Dissertação apresentada para obtenção do grau de Mestre em Planeamento e Projecto em Ambiente Urbano, nas Faculdades de Engenharia e Arquitectura da Universidade do Porto, sob a orientação do Prof. Doutor Rui Braz Afonso

Tese de mestrado integrado. Engenharia Civil (Especialização em Construções). Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2010

Atualmente o Brasil ocupa lugar de destaque entre os produtores de citros sendo o maior produtor de laranja doce do mundo. Entretanto, essa produção vem sendo gravemente afetada, por doenças como o huanglongbing (HLB), que tem causado perdas significativas para toda cadeia citrícola. O HLB está associado a bactérias Gram-negativas, restritas ao floema das plantas, denominadas Candidatus Liberibacter spp., que além de reduzir a produção de frutos, podem, em casos mais severos da doença, ocasionar a morte da planta. Uma importante estratégia para controle desta doença é a produção de plantas transgênicas expressando genes, especificamente no local de colonização do patógeno. O objetivo deste trabalho foi a obtenção de plantas transgênicas de Citrus sinensis cvs. \'Pera\' e \'Natal\', contendo o gene atacina A (attA) que codifica um peptídeo antibacteriano, dirigido por promotores preferencialmente expressos no floema: AtSuc2 (transportador de sacarose) ou AtPP2 (proteína de floema 2), clonados de Arabidopsis thaliana, ou CsPP2 (proteína de floema 2) clonado de Citrus sinensis. A identificação de 65 plantas transgênicas foi realizada, por meio da análise de PCR. Foi verificado um número menor de eventos transgênicos, utilizando-se a construção gênica pCAtSuc2/attA em relação ao número de eventos transgênicos obtidos com as construções gênicas pCCsPP2/attA e pCAtPP2/attA. Plantas identificadas como transgênicas pela análise de PCR, foram aclimatizadas e transferidas para casa-devegetação certificada para o cultivo de plantas transgênicas. Análises de Southern blot foram realizadas em plantas aclimatizadas que apresentaram desenvolvimento suficiente, confirmando-se a integração do gene attA. A expressão do gene attA foi confirmada pela análise de RT-qPCR. As plantas transgênicas obtidas neste trabalho, contendo o gene attA dirigido por promotores preferencialmente expressos no floema, serão avaliadas em uma etapa futura para resistência a Candidatus Liberibacter spp. / Currently, Brazil is a major citrus producer and the world\'s largest producer of sweet oranges. However, diseases, such as huanglongbing (HLB) have seriously affected this production, causing significant losses in citrus production chain. HLB is associated with Gram-negative bacterias, restricted to the phloem of plants, called Candidatus Liberibacter spp., which besides reducing fruit production, can lead to plant death. An important strategy to control this disease is the production of transgenic plants expressing genes, specifically at the region of pathogen colonization. The aim of this study was to obtain transgenic plants of Citrus sinensis cv. \'Natal\' and \'Pera\', containing the gene attacin A (attA) that encodes an antibacterial peptide, driven by preferentially expressed in phloem promoters: AtSuc2 (sucrose transporter) or AtPP2 (phloem protein 2), cloned from Arabidopsis thaliana, or CsPP2 (phloem protein 2) cloned from Citrus sinensis. The identification of 65 transgenic plants was performed by PCR analysis. A lower number of transgenic events were verified using the gene construct pCAtSuc2/attA in relation events obtained with the gene constructs pCCsPP2/attA and pCAtPP2/attA. Plants identified as transgenic by PCR analysis were acclimatized and transferred to a greenhouse certified for growing transgenic plants. The Southern blot analyses were performed in acclimatized plants, which had sufficiently developed, confirming the integration of attA gene. The expression of attA gene was confirmed by RT-qPCR analysis. The transgenic plants obtained in this work, containing the gene attA directed by preferentially expressed in phloem promoters, will be further evaluated for resistance to Candidatus Liberibacter spp.

COSTA, E. Efeito da variação de lítio em catalisadores de ferro tendo potássio e cobre como promotores para a síntese Fischer-Tropsch. 95 f. 2010. Dissertação (Mestrado em Engenharia Química) – Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. / Submitted by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2016-03-23T12:23:25Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_ecosta.pdf: 2161446 bytes, checksum: ec2de3e4dd8bf253f8868c4184687250 (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa(mmarlene@ufc.br) on 2016-03-28T17:12:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_ecosta.pdf: 2161446 bytes, checksum: ec2de3e4dd8bf253f8868c4184687250 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-28T17:12:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_ecosta.pdf: 2161446 bytes, checksum: ec2de3e4dd8bf253f8868c4184687250 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / New environmental regulations and a possible instability in the international oil market have led to a renewal interest in the Fischer-Tropsch Synthesis (FTS), which is an alternative to produce more environmental friendly fuels. The FTS is a polymerization reaction, in which syngas (H2 + CO) reacts in the presence of catalyst to produce hydrocarbons. Three iron-based catalysts supported in silica and promoted with lithium were synthesized and the effects of lithium content and operating conditions (temperature and pressure) were studied. The composition of the catalysts was based on 100Fe/5Cu/24K/240SiO2 (molar basis) with varying lithium concentration 06Li, 12Li e 24Li. The catalysts were characterized by X-ray fluorescence, X-ray diffraction, thermogravimetric analysis, textural analysis and temperature programming reduction. An experimental planning was carried out for each catalyst, varying the temperature from 240 to 270 ºC and the pressure from 20 to 30 atm. The answer variables were the average carbon number (Nm), dispersion and curtosis of the product distribution. The reactions were carried out in a slurry bed reactor and the products were analyzed by gas chromatography. The products were identified by means of internal standards and quantified by mass balance. The product distribution of the FTS presented a normal distribution in the diesel and wax region. The distribution was similar to a Gaussian curve for all catalysts. The liquid products consisted mainly of n-parafins. The results for all catalysts presented significant quantities of n-parafins in the range of 20 to 36 carbons. The perturbation analysis of the independent variables (temperature, pressure and lithium content) showed that only the lithium content has a significant effect over the average carbon number, at a 90% confidence level. The lithium content presented a negative effect over the average carbon number. / Diante das atuais exigências ambientais e uma possível instabilidade no mercado internacional de petróleo, o processo de Síntese de Fischer-Tropsch (SFT) representa uma nova trajetória tecnológica na busca de combustíveis alternativos limpos. A SFT é uma reação de polimerização, na qual o gás de síntese (H2 + CO) reage na presença de um catalisador produzindo uma mistura de hidrocarbonetos. A fim de se estudar o efeito das condições operacionais (temperatura e pressão) e do teor de lítio como promotor em catalisadores de ferro para a (SFT) foram sintetizados três catalisadores suportados em sílica. A composição desses catalisadores em base molar seguiu o padrão: 100Fe/5Cu/24K/240SiO2, variando apenas a concentração de lítio, em 06Li, 12Li e 24Li. Os catalisadores foram caracterizados através das técnicas de fluorescência de raios-X, difração de raios-X, análise termogravimétrica, análise textural e redução a temperatura programada. Foi realizado um planejamento experimental fatorial para cada catalisador e as variáveis respostas selecionadas foram o número médio de carbono (Nm), a dispersão e a curtose da distribuição dos produtos. A pressão variou de 240 a 270ºC e a pressão de 20 a 30 atm. As reações foram conduzidas em um reator de leito de lama de alta pressão e os produtos gerados foram analisados por cromatografia gasosa e identificados através de padrões internos e quantificados a partir de balanços molares e programa computacional de estimativa de área dos picos. A distribuição de hidrocarbonetos resultantes da reação da Síntese de Fischer-Tropsch apresentou comportamento de uma distribuição normal para fração diesel e graxa, semelhante ao comportamento de uma Gaussiana para todos os catalisadores nas condições estudadas. Os produtos líquidos obtidos nas corridas experimentais da SFT são constituídos principalmente de n-parafinas. Os resultados de todos os experimentos para os três tipos de catalisador apresentaram quantidades significativas de n-parafinas na faixa de 20 a 36 átomos de carbono. A análise estatística da perturbação das variáveis independentes do processo (temperatura, pressão e concentração de lítio no catalisador) sobre o número médio de carbonos mostra que apenas a concentração de lítio no catalisador tem um efeito significativo para um intervalo de confiança de 90%. A concentração de lítio apresenta influência negativa, indicando que sua utilização desfavorece a produção de hidrocarbonetos de maior peso molecular.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-20T16:31:37Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_DesenvolvimentoProdutoLiofilizado.pdf: 1353740 bytes, checksum: 0dbb3f77e20473254bde70eca12d48c3 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-08-25T12:37:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_DesenvolvimentoProdutoLiofilizado.pdf: 1353740 bytes, checksum: 0dbb3f77e20473254bde70eca12d48c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-25T13:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_DesenvolvimentoProdutoLiofilizado.pdf: 1353740 bytes, checksum: 0dbb3f77e20473254bde70eca12d48c3 (MD5) Previous issue date: 2013 / O objetivo desse trabalho foi desenvolver um produto liofilizado a partir de soluções aquosas micelares de Pluronic® F-127 (F127) contendo insulina (INS) e ácido oleico (AO). Espera-se que este produto liofilizado se transforme em gel no trato gastrintestinal e promova a absorção de INS na mucosa do intestino. Primeiramente avaliou-se o efeito de diferentes concentrações de F127 e AO sobre a capacidade das soluções alcançarem o estado gel a 37 °C. O perfil de liberação de INS a partir das formulações no estado gel foi avaliado in vitro em meio de dissolução tampão fosfato pH 7,4. A partir deste estudo, ajustes nas concentrações de F127 e AO foram feitos e dois produtos liofilizados foram desenvolvidos. A reidratação do produto liofilizado, bem como, o perfil de liberação de INS e o tamanho médio das micelas/partículas formadas no meio de dissolução (HCl 0,1M, tampão fosfato pH7,4, solução de sais biliares 0,1 e 1,0%) foram avaliados. Na parte final do trabalho, cápsulas liofilizadas contendo INS e AO e diferentes concentrações de F127 e sais biliares (SB) foram desenvolvidas. A reidratação e o perfil de liberação de INS em tampão fosfato pH 7,4 a partir dos produtos liofilizados foram avaliados. De um modo geral, levando-se em conta o menor tamanho encontrado para as micelas/partículas nos meios de dissolução contendo SB e uma liberação da INS mais efetiva de algumas das formulações que as contém, acredita-se que a presença desses sais, em formulações de F127, juntamente com a presença de ácidos graxos insaturados são potenciais candidatos à administração de INS por via oral. _______________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The purpose of this study was to develop a lyophilized product from aqueous micellar solutions of Pluronic® F-127 (F127) containing insulin (INS) and oleic acid (OA). This product is expected to become a gel in the gastrointestinal tract and to promote the INS absorption in the mucosa of the intestine. Firstly, solutions containing different concentrations of F127 and OA were prepared, and their ability to reach the gel state at 37 °C was evaluated. The INS release profile of gelled formulations were evaluated in vitro in phosphate buffer pH 7.4. From this study, adjusts in the concentration of F127 and OA were done and two lyophilized formulations were developed. The rehydration of the lyophilized product, as well as the INS release profile and the average size of the micelles/particles in the dissolution media (HCl 0.1 M, phosphate buffer pH 7,4, bile salts solution 0,1 and 1,0%) were evaluated. Finally, freeze-dried products containing INS and OA and different concentrations of F127 and bile salts (BS) were developed. The rehydration and the INS release profile from the lyophilized products in phosphate buffer pH 7.4 were evaluated. In resume, considering the smaller size of micelles/particles formed in the dissolution media containing BS and the most effective INS release from some formulations containing them, it is believed that the combination of BS and unsaturated fatty acids within F127 formulations are potential candidates for improving the intestinal absorption of INS orally administered.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas, Programa de Pós-Graduação em Sociologia Política, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-10-19T13:13:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 338208.pdf: 2660853 bytes, checksum: 0dea81dce16c6101d67bebec82ba8d00 (MD5) Previous issue date: 2015 / As promotoras de justiça realizam uma atividade que por séculos foi reconhecida como atividade exclusivamente masculina, contudo poucos são os registros que mostram como se deu a inserção e emergência dessas mulheres nesse campo jurídico. Assim, nessa pesquisa foram abordados temas que revelam alguns aspectos da vida dessas mulheres, como os desafios a que se submeteram no início de suas carreiras; as táticas que lançaram mão para que fossem vistas e aceitas como profissionais, seja por seus pares ou pela sociedade civil; como conciliam sua vida profissional e privada, e qual a trajetória de vida dessas mulheres, temas pouco ou quase nada estudados, mas que merecem fazer parte da memória coletiva feminina brasileira. Esta pesquisa é predominantemente qualitativa, realizada através de entrevistas feitas com promotoras de justiça da grande Florianópolis, aprovadas no concurso público no período compreendido entre 1970 e 2010. Do questionamento inicial dessa pesquisa sobre as diferenças nas relações de gênero vivenciadas pelas primeiras promotoras de justiça ? década de 1970 e 1980 - e as vivenciadas por aquelas que adentraram a instituição do Ministério Público de Santa Catarina em um novo contexto social, pode-se observar que, embora, elas verbalizem não sentirem ou identificarem a presença de dominação masculina em seu ambiente profissional, seja pela igualdade de direitos que a lei confere aos profissionais da área ou pela autonomia que têm para realizar suas tarefas, constatou-se que ela ainda se faz presente e atuante na atividade meio da instituição.<br> / Abstract : District Attorney perform an activity that for centuries was recognized as exclusively a male activity, but there are few records that show how was the insertion and emergence of these women in this legal field. This research has investigated topics that reveal some aspects of the lives of these women, as the challenges that have undergone early in their careers; the tactics used for be seen and accepted as professionals, either by their peers or by civil society; how to reconcile their professional and private life, and what life trajectory of these women, topics little or nothing studied, but they deserve to be part of the Brazilian women's collective memory. This research is predominantly qualitative, conducted through interviews with District Attorneys of Florianopolis, approved inthe public contest of Prosecution Office of Santa Catarina in the period between 1970 and 2010. And so the initial question of this research about the differences of gender relations experienced by the first District Attorneys - the 1970s and 1980s- and experienced by those who joined into Prosecution Office of Santa Catarina in a new social context, we observe that although they verbalize not feel or identify the presence of male dominance in the workplace, whether for equal rights that the law gives the professionals, or the autonomy they have to do their jobs, it was found that this male domination still does present and active in the midst activity of Prosecution Office of Santa Catarina.

Atualmente o Brasil ocupa lugar de destaque entre os produtores de citros sendo o maior produtor de laranja doce do mundo. Entretanto, essa produção vem sendo gravemente afetada, por doenças como o huanglongbing (HLB), que tem causado perdas significativas para toda cadeia citrícola. O HLB está associado a bactérias Gram-negativas, restritas ao floema das plantas, denominadas Candidatus Liberibacter spp., que além de reduzir a produção de frutos, podem, em casos mais severos da doença, ocasionar a morte da planta. Uma importante estratégia para controle desta doença é a produção de plantas transgênicas expressando genes, especificamente no local de colonização do patógeno. O objetivo deste trabalho foi a obtenção de plantas transgênicas de Citrus sinensis cvs. \'Pera\' e \'Natal\', contendo o gene atacina A (attA) que codifica um peptídeo antibacteriano, dirigido por promotores preferencialmente expressos no floema: AtSuc2 (transportador de sacarose) ou AtPP2 (proteína de floema 2), clonados de Arabidopsis thaliana, ou CsPP2 (proteína de floema 2) clonado de Citrus sinensis. A identificação de 65 plantas transgênicas foi realizada, por meio da análise de PCR. Foi verificado um número menor de eventos transgênicos, utilizando-se a construção gênica pCAtSuc2/attA em relação ao número de eventos transgênicos obtidos com as construções gênicas pCCsPP2/attA e pCAtPP2/attA. Plantas identificadas como transgênicas pela análise de PCR, foram aclimatizadas e transferidas para casa-devegetação certificada para o cultivo de plantas transgênicas. Análises de Southern blot foram realizadas em plantas aclimatizadas que apresentaram desenvolvimento suficiente, confirmando-se a integração do gene attA. A expressão do gene attA foi confirmada pela análise de RT-qPCR. As plantas transgênicas obtidas neste trabalho, contendo o gene attA dirigido por promotores preferencialmente expressos no floema, serão avaliadas em uma etapa futura para resistência a Candidatus Liberibacter spp. / Currently, Brazil is a major citrus producer and the world\'s largest producer of sweet oranges. However, diseases, such as huanglongbing (HLB) have seriously affected this production, causing significant losses in citrus production chain. HLB is associated with Gram-negative bacterias, restricted to the phloem of plants, called Candidatus Liberibacter spp., which besides reducing fruit production, can lead to plant death. An important strategy to control this disease is the production of transgenic plants expressing genes, specifically at the region of pathogen colonization. The aim of this study was to obtain transgenic plants of Citrus sinensis cv. \'Natal\' and \'Pera\', containing the gene attacin A (attA) that encodes an antibacterial peptide, driven by preferentially expressed in phloem promoters: AtSuc2 (sucrose transporter) or AtPP2 (phloem protein 2), cloned from Arabidopsis thaliana, or CsPP2 (phloem protein 2) cloned from Citrus sinensis. The identification of 65 transgenic plants was performed by PCR analysis. A lower number of transgenic events were verified using the gene construct pCAtSuc2/attA in relation events obtained with the gene constructs pCCsPP2/attA and pCAtPP2/attA. Plants identified as transgenic by PCR analysis were acclimatized and transferred to a greenhouse certified for growing transgenic plants. The Southern blot analyses were performed in acclimatized plants, which had sufficiently developed, confirming the integration of attA gene. The expression of attA gene was confirmed by RT-qPCR analysis. The transgenic plants obtained in this work, containing the gene attA directed by preferentially expressed in phloem promoters, will be further evaluated for resistance to Candidatus Liberibacter spp.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas, Programa de Pós-Graduação em Sociologia Política, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:47:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 338208.pdf: 2660853 bytes, checksum: 0dea81dce16c6101d67bebec82ba8d00 (MD5) Previous issue date: 2015 / As promotoras de justiça realizam uma atividade que por séculos foi reconhecida como atividade exclusivamente masculina, contudo poucos são os registros que mostram como se deu a inserção e emergência dessas mulheres nesse campo jurídico. Assim, nessa pesquisa foram abordados temas que revelam alguns aspectos da vida dessas mulheres, como os desafios a que se submeteram no início de suas carreiras; as táticas que lançaram mão para que fossem vistas e aceitas como profissionais, seja por seus pares ou pela sociedade civil; como conciliam sua vida profissional e privada, e qual a trajetória de vida dessas mulheres, temas pouco ou quase nada estudados, mas que merecem fazer parte da memória coletiva feminina brasileira. Esta pesquisa é predominantemente qualitativa, realizada através de entrevistas feitas com promotoras de justiça da grande Florianópolis, aprovadas no concurso público no período compreendido entre 1970 e 2010. Do questionamento inicial dessa pesquisa sobre as diferenças nas relações de gênero vivenciadas pelas primeiras promotoras de justiça ? década de 1970 e 1980 - e as vivenciadas por aquelas que adentraram a instituição do Ministério Público de Santa Catarina em um novo contexto social, pode-se observar que, embora, elas verbalizem não sentirem ou identificarem a presença de dominação masculina em seu ambiente profissional, seja pela igualdade de direitos que a lei confere aos profissionais da área ou pela autonomia que têm para realizar suas tarefas, constatou-se que ela ainda se faz presente e atuante na atividade meio da instituição.<br> / Abstract : District Attorney perform an activity that for centuries was recognized as exclusively a male activity, but there are few records that show how was the insertion and emergence of these women in this legal field. This research has investigated topics that reveal some aspects of the lives of these women, as the challenges that have undergone early in their careers; the tactics used for be seen and accepted as professionals, either by their peers or by civil society; how to reconcile their professional and private life, and what life trajectory of these women, topics little or nothing studied, but they deserve to be part of the Brazilian women's collective memory. This research is predominantly qualitative, conducted through interviews with District Attorneys of Florianopolis, approved inthe public contest of Prosecution Office of Santa Catarina in the period between 1970 and 2010. And so the initial question of this research about the differences of gender relations experienced by the first District Attorneys - the 1970s and 1980s- and experienced by those who joined into Prosecution Office of Santa Catarina in a new social context, we observe that although they verbalize not feel or identify the presence of male dominance in the workplace, whether for equal rights that the law gives the professionals, or the autonomy they have to do their jobs, it was found that this male domination still does present and active in the midst activity of Prosecution Office of Santa Catarina.

La síntesis de Fischer-Tropsch (SFT) es en la actualidad, la ruta más eficiente para la producción de hidrocarburos a partir de gas natural, metano o carbón. El principal interés de la SFT, es la obtención de combustible sintético (diesel y gasolina) de alta calidad y medioambientalmente limpio. Para la producción de diesel sintético se utilizan catalizadores de cobalto soportado sobre SiO2 (Co/SiO2), con una elevada selectividad a hidrocarburos pesados, pero que sin embargo son poco activos debido a la baja dispersión de la fase de cobalto activa sobre SiO2. En la presente tesis se han ensayado diversas sílices mesoporosas ordenadas (MCM-41, MCM-48, SBA-15 y Me-MCM-41), como soportes alternativos para catalizadores de cobalto de FT. La elevada área superficial de estos materiales y su estructura de canales ordenada permite dispersar el cobalto con mayor eficacia, con respecto al soporte convencional SiO2. En esta serie, el mejor resultado de actividad y selectividad a hidrocarburos pesados, se ha obtenido para el catalizador de cobalto soportado sobre SBA-15. Por ello, se ha investigado la influencia de diversos parámetros (contenido de cobalto, sal precursora de cobalto, incorporación de promotores) en las propiedades catalíticas del catalizador Co/SBA-15. Por otra parte, se ha explorado el uso de las zeolitas deslaminadas ITQ-2 e ITQ-6 (de alta área externa y estabilidad hidrotermal), como soportes para catalizadores de cobalto de FT. Estos catalizadores también resultan más activos y selectivos a hidrocarburos pesados que el catalizador de referencia (Co/SiO2). Para la obtención de gasolina sintética se utilizan catalizadores de FT basados en hierro. No obstante, debido al bajo rendimiento a la fracción gasolina obtenida directamente del proceso de FT y a la baja calidad (octano) de ésta, es necesario llevar a cabo diversos procesos (craqueo, reformado, isomerización) sobre los hidrocarburos obtenidos de la reacción de FT, para aumentar el rendimiento y la calidad (octanaje) de la fracción gasolina. Por ello, en la última parte de esta tesis, se han preparado y ensayado catalizadores híbridos que combinan un catalizador de hierro y una zeolita capaz de promover reacciones (in-situ) de craqueo y aromatización de los productos primarios de FT. El estudio de la influencia de la estructura zeolítica, indica que la combinación del catalizador de hierro de FT con la zeolita ZSM-5 permite obtener el mayor rendimiento a la fracción de gasolina, y dentro de ésta, a isoparafinas y aromáticos. El estudio del efecto de la relación Si/Al, de la presencia de promotores (Pd, Ga) o del tamaño de cristal de la zeolita, indica diversos métodos para optimizar el rendimiento del catalizador híbrido hacia los productos de interés, así como su estabilidad en el proceso catalítico. / López Cruz, C. (2004). Materiales mesoporosos y zeolitas deslaminadas como soportes para catalizadores de Fischer-Tropsch basados en Cobalto [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/131736

[EN] END1 is an anther-specific gene of pea (Pisum sativum. L) that displays specific expression in the cell lines that will develop the epidermis, connective, middlle layer and endothecium tissues from very early stages (anther primordium) to late stages of the anther development. The END1 promoter region drives the uidA (GUS) gene expression specifically to the anthers of Arabidopsis thaliana, Nicotiana tabacum and Lycopersicon esculentum. The chimaeric END1::GUS gene is regulated exactly like the endogenous END1. The spatial and temporal expression pattern of END1 and the functionality of its promoter region in different plant species suggested us the possibility to use its promoter region for biotechnological applications. We fused the 2’7 kb END1 5’ region with the ribonuclease barnase gene. The barnase is a natural ribonuclease isolated from Bacillus amyloliquefaciens. The chimaeric END1::barnasa gene was introduced into Arabidopsis, tobacco and tomato plants. The expression of the chimaeric gene inhibited anther morphogenesis and efficiently produced male-sterile transgenic plants. A detailed histological study of the development of both, WT and transgenic anthers, showed severe morphological differences from very early stages of anther development. The effects of barnase in transgenic anthers appeared when the anther was at the stage of anther primordium and it was composed by undifferentiated cells. Our results show that the END1 promoter might be a biotechnological tool to generate male-sterile plants for the production of hybrid crop plants. Tomato male-sterile transgenic plants produced parthenocarpic fruits. This observation suggests that male-sterility in tomato is related to the induction of parthenocarpic fruits. To identify and characterize cis-regulatory elements involved in the promoter strength and specificity, expression analysis were performed using constructs containing the END1 promoter, modified by deleting different nucleotide sequences, and the β-glucuronidase gene. Our results reveal that the 5’ region -336/-6 is sufficient to direct properly the spatial and temporal END1 gene expression and also, suggest that the END1 might be a target gene of floral organ identity genes of classes B and C. / [ES] END1 es un gen de guisante (Pisum sativum L.) específico de antera que comienza a expresarse desde estadios tempranos del desarrollo (primordio de antera) en aquellas líneas celulares que darán lugar a los tejidos epidermis, conectivo, capa intermedia y endotecio, y en estos tejidos una vez desarrollados. La región promotora de dicho gen es capaz de dirigir la expresión específica del gen uidA (GUS) a las anteras de plantas de diferentes especies (Arabidopsis thaliana, Nicotiana tabacum y Lycopersicon esculentum). El patrón de expresión del gen GUS en esas plantas es similar al del gen END1 en guisante. Esta especificidad que confiere el promotor de END1 para la expresión de un gen foráneo en las anteras ofrecía la posibilidad de utilizarlo, fusionándolo a un gen citotóxico, como una herramienta biotecnológica para la obtención de plantas transgénicas androestériles. En este trabajo, hemos fusionado la región 5’ completa (-2736/-6) del promotor de END1 a la secuencia codificante de la ribonucleasa extracelular producida por el Bacillus amyloliquefaciens, barnasa. Con esta construcción hemos transformado dos plantas modelo, Arabidopsis y tabaco y una planta de interés agronómico, el tomate. La expresión del gen citotóxico barnasa donde END1 es activo, trajo como consecuencia una degeneración de tejidos de la antera que inhibió el desarrollo de los granos de polen. Las plantas transgénicas resultantes fueron androestériles. Los estudios a nivel histológico de las anteras transgénicas mostraron que los efectos de la barnasa comienzan a observarse muy pronto en el primordio de antera, cuando este está constituido sólo por células indiferenciadas, y continúa observándose a lo largo del desarrollo de la misma. De manera general, al final del programa de desarrollo, las anteras transgénicas eran de menor tamaño, su morfología era distinta de las de las anteras silvestres correspondientes, y en su interior se observaba el tejido conectivo colapsado y una estructura amorfa en lugar de granos de polen viable. La posible pérdida de las células parietales primarias por la acción ribonucleasa podría estar afectando la diferenciación de las células esporógenas, contiguas en el territorio del futuro microsporangio. Estos resultados muestran que el promotor de END1 podría ser una herramienta biotecnológica útil en los programas de obtención de semillas híbridas de diferentes cultivos de interés agronómico. En el caso particular del tomate, todas las plantas transgénicas androestériles produjeron frutos partenocárpicos. Este resultado muestra que existe una relación entre la androesterilidad y el desarrollo autónomo del ovario en esa especie. Por otra parte, se ha realizado un análisis del promotor del gen END1. Para este análisis se realizaron delecciones sucesivas de la región 5’ del gen y los fragmentos resultantes se fusionaron transcripcionalmente al gen delator uidA (GUS). Con estas construcciones se transformaron plantas de A. thaliana y se estudió la expresión del gen uidA mediante el ensayo histoquímico de la actividad de la β-glucuronidasa. Hemos visto que el fragmento de 366/-6 de la región 5’ es la secuencia mínima con capacidad para dirigir la correcta expresión espacial y temporal del gen END1. La pérdida de la expresión de GUS en las anteras de las plantas de Arabidopsis thaliana transformadas con el fragmento de la región 5’ donde se elimina el motivo CArG2, apoya la hipótesis de que END1 podría estar regulado directamente por los genes de identidad de órgano de clase B y C. / [CA] END 1 és un gen de pèsol (Pisum sativum L.) específic d'antera que comença a expressar-se des d'estadis primerencs del desenvolupament (primordi d'antera) en aquelles línies cel·lulars que donaran lloc als teixits epidèrmics, connectiu, capa intermèdia i endoteci, i en aquests teixits una vegada desenvolupats. La regió promotora d'aquest gen és capaç de dirigir l'expressió específica del gen uidA (GUS) a les anteres de plantes de diferents espècies (Arabidopsis thaliana, Nicotiana tabacum i Lycopersicon esculentum). El patró d'expressió del gen GUS en aquestes plantes és similar al del gen END1 en pèsol. Aquesta especificitat que confereix el promotor d' END 1 per a l'expressió d'un gen forà les anteres oferia la possibilitat d'utilitzar-lo, fusionant-lo a un gen citotòxic, com una ferramenta biotecnològica per a l'obtenció de plantes transgèniques androestèrils. En aquest treball, hem fusionat la regió 5' completa (-2736/-6) del promotor d' END1 a la seqüència codificant de la ribonucleasa extracel·lular produïda per Bacillus amyloliquefaciens, barnasa. Amb aquesta construcció hem transformat dos plantes model, Arabidopsis i tabac i una planta d'interés agronòmic, la tomata. L'expressió del gen citotòxic barnasa a on END1 és actiu, porta com a conseqüència una degeneració de teixits de l'antera que va inhibir el desenvolupament dels grans de pol·len. Les plantes transgèniques resultants foren androestèrils. Els estudis a nivell histològic de les anteres transgèniques mostraren que els efectes de la barnasa comencen a observar-se molt prompte en el primordi d'antera, quant aquest está constituït només per cèl·lules indiferenciades, i continua observant-se al llarg del desenvolupament de la mateixa. De forma general, al final del programa de desenvolupament, les anteres transgèniques eren de menor mida , la seua morfologia era diferent de la de les anteres silvestres corresponents , i al seu interior s'observava el teixit connectiu col lapsat i una estructura amorfa en lloc de grans de pol·len viable. La possible pèrdua de les cèl·lules parietals primàries per l'acció ribonucleasa podria estar afectant la diferenciació de les cèl·lules esporògenes,contigües en el territori del futur microesporangi. Aquests resultats mostren que el promotor d' END1 podria ser una ferramenta biotecnològica útil en els programes d'obtenció de llavors híbrides de diferents cultius d'interès agronòmic. En el cas particular de la tomata, totes les plantes transgèniques androestèrils produïren fruits partenocàrpics. Aquestresultat mostra que existeix una relació entre l'androstèrilitat i el desenvolupament atònom de l'ovari en eixa espècie. D' altra banda, s' ha realitzat una anàlisi del promotor del gen END1. Per a aquesta anàlisi és realitzaren delecions successives de la regió 5' del gen i els fragments resultants es fusionaren transcripcionalment al gen delator uidA (GUS). Amb estes construccions és transformaren plantes de A. thaliana i es va estudiar l'expressió del gen uidA mitjançant l'assaig histoquímic de l'activitat de la beta-glucuronidasa. Hem vist que el fragment de 366/-6 de la regió 5' ès la seqüència mínima amb capacitat per a dirigir la correcta expressió espacial i temporal de gen END1. La pèrdua de l'expressió de GUS en les anteres de les plantes d'Arabidopsis thaliana transformades amb el fragment de la regió 5' a on és elimina el motiu CArG2, recolza la hipòtesi que END1 podria estar regulat directament pels gens d'identitat d'òrgan de la classe B i C. / Este trabajo ha sido financiado por el Ministerio de Ciencia y Tecnología mediante los proyectos BIO2000-0940 y BIO2003-01171. Ha sido posible la realización del mismo gracias a la beca otorgada por las Cortes Valencianas en su programa de ayuda a los países del tercer mundo, a las becas de acción social otorgadas por el Rector de la Universidad Politécnica de Valencia Justo Nieto Nieto y a los contratos de trabajo adjudicados a los proyectos antes mencionados. / Roque Mesa, EM. (2004). Análisis funcional y aplicaciones biotecnológicas del promotor del gen END1 de guisante (Pisum sativum L.) [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/114847 / TESIS