Submitted by Milena Dias (milena.dias@ufpe.br) on 2015-03-12T17:45:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Rafael Medeiros.pdf: 841724 bytes, checksum: 770fac09975639de3352fde1d0ea2ec3 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T17:45:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Rafael Medeiros.pdf: 841724 bytes, checksum: 770fac09975639de3352fde1d0ea2ec3 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES / As Leishmanioses são uma antropozoonose com ampla distribuição geográfica e ocorrência em torno de 88 países. Na Leishmaniose visceral americana (LVA), os cães domésticos são considerados os principais reservatórios da L. infantum no ambiente domiciliar. Diferentes perfis epidemiológicos da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) têm sido caracterizados pela presença de casos humanos em áreas de colonizações antigas, sugerindo uma antropozoonose entre os animais domésticos por demonstrarem lesões tegumentares causadas pela Leishmania (Vianna) braziliensis. O diagnóstico das leishmanioses pode ser realizado através de métodos clínicos, epidemiológicos, parasitológicos, imunológicos e moleculares. Em áreas endêmicas o diagnóstico clínico e epidemiológico dessas zoonoses é dificultado pela similaridade clínica com outras doenças, tornando a utilização de exames laboratoriais de suma importância para confirmação diagnóstica. Em virtude da necessidade de diagnóstico especifico das leishmanioses na espécie canina, este trabalho tem como objetivo a utilização da PCR-RFLP, tendo como alvo o espaçador interno transcrito (ITS-1), para diferenciação das espécies de Leishmania em cães provenientes da Região Metropolitana do Recife. Foram coletadas 40 amostras de soro e medula de cães, 30 machos e 10 fêmeas, com idades entre 2 e 7 anos , que apresentaram suspeita clinica de leishmaniose quando atendidos no Hospital Veterinário da UFRPE. Foram realizados os testes diagnósticos de exame direto em medula e Reação indireta de imunoflorescência tanto para LTA quanto LVA. Além disso foi realizado a PCR-RFLP nas amostras de soro e urina para a pesquisa de L. infantum e L. (viannia) braziliensis. Dos 40 cães pesquisados 23 foram positivos para L.infantum e 17 foram negativos para as duas espécies pesquisadas. Quando comparado com os testes diagnósticos convencionais , 3 dos 23 cães foram positivos apenas na técnica molecular. Portanto, a ITS1-PCR RFLP pode ser uma importante ferramenta para o diagnostico e caracterização da leishmaniose canina em uma determinada região.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-17T13:35:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Victor Rafael Coimbra.pdf: 2813070 bytes, checksum: db94506ce452b12ba7734f42b48a4593 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-17T13:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Victor Rafael Coimbra.pdf: 2813070 bytes, checksum: db94506ce452b12ba7734f42b48a4593 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / Com o intuito de contribuir com o conhecimento taxonômico e filogenético dos membros da ordem Agaricales em Pernambuco, foram realizadas sete visitas a campo, entre os meses de julho de 2011 a abril de 2012, em um remanescente de Mata Atlântica: Reserva Biológica de Saltinho, no município de Tamandaré. No total, foram coletados 82 espécimes, representando 17 espécies, sendo 10 delas possíveis espécies novas para a ciência, uma representa, possivelmente, um novo registro para o Brasil, três são novos registros para a região Nordeste e uma espécie ainda permanece indeterminada. O DNA das possíveis espécies novas e de táxons de difícil identificação por caracteres morfológicos foi extraído e a amplificação, purificação e sequenciamento das regiões ITS e LSU do rDNA foram realizadas. Houve sucesso em 58% dos sequenciamentos da região ITS e 66% da região LSU. Os procedimentos de extração, amplificação e/ou sequenciamento das espécies Amanita sp., Camarophyllus sp., Hydropus sp.1 e Rhodocollybia sp.2 não foram bem sucedidos, enquanto a seqüência obtida de Hygrophorus sp. não apresentou qualidade satisfatória, sendo inviável para este estudo. Para Collybia aurea, só houve sucesso na amplificação e sequenciamento da região LSU, enquanto para Hygrophoraceae sp., Psathyrella sp., Marasmiellus volvatus, Rhodocollybia sp.1, Marasmius sp. e Hydropus sp.2 foi obtido sucesso para ambas as regiões estudadas. Baseado nas análises filogenéticas da região LSU pelo método de inferência bayesiana e pelos BLASTn realizados com as sequências das regiões ITS e LSU, foi possível confirmar a identidade de Collybia aurea, confirmar a identidade de Psathyrella sp., Rhodocollybia sp.1, Marasmius sp. e Hydropus sp.2, bem como dar suporte as suas determinações como novos táxons para a ciência.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1525_1.pdf: 3364712 bytes, checksum: 10443b95f96f92a8d3273aef9e3944b3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / A Chamydia trachomatis (C. trachomatis) é uma bactéria intracelular obrigatória, sexualmente transmitida, que causa doença inflamatória pélvica, gravidez ectópica e infertilidade. O papilomavírus humano (HPV) e a C. trachomatis são responsáveis por infecções sexualmente transmissíveis (ISTs) tipo-específicas, que infectam a pele, mucosas e o trato genital masculino e feminino, causando lesões, tanto benignas quanto malignas. A lectina ligadora de manose (MBL, Mannose-Binding Lectin) é uma proteína sérica da resposta imune inata capaz de ativar o sistema complemento e de se ligar a resíduos de carboidratos, inclusive a manose, em diferentes microrganismos. A deficiência ou polimorfismo gênico, dessa proteína, associa-se a um aumento da susceptibilidade a muitas doenças infecciosas. Os objetivos principais desse trabalho foram elaborar um protocolo para detecção da infecção por C. trachomatis e investigar a freqüência do polimorfismo no primeiro éxon do gene MBL2, correlacionando-os com a susceptibilidade à infecção por C. trachomatis, através da reação da PCR em Tempo Real (Real-Time Polimerase Chain Reaction), utilizando o SYBR® Green como fluoróforo. Para determinação do protocolo de identificação da C. Trachomatis foram utilizadas 98 amostras de secreção vaginal, oriundas de pacientes do Ambulatório Especializado da Mulher, da Prefeitura Municipal do Recife-PE, Brasil. O diagnóstico da infecção foi dado pela análise melting temperature assay. Aproximadamente, 14% (n=14) das amostras foram positivas para a infecção. Todas as amostras foram confirmadas através da análise em gel de agarose a 1%. Em relação à associação do polimorfismo do gene MBL2 entre os grupos infectados e saudáveis, os resultados demonstraram que não houve diferença estatística na freqüência dos alelos entre os grupos (64% vs. 74%) (36% vs. 26%), respectivamente, alelos A e 0, p-value = 0.3112), não sendo associado a um aumento na susceptibilidade à infecção pela C. trachomatis. Da mesma forma, quando comparadas às freqüências genotípicas, o genótipo OO , no grupo C. trachomatis-positivo, não mostrou diferença significativa em relação ao grupo controle, 6% vs. 3%, respectivamente. Além disso, apesar do genótipo AA , no grupo controle, apresentar uma freqüência maior em relação ao grupo C. trachomatis-positivo (47% vs. 33%), esta não foi significativa (p-value = 0.1430). Todas as amostras estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg (χ2=2,65). Conclui-se assim que com a metodologia proposta, pode-se facilmente detectar a presença de C. trachomatis, em amostras de secreção vaginal, e que a presença do alelo mutante O no gene da MBL2, não confere fator predisponente relevante para um aumento na susceptibilidade à infecção por C. trachomatis

Made available in DSpace on 2014-06-12T17:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4409_1.pdf: 676822 bytes, checksum: 4a1153b3912f6483c79f20c422b118f1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2002 / Oligonucleotídeos foram construídos com base na sequência primária do gene codificando o rRNA de Plasmodium para amplificar DNA de P. falciparum, P. vivax, P. malariae e P. ovale, de maneira gênero-específica. Três sistemas de PCR foram utilizados: PCR simples, hemi-nested PCR convencional e hemi-nested PCR em um único tubo, desenvolvidos em nosso laboratório. Na PCR simples, composta de 30 ciclos, foram utilizados os oligonucleotídeos GJ1 e HR842 (20 pmol/50μl), já testados por nosso grupo. Na hemi-nested PCR convencional utilizou-se três oligonucleotídeos (GJ1, PGFO3 e HR842), em duas reações sequenciais, sendo o PGFO3 construído durante o desenvolvimento do presente trabalho, visando a detecção do gênero Plasmodium. O par GJ1 e HR842 foram utilizados como oligonucleotídeos externos na primeira reação, e o PGFO3 como interno, ancorado ao HR842 na segunda reação. A hemi-nested PCR em um único tubo consistiu em 60 ciclos (92ºC, 30s; 58ºC, 30s e 72ºC, 45s), e concentrações limitantes de oligonucleotídeos externos (4 pmols/50μl) participavam da PCR sem competição com os oligonucleotídeos internos durante os primeiros 15 ciclos da reação e 40 pmol/50μl de primers internos (imobilizados na face interna da tampa do microtubo) foram introduzidos na PCR no 16º ciclo. As concentrações dos outros componentes da reação foram as mesmas utilizadas nas reações convencionais de PCR. Observou-se que a quantidade mínima de DNA genômico detectada pela PCR simples, hemi-nested PCR e hemi-nested PCR em um único tubo foi de 10 pg; 0,01 pg e 0,1 pg, respectivamente. Apesar da hemi-nested PCR em um único tubo ter sido menos sensível que a heminested PCR convencional, é muito mais simples e conveniente, já que o risco de contaminação cruzada é bem menor. Esses sistemas moleculares de diagnóstico podem ser usados em situações quando se requer uma alta sensibilidade e especificidade, tais como na avaliação da eficiência de quimioterapia, detecção precoce de infecção e prevenção de transmissão a partir de pacientes hipoparasitêmicos

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:02:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3670_1.pdf: 805127 bytes, checksum: 81880f8507596b7cf1777659e6161060 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os papilomavírus (PV) são vírus de DNA dupla fita que infectam o epitélio escamoso da pele e mucosa. O papilomavírus bovino (BPV) apresenta 10 diferentes tipos (BPV-1 a 10) e causam doenças em rebanhos de corte ou leiteiro, gerando grandes prejuízos econômicos aos criadores. A presença de BPV já foi detectada em tecidos reprodutivos e fluídos corporais, tais como sangue periférico, plasma sanguíneo, oócitos, ovário, útero, células do cúmulus, fluídos uterinos, sêmen e espermatozóide, placenta e líquido amniótico. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença do BPV, através da técnica PCR, em sêmen de touros (Bos taurus) fresco e comercializado no Estado de Pernambuco. Para isso, foram utilizados primers de detecção geral para PV e específicos para os tipos de BPV-1 a 6 em amostras de sêmen fresco e sêmen comercial de touros da raça Gir Leiteiro. Foi detectada a presença de DNA de BPV em 100% das amostras de sêmen analisadas. O tipo viral mais freqüente foi o BPV-2 em 100% das amostras analisadas, seguido por BPV-3 em 48% das amostras e BPV- 4 presente em 6,9% das amostras avaliadas. Houve detecção simultânea de mais um tipo de BPV em 51% das amostars de sêmen analisadas. Estes resultados demonstram a importância do estudo e de um melhor detalhamento da relação entre BPV e sêmen. Dada a grande utilização, a inseminação artificial com sêmen contaminado com BPV pode ter importância similar à via sexual para a dispersão viral entre o rebanho

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:29:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1145_1.pdf: 2388404 bytes, checksum: d5d1c640b2454e7af3e22d1b54b5df68 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O vírus Epstein Barr (EBV) apresenta ampla distribuição mundial, estimando-se que aproximadamente 90% da população está infectada. É agente etiológico da mononucleose infecciosa e está também associado a várias doenças linfoproliferativas. Tem sido relacionado ainda como fator desencadeador de algumas doenças auto-imunes, como o lúpus eritematoso sistêmico (LES), que envolve múltiplos órgãos, com variadas manifestações clínicas. O papel etiológico do EBV no LES ainda é pouco elucidado, mas há evidências de um mimetismo molecular do vírus com os auto-antígenos típicos desta síndrome, que induziria a produção dos auto-anticorpos. Muitos autores demonstraram associação entre EBV e LES através de métodos sorológicos. No entanto, há poucos estudos que pesquisaram o DNA viral, e os resultados são controversos. O objetivo deste estudo foi verificar a associação entre o LES e a infecção pelo EBV, mensurada pela detecção do EBV-DNA no sangue e do anti-EBV IgG no plasma, num estudo caso-controle. Foram recrutados 116 indivíduos atendidos no Ambulatório de Reumatologia do Hospital das Clínicas/UFPE, de dezembro de 2009 a maio de 2010. O grupo de casos foi composto por 59 pacientes com LES, os quais preencheram os critérios estabelecidos pelo Colégio Americano de Reumatologia (1997). O grupo controle foi constituído de 57 indivíduos sem LES e que não apresentavam outras doenças auto-imunes. O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital Agamenon Magalhães, e o termo de consentimento livre e esclarecido foi obtido de todos pacientes. Foi realizada PCR in house para detecção do EBV-DNA em células mononucleares do sangue periférico (PBMC), e teste de avidez do anti-EBV IgG. Os dados da pesquisa foram analisados com o programa Epi-Info versão 6.04. O EBV-DNA não foi detectado nas amostras analisadas e o anti-EBV IgG foi reagente em 100% dos casos e controles, com alto índice de avidez, indicando infecção passada pelo vírus. Portanto, neste estudo não foi demonstrada a associação entre a infecção pelo EBV e o LES, tanto por métodos sorológicos como pela PCR

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3566_1.pdf: 7927294 bytes, checksum: add9c73fe4506901113309a0dc549513 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O diagnóstico da neurotoxoplasmose em portadores de aids pode ser difícil, requerendo distinção com outras neuroinfecções e lesões tumorais. Os exames complementares disponíveis trazem limitações para a confirmação da doença. A tese esteve composta por uma revisão da literatura, abordando o estado de arte dos métodos disponíveis para diagnóstico de neurotoxoplasmose, e por dois artigos: No primeiro, sob título Lesão cerebral única de origem toxoplásmica, foram analisados aspectos de ressonância magnética convencional de 10 pacientes com neurotoxoplasmose e lesão cerebral única, uma vez que essa forma de apresentação impõe maior dificuldade diagnóstica sendo pouco explorada na literatura. As imagens foram avaliadas quanto à localização das lesões, intensidade de sinal, tipo de realce após contraste, presença de alvo excêntrico e captação meníngea, em aparelho Phillips 1,5 Tesla, modelo Achieva®. As lesões não tiveram localização preferencial e ocorreram igualmente em regiões córtico-subcorticais e profundas. Na seqüência T2, houve variabilidade de sinal, porém, no T1, predominaram padrões de iso ou hipossinal, edema perilesional e realce anelar após contraste, aspectos similares aos de lesões múltiplas, descritos na literatura. Concluiu-se que a presença desses padrões em lesões únicas pode ser sugestiva da neurotoxoplasmose. O segundo artigo, sob título Influência de características da neurotoxoplasmose na sensibilidade da PCR em tempo real em pacientes com aids, consistiu de estudo de validação fase III da reação em cadeia da polimerase em tempo real para detecção do gene B1 em sangue e líquor de pacientes com aids e diagnóstico presuntivo de neurotoxoplasmose. O DNA foi extraído com kit QiAmp DNA®, marca Qiagen®; amplificado com uso de primers da marca Applied Biosystem®, com seqüência específica de 98 pares de bases do gene B1. As amostras foram processadas em termociclador Icicle®, marca Biorad®, operado pelo programa PrimerExpress. Foram incluídos 135 pacientes com sintomatologia neurológica encefálica, distribuídos em dois grupos: grupo I - 85 casos de neurotoxoplasmose e grupo II - 50 pacientes com manifestações neurológicas não toxoplásmicas. A PCR em tempo real em sangue revelou sensibilidade de 1,5% (IC 95% 0,1% - 9%), especificidade igual a 100% (IC 95% 87,7% - 100%), valor preditivo positivo de 100% (IC 95% 5,5% - 100%) e valor preditivo negativo de 34,3% (IC 95% 25,4% - 44,4%). No líquor, houve sensibilidade igual a 35,8% (IC 95% 25,7% - 47,3%), especificidade igual a 100,0% (IC 95% 89,6% - 100,0%), valor preditivo positivo de 100.0% (IC 95% 85,4% - 100,0%) e valor preditivo negativo de 44,7% (IC 95% 34,5% - 55,3%). Nos pacientes do grupo I com pleocitorraquia e quatro ou mais lesões encefálicas pelo T gondii, a positividade liquórica da PCR foi significantemente maior do que a daqueles com normocitorraquia (p=0,021) e com até três lesões encefálicas (p=0,026). Concluiu-se que a PCR em tempo real no sangue não se mostrou útil ao diagnóstico; no LCR, o teste demonstrou baixa sensibilidade, mas alta especificidade para o diagnóstico da neurotoxoplasmose. Maior número de lesões e maior celularidade liquórica podem melhorar a sensibilidade do método. Sugerem-se novas pesquisas que correlacionem esses aspectos com os parâmetros de acurácia do método

We present an atypical case of disseminated cutaneous leishmaniasis in the Sihuas district, located in the Andean valleys of Ancash-Peru. A 62-year-old man with no particular medical history presented multiple lesions located on the inferior abdomen, lumbar region and the right anterior thigh. Histological analysis found leishmanial amastigotes in the lesion sample, the Montenegro reaction was positive for Leishmania spp, and the polymerase chain reaction was positive for Leishmania peruviana. In conclusion, the atypical presentation of this disease may be related to the presence of an uncommon parasite strain or host immune deficiencies. The molecular identification of the etiology for disseminated leishmaniasis, will allow a better understanding of the presentation and proper treatment, as well as associated risk factors.

This diploma thesis contains a literary overview including the basic characteristics of metallothioneins, a summary of their functional properties and the cell processes affected by them. The practical part of the thesis deals with the issue of metallothioneins as potential tumour markers using the multiplex RT-PCR method, for which specific primers were designed, with the subsequent sequencing of their products. The following step involved a study of expression using the PCR method for selected MT1A, MT2A and MT3 genes after treating cell lines with cisplatin. Experiments were carried out on PNT1A, LNCaP and DU145 prostatic cell lines. Despite a very high similarity of the individual isoforms of metallothioneins, a triplex of three genes for two cell lines, PNT1A and DU145, was created. Upon a statistical evaluation of data obtained via the method of polymerase chain reaction in real time, it was found that, after the application of cisplatin, there was an increase in metallothionein expression.

Traditional serologic assays of Actinobacillus pleuropeumoniae often have problems with cross-reactivity. To avoid the complications of antibody-antigen reactions, a PCR assay was developed to detect Actinobacillus pleuropneumoniae and identify serotype 5 strains. Primers specific to the conserved capsular export region of A. pleuropneumoniae amplified a 0.7 kb DNA band in all strains with the exception of serotype 4. A second set of primers specific to the unique capsular biosynthesis region of serotype 5 amplified a unique 1.1 kb band for serotype 5 only. The sensitivity of this assay was determined to be less than 100 colony forming units. This PCR assay enables us to detect A. pleuronpeumoniae and definitively distinguishes serotype 5 strains from other serotyes. / Master of Science