L’expression génique présente un caractère stochastique qui génère une variabilité phénotypique entre cellules individuelles, ce qui pourrait augmenter et favoriser l’adaptation des microorganismes dans des environnements sélectifs. Des modifications génétiques de promoteurs augmentant la variabilité d’expression pourraient avoir été sélectionnées dans des souches industrielles de Saccharomyces cerevisiae grâce à l’avantage qu’elles confèrent dans des conditions stressantes. Nous avons utilisé une approche génomique pour identifier des promoteurs conférant une forte variabilité d’expression dans la souche de vin industrielle EC1118. De nombreux promoteurs identifiés sont liés à des facteurs environnementaux. Certains d'entre eux contiennent des variations génétiques par rapport à leur homologue dans la souche de laboratoire S288c. Ces variations pourraient être responsables d’une augmentation de variabilité d’expression. Chacun des deux variantes de huit promoteurs a été fusionné avec yEGFP et intégré dans le génome des deux souches au même locus. Certains variantes industriels augmentent l’expression moyenne tout en présentant, comme attendu, moins de variabilité, mais d'autres augmentent ou diminuent l’expression sans modifier la variabilité, de telle sorte qu’ils pourraient présenter un niveau de variabilité différent à moyenne égale. Dans différentes conditions d’induction du promoteur CUP1 donnant des niveaux d’expression similaire pour les deux variantes, nous avons en effet observé que le variant industriel produit la variabilité la plus élevé, mais seulement dans la souche industrielle. Ceci démontre l’existence d’un phénomène d’épistasie dans la génération de la variabilité d’expression. Nous avons aussi observé que cette différence de variabilité est suffisante pour conférer un avantage dans un environnement sélectif. Par conséquent, la modulation de la variabilité d'expression génique par une combinaison de modifications de promoteur et d’influences en trans est un mécanisme d'adaptation possible dans la levure. Ce travail a été prolongé par l’étude de nombreux promoteurs produisant des profils d’expression bimodaux identifiés lors de l’approche génomique initiale, afin de mieux comprendre l’origine et le contrôle de ce type d’expression. Enfin, un travail concernant le lien potentiel entre variabilité d’expression et variabilité génétique a été engagé par l’utilisation d’un substrat de recombinaison homologue et de paires de promoteurs permettant d’exprimer des gènes impactant la recombinaison à un niveau moyen similaire mais des niveaux de variabilité différents. / The increase in phenotypic variability through gene expression noise is proposed to be an evolutionary strategy in selective environments. Differences in promoter-mediated noise between Saccharomyces cerevisiae strains could have been selected for thanks to the benefit conferred by gene expression heterogeneity in the stressful conditions, for instance, those experienced by industrial strains. In the first part of this thesis, we used a genome-wide approach to identify promoters conferring high noise levels in the industrial wine strain EC1118. Many promoters of genes related to environmental factors were identified, some of them containing genetic variations compared to their counterpart in the laboratory strain S288c. Each variant of eight promoters has been fused to yEGFP and integrated in the genome of both strains. Some industrial variants conferred higher expression associated, as expected, to lower noise, but other variants either increased or decreased expression without modifying variability, so that they might exhibit different levels of transcriptional-mediated noise at equal mean. At different induction conditions giving similar expression for both variants of the CUP1 promoter (pCUP1), we indeed observed higher noise with the industrial variant. Nevertheless, this difference was only observed in the industrial strain, revealing epistasis in the generation of promoter-mediated noise. Moreover, the increased expression variability conferred by this natural yeast promoter variant provided a clear benefit in the face of an environmental stress. Thus modulation of gene expression noise by a combination of promoter modifications and trans-influences might be a possible adaptation mechanism in yeast. This work was extended by the study of some promoters conferring bimodal expression profiles identified in the initial genomic approach to better understand the origin and the control of this expression pattern. Finally, works on the potential link between gene expression variability and genetic variability was carried out by the use of homologous recombination materials and a pair of promoters conferring similar mean level but different levels of variability for genes affecting recombination.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A pesquisa foi desenvolvida com o objetivo de avaliar os efeitos da adiÃÃo do anacardato de cÃlcio (ACC), como fonte de Ãcido anacÃrdico na raÃÃo de frangos de corte sobre o desempenho, as caracterÃsticas de carcaÃa, qualidade e a estabilidade lipÃdica da carne, parÃmetros sanguÃneos, atividade enzimÃtica e peroxidaÃÃo lipÃdica do fÃgado e no crescimento, composiÃÃo e qualidade dos ossos. Para isso, 840 pintos machos de um dia da linhagem Ag Ross 308 foram distribuÃdos ao acaso em seis tratamentos, com sete repetiÃÃes de vinte aves. Os tratamentos consistiram em: raÃÃo sem promotor de crescimento (PC); raÃÃo com PC e, os demais, raÃÃes sem o PC e adiÃÃo de ACC nos nÃveis de 0,25; 0,50; 0,75 e 1%. A adiÃÃo de ACC na raÃÃo nÃo influenciou nos parÃmetros bioquÃmicos do sangue (Ãcido Ãrico, creatinina, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, colesterol total, HDL, LDL e triglicerÃdeos), na atividade enzimÃtica (superÃxido dismutase, grupos sulfidrÃlicos nÃo-protÃicos) e peroxidaÃÃo dos lipÃdeos do fÃgado, no crescimento e qualidade Ãssea (peso, comprimento, diÃmetro, Ãndice de Seedor, resistÃncia, deformidade, matÃria seca e matÃria mineral), nas caracterÃsticas de carcaÃa (% de carcaÃa, peito e coxa+sobrecoxa) e na qualidade da carne ( L*, a*, b*, pH, perda de Ãgua por cocÃÃo e capacidade de retenÃÃo de Ãgua). No entanto, a adiÃÃo a partir de 0,75% de ACC reduziu o ganho de peso e prejudicou a conversÃo alimentar dos frangos atà 21 dias de idade, porÃm, a adiÃÃo de atà 1% nÃo afetou o desempenho quando se considerou o perÃodo total de criaÃÃo (1 a 42 dias de idade). Para os valores de TBARS da carne, os nÃveis de 0,75% e 1% proporcionaram os menores valores, enquanto, o tratamento sem promotor de crescimento proporcionou maior valor. O ACC pode ser adicionado na raÃÃo dos frangos de corte atà o nÃvel de 1%, sem que ocorram alteraÃÃes nos parÃmetros sanguÃneos, enzimÃticos do fÃgado, no desempenho ao final do perÃodo de criaÃÃo (42 dias de idade), nas caracterÃsticas de carcaÃa e no crescimento, composiÃÃo e qualidade dos ossos. Contudo, a qualidade da carne pode melhorar com a reduÃÃo da oxidaÃÃo lipÃdica a partir de 0,75%. / The research aims to evaluate the effects of adding calcium anacardic (CAC) as a source of anacardic acid in the feed of broiler about the performance, carcass characteristics, quality and lipid stability meat, blood parameters, enzyme activity and lipid peroxidation liver and growth, composition and quality of the bones. For this, 840 male chicks with a day Ross 308 line were randomly assigned to six treatments, with seven replicates of twenty birds. The treatments consisted of: diet without growth promoter (PC); diet with PC and the others without PC and adding CAC levels of 0.25; 0.50; 0.75 to 1%. The addition of CAC in the feed didnât affect the biochemical blood parameters (uric acid, creatinine, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, total cholesterol, HDL, LDL and triglycerides) in the enzyme activity (superoxide dismutase, non-protein sulfhydryl groups) and peroxidation of liver lipids, growth and bone quality (weight, length, diameter, Seedor index, strength, deformity, dry matter and mineral matter), in the carcass characteristics (% of carcass, breast and thigh + drumstick) and quality meat (L *, a *, b *, pH, loss of water by cooking and water holding capacity). However, the addition of from 0.75% CAC reduced weight gain and feed conversion detracted from the chickens up to 21 days old, however, the addition of up to 1 % did not affect performance when considering the total period (1 to 42 days old). For TBARS values for beef, the levels of 0.75% to 1% have provided the lowest values while treatment without growth promoter yielded higher value. The CAC can be added in the feed of broilers to the level of 1 %, no changes occur in the blood parameters and enzyme of the liver, the performance at the end of the growing period (42 days old), carcass characteristics and growth, composition and quality of the bones. However, the quality of the meat can improve with reduced lipid oxidation from 0,75. The CAC can be added in the feed of broiler until the level of 1%, without change the blood parameters, enzymatic liver, the performance at the end of the growing period (42 days old), carcass characteristics and growth, composition and quality of the bones. However, the quality of the flesh can be improved by reducing lipid oxidation as 0.75%.

O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença autoimune inflamatória crônica que possui uma etiopatogênese complexa. Diversos fatores participam da patogênese da doença, dentre eles alterações no balanço de citocinas e quimiocinas. As quimiocinas e seus receptores são fundamentais na regulação da migração de leucócitos durante a inflamação e acredita-se que elas possam ter um papel importante na patogênese de doenças autoimunes, inclusive no LES. Diversos estudos abordaram o papel de quimiocinas e seus receptores no LES, porém, principalmente se tratando dos receptores de quimiocinas CCR5 e CCR2, não existe um consenso. Devido à falta de consenso em relação ao papel dos receptores de quimiocinas na patogênese do LES e considerando a necessidade de mais estudos nesta área, o presente trabalho tem por objetivo investigar o possível papel de polimorfismos na região promotora do CCR5 no desenvolvimento do LES, comparando as frequências dos genótipos e haplótipos entre pacientes e controles, e analisar o possível envolvimento destes polimorfismos nas manifestações clínicas/laboratoriais da doença. O estudo incluiu 382 pacientes com LES (289 Euro-descendentes e 93 Afro-descendentes) e 375 controles (243 Euro-descendentes e 132 Afro-descendentes) genotipados para os polimorfismos CCR2-64I G>A (rs1799864), CCR5-59353 C>T (rs1799988), CCR5-59356 C>T (rs41469351), CCR5-59402 A>G (rs1800023) e CCR5-59653 C>T (rs1800024) através de PCR-RFLP e sequenciamento, respectivamente. Dados prévios de nosso grupo em relação ao CCR5delta32 foram incluídos no estudo para a inferência dos haplótipos e como um possível fator de confusão na regressão binária logística. Os resultados obtidos indicam que, em pacientes Euro-descendentes, as frequências reduzidas o polimorfismo CCR5delta32 e o haplótipo HHG*2 observadas em pacientes quando comparados com controles foram associadas com a doença (p=0,001; OR 3,5; 95%CI 1,6-7,5 e 2,0% vs. 7,2%; presidual=2,9E-5; respectivamente). Em pacientes Afrodescendentes, as frequências dos haplótipos HHA/HHB, HHC e HHG*2 foram diferentes em pacientes e controles (10% vs. 20,5%, presidual = 0,003; 29,4% vs. 17,4%; presidual=0,003 e 3,9% vs. 0,8%; presidual=0,023; respectivamente). Em relação às manifestações clínicas da doença, a presença do CCR5delta32 foi confirmada como um fator de susceptibilidade para nefrite classe IV em pacientes Afro-descendentes e no grupo de pacientes como um todo (pcorrigido=0,012; OR 3,0; 95%CI 3,0-333,3 e pcorrigido=0,0006; OR 6,8; 95%CI 1,9-2,48; respectivamente). Em conclusão, o presente estudo indica que polimorfismos na região promotora do CCR5 podem atuar como modificadores no LES. Os resultados observados reforçam o papel do polimorfismo CCR5delta32 como um fator de proteção para o desenvolvimento do LES em Euro-descendentes e como um fator de susceptibilidade à nefrite classe IV em pacientes Afro-descendentes. Além disto, também foram descritos a redução da frequência dos haplótipos HHA/HHB e o aumento da frequência dos haplótipos HHC e HHG*2 em pacientes Afro-descendentes, que possivelmente podem estar associados com uma maior expressão do CCR5 em subtipos específicos celulares e com uma menor expressão deste receptor de maneira geral. / Systemic Lupus erythematosus (SLE) is a chronic inflammatory autoimmune disease, characterized by a complex etiopathogenesis. Many factors are known to participate in the pathogenesis of SLE, including alterations in the cytokines or chemokines balance. Chemokines and their receptors are central players in the regulation of leucocytes chemotaxis in inflammation and they are thought to have an important role in the pathogenesis of autoimmune diseases, including SLE. Several studies have addressed the role of chemokines and their receptors in SLE, however there is no consensus regarding their involvement on the pathogenesis of the disease. Given the lack of consensus considering the role of chemokine receptors in SLE pathogenesis and the need for more studies in this area, the present work aims to investigate a possible role of the CCR5 promoter region polymorphisms in the development of SLE comparing the frequencies of the genotypes and haplotypes with ethnically matched controls and analyze if there is a possible involvement of the polymorphisms in the clinical outcome of the disease. This study included 388 SLE patients (289 classified as Europeanderived and 93 as African-derived) and 375 controls (243 European-derived and 132 African-derived) genotyped for the CCR2-64I G>A (rs1799864), CCR5-59353 C>T (rs1799988), CCR5-59356 C>T (rs41469351), CCR5-59402 A>G (rs1800023) and CCR5-59653 C>T (rs1800024) polymorphisms though PCRRFLP and direct sequencing, respectively. Previous data from CCR5delta32 were included in the study to infer the haplotypes and also as a possible confounding factor in the binary logistic regression. Our results indicated that, in Europeanderived patients, CCR5delta32 and the HHG*2 haplotype reduced frequencies in patients when compared to controls were associated with the disease (p=0.001; OR 3.5; 95%CI 1.6-7.5 and 2.0%, vs. 7.2% residual p= 2.9E-5, respectively). In African-derived patients, the HHA/HHB, HHC and HHG*2 haplotype frequencies differed between patients and controls (10% vs. 20.5%, residual p= 0.003; 29.4% vs. 17.4%, residual p=0.003 and 3.9% vs. 0.8%, residual p=0.023; respectively). Considering the clinical manifestations of the disease, CCR5delta32 presence was confirmed as a susceptibility factor to class IV nephritis in the African-derived group and when patients were considered together (pcorrected=0.012; OR 3.0; 95%CI 3.0-333.3 and pcorrected= 0.0006; OR 6.8; 95%CI 1.9-2.48, respectively). In conclusion, this study indicates that CCR5 promoter polymorphisms are important disease modifiers in SLE. Present data reinforces CCR5delta32 polymorphism as a protective factor for the development of the disease in European-derived patients and as a susceptibility factor for class IV nephritis in African-derived patients. Furthermore, we also describe a reduced frequency of HHA/HHB and an enhanced frequency of HHC and HHG*2 haplotypes in our African-derived patients, which potentially could reflect in a higher expression of CCR5 in specific cell subsets and in a lower expression of CCR5 overall.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-12-12T13:56:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Jessica Catarine Frutuoso do Nascimento.pdf: 3226012 bytes, checksum: 795583806a66d8ac66b9fbdb738f7d93 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-12T13:56:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Jessica Catarine Frutuoso do Nascimento.pdf: 3226012 bytes, checksum: 795583806a66d8ac66b9fbdb738f7d93 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / CAPES / FACEPE / CNPQ / O carcinoma ductal invasivo (CDI) é o tumor maligno de mama mais comum e uma das principais causas de morte relacionada ao câncer em mulheres no mundo. A alteração no padrão de glicosilação é uma característica marcante do fenótipo tumoral. Dentre as reações glicosídicas alteradas no câncer está a fucosilação. Os tetrassacarídeos fucosilados sialil Lewis X (sLex) e sialil Lewis A (sLea) são ligantes reconhecidos pelas glicoproteínas transmembrânicas selectinas envolvidos nas interações célula-célula necessárias nos processos inflamatórios, hemostase/trombose, cicatrização de feridas e metástase tumoral. A etapa final na síntese do sLex e sLea é realizada pela ação da α1,3/4-fucosiltransferase (FUT3), enzima codificada pelo gene FUT3. A expressão do sLea em carcinoma mamário está relacionada ao estágio tumoral e maiores níveis desse antígeno foram encontrados em tumores metastáticos. Níveis elevados da enzima FUT3 está relacionada ao maior poder metastático em linhagens celulares de câncer de próstata e pâncreas e sua ação é fundamental para o mecanismo de transição epitelial-mesenquimal induzido por TGF-β no câncer colorretal. Apesar da ação pró-tumoral exercida pela enzima FUT3 e seus produtos, estudos vem demonstrando sua importância para a citotoxicidade mediada pelas células NK sobre células tumorais, tanto devido ao reconhecimento do antígeno sLex pelos receptores lectina do tipo C quanto devido a fucosilação dos receptores DR4 e DR5 por essa enzima que é fundamental para o desencadeamento da via de apoptose extrínseca estimulada pelo Apo2L-TRAIL. Visando o maior conhecimento do papel dessa enzima no câncer de mama, o presente trabalho objetivou avaliar os níveis teciduais da FUT3 em tumores mamários malignos (carcinoma ductal invasivo - CDI) de pacientes do Hospital das Clínicas da UFPE (HCUFPE) e do Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP), investigando se há correlação entre a expressão enzimática com a malignidade tumoral e o risco de metástase. A genotipagem da região promotora do gene FUT3 também foi realizada a fim de identificar possíveis SNPs relacionados à expressão dessa enzima. Para tal biópsias em parafina de carcinoma ductal invasivo (CDI) foram selecionadas no arquivo do Setor de Anatomia Patológica do HC-UFPE e do IMIP. Os níveis teciduais da FUT3 foram avaliados por imuno-histoquímica. O DNA foi extraído por metodologia adaptada de Ramalho et al. (2014), a região promotora amplificada por PCR e posteriormente sequenciada pelo método de Sanger modificado. As sequências obtidas em duplicata foram analisadas através do software CLC Main Workbench. A análise estatística foi realizada através do teste exato de Fisher para os dados de expressão e pelo teste de Qui quadrado para a análise genômica, ambas as análises utilizando o software GraphPad Prism v.5. Nossos resultados demonstraram que a ausência tecidual da enzima FUT3 está relacionada ao CDI em pacientes brasileiros, sendo mais freqüente em tumores maiores e negativos para o receptor do fator de crescimento epidérmico humano 2 (HER2). Análise genômica mostrou que duas variações localizadas na região promotora do gene FUT3 estão associadas ao CDI, embora o efeito direto desses polimorfismos na expressão da FUT3 não pode ser avaliada. O alelo T do SNP rs73920070 (-6933 C> T) está associado a ausência da neoplasia enquanto que o alelo T do SNP rs2306969 (-6951 C> T) está associado a presença do carcinoma ductal invasivo na população brasileira. / Invasive ductal carcinoma (IDC) is the most common breast malignant tumor and the mainly cause of death related to cancer among women in the world. The alteration of glycosylation pattern is a well established feature of tumor phenotype. Fucosylation is one of main glycosidic changes in cancer. The fucosylated tetrasacarides sialil Lewis X (sLex) and sialil Lewis A (sLea) are ligands recognized by the transmembrane glycoproteins selectins involved in cell-cell interactions during the inflammatory process, hemostasis/thrombosis, wound healing and tumor metastasis. The final step in sLex and sLea synthesis is done by the action of α1,3/4-fucosyltransferase (FUT3), enzyme encoded by FUT3 gene. The expression of sLea in mammary carcinoma is related to tumor stage and higher levels of this antigen were found in metastatic tumors. Higher protein expression of FUT3 were related to a bigger metastatic power in prostate and pancreas cancer cell lines and its action is primordial to epithelial-mesenchymal transition induced by TGF-β in colorectal cancer. Despite the protumoral action of FUT3 enzyme and its products, studies have shown their importance to NK cell-mediated citotoxicity against tumor cells, due to the sLex antigen recognition by type C lectin receptors and due to the fucosylation of DR4 and DR5 receptors, fundamental step to the extrinsic pathway of apoptosis stimulated by Apo2L-TRAIL. Aiming to better understand the role of this enzyme in breast cancer, the purpose of this study was evaluate the tissue protein expression of FUT3 in breast malignancies (invasive ductal carcinoma – IDC) in patients from Hospital das Clínicas da UFPE (HC-UFPE) and Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP). We investigated whether there is correlation between the FUT3 enzymatic expression with malignancy and metastasis risk in this cancer type. The genotyping of the FUT3 promoter region was also realized in order to identify SNPs with potential to interfere on the enzyme expression. IDC formalin-fixed and paraffin-embedded biopsies were selected from pathological anatomy service from HC-UFPE and IMIP. FUT3 tissue levels were evaluated by immunohistochemistry. DNA was extracted using the adapted methodology from Ramalho et al. (2014), the promoter region was amplified by PCR and next sequenced by Sanger modified method. The sequences obtained in duplicate were analyzed using the CLC Main Workbench software. Statistical analyzes were realized using Fisher’s exact test for expression data and Qui square test for genomic data. Both analyzes were conducted using GraphPad Prism software v. 5. Our results demonstrate that the lack of FUT3 expression in breast tissues is related to the presence of IDC in Brazilian patients. No expression of FUT3 was more frequent in patients with large neoplastic lesions and tumors that do not express the human epidermal growth factor receptor 2 (HER2). Genomic analyzes showed that two variations localized in FUT3 promoter region are statistically associated to IDC, however the direct effect of these polymorphisms in FUT3 enzyme expression is still to be evaluated. The T allele of rs73920070 (-6933 C> T) SNP is associated to the neoplasia absence while the T allele of rs2306969 (-6951 C> T) SNP is associated to IDC presence in Brazilian northeastern population.

Orientador: Sergio Roberto Peres Line / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T02:01:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_CarolinaVieirade_M.pdf: 673929 bytes, checksum: de7a7d8f324324fae24215bb7eb7ed66 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O gene PAX9 pertence a uma família de fatores de transcrição denominada família Pax. Esse gene é expresso em tecidos embrionários como somitos, bolsa endodérmica da faringe, brotos distais dos membros e mesênquima derivado da crista neural. Alguns polimorfismos na região promotora desse gene em humanos vêm sendo associados a formas de agenesias não-sindrômicas autossômicas dominantes. No presente trabalho, nós verificamos a expressão gênica e a influência de duas seqüências da região promotora na transcrição do gene PAX9 em ensaios in vitro com células de tecido embrionário de ratos de 13.5 dias obtidas a partir de seus membros, face e regiões do mesencéfalo e romboencéfalo. Os fragmentos da região promotora foram clonados em plasmídios repórteres e transfectados nos três diferentes tecidos embrionários. Nossos resultados das análises de RT-PCR demonstraram que em culturas in vitro, as células dos membros e do SNC expressam o gene PAX9, porém, aquelas obtidas a partir da face não o expressaram. Além disso, os resultados dos ensaios de luciferase mostraram que a atividade dessa nos vetores construídos são mais fracas do que do vetor pGL3-Basic sozinho, sugerindo que essas regiões não são suficientes para guiar a transcrição gênica. / Abstract: PAX9 belongs to a transcriptional factor genes family named Pax. This gene is expressed in embryonic tissues like somites, pharyngeal pouch endoderm, distal limb buds and neural crest-derived mesenchyme. Some polymorphisms in the upstream promoter region of the human PAX9 have been associated with human non-syndromic forms of autossomal dominant agenesis. In the present study we verified the in vitro expression of this gene and the influence of two promoter sequences in the transcription of PAX9 gene, in embryo tissues obtained from digits, face and midbrain and hindbrain regions. These fragments were cloned on reporter plasmid and were transfected into the different cells cultures. Our RT-PCR results showed that in vitro E13.5 limb bud and CNS cells express PAX9, but not in derived facial region cells. Moreover, the luciferase activity of the Pax9 promoter vectors were weaker than pGL3-Basic alone, suggesting that the PAX9 sequences of promoter region are not sufficient to drive PAX9 gene transcription. / Mestrado / Histologia e Embriologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Orientador: Lucia Elvira Alvares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T02:44:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Grade_CarlaVermeulenCarvalho_M.pdf: 54304678 bytes, checksum: 869f67d6a836e256bbd7ee9e15980659 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A proteina Miostatina (tambem conhecida como GDF8) e um membro da superfamilia de crescimento e diferenciacao ß (TGF- ß) e e expressa quase que exclusivamente em musculatura esqueletica, tanto no embriao em desenvolvimento quanto no individuo adulto, onde circula livre pela corrente sanguinea. A Miostatina foi inicialmente identificada em 1997 por MCPHERRON et al. e, desde entao, muitos estudos tem demonstrado seu papel essencial na regulacao do desenvolvimento de musculatura esqueletica de aves e mamiferos. O nocaute genico da Miostatina causa hiperplasia e hipertrofia das fibras musculares, resultando em musculos individuais ate duas vezes maiores do que em animais selvagens. Isso demonstra que a Miostatina e um regulador negativo da deposicao de musculatura esqueletica. A estrutura e a funcao desta proteina sao conservadas em diversas especies, incluindo humanos, onde os niveis de Miostatina circulante no sangue se encontram aumentados durante condicoes de distrofia e na caquexia que acompanha alguns tipos de cancer e a AIDS. Um melhor entendimento dos mecanismos que regem a expressao da Miostatina e essencial para o desenvolvimento de estrategias que possam regular sua atividade durante tais condicoes. No presente trabalho, nos identificamos, com o uso de ferramentas de Bioinformatica, elementos cisregulatorios putativos (promotor e enhancers) que possivelmente regulam a transcricao do gene da Miostatina. Inicialmente foi realizada uma comparacao dos loci do GDF8, incluindo as regioes intergenicas adjacentes, provenientes dos genomas de Humano, Camundongo e Galinha. Essa analise revelou a presenca de diferentes regioes evolutivamente conservadas (RECs) adjacentes a sequencia codificadora desta proteina, sete downstream e uma upstream ao gene. Por terem sido mantidas relativamente conservadas ao longo da evolucao, essas regioes supostamente possuem um papel funcional, possivelmente como elementos cis-regulatorios do gene da Miostatina. Em seguida, com o intuito de entender as funcoes que cada uma dessas regioes possa estar exercendo sobre a regulacao da atividade transcricional do gene da Miostatina, foi realizada uma busca por sitios de ligacao para fatores transcricionais que tenham sido conservados evolutivamente nessas RECs. Muitos sitios conservados foram observados nas sete RECs downstream ao gene da Miostatina, entre eles estao sitios para fatores relacionados ao desenvolvimento de musculatura esqueletica (MyoD, Myogenin, E47, EN1), membros (Pax3, Tbx5) e coracao (Nkx2.5, Pitx2). Juntos, esses dados sugerem uma regulacao modular do gene da Miostatina durante a embriogenese dos vertebrados. A unica REC localizada upstream ao GDF8 representa o promotor minimo putativo deste gene. Essa hipotese e reforcada pela presenca de um sitio de ligacao conservado para a Proteina de Ligacao ao sitio TATA. Com o intuito de validar as hipoteses formuladas com base nas analises de Bioinformatica, no presente trabalho buscamos caracterizar funcionalmente o promotor minimo do gene da Miostatina. Para tanto, a regiao do promotor minimo foi inicialmente clonada em um vetor que nao contem promotor e possui como gene reporter o GFP. Essa construcao de expressao foi entao testada atraves de experimentos de eletroporacao em embrioes de galinha in ovo. A analise dos embrioes eletroporados revelou que a regiao de DNA elegida para as analises funcionais e capaz de dirigir a transcricao do gene reporter, indicando que ela corresponde ao promotor minimo do gene da Miostatina. Alem do sitio TATA, ha, na regiao do promotor, diversos sitios conservados para a ligacao de proteinas envolvidas na via de sinalizacao mediada por cAMP (CREB, ATF, NFY). Esse achado esta de acordo com estudos recentes que demonstram o envolvimento do cAMP na regulacao dos fatores miogenicos Myf5 e MyoD, bem como de Pax3, sugerindo que a atividade do gene da Miostatina tambem possa estar sendo regulada por essa via de sinalizacao. Outras regioes do genoma humano que possuem arquitetura semelhante a observada no promotor da Miostatina foram identificadas, demonstrando que outros genes podem estar sob influencia da mesma via de sinalizacao que regula a atividade do promotor da Miostatina, dentre eles genes envolvidos na miogenese e neurogenese. / Abstract: The Myostatin protein (also known as GDF8) is a member of the transforming growth factor-ß (TGF-ß) superfamily and is expressed almost exclusively in skeletal muscle, both in the embryo and in the adult, where the protein circulates in the blood flow. It was initially identified in 1997 by MCPHERRON et al., and since then many studies have been demonstrating its essential role in the regulation of the development of skeletal muscle from birds and mammals. The knockout of the Myostatin gene causes both hyperplasia and hypertrophy of the skeletal muscle fibers, resulting in muscles twice as big as the wildtype ones, thus showing that Myostatin is a negative regulator of skeletal muscle deposition. The GDF8 structure and function is conserved in many species, including humans where the Myostatin levels are increased during dystrophy conditions and in the cachexia that accompanies some types of cancer and AIDS. A better understanding of the mechanisms that rule the Myostatin expression is essential for the development of strategies that might regulate its activity during such conditions. In this research, we have identified, with the use of bioinformatic tools, the cis-regulatory elements (promoter and enhancers) that regulate the Myostatin gene transcription. We compared the GDF8 loci from human, chicken and mouse and found different evolutionary conserved regions (ECRs), adjacent to the GDF8 coding sequence. Because these intergenic sequences remained relatively conserved throughout evolution, they supposedly have a functional role, possibly as cis-regulatory elements for the Myostatin gene. Our analyses revealed the presence of seven possible enhancers downstream of the GDF8 gene and one conserved region upstream of it. In order to understand the role these regions might have in the regulation of Myostatin's transcription activity, we searched for binding sites that were also evolutionary conserved. Many conserved binding sites were observed in the RECs downstream to the Myostatin gene, and among them are sites for factors related to the development of the skeletal muscle (MyoD, Myogenin, E47, EN1), limbs (Pax3, Tbx5) and heart (Nkx2.5, AREB6, Pitx2). Together, these data suggest a modular regulation of the Myostatin gene during vertebrates' embryogenesis. The only REC observed upstream of the Myostatin locus represents the putative basal gene promoter. This hypothesis is strengthened by the presence of a binding site for the Tata Binding Protein conserved for the studied species. In this research, we aimed at functionally characterizing the Myostatin gene basal promoter. For that purpose, we cloned the studied region in a promoterless vector, which contains GFP as a reporter gene. This expression construct was then tested through in ovo electroporation assays. The analysis of the electroporated embryos revealed that the cloned DNA region is capable of driving the transcription of the reporter gene, which indicates that it truly corresponds to the basal promoter of the Myostatin gene. Moreover, there are conserved binding sites for the CREB and ATF1 transcription factors in the basal promoter, which are activated by the cAMP signaling path. This finding is in agreement with recent studies that demonstrate the involvement of cAMP in the regulation of the myogenic factors Myf5 and MyoD, as well as Pax3, thus suggesting that the activity of the Myostatin gene might be under the influence of this signaling path. Other regions of the human genome that have a similar architecture to the one observed in the Myostatin promoter were identified. This demonstrates that other genes are possibly under the influence of the same signaling path regulating the activity of the Myostatin promoter, among them genes involved in myogenesis and neurogenesis. / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

A cana-de-açúcar possui uma característica única entre as plantas de interesse econômico mundial: a capacidade de acumular altos níveis de sacarose no colmo. No Brasil, em virtude do aumento da demanda interna e mundial por fontes energéticas renováveis, é nítida a expansão da cultura canavieira para regiões menos propícias para cultivo, como as regiões secas do centro-oeste brasileiro. O déficit hídrico é um dos principais agentes que afetam o desenvolvimento das plantas e a obtenção de variedades melhor adaptadas é fundamental para a sustentabilidade e expansão da agroindústria canavieira. Neste sentido, genes regulados por seca são alvos importantes para a obtenção de plantas transgênicas mais tolerantes ao estresse. Como a expressão constitutiva do transgene pode causar efeitos indesejáveis nas plantas transgênicas, também é necessária a identificação de promotores induzíveis pelo estímulo ambiental. O objetivo deste trabalho é a identificação de genes e sequências promotoras reguladas pela seca em cana-de-açúcar que, além de contribuir com o entendimento dos mecanismos envolvidos na tolerância ao estresse, podem ser utilizados como alvos para obtenção de plantas transgênicas mais resistentes. Para a identificação de genes diferencialmente regulados por seca, utilizamos diferentes plataformas de microarranjo: SUCAST (com 1.830 genes relacionados à transdução de sinal), SUCAMET (com 4.594 genes relacionados a metabolismo) e CaneRegNet (com sondas para a identificação de transcritos senso e antisenso que correspondem a 14.522 genes únicos). Nestas plataformas, analisamos a expressão dos genes de quatro variedades de cana-de-açúcar, duas tolerantes e duas sensíveis à seca, submetidas a 24, 72 e 120 h de déficit hídrico. Dos genes diferencialmente expressos (alguns identificados como transcritos pelas fitas senso e/ou antisenso), 53 foram selecionados para validação por PCR em tempo real. As regiões promotoras de quatro dos genes selecionados foram identificadas por meio das técnicas de andamento cromossômico, de seleção e sequenciamento de cromossomos artificiais de bactéria contendo DNA de cana-de-açúcar e de análise de contigs obtidos por Whole Genome Shotgun. Sete sequências promotoras foram selecionadas e clonadas em um vetor contendo o gene repórter gus. As atividades promotoras destas sequências foram testadas e verificadas em transformações transientes de calos embriogênicos de cana-deaçúcar. Para obtenção de plantas de cana-de-açúcar transgênicas, selecionamos o gene induzido por seca que codifica uma PP2C. Através da transformação de calos embriogênicos de cana-de- açúcar com vetor de silenciamento de pp2c, obtivemos algumas plantas com expressão de pp2c reduzida. O transcriptoma das plantas transgênicas foi avaliado. Em comparação com plantas controles e em condições normais de irrigação, identificamos 352 transcritos com expressão alterada. As plantas transgênicas com pp2c silenciado e plantas controles também foram estudadas num experimento de supressão de rega. Os dados fisiológicos e as observações morfológicas demonstraram que um dos eventos transgênicos apresentou tolerância à seca. A comparação do transcriptoma das plantas irrigadas contra as submetidas à seca e da planta tolerante contra não tolerantes ao estresse mostrou que diversos genes estavam diferencialmente regulados, inclusive aqueles envolvidos na sinalização por ABA, via no qual o gene pp2c atua. / Sugarcane has a unique characteristic among crop plants in the world: the ability to accumulate high levels of sucrose in its stems. In Brazil, due to the local and global increasing demand for renewable energy sources, it is notable the expansion of sugarcane cultivation to areas less favorable for cultivation, such as the dry regions of central-western Brazil. Water deficit is one of the main agents that affect plant development. The production of better varieties is critical to the sustainability and expansion of the sugarcane industry. In this way, genes regulated by drought are important targets for obtaining transgenic plants tolerant to stress. Since transgene constitutive expression may cause unwanted effects in transgenic plants, it is also important to identify of stress inducible promoters. The goal of this work is the identification of genes and promoters regulated by drought in sugarcane that, in addition to contributing to the understanding of the mechanisms involved in stress tolerance, can be used as targets for the production of transgenic plants more resistant to water stress. For the identification of genes differentially expressed in response to drought, we have used different microarray platforms: SUCAST (contains 1,830 genes related to signal transduction), SUCAMET (contains 4,594 genes related to metabolism) and CaneRegNet (contains probes for the identification of sense and antisense transcripts that correspond to 14,522 unique genes). In these platforms we analysed gene expression of four different sugarcane varieties, two tolerant and two sensitive to drought, after 24, 72 and 120 h of water deficit. From the genes differentially expressed (some transcribed by the sense and/or antisense strand), 53 were selected for qPCR validation. Promoter regions of four genes were identified by Chromosome Walking, selection and sequencing of BACs and the analyses of Whole Genome Sequencing contigs. Seven promoter sequences were selected and cloned into a vector containing the gus reporter gene. Promoter activity was tested and verified through the transient transformation of sugarcane embryogenic calli. For sugarcane transgenics production we selected the drought-induced pp2c gene. Through the transformation of sugarcane embryonic calli with a vector for pp2c silencing we obtained transformed plants with pp2c gene expression reduced. The transcriptome of transgenic plants was analysed. In comparison with control plants and in irrigated conditions, we identified 352 differentially expressed transcripts. Transgenic plants with silenced pp2c and control plants were studied in a pilot drought experiment. Physiological data and morphological observations indicated that one of the transgenic events presented tolerance to drought. The comparison between irrigated and drought plants and between tolerant and no tolerant showed that a large number of genes was differentially regulated including genes related to the ABA signaling, pathway in which pp2c acts.

A suspeita de indução de resistência bacteriana a antibióticos melhoradores de desempenho (AMD) e a pressão dos consumidores e dos mercados importadores para a abolição da prática criam a necessidade da descoberta de novas substâncias que funcionem como substitutos aos antibióticos, como os probióticos, prebióticos e simbióticos. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de probiótico, prebiótico e simbiótico sobre o desempenho zootécnico, os rendimentos de carcaça e de cortes e a morfologia intestinal de frangos de cortes criados de 1 a 43 dias de idade. Foram utilizados 1200 pintos de 1 dia, machos, da linhagem comercial Cobb 500®, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado, com 5 dietas experimentais: Controle, Antibiótico (virginiamicina), Probiótico (Bacillus subtilis), Prebiótico (mananoligossacarídeo - parede celular de Saccharomyces cerevisae) e Simbiótico (Bacillus subtilis + mananoligossacarídeo - parede celular de Saccharomyces cerevisae) e 8 repetições de 30 aves cada. Em relação ao desempenho zootécnico, os aditivos testados provaram ser alternativas viáveis ao antibiótico melhorador de desempenho utilizado, uma vez que apresentaram resultados melhores que os do grupo controle e iguais aos obtidos com o uso do AMD. Da mesma maneira, para os rendimentos de carcaça e de cortes, o probiótico, o prebiótico e o simbiótico, mostraram poder ser usados como substitutos ao antibiótico, uma vez que promoveram rendimentos iguais aos do grupo alimentado com AMD. Por fim, para a morfometria intestinal, os dados obtidos mostram não haver uma relação direta entre a presença de aditivo e uma maior altura de vilosidade, menor profundidade de cripta ou maior relação vilo:cripta, uma vez que nem sempre os animais suplementados tiveram melhores resultados que o grupo controle negativo. Desta maneira concluí-se que os aditivos usados podem substituír o antimicrobiano testado, em suas respectivas doses, para as fases de criação consideradas, uma vez que fornecem resultados tão bons quanto aos obtidos com o AMD. / The suspect of the resistance\'s indution of antibiotics (ATB) and the pressure of the consumers and of the importing markets for the abolishment of this kind of practice have criated the necessity of discovering new substances that work like substitutes to antibiotics, just like probiotics, prebiotics and symbiotcs. In this manner, the objective of this study it was evaluate the effects of probiotic, prebiotic and symbiotic on performance, carcass and parts yield and intestinal morphology of broilers from 1 to 43 days of age. There were used 1,200 one-day-old chicks, male, Cobb 500® strain, distributed on a completely randomized design, with 5 experimental diets: Control, Antibiotic (virginiamicin), Probiotic (Bacillus subtilis), Prebiotic (Saccharomyces cerevisae yeast cell) and Symbiotic (Bacillus subtilis + Saccharomyces cerevisae yeast cell) and 8 replicates with 30 chicks each one. Concernig on the performance, the tested additives have been proved to be viable alternatives to used antibiotic, once that they have showed better results than the control group, and similars to the ones that were obtained with the use of antibiotic (ATB). Equally, for the carcass and parts yield, probiotic, prebiotic and symbiotic have showed they can be used like substitutes to antibiotics, once they have promoted equall yields to the group fed antibiotic. At last, for the intestinal morphology, the data haven\'t showed relation between the additive\'s presence and a higher vilo high, a smaller cript depth and a higher vilo:cript ratio, once not always animals fed additives have had better results than the control group. This way, the conclusion is that the substitution of the antimicrobian by the additives, in its respective doses, can be adopted once promotes good results as the antibiotic.

A citricultura brasileira é a maior produtora e exportadora de citros e tem sido afetada por doenças que causam sérios prejuízos a produção e a qualidade dos frutos. No entanto, a cultura apresenta grandes problemas, entre eles, os fatores fitossanitários, que vem dizimando milhares de plantas e afetando a produtividade e a competitividade do setor. Atualmente, o huanglongbing (HLB), associado às bactérias de floema Candidatus Liberibacter spp., é considerado uma das mais destrutivas doenças de citros. A inexistência de cultivares de laranja doce resistentes ao HLB torna a transformação genética de citros uma ferramenta importante no controle desta doença. Para se defender do ataque de pragas e patógenos as plantas desenvolveram, durante o processo evolutivo, uma série de mecanismos de defesa, no qual pode-se incluir a produção de peptídeos com atividade antimicrobiana. As defensinas vegetais são peptídeos pequenos relacionadas à patogênese (PR), que possuem atividade antimicrobiana associada aos mecanismos de defesa das plantas. Assim, o objetivo deste trabalho foi a obtenção de plantas transgênicas de laranja doce (Citrus sinensis L.) cvs. \'Hamlin\', \'Natal\', \'Valência\' e \'Pera\', via Agrobacterium tumefaciens, superexpressando o gene codificador de defensina (def), isolado de Citrus sinensis cv. \'Valência\', dirigido pelo promotor com expressão preferencial no floema AtSUC2 (transportador de sacarose, clonado de Arabidopsis thaliana) ou pelo promotor constitutivo CaMV 35S (clonado do vírus do mosaico da couve-flor). Os explantes utilizados na transformação genética foram segmentos de epicótilo obtidos de plantas germinadas in vitro. A identificação das plantas transgênicas foi realizada por meio da análise da PCR, utilizando-se primers para a detecção do fragmento do gene de seleção nptII. As plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação. A análise de Southern blot confirmou a integração do transgene em 36 plantas. Foram obtidas 7 plantas transgênicas da cultivar \'Hamlin\', 9 da cultivar \'Natal\', 1 da cultivar \'Pera\' e 9 da cultivar \'Valência\' contendo a construção gênica pC35S/def, e 3 plantas transgênicas da cultivar \'Hamlin\', 6 da cultivar \'Natal\' e 1 da cultivar \'Valência\' contendo a construção gênica pcAtSUC2/def. Os resultados obtidos neste trabalho serão importantes para futura avaliação e estudo visando o controle de Candidatus Liberibacter spp.. / The Brazilian citrus industry is the world\'s largest producer and exporter of citrus, however, it has been affected by diseases that cause serious production losses and damages to fruit quality. However, the culture faces problems, namely phytosanitary issues that have been damaging thousands of plants, affecting yield and competitiveness of the sector. Currently, Huanglongbing (HLB), associated with phloem bacteria Candidatus Liberibacter spp., is considered one of the most destructive citrus diseases. The lack of sweet orange cultivars resistant to HLB makes genetic transformation an important tool in the disease control. To defend from pest and pathogen attack, plants developed a series of defense mechanisms during the evolutionary process, which may include the production of peptides with antimicrobial activity. Plant defensins are small peptides related to pathogenesis (PR) which have antimicrobial activities, associated with plant defense mechanisms . The objective of this study was to obtain transgenic plants of sweet orange (Citrus sinensis L.) cultivars \'Hamlin\', \'Natal\', \'Valência\' and \'Pera\' with Agrobacterium tumefaciens overexpressing the defensin gene (def), isolated from Citrus sinensis cv. \'Valência\', controlled by the promoter with preferential expression in the phloem AtSUC2, (sucrose transporter, cloned from Arabidopsis thaliana) or by the constitutive promoter CaMV 35S (cloned from the mosaic virus of cauliflower). The explants used in genetic transformation were epicotyl segments obtained from germinated plants in vitro. The identification of transgenic plants was accomplished by PCR analysis using primers for the detection of nptII gene fragment. The PCR+ plants were acclimatized and transferred to greenhouse. The analysis of Southern blot confirmed the transgene integration in 36 plants. Seven transgenic plants were obtained for the cultivar \'Hamlin\', nine for \'Natal\', one for \'Pera\' and nine for \'Valência\' containing the gene construct pC35S/def and three transgenic plants for \'Hamlin\', six for \'Natal\' and one for \'Valência\' containing the gene construct pcAtSUC2/def. The results obtained in this work are important for future evaluation of the plants for resistance to Candidatus Liberibacter spp..

Apesar da eficácia dos antimicrobianos como melhoradores no desempenho animal, questões relativas à seleção de microorganismos resistentes e transferência desses para o consumo humano de carne vêem trazendo uma crescente preocupação que tem provocado diminuição do seu uso. Assim, há necessidade da busca de alternativas, destacando-se as ervas medicinais, as quais apresentam ações, antimicrobiana, antioxidante, imunomodulatória e ainda, estimulante da secreção de enzimas digestivas. O objetivo do estudo foi avaliar a ação de um fito composto, produzido pela adição de partes aéreas secas e trituradas de plantas medicinais (Rosmarinus officinalis, Mentha piperita, Lippia sidoides e Lychnophora pinaster), em leitões, desde a creche até o abate, sobre parâmetros de desempenho, freqüência de diarréia, eliminação fecal de salmonelas, lesões histopatológicas intestinais e oxidação lipídica da carcaça. Os animais foram submetidos a duas situações: uma de desafio experimental (D, com inoculação de Salmonella typhimurium aos 35 dias de idade) e outra sem desafio (SD), permanecendo ambos grupos em salas isoladas. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com arranjo fatorial 3x2, sendo um fator o desafio, e outro, a suplementação de aditivos na ração (fito composto FITO; antibióticos ATB; e controle negativo, sem adição de promotores CTRL). Foram alojados 120 leitões recém-desmamados aos 21 dias de idade, na unidade de creche do Laboratório de Pesquisa em Suínos. Os animais foram pesados aos 21, 35, 49, 63 dias (creche) aos 96 e 106 dias (crescimento) e 131 dias de idade (terminação), e verificado o consumo de ração. Foi avaliada a freqüência de dias com diarréia (FDD) na creche, além da eliminação fecal de S. typhimurium, observando-se lesões histopatológicas causadas pela bactéria no trato entérico, e oxidação lipídica da carcaça aos 131 dias de idade. Não houve interação entre aditivos e desafio para nenhuma variável estudada. O peso médio (PM) do grupo ATB foi mais elevado durante todos os períodos em relação a FITO e CTRL, e estes não diferiram entre si; no entanto, aos 96 e 106 dias, o PM dos animais CTRL foi maior que FITO. De 21 a 35 dias de idade, a conversão alimentar (CA) do grupo ATB foi significativamente menor que CTRL; no entanto, FITO promoveu valor intermediário, não diferindo estatisticamente de ambos. O desafio experimental levou à queda no consumo diário de ração (CDR) de 35 a 48 dias. No entanto, no período final de crescimento, houve um efeito compensatório sobre as variáveis de desempenho, sendo PM, ganho diário de peso (GDP), CDR e CA significativamente melhores na sala D. Ainda, nesse período, na sala D, todas essas variáveis foram melhores para FITO, apesar da diferença ser meramente numérica, sugerindo efeito compensatório desse aditivo. O ATB promoveu menor FDD dos 21 aos 48 dias; no entanto, dos 35 aos 48 dias, FITO promoveu uma melhora mais rápida no quadro que CTRL. Não houve influência dos aditivos sobre a eliminação fecal de salmonelas, lesões histopatológicas no trato entérico ou sobre a oxidação lipídica na carcaça. Assim, a melhor CA na creche, e o efeito compensatório no final da fase de crescimento justificam futuras pesquisas sobre a ação do produto. / Despite the proven efficiency of antibiotics as growth promoters, issues associated to selection of microbial resistance and its impact over human health are rising concern between consumers and decreasing their use. Therefore, alternatives must be found, and medical herbs, with antimicrobial, antioxidant, immunomodulatory and stimulatory of digestives enzymes properties, seem promising. This study was carried out in order to evaluate the action of a phyogenic compound of medical herbs (Rosmarinus officinalis, Mentha piperita, Lippia sidoides and Lychnophora pinaster) towards piglets from weaning to slaughter, on performance parameters (body weight BW; average daily gain ADG; average daily feed intake ADFI; and feed conversion FC), frequency of diarrhea, fecal shedding of salmonellas, gut hystopatological lesions and lipid oxidation of meat, either under a challenged condition (C) or a non-challenged condition (NC). Experimental challenge consisted of oral administration of Salmonella typhimurium to piglets, at 35 days of age. Both groups were kept in isolated rooms. Experimental design was at random, and the treatments distributed in a 3x2 factorial arrangement. Factors were: challenge (C and NC) and additives (phytogenic compound PHYTO; antibiotic ATB; and control CTRL). 120 weaned piglets (21 days years old) were housed at nursery unit of Laboratory of Researche in Swine (LPS), and weighted at 21, 35, 49, 63 (nursery), 96, 105 (growing) and 131 (finishing) days of age. There was not interaction between factors. BW of ATB group was higher througout the experimental period. From 21 to 35 days of age, FC of ATB group was significantly lower than CTRL; however, PHYTO showed intermediary value, which did not statistically differ from both ATB and CTRL. Challenge caused lower ADFI from day 35 to 48. Nevertheless, at the final of growing period (96 to 105 days of age), there was a compensatory effect on performance, and animals out of C room had showed better values of BW, ADG, ADFI, FC than NC. At C room, such parameters were better for animals out of PHYTO group (although the differences were merely numerical), suggesting thus a compensatory effect of this compound. ATB has lead to lower FDD from day 21 to 48; however, from day 35 to 48, FDD of PHYTO group was lower than CTRL. There was not effect of additives on fecal shedding of salmonellas and on lipd oxidation of carcass. Further studies on the effect of the phyto compound must be carried out, especially during the growing and finishing periods.