As leishmanioses são um conjunto de doenças cuja maioria tem caráter zoonótico e são causadas por protozoários parasitos do gênero Leishmania, além de ameaçarem cerca de 350 milhões de indivíduos em 98 países. O tratamento é feito à base de antimoniais pentavalentes desde a década de 40, anfotericina B e pentamidina, porém a toxicidade destes, a persistência dos efeitos colaterais e a duração do tratamento são as principais dificuldades na terapia dos pacientes que apresentam tal doença. Neste contexto, a busca de novos fármacos menos tóxicos e mais eficazes é de extrema importância. Como há relatos na literatura de que a associação compostos de prata e ligantes diimínicos apresenta atividade leishmanicida, o presente estudo avaliou a atividade anti-Leishmania in vitro e in vivo de compostos orgânicos contendo este metal em sua estrutura (JB3, JB4, JB5, JB5SF e JB6), além dos ligantes 2-tionaimidazolina e fenantrolina e os prováveis mecanismos de ação. Para tanto, foram feitas análises das atividades leishmanicidas em promastigotas e amastigotas, no contexto in vitro, para a determinação do IC50, além da citotoxicidade em macrófagos peritoneais murinos para determinação do CC50. Para avaliar os possíveis mecanismos de ação destes compostos, foram feitos ensaios de inibição enzimática, utilizando isoforma r-CPB2.8; eletroforese para avaliar degradação do DNA; microscopia de força atômica e dosagem de óxido nítrico. Para análise in vivo foi utilizado PCR em tempo real para quantificar a carga parasitária de hamsters infectados com L. (L.) infantum chagasi após tratamento experimental. O composto que apresentou melhores resultados sobre atividade anti-promastigota e anti-amastigota de L. (L.) amazonensis (8,06 μg/mL, 1,30 μg/mL, respectivamente) e L. (L.) infantum chagasi (1,46 μg/mL, 8,21 μg/mL, respectivamente) foi o JB5, e o que apresentou menor toxicidade foi o 2-tionaimidazolina. Como alguns compostos apresentaram uma toxicidade considerável, avaliou-se este parâmetro no ligante fenantrolina e obteve-se CC50 = 30,80 μg/mL, concluindo que este contribui consideravelmente para a toxicidade dos compostos. Com isso, avaliou-se a atividade leishmanicida contra as formas do parasito do JB5SF (sem o grupamento fenantrolina) e obteve-se IC50 de 1,80 e 8,91 μg/mL. Apesar do 2-tionaimidazolina ter sido o de menor toxicidade não foi tão eficiente para reduzir a carga parasitária das amastigotas teciduais quanto o Glucantime. Contudo, o composto JB5SF que apresentou o maior índice de seletividade (40,34) foi capaz de reduzir a carga parasitária das amastigotas teciduais, apresentando estatística semelhante, no fígado comparado com o fármaco de referência. Os compostos não apresentaram atividade inibitória significativa frente à cisteíno proteases (rCPB2.8) e nem degradação do DNA do parasito. Especificamente o JB5SF na concentração de 5,0 μg/mL não produziu modificações na membrana do protozoário e não alterou significativamente a área da superfície do macrófago infectado. Todavia, o JB5SF na concentração de 10,0 μg/mL e associado ao LPS levou o macrófago infectado a uma maior produção de NO quando comparado ao não tratado. Embora não tenha sido definido o mecanismo de ação do composto sobre o parasito pode-se inferir que o mesmo pode contribuir com a resposta imune estimulando as células macrofágicas no processo de fagocitose. / Leishmaniasis is a group of diseases most of which are zoonotic and are promoted by protozoan parasites of Leishmania genus, threatening around 350 million individuals in 98 countries. Since 1940s, treatment is based on pentavalent antimonials, amphotericin B and pentamidines, however the toxicity of these, the persistence of side effects and the duration of treatment are the main difficulties in the therapy of patients with such disease. In this context, the research for new, less toxic and more effective drugs is of utmost importance. As reported on literature, the association of silver compounds and diimine binders has leishmanicidal activity, the present study evaluated the anti-Leishmania activity in vitro and in vivo of organic compounds containing this metal in its structure (JB3, JB4, JB5, JB5SF And JB6), in addition to the 2-thionaimidazoline and phenanthroline binders and these probable activity mechanisms. With this aim, analyzes of leishmanicidal activities in promastigotes and amastigotes, in vitro context, were performed for IC50 determination, in addition to cytotoxicity in murine peritoneal macrophages using MTT methodology to CC50 determination. Evaluating possible mechanisms of these compounds action, enzymatic inhibition assays were performed using r-CPB2.8 isoform; electrophoresis to evaluate DNA degradation; atomic force microscopy and nitric oxide dosage to evaluate the interaction of these with the parasite and/or macrophage. For in vivo analysis, real-time PCR was performed to quantify the parasite bulk of hamsters infected with L. (L.) infantum chagasi after experimental treatment. The compound that presented the best results on L. (L.) amazonensis (8.06 μg/mL, 1.30 μg/mL, respectively) and L. (L.) infantum chagasi (1.46 μg/mL, 8.21 μg/mL, respectively) activity was JB5, and that showed the lowest toxicity was 2- thionamidazoline. As some compounds presented considerable toxicity, this trait was evaluated on the phenanthroline binder and CC50 was equal 30.80 μg/mL, concluding that this contributes considerably to compounds toxicity. Therefore, the leishmanicidal activity against JB5SF parasite forms (without the phenanthroline group) was evaluated and IC50 ranging from 1.80 and 8.91 μg/mL. Although 2-thionaimidazoline showed the lowest toxicity, it was not as efficient to reduce the amastigotes tissue parasitic bulk as Glucantime. However, the compound JB5SF that had the highest selectivity index (40,34) was able to reduce the parasitic load of the tissue amastigotes, presenting similar statistics, in the liver compared to the reference drug. The evaluated compounds showed no significant inhibitory activity against cysteine proteases (rCPB2.8) and no degradation of parasite DNA. Specifically, 5.0 μg/mL of JB5SF did not produce protozoal membrane modifications and did not alter the significantly surface area of the infected macrophage. However, 10.0 μg/mL JB5SF concentration associated with LPS increased NO production in infected macrophage when compared to untreated. Although the compound action mechanism on the parasite has not been defined, it is possible inferred that the same could contribute to immune response by stimulating macrophages in phagocytosis process

De acordo com a Organização Mundial de Saúde, a doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, ainda faz parte do grupo de doenças negligenciadas, uma vez que ainda são escassos os investimentos destinados às pesquisas para desenvolvimento de novas drogas, de modo que as opções terapêuticas são limitadas. Sendo assim, é evidente a necessidade de estudos com a finalidade de desenvolver novos medicamentos eficazes na quimioterapia da doença. A espécie Tithonia diversifolia, o margaridão, é uma planta considerada invasora no Brasil, sendo encontrada ao longo de rodovias e em terrenos baldios. As lactonas sesquiterpênicas (LSTs) isoladas desta planta, possuem ação anti-inflamatória e anti-parasitária, dentre outras ações farmacológicas. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade tripanocida in vitro do extrato de lavagem foliar rico em LSTs (ELF) e da tagitinina C (TC) extraídos de T. diversifolia, isolados e em combinação com benznidazol (Bz). Adicionalmente, foi avaliado o potencial dos tratamentos, em monoterapia e combinados, em relação à capacidade de induzir a cura parasitológica, prevenir ou reduzir o índice de miocardite e suas influências na resposta imune celular e humoral de animais experimentalmente infectados pela cepa Y do T.cruzi. Os resultados demonstraram que tanto o ELF quanto a TC isolada possuem atividade tripanocida in vitro, apresentando a IC50 de 0,6426 μg/mL e 0,4022 μg/mL, respectivamente. Tais resultados foram considerados promissores quando comparados à IC50 de 9,32 μg/mL do fármaco de referência Bz. Ainda foi observado que o ELF e a TC reduziram em 32% e 51%, respectivamente, o índice de infecção por amastigotas em células H9c2, enquanto o Bz inibiu 36%. Nos experimentos in vivo, foi verificado que tanto o ELF quanto a TC foram capazes de suprimir a parasitemia dos animais experimentalmente infectados pela cepa Y, sendo observada uma potencialização desta atividade quando as LSTs foram combinadas ao Bz, uma vez que o tratamento com ELF+Bz induziu a 70% de cura nos animais, o mesmo índice foi observado no tratamento com Bz em monoterapia. Já a combinação TC+Bz foi capaz de suprimir totalmente a parasitemia e os testes do critério de cura confirmaram um índice de 100% de cura entre os animais submetidos a este tratamento. Através da dosagem de citocinas, foi observado que as terapias combinadas inibiram a produção de IFN-γ e TNF-α, importantes citocinas pró-inflamatórias ligadas à lesão tecidual associada à doença de Chagas, e foi verificado também que animais submetidos aos tratamentos contendo as LSTs apresentaram maiores produções da citocina IL-10, o que sugere uma modulação da resposta imunológica induzida pela atividade anti-inflamatória das LSTs. O benefício da modulação da resposta imune também foi evidenciado pela ausência e/ou redução de miocardite nos animais que receberam o tratamento combinado com ELF+Bz e TC+Bz. De maneira geral, nossos resultados demonstram que o tratamento combinado entre TC e Bz é promissor, pois além de induzir ao índice de cura superior ao Bz em monoterapia, ainda preveniu a miocardite nos animais. Além disso, as LSTs são capazes de interferir na resposta imune do hospedeiro, podendo esta interferência estar relacionada a melhor prognóstico da doença. / According to the World Health Organization, Chagas' disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, is still part of the neglected diseases group, since investments for research into new drug development are scarce, therapeutic options are limited. Thus, the need for studies with the purpose of developing new drugs effective in the chemotherapy of the disease is evident. The Tithonia diversifolia species, daisy, is a plant considered invasive in Brazil, being found along highways and in vacant lots. The sesquiterpene lactones (STLs) isolated from this plant have anti-inflammatory and anti-parasitic action, among other pharmacological actions. In this sense, the objective of this work was to evaluate the trypanocidal activity of foliar lavage extract in STLs (ELF) and tagitinin C (TC) extracted from T. diversifolia, isolated and in combination with benznidazole (Bz). In addition, the potential of monotherapy and combined treatments in relation to the ability to induce parasitological cure, and to prevent or reduce the myocarditis index and its influences on the cellular and humoral immune response of experimentally infected animals by T.cruzi Y strain were evaluated. The results demonstrated that both the ELF and the isolated TC have trypanocidal activity in vitro, presenting the IC50 of 0.6426 μg/mL and 0.4022 μg/mL, respectively. These results were considered promising when compared to the IC50 of 9.32 μg/mL of the reference drug Bz. It was also observed that ELF and TC reduced the rate of infection by amastigotes in H9c2 cells by 32% and 51%, respectively, while Bz inhibited 36%. In the in vivo experiments, it was verified that both ELF and TC could suppress the parasitemia of the animals experimentally infected by strain Y, being observed a potentiation of this activity when the STLs were combined with Bz, once the treatment with ELF + Bz induced 70% cure in the animals, the same rate was observed in the treatment with Bz monotherapy. The TC + Bz combination could completely suppress the parasitaemia and the tests of the curing criterion confirmed a cure rate of 100% among the animals submitted to this treatment. Through dosing of cytokines has been observed that combination therapy inhibited the production of IFN-γ and TNF-α, important inflammatory cytokines related to tissue injury associated with Chagas’ disease, and was also found that animals subjected to treatments containing the STLs, presented higher IL-10 cytokine productions, suggesting a modulation of the immune response induced by the anti-inflammatory activity of the STLs. The benefit of modulation of the immune response was also evidenced by the absence and / or reduction of myocarditis in the animals receiving combined treatment with ELF + Bz and TC + Bz. In general, our results demonstrate that the combined treatment between TC and Bz is promising, since in addition to inducing the cure rate superior to Bz in monotherapy, it still prevented the myocarditis in the animals. In addition, the STLs are capable of interfering in the immune response of the host, and this interference may be related to a better prognosis of the disease. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

El risc d’infecció per Plasmodium falciparum, el paràsit causant de la malària, augmenta durant l’embaràs. La disminució del risc d’infecció en embarassos successius s’atribueix a l’adquisició d’anticossos contra eritròcits infectats a la placenta, els quals expressen en la seva superfície la proteïna VAR2CSA. Aquesta proteïna pertany a la família de lligands polimòrfics PfEMP1, i permet l’adhesió dels paràsits a la placenta mitjançant la seva interacció amb el receptor humà sulfat de condroitina A. Per aquest motiu, VAR2CSA és actualment un candidat a vacuna per a la prevenció de la malària en dones embarassades. No obstant, altres mecanismes com la modulació general de la immunitat durant l’embaràs podrien contribuir a augmentar la susceptibilitat a la infecció. A més, la contribució de paràsits que expressin membres de la família PfEMP1 diferents de VAR2CSA no s’ha estudiat en detall en les infeccions maternes. Per tant, és necessària una millor comprensió dels mecanismes moleculars implicats en la fisiopatologia de la malària en dones embarassades, a fi de desenvolupar intervencions específiques i efectives. Els treballs inclosos en aquesta tesi doctoral demostren que: i) una baixa resposta d’anticossos contra VAR2CSA però també una disminució general dels nivells de IgG poden contribuir a augmentar el risc de malària en el primer embaràs; ii) la infecció de la placenta per P. falciparum estimula la producció d’anticossos amb especificitats múltiples, suggerint que els anticossos en el moment del part són un indicador d’exposició més que de protecció; iii) tot i que la població de paràsits que expressen VAR2CSA és majoritària, paràsits que expressen altres PfEMP1 són freqüents en les infeccions maternes; iv) la presència de determinades variants de seqüència en les regions polimòrfiques de VAR2CSA s’associen a un increment de la densitat de paràsits a la placenta. A nivell immunològic, aquests resultats impliquen que els nivells d’anticossos en fases inicials de l’embaràs o bé altres mecanismes com les respostes cel•lulars podrien ser més rellevants en el control de la infecció, comparat amb els nivells d’anticossos al final de l’embaràs. A nivell molecular, vacunes específiques per a prevenir la malària en dones embarassades podrien ser més efectives si incorporessin aquelles variants VAR2CSA potencialment més patogèniques, així com epítops rellevants d’altres PfEMP1 o altres antígens conservats de P. falciparum. / The thesis project entitled Malaria during pregnancy: maternal immunity and expression of Plasmodium falciparum citoadhesion-related genes focuses on var gene expression patterns in maternal P.falciparum isolates as well as host immune responses against PfEMP1 and merozoite antigens in pregnant women from Mozambique.

Diversos trabajos sobre la leishmaniosis canina han demostrado que el perfil clínico de esta infección es variable, yendo desde formas asintomáticas hasta patologías graves polisintomáticas y desde una evolución con cura espontánea a una resolución fatal, en función de la respuesta inmune que desarrolle el animal a lo largo de la infección.Se ha observado que existe un gran número de perros seropositivos asintomáticos, algunos de los cuales se encuentran en la fase prepatente de la infección, otros en la regresiva y un tercer grupo de animales que presentan formas crípticas, sin manifestar síntomas durante varios años y con una respuesta de anticuerpos baja situada alrededor del umbral de positividad. Ésta es una zona considerada gris en la que coinciden las reacciones cruzadas y las inespecificidades de la técnica. En estos casos, las técnicas serológicas convencionales no distinguen si se trata de animales infectados o no, ni diferencian las fases de la enfermedad en la que se encuentran. Con el objetivo de determinar la utilidad de diferentes técnicas parasitológicas, inmunológicas y moleculares para detectar estas leishmaniosis caninas crípticas se han aplicado varias pruebas diagnósticas a un grupo de perros de zonas endémicas para esta zoonosis. Se ha observado que las técnicas inmunológicas convencionales no discriminan claramente entre animales infectados y no infectados, sino que son los métodos parasitológicos y la PCR los que ofrecen resultados más fiables.También se ha determinado la expresión de IgG, IgG1, IgG2 e IgE específicas anti-Leishmania durante distintas fases de la infección para determinar su relación con la evolución de la infección, la respuesta al tratamiento y su valor pronóstico, viendo que las IgG1 y las IgE son marcadoras de leishmaniosis canina activa y que el nivel de IgG2 está directamente relacionado con la presencia de desórdenes patofisiológicos en los animales.Se ha analizado la expresión idiotípica de IgG1 e IgG2, frente a las diferentes fracciones del antígeno de Leishmania con el objetivo de usarlas como marcadoras de estadio y de evolución en la leishmaniosis canina. Se ha observado que las fracciones polipeptídicas de bajo peso molecular 14, 16 y 18 kDa para IgG1 y 14 y 16 kDa para IgG2 se expresan precozmente en perros infectados por L. infantum, lo que permite detectar diagnósticos falsos negativos mediante pruebas parasitológicas y moleculares en las fases tempranas de la infección, fundamentalmente por parte de las IgG1.Se ha determinado el significado clínico y diagnóstico de la excreción mediante la orina de anticuerpos frente a Leishmania por parte de perros infectados y se ha observado que la presencia de anticuerpos en la orina es debida mayoritariamente a un fallo del filtrado glomerular y, en menor medida, a una producción local de anticuerpos.A pesar de que el perro es el principal reservorio peridoméstico en la zona mediterránea, estudios de epidemiología molecular indican que existe una variabilidad genética de cepas de Leishmania superior a la que se encuentra al analizar las cepas presentes en el perro, por lo que se sospecha que otras especies animales pueden actuar como reservorio. Por ello, se planteó un estudio seroepidemiológico de la leishmaniosis felina para determinar la extensión de esta infección en nuestro entorno. La alta seropositividad encontrada, junto con el patrón de fracciones proteicas revelado por el western blot indican que el gato actúa como verdadero reservorio de la leishmaniosis y no como un hospedador accidental, tal como se venía considerando hasta ahora. / Studies about canine leishmaniosis show that clinic profile of this disease is variable, going from asymptomatic forms to sever pathology, and from spontaneously cure to fatal resolution. Seroepidemiological studies have revealed a large number of asymptomatic seropositive animals. Follow-up of these animals shows that some of them are in the prepatent infection period, others have regressive forms of the disease and others maintain low levels of antibodies without developing the disease for years. The low humoral immunoresponse characteristic of asymptomatic animals frequently places their antibody levels at the borderline of detectability where serological techniques don't discriminate between infected and noninfected animals. To determine the utility of different parasitology, immunology and molecular techniques to detect canine leishmaniosis, we applied various diagnostic methods for dogs from endemic areas and observed that antibody detection are not suitable tools to discriminate infected and noninfected animals, and parasitological methods and PCR offer more accurate results.The study of the level of specific IgG, IgG1, IgG2, and IgE in different phases of infection reveled that IgG1 and IgE are considered markers of the active disease and IgG2 expression is related to pathophysiological disorders.The idiotype expression of IgG1 and IgG2 was analyzed to detect markers related to infection, and to early phases of disease. The early Leishmania infantum infection is characterized by the recognition of polypeptide fractions of low molecular weight, mainly fractions of 14, 16 and 18 kDa by IgG1 and 14 and 16 kDa by IgG2.We have investigate the presence of anti-Leishmania antibodies in the urine of dogs with leishmaniosis and have determined that the presence of these antibodies is mainly caused by the passage into the urinary tract of blood-derived immunoglobulins and, to a lesser extent, by the local production.Dog is the main peridomestic reservoir for leishmaniosis caused by L. infantum, but some studies of molecular epidemiology show a great genetic variability. The study of feline leishmaniosis in Northwestern Mediterranean shows that specific antibodies are prevalent in cats from these ecoregions. So, it could be hypothesized that cats are a secondary reservoir host rather than simply incidental one.

Doutor -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 2002.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-20Bitstream added on 2014-06-13T19:46:42Z : No. of bitstreams: 1 cruz_ld_dr_rcla.pdf: 1201063 bytes, checksum: cc322ba66d3b7aeaa96f2e1ae46979e9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Ácaros mesostigmatídeos e seus roedores hospedeiros compreendem um dos mais ricos e diversos sistemas parasito-hospedeiro da região Neotropical. A maior parte do conhecimento disponível sobre este sistema refere-se a listas de ocorrências, descrições de espécies parasitas e relações de especificidade hospedeira em escalas locais. Estudos ecológicos com o objetivo de procurar padrões de estruturas de comunidades de espécies parasitas, bem como investigar os possíveis processos subjacentes à organização destas comunidades são escassos. Dessa forma, o presente estudo tenta contribuir para o conhecimento ecológico deste sistema parasito-hospedeiro. No Capítulo 1, investigou-se a existência de padrões organizacionais nas infracomunidades de mesostigmatídeos em duas populações do hospedeiro roedor Oligoryzomys nigripes, bem como possíveis fatores subjacentes aos padrões observados. Demonstrou-se que as infracomunidades de mesostigmatídeos podem apresentar variações na sua organização, indo desde infracomunidades completamente aleatórias, a infracomunidades estruturadas. Fatores relacionados à história de vida dos hospedeiros podem ser responsáveis pela estruturação das infracomunidades de mesostigmatídeos; todavia, a proposição de padrões gerais não foi possível, principalmente devido a grande diversidade de espécies parasitas e hospedeiras envolvidas na região Neotropical. No Capítulo 2, investigou-se a existência de padrões de similaridades entre as comunidades de mesostigmatídeos em duas escalas observacionais: comunidade componente e comunidade composta. Os resultados obtidos demonstraram que as similaridades entre as comunidades componentes e entre as comunidades compostas geralmente são baixas, não sendo influenciadas pela distância geográfica e pela dissimilaridade ambiental entre as localidades... / Mites and their rodent hosts mesostigmatídeos comprise one of the richest and most diverse host-parasite systems of the Neotropical region. Most of the knowledge available about this system refers to occurrence lists, parasite species descriptions and host specificity relationships at local scales. Ecological studies with the aim looking for structure patterns of parasite communities, as well as investigate the possible processes underlying the organization of these communities are scarce. Thus, this study attempts to contribute to the ecological knowledge of this host-parasite system. In Chapter 1, we investigated the existence of organizational patterns in infracommunities of Mesostigmata mites of the two populations of the rodent host Oligoryzomys nigripes as well as possible factors underlying the observed patterns. It was demonstrated that the infracommunities of Mesostigmata mites may vary in their organization, ranging from completely random infracommunities to structured infracommunities. Factors related to the hosts life histories may be responsible for structuring Mesostigmata mites infracommunities. However, the proposition of general patterns was not possible, mainly due to the great diversity of parasites and host species involved in Neotropical region. In Chapter 2, we investigated the existence of similarity patterns among Mesostigmata mites communities in two levels: component community and compound community. The results showed that the similarities among the component communities and among the compound communities generally are low, not being influenced by geographical distance and environmental dissimilarity among the localities. However, the similarities of Mesostigmata mites among the compound communities were positively related to the host faunas similarities among the localities... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-04-24Bitstream added on 2014-06-13T19:43:51Z : No. of bitstreams: 1 rocha_ra_dr_botfmvz.pdf: 361805 bytes, checksum: 5c55d3f7c6f6c5d5c1f2a2ed98259327 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O experimento teve como objetivo avaliar a sobrevivência de larvas infectantes (L3) de Trichostrongylus colubriformis em três espécies forrageiras. Para tal, foram utilizados módulos experimentais constituídos por seis canteiros de 32,4 m2 cada, estabelecidos com as seguintes gramíneas forrageiras: Brachiaria decumbens cv. Australiana, Cynodon dactilon cv. Coast-cross e Panicum maximum cv. Aruana, perfazendo dois canteiros por espécie. Cada canteiro foi dividido em 36 parcelas, de 30 x 30 cm, de forma a permitir seis repetições por espécie e por altura em cada semana de colheita de material. A sobrevivência larval foi avaliada nas quatro estações do ano, sob o efeito de duas alturas de poda das forragens (baixa, 5 cm e alta, 30 cm). A poda foi realizada imediatamente antes da deposição das fezes. Ocorreram quatro deposições de fezes, uma a cada estação do ano. A colheita das fezes e da forragem foi realizada uma, duas, quatro, oito, 12 e 16 semanas após cada deposição de fezes nos canteiros experimentais. A altura da forragem foi medida em cada uma das subdivisões imediatamente antes das colheitas. A forragem foi cortada com uma tesoura de poda, rente ao solo, de uma área delimitada com o auxílio de um círculo de 10 cm de raio. As fezes foram recolhidas manualmente dos canteiros. A recuperação de L3 das amostras fecais foi maior quando as fezes foram depositadas em meio ao capim alto (com 30 cm - P<0,05). Porém, a recuperação de L3 nas forragens foi similar em ambos os cortes. Em relação à concentração de L3, o corte baixo propiciou maior quantidade de L3 por quilo de matéria seca (P<0,05). As maiores recuperações de L3, nas fezes e nas forragens, ocorreram quando as fezes foram depositadas no outono e na primavera. Dentre as espécies forrageiras, o capim aruana foi o que no geral apresentou maiores concentrações de larvas infectantes de T. colubriformis. / The purpose of the experiment was to evaluate infective Trichostrongylus colubriformis larvae (L3) survival in three forage species. Experimental modules formed by six 32.4-m2 plot, established with the following forage grass species, were used in the study: Australian Brachiaria decumbens cv., Cynodon dactilon cv. Coast-cross, and Panicum maximum cv. Aruana, totaling two plots for each species. Each plot was divided into 36 30 x 30 cm parts in order to allow six replicates per species and per height in each week of material collection. Larval survival was evaluated in the four seasons of the year under the effect of two forage paring heights (low, 5 cm, and high, 30 cm). The paring was carried out immediately before the feces were deposited. Four feces deposits were made, one in each season of the year. Feces and forage collection was performed one, two, four, eight, 12 and 16 weeks after each feces deposition in the experimental plots. Forage grass height was measured in each subdivision immediately before the collections. The forage was cut using pairing scissors, close to the soil, from an area delimited with a circle with a 10-cm radius. The feces were collected manually from the plots. L3 recovery rates from fecal samples were bigger when the feces were deposited in high grass (measuring 30 cm - P<0,05). However, L3 recovery in the forages was similar for both cuts. So far as the L3 concentration is concerned, the low cut resulted in a bigger number of L3 per kilogram of dry matter (P<0,05). The higher L3 recovery in the feces and in the forage grass occurred when the feces were deposited in the autumn and in the spring. Among the forage species, the aruana grass was the one that, in general, harbored the biggest concentrations of infecting T. colubriformis larvae.

Orientador: Helio Langoni / Resumo: Com relação ao desenvolvimento do quadro clínico e a transmissão transplacentária, a toxoplasmose em humanos e ratos é similar, e a infecção em ratos pode servir como um modelo para a enfermidade humana. Foram inoculados, pela via oral, sete grupos de ratos com 105 (Grupo 1), 104 (Grupo 2) e 103 (Grupo 3) bradizoítos de Toxoplasma gondii cepa BTU-2 (altamente virulenta para camundongos), 105 (Grupo 4), 104 (Grupo 5) e 103 (Grupo 6) bradizoítos de T.gondii cepa ME-49 (pouco virulenta para camundongos) e solução salina estéril (Grupo 7 - Controle). Os animais foram observados durante 84 dias, com colheita semanal de sangue para obtenção de soro e realização das provas sorológicas pelos métodos de aglutinação direta (MAD) e imunofluorescência indireta (RIFI) para anticorpos das classes IgG e IgM. Ao final do período os animais foram sacrificados e fragmentos de tecidos colhidos para reisolamento do parasita em camundongos e para detecção de DNA do T.gondii pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando-se oligonucleotídeos dirigidos para a detecção dos genes SAG- 1, B1, rDNA e para uma seqüência repetida não codificadora (REP). Foi realizada a tipagem da cepa BTU-2 pela avaliação do polimorfismo do gene SAG-2. Todos os ratos desenvolveram títulos de anticorpos detectáveis pelas diferentes técnicas, havendo, independente da cepa inoculada, diferenças mais frequentes entre os grupos que receberam 105 e 103 bradizoítos. Para IgM a partir do 35o DPI e para a RIFI-IgG e o MAD, a cepa BTU-2 induziu títulos mais elevados que a cepa ME-49. A cepa BTU-2 foi isolada de todas as amostras de cérebro e musculatura estudadas, independente da dose utilizada na infecção dos animais, enquanto que para a cepa ME-49, o parasita foi isolado mais frequentemente do cérebro do que da musculatura, com influência da dose infectante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Referring to the symptoms and transplacentary transmission, toxoplasmosis in humans and rats is similar and rats can be used as a model for the disease in humans. 7 groups of rats were inoculated, by oral administration, using 105 (Group 1), 104 (Group 2) and 103 (Group 3) Toxoplasma gondii bradyzoits from strain BTU-2, which is highly infective to mice and with 105 (Group 4), 104 (group 5) and 103 (Group 6) T.gondii bradyzoits of strain ME-49, which is less infective to mice and, finally, sterile saline solution (Group 7) as a control one. The animals were observed during 84 days, with weekly blood samples, in order to obtain serum and then submitted to serological tests by modified agglutination test (MAT) and imunofluorecent antibody test (IFAT) to antibodies from subtypes IgG and IgM. At the end of time of observation, the animals were killed and samples of their tissues were obtained in order to reisolate the parasite and to detect the T.gondii DNA by polymerase chain reaction (PCR), using specific oligonucleotids to detect the genes SAG-1, B1, rDNA and to no coding repetitive sequence (REP). The BTU-2 strain was classified by the SAG-2 gene polymorphism. All the rats developed detectable antibodies titers, no matter which strain was used between the techniques. The most frequent differences in the serological results were among the groups that received 105 and those who received 103 bradizoits, no matter the strain used. The BTU-2 strain induced higher titles to IgM since 35 DPI and to IFAT-IgG and MAT than the ME-49 strain. The BTU-2 strain also was isolated from all the brain and muscles samples, no matter the dosage used to infect the animals. When the ME- 49 strain was used, the parasite was isolated more frequently... (Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Coorientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Sílvia Helena Venturoli Perri / Banca: Mônica Regina Vendrame Amarante / Resumo: No primeiro capítulo foi abordada a importância, assim como os aspectos da etiologia, biologia, epidemiologia e diagnóstico da infecção por Cryptosporidium spp. No segundo capítulo, um total de 101 amostras fecais de éguas das raças Quarto de Milha, Mangalarga Marchador, Paint Horse, Crioula e Pampa e seus respectivos potros foram analisados pela técnica de Kinyoun. A partir dos resultados obtidos neste estudo foi elaborado um artigo científico a ser submetido à Revista Brasileira de Parasitologia. A ocorrência da infecção por Cryptosporidium detectada pela técnica de Kinyoun foi de 20,8% (21/101) para potros e 17,8% (18/101) para éguas. Adicionalmente, observou-se que potros com idade superior a dois meses, independentemente da raça analisada, bem como os animais da raça Mangalarga são menos susceptíveis à ocorrência de Cryptosporidium spp / Abstract: In the first chapter, the importance and aspects related to the etiology, biology, epidemiology and diagnosis of infection by Cryptosporidium spp. were addressed. The second chapter reports the analysis, using Kinyoun stain, of a total of 101 fecal samples from mares of the breeds Quarter Horse, Mangalarga Marchador, Paint Horse, Crioula and Pampa and their respective foals. The results obtained in this study were used to prepare a scientific paper to be submitted to the Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. Occurrence of infection by Cryptosporidium, according to Kinyoun stain, was 20.8% (21/101) for foals and 17.8% (18/101) for mares. In addition, foals older than two months, regardless of the analyzed breed, as well as Mangalarga animals, are less susceptible to the occurrence of Cryptosporidium spp / Mestre

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-06-03T12:32:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertação padronizada_Felipe Dutra Rêgo 2013 versao final.pdf: 3338152 bytes, checksum: 4b1ea54844c41caffe2e3dd7db69355e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-03T12:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação padronizada_Felipe Dutra Rêgo 2013 versao final.pdf: 3338152 bytes, checksum: 4b1ea54844c41caffe2e3dd7db69355e (MD5) Previous issue date: 2013 / As leishmanioses são protozooses de alta prevalência em regiões tropicais como o Brasil e são transmitidas por vetores flebotomíneos, cujos hospedeiros são compostos por diferentes espécies animais vertebrados. O objetivo deste trabalho foi estudar os aspectos entomológicos relacionados à epidemiologia das leishmanioses na aldeia Imbaúbas da Terra Indígena Xakriabá, Município de São João das Missões, Minas Gerais. Durante o período de julho de 2008 a julho de 2009 foram realizadas seis coletas de flebotomíneos sendo dispostas 40 armadilhas luminosas no peridomicílio de 20 casas sorteadas aleatoriamente. Entre outubro de 2011 a agosto de 2012 foram realizadas seis campanhas de captura de flebotomíneos e 20 armadilhas luminosas foram distribuídas em 4 trilhas (cinco armadilhas por trilha) previamente demarcadas para estudo de hospedeiros silvestres e sinantrópicos de Leishmania. Foram utilizados testes estatísticos para avaliar diferenças no padrão de distribuição de espécies, riqueza e abundância de flebotomíneos nos diferentes ecótopos. Um total de 8.046 flebotomíneos pertencentes a 28 espécies e 11 gêneros foram coletados e identificados. As spécies Lutzomyia longipalpise Nyssomyia intermediaforam as mais abundantes no peridomicílio enquanto Martinsmyia minasensise Lutzomyia cavernicolaas mais abundantes nas trilhas de coleta. As fêmeas foram dispostas em "pools" contendo no máximo dez espécimes da mesma localidade, espécie e data de coleta para pesquisa de DNA de Leishmania spp. por métodos moleculares. A identificação da espécie de Leishmaniafoi feita a partir da técnica de ITS1PCR-RFLP utilizando a enzima HaeIIIe o sequenciamento genético para um alvo do gene SSUrRNA. Foi possível detectar a presença de DNA de Leishmaniaem 11 amostras provenientes do peridomicílio: Lu. longipalpis (2), Ny. intermedia(4); Lu. renei(2); Lu. ischnacantha; Micropygomyia goiana e Evandromyia lenti. Com relação às trilhas, foi possível verificar a presença de DNA de Leishmania em 12 amostras: Mt. minasensis (5); Ny. intermedia(3); Mi. peresi(2); Mi. capixabae Ev. lenti. Os resultados obtidos reforçam a importância epidemiológica das espécies Lu. longipalpise Ny. intermediana transmissão da leishmaniose visceral e tegumentar respectivamente, além do encontro de outras espécies com DNA de Leishmania como Mt. minasensise Ev. lenti que podem participar de um ciclo silvestre e/ou sinantrópico de Leishmania na área de estudos / Leishmaniases are protozooses highly prevalent in tropical regions such as Brazil and are transmitted by sand flies vectors, whose hosts are different vertebrate species. The objective of this study was to survey the entomological aspects related to the epidemiology of this disease in Imbaúbas village of the Xacriabá Indian Reserve, São João das Missões municipality, Minas Gerais state. Between July 2008and July 2009, six sand fly collections were carried out using 40 light traps placed in theperidomicile of 20 randomly selected houses. Between October 2011 and August 2012, another six collections to capture sand flies were carried out with 20 light traps distributed in 4 tracks (five traps per track) selected for a previous study of wild and synanthropic hostsof Leishmania. Statistical tests were used to evaluate differences in the distribution patterns, richness and abundance of sand flies in different ecotopes. A total of 8.046 sand flies belonging to 28 species and 11 genera were collected and identified. The species Lutzomyia longipalpisand Nyssomyia intermediawere the most abundant in peridomicile, while Martinsmyia minasensisand Lutzomyia cavernicola were the most abundant on the tracks. Females were organized in poolswith a maximum of ten specimens from the same locality, species and date for detection of Leishmaniaspp. by molecular methods. Leishmaniaspecies identification was made with ITS1PCR-RFLP using the enzyme HaeIIIand genetic sequencing was used for SSUrRNA target. The presence of LeishmaniaDNA was detected in 11 samples from peridomicile: Lu. longipalpis (2), Ny. intermedia(4), Lu. renei(2), Lu. ischnacantha, Micropygomyia goiana and Evandromyia lenti. On the tracks, it was possible to verify the presence of LeishmaniaDNA in 12 samples: Mt. minasensis (5), Ny. intermedia(3), Mi. peresi(2), Mi. capixabaand Ev. lenti. The results support the epidemiological importance of Lu. longipalpisand Ny. intermedia in the transmission of visceral and cutaneous leishmaniases respectively, in addition to the finding of other species associated with Leishmania DNA, such as Mt. minasensisand Ev. lenti which may participate in a wild and/or synanthropiccycle of Leishmaniain the tudied area.