considerados os principais reservatórios da L. infantum no ambiente domiciliar. Diferentes perfis epidemiológicos da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) têm sido caracterizados pela presença de casos humanos em áreas de colonizações antigas, sugerindo uma antropozoonose entre os animais domésticos por demonstrarem lesões tegumentares causadas pela Leishmania (Vianna) braziliensis. O diagnóstico das leishmanioses pode ser realizado através de métodos clínicos, epidemiológicos, parasitológicos, imunológicos e moleculares. Em áreas endêmicas o diagnóstico clínico e epidemiológico dessas zoonoses é dificultado pela similaridade clínica com outras doenças, tornando a utilização de exames laboratoriais de suma importância para confirmação diagnóstica. Em virtude da necessidade de diagnóstico especifico das leishmanioses na espécie canina, este trabalho tem como objetivo a utilização da PCR-RFLP, tendo como alvo o espaçador interno transcrito (ITS-1), para diferenciação das espécies de Leishmania em cães provenientes da Região Metropolitana do Recife. Foram coletadas 40 amostras de soro e medula de cães, 30 machos e 10 fêmeas, com idades entre 2 e 7 anos , que apresentaram suspeita clinica de leishmaniose quando atendidos no Hospital Veterinário da UFRPE. Foram realizados os testes diagnósticos de exame direto em medula e Reação indireta de imunoflorescência tanto para LTA quanto LVA. Além disso foi realizado a PCR-RFLP nas amostras de soro e urina para a pesquisa de L. infantum e L. (viannia) braziliensis. Dos 40 cães pesquisados 23 foram positivos para L.infantum e 17 foram negativos para as duas espécies pesquisadas. Quando comparado com os testes diagnósticos convencionais , 3 dos 23 cães foram positivos apenas na técnica molecular. Portanto, a ITS1-PCR RFLP pode ser uma importante ferramenta para o diagnostico e caracterização da leishmaniose canina em uma determinada região.
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Fungos agaricóides (agaricales, Basidiomycota) da reserva biológica saltinho, Pernambuco: diversidade e aspectos molecularesCoimbra, Victor Rafael Matos 31 January 2013 (has links)
Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-17T13:35:21Z
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Previous issue date: 2013 / Com o intuito de contribuir com o conhecimento taxonômico e filogenético dos membros
da ordem Agaricales em Pernambuco, foram realizadas sete visitas a campo, entre os
meses de julho de 2011 a abril de 2012, em um remanescente de Mata Atlântica: Reserva
Biológica de Saltinho, no município de Tamandaré. No total, foram coletados 82
espécimes, representando 17 espécies, sendo 10 delas possíveis espécies novas para a
ciência, uma representa, possivelmente, um novo registro para o Brasil, três são novos
registros para a região Nordeste e uma espécie ainda permanece indeterminada. O DNA
das possíveis espécies novas e de táxons de difícil identificação por caracteres
morfológicos foi extraído e a amplificação, purificação e sequenciamento das regiões ITS e
LSU do rDNA foram realizadas. Houve sucesso em 58% dos sequenciamentos da região
ITS e 66% da região LSU. Os procedimentos de extração, amplificação e/ou
sequenciamento das espécies Amanita sp., Camarophyllus sp., Hydropus sp.1 e
Rhodocollybia sp.2 não foram bem sucedidos, enquanto a seqüência obtida de
Hygrophorus sp. não apresentou qualidade satisfatória, sendo inviável para este estudo.
Para Collybia aurea, só houve sucesso na amplificação e sequenciamento da região LSU,
enquanto para Hygrophoraceae sp., Psathyrella sp., Marasmiellus volvatus, Rhodocollybia
sp.1, Marasmius sp. e Hydropus sp.2 foi obtido sucesso para ambas as regiões estudadas.
Baseado nas análises filogenéticas da região LSU pelo método de inferência bayesiana e
pelos BLASTn realizados com as sequências das regiões ITS e LSU, foi possível confirmar
a identidade de Collybia aurea, confirmar a identidade de Psathyrella sp., Rhodocollybia
sp.1, Marasmius sp. e Hydropus sp.2, bem como dar suporte as suas determinações como
novos táxons para a ciência.
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Polimorfismo no gene da MBL-2 em mulheres infectadas por Chlamydia trachomatis, cofator do câncer cervicalCatarina Simonetti, Ana 31 January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / A Chamydia trachomatis (C. trachomatis) é uma bactéria intracelular obrigatória,
sexualmente transmitida, que causa doença inflamatória pélvica, gravidez ectópica e
infertilidade. O papilomavírus humano (HPV) e a C. trachomatis são responsáveis
por infecções sexualmente transmissíveis (ISTs) tipo-específicas, que infectam a
pele, mucosas e o trato genital masculino e feminino, causando lesões, tanto
benignas quanto malignas. A lectina ligadora de manose (MBL, Mannose-Binding
Lectin) é uma proteína sérica da resposta imune inata capaz de ativar o sistema
complemento e de se ligar a resíduos de carboidratos, inclusive a manose, em
diferentes microrganismos. A deficiência ou polimorfismo gênico, dessa proteína,
associa-se a um aumento da susceptibilidade a muitas doenças infecciosas. Os
objetivos principais desse trabalho foram elaborar um protocolo para detecção da
infecção por C. trachomatis e investigar a freqüência do polimorfismo no primeiro
éxon do gene MBL2, correlacionando-os com a susceptibilidade à infecção por C.
trachomatis, através da reação da PCR em Tempo Real (Real-Time Polimerase
Chain Reaction), utilizando o SYBR® Green como fluoróforo. Para determinação do
protocolo de identificação da C. Trachomatis foram utilizadas 98 amostras de
secreção vaginal, oriundas de pacientes do Ambulatório Especializado da Mulher, da
Prefeitura Municipal do Recife-PE, Brasil. O diagnóstico da infecção foi dado pela
análise melting temperature assay. Aproximadamente, 14% (n=14) das amostras
foram positivas para a infecção. Todas as amostras foram confirmadas através da
análise em gel de agarose a 1%. Em relação à associação do polimorfismo do gene
MBL2 entre os grupos infectados e saudáveis, os resultados demonstraram que não
houve diferença estatística na freqüência dos alelos entre os grupos (64% vs. 74%)
(36% vs. 26%), respectivamente, alelos A e 0, p-value = 0.3112), não sendo
associado a um aumento na susceptibilidade à infecção pela C. trachomatis. Da
mesma forma, quando comparadas às freqüências genotípicas, o genótipo OO , no
grupo C. trachomatis-positivo, não mostrou diferença significativa em relação ao
grupo controle, 6% vs. 3%, respectivamente. Além disso, apesar do genótipo AA ,
no grupo controle, apresentar uma freqüência maior em relação ao grupo C.
trachomatis-positivo (47% vs. 33%), esta não foi significativa (p-value = 0.1430).
Todas as amostras estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg (χ2=2,65). Conclui-se
assim que com a metodologia proposta, pode-se facilmente detectar a presença de
C. trachomatis, em amostras de secreção vaginal, e que a presença do alelo
mutante O no gene da MBL2, não confere fator predisponente relevante para um
aumento na susceptibilidade à infecção por C. trachomatis
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Desenvolvimento de novas abordagens moleculares baseadas em PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) para detecção gênero-específica de plasmodiumMaria Lapa Montenegro, Lílian January 2002 (has links)
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Previous issue date: 2002 / Oligonucleotídeos foram construídos com base na sequência primária do
gene codificando o rRNA de Plasmodium para amplificar DNA de P. falciparum,
P. vivax, P. malariae e P. ovale, de maneira gênero-específica. Três sistemas
de PCR foram utilizados: PCR simples, hemi-nested PCR convencional e
hemi-nested PCR em um único tubo, desenvolvidos em nosso laboratório. Na
PCR simples, composta de 30 ciclos, foram utilizados os oligonucleotídeos GJ1
e HR842 (20 pmol/50μl), já testados por nosso grupo. Na hemi-nested PCR
convencional utilizou-se três oligonucleotídeos (GJ1, PGFO3 e HR842), em
duas reações sequenciais, sendo o PGFO3 construído durante o
desenvolvimento do presente trabalho, visando a detecção do gênero
Plasmodium. O par GJ1 e HR842 foram utilizados como oligonucleotídeos
externos na primeira reação, e o PGFO3 como interno, ancorado ao HR842 na
segunda reação. A hemi-nested PCR em um único tubo consistiu em 60
ciclos (92ºC, 30s; 58ºC, 30s e 72ºC, 45s), e concentrações limitantes de
oligonucleotídeos externos (4 pmols/50μl) participavam da PCR sem
competição com os oligonucleotídeos internos durante os primeiros 15 ciclos
da reação e 40 pmol/50μl de primers internos (imobilizados na face interna da
tampa do microtubo) foram introduzidos na PCR no 16º ciclo. As concentrações dos outros componentes da reação foram as mesmas utilizadas nas reações
convencionais de PCR. Observou-se que a quantidade mínima de DNA
genômico detectada pela PCR simples, hemi-nested PCR e hemi-nested
PCR em um único tubo foi de 10 pg; 0,01 pg e 0,1 pg, respectivamente. Apesar
da hemi-nested PCR em um único tubo ter sido menos sensível que a heminested
PCR convencional, é muito mais simples e conveniente, já que o risco
de contaminação cruzada é bem menor. Esses sistemas moleculares de
diagnóstico podem ser usados em situações quando se requer uma alta
sensibilidade e especificidade, tais como na avaliação da eficiência de
quimioterapia, detecção precoce de infecção e prevenção de transmissão a
partir de pacientes hipoparasitêmicos
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Avaliação da presença de Papilomavírus bovino em sêmen de touros (Bos taurus)SILVA, Maria Angélica Ramos da 31 January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os papilomavírus (PV) são vírus de DNA dupla fita que infectam o epitélio escamoso da
pele e mucosa. O papilomavírus bovino (BPV) apresenta 10 diferentes tipos (BPV-1 a 10) e
causam doenças em rebanhos de corte ou leiteiro, gerando grandes prejuízos econômicos aos
criadores. A presença de BPV já foi detectada em tecidos reprodutivos e fluídos corporais, tais
como sangue periférico, plasma sanguíneo, oócitos, ovário, útero, células do cúmulus, fluídos
uterinos, sêmen e espermatozóide, placenta e líquido amniótico. O objetivo deste trabalho foi
avaliar a presença do BPV, através da técnica PCR, em sêmen de touros (Bos taurus) fresco e
comercializado no Estado de Pernambuco. Para isso, foram utilizados primers de detecção geral
para PV e específicos para os tipos de BPV-1 a 6 em amostras de sêmen fresco e sêmen
comercial de touros da raça Gir Leiteiro. Foi detectada a presença de DNA de BPV em 100% das
amostras de sêmen analisadas. O tipo viral mais freqüente foi o BPV-2 em 100% das amostras
analisadas, seguido por BPV-3 em 48% das amostras e BPV- 4 presente em 6,9% das amostras
avaliadas. Houve detecção simultânea de mais um tipo de BPV em 51% das amostars de sêmen
analisadas. Estes resultados demonstram a importância do estudo e de um melhor detalhamento
da relação entre BPV e sêmen. Dada a grande utilização, a inseminação artificial com sêmen
contaminado com BPV pode ter importância similar à via sexual para a dispersão viral entre o
rebanho
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Pesquisa do DNA do vírus Epstein-Barr em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico: um estudo caso-controleSales Barbosa de Souza, Veridiana 31 January 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O vírus Epstein Barr (EBV) apresenta ampla distribuição mundial, estimando-se que
aproximadamente 90% da população está infectada. É agente etiológico da mononucleose
infecciosa e está também associado a várias doenças linfoproliferativas. Tem sido relacionado
ainda como fator desencadeador de algumas doenças auto-imunes, como o lúpus eritematoso
sistêmico (LES), que envolve múltiplos órgãos, com variadas manifestações clínicas. O papel
etiológico do EBV no LES ainda é pouco elucidado, mas há evidências de um mimetismo
molecular do vírus com os auto-antígenos típicos desta síndrome, que induziria a produção
dos auto-anticorpos. Muitos autores demonstraram associação entre EBV e LES através de
métodos sorológicos. No entanto, há poucos estudos que pesquisaram o DNA viral, e os
resultados são controversos. O objetivo deste estudo foi verificar a associação entre o LES e a
infecção pelo EBV, mensurada pela detecção do EBV-DNA no sangue e do anti-EBV IgG no
plasma, num estudo caso-controle. Foram recrutados 116 indivíduos atendidos no
Ambulatório de Reumatologia do Hospital das Clínicas/UFPE, de dezembro de 2009 a maio
de 2010. O grupo de casos foi composto por 59 pacientes com LES, os quais preencheram os
critérios estabelecidos pelo Colégio Americano de Reumatologia (1997). O grupo controle foi
constituído de 57 indivíduos sem LES e que não apresentavam outras doenças auto-imunes. O
protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital Agamenon
Magalhães, e o termo de consentimento livre e esclarecido foi obtido de todos pacientes. Foi
realizada PCR in house para detecção do EBV-DNA em células mononucleares do sangue
periférico (PBMC), e teste de avidez do anti-EBV IgG. Os dados da pesquisa foram
analisados com o programa Epi-Info versão 6.04. O EBV-DNA não foi detectado nas
amostras analisadas e o anti-EBV IgG foi reagente em 100% dos casos e controles, com alto
índice de avidez, indicando infecção passada pelo vírus. Portanto, neste estudo não foi
demonstrada a associação entre a infecção pelo EBV e o LES, tanto por métodos sorológicos
como pela PCR
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Validação da reação da cadeia de polimerase em tempo real para o diagnóstico de neurotoxoplasmose em pacientes com AIDSda Cunha Correia, Carolina 31 January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O diagnóstico da neurotoxoplasmose em portadores de aids pode ser difícil, requerendo distinção
com outras neuroinfecções e lesões tumorais. Os exames complementares disponíveis trazem
limitações para a confirmação da doença. A tese esteve composta por uma revisão da literatura,
abordando o estado de arte dos métodos disponíveis para diagnóstico de neurotoxoplasmose, e
por dois artigos: No primeiro, sob título Lesão cerebral única de origem toxoplásmica, foram
analisados aspectos de ressonância magnética convencional de 10 pacientes com
neurotoxoplasmose e lesão cerebral única, uma vez que essa forma de apresentação impõe maior
dificuldade diagnóstica sendo pouco explorada na literatura. As imagens foram avaliadas quanto à
localização das lesões, intensidade de sinal, tipo de realce após contraste, presença de alvo
excêntrico e captação meníngea, em aparelho Phillips 1,5 Tesla, modelo Achieva®. As lesões não
tiveram localização preferencial e ocorreram igualmente em regiões córtico-subcorticais e
profundas. Na seqüência T2, houve variabilidade de sinal, porém, no T1, predominaram padrões
de iso ou hipossinal, edema perilesional e realce anelar após contraste, aspectos similares aos de
lesões múltiplas, descritos na literatura. Concluiu-se que a presença desses padrões em lesões
únicas pode ser sugestiva da neurotoxoplasmose. O segundo artigo, sob título Influência de
características da neurotoxoplasmose na sensibilidade da PCR em tempo real em pacientes com
aids, consistiu de estudo de validação fase III da reação em cadeia da polimerase em tempo real
para detecção do gene B1 em sangue e líquor de pacientes com aids e diagnóstico presuntivo de
neurotoxoplasmose. O DNA foi extraído com kit QiAmp DNA®, marca Qiagen®; amplificado com
uso de primers da marca Applied Biosystem®, com seqüência específica de 98 pares de bases do
gene B1. As amostras foram processadas em termociclador Icicle®, marca Biorad®, operado pelo
programa PrimerExpress. Foram incluídos 135 pacientes com sintomatologia neurológica
encefálica, distribuídos em dois grupos: grupo I - 85 casos de neurotoxoplasmose e grupo II - 50
pacientes com manifestações neurológicas não toxoplásmicas. A PCR em tempo real em sangue
revelou sensibilidade de 1,5% (IC 95% 0,1% - 9%), especificidade igual a 100% (IC 95% 87,7% -
100%), valor preditivo positivo de 100% (IC 95% 5,5% - 100%) e valor preditivo negativo de 34,3%
(IC 95% 25,4% - 44,4%). No líquor, houve sensibilidade igual a 35,8% (IC 95% 25,7% - 47,3%),
especificidade igual a 100,0% (IC 95% 89,6% - 100,0%), valor preditivo positivo de 100.0% (IC
95% 85,4% - 100,0%) e valor preditivo negativo de 44,7% (IC 95% 34,5% - 55,3%). Nos pacientes
do grupo I com pleocitorraquia e quatro ou mais lesões encefálicas pelo T gondii, a positividade
liquórica da PCR foi significantemente maior do que a daqueles com normocitorraquia (p=0,021) e
com até três lesões encefálicas (p=0,026). Concluiu-se que a PCR em tempo real no sangue não
se mostrou útil ao diagnóstico; no LCR, o teste demonstrou baixa sensibilidade, mas alta
especificidade para o diagnóstico da neurotoxoplasmose. Maior número de lesões e maior
celularidade liquórica podem melhorar a sensibilidade do método. Sugerem-se novas pesquisas
que correlacionem esses aspectos com os parâmetros de acurácia do método
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An atypical case of disseminated cutaneous leishmaniasis due to Leishmania peruviana in the valleys of Ancash-PeruEspinoza-Morales, Diego, Lucchetti Rodríguez, Aldo, Silva-Caso, Wilmer, Suarez-Ognio, Luis, Pons, María J., Del Valle Mendoza, Juana Mercedes 11 1900 (has links)
We present an atypical case of disseminated cutaneous leishmaniasis in the Sihuas district, located in the Andean valleys of Ancash-Peru. A 62-year-old man with no particular medical history presented multiple lesions located on the inferior abdomen, lumbar region and the right anterior thigh. Histological analysis found leishmanial amastigotes in the lesion sample, the Montenegro reaction was positive for Leishmania spp, and the polymerase chain reaction was positive for Leishmania peruviana. In conclusion, the atypical presentation of this disease may be related to the presence of an uncommon parasite strain or host immune deficiencies. The molecular identification of the etiology for disseminated leishmaniasis, will allow a better understanding of the presentation and proper treatment, as well as associated risk factors.
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Návrh a optimalizace multiplex RT-PCR pro paralelní analýzu míry exprese (sub)isoforem metalothioneinůPetrlák, František January 2019 (has links)
This diploma thesis contains a literary overview including the basic characteristics of metallothioneins, a summary of their functional properties and the cell processes affected by them. The practical part of the thesis deals with the issue of metallothioneins as potential tumour markers using the multiplex RT-PCR method, for which specific primers were designed, with the subsequent sequencing of their products. The following step involved a study of expression using the PCR method for selected MT1A, MT2A and MT3 genes after treating cell lines with cisplatin. Experiments were carried out on PNT1A, LNCaP and DU145 prostatic cell lines. Despite a very high similarity of the individual isoforms of metallothioneins, a triplex of three genes for two cell lines, PNT1A and DU145, was created. Upon a statistical evaluation of data obtained via the method of polymerase chain reaction in real time, it was found that, after the application of cisplatin, there was an increase in metallothionein expression.
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Detection and Identification of Acinobacillus pleuropneumoniae serotype 5 by multiplex Polymerase Chain ReactionLo, Terry 25 August 1997 (has links)
Traditional serologic assays of Actinobacillus pleuropeumoniae often have problems with cross-reactivity. To avoid the complications of antibody-antigen reactions, a PCR assay was developed to detect Actinobacillus pleuropneumoniae and identify serotype 5 strains. Primers specific to the conserved capsular export region of A. pleuropneumoniae amplified a 0.7 kb DNA band in all strains with the exception of serotype 4. A second set of primers specific to the unique capsular biosynthesis region of serotype 5 amplified a unique 1.1 kb band for serotype 5 only. The sensitivity of this assay was determined to be less than 100 colony forming units. This PCR assay enables us to detect A. pleuronpeumoniae and definitively distinguishes serotype 5 strains from other serotyes. / Master of Science
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