Made available in DSpace on 2015-04-14T13:09:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 389286.pdf: 1859740 bytes, checksum: 5056bcedea79433eb88e0c64523c9659 (MD5) Previous issue date: 2007-03-26 / Angiostrongil?ase abdominal ? uma infec??o zoon?tica causada por Angiostrongylus costaricensis, um nemat?deo com uma localiza??o intra-vascular no mesent?rio. O diagn?stico ? realizado somente com exame patol?gico de fragmentos do tecido ressecado, durante o tratamento cir?rgico de curso cl?nico complicado (perfura??o intestinal e/ou obstru??o). M?todos de imunodiagn?stico mostram muitas dificuldades com rea??o cruzada de anticorpos e a diversidade de resposta humoral. Esfor?os t?m sido direcionados para uma contribui??o na identifica??o e purifica??o de ant?genos espec?ficos de parasitos no desenvolvimento de m?todos sorodiagn?sticos. No presente estudo, foi analisado o uso de uma prote?na recombinante de A. costaricensis, a prote?na de choque t?rmico (HSP 20), em ELISA como sorodiagn?stico. Um dos clones de cDNA, obtido e expresso como uma pequena prote?na de choque t?rmico HSP 20 com 147 amino?cidos, apresentou identidade com seq??ncias de pequenas prote?nas de choque t?rmico de outros nemat?deos. A seq??ncia correspondente foi sub-clonada no vetor de express?o pET-23a-d (+), utilizando a t?cnica de PCR para a constru??o da prote?na recombinante HSP 20. O alto n?vel de express?o de HSP 20 em Escherichia coli BL 21 (DE3), clonado no vetor de express?o, foi observado ap?s indu??o com 1 mM de IPTG a 37 ?C. A etapa da purifica??o do recombinante HSP 20 foi realizada com a resina de Ni-NTA. An?lise do Western blot utilizando soro de um paciente com diagn?stico confirmado para angiostrongil?ase abdominal, indicou que o produto de express?o purificado foi imunog?nico. A sensibilidade da HSP 20 foi de 33%. Entretanto, 100% de especificidade da prote?na recombinante sugere o uso de um painel de ant?genos, na tentativa de m?ltiplos testes de varredura, para um sorodiagn?stico melhor e preciso da angiostrongil?ase abdominal

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:33:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 442103.pdf: 1045106 bytes, checksum: c41cb173539d408ecd0b051fca78598e (MD5) Previous issue date: 2012-07-31 / Introduction: Heat shock proteins like mycobacterial HSP70 has a protective and anti-inflamatory activity in several animals models diseases, like arthritis and skin allograft. This protein can modulates both the innate and adaptative immune system. Objective: The aim of this study was evaluate the effect of HSP70 from M. tuberculosis on development of pulmonary allergic reponse in a mice model. Methods: Female BALBc mice with ovalbumin induced pulmonary disease received intraperitoneal inject or intranasal instillation of mycobacterium HSP70. Treg cell in lung tissue, inflammatory cells profiles and cytokines levels in broncalveolar lavage fluid was measured. Results: HSP70 show an inhibitory effect on pulmonary allergic response on mice. Eosinophils, IL-5 and IFN- levels was reduced in broncoalveolar lavage fluid in animals that received intranasal instillation of mycobacterial HSP70. Conclusion: Mycobacterial HSP70 can be efficiently used to treat airway allergic disorders. / Introdu??o: Algumas prote?nas de choque t?rmico, como a HSP 70 micobacteriana, apresentam propriedades anti-inflamat?rias e protetoras em modelos experimentais de doen?as como artrite e aloenxertos cut?neos. Essa prote?na pode modular tanto o sistema imune inato quanto o adaptativo. Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da prote?na HSP70 de M. tuberculosis no desenvolvimento da resposta pulmonar al?rgica em um modelo experimental de asma al?rgica em camundongos. M?todos: camundongos BALB/c f?meas submetidos a um protocolo de indu??o de asma por ovalbumina foram expostos a prote?na HSP70 de M. tuberculosis atrav?s de diferentes vias de administra??o (intraperitoneal e intranasal). Foram analisados par?metros inflamat?rios (leuc?citos e citocinas IFN, IL-4, IL-5 e IL-10) no fluido do lavado broncoalveolar. Resultados: A administra??o de MtHSP70 intranasal reduziu significativamente o infiltrado inflamat?rio e os n?veis de IL-5 e IFN- no lavado broncoalveolar. Conclus?o: A prote?na HSP70 micobacteriana pode apresentar potencial aplica??o no tratamento da asma al?rgica.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 383317.pdf: 533302 bytes, checksum: d1c54ea34e0bdbcdd31f54bbce98b274 (MD5) Previous issue date: 2006-08-16 / Base te?rica - A doen?a obstrutiva severa de art?rias car?tidas (DOSAC) est? relacionada ? aterosclerose (ATC). Mecanismos de inflama??o e auto-imunidade podem influenciar o deflagramento da ATC. Neste contexto, incluem-se anticorpos antifosfol?pides (AAF), marcadores da s?ndrome antifosfolip?dica (SAF) e anticorpos contra prote?nas de choque t?rmico (anti-Hsp). A beta2-glicoprote?na I (beta2-gpI) e as Hsp de 60 e 65 kilodaltons (kDa) s?o mol?culas encontradas em ateromas. O relato ? o primeiro a incluir a pesquisa de IgA anticardiolipina (aCL), IgG/IgM/IgA antibeta2-gpI e anti-HSP em casu?sticas de DOSAC. Objetivo - Avaliar a associa??o, se alguma, entre ocorr?ncia de AAF/anti-Hsp e DOSAC. Pacientes e M?todos - Neste estudo de caso-controle, os casos consistiram de uma popula??o de pacientes com DOSAC (sintom?tica ou assintom?tica). A presen?a de DOSAC foi definida pela anamnese, exame f?sico, angiografia por resson?ncia nuclear magn?tica (ARM) e endarterectomia de car?tida. Os controles foram selecionados de enfermarias de ortopedia. Ambos os grupos foram avaliados quanto aos fatores de risco: idade, sexo, ra?a, hipertens?o arterial sist?mica (HAS), tabagismo, diabete mellitus (DM) e hipercolesterolemia. Anticorpos IgG/IgM/IgA aCL, IgG/IgM/IgA antibeta2-gpI, IgG anti-Hsp 60 kDa humana recombinante e IgG anti-Hsp 65 kDa de Mycobacterium bovis foram detectados atrav?s de ensaio enzim?tico. Para estimar o grau de associa??o dos anticorpos com DOSAC, raz?o de chances (odds ratios, OR) foram calculadas com seus respectivos IC 95%. Regress?o log?stica foi utilizada para ajuste de fatores de confus?o. Resultados - Entre os 57 casos e 93 controles estudados, a m?dia de idade foi de 66 + 8,7 anos nos casos e de 47,5 + 18,8 anos nos controles (P<0,001). A ra?a negra predominou no grupo controle. O sexo masculino foi mais freq?ente nos casos (61,4%), situa??o que se inverteu nos controles (49,5%). As presen?as de HAS (OR=21,0; IC95% 8,0 a 57,1; P<0,001) e de hipercolesterolemia (OR=25,5; IC95% 9,5 a 70,9; P<0,001) determinaram, entre os fatores de risco conhecidos, as mais fortes associa??es com DOSAC. Anticorpos IgA antibeta2-gpI foram detectados em 33,3% dos casos e em 9,7% dos controles (OR ajustado 4,7; IC95% 1,0 a 23,7; P=0,06). A freq??ncia dos outros anticorpos testados n?o diferiu significantemente em casos e controles. Conclus?o - N?o houve associa??o entre ocorr?ncia de aCL, IgG/IgM antibeta2- gpI, anti-Hsp e desfecho DOSAC. A presen?a de anticorpos IgA antibeta2-gpI se configurou como fator de risco independente para DOSAC (OR ajustado 4,7), embora com signific?ncia lim?trofe (P=0,06). A associa??o de IgA antibeta2-gpI com DOSAC pode representar um dos elos na rela??o auto-imunidade e aterosclerose carot?dea.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438527.pdf: 10657738 bytes, checksum: caad3abdc5d9b9863dbe5c3d7120700f (MD5) Previous issue date: 2012-03-26 / Transplantation of solid organs has emerged as a viable therapeutic modality for the treatment of a variety of disorders. Rejection of solid organ allografts is the result of a complex range of interactions involving coordination between both the innate and adaptive immune system. Therewith, a major goal of clinical organ transplantation is to induce a donor-specific unresponsive state in a mature immune system that is free from long-term immunosuppression and chronic rejection. The limitations in the establishment of immunossupressive stratagies led us to search new methods to the modulation of the homeostatic mechanisms that limit and prevent inflammatory responses in allograft tissue. The heat shock protein 70 (Hsp70) has a protective and antiinflamatory role in several animals models like arthritis, colitis, pulmonary fibrosis and brain injury. This protein can modulates both the innate and adaptative immune system. Our group demonstrated that Mycobacterium tuberculosis Hsp70 (Mt Hsp70) can inhibit bone marrow dendritic cells (BMDCs) maturation; however the mechanisms involved in this process has not been completely elucidated. In the present work, we demonstrated that Mt Hsp70 inhibited the acute rejection in two allograft models (a tumor model and a skin allograft model).In both models, we observed an involvement of Tregs. In addition, s.c. Mt Hsp70 injection leds to an increase in Treg population and IL-10 production in the draining lymph node. We also observed that the inhibition of acute rejection induced by Mt Hsp70 was dependent on the presence of toll-like receptor (TLR) 2 in the allograft, and not in the host. In BMDCs, we demonstrated that IL-10 production induced by Mt Hsp70 is dependent on TLR2. Also, we analyzed the phosphorylation of ERK, p38 and Akt after Mt Hsp70 stimulus. We observed an increase in p-ERK expression, but no difference in p-38 and p-Akt levels. The inhibition of ERK abolished the IL-10 production induced by Mt Hsp70. We propose that Mt Hsp70 effect on DCs can be used as a therapeutic approach in transplantation models. / O transplante de ?rg?os s?lidos emergiu como uma terapia vi?vel para o tratamento de uma variedade de patologias. A rejei??o dos enxertos ? resultado de uma s?rie complexa e coordenada de intera??es envolvendo o sistema imune inato e adaptativo. Com isso, o maior desafio no transplante de ?rg?os s?lidos ? induzir um estado irresponsivo e espec?fico ao doador em um sistema imune maduro sem que haja uma imunossupress?o sist?mica e de longo prazo, tudo isso livre de rejei??o cr?nica. As limita??es no estabelecimento de estrat?gias imunossupressoras nos levaram a buscar novos m?todos para a modula??o dos mecanismos homeost?ticos que previnem e limitam as respostas inflamat?rias nos tecidos enxertados. A prote?na de choque t?rmico (Heat shock protein Hsp) 70 tem um papel antiinflamat?rio e protetor em modelos animais experimentais como artrite, colite, fibrose pulmonar e danos cerebrais. Essa prot?ina pode modular tanto o sistema imune inato quanto o adaptativo. Nosso grupo demonstrou que a Hsp70 de Mycobacterium tuberculosis (Mt Hsp70) pode inibir a matura??o de c?lulas dendr?ticas diferenciadas da medula ?ssea (bone marrow dendritic cells BMDCs), por?m o mecanismo envolvido nesse processo ainda n?o foi totalmente esclarecido. Nesse trabalho, demonstramos que a Mt Hsp70 foi capaz de aumentar a sobrevida do enxerto em dois modelos murinos de transplantes (um modelo tumoral e um modelo de aloenxerto cut?neo).Em ambos os modelos, observamos o envolvimento de Tregs. Demonstramos que a administra??o s.c. da Mt Hsp70 levou a um aumento dessas c?lulas nos linfonodos drenantes, al?m de um aumento na produ??o de IL-10. Tamb?m observamos que a inibi??o da rejei??o aguda induzida pela Mt Hsp70 no modelo de aloenxerto cut?neo ? dependente da presen?a do receptor do tipo toll (toll like receptor TLR) 2 no enxerto, e n?o no receptor. Nas BMDCs, vimos que a indu??o da IL-10 induzida pela Mt Hsp70 ? dependente de TLR2. Ainda nessas c?lulas, analisamos a fosforila??o de mol?culas como a ERK, p38 e Akt ap?s o est?mulo com a Mt Hsp70. Observamos um aumento na express?o de p-ERK e nenhuma altera??o nos n?veis de p-p38 e p-Akt. A inibi??o da ERK aboliu a produ??o de IL-10 induzida pela Mt Hsp70. Propomos que esse efeito da Mt Hsp70 sobre as DCs pode servir como interven??o terap?utica em modelos de transplantes.