O objetivo deste estudo foi analisar a participação do PCV2 no desenvolvimento de ulcerações gástricas em suínos. Descrevem-se as lesões macroscópicas e histopatológicas nas diferentes zonas do estômago de suínos naturalmente infectados pelo PCV2 e H. pylori. As lesões foram descritas nas diferentes zonas do estômago. Os estômagos coletados eram provenientes de granjas com diagnóstico prévio de infecção pelo PCV2 durante os anos de 2006 à 2008. A presença dos agentes foi verificada por técnicas de imunoistoquímica (IHQ). Dentre os 63 estômagos processados, 30 não apresentavam ulcerações no quadrilátero, sendo que 16 deles apresentavam marcação anti-PCV2 positiva em alguma das regiões analisadas. Apenas 06 casos não apresentavam marcação anti-PCV2 nos dos tecidos testados (estômago e linfonodo). Marcação positiva anti-PCV2 foi verificada em 56 linfonodos, dos quais 28 estômagos foram positivos para PCV2 em alguma zona da mucosa glandular. Grandes quantidades de antígeno do PCV2 foram observadas pela IHQ no citoplasma, núcleo e restos necróticos de células intralesionais das glândulas gástricas nas regiões do antro e cárdia; entretanto, na região do fundo, a marcação de IHQ anti-PCV2 foi restrita às células da superfície mucosa e fossetas gástricas. Marcação de IHQ anti-H. pylori foi identificada em 27 casos, principalmente, na superfície mucosa e fossetas gástricas no antro. A associação de antígenos PCV2 com células produtoras de muco lesadas na zona glandular gástrica sugere o envolvimento de PCV2 como um fator adicional para o desenvolvimento de úlceras gástricas em suínos. / The aim of this study was to describe macroscopical and histopathological found in different zones of stomachs collected from pigs naturally infected with PCV2 and H. pylori. lesions were described in the different zones of the stomach. Stomachs were collected during the years of 2006 to 2008 from herds previously diagnosed as positive for PCV2 infection. The presence of the agents was determined by immunohistochemical techniques. Among 63 stomachs examined, ulceration of the Pars oesophagica was not observed in 30 stomachs, although, 16 of them showed positive PCV2 immunostaining in some of the areas tested. PCV2 immunostaining was not observed in only six cases in any of the tested tissues (stomach and lymph node). PCV2 positive immunostaining was observed in 56 lymph nodes and in some zones of the glandular mucosa, in 28 stomachs. Large amounts of PCV2 antigen were observed in the cytoplasm and nucleus of intralesional cells and in debris of gastric glands of antrum and cardia. However, anti-PCV2 immunostaining was restricted to superficial mucosal cells and gastric pits, in the fundus. H. pylori immunostaining was observed in 27 cases, mainly pn the mucosal surface and gastric pits of the antrum. The association of PCV2 antigen with damaged glandular mucus-producing cells in the gastric glandular zone suggests a role of PCV2 as an additional factor for the development of swine gastric ulcers.

Pneumocystis é um importante patógeno oportunista que pode causar um quadro de pneumonia intersticial fatal em animais infectados por alguma doença imunodepressora. Pneumocystis sp. tem sido identificado em suínos domésticos e selvagens coinfectados com o circovírus suíno tipo 2 (PCV2) que desenvolvem a síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS). O presente trabalho analisou 78 javalis (Sus scrofa) com histórico de SMDS procedentes de 6 diferentes propriedades com sistema de confinamento intensivo no Rio Grande do Sul no período de março de 2006 a junho de 2008. Amostras de tecido pulmonar de seis javalis que não desenvolveram clinicamente a SMDS, assim como, amostras de suínos procedentes de abatedouros dos Estados do Rio Grande do Sul e Mato Grosso foram incluídas nas análises molecular e filogenética do trabalho. O teste de imunohistoquímica (IHQ) para a detecção de Pneumocystis sp. foi positivo em 50% dos pulmões analisados. A IHQ para a detecção de PCV2 foi positiva em 37% dos animais, sendo que o linfonodo mesentérico foi o órgão que apresentou maior grau de marcação positiva. Coinfecção entre Pneumocystis sp. e PCV2 foi confirmada pela IHQ em 20,5% dos javalis. O teste de nested-PCR dos genes mtLSU rRNA e mtSSU rRNA identificou a presença de material genético de Pneumocystis sp. em pulmões de javalis que desenvolveram a SMDS e em pulmões de javalis que não apresentaram clinicamente a doença, sugerindo que somente a presença de Pneumocystis sp. não se caracteriza como causa suficiente para o desenvolvimento de pneumonia intersticial. Identificou-se pela análise filogenética que javalis e suínos no Brasil são afetados pela mesma espécie de Pneumocystis sp. e que esta subdividese em dois grupos distintos. / Pneumocystis is an important opportunistic pathogen that may cause lethal interstitial pneumonia in infected animals due to some immunosuppressive disease. Pneumocystis sp. has been found in domestic and feral swine co infected with porcine circovirus type 2 (PCV2) that developed the postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). This study analyzed 78 wild boars (Sus scrofa) with PMWS background from 6 different farms with intensive confinement system in Rio Grande do Sul from March 2006 to June 2008. The lung tissue samples of six wild boars that did not develop PMWS, as well as the swine samples from slaughterhouses in Rio Grande do Sul and Mato Grosso were included in the molecular and phylogenetic analyses of this study. The immunohistochemistry test (IHC) for detection of Pneumocystis sp. was positive in 50% of the analyzed lungs. The IHC for PCV2 detection was positive in 37% of the animals and the mesenteric lymph node was the organ with the highest degree of positive staining. Co infection in Pneumocystis sp. and PCV2 was confirmed by IHC in 20.5% of wild boars. The nested-PCR test of the mtLSU rRNA and mtSSU rRNA genes identified the presence of genetic material of Pneumocystis sp. in lungs of wild boars that developed the PWMS and in wild boars that did not presented clinical disease, which may mean that only the presence of Pneumocystis sp. was not characterized as sufficient cause to interstitial pneumonia development. Through phylogenetic analysis it has been identified that wild boars and swine in Brazil are affected by the same specie of Pneumocystis sp. and its subdivision in two different groups.

Porcine circovirus type 2 (PCV2) is a small, non-enveloped, single-stranded DNA virus that causes disease in pigs and is an economically important pathogen affecting pig populations worldwide. PCV2 contains two major open reading frames (ORF): ORF1 encodes two replicase proteins and ORF2 encodes the immunogenic capsid protein. There are three genotypes of PCV2 (PCV2a, PCV2b, and PCV2c), but vaccines available for PCV2 infection are only targeted against PCV2a. The objective of this thesis was to create viable chimeric PCV2 viruses with an ORF2 displaying genetic diversity from all PCV2 genotypes by synthetic DNA shuffling. Variation was identified at 55 amino acid positions in the ORF2 gene among 853 PCV2 capsid gene sequences available in the GenBank database. Degenerate oligonucleotide primers spanning ORF2 were synthesized to contain this naturally observed sequence diversity. Sets of overlapping oligonucleotide primers were fused together using overlap extension PCR to create full-length shuffled ORF2 sequences. The shuffled library of the ORF2 genes was subsequently cloned into the genomic backbone of a wildtype PCV2a infectious DNA clone and transfected into porcine kidney cells (PK-15). After transfection and infection of PK-15 cells, viability of chimeric viruses was screened by immunofluorescence assay (IFA) using anti-PCV2 Rep antibodies. PCR was used to amplify the genomes of viable shuffled viruses from infected cells. PCV2 viruses containing an ORF2 displaying genetic diversity from PCV2a, PCV2b, and PCV2c were isolated in vitro. These shuffled PCV2 viruses may be used as potential candidates for a broadly-protective PCV2 vaccine, although additional studies are warranted to determine in vivo infectivity and pathogenicity. / Master of Science

The non-pathogenic porcine circovirus type 1 (PCV1) was originally isolated as a persistent contaminant of the porcine kidney cell line PK-15. Whereas, porcine circovirus type 2 (PCV2) causes postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) in pigs, which is devastating to the swine industry. My objectives were to determine the effect of maternally derived antibodies on PCV2 infection, assess the role of 2 amino acid substitutions in the PCV2 capsid protein in PCV2 attenuation, evaluate the effect of Rep gene exchange between PCV1 and PCV2 on growth characteristics of a chimeric PCV2, and evaluate the role of open reading frame (ORF) 3 of PCV2 in virus replication and pathogenesis in pigs. Under field conditions, PCV2 infection is widespread and most breeding pigs are seropositive. Assessment of the role of PCV2 maternal antibodies in preventing PCV2 infection in piglets provided evidence that higher levels of maternal antibody provide more protection to piglets. Two amino acid substitutions in the PCV2 capsid protein that enhanced virus replication in vitro and attenuated the virus in vivo were evaluated for their pathogenicity in pigs. The results indicated that P110A and R191S are collectively responsible for virus attenuation. PCV1 replicates better in PK-15 cells and grows at least 1-log titer higher than PCV2. A chimeric PCV with the rep gene of PCV1 replacing that of PCV2 in the genomic backbone of PCV2 replicated more rapidly than PCV1 and PCV2, and more efficiently than PCV2, although to a titer similar to PCV1. The ORF3 of PCV2 is believed to encode a protein involved in apoptosis. The ORF3 start codon was mutated from ATG to GTG and the resulting mutant muPCV2 was infectious in vitro and in pigs; therefore ORF3 is dispensable for virus replication. The pathogenicity of muPCV2 was compared with PCV2 in vivo. Delayed viremia and seroconversion, decreased viral loads, lower level of IgG antibodies, and lower amounts of PCV2 antigen in mesenteric lymph nodes suggested attenuation of muPCV2. However, there was no significant difference in histological or gross lesions in tissues between PCV2- and muPCV2-inoculated groups. The role of ORF3 in attenuation needs to be further elucidated. / Ph. D.

Porcine circovirus type 2 is a single stranded DNA virus that belongs to the genus Circovirus in the family Circoviridae. This virus is associated with many kinds of diseases in pigs and causes significant economic losses in swine-breeding. In this study, two approaches of vaccination were tested in order to develop an effective vaccine against PCV2. The first approach was to test DNA vaccines. For this purpose, eukaryotic expression plasmids encoding two form of PCV2 Cap protein were constructed. The expression plasmids encoding murine TNF-α and IFN-α1 were also prepared for co-immunization with antigen encoding plasmid to enhance the immune response. The second approach is based on the previous finding that chimeric pentamers of VP1 mouse polyomavirus capsid protein fused with PCV2 can induce protective immunity against PCV2. These chimeric pentamers were further modified by AA substitutions in PCV2 Cap immunodominant epitope in order to enhance protective antibody response directed against PCV2. The chimeric pentamers and DNA vaccines were tested for ability to induce antibody immune response against PCV2 in mice. The results showed that chimeric pentamers are more potent inducers of protective antibody immune response against PCV2 compared to DNA vaccines. However, the protective antibody...

As doenças associadas ao circovírus suíno (DACS) causam impacto econômico negativo nos sistemas de criação de suínos no mundo todo. As perdas incluem tratamento da doença, mortalidade, bem como diminuição no desempenho dos animais. Uma das manifestações mais relevantes das DACS é a síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS). O principal agente patogênico na causa da SMDS é o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), no entanto, estudos observacionais e experimentais demonstraram que outros agentes estão envolvidos na patogênese e manifestação dos sinais clínicos. O sequenciamento de alto desempenho aliado a metagenômica são ferramentas que tornam possível a identificação da microbiota total de uma determinada amostra, independentemente de cultivo dos microrganismos. Visando contribuir para o conhecimento dos possíveis vírus envolvidos na SMDS, o presente trabalho realizou o sequenciamento genético de alto desempenho de soros de suínos e posterior análise do metagenoma resultante. Foram utilizadas amostras de soro coletadas em 2008, de 16 suínos com sinais clínicos da SMDS, entre 80 e 100 dias de idade, em uma granja no interior do Rio Grande do Sul. Os dados revelaram sequências virais de PCV2, parvovírus suíno tipo 1 a 6 (PPV1-6), torque teno vírus de suínos (TTSuV) tipo 1b, k2a e k2b e vírus de DNA circular de fita simples codificador de proteína associada a replicação (CRESS). A ocorrência de PCV2, PPV1-5 e TTSuV já foi descrita em suínos com SMDS, portanto este estudo reforça resultados anteriores. O PPV6 foi recentemente descrito na China, Europa e Estados Unidos, e os estudos não relacionaram o vírus com nenhuma doença específica de suínos. Os CRESS já foram identificados em todos os continentes, em vários tipos de amostras, incluindo fezes de suínos, mas sem nenhuma conexão com doenças de animais. Portanto, este é o primeiro relato de PPV6 e CRESS em suínos apresentando sinais de SMDS. Porém estudos posteriores são necessários para poder atribuir relação entre PPV6 e CRESS no desenvolvimento da SMDS. / Porcine circovirus associated disease (PCVAD) is one of the causes of negative economic impact on pig farming systems described worldwide. Losses include expenditures with treatment, increased mortality rates, and decreased productivity. One of the most relevant manifestations of PCVAD is the post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). The main pathogen present in PMWS is porcine circovirus type 2 (PCV2). However, observational and experimental studies have shown that other agents may be involved in the pathogenesis and clinical manifestation. High-throughput sequencing combined with metagenomics analyses make it possible to identify the total microbiota in a given sample, regardless of microorganism culture. In order to contribute to the knowledge of the viruses involved in PMWS, the present study carried out the high-throughput sequencing of swine sera and subsequent analysis of the resulting metagenome. Sixteen serum samples collected in 2008 on a farm in Rio Grande do Sul, from 80 and 100 days old pigs with clinical signs of PMWS, were examined. Data revealed viral sequences of PCV2, porcine parvovirus type 1 through 6 (PPV1-6), torque teno sus virus (TTSuV) types 1b, k2a and k2b and circular replication-associated protein (Rep) encoding single-stranded (CRESS) DNA viruses. The occurrences of PCV2, PPV1-5 and TTSuV have already been described in pigs with PMWS, so this study reinforces previous results. PPV6 was recently described in China, Europe and the United States, and the studies did not correlate the virus to any specific disease. CRESS DNA viruses have been identified on all continents in various types of samples, including swine feces, but without any connection to animal diseases. The present study is the first report of PPV6 and CRESS in pigs presenting PMWS signals. However, further studies are necessary to be able to attribute the relationship between PPV6 and CRESS in the development of SMDS.

El circovirus porcino tipo 2 (PCV2) genera en el ganado porcino diversas enfermedades que se conocen con el nombre de enfermedades asociadas a PCV2 (EACP). Dentro de estas EACP encontramos la infección sistémica (donde se incluyen los casos diagnosticados en el pasado como PMWS), neumonías asociadas a PCV2, enteritis asociadas a PCV2, PDNS asociado a PCV2 y fallo reproductivo asociado a PCV2. La infección sistémica provoca graves consecuencias sanitarias que llevan a pérdidas económicas importantes en las explotaciones porcinas. En nuestro estudio hemos valorado la expresión génica de las interleucinas (IL) de respuesta TH2 (IL4, IL5 e IL13) en animales vacunados y no vacunados frente a PCV2, para comprender mejor las respuestas inmunológicas TH2 desarrolladas tras la vacunación, así como estudiar la variabilidad individual en la respuesta inmune TH2 generada. Para ello, se realizaron dos estudios, en el primero de ellos se emplearon 10 cerdos de 10 semanas de edad vacunados y revacunados frente a PCV2 de los que se obtuvieron células mononucleares periféricas de la sangre (PBMC) los días 0, 21 y 28 tras la primera vacunación y de los nódulos linfáticos el día 29 tras la primera vacunación. En el segundo estudio se emplearon PBMC de 15 lechones de 4 semanas de edad distribuidos en tres grupos: lechones vacunados nacidos de madres vacunadas, lechones no vacunados nacidos de madres vacunadas y lechones no vacunados procedentes de madres no vacunadas. Las células mononucleares de los animales de ambos estudios se cultivaron en presencia de péptidos antigénicos del ORF2 de PCV2, péptidos del gen temprano inmediato del Herpes Virus Equino (EHV) y en presencia sólo de medio de cultivo como control negativo. Se realizó una cinética de expresión extrayendo el ARN a diferentes puntos de tiempo: 0, 2, 12, 24 y 48 horas tras la estimulación con los antígenos. La expresión génica fue calculada mediante cuantificación relativa empleando PCR a tiempo real con el método 2-ΔΔCt y utilizando como gen endógeno la ciclofilina. Nuestros resultados mostraron que en el genoma de la especie porcina existen seudogenes de ciclofilina e IL4 que podrían interferir en la cuantificación de su expresión a nivel del ARNm. Se observó que la IL4 y la IL13 presentan mayores niveles de cambio de expresión génica que la IL5, teniendo su pico de expresión de ARNm entre las 12 y 24 horas postestimulación para las IL4 e IL5 y entre las 24 y 48 horas para la IL13. En las PBMC porcinas se detectaron mayores niveles de cambios postestimulación en la transcripción de IL13 que en las células de mononucleares de los nódulos linfáticos, dándose el fenómeno contrario para la IL4 e IL5. Los datos de expresión génica mostraron que a pesar de que en ocasiones las células mononucleares porcinas tengan correlaciones significativas en la transcripción de IL4, IL5 e IL13, deben existir otros mecanismos que regulen independientemente la transcripción de cada una de ellas. Respecto a los efectos de la vacunación, nuestros resultados m ostraron que las PBMC de los cerdos vacunados y revacunados frente a PCV2 expresaron mayores niveles de IL4 que las PBMC de los animales no vacunados en todas las condiciones de cultivo ensayadas. Asimismo, las PBMC de los cerdos vacunados y revacunados frente a PCV2 expresaron mayores niveles de IL13 que las PBMC de los animales no vacunados cuando fueron reestimuladas con péptidos antigénicos del ORF2 de PCV2. Las PBMC de los lechones vacunados nacidos de madres vacunadas presentaron mayores niveles de IL4 e IL13 que el resto de lechones de los otros dos grupos en todas las situaciones de cultivo probadas. Podemos concluir tras este estudio que la vacunación y revacunación de cerdos frente a PCV2 y la vacunación frente a PCV2 de lechones nacidos y encalostrados de cerdas vacunadas frente a PCV2 potenciaría la síntesis de interleucinas TH2, que al contribuir en el establecimiento de la respuesta inmune, favorecería el estado sanitario de los animales.

As doenças respiratórias constituem um sério problema em sistemas intensivos de criação de suínos, causando enormes prejuízos à industria suína no Brasil e no mundo. Estes prejuízos estão freqüentemente relacionados à redução de peso, mortalidade, maior predisposição a doenças entéricas, gastos com vacinas e medicamentos. Os distúrbios respiratórios em suínos são manifestados através de um complexo de doenças, com envolvimento de agentes virais, bacterianos e fúngicos. Dentre estes, a presença do circovírus (PCV2) e o Pneumocystis sp. começa a ser gradativamente caracterizada como uma associação entre um agente causador de imunossupressão e um organismo de ação oportunista. O trabalho objetivou diagnosticar Pneumocystis sp. através das técnicas de imunohistoquímica, Grocott e nested-PCR, em suínos abatidos nos Estados do Rio Grande do Sul (RS) e Mato Grosso (MT), diagnosticar a ocorrência de PCV2 na mesma população de suínos, verificar a associação entre Pneumocystis sp. e PCV2, e determinar as relações filogenéticas entre as amostras de Pneumocystis sp. O estudo avaliou um total de 591 pulmões, 297 com alterações macroscópicas (pneumonia) e 294 normais obtidos em frigoríficos. Foram analisados 292 pulmões procedentes do RS e 299 pulmões do MT Para diagnóstico do Pneumocystis sp. as amostras foram analisadas através das técnicas de Grocott, Imunohistoquímica e nested-PCR (mtLSU e mtSSU rRNA). Do total das amostras, 36,9% foram positivas para Pneumocystis. O índice de positividade para o vírus PCV2 foi de 32,7% na amostra total. Os resultados revelaram uma alta prevalência do vírus (PCV2) em pulmões sem lesões macroscópicas. A co-infecção (PCV2 e Pneumocystis sp.), foi detectada em 28,0% em 564 pulmões examinados. As análises das seqüências dos nucleotídeos dos produtos de PCR dos genes mtLSU e mtSSU do rRNA do Pneumocystis sp. nos pulmões analisados, sugerem a presença até o presente momento de 2 espécies diferentes de Pneumocystis no Brasil. Este estudo evidencia a ocorrência da co-infecção de dois agentes (Pneumocystis sp. e PCV2) em animais hígidos, fato que, indica a necessidade de planejamento e implementação de medidas de controle para melhorar a produtividade na suinocultura. / Respiratory diseases are a major problem in intensive systems of swine husbandry. They are a cause for high losses in the swine industry in Brazil and in the world. These losses are often related to weight reduction, mortality, higher vulnerability to enteric diseases, and expenses with vaccines and drugs. Respiratory diseases in swine appear through a complex of diseases, caused by virus, bacteria and fungi; among these, the porcine circovirus 2 (PCV2) and Pneumocystis sp., the former an agent which causes immunosupression and the latter an oportunistic microorganism. Both are being recognized as capable of being associated. The objectives of this study were to: identify Pneumocystis sp. through immunohystochemistry techniques, Grocott and nested-PCR in swine slaughtered in the States of Rio Grande do Sul and Mato Grosso (MT); investigate PCV2 in the same swine population; investigate the association between Pneumocystis sp. and PCV2, and establish a filogenetic relationship between isolated of Pneumocystis sp. The study was carried out with a total of 591 lungs, 297 with macroscopic alterations characteristic of pneumonia, and 294 normal lungs from the industry. 292 lungs came from RS and 299 lungs came from MT. In order, to diagnose Pneumocystis infection, samples were analysed through Grocott technique, immunohystochemistry and nested-PCR (mtLSU and mtSSU rRNA). Among all samples 36,9% were positive for Pneumocystis sp.. PCV2 virus was found in 37,2% of the samples. Results revealed a high prevalence of the PCV2 virus in lungs without macroscopic lesions. Co-infection (PCV2 and Pneumocystis sp.) was found in 28,0% of 564 lungs examined. So far, the analyses of the sequences of nucleotides from the products of PCR from the genes mtlSU rRNA and mtSSU rRNA from Pneumocystis obtained from the examined lungs suggest that, it is possible the existence of two different species of Pneumocystis in Brazil. This study shows co-infection by two agents (Pneumocysts sp. and PCV2) in apparently healthy animals. This fact points out the necessity planning and implementation of control measures in order to improve productiviy in swine husbandry and industry.

A Síndrome Multissistêmica do Definhamento do Suíno (SMDS) é uma doença emergente e mundialmente distribuída, que tem trazido sérios prejuízos econômicos para a indústria suinícola. O Circovírus Suíno tipo 2 (PCV2), agente causal da doença, provoca lesões principalmente nos tecidos linfóides, e sugere-se que produza imunossupressão, predispondo o hospedeiro a infecções virais, bacterianas e fúngicas secundárias. Neste trabalho, é descrito um estudo da prevalência e bacteriologia das otites purulentas em suínos apresentando a SMDS, bem como em animais de baixo desenvolvimento e de crescimento normal. No total, foram examinados 385 suínos com idades entre 60 e 130 dias. De 242 animais com a SMDS, 57 (23,5%) apresentaram lesões purulentas no ouvido médio. Dentre 119 animais de baixo desenvolvimento, apenas 1 (0,7%) apresentou a lesão. Não foram detectadas lesões macroscópicas no ouvido médio dos 24 animais com crescimento normal (controles). Os agentes isolados com maior freqüência das lesões foram Arcanobacterium pyogenes, Streptococcus α– hemolíticos e Pasteurella multocida, encontrados em, respectivamente, 37 (43%), 32 (37,2%) e 24 (27,9%) dos 86 ouvidos submetidos à bacteriologia. A alta prevalência de lesões purulentas no ouvido médio de animais com a SMDS sugere que a infecção pelo PCV2 pode tornar o suíno mais suscetível às otites bacterianas. Por outro lado, a prevalência reduzida das lesões em suínos de baixo desenvolvimento sugere que a otite não representa uma causa importante de mau desempenho em suínos nas fases de crescimento e terminação. O isolamento do A. pyogenes, de Streptococcus α- hemolíticos e da P. multocida na maioria das lesões está de acordo com relatos anteriores, confirmando a importância desses organismos como agentes causais da otite média em suínos. / Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome (PMWS) is an emerging disease disseminated globally that causes severe losses to the pig industry. Porcine circovirus type 2 (PCV2) is the causal agent of the disease and causes lesions mainly in lymphoid tissue and it is suggested that it can cause immunosuppression, predisposing the host to viral, bacterial and mycotic infections. In the present work we describe a study on prevalence and bacteriology of purulent otitis in pigs with PMWS, as well as in pigs with attrition and pigs with normal growth. A total amount of 385 animals were examined, with ages ranging from 60 to 130 days. Among 242 pigs with PMWS, 57 (23,5%) showed purulent lesions in the middle ear. Among 119 pigs with attrition, only 1 (0,7%) presented the lesion. In 24 control pigs, middle ear lesions were not detected. The agents most frequently isolated from the lesions were Arcanobacterium pyogenes, α–hemolytic Streptococci and Pasteurella multocida, found respectively in 36 (43%), 32 (37,2%) and 24 (27,9%) of 86 ears bacteriologically examined. The high prevalence of purulent lesions found in middle ear of PMWS affected pigs suggests that PCV2 infection can increase susceptibility of swine to bacterial otitis. On the other hand, the small prevalence of lesions in piglets with attrition suggests that otitis does not represent a significant cause for depressed growth in pigs from growing and finishing ages. The isolation of A. pyogenes, α-hemolytic Streptococci and P. multocida from most lesions agrees with previous reports, confirming the importance of these organisms as causal agents in the etiology of otitis media in pigs.

As doenças associadas ao circovírus suíno (DACS) causam impacto econômico negativo nos sistemas de criação de suínos no mundo todo. As perdas incluem tratamento da doença, mortalidade, bem como diminuição no desempenho dos animais. Uma das manifestações mais relevantes das DACS é a síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS). O principal agente patogênico na causa da SMDS é o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), no entanto, estudos observacionais e experimentais demonstraram que outros agentes estão envolvidos na patogênese e manifestação dos sinais clínicos. O sequenciamento de alto desempenho aliado a metagenômica são ferramentas que tornam possível a identificação da microbiota total de uma determinada amostra, independentemente de cultivo dos microrganismos. Visando contribuir para o conhecimento dos possíveis vírus envolvidos na SMDS, o presente trabalho realizou o sequenciamento genético de alto desempenho de soros de suínos e posterior análise do metagenoma resultante. Foram utilizadas amostras de soro coletadas em 2008, de 16 suínos com sinais clínicos da SMDS, entre 80 e 100 dias de idade, em uma granja no interior do Rio Grande do Sul. Os dados revelaram sequências virais de PCV2, parvovírus suíno tipo 1 a 6 (PPV1-6), torque teno vírus de suínos (TTSuV) tipo 1b, k2a e k2b e vírus de DNA circular de fita simples codificador de proteína associada a replicação (CRESS). A ocorrência de PCV2, PPV1-5 e TTSuV já foi descrita em suínos com SMDS, portanto este estudo reforça resultados anteriores. O PPV6 foi recentemente descrito na China, Europa e Estados Unidos, e os estudos não relacionaram o vírus com nenhuma doença específica de suínos. Os CRESS já foram identificados em todos os continentes, em vários tipos de amostras, incluindo fezes de suínos, mas sem nenhuma conexão com doenças de animais. Portanto, este é o primeiro relato de PPV6 e CRESS em suínos apresentando sinais de SMDS. Porém estudos posteriores são necessários para poder atribuir relação entre PPV6 e CRESS no desenvolvimento da SMDS. / Porcine circovirus associated disease (PCVAD) is one of the causes of negative economic impact on pig farming systems described worldwide. Losses include expenditures with treatment, increased mortality rates, and decreased productivity. One of the most relevant manifestations of PCVAD is the post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). The main pathogen present in PMWS is porcine circovirus type 2 (PCV2). However, observational and experimental studies have shown that other agents may be involved in the pathogenesis and clinical manifestation. High-throughput sequencing combined with metagenomics analyses make it possible to identify the total microbiota in a given sample, regardless of microorganism culture. In order to contribute to the knowledge of the viruses involved in PMWS, the present study carried out the high-throughput sequencing of swine sera and subsequent analysis of the resulting metagenome. Sixteen serum samples collected in 2008 on a farm in Rio Grande do Sul, from 80 and 100 days old pigs with clinical signs of PMWS, were examined. Data revealed viral sequences of PCV2, porcine parvovirus type 1 through 6 (PPV1-6), torque teno sus virus (TTSuV) types 1b, k2a and k2b and circular replication-associated protein (Rep) encoding single-stranded (CRESS) DNA viruses. The occurrences of PCV2, PPV1-5 and TTSuV have already been described in pigs with PMWS, so this study reinforces previous results. PPV6 was recently described in China, Europe and the United States, and the studies did not correlate the virus to any specific disease. CRESS DNA viruses have been identified on all continents in various types of samples, including swine feces, but without any connection to animal diseases. The present study is the first report of PPV6 and CRESS in pigs presenting PMWS signals. However, further studies are necessary to be able to attribute the relationship between PPV6 and CRESS in the development of SMDS.