Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: Daniel Galera Bernabé / Coorientadora: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Eder Ricardo Biasoli / Banca: Laura Cristina Sichero Vetorazzo / Resumo: Evidências sugerem que o papilomavírus humano (HPV) está associado com um subgrupo de carcinomas de células escamosas da cabeça e pescoço (HNSCC). No entanto, a prevalência do HPV varia substancialmente dependendo do local anatômico e da região geográfica estudada. Aqui, nosso objetivo foi investigar a prevalência do HPV em amostras de tecido fresco de pacientes brasileiros com carcinoma de células escamosas (CEC) de boca e orofaringe combinando dois métodos confiáveis para a detecção do HPV. Foram recrutadas trinta e seis amostras de tecido fresco provenientes de CEC de boca (n= 27) e orofaringe (n= 9) para análises. As características sociodemográficas, estilo de vida e clinicopatológicas foram coletadas através dos prontuários. O DNA do HPV foi detectado por dois métodos: reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real através de ensaio qualitativo de presença ou ausência do HPV-16, e testado para 37 genótipos usando Linear Array. A amplificação do gene β -globina funcionou como controle interno positivo para a análise do DNA em todas as amostras. O DNA do HPV não foi detectado em nenhum dos casos de amostras de tecido de pacientes com CEC em ambos os métodos utilizados. A ausência do HPV observada em nosso estudo pode sugerir que este não é um fator de risco prevalente nos CECs de boca e orofaringe nesta região geográfica. Os fatores de risco clássicos para o desenvolvimento desses tumores parecem ser ainda a principal causa nessa população brasileira. Investigações de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Evidence suggests that human papillomavirus (HPV) is associated with a subgroup of squamous cell carcinomas of the head and neck (HNSCC). However, the prevalence of HPV varies substantially depending on the anatomical site and geographic region studied. Here, our goal was to investigate the prevalence of HPV in fresh tissue samples from Brazilian patients with squamous cell carcinoma (SCC) of the oral cavity and oropharynx by combining two reliable methods for the detection of the HPV DNA. We recruited thirty-six fresh tissue samples from SCC of the oral cavity (n= 27) and oropharynx (n= 9) for analysis. The sociodemographic, lifestyle and clinicopathological characteristics were obtained from individual medical records. HPV DNA was detected by two methods: real-time polymerase chain reaction (PCR) through the qualitative assay of presence or absence for HPV-16, and tested for 37 genotypes by the Roche Linear Array. Amplification of the β-globin gene functioned as a positive internal control for DNA analysis in all samples. HPV DNA was detected in none of the tissue samples from patients with SCC in both methods. The absence of HPV observed in our study may suggest that this is not a prevalent risk factor in SCC of the oral cavity and oropharynx in this geographical region. The classic risk factors for the development of these tumors seem to be still the main cause in this Brazilian population. Detailed investigations of lifestyle with larger sample needs to be better explored to understand the low prevalence found / Mestre

Orientador: Paula Rahal / Coorientadora: Paola Jocelan Scarin Provazzi Trabulsi / Banca: Tatiana Rabachini / Banca: Cristiane Damas Gil / Banca: Patricia Simone Leite Vilamaior / Banca: Rejane Maira Góes / Resumo: Introdução. A infecção por Papilomavírus humano (HPV) está relacionada a doenças benignas e malignas, sendo o grau de patologia dependente do tipo viral, da resposta imune do hospedeiro e de fatores ambientais. O condiloma acuminado são lesões hiperproliferativas benignas encontradas principalmente em epitélios não queratinizados. O objetivo deste estudo foi identificar genes e vias celulares associadas às alterações imunes em indivíduos que não eliminaram espontaneamente o vírus e, assim, desenvolveram verrugas genitais. Material e Métodos. Vinte e sete biópsias de condiloma foram genotipadas por sequenciamento direto e seus cDNAs foram organizados em três pools - HPV 6, HPV 11 e pool HPV negativo (margem). Noventa e dois genes relacionados à resposta imune foram analisados por meio da metodologia de TaqMan Array. Seis genes com expressão diferencial obtidos a partir do ensaio de expressão foram validados por qPCR. Além disso, cinquenta e seis amostras parafinadas de condiloma foram submetidas a imuno-histoquímica com anticorpos primários para CD1a, FOXP3, CD3, CD4, CD8 e interferon gama (IFNG). Resultados. Todas as vinte e sete amostras foram HPV positivas e apresentaram HPV 6 (70,4%) ou HPV 11 (29,6%). A análise de expressão gênica resultou em 31 genes diferencialmente expressos em lesões de condiloma acuminado. Seis desses genes tiveram a expressão validada por qPCR. O gene GZMB foi regulado positivamente em 63% das amostras, enquanto o IFNG, IL12B e IL8 foram superexpre... / Abstract: Human papillomavirus (HPV) infection is related to several benign and malignant diseases, the pathology degree is dependent of viral type, host immune response and local environmental factors. Condyloma acuminate are benign proliferative disease, a category of anogenital warts, found mainly on non-keratinized epithelia. The aim of this study was highlight candidate genes and pathways associated with the immune changes in individuals that not eliminated spontaneously the virus and thus developed genital warts. Methods. Twenty-seven condyloma biopsies were genotyped by sequencing and their cDNAs were arranged in three pools - HPV 6, HPV 11 and HPV negative pool (margin). Ninety-two ... / Doutor

Submitted by INGRID DA SILVA SANTOS null (iingridsantos@hotmail.com) on 2017-06-26T03:09:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado_Repositório UNESP_INGRID DA SILVA SANTOS.pdf: 1875360 bytes, checksum: b760f2a2958eb68922d78501172c5f4e (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-06-28T16:45:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_is_me_araca_par.pdf: 1437951 bytes, checksum: 9bb3ef4b8f15e4259996185982c7950e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T16:45:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_is_me_araca_par.pdf: 1437951 bytes, checksum: 9bb3ef4b8f15e4259996185982c7950e (MD5) Previous issue date: 2017-06-02 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas (FAPEAM) / Evidências sugerem que o papilomavírus humano (HPV) está associado com um subgrupo de carcinomas de células escamosas da cabeça e pescoço (HNSCC). No entanto, a prevalência do HPV varia substancialmente dependendo do local anatômico e da região geográfica estudada. Aqui, nosso objetivo foi investigar a prevalência do HPV em amostras de tecido fresco de pacientes brasileiros com carcinoma de células escamosas (CEC) de boca e orofaringe combinando dois métodos confiáveis para a detecção do HPV. Foram recrutadas trinta e seis amostras de tecido fresco provenientes de CEC de boca (n= 27) e orofaringe (n= 9) para análises. As características sociodemográficas, estilo de vida e clinicopatológicas foram coletadas através dos prontuários. O DNA do HPV foi detectado por dois métodos: reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real através de ensaio qualitativo de presença ou ausência do HPV-16, e testado para 37 genótipos usando Linear Array. A amplificação do gene β -globina funcionou como controle interno positivo para a análise do DNA em todas as amostras. O DNA do HPV não foi detectado em nenhum dos casos de amostras de tecido de pacientes com CEC em ambos os métodos utilizados. A ausência do HPV observada em nosso estudo pode sugerir que este não é um fator de risco prevalente nos CECs de boca e orofaringe nesta região geográfica. Os fatores de risco clássicos para o desenvolvimento desses tumores parecem ser ainda a principal causa nessa população brasileira. Investigações detalhadas do estilo de vida com maior amostragem precisam ser melhor exploradas para compreensão da baixa prevalência encontrada. / Evidence suggests that human papillomavirus (HPV) is associated with a subgroup of squamous cell carcinomas of the head and neck (HNSCC). However, the prevalence of HPV varies substantially depending on the anatomical site and geographic region studied. Here, our goal was to investigate the prevalence of HPV in fresh tissue samples from Brazilian patients with squamous cell carcinoma (SCC) of the oral cavity and oropharynx by combining two reliable methods for the detection of the HPV DNA. We recruited thirty-six fresh tissue samples from SCC of the oral cavity (n= 27) and oropharynx (n= 9) for analysis. The sociodemographic, lifestyle and clinicopathological characteristics were obtained from individual medical records. HPV DNA was detected by two methods: real-time polymerase chain reaction (PCR) through the qualitative assay of presence or absence for HPV-16, and tested for 37 genotypes by the Roche Linear Array. Amplification of the β-globin gene functioned as a positive internal control for DNA analysis in all samples. HPV DNA was detected in none of the tissue samples from patients with SCC in both methods. The absence of HPV observed in our study may suggest that this is not a prevalent risk factor in SCC of the oral cavity and oropharynx in this geographical region. The classic risk factors for the development of these tumors seem to be still the main cause in this Brazilian population. Detailed investigations of lifestyle with larger sample needs to be better explored to understand the low prevalence found. / FAPEAM: 120/2015

Resumo: A infecção por Papilomavírus Humano (HPV) oncogênico é o fator de risco mais importante para desenvolvimento de lesões intraepiteliais bem como para o carcinoma epidermóide invasor. A resposta imune tem um papel importante na história natural da infecção pelo HPV na cérvice uterina estando envolvida na persistência viral e na progressão das lesões. As citocinas são moléculas reguladoras da transcrição do HPV, sendo que o padrão Th1 contribui para o desenvolvimento da imunidade celular contra a neoplasia e infecção pelo HPV, e está relacionado com clearance dessa infecção. O padrão Th2 está associado com a persistência da infecção viral e com a progressão das lesões. Avaliar a concentração de IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-g e TNF-a na secreção cervical e no soro de mulheres portadoras de lesão intraepitelial de baixo grau (LIEBG), lesão intraepitelial de alto grau (LIEAG) e carcinoma epidermóide invasor (CE). Foram incluídas no estudo 109 mulheres com diagnóstico histopatológico de LIEBG (n=16), LIEAG (n=40), CE (n=13) e 40 mulheres com suspeita de doença HPV induzida, mas sem alterações histopatológicas na biópsia do colo do útero (grupo controle), atendidas no Ambulatório de Colposcopia da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP) e no Ambulatório de Ginecologia Preventiva do Hospital Amaral Carvalho, Jaú, SP. Durante o exame especular foi coletada a secreção cervical com cytobrush para determinação do perfil de citocinas. O sangue periférico das mulheres incluídas no estudo foi colhido por punção venosa, em volume de 10mL e os padrões de citocinas no soro e na secreção cervical foram avaliados por ensaio imunoenzimático (ELISA). A pesquisa de HPV nas biópsias foi realizada empregando-se a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os primers específicos (MY9/11 e GP5+/GP6+) e a genotipagem foi realizada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Infection with oncogenic types of human papillomavirus (HPV) is the most important factor for development of intraepithelial lesions and invasive squamous cell carcinoma. The immune response has an important role in the natural history of HPV infection in uterine cervix is involved in viral persistence and progression of lesions. Cytokines are molecules that regulate the transcription of HPV; the Th1 cytokine profile contributes to the development of cellular immunity against HPV infection and neoplasia, and is related to clearance of infection. The Th2 cytokine profile is associated with persistence of viral infection and the progression of lesions. Objectve: To evaluate the concentration of IL-2, IL-4, IL-6, IL- 10, IL-12, IFN-g and TNF-a in cervical secretion and serum of women with low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL), high-grade intraepithelial lesion (HSIL) and invasive squamous cell carcinoma (EC). The study included 109 women with histological diagnosis of LSIL (n = 16), HSIL (n = 40), EC (n = 13) and 40 women with suspected of HPVinduced disease, but no pathological changes on cervix biopsy (control group) attending in the Colposcopy Clinic of the Botucatu Medical School (UNESP) and in the Preventive Gynecology, Hospital Amaral Carvalho, Jaú, SP. During speculum examination cervical secretion was collected with cytobrush to determining the profile of cytokines. The peripheral blood of women enrolled in the study was collected by venipuncture in 10 mL volume and patterns of cytokines in serum and cervical secretion were assessed by enzyme immunoassay (ELISA). The search for HPV in the fragments of the biopsies were performed using the technique of polymerase chain reaction (PCR) using specific primers (MY9/11 and GP5+/GP6+) and genotyping was performed using the technique of PCR primers specific and confirmed by the analysis of restriction fragment polymorphism... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Márcia Guimarães da Silva / Coorientador: João Manuel Grisi Candeias / Banca: Denise Fecchio / Banca: Gisele Alborgheti Nai / Mestre

Resumo não disponível

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:38:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) ana_fernandes_ipcec_dout_2011.pdf: 1168893 bytes, checksum: 8127e15ae5d45011b8d8ba254de4a33d (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A citotoxicidade mediada por células desempenha um importante papel na regulação da infecção pelo HPV e na formação de tumores. Apoptose é regulada por diferentes vias envolvendo genes que promovem (BAX) ou inibem (BCL2) a morte celular. Avaliamos a presença de células cervicais inflamatórias, marcadores apoptóticos (BAX, BCL-2, FasL, NOS2, perforina) e o marcador de degranulação (CD107a) em mulheres HPV e HPV/HIV através da técnica de imunohistoquimca. Uma alta porcentagem de células T CD4+ e CD8+ foram observadas em ambos os grupos, com baixa contagem de células T CD4+ em mulheres HPV/HIV. Houve poucas células expressando FasL, BAX e BCL-2 em ambos os grupos. A expressão de NOS2 estava presente especialmente em queratinócitos na camada basal do epitélio em ambos os grupos. Perforina foi idenficada em poucas células cervicais. Contudo, CD107a foi detectado na camada basal do epitélio e estroma, principalmente em mulheres HPV. Determinamos se os SNPs em promotores dos genes BCL2 (-938C>A) e BAX (-248G>A) estariam associados com o risco de neoplasia intraepitelial cervical (NIC) A frequência observada desses SNPs estavam em equilíbrio de Hardy\2013Weinberg nos casos e controles. Nenhuma diferença estatística na frequência genotípica e alélica do polimorfismo de BCL-2 (-938C>A) foi observada entre casos e controles. Contudo, uma forte associação foi identificada na freqüência do genótipo GG de BAX (-248G>A) entre os casos e controles. Quando os grupos de LSIL e HSIL foram comparados, nenhuma diferença estatística foi observada, indicando que o genótipo GG pode influenciar no aparecimento de lesões cervicais, mas não na gravidade da doença. Analisamos a expressão de RNAm de genes associados a apoptose (BAX, BCL2, p53 e pRb) e citotoxicidade (perforina e Fas). Quando a expressão de RNAm de Perforina e Fas foram avaliadas, diferença estatística foi observadas em pacientes portadoras de NIC III e câncer Observamos diferença estatística entre os controles e todos os casos, quando analisamos a expressão de RNAm de p53, mas não de pRb, sendo observada diferença apenas nos controles e NIC II e III. Na analise de RNAm de BCL2, notamos uma baixa expressão no grupo de câncer quando comparado com NIC II, III e controle. Em conclusão, a infecção pelo HIV pode induzir redução na degranulação de células inflamatórias, corroborando para a progressão de infecção pelo HPV, e que carreadoras do alelo G na região promotora de BAX (-248G>A) pode estar associado ao desenvolvimento de NIC quando comparado com as carreadoras do alelo A, possuindo papel protetor; contudo o alelo G não está correlacionado com a gravidade da doença / Cell - mediated cytotoxicity plays an important role in the regulation of HPV infection, and in tu mor formation. Apoptosis is regulated by different pathways involving a number of genes that either prom ote ( BAX gene)or inhibit ( BCL2 gene) the cell death. We evaluated the presence of cervical inflammatory cells, apoptotic (Bax, Bcl - 2, FasL, NOS2, perforin) markers and the degranulating expressing cell marker (CD107a) from HPV and HPV/HIV women. Higher per centage of cervical CD4 + and CD8 + T cells were observed in both groups, with lower CD4 + T cells count observed in HPV/HIV women. There were few FasL, Bax and Bcl - 2 inflammatory cervical expressing cells in both groups. NOS2 expression was present especially in the epithelium basal layer on keratinocytes in both groups. Perforin was identified in few cervical cells. However, CD107a was detected in the epithelium basal layer and stroma, meanly on HPV women. We determined whether the SNPs of BCL2 ( - 938C>A) and BAX ( - 248G>A) promoters are associated with risk of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) outcome. The observed genotype frequencies of these SNPs were in agreement with Hardy – Weinberg equilibrium in cases and control groups. No statistical difference i n genotype and allelic frequency of BCL - 2 ( - 938C>A) polymorphism was observed between all cases and control groups. However, a strong association was identified in GG genotype frequency of BAX ( - 248G>A) polymorphism between cases and controls. When LSIL an d HSIL groups were compared, no statistical difference was observed, indicating that GG genotype may influence the risk of CIN but not the lesion severity. We analyzed the mRNA expression of apoptosis - associated genes ( BAX, BCL2, p53 and pRb ) and cytotoxic ity - related genes ( perforin and Fas ). When Fas and Perforin mRNA expressions were evaluated, the statistical difference between CIN III and cancer was seen. We observed a statistical difference between control and all cases, when we analyzed p53 mRNA, but in pRb mRNA, we observed difference between control group and CIN II or CIN III. In BCL2 mRNA evaluation, we observed low expression in cancer group when compare with CIN II, III and control. In relation to BAX mRNA, a statistical difference was evaluated with all cases and control. In conclusion, HIV infection may induce reduction on inflammatory cervical cells degranulation corroborating to HPV progression and allele G carriers in the promoter regions of BAX ( - 248G>A) can be related to CIN development whe n compared with allele A carriers that play a protective role; however, allele G was not correlated with the disease severity

Made available in DSpace on 2016-03-08T14:00:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 michelle_silva_ioc_dout_2012.pdf: 7931324 bytes, checksum: 70b78e7f6485074455de8780d640e2a3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A associação do HPV ao câncer de orofaringe tem sido sugerida, apesar da variável prevalência viral nos diferentes estudos. Por outro lado, a relação etiológica do HPV em casos de câncer oral ou de hipofaringe/laringe é ainda controversa. No entanto, estudos recentes tem sugerido que a presença do DNA do HPV nos tumores não é evidência suficiente para a associação causal, sendo fortemente indicado análises de expressão das oncoproteínas virais e do status do genoma do HPV. N presente estudo caso-controle, a prevalência do HPV foi analisada utilizando PCR-nested para detecção viral em 228 casos de câncer de cabeça e pescoço e 227 controles. A análise multivariada dos diferentes tipos de HPV e outros fatores de risco epidemiológicos, ambientais, clínicos e moleculares suportou a associação etológica do HPV no câncer de orofaringe corroborando a hipótese de duas diferentes vias na carcinogênese, uma desencadeada por fatores ambientais, como o consumo de tabaco e álcool e outra direcionada pelo HPV, cujo efeito é evidenciado na ausência desses outros fatores de risco. Entretanto , os dados aqui apresentados sugerem uma relação limitada do HPV aos tumores da cavidade oral e hipofaringe/laringe Apesar da similaridade da prevalência do HPV em casos e controles, os dados deste estudo sugerem fortemente que a distribuição dos tipos de HPV quanto ao potencial carcinogênico é diferenciado, sendo HPV de baixo risco mais frequente em controles e de alto-risco nos casos de câncer de orofaringe. O estudo de casos para presença de DNA e transcritos de RNA de E6 e E7 do HPV por ISH em dois TMAs construídos para o presente estudo mostrou atividade transcricional apenas para os casos de câncer de orofaringe. A superexpressão de p16INK4a foi coincidente na identificação de atividade do HPV por IHQ em caso de câncer de orofaringe, mostrando a eficiência deste marcador A presença de DNA do HPV integrado ao genoma foi detectada na maioria dos casos de câncer de orofaringe, diferente do encontrado para casos de câncer da cavidade oral ou hipofaringe/laringe. Este cenário mostra claramente a distinta associação etiológica do HPV nos diferentes sítios anatômicos de câncer de cabeça e pescoço, principalmente nos pacientes com câncer de orofaringe sem exposição aos principais fatores de risco, o tabaco e álcool / Human Papillomaviruses (HPV) have been associated with oropharynx cancer, even though previous studies show a wide variation o f viral prevalence. On the other hand, the etiological relation of HPV on oral or hypopharynx/ larynx cancers is still controve rsial. However, recent studies have been suggesting that the presence of HPV DNA in tumors is not sufficient evidence for the causal association, for which analyses of viral oncoproteins expression and genome status are strongly indicated. In this case - con trol study, the prevalence of HPV was analyzed using nested - PCR for viral detection in 228 cases of head and neck cancer and 227 controls. Multivariate analyses of different types of HPV and other risk factors epidemiological, environmental, clinical and m olecular supported the etiological association of HPV in oropharyngeal cancer, corroborating the hypothesis of two different pathways in carcinogenesis : O ne related to environmental factors such as tobacco and alcohol consumption , and the second linked to HPV, effect of which is evident in the absence of these other risk factors. However, the data presented here suggest a limited relationship of HPV in tumors of the oral cavity and hypopharynx/ larynx. Despite the similarity of HPV prevalence in cases and c ontrols, data from this study strongly suggest that the distribution of HPV types regarding the carcinogenic potential is differentiated, with low - risk HPV been frequent in controls and high - risk ones in cancer cases of oropharynx. The cases study for the presence of DNA and RNA transcripts of E6 and E7 HPV by ISH in two TMAs constructed for the present study showed transcriptional activity only for cases of oropharyngeal cancer. The overexpression of p16INK4a was coincident in identifying HPV activity by I HC in cases of oropharyngeal cancer, showing the efficiency of this marker. The presence of HPV DNA integrated into the genome was detected in the majority of cases of oropharyngeal cancer, unlike observed for cancers of the oral cavity or hypopharynx/ lar ynx. This scenario clearly show s the distinct etiological association of HPV in different anatomical sites of cancer of the head and neck, especially in patients with oropharyngeal cancer without exposure to the main risk factors, tobacco and alcohol

Orientador: Prof. Dr. Newton Sérgio Carvalho / Co-orientador: Prof. Dr. Renato Mitsunori Nisihara / Co-orientadora: Profª. Drª. Maria da Graça Bicalho / Co-orientadora: Profª. Drª. Iara Taborda Messias Reason / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 21/11/2014 / Inclui referências / Resumo: Introdução- A as lesões associadas com a infecção pelo HPV podem evoluir para lesões pré malignas como as neoplasias intraepiteliais cervicais(NIC) e câncer de colo uterino(CC). Suspeitamos que alguma falha no sistema imune permita a persistência do vírus. Neste estudo foi avaliado de forma transversal a concentração de (MBL) Lectina Ligante de Manose, uma ficolina que atua na via das lectinas do sistema complemento e para se avaliar a hipótese que poderia estar envolvida na evolução da doença. Método- As pacientes atendidas no serviço de Patologia do Trato Genital Inferior do Hospital Erasto Gaertner em 2011, (Hospital do Câncer) foram triadas de acordo com o grau de doença em NIC1, NIC2, NIC3 e Câncer. Foi coletado sangue para exames de rotina e dosagem da concentração de MBL. Resultado- Foram avaliados 364 pacientes distribuídas em NIC1=54, NIC2=72, NIC3=145 e CC = 93. A média de idade foi distinta entre os grupos sendo NIC1(30,6), NIC2(34,4), NIC3(34,3), e CC(48,3). A mediana das concentrações de MBL foram NIC1(1324), NIC2(1104), NIC3(1098), e CC(1452). Conclusão- Os resultados encontrados, não sustentam a hipótese de que níveis de MBL podem influenciar a infecção ou evolução da doença no colo uterino. Também demonstraram que a concentração não variou com a idade das pacientes estudadas. Palavras-chave: MBL, Papiloma vírus Humano, HPV, Câncer de colo uterino, imunidade. / Abstract: Background The lesions associated with HPV infection can progress to pre malignant lesions such as cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and cervical cancer (CC). We suspect a fault in the immune system is what allows the virus persistence. This study evaluated transversely the concentration of Mannose Binding Lectin (MBL) that operates in the ficolin and lectin pathway of the complement system to evaluate the hypothesis that MBL could be involved in the disease progression. Method Patients treated in the Hospital in 2011 (Cancer Hospital) were screened according to the degree of disease in CIN1, CIN2, CIN3 and Cervical Cancer. The blood was collected and tested, for standard blood tests and concentration of MBL. Results We evaluated 364 patients distributed in CIN1=54, CIN2=72, CIN3=145 CC=93 were evaluated. Mean age was different among the groups being CIN1 (30.6), CIN2 (34.4), CIN3 (34, 3), and CC (48.3). The median MBL concentrations were NIC1 (1324), CIN2 (1104), CIN3 (1098), and CC (1452). Conclusion The results do not support the hypothesis that MBL levels may influence the progress of the disease or infection in the cervix. The results also demonstrated that the concentration did not vary with age of the patients studied. Keywords: MBL, human papillomavirus, HPV, Cervical cancer, immunity.

Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: José Fernando Garcia / Coorientador: Styna Marita Syrjänen / Banca: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Eder Ricardo Biasoli / Banca: Alan Roger dos Santos Silva / Banca: Ricardo Della Coletta / Resumo: O papilomavirus humano (HPV) tem sido relacionado com a etiologia dos carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço, em análise de tecidos cerca de 60% destes carcinomas podem ser HPV positivos. O objetivo deste trabalho foi analisar a presença do HPV em material genético obtidos de tecidos, secreção salivar e sangue de pacientes portadores de carcinoma epidermóide (CEC) de orofaringe e controles e a correlação da presença viral com as váriáveis sexo, idade, tabagismo, etilismo e perfil anatomopatologico do tumor. Foi realizada uma análise do material genético de 46 pacientes com diagnóstico de CEC de orofaringe e 40 pacientes sem carcinoma. A extração do DNA dos espécimes foi realizada utilizando o kit de extração de DNA QuiAMP. O DNA isolado foi submetido a PCR para beta-globina para confirmar a presença e integridade do DNA, em seguida, foram realizadas novas reações para detecção do DNA do HPV. Para análise estatística foram empregados o teste Qui-quadrado e teste exato de Fisher. A idade média de idade foi de 60 anos para os casos e 58,2 anos para os controles e a mediana foi de 59 e 56 anos, respectivamente. Os resultados obtidos com a metodologia descrita permitiram concluir que não houve diferenças estatisticamente significativas na análise das variáveis em relação à presença do papilomavírus humano nas amostras de tecidos biológicos dos pacientes estudados / Abstract: Human papillomavirus (HPV) it has been related with head and neck SCC etiology, about 60% of these carcinomas tissues can be HPV positive. The aim of this study was to analyze the HPV presence in genetic material obtained from tissues, salivary secretion and blood of oropharyngeal SCC patients and controls and correlate the virus presence with variables: sex, age, smoking, alcoholism and pathological profile of the tumours.It was made molecular and statistical analysis of genetic material of 46 oral and oropharyngeal SCC patients and 40 controls patients without carcinoma. The DNA extraction of all specimens was accomplished using the DNA extraction kit QuiAMP. The isolated DNA was submitted PCR for beta-globin to confirm the DNA presence and integrity, after new reactions it was accomplished for HPV DNA detection. Chi-square test and Fisher exact test were used for statistical analysis. The average age was 60 years for cases and 58.2 years for controls and the median age was 59 and 56 years respectively. The results obtained with the described methodology shows there was no statistically significant differences between HPV presence in samples of biological tissues and the analyzed variables / Doutor

Orientador: Marilia de Freitas Calmon / Coorientador: Paula Rahal / Banca: Carolina Colombelli Pacca / Banca: Sebastião Roberto Taboga / Resumo: O Papilomavirus humano (HPV) é um dos vírus mais prevalentes entre as infecções sexualmente transmissíveis e está associado com doenças malignas. Os HPVs de alto risco possuem proteínas, denominadas de E6 e E7, caracterizadas como oncoproteínas devido aos seus papéis na transformação celular e na inativação de supressores de tumor. Um dos mecanismos usados na transformação celular pela proteína E6 do HPV de alto risco é a interação do seu domínio carboxi-terminal, PDZ, com domínios PDZs presentes em algumas proteínas celulares, destinando-as à degradação. Uma proteína que está associada com várias condições patológicas e tem domínio PDZ é a protease HtrA1. Esta proteína é pouco expressa em alguns cânceres, sugerindo um papel supressor de tumor. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da superexpressão de HTRA1 em linhagem celular HPV16 positiva (HF698) e HPV negativa (C33). As linhagens celulares foram transfectadas com vetor contendo a ORF de HTRA1 ou vetor vazio. A superexpressão do mRNA e proteína foi confirmada por qPCR e imuno-histoquímica, respectivamente. As linhagens celulares transfectadas foram submetidas a ensaio de formação de colônia, de viabilidade celular, de apoptose e ciclo celular. As células C33 superexpressando HtrA1 formaram significantemente menos colônias e apresentaram redução de viabilidade celular comparadas as células sem expressão de HtrA1. Diferentemente, na linhagem HPV positiva ocorreu aumento no número de colônias nas células superexpressando HtrA1 e não houve diferença no ensaio de viabilidade celular. Esses resultados sugerem que os diferentes padrões observados nas duas linhagens celulares são decorrentes da presença do HPV na HF698 e da ausência na C33. A fim de confirmar se o aumento do número de colônias nas células HF698 superexpressando HtrA1 é decorrente da interação dessa proteína com E6, foi produzida linhagem estável de C33 com ... / Abstract: The Human Papillomavirus (HPV) is one of the most prevalent virus among sexually transmitted infections and it is associated with some malignancies. High risk HPVs contain proteins, E6 and E7, characterized by oncoproteins due to their roles in cellular transformation and suppressor tumor inactivation. One of the mechanisms used in cell transformation by E6 protein from high-risk HPVs is the interaction of its carboxy-terminal domain, known as PDZ, with PDZs domains present in some cellular proteins, triggering them to degradation. A protein that is associated with various pathological conditions and has PDZ domain is the protease HtrA1. This protein is poorly expressed in some cancers, suggesting its tumor suppressor role. The aim of this study was to evaluate the effect of the HtrA1 overexpression in HPV 16 positive (HF698) and HPV negative (C33) cell lines. The cell lines were transfected with vector containing the HTRA1 ORF or empty vector. The mRNA and protein overexpression were confirmed by qPCR and immunohistochemical, respectively. The cell lines transfected were subjected to cell proliferation, viability, apoptosis and cell cycle assays. C33 cells expressing HtrA1 presented significantly fewer colonies and showed reduced viability than cells without HtrA1 expression. On the other hand, in HPV-positive cell line there was an increase in the number of colonies in cells expressing HtrA1 and there was no difference in the cell viability assay. These results suggest that the different patterns observed between the two cell lines studied may be due to the HPV presence in HF698 and its absence in C33 cells. To confirm if the increase in the number of colonies in HPV positive cells (HF698) overexpressing HtrA1 arises from the interaction of this protein with E6, stable lines of C33 containing gene E6 were produced and subsequently performed cell proliferation assay. C33 cells overexpressing E6 and HTRA1 showed an increased number of ... / Mestre