Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T19:15:34Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_LaraCottaAmaral.pdf: 1571356 bytes, checksum: d96cdf3ef9b085b1c5f6bb55657eaaac (MD5) Dissertacao_LaraCottaAmaral.pdf: 1571356 bytes, checksum: d96cdf3ef9b085b1c5f6bb55657eaaac (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T19:15:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_LaraCottaAmaral.pdf: 1571356 bytes, checksum: d96cdf3ef9b085b1c5f6bb55657eaaac (MD5) Dissertacao_LaraCottaAmaral.pdf: 1571356 bytes, checksum: d96cdf3ef9b085b1c5f6bb55657eaaac (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T19:15:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_LaraCottaAmaral.pdf: 1571356 bytes, checksum: d96cdf3ef9b085b1c5f6bb55657eaaac (MD5) Dissertacao_LaraCottaAmaral.pdf: 1571356 bytes, checksum: d96cdf3ef9b085b1c5f6bb55657eaaac (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T19:15:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_LaraCottaAmaral.pdf: 1571356 bytes, checksum: d96cdf3ef9b085b1c5f6bb55657eaaac (MD5) Dissertacao_LaraCottaAmaral.pdf: 1571356 bytes, checksum: d96cdf3ef9b085b1c5f6bb55657eaaac (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / O diagnóstico adequado de malária permanece como um dos pilares dos programas de controle da doença no mundo, já que um diagnóstico eficiente permite a identificação precoce de casos e definição do esquema terapêutico, contribuindo para interrupção do ciclo biológico do parasito. A microscopia óptica (MO), atual diagnóstico de referência para malária, tem apresentado limitações, principalmente em casos de co-infecções e baixas parasitemias. Assim sendo, busca-se por técnicas mais sensíveis e específicas para auxiliar a MO, sendo os métodos baseados na reação em cadeia da polimerase (PCR) considerados mais adequados para identificação de indivíduos com infecção submicroscópica. Entretanto, os vários protocolos de PCR apresentados até o momento tem se baseado no gene da subunidade menor do RNA ribossomal 18S dos plasmódios (18S rRNA), que se encontra em poucas cópias no genoma destes parasitos. Recentemente, foram descritas sequências não ribossomais para identificação de Plasmodium vivax (Pvr47) e Plasmodium falciparum (Pfr364), sendo estas sequências promissoras para o diagnóstico molecular de malária. Baseando-se nestes achados, este trabalho propôs o desenvolvimento de um protocolo de Real-Time PCR para validar os alvos Pvr47 e Pfr364 para o diagnóstico de malária vivax e falciparum, respectivamente, com ênfase em infecções mistas e baixas parasitemias. Após padronização com sucesso da técnica de Real-Time PCR (RT-LAMAL), a mesma foi comparada a três outros protocolos moleculares, sendo duas técnicas baseadas no gene 18S rRNA – Nested-PCR (Snounou et al., 1993) e Real-Time PCR (Mangold et al., 2005) – e uma PCR convencional baseada nos alvos Pvr47/Pfr364 (Demas et al., 2011). Para avaliar os protocolos quanto aos seus limites de detecção de infecções únicas e mistas por P. vivax e P. falciparum, foram realizadas titulações de misturas artificiais com diferentes concentrações dos parasitos. Os resultados obtidos nesta etapa revelaram que a PCR-Demas e RT-LAMAL apresentaram os menores limites de detecção para P. vivax e P. falciparum, tanto em infecções únicas quanto mistas, e que o protocolo de RT-Mangold foi incapaz de detectar coinfecções. Posteriormente, os protocolos foram avaliados para o diagnóstico de malária em amostras de campo, incluindo área não endêmica (n=117) e área endêmica para malária (n=163). Os resultados revelaram que os protocolos de RTMangold, PCR-Demas e RT-LAMAL foram mais eficientes na detecção de parasitemias submicroscópicas, porém, o protocolo de RT-Mangold novamente mostrou ser incapaz de detectar infecções mistas. Em conjunto, os dados obtidos demonstraram que os alvos Pvr47/Pfr364 foram mais adequados para o diagnóstico molecular de malária vivax e falciparum do que o gene 18S rRNA. Contudo, o protocolo aqui desenvolvido (RT-LAMAL) se mostra em vantagem à PCR-Demas, com maior rapidez na obtenção de resultados, dispensando a revelação em gel de agarose e uso de brometo de etídeo, além de diminuir a possibilidade de contaminação de reagentes e amostras. Portanto, conclui-se que a RT-LAMAL possui grande potencial para o diagnóstico molecular de certeza de pacientes com infecções mistas e baixas parasitemias. / Accurate diagnosis of malaria remains as one of the pillars for prevention and control of the disease. An efficient diagnostic test may allow early case detection and appropriate treatment, therefore contributing to the interruption of malaria transmission cycle. Because the optical microscopy (OM) – the gold standard of malaria diagnosis – presents significant limitations, mainly in cases of co-infections and low parasitemias, it seems to be essential to develop a more sensitive and specific diagnostic tool. In this context, methods based on the polymerase chain reaction (PCR) seem to be more suitable for detecting individuals with submicroscopic malaria infections. Unfortunately, the majority of PCR-based methods still rely on the 18S rRNA gene targets, present in few copies in the parasite genome. Recently, new target DNA sequences were described for the identification of Plasmodium vivax (Pvr47) and Plasmodium falciparum (Pfr364). Due to the importance of these findings, the goal of the present study was to validate the Pvr47 and Pfr364 targets for the diagnosis of vivax and falciparum malaria, focusing on the development of a real-time PCR for detection of mixed infection and sub-microscopic parasitemia. After successful standardization of the Real-Time PCR (RT-LAMAL), this-PCR protocol was compared with three well-established PCR protocols, two of them relied on the gene 18S rRNA – Nested-PCR (Snounou et al., 1993) and Real-Time PCR (Mangold et al., 2005) -- and a third protocol based on the Pvr47/Pfr364 as target for a conventional PCR assay (Demas et al., 2011). In order to evaluate these different PCR-protocols in terms of their limit of detection, titrations of artificial mixtures of DNA plasmodial were performed. The results revealed that the PCRDemas and RT-LAMAL presented the lowest limit of detection for either single or mixed P. vivax and P. falciparum infections. In addition, the RT-Mangold protocol was unable to detect co-infections. To further evaluate the performance of these four PCR protocols for diagnosis of malaria in the field, we analyzed samples from malaria-endemic areas (n=163) as well as from non-endemic area (n = 117). While the results confirmed that PCR-Demas and RT-LAMAL protocols as being more appropriate for the diagnosis of submicroscopic infection, the data demonstrated again that the RT-Mangold protocol was unable to detect mixed infections. Together, the data confirmed Pvr47/Pfr364 targets as more suitable for molecular diagnosis of P. vivax and P. falciparum. Of interest, the Real-time PCR developed here (RTLAMAL) offers several advantages over the traditional PCR-Demas, including faster processing time and decreased risk of contamination. In conclusion, that RT-LAMAL has great potential for molecular diagnosis of patients with mixed infections and low levels of parasitemia.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-09-08T13:19:05Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CristianideCastilhoSanguinette - T_97.pdf: 18450256 bytes, checksum: 4cda2f86042db8ee71128cabc8d9436b (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-09-08T18:05:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CristianideCastilhoSanguinette - T_97.pdf: 18450256 bytes, checksum: 4cda2f86042db8ee71128cabc8d9436b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-08T18:05:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_CristianideCastilhoSanguinette - T_97.pdf: 18450256 bytes, checksum: 4cda2f86042db8ee71128cabc8d9436b (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / As leishmanioses são um complexo de doenças e sua epidemiologia somente pode ser compreendida pelo conhecimento de todos os elos que compõem seu ciclo de transmissão, como reservatórios, vetores e espécies de parasitos envolvidos e suas relações ecológicas. O objetivo deste trabalho foi estudar a epidemiologia das leishmanioses no distrito de Barra do Guaicui, município de Várzea da Palma, Minas Gerais. Foram realizadas no ano de 2012 cinco coletas de flebotomíneos em 24 casas da área urbana e doze coletas durante os anos de 2013 e 2014 em três ambientes distintos (urbano, transição e mata), utilizando armadilhas luminosas HP. As fêmeas coletadas foram identificadas e submetidas à verificação de infecção natural pela dissecção do tubo digestório e a detecção de DNA do parasito (LnPCR) em amostras individuais. Para o segundo período de estudo foram verificados e comparados os padrões de distribuição, a riqueza, uniformidade, e abundância dos flebotomíneos nas diferentes áreas. Para o estudo dos hospedeiros silvestres e sinantrópicos de Leishmania foram instaladas duas armadilhas, uma do tipo Sherman e outra do tipo gaiola, em cada uma das casas amostradas para o ano de 2012 e, além destes pontos foram definidas três trilhas, com 15 armadilhas tipo Sherman e 15 tipo gaiola por trilha, em área limítrofe ao perímetro urbano. No ano de 2013 as coletas de pequenos mamíferos foram conduzidasnos mesmos pontos de coleta dos flebotomíneos e utilizando a mesma metodologia. O estudo da infecção dos pequenos mamíferos foi realizado utilizando técnicas moleculares. Um total de 5.831 flebotomíneos pertencentes a quinze espécies e oito gêneros foi coletado e identificado. A espécie mais prevalente foi Nyssomyia intermedia, seguida de Lutzomyia longipalpis, importantes vetoras dos agentes etiológicos da forma tegumentar e visceral em humanos, respectivamente. A área urbana teve a maior abundância enquanto a área de transição teve a maior diversidade e uniformidade de espécies. Nyssomyia intermedia foi a espécie mais abundante na área urbana, enquanto Evandromyia evandroi foi a mais abundante na área de transição e Ev. lenti na área silvestre. Nenhuma forma flagelada foi encontrada pela técnica da dissecção. Foi detectada a presença de DNA de Leishmania nas seguintes espécies: Ny. intermedia (0,9%), Lu. longipalpis (2,9%), Ev. termitophila (3,0%), Ev. sallesi (1,8%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. neivai (1,1%), Ev lenti (0,9%) e Ev. walkeri (9,0%) todas com DNA de parasitos do complexo Le. braziliensis. Nyssomyia intermedia (0,3%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. lenti (1,8%), Ev. sallesi (1,2%), Lu. longipalpis (0,58%), Ny. neivai (1,1%) e Psathyromyia lutziana (33,3%) apresentaram positividade para parasitos do complexo Le. donovani. Das 47 amostras positivas para a presença de DNA de Leishmania, 34 (72,3%) eram provenientes da área urbana, três (6,4%) da área de transição e dez (21,3%) da área de mata. A fauna de pequenos mamíferos foi composta pelas espécies Rattus rattus (19,4%), Didelphis albiventris (44,4%) e Thricomys apereoides (36,1%). Rattus rattus foi capturado apenas na área urbana, T. apereoides apenas na área silvestre e D. albiventris nos três ambientes amostrados. As duas últimas espécies foram encontradas infectadas por Le. braziliensis na área de mata e na de transição, respectivamente. Nossos resultados contribuem para a compreensão do processo gradual de sinantropização das espécies de flebotomíneos encontradas no estado de Minas Gerais, demostrando que o município de Várzea da Palma apresenta todas as características necessárias para a expansão das leishmanioses, visceral e tegumentar. / Leishmaniasis are a complex of diseases and their epidemiology is understood only if all the links that compound its transmission cycle are known, such as reservoirs, vectors and parasites species and their ecological relationships. The aim of this research was to study the epidemiology of leishmaniasis in the District of Barra do Guaicui, municipality of Varzea da Palma, Minas Gerais State, Brazil. Five collections of phlebotomines were performed in 2012 in 24 houses in the urban area and another twelve collections from 2013 to 2014 in three distinct environments (urban, transition and wild forest), utilizing HP light traps. The collected females were identified and submitted to natural infection assessment through dissection of the digestive tract and parasite DNA detection (LnPCR) in individual samples. For the second period of study it was verified and compared the distribution richness, uniformity and abundance of sand flies in the different areas. For the study of wild and synanthropic hosts of Leishmania two traps were installed in each house sampled during 2012 and three tracks in a boundary area of urban perimeter were set, with 15 Sherman traps and 15 “cage” traps per track. Collections of small mammals were performed in 2013, in the same collections points of sand flies and with the same methodology used in 2012. The detection of Leishmania infection in small mammals was carried out through molecular techniques. A total of 5.831 phlebotomines belonging to fifteen species and eight genera were collected and identified. The most frequent species was Nyssomyia intermedia followed by Lutzomyia longipalpis, which are important vectors of the etiologic agents of cutaneous and visceral leishmaniasis in humans, respectively. The urban area had the highest abundance while the transition area has the highest diversity and uniformity of species. Nyssomyia intermedia was the most abundant species of the urban area, while Evandromyia evandroi was the most abundant in the transition area and Ev. lenti in the wild area. No flagellate forms were found by the dissection technique. Leishmania DNA was detected in the following species: Ny. intermedia (0,9%), Lu. longipalpis (2,9%), Ev. termitophila (3,0%), Ev. sallesi (1,8%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. neivai (1,1%), Ev lenti (0,9%) and Ev. walkeri (9,0%), all of them with DNA of Le. braziliensis complex. Nyssomyia intermedia (0,3%), Ev. evandroi (1,5%), Ev. lenti (1,8%), Ev. sallesi (1,2%), Lu. longipalpis (0,58%), Ny. neivai (1,1%) and Psathyromyia lutziana (33,3%) presented positivity for the Le. donovani complex. Out of 47 Leishmania positive samples, 34 (72,3%) were from the urban area, three (6,4%) from the transition area and ten (21,3%) from the wild area. The small mammals fauna was composed by the species Rattus rattus (19,4%), Thricomys apereoides (36,1%) and Didelphis albiventris (44,4%) . Rattus rattus was captured exclusively in urban area, T. apereoides only in the forest area and D. albiventris in the three environments. The last two animals were found infected by Le. braziliensis in the wild and transitional areas, respectively. Our results contributes to understand the gradual process of synanthropism of the sand flies species found in the state of Minas Gerais, demonstrating that the municipality of Varzea da Palma has all the necessary characteristics for the expansion of leishmaniasis, visceral and cutaneous.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_isis_almeida.pdf: 2008353 bytes, checksum: d2f0dbd897b4e60effb16cb39f16d38d (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Intestinal parasite infections are diseases caused by protozoa and helminth groups. They are common in developing countries and are the most frequent diseases especially among children. Although it is known that hospitalized children may be more susceptible to intestinal parasites, because they are usually neglected, few studies describe the prevalence. This study aimed to investigate the prevalence of enteric parasite infections among patients admitted to the University Hospitals Pediatric Units in the municipality of Pelotas, state of Rio Grande do Sul, Brazil, from April to December, 2012. Along with the delivery of the material for collecting feces sample, a structured questionnaire was administered to parents or guardians in order to obtain information about socioeconomic conditions of the family and how much they know about parasitic diseases. They were also given an educational material addressing the major parasitic diseases in the region. Feces samples were processed according to the techniques developed by Faust (centrifugal-flotation), Ritchie (centrifugal-sedimentation), and Baermann-Moraes. Of the 106 patients investigated, 32.1% were positive for one or more intestinal parasites. Trichuris trichiura (38.24%) and Ascaris lumbricoides (35.29%) were prevalent among helminthes. Giardia lamblia (14.7%) stood out among protozoa. Analysis of the questionnaires revealed alarming results regarding to people knowledge about parasitic diseases and the lack of parasite examination among children surveyed in this municipality. The index of parasitic diseases found in this study is a clear reflection of the lack of information behind parasitic diseases, and points to the need for implementing public policies that aim at inclusion of projects in education, including in elementary school curriculum hygiene and environmental sanitation issues, as well as fecal parasite testing in hospital routine. / Parasitoses intestinais são doenças causadas por protozoários ou helmintos, mais frequentes em países subdesenvolvidos e em desenvolvimento, acometendo principalmente as crianças. Embora se saiba que crianças hospitalizadas podem apresentar maior suscetibilidade às parasitoses intestinais, por serem geralmente negligenciadas, poucos trabalhos descrevem essa prevalência. Esse estudo teve como objetivo investigar a prevalência de enteroparasitoses em pacientes internados em unidades pediátricas de Hospitais Universitários em Pelotas, Rio Grande do Sul, Brasil, no período de abril a dezembro de 2012. Após a entrega de material para coleta de amostras de fezes, foi aplicado um questionário estruturado aos pais ou responsáveis com intuito de obter informações sobre as condições socioeconômicas da família e o conhecimento sobre parasitoses, sendo também distribuído material educativo, abordando as principais parasitoses da região. As amostras de fezes foram processadas através das técnicas de Faust (centrífugo-flutuação), Ritchie (centrífugo-sedimentação) e Baermann-Moraes. Dos 106 pacientes avaliados, 32,1% foram positivos para uma ou mais espécies de enteroparasito. Entre os helmintos, os prevalentes foram Trichuris trichiura (38,24%) e Ascaris lumbricoides (35,29%). Dentre os protozoários, destacou-se Giardia lamblia (14,7%). A análise dos questionários revelou resultados alarmantes no que diz respeito ao conhecimento da população sobre parasitoses e a ausência da realização de exames parasitológicos das crianças estudadas nesse município. O índice de parasitoses observado é um reflexo claro da falta de informação da população e atenta para a necessidade de implementação de políticas públicas que visem à inclusão de projetos na área educacional, introduzindo no currículo conteúdos que trabalhem propostas de higiene e saneamento ambiental, bem como a adoção de exames parasitológicos de fezes na rotina hospitalar.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_nilton_cunha_filho.pdf: 562698 bytes, checksum: 8ecca8a95ee4af63a3925be6db47b247 (MD5) Previous issue date: 2007-06-29 / Neospora caninum is a protozoan parasite that causes neurological problems in dogs. It has been shown that it may act as definitive hosts of the parasite. There is a need for more information on the occurrences of N. caninum in due to the wide range of its incidence in several Brazilian states, and the lack of animals diagnosed serum positive in Rio Grande do Sul. Rural dogs from (meat and dairy producers) and urban areas from the city of Pelotas were examined. Serum samples of 339 dogs were tested for the detection of antibodies against N. caninum by indirect immunofluorescence (RIFI ≥1:50). Antibodies for N. caninum were found in 53 (15,6%) of the dogs serum samples. The occurrence in the urban area was 5,5%, among the rural dogs 14,1% (18 dogs) belonged to dairy and 28,4% (29 dogs) from cattle farms. Dogs over three years old present the higher levels of serum positively and its presence increased with age. The dogs antibody titers were 1:50 (12 dogs), 1:100 (07 dogs), 1:200 (08 dogs), 1:400 (19 dogs), 1:800 (05 dogs) and 1:1600 (02 dogs). None of the dogs examined presented clinical signs of neosporosis when the blood was collected. The study of the variables (risk factors for N. caninum) in the logistic regression between the rural and urban environment has shown that older animals are 3,75 times more likely to get infected by the N. caninum then the younger ones. Also in farms where the carcasses of dead animals are not removed there is a risk 2,67 times greater (IC 95% = 1,31 5,42) of a N. caninum infection. In the rural environment, dogs from cattle raising farms have a chance 2,24 times greater of being infected by N. caninum then dogs from dairy farms. In addition, the risk of having serum positive dogs in farms where the carcasses are not removed was more significant (OR = 6,11 IC 95% = 1,00 37,17). The data suggest that Neospora caninum is present in the southern region of Rio Grande do Sul and afflicts both rural and urban dogs. The probability of serum positive dogs in the rural area is grater, possibly by the easy access they have to infected material and the canine/bovine contact, which is characteristic of the cattle raising in the region. The main form of infection by N. caninum among the dogs studied is the horizontal (post natal), suggested by the fact that serum prevalence increase with the age. / Neospora caninum é um protozoário parasito que causa problemas neurológicos em cães. Foi demonstrado que os cães podem atuar como hospedeiros definitivos do parasito. Devido às diferenças entre as ocorrências e prevalências de N. caninum nos diversos estados brasileiros, e a falta de diagnóstico de animais soropositivos no Rio Grande do Sul, revelam a necessidade de maiores informações a respeito de ocorrências do N. caninum em cães no sul do Rio Grande do Sul. Cães provenientes do Município de Pelotas, de diferentes ambientes, rural (corte e leite) e urbanos domiciliados foram examinados. Amostras de soro de 339 cães foram testadas para a detecção de anticorpos para N. caninum mediante a reação de imunofluorescência indireta (RIFI ≥1: 50). Anticorpos para N. caninum foram encontrados em 53 (15,6%) amostras de soro dos cães. Na área urbana a ocorrência foi de 5,5%, entre os cães rurais, 14,1% (18 cães) eram de propriedades de criação de gado de leite e 28,4% (29 cães) de propriedade de corte. Foi observado que cães acima de três anos de idade são mais soropositivos para N. caninum e a soropositividade dos cães aumentou conforme aumentou a idade. Os títulos de anticorpos dos cães foram 1:50 (12 cães), 1:100 (07 cães), 1:200 (08 cães), 1:400 (19 cães), 1:800 (05 cães) e 1:1600 (02 cães). Nenhum dos cães examinados apresentou sinais clínicos de neosporose no momento da coleta de sangue. O estudo das variáveis (fatores de risco para N. caninum) na regressão logística feita entre o ambiente urbano e rural demonstrou que nos ambientes estudados, animais mais velhos tem 3,75 vezes mais chances de se infectarem com N. caninum do que animais jovens, até três anos de idade. Em propriedades que os proprietários não recolhem carcaças de animais mortos do campo representou um risco 2,67 vezes maior (IC 95% = 1,31- 5,42) de infecção por N. caninum. Quando analisou-se em separado o ambiente rural (leite e corte) observou-se que, cães provenientes de propriedades de criação de gado de corte tem 2,24 vezes mais chance de serem infectados por N. caninum do que cães de propriedades de produção leiteira, e o risco de cães serem soropositivos em propriedades onde os proprietários não tem o hábito de recolher carcaças de animais mortos do campo foi maior (Odds Ratio = 6,11 IC 95% = 1,00- 37,17). Os dados sugerem que Neospora caninum está presente na região sul do Rio Grande do Sul, infectando cães urbanos domiciliados e rurais (leite e corte). A probabilidade de cães da área rural da região serem soropositivos para N. caninum é maior neste ambiente, provavelmente pelo fácil acesso destes animais a material infectado e ao grande contato cão/bovino, característico da bovinocultura da região. A principal forma de infecção por N. caninum entre os cães analisados é a horizontal (pós-natal), uma vez que a soroprevalência aumenta conforme aumenta a faixa etária.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_ricardo_luiz_ricci_falchi.pdf: 1452866 bytes, checksum: 5f2efbe078fb811eeea2b4e998a1ef48 (MD5) Previous issue date: 2006-06-22 / In countries in development, one of the main causes of diseases is the contamination of the water due to the deficiency of the sanitary sewerage system. Rio Grande city, situated in the South of Rio Grande do Sul, as the majority of the Brazilian cities also presents limitations in the collection and treatment of the cloacal sewer. This deficiency makes that part of the residues of the population be eliminated directly in the Patos Lagoon, which acquits a important role in the fishing activity, besides being used as local for washing, in the summer months, by the population which lives around. This study had as objectives to investigate the presence of pathogenic parasites to the man and parasites that are indicator of fecal contamination water samples gathered in different parts of the Patos Lagoon, Rio Grande, RS. In the period between January and December of 2005, it was gathered, monthly, samples of 500mL of water in 12 different parts of the Lagoon. The samples were filtered through a membrane of acetate of cellulose (0,45), under a negative pressure for the material retention. After the material elution, through the Tween 80 solution to 0, 1%, the material was concentrated by centrifugation in 1500 rpm, during 15 minutes. For the initial research of protozoa, it was achieved the direct exam in breezy of the material, as well as the material concentrated by the centrifugal-flotation technique in solution of sulfate of zinc. For the research of oocysts of Cryptosporidium spp., they were achieved concurrently the techniques of concentration centrifugal-flotation of Sheather and centrifugal-sedimentation by formol ether, with the posterior coloration with the Kinyoun technique. For the research of free-living amoebas, it was made the culture of one aliquot of each water sample in non-nutrient agar inoculated with inactive Escherichia coli . Aliquots originated of the eluted material from the membrane and of the culture were ruddy by trichrome, for the diagnosis of protozoa cysts. In the gathering places of the samples it was sized pH, saltiness and water temperature. The research of total coliforms and Escherichia coli was achieved by the technique of multiple tubes. In the analysis of the 12 parts, during the 12 months of water gathering, it was observed that 91,7% were infected with protozoa that can infect human beings; Cryptosporidium spp. (16,7%), Acanthamoeba spp. (91,7%), Naegleria spp. (25%) and Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar (8,3). Total coliforms (more than 5.000/100mL) and Escherichia coli (more than 1.000/100mL) were secluded in all the harvested samples, showing water contamination by cloacal sewer. The temperature, the saltiness and water pH, do not influenced in the detection do protozoa, except for Acanthamoeba spp. That presented bigger frequency when the water saltiness was under or equal 0,6% (p < 0,05). The presence of organic substance in the closeness of the places of samples gathering influenced in the detection of protozoa in general, as well as the creation of animals for the detection of Naegleria spp. (p < 0.05). The observation of water contamination for pathogenic parasites to man and the indications of fecal contamination, suggest better action of sanitary planning, as well as preventive and educative steps in order to avoid the human infection. / Nos países em desenvolvimento uma das principais causas de doenças é a contaminação da água devido às deficiências dos serviços de esgotamento sanitário. A cidade de Rio Grande, localizada ao sul do Rio Grande do Sul, assim como a maioria dos municípios brasileiros, também apresenta limitações na colheita e tratamento do esgoto cloacal. Esta deficiência faz com que parte dos dejetos da população seja eliminada diretamente na Laguna dos Patos, a qual desempenha importante papel na atividade pesqueira, além de ser usada como local para banho, nos meses de verão, pela população residente nos seus arredores. Este estudo teve como objetivos investigar a presença de parasitos patogênicos ao homem e de parasitos que são indicadores de contaminação fecal em amostras de água colhidas em diferentes pontos da Laguna dos Patos, Rio Grande, RS. No período de janeiro a dezembro de 2005, foram colhidas, mensalmente, amostras de 500 mL de água em 12 pontos da Laguna. As amostras foram filtradas através de membrana de acetato de celulose (0,45 µm), sob pressão negativa para a retenção do material. Após eluição do material, através da solução de Tween 80 a 0,1%, o material foi concentrado por centrifugação a 1500 rpm, por 15 minutos. Para a pesquisa inicial de protozoários, foi realizado o exame direto a fresco do material, bem como do material concentrado pela técnica de centrífugo-flutuação em solução de sulfato de zinco. Para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp., foram realizadas simultaneamente as técnicas de concentração de centrífugo-flutuação de Sheather e de centrífugo-sedimentação pelo formol-éter, com posterior coloração com a técnica de Kinyoun. Para a pesquisa de amebas de vida livre, foi feito o cultivo de uma alíquota de cada amostra de água em meio de ágar não nutriente com Escherichia coli inativada. Alíquotas provenientes do material eluído da membrana e do cultivo foram coradas pelo tricrômio, para diagnóstico de cistos de protozoários. Nos locais de colheita das amostras foram medidos pH, salinidade e temperatura da água. A pesquisa de coliformes totais e Escherichia coli foi realizada pela técnica dos tubos mú ltiplos. Na análise dos 12 pontos, durante os 12 meses de colheita de água, foi observado que 91,7% (11/12) estavam contaminados com protozoários que podem infectar seres humanos; Cryptosporidium spp. (16,7%), Acanthamoeba spp. (91,7%), Naegleria spp. (25%) e Entamoeba histolytica/ Entamoeba dispar (8,3%). Coliformes totais (superior a 5.000/100mL) e Escherichia coli (superior a 1.000/100mL) foram isolados em todas as amostras colhidas, demonstrando contaminação da água por esgoto cloacal. A temperatura, salinidade e pH da água, não influenciaram na detecção dos protozoários, exceto para Acanthamoeba spp. que apresentou maior freqüência quando a salinidade da água estava menor ou igual a 0,6% (p<0,05). A presença de matéria orgânica nas proximidades dos locais de colheita das amostras influenciou na detecção de protozoários em geral, bem como a criação de animais para a detecção de Naegleria spp. (p<0,05). A observação da contaminação da água por parasitos patogênicos ao homem e a indicação de contaminação fecal, sugerem melhores ações de planejamento sanitário, assim como medidas preventivas e educativas a fim de evitar a infecção humana.

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O Panstrongylus megistus atualmente é o principal vetor do Brasil, sendo responsável pela transmissão da DC na região da Serra do Cipó, MG, na década de 80. O P. megistus possui alta capacidade de reinfestação das casas, exigindo permanente vigilância contra a instalação de novos focos. O peridomicílio apresenta grande importância para a manutenção de triatomíneos e do T. cruzi circulando entre barbeiros e os animais que o frequentam. O objetivo do trabalho foi avaliar o cenário ecoepidemiológico da doença de Chagas no entorno do Parque Nacional da Serra do Cipó (ParnaCipó), visando subsidiar o programa de controle do P. megistus. O estudo se realizou nos municípios de Jaboticatubas e Santana do Riacho que, juntamente com Morro do Pilar e Itambé do Mato Dentro, integram o ParnaCipó. O perfil de infestação pelo P. megistus foi determinado através de captura de triatomíneos nas unidades domiciliares (setembro de 2007 a setembro de 2010) e capturas silvestres, que também incluiram avaliação da infecção em marsupiais e roedores. Cães levados à campanha de vacinação antirrábica de Jaboticatubas foram examinados a fim de determinar sua importância epidemiológica na região. Exemplares de P. megistus capturados foram utilizados para análise populacional pela morfometria geométrica. Os exemplares provenientes de Jaboticatubas foram ainda analisados por RAPD para estudo populacional. As cepas isoladas dos reservatórios e vetores foram caracterizadas como pertencentes ao grupo T. cruzi I ou T. cruzi II utilizando‐se DNA satélite como alvo. A maioria dos exemplares P. megistus foi capturada em galinheiros; no intradomicílio o ecótopo preferencial foi o quarto. Foram realizadas pesquisas em 15 áreas silvestres com a captura de 105 mamíferos, com taxa de infecção de 6,7%; todas as cepas foram caracterizadas como T. cruzi I. A prevalência em cães foi de 2,4%. Em palmeiras foram capturados Rhodnius neglectus, P. megistus e Triatoma sordida. Dentre as cepas isoladas de triatomíneos domiciliados e silvestres, apenas uma cepa proveniente do ambiente domiciliar foi caracterizada como T. cruzi II, as demais, T. cruzi I. A morfometria diferenciou a população silvestre das domiciliares. A RAPD demonstrou grande variabilidade dos P. megistus de Jaboticatubas, entretanto, sem diferenciação populacional. Frente aos resultados, podemos concluir que a população rural dos dois municípios permanece sob o risco de infecção pelo T. cruzi, uma vez que são encontrados vetores e reservatórios infectados no ambiente artificial e natural, e podem infestar as habitações a partir de diversos focos, domiciliares ou silvestres. / Chagas disease (CD) is caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, whose main mode of transmission is through the feces of infected bugs. Panstrongylus megistus is currently the main vector in Brazil, being responsible for the CD transmition in Serra do Cipo, MG, in the 80s. P. megistus has high capacity to reinfestate the houses, requiring constant vigilance against the installation of new focus. The peridomicile has great importance for the maintenance of triatomine bugs and the T. cruzi circulating among triatomines and the animals that occure in this environment. The objective of this study was to evaluate the ecoepidemiologic scenario of Chagas disease in the surrounding of the National Park of Serra do Cipo (ParnaCipó), aiming to support the control program of the P. megistus. The study was conducted in the municipalities of Jaboticatubas and Santana do Riacho, which together with Morro do Pilar and Itambé do Mato Dentro, integrate the ParnaCipó. P. megistus infestation profile was determined by capturing triatomines in the households (September 2007 to September 2010) and in wild captures, which were also performed to evaluate the rodents and marsupials infection. Dogs carried to the anti‐rabies vaccination campaign of the Jaboticatubas were examined to determine their prevalence in the region. The P. megistus exemplaries captured were used to the geometric morphometry analisis. Specimens from Jaboticatubas were further analyzed by RAPD for population study. The strains isolated from reservoirs and vectors were characterized as T. cruzi I or T. cruzi II using satellite DNA as target. Most P. megistus was captured in chicken coops; inside the houses the preferred ecotope was the bedroom. Were investigated 15 wild areas with the capture of 105 mammals, with infection rates of 6.7%, all strains were characterized as T. cruzi I. The prevalence in dogs was 2.4%. In the palm trees examined were captured Rhodnius neglectus, P. megistus and Triatoma sordida. Among the strains isolated from the domiciled and wild triatomines, only one from the intradomicile was characterized as T. cruzi II, the others were T. cruzi I. The morphometric analysis differentiated the wild from the domestics populations. The RAPD showed great variability of P. megistus in Jaboticatubas, however, without population differentiation. Based on the results, we conclude that the rural population of both municipalities remains at risk of infection by T. cruzi, since the infected vectors in artificial and natural environment follow to be found, and can infest the dwellings from various domestic or wild focus.

Orientador: Mônica R. V. Amarante / Banca: Alexandrina Sartori / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Maria Elisabete Jorge Amaral / Resumo: No presente estudo foram analisadas a dinâmica da infecção primária por Strongyloides venezuelensis em ratos Lewis, a influência do sexo do hospedeiro e sua resposta imune. Também foi comparada a sensibilidade da PCR com as técnicas histológica e parasitológica na caracterização desta infecção utilizando amostras de tecidos e fezes, respectivamente. No primeiro artigo, o número de ovos por grama de fezes (OPG) foi determinado pela técnica de McMaster modificada e o DNA foi extraído para análise por PCR. Comparou-se a sensibilidade de ambos os métodos para o diagnóstico do parasita em fezes de ratos inoculados com 40, 400 e 4000 larvas infectantes (L3) e essas infecções foram consideradas leve, moderada e grave, respectivamente. Na PCR dois pares de primers foram empregados, um foi desenhado a partir da seqüência parcial de rDNA de S. venezuelensis e o outro, amplifica o rDNA de diversas espécies deste gênero. Nas amostras oriundas dos animais com infecção leve o primer específico não detectou DNA, já o primer gênero apresentou maior sensibilidade que a quantificação de OPG. No segundo artigo foi analisada a influência do sexo dos hospedeiros na suscetibilidade às infecções leve, moderada e pesada. Machos com infecção moderada e pesada apresentaram maior média de OPG e de número de parasitas recuperados do intestino delgado em comparação com as fêmeas, porém esse fenômeno não foi observado nas infecções leves. No terceiro artigo, os animais foram inoculados com 4000 L3 para a avaliação da dinâmica da infecção e caracterização da resposta imune durante as fases aguda e de recuperação. A dinâmica da infecção foi monitorada, diariamente, por OPG durante 32 dias. A infecção apresentou período pré-patente de seis dias e picos de eliminação de ovos no oitavo e no 11º dias. Ambos os anticorpos específicos IgG1 e IgG2b apresentar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the present study the dynamics of Strongyloides venezuelensis primary infection in Lewis rats, the host sex influence and its immune response were analyzed. We also compared the sensitivity between PCR, parasitological and histological techniques to characterize this infection using feces and tissue samples. In the first paper the number of eggs per gram of feces (EPG) using a McMaster modified technique was enumerated and DNA was extracted to do PCR analysis. Sensitivity of both methods to diagnosis the parasite in feces of rats inoculated with 40, 400 or 4000 infective larvae (L3) was compared. These infections were considered light, moderate and heavy, respectively. Two PCR primer pairs were employed, a specific one was designed from a S. venezuelensis rDNA partial sequence and the other one amplifies several species within this genus. In light infection, the specific primer did not detect DNA in any sample, in the other hand the genus primer presented higher sensitivity than EPG. The host sex influence in susceptibility to light, moderate and heavy infection was evaluated in the second experiment. The FEC means and the mean parasite infection intensity were higher in males than in females in animals with moderate and heavy infection. But this phenomenon was not observed in light infection. In the third paper, animals were inoculated with 4000 L3 to determine the kinetics infection and to characterize the immune response during acute and recovery phases. The kinetics of infection was daily measured by FEC during 32 days after infection. Parasite eggs were detected in the feces for the first time at day 6 post-infection, but the maximal egg number was observed at days 8 and 11 post-infection. Both IgG1 and IgG2b specific antibodies were elevated at the acute phase and there was a significant increase of IgG1 concentration in the recovery one. IgE and IL-10 also presented a high... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Membros do gênero Potamotrygonocestus (Eucestoda: Tetraphyllidea: Onchobothriidae) são parasitas exclusivos de raias da família Potamotrygonidae, endêmica da região Neotropical. Atualmente, são reconhecidas 7 espécies nominais para o gênero (P. magdalenensis, P. travassosi,P. amazonensis, P. maurae, P. fitzgeraldae, P. chaoi e P. marajoara), além de duas linhagens não descritas terem sido apontadas na última revisão taxonômica disponível. A taxonomia destes parasitas é tradicionalmente baseada em caracteres morfométricos e sofre com a plasticidade que a estrutura corpórea destes animais apresenta pois acaba dependente da fixação do espécime. Somada à prática comum de basear descrições em um número restrito de espécies coletados em regiões geograficamente isoladas, esta plasticidade corpórea resultou na premissa que estes parasitas apresentam baixa variabilidade morfológica. Neste estudo, foram analisados 1753 espécimes de Potamotrygonocestus, coletados amplamente na América do Sul. A análise dos parâmetros morfométricos tradicionalmente utilizados na taxonomia do gênero não mostrou utilidade na diagnose das espécies, porém os parâmetros discretos observados na morfologia do gancho mostraram-se informativos. Os ganchos são estruturas esclerotizadas cuja forma não depende da fixação do espécime, portanto possuem um enorme potencial para a resolução taxonômica destes parasitas. Baseadas na morfologia do gancho, as espécies de Potamotrygonocestus válidas foram redescritas e 4 novas linhagens foram observadas. Dentre todos os táxons observados, apenas P.chaoi e P. marajoara ainda necessitam o refinamento de sua diagnose, pois não foi possível diferenciá-los através da morfologia do gancho. Assim, uma nova chave de identificação foi proposta para Potamotrygonocestus, baseada nos caracteres discretos dos ganchos. Entre os 32 morfotipos de potamotrigonídeos amostrados neste estudo, em apenas 5 não havia infestação por Potamotrygonocestus. Estes hospedeiros restringem-se as regiões dos rios Madeira e Purus e a P. leopoldi no Xingu. Os padrões de especificidade estrita observados para grupos marinhos que se julga serem próximos a Potamotrygonocestus não se refletem no grupo dulcícola, e inclusive mais de uma espécie do gênero foi encontrada em um mesmo indivíduo hospedeiro, fato até então inédito para o gênero. / The members of the Potamotrygonocestus genus (Eucestoda: Tetraphyllidea: Onchobothriidae) are parasites that infect exclusively the stingrays of the family Potamotrygonidae, which are endemic of the Neotropical region. To date, seven species are recognized for this genus (P. magdalenensis, P. travassosi, P. amazonensis, P. maurae, P. fitzgeraldae, P. chaoi and P.marajoara) and two undescribed lineages were cited in the last taxonomic revision published. The taxonomy of these parasites is traditionally based on morphometric characters and therefore relies on soft tissue structures whose observed morphology is highly dependent on the fixation method used. This, in addition to the use of a restricted number of specimens from distant localities on taxonomic studies, led researchers to believe in a low morphological variation for the genus. In this study, 1753 Potamotrygonocestus specimens were examined from almost all of the South American basins. The traditional morphometric parameters for the genus taxonomy were not useful for species diagnosis, but the discrete parameters from the morphology of the hooks were shown to be informative characters. The hooks are sclerotized structures and its shape is not dependent on the fixation of the specimen, therefore having a great potential to distinguish species. Based on the morphology of the hooks, the Potamotrygonocestus nominal species that were recognized were redescribed and four new lineages were found. Among all the taxa examined, only P. chaoi e P. marajoara still need a detailed diagnosis, because it was not possible to distinguish these two species based on the morphology of the hooks. Based on the data at hand, an inference key for species of Potamotrygonocestus is proposed based on the morphology of the hooks. Among the 32 potamotrygonids morphotypes obtained for this study, only five were not infected by Potamotrygonocestus. These hosts were restricted to the Madeira and Purus basins and for P.leopoldi from the Xingu River. The host-specificity observed for the parasite worms of marine elasmobranchs closely related to Potamotrygonocestus were nor found in this freshwater genus Additionally, more than one species of Potamotrygonocestus were found infecting the same host specimen, an occurrence never noted for this parasite taxon.

Orientador : Teresa Cristina G. Oliveira-Sequeira / Banca: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Mara Regina Stip Balarin / Resumo: As técnicas coproparasitológicas de concentração por sedimentação e por flutuação e o kit TF-Test® foram utilizadas na investigação da epidemiologia dos parasitas gastrintestinais de cães no Estado de São Paulo. Amostras de fezes de 129 cães errantes e de 125 domiciliados foram colhidas de outubro de 2004 a setembro de 2005 e processadas de acordo com os protocolos do kit TF Test® e dos métodos de centrífugo-sedimentação e centrífugo-flutuação. Os seguintes parasitas e suas respectivas freqüências foram detectados: Ancylostoma spp. (38,2%), Giardia sp. (16,9%), Toxocara canis (8,7%), Tnchuns vulpis (7,1%), Isospora spp. (3,5%), Sarcocystís spp. (2,7%) e Dipy!idium caninum (2,4%). Dos 132 animais parasitados, 79 apresentaram parasitismo único e 53 estavam parasitados por dois ou mais gêneros e/ou espécies. Em cães errantes a prevalência de Ancylostoma spp., T. canis e Giardia sp. e a ocorrência de poliparasitismo foi maior (P < 0,01) que em animais domiciliados. Não houve diferença na freqüência de parasitas intestinais relacionada ao sexo, raça ou ao tratamento anti-helmíntico dos animais (P > 0,05), no entanto a freqüência de T. canis foi maior (P < 0,05) em cães jovens. Com relação à sazonalidade, a detecção de cistos de Giardia sp. foi mais freqüente nos meses de outubro a março. A sensibilidade diagnóstica do método de centrífugo-flutuação foi maior para todos os parasitas intestinais diagnosticados, porém somente no caso de Ancylostoma spp. essa diferença (P <0,05) se expressou em termos de uma maior freqüência de detecção de cães infectados. O elenco de parasitas diagnosticados na região estudada faz com que a técnica de centrifugo-flutuação com sulfato de zinco seja a mais apropriada tanto para os estudos epidemiológicos como para o diagnóstico individual, especialmente nas infecções subclínicas. / Abstract: The sedimentation and flotation procedures for concentration of fecal specimens and the commercial device TF were used, in an epidemiological investigation of gastrointestinal parasites of dogs in São Paulo state. Fecal samples from 129 stray dogs and 125 dogs with an owner were collected from October 2004 to September 2005. AlI samples were concentrated by the sedimentation and flotation methods and by TF-Test® device. The following parasites, and their respective frequency were diagnosed in fecal samples : Ancylostoma spp. (38,2%), Giardia sp. (16,9%), Toxocara canis (8,7%), Tnchuris vulpis (7,1%), Isospora spp. (3,5%), Sarcocystis spp. (2,7%) and Dipylidium caninum (2,4%). Fifty-three out of 132 infected animais had mixed infection with two or more parasite genera. The prevalence of Ancy!ostoma spp., 1 canis and Giardia sp. as well as the occurrence of mixed infections were significantly higher in stray dogs (P <0,01) than in dogs with an owner. No effect of gender, breed and anti-helminthic treatment (P> 0,05) on the parasite frequency was observed, but the frequency of T. canis was higher (P < 0,05) in young animais. Giardia sp. cysts were more frequently detected from October to March. The centrifugation-flotation method was generally more accurate in the diagnosis of ali intestinal parasites of dogs, but only for Ancylostoma spp. this difference was observed in terms of prevalence. The species of parasites found in the studied region make the zinc sulfate flotation the most appropriate method not only to epidemiological studies, but also to individual diagnosis, speciaily in subciinical infections. / Mestre

Nenhuma / O controle epidemiológico da leishmaniose visceral (LV) no Brasil envolve a eliminação de cães infectados, portanto, métodos diagnósticos confiáveis são essenciais para evitar a transmissão da doença ou o sacrifício desnecessário de animais. O programa de controle da LV no Brasil é baseado em inquéritos sorológicos. Os métodos sorológicos, no entanto, apresentam problemas de sensibilidade e especificidade. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) demonstrou ser uma técnica rápida e sensível para a detecção de Leishmania, no entanto amostras não invasivas representam um instrumento essencial, neste contexto, uma vez que elas são mais simples, indolores e mais facilmente aceitas pelos proprietários de cães. Um método útil é o swab conjuntival (SC) que utiliza um swab estéril para a realização de um esfregaço das conjuntivas do cão. O SC mostrou-se altamente sensível para o diagnostico da LV por PCR. O objetivo deste estudo foi avaliar através do SC a prevalência de animais infectados em dois grupos de cães: assintomáticos e vacinados contra a LV. O primeiro grupo foi composto por 30 animais assintomáticos, positivos nos diagnósticos sorológico e parasitológico. Os resultados do SC foram comparados com os obtidos através de duas amostras pouco invasivas, sangue (S) e biopsia de pele (BP). As amostras foram analisadas por dois métodos diferentes de PCR: kDNA PCR-hibridização e ITS-1 nPCR. O volume de amostra de DNA utilizada para o kDNA PCR-hibridização foi de 1,0 &#61549;L e para o ITS-1 nPCR o volume foi de 10,0 L. Utilizando-se o SC o método kDNA PCR- hybridização detectou DNA de Leishmania em 24/30 cães (80%) através da conjuntiva direita (CD) e 23/30 cães (76,6%) utlizando-se a conjuntiva esquerda (CE), 17/30 cães (56,7%) por meio de BP e 4/30 cães (13.3%) com S. A positividade do SC obtida combinando-se ambas as conjuntivas foi de 90% (27/30 cães). A análise das amostras de SC pelo método ITS-1 nPCR revelou que 25/30 cães (83,3%) foram positivos utilizando-se a CD e 20/30 cães (66,6%) foram positivos via a CE. Pelo mesmo método 15/30 cães (50,0%) foram positivos através de BP e 17/30 cães (56,7%) com S. A positividade obtida combinando-se ambas as oculares foi de 83,3%. Para o método kDNA PCR- hybridização as positividades do SC para a CD e CE foram significantemente superiores (p<0.05) as obtidas com BP e S. Diferença estatística em relação a BP e S foi verificada pelo método ITS-1 nPCR apenas para CD. Os métodos kDNA PCR-hibridação e ITS-1 nPCR apresentaram sensibilidade semelhante para SC e amostras BP. Por outro lado, a positividade do ITS-1 nPCR para amostras de S, foi significativamente maior que a obtida pelo kDNA PCR-hibridização, indicando que a sensibilidade dos métodos de PCR pode variar de acordo com o tecido examinado. A melhor sensibilidade neste estudo (90%) foi obtido através de amostras SC (combinando-se as duas conjuntivas) associada ao kDNA PCR-hibridização. Este nível de sensibilidade foi semelhante ao obtido em outros estudos utilizando SC para o diagnóstico da LV em cães sintomáticos. O segundo grupo foi de 42 cães militares, todos vacinados contra a LV. Neste grupo os resultados do SC foram comparados aos obtidos por testes sorológicos. Os testes sorológicos foram realizados de forma independente por três laboratórios. Os laboratórios 1 e 2 (Lab1 e Lab2) foram laboratórios comerciais. O laboratório 3 (Lab3) foi o Laboratório de Referência Nacional. A primeira triagem sorológica realizada pelo Lab1 mostrou 15 cães reativos e 4 cães foram classificados como indeterminados. Devido à alta positividade encontrada neste ensaio, animais com sorologia reativa e indeterminada, diagnosticados pelo Lab1, foram submetidos a novos testes sorológicos pelos Lab2 e Lab3. O Lab2 confirmou apenas 3 cães reativos e 2 animais foram indeterminados. O Lab3 confirmou 7 cães reativos e 3 cães foram classificados como indeterminados. Os cães que foram confirmados como reativos no diagnóstico sorológico do Lab3 foram submetidos à eutanásia. O diagnóstico molecular por PCR, utilizando o SC em todos os 42 animais foi capaz de detectar o DNA de Leishmania em 17 cães. Comparando os resultados da PCR com os obtidos através do teste sorológico do Lab1, a PCR foi positiva para 10 casos reativos e um caso indeterminado, mas foi negativo para 5 reativos e 3 casos indeterminados. Além disso, a PCR foi positiva em 5 casos não reativos. Os casos reativos e indeterminados, de acordo com o Lab1 que foram PCR negativos, apresentaram resultados negativos nos testes sorológicos dos Lab2 e Lab3. Para o Lab2, a PCR confirmou os 3 casos reativos e foi positiva para os 2 casos indeterminados. Em relação ao Lab3, a PCR confirmou todos os 7 casos reativos e foi positiva para os 3 casos indeterminados. O ensaio de PCR confirmou todos os casos, simultaneamente reativos nos testes sorológicos de dois laboratórios. Nossos resultados mostraram que o SC é um método sensível e prático para coleta de amostra permitindo diagnósticos confiáveis por PCR, além de apresentar sensibilidade superior a outras amostras pouco invasivas. Concluímos que o uso do SC deve ser considerado para os inquéritos caninos rotineiros para a LV / The epidemiological control of visceral Leishmaniasis (VL) in Brazil involves the elimination of infected dogs. Therefore, reliable diagnostic tests are essential to prevent the transmission of the disease or unnecessary culling of dogs. The VL control in Brazil is based on serological surveys, nevertheless serologic assays present problems related to sensitivity and specificity. Polymerase chain reaction (PCR) proved to be a rapid and sensitive technique for detection of Leishmania. However, non-invasive samples are an essential tool in this context, since they are simpler, painless and more easily accepted by dog owners. A useful method is the conjunctival swab (CS) that uses a sterile swab to sample the dog conjunctiva. The SC was highly sensitive for the VL diagnosis by PCR. The objective of this study was to evaluate by CS the prevalence of infected animals in two groups of dogs: asymptomatic and vaccinated against VL. The first group had 30 asymptomatic dogs with positive serological and parasitological tests. The SC samples were compared with two non-invasive samples: blood (B) and skin biopsy (SB). The samples were analyzed by two different PCR methods: kDNA PCR-hybridization and ITS-1 nPCR. The volume of DNA sample used for kDNA PCR-hybridization was 1.0 &#61549; L and ITS-1 nPCR volume was 10.0 L. The DNA sample volume used was of 1.0 L and 10.0 L respectively. Using CS samples the kDNA PCR- hybridization was able to detected parasite DNA in 24/30 dogs (80%) using the right conjunctiva (RC) and 23/30 dogs (76.6%) with the left conjunctiva (LC), 17/30 dogs (56.7%) by means of SB and 4/30 dogs (13.3%) with B. The CS positivity obtained combining RC and LC results was of 90% (27/30 dogs). The assay of CS samples by ITS-1 nPCR revealed that 25/30 dogs (83.3%) were positive when using RC and 20/30 dogs (66.6%) were positive when using LC. Via the same method 15/30 dogs (50.0%) were positive by SB and 17/30 dogs (56.7%) with B. The CS positivity obtained by ITS-1 nPCR combining RC and LC was of 83.3%. The CS positivities for RC and LC were significantly higher (p<0.05) than SB and B for kDNA PCR- hybridization method. Statistical difference in relation to SB and B was verified by ITS-1 nPCR only for RC. Methods kDNA PCR-hybridization and ITS-1 nPCR showed similar sensitivities to CS and SB samples. Moreover, the positivity of ITS-1 nPCR 11 for B samples, was significantly higher than that obtained by kDNA PCR-hybridization, indicating that the sensitivity of the PCR may vary with the tissue examined. The best sensitivity in this study (90%) was obtained from CS samples (by combining both conjunctivas) associated with kDNA PCR-hybridization. This level of sensitivity was similar to that obtained in other studies using CS for the VL diagnosis in symptomatic dogs. The second group was of 42 military dogs, all of them vaccinated against VL. In this group CS and compared with the results obtained by serological tests. The serological tests were carried out independently by three laboratories. Laboratories 1 and 2 (Lab1 and Lab2) were private laboratories. Laboratory 3 (Lab3) was the National Reference Laboratory. The first serological screening performed by the Lab 1 showed 15 reactive dogs and 4 dogs were classified as indeterminate. Due to the high positivity found in this test, animals with reactive and indeterminate serology according Lab 1 were subjected to new serological tests by Lab 2 and Lab 3. Lab 2 confirmed only 3 reactive dogs and 2 animals were undetermined. The Lab 3 found 7 reactive dogs and 3 dogs were classified as indeterminate. Dogs that were confirmed as reactive by Lab 3 were euthanized. The molecular diagnosis by PCR, using CS, was performed in all 42 animals and was able to detect Leishmanial DNA in 17 dogs. Comparing the PCR results with those obtained by serological test of Lab 1, PCR was positive for 10 reactive and one indeterminate case, but was negative for 5 reactive and 3 indeterminate cases. In addition, the PCR was positive in 5 non-reactive cases. The reactive and indeterminate cases according to Lab 1 that were PCR negatives, tested negative in the serologic assays of Lab 2 and Lab 3. For the Lab 2, the PCR confirmed the 3 reactive cases and was positive for the 2 indeterminate cases. In relation to Lab 3, the PCR confirmed all 7 reactive cases and test positive for the 3 indeterminate cases. The PCR assay confirmed all cases simultaneously reactive in the serologic tests of two laboratories. Our results showed that the SC is a sensitive and practical method for collecting samples, allowing reliable diagnostic tests by PCR and showed higher sensitivity than other low invasive samples. We conclude that the use of CS for the regular screenings of dogs by PCR should be considered.