A cultura do maracujazeiro é afetada pela virose causada pelo Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV), provocando a redução da qualidade e produtividade dos frutos e, em alguns casos, pode inviabilizar o cultivo comercial desta espécie. Uma alternativa para o controle de doenças viróticas é o desenvolvimento de plantas resistentes pela transformação genética. O objetivo deste trabalho foi a obtenção de plantas transgênicas de maracujazeiro (Passiflora edulis f. flavicarpa), utilizando 2 construções gênicas contendo a região codificadora do gene da proteína capsidial do CABMV. A construção pCABMV-asCP, que contém um fragmento na orientação antisenso e a construção pCABMV-dsCP, que contém fragmentos senso e antisenso do gene da proteína capsidial, separados por um íntron, uma construção hairpin. Para os experimentos de transformação genética, via Agrobacterium tumefaciens, foram utilizados os explantes de segmentos de hipocótilo e discos de folhas jovens das variedades FB-100, IAC-275 e IAC-277. Após 2 - 3 dias de co-cultivo em meio de cultura MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962) contendo acetosseringona (100 mM), os explantes foram transferidos para meio de cultura de seleção e regeneração constituído de sais minerais e vitaminas de MS, suplementado com canamicina (100 mg/L) + cefotaxima (500 mg/L) + nitrato de prata (4,0 mg/L), pH 5,8 e os reguladores BAP, TDZ e combinação de BAP e TDZ. Após 4 - 6 semanas, as gemas adventícias desenvolvidas foram transferidas para meio de cultura de alongamento MSM + GA3 (1,0 mg/L) + cefotaxima (500 mg/L) + nitrato de prata (4,0 mg/L). As plantas desenvolvidas foram aclimatizadas e analisadas por PCR, utilizando-se primers específicos para a detecção dos transgenes. Foram identificadas 30 plantas transgênicas PCR positivas para do gene nptII, sendo 11 positivas para o fragmento antisenso da proteína capsidial do CABMV e 2 positivas para o fragmento da construção gênica hairpin. Até o momento, a integração dos transgenes foi confirmada por Southern blot em 4 plantas. Paralelo aos experimentos de transformação genética, foram avaliadas plantas de maracujazeiro das variedades IAC-275 e IAC-277, obtidas em experimentos anteriores, com a construção gênica pCABMV-CP, que contém o gene da proteína capsidial do CABMV. A análise de Southern blot de 14 plantas destes experimentos, confirmou a integração do transgene em 13 plantas, as quais foram propagadas e inoculadas mecanicamente com 3 isolados do CABMV (SP, RJ, CE). A linhagem T16 foi resistente as 3 inoculações, com os 3 isolados testados. Clones desta linhagem foram analisados por RT-PCR, comprovando a transcrição do transgene / The yellow passionfruit is affected by Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV), which causes a decrease in fruit quality and productivity and in some cases making it unpractical for commercial cultivation of this species. Ann alternative for the control of virus diseases is the development of resistant plants through genetic transformation techniques. The objective of this work was to obtain passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa) transgenic plants with two different gene constructs derived from the CABMV coat protein coding region. pCABMV-asCP contains the gene fragment in an antisense direction and pCABMV-dsCP contains a sense and antisense coat protein gene fragments, separated by intron, a hairpin construct. The genetic transformation experiments with Agrobacterium tumefaciens, were done in hypocotyl segments and young leaf disks explants from varieties FB-100, IAC-275 and IAC-277. After two to three days in co-culture in MS culture medium (MURASHIGE; SKOOG, 1962) supplemented with acetoseringone (100 mM) the explants were subcultured to medium for selection and regeneration, composed of MS minerals and vitamins, supplemented with kanamycin (100 mg/L), cefotaxime (500 mg/L) and silver nitrate (4.0 mg/L), at pH 5.8, and the growth regulators BAP, TDZ and combination of BAP and TDZ. After four to six weeks, the adventitious buds developed were transferred to an elongating medium composed of MSM salts supplemented with GA3 (1.0 mg/L), cefotaxime (500 mg/L) and silver nitrate (4.0 mg/L). Plants were acclimatized and analyzed by PCR, with specific primers for the transgenes detection. Thirty transgenic plants were identified as PCR positive for the nptII gene, with 11 being positive for the antisense fragment of the CABMV coat protein gene and two positive for the hairpin gene construct fragment. Currently, the transgene integration was confirmed by Southern blot analysis in four plants. Simultaneously to the genetic transformation experiments, passionfruit plants, varieties IAC-275 e IAC-277, obtained from previous experiments with pCABMV-CP, which contains CABMV coat protein gene, were analized. The Southern blot analysis of 14 plants from these experiments confirmed the transgene integration in 13 plants, which were propagated and mecanically inoculated with three CABMV isolates (SP, RJ, CE). Line T16 was resistant to three inoculations with all three isolates tested. Clones from this line were analyzed by RT-PCR which confirmed the transgene transcription

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-08-29T22:28:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Anderson Gustavo Santos.pdf: 2571906 bytes, checksum: 0241f966a2aefc7dd806932c693fb2fb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T22:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Anderson Gustavo Santos.pdf: 2571906 bytes, checksum: 0241f966a2aefc7dd806932c693fb2fb (MD5) Previous issue date: 2018-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A doença de Parkinson (DP) é uma doença crônica e neurodegenerativa, de etiologia não totalmente elucidada. Estudos demonstram que processos oxidativos podem estar envolvidos nesta morte neuronal. Sabendo-se disso, pesquisas têm sido direcionadas na busca de plantas medicinais e substâncias que possam atuar inibindo tais processos oxidativos. A Passiflora alata é uma planta nativa do Brasil e que possui uma atividade antioxidante descrita na literatura. Além disto, há evidências de que espécies do gênero Passiflora podem atuar frente a doenças neurodegenerativas, como a DP. Através disto, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do tratamento com o extrato hidroalcoólico de P. alata (EHPA) em um modelo animal de DP, induzido pela neurotoxina 6-hidroxidopamina (6-OHDA). O extrato das folhas de P. alata foi preparado através da extração com solução hidroalcoólica a 95%, e posteriormente foi realizado a determinação do conteúdo de compostos fenólicos e flavonoides, além de ser determinada a sua atividade antioxidante frente aos ensaios DPPH• e ABTS•+. Para avaliar o efeito per se do EHPA, foi realizado uma avaliação do efeito comportamental, de diferentes doses do extrato, em animais não lesionados. Para a identificação do possível efeito neuroprotetor da planta, os animais foram separados em 5 grupos experimentais: SHAM (falso-operado), 6-OHDA controle, 6-OHDA + 100mg/Kg/dia de EHPA, 6-OHDA + 200mg/Kg/dia de EHPA e 6-OHDA + 300mg/Kg/dia de EHPA. Após a divisão dos grupos, os animais foram submetidos a cirurgia estereotáxica para a administração bilateral da neurotoxina 6-OHDA ou de solução salina (SHAM) no feixe prosencefálico medial. No dia seguinte, iniciou-se o tratamento com os extratos, por via oral, tendo uma duração de 14 dias. Após o término do tratamento, os animais foram submetidos aos seguintes testes comportamentais: Reconhecimento social, Campo aberto, Reconhecimento de objetos, Labirinto em cruz elevado e Natação forçada. Após o término dos testes, os animais foram sacrificados e foram coletados sangue e cérebro (estriado) para a determinação de GSH, catalase, parâmetros hematológicos e bioquímicos. Os resultados apresentados sugerem um efeito neuroprotetor resultante do tratamento com o EHPA, indicando uma reversão do déficit cognitivo e comportamentos do tipo depressivo e ansioso, resultantes da lesão com a 6-OHDA. No entanto, não foram observadas alterações comportamentais nos ratos não lesionados. Além disto, o extrato apresentou um bom desempenho frente ao modelo de captura de radicais livres ABTS•+, indicando a sua atividade antioxidante. Não foram observadas diferenças entre os grupos nas concentrações de GSH e na atividade da catalase, tanto no plasma como no estriado. No entanto, alterações hematológicas foram identificadas nos animais lesionados. Conclui-se, portanto, que o tratamento com o EHPA reverteu os prejuízos cognitivos, efeito tipo ansioso e tipo depressivo causados pela infusão intracerebral de 6-OHDA, um modelo animal de DP. / Parkinson’s disease (PD) is a chronic and neurodegenerative disease with an unknown etiology. Studies have shown that oxidative processes may be involved in this neuronal death. Thus, studies have been focused on medicinal plants and substances with antioxidant properties that may inhibit such oxidative processes. Passiflora alata is a Brazilian native plant with an antioxidant and neuroprotective activity, described on literature. In addition, there is evidences that species of the genus Passiflora can act against neurodegenerative diseases, such as PD. Hence, the aim of present investigation was to evaluate the neuroprotective effect of ethanolic extract of Passiflora alata (EEPA) in an animal model of PD, induced by the neurotoxin 6-Hydroxidopamine (6-OHDA). The extract of P. alata’s leaves was prepared by extraction with ethanolic solution (95%), and characterized by its phenolic compounds, flavonoids and the scavenger activity against DPPH• and ABTS•+ radicals. To evaluate the effect per se of EEPA, an evaluation of the behavioral effect was carried out on non-injured animals, with different doses of the extract. For the identification of the possible neuroprotective effect of the plant, male Wistar rats were used, which were separated into 5 experimental groups: SHAM (false-operated), 6-OHDA control, 6-OHDA + 100mg/kg/day of EEPA, 6-OHDA + 200mg/kg/day of EEPA and 6-OHDA + 300mg/kg/day of EEPA. After the division of these groups, the animals were submited to the stereotaxic surgery for bilateral administration of 6-OHDA neurotoxin or saline solution (SHAM) in the medial forebrain bundle. On following day, the treatment with the extracts started and continued for 14 days. After the treatment was finished, all the animals were submitted to the following behavioral tests: Social recognition, Open field, Object recognition, Elevated plus maze and Forced swimming. The non-injured animals, the same treatment protocol and tests were followed. Subsequently, the animals were sacrificed and blood and brain (striatum) were collected for the determination of GSH, catalase, hematological and biochemical parameters. The present results demonstrate a neuroprotective effect resulting from treatment with the EEPA on rats with 6-OHDA injury, indicating a reversal of cognitive deficit and depressive and anxious behaviors. However, no behavioral effects were observed in the non-injured rats. In addition, the extract exhibited a good scavenger activity against the ABTS•+ radical, indicating its antioxidant activity. No differences were observed between groups on GSH concentrations and catalase activity, on blood and striatal tissue. However, hematological changes were identified in the injured animals. In conclusion, the treatment with EEPA reversed the cognitive, anxious and depressive impairments caused by the intracerebral infusion of 6-OHDA, an animal model of PD.

A psoríase é uma doença de pele inflamatória crônica, que afeta cerca de 2-4% da população mundial. Se desenvolve ao longo do tempo, principalmente no final da adolescência ou início da idade adulta e depende de uma complexa interação entre fatores genéticos e ambientais. Dados experimentais demostram que a dermatite induzida por imiquimode (IMQ) em camundongos assemelha-se estreitamente às lesões de psoríase humana, tanto nas características fenotípicas e histológicas como no desenvolvimento das lesões na epiderme. O estudo avaliou os efeitos anti-inflamatórios do óleo de semente de maracujá (Passiflora edulis) no tratamento da psoríase, utilizando a análise histológica e imunológica da epiderme. O experimento foi realizado com 36 camundongos Balb/c, os quais foram submetidos à indução da psoríase por imiquimode, por 10 dias consecutivos. O tratamento foi realizado com óleo de semente de maracujá in natura 100%, pomada LECIGEL® 2%, pomada associação de óleo de semente de maracujá 20% e LECIGEL® 2%, por 15 dias. Tanto o óleo da semente do maracujá quanto a associação do mesmo ao LECIGEL® diminuíram o quadro inflamatório induzido por imiquimode nas orelhas tratadas. Através das análises imuno-histoquímicas realizadas na epiderme (PCNA, IL-6, VEGF, CD34), observou-se um aumento na formação de corpos apoptóticos, diminuição a hiperplasia epitelial e redução do infiltrado inflamatório. Os resultados deste experimento demonstraram que o óleo da semente do maracujá desempenha um efeito anti-inflamatório no tratamento da psoríase induzida por imiquimode. / Psoriasis is a chronic inflammatory skin disease that affects about 2-4% of the world\'s population. It develops over time, especially in late adolescence or early adulthood and depends on a complex interaction between genetic and environmental factors. Experimental data show that imiquimode-induced dermatitis (IMQ) in mice closely resembles human psoriasis lesions, both in phenotypic and histological characteristics and in the development of lesions in the epidermis. The study evaluated the anti-inflammatory effects of passion fruit (Passiflora edulis) oil in the treatment of psoriasis, using the histological and immunological analysis of the epidermis. The experiment was performed with 36 Balb / c mice, which were submitted to psoriasis induction by imiquimode, for 10 consecutive days. The treatment was carried out with 100% fresh passion fruit seed oil, LECIGEL ® 2% ointment, 20% passion fruit seed oil ointment and LECIGEL ® 2% for 15 days. Both passionflower seed oil and its association with LECIGEL ® decreased the imiquimod-induced inflammation in the treated ears. Through the immunohistochemical analyzes performed on the epidermis (PCNA, IL-6, VEGF, CD34), an increase in the formation of apoptotic bodies, decrease in epithelial hyperplasia and reduction of inflammatory infiltrate was observed. The results of this experiment suggest that passion fruit seed oil has an anti-inflammatory effect in the treatment of imiquimode-induced psoriasis.

O gênero Passifloraceae possui mais de 400 espécies, sendo uma delas Passiflora incarnata L., detentora de diversas aplicações , principalmente no âmbito farmacêutico como uma planta capaz de atuar no sistema nervoso central para o tratamento de distúrbios da ansiedade. As substâncias mais abundantes existentes nas folhas dessa espécie pertencem à classe dos flavonóides, principalmente os C-glicosilados, que podem estar diretamente relacionados à atividade farmacológica da planta. Assim, o objetivo do presente trabalho , foi avaliar a influência (ou não ) de fatores externos na concentração dos flavonóides, em um cultivo experimental realizado na região de Botucatu .Os flavonóides analisados foram a luteolina, homoorientina, vitexina, isovitexina e orientina , com sua quantificação realizada por HPLC-UV/DAD e expressos em flavonóides totais calculados com base no padrão de rutina, através do método descrito por Pereira (2002). Realizou-se a correlação quimiométrica destes resultados pela análise multivariada , através de PCA (análise de componentes principais ) e HCA (análise hierárquica de agrupamentos), para avaliar se ocorreu a influência direta de determinados elementos do solo (pH, macronutrientes e micronutrientes) e do ambiente (temperatura e umidade) no teor de flavonóides encontrados nas folhas. Concluiu-se que as amostras se apresentaram de forma heterogênea no decorrer do cultivo (quanto à classificação ) , porém que alguns minerais presentes no solo (por exemplo, ferro, boro e cobre ), possuem relação inversa à concentração dos flavonóides totais encontrados nas folhas de P. incarnata. / Passifloraceae genus has more than 400 species and one of them is Passiflora incarnata L., which holds different application, mainly on the pharmaceutical scope as an herb capable to act on the central nervous system to the treatment of anxiety disturbs. The more copious compounds that exist on the leaves of this specie belong to flavonoid category, mainly C-glicosilates that could have direct relationship with pharmacologic properties of the herb. So, the objective of this task was to evaluate concentration in experimental growth made on Botucatu?s place. Analysed flavonoids were luteolin, homoorientin, vitexin, isovitexin and orientin, which were quantified by HPLC-UV/DAD and expressed as total flavonoids as rutin, through described method from Pereira (2002). Results were analysed through chemometric´s correlation, with PCA (principal components analysis) and HCA (hierarchic clusters analysis), to evaluate if some soil members (pH, macro and micronutrients) and ambient members (temperature and humidity) affected or not the flavonoids content on the leaves. It was conclude that all samples appeared heterogeneous in the course of growth, but some members present on the soil (as example iron, cupper and bore), have opposite relationship with total flavonoids content on the leaves of P. incarnata.

A família Passifloraceae é conhecida mundialmente por suas flores exuberantes, frutos comestíveis e pelo uso na medicina. Composta por duas tribos, com apenas Passifloreae ocorrendo abundantemente no Brasil, principalmente espécies pertencentes ao gênero Passiflora. Este gênero compreende quatro subgêneros, Astrophea, Decaloba, Deidamioides e Passiflora. Destes Decaloba e Passiflora são grupos monofiléticos e os mais numerosos em espécies. É ainda o gênero que mais apresenta diversidade morfológica das folhas e estípulas. Apesar do elevado número de espécies, os estudos sobre anatomia foliar em Passifloraceae ainda são escassos, embora muitas revisões taxonômicas utilizem amplamente a morfologia foliar para classificar as espécies. Dessa forma este trabalho teve como objetivo auxiliar na identificação das espécies e contribuir com futuros estudos filogenéticos, a partir das descrições morfológicas e anatômicas das folhas de Passiflora. Técnicas usuais de anatomia vegetal foram utilizadas para análise em microscopia óptica. Como principais resultados foram descritos caracteres anatômicos que corroboram a classificação infrasubgenérica já existente, além de acrescentar características particulares ao nível de espécie. O padrão de venação mostrou-se o caráter anatômico bastante seguro. Dentre as superseções analisadas, a superseção Dacaloba mostrou-se mais sólida quanto aos caracteres anatômicos estudados. No entanto, na superseção Stipulata, outro grupo com boa representação, as características anatômicas não foram constantes entre as espécies / Passifloraceae family is worldwide known for its exuberant flowers, edible fruits and for their use in medicine. Composed of two tribes, with only Passifloreae largely distributed in Brazil, especially species belonging to the genera Passiflora. This genera comprises four subgenera, .Astrophea, Decaloba, Deidamioides and Passiflora. Within these, Decaloba and Passiflora are monophyletic groups and the most representative in number of species. Besides, these are the subgenera with the greatest morphological diversity in leaves and stipules. Even with the large number of species, the studies about leaf anatomy in Passifloraceae are still scarce. Several taxonomic reviews widely use leaf morphology to classify the species and group them in taxa. Thus, this study aimed to support the species identification and contribute with future phylogenetic studies, based on the morphological and anatomical descriptions of Passiflora leaves. Usual techniques of plant anatomy laboratory were used in optical microscopy. As main results, the anatomical characters described corroborated the infrasugnenera classification already existent, besides adding particular characteristics to the level of species. The venation pattern demonstrated to be a safe anatomical character. Within the analyzed supersections, the supersection Decaloba was found to be solid regarding to the anatomical characters studied. Although, in Stipulata supersection, another group with good representation, the anatomical characteristics were not persistent within the species

Estudaram-se os efeitos da administração diária do extrato seco de maracujá, Passiflora incarnata, sobre o bem-estar, comportamento social e desempenho de juvenis de tilápia do Nilo, Oreochromis niloticus. Machos juvenis desta espécie (86,02 ± 5,72g) foram mantidos na condição de isolamento químico, térmico e visual em aquários de vidro (30L) durante sete dias para aclimatação, coletando-se a seguir, por punção da veia caudal, amostras de sangue para determinação dos níveis plasmáticos basais de glicose (método enzimático) e cortisol (método imunoenzimático). Após este período, todos os peixes receberam diariamente ração comercial (32% PB) contendo extrato seco de maracujá veiculado em alginato de sódio (5%) nas doses de 0, 50, 100 e 200 mg/kg, oferecida duas vezes ao dia (9:00h e 16:00h) na proporção de 2% da biomassa. Semanalmente os peixes foram submetidos à reflexão da própria imagem em espelho durante 30 minutos, registrando-se nos primeiros 10 minutos a coloração dos olhos e do corpo e seu comportamento agonístico (freqüências de ameaças, confrontos frontais e laterais). Após 30 minutos foram capturados e anestesiados para realização da biometria (comprimento padrão e peso) para cálculo do ganho em peso, taxa de crescimento específico e fator de condição, coletando-se novamente amostras de sangue para determinação dos níveis plasmáticos de glicose (aos 7, 14, 21 e 28 dias) e de cortisol (aos 14 e 28 dias). Os dados comportamentais foram analisados por meio do teste não paramétrico de Kruskal-Wallis (p=0,05) e teste de comparação múltipla de Dunn. Os demais parâmetros foram submetidos à ANOVA, utilizando-se para tais análises o procmixed do SAS (p=0,05). Não foram observadas diferenças significativas nos parâmetros analisados para nenhum tratamento. Todos os peixes cresceram e, embora não tenham sido detectados efeitos dos diferentes tratamentos, os níveis de cortisol reduziram e os níveis de glicose aumentaram significativamente em relação aos níveis basais. Concluiu-se que os peixes foram mantidos em condições adequadas que preservaram seu bem-estar, que o agente estressor e o modo como este foi imposto não foi adequado para promover o estresse social, que o extrato de maracujá não contribuiu para o aumento do bem-estar da tilápia do Nilo e que, na forma como foi administrado, não afetou a palatabilidade da ração e nem o desempenho dos peixes. Sugere-se, porém, que o extrato de maracujá interfira na expressão dos comportamentos agonísticos da tilápia. / The effects of daily administration of passion fruit (Passiflora incarnata) dry extract, on welfare, social behavior and performance of juvenile Nile tilapia, Oreochromis niloticus were studied. Juvenile males of this species (86.02 ± 5.72g) were maintained under chemical, thermal and visual isolation in glass aquariums (30L) during seven days for acclimatization. Blood samples were collected by puncture of the caudal vein, and used for determination of basal plasma levels of glucose (enzymatic method) and cortisol (immunoenzimatic method). After this period, the fish received commercial ration (32% PB) containing dry extract of passion fruit in sodium alginate (5%) as carrier in doses of 0, 50, 100 and 200 mg/kg, offered twice a day (9:00h and 16:00h) in the proportion of 2% of the biomass. Weekly, the fish were submitted to the reflection of their own image in a mirror for 30 minutes, registering during the first 10 minutes the coloration of the eyes and of the body and agonistic behavior (frequencies of threats, front and lateral confrontations). After 30 minutes they were captured and anesthetized for biometric measures (standard length and weight) for calculation of weight gain, specific growth rate and condition factor, with blood samples collected again for determination of plasma levels of glucose (at 7, 14, 21 and 28 days) and cortisol (at 14 and 28 days). The data of behavior were analyzed by the Kruskal-Wallis non parametric (p=0.05) test and Dunn’s multiple comparison test. The other parameters were submitted to ANOVA, using procmixed of the SAS (p=0.05). No significant differences were observed for the parameters analyzed for any treatment. All the fish grew and, although effects of the different treatments were not detected, cortisol levels reduced and glucose levels increased significantly in relation to basal levels. It is concluded that the fish were maintained under appropriate conditions that preserved their welfare, that the stressor agent and the way it was imposed did not promote social stress, that the passion fruit extract did not contribute to the increase in welfare of the Nile tilapia and that the form of administration did not affect the palatability of the ration nor fish growth. It is suggested, however, that the passion fruit extract interferes in the expression of agonistic behaviors in Nile tilapia.

O maracujá-amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa) é uma frutífera de importância econômica no Brasil, sendo apreciado para a produção de suco concentrado e para o consumo in natura, além de ser usado pela indústria farmacêutica na extração da passiflorina. O presente trabalho visou à exploração da biblioteca genômica inserida em BACs (Ped-B-Flav) por meio da técnica de BAC-end sequencing, visando prover os primeiros insights sobre a composição e organização genômica da espécie, além de gerar novos candidatos a marcadores moleculares. Ao todo foram realizadas 9.979 reações de sequenciamento com eficiência média de 89 %, resultando em 8.821 BES de alta qualidade, com tamanho variando entre 100 pb e 1.255 pb, tendo em média 596 pb, totalizando cerca de 5,7 Mpb de informação genômica. Foram identificados, ao todo, 610 potenciais novos marcadores microssatélites. Os motivos de tetranucleotídeos foram os mais abundantes, ou seja, 28,9 % do total, sendo as repetições AATT aquelas observadas com maior frequência, com 131 ocorrências. Foram identificados e classificados 4.394 (19,69 %) elementos repetitivos. Dentre estes elementos, os grupos dos retrotransposons gypsy e copia-like foram os mais abundantes, correspondendo a 10,08 % e 7,93 % das ocorrências, respectivamente. Além disso, foram encontradas 767 (8,7 %) sequências com alta identidade a regiões codificadoras de proteínas. Estas sequências foram classificadas e anotadas de acordo com o vocabulário controlado GeneOntology. Análises de mapeamento genômico comparativo revelaram três regiões microssintênicas com o genoma de Populus trichocarpa, uma com o genoma de Vitis vinifera e uma com o genoma de Arabdopisis thaliana, além de evidenciarem uma série de regiões rearranjadas em relação aos genomas de referência. O presente estudo mostrou que os BES de Passiflora edulis são uma excelente fonte de informações sobre o genoma da espécie, principalmente no que tange à diversidade gênica, identificação de elementos transponíveis e ao potencial para o desenvolvimento de novos marcadores genéticos. Igualmente, foi possível empregar essas sequências na identificação de regiões microssintênicas entre o genoma do maracujá-amarelo e de outras espécies vegetais próximas. / Yellow passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa) is of considerable economic importance to Brazil. It is used to produce juice concentrate and also marketed for consumption as a fresh fruit. In the pharmaceutical industry, it is used to produce passiflora extract. The aim of this study was to explore the BAC (Bacterial Artificial Chromosome) genomic library (Ped-B-Flav) using BAC-end sequencing (BES) to provide some initial insights into the composition and organization of the species genome, and to generate new candidates for molecular markers. Altogether, 9,979 sequencing reactions were performed, with an average efficiency of 89 %, resulting in 8,821 high-quality BES, of average length ranging from 100 bp to 1255 bp, and consisting of an average 596 bp, totaling some 5.7 Mb of genomic information. In all, we identified 610 potential new microsatellite markers. Tetranucleotide motifs (28.9%) were the most abundant and AATT was the most frequently observed motif, with 131 occurrences. We identified and classified 4,394 (19.69 %) repetitive elements. Retrotransposon gypsy (10.8%) and copia-like (7.93%) elements were the most abundant. Furthermore, we found 767 (8.7 %) sequences very similar to those of protein coding regions. These sequences were classified and annotated according to gene ontology controlled vocabulary. Comparative genomic mapping revealed three regions showing microsynteny with the genome of Populus trichocarpa, one with Vitis vinifera genome and one with the Arabdopisis thaliana genome. In addition it revealed a series of rearranged regions in comparison to the reference genomes. This study showed that Passiflora edulis BES form an excellent source of information on the genome of the species, especially in regard to genetic diversity, identification of transposable elements and potential for the development of new genetic markers. It was also possible, using these sequences, to identify regions showing microsynteny with other plant species.

A cultura do maracujazeiro é afetada pela virose causada pelo Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV), provocando a redução da qualidade e produtividade dos frutos e, em alguns casos, pode inviabilizar o cultivo comercial desta espécie. Uma alternativa para o controle de doenças viróticas é o desenvolvimento de plantas resistentes pela transformação genética. O objetivo deste trabalho foi a obtenção de plantas transgênicas de maracujazeiro (Passiflora edulis f. flavicarpa), utilizando 2 construções gênicas contendo a região codificadora do gene da proteína capsidial do CABMV. A construção pCABMV-asCP, que contém um fragmento na orientação antisenso e a construção pCABMV-dsCP, que contém fragmentos senso e antisenso do gene da proteína capsidial, separados por um íntron, uma construção hairpin. Para os experimentos de transformação genética, via Agrobacterium tumefaciens, foram utilizados os explantes de segmentos de hipocótilo e discos de folhas jovens das variedades FB-100, IAC-275 e IAC-277. Após 2 - 3 dias de co-cultivo em meio de cultura MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962) contendo acetosseringona (100 mM), os explantes foram transferidos para meio de cultura de seleção e regeneração constituído de sais minerais e vitaminas de MS, suplementado com canamicina (100 mg/L) + cefotaxima (500 mg/L) + nitrato de prata (4,0 mg/L), pH 5,8 e os reguladores BAP, TDZ e combinação de BAP e TDZ. Após 4 - 6 semanas, as gemas adventícias desenvolvidas foram transferidas para meio de cultura de alongamento MSM + GA3 (1,0 mg/L) + cefotaxima (500 mg/L) + nitrato de prata (4,0 mg/L). As plantas desenvolvidas foram aclimatizadas e analisadas por PCR, utilizando-se primers específicos para a detecção dos transgenes. Foram identificadas 30 plantas transgênicas PCR positivas para do gene nptII, sendo 11 positivas para o fragmento antisenso da proteína capsidial do CABMV e 2 positivas para o fragmento da construção gênica hairpin. Até o momento, a integração dos transgenes foi confirmada por Southern blot em 4 plantas. Paralelo aos experimentos de transformação genética, foram avaliadas plantas de maracujazeiro das variedades IAC-275 e IAC-277, obtidas em experimentos anteriores, com a construção gênica pCABMV-CP, que contém o gene da proteína capsidial do CABMV. A análise de Southern blot de 14 plantas destes experimentos, confirmou a integração do transgene em 13 plantas, as quais foram propagadas e inoculadas mecanicamente com 3 isolados do CABMV (SP, RJ, CE). A linhagem T16 foi resistente as 3 inoculações, com os 3 isolados testados. Clones desta linhagem foram analisados por RT-PCR, comprovando a transcrição do transgene / The yellow passionfruit is affected by Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV), which causes a decrease in fruit quality and productivity and in some cases making it unpractical for commercial cultivation of this species. Ann alternative for the control of virus diseases is the development of resistant plants through genetic transformation techniques. The objective of this work was to obtain passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa) transgenic plants with two different gene constructs derived from the CABMV coat protein coding region. pCABMV-asCP contains the gene fragment in an antisense direction and pCABMV-dsCP contains a sense and antisense coat protein gene fragments, separated by intron, a hairpin construct. The genetic transformation experiments with Agrobacterium tumefaciens, were done in hypocotyl segments and young leaf disks explants from varieties FB-100, IAC-275 and IAC-277. After two to three days in co-culture in MS culture medium (MURASHIGE; SKOOG, 1962) supplemented with acetoseringone (100 mM) the explants were subcultured to medium for selection and regeneration, composed of MS minerals and vitamins, supplemented with kanamycin (100 mg/L), cefotaxime (500 mg/L) and silver nitrate (4.0 mg/L), at pH 5.8, and the growth regulators BAP, TDZ and combination of BAP and TDZ. After four to six weeks, the adventitious buds developed were transferred to an elongating medium composed of MSM salts supplemented with GA3 (1.0 mg/L), cefotaxime (500 mg/L) and silver nitrate (4.0 mg/L). Plants were acclimatized and analyzed by PCR, with specific primers for the transgenes detection. Thirty transgenic plants were identified as PCR positive for the nptII gene, with 11 being positive for the antisense fragment of the CABMV coat protein gene and two positive for the hairpin gene construct fragment. Currently, the transgene integration was confirmed by Southern blot analysis in four plants. Simultaneously to the genetic transformation experiments, passionfruit plants, varieties IAC-275 e IAC-277, obtained from previous experiments with pCABMV-CP, which contains CABMV coat protein gene, were analized. The Southern blot analysis of 14 plants from these experiments confirmed the transgene integration in 13 plants, which were propagated and mecanically inoculated with three CABMV isolates (SP, RJ, CE). Line T16 was resistant to three inoculations with all three isolates tested. Clones from this line were analyzed by RT-PCR which confirmed the transgene transcription

Passiflora alata Curtis (PASSIFLORACEAE) é utilizada como tranqüilizante, seja popularmente ou pela indústria farmacêutica na produção de fitoterápicos. O objetivo desse trabalho foi avaliar, em camundongos, a atividade geral sobre o Sistema Nervoso Central e o efeito ansiolítico de um extrato hidroetanólico (70%) (EXT) e de duas frações enriquecidas (fração de saponinas - SAP e fração de flavonóides - FLA) obtidos das folhas de P. alata e, também, investigar o envolvimento do complexo receptor GABAA nos efeitos observados. O extrato e as frações foram administrados agudamente, pela via oral, e avaliados nos seguintes modelos: labirinto em cruz elevado, tempo de sono barbitúrico, avaliação da atividade locomotora espontânea, avaliação da coordenação motora em aparelho rota-rod e proteção às convulsões induzidas por pentilenotetrazol. FLA 300 mg/kg e SAP 600 e 900 mg/kg provocaram um efeito do tipo ansiolítico no labirinto em cruz elevado. FLA (CI50= 181,2 μg/mL) e SAP (CI50= 23,4 μg/mL) deslocaram a ligação específica de [3H]-TBOB em membranas sinaptossomais de córtex de ratos adicionadas de GABA (0,3 μM), indicando uma modulação positiva do canal de cloreto ativado por GABA, porém esse efeito não é mediado pelo sítio benzodiazepínico uma vez que ambas as frações não deslocaram a ligação de [3H]-flunitrazepam em concentrações até 300 μg/mL. O extrato hidroetanólico (EXT) provocou efeitodo tipo ansiolítico (300 mg/kg) no labirinto em cruz elevado, o qual foi bloqueado pela administração de flumazenil (6 mg/kg, i.p.). Porém, esse extrato em concentrações até 1000 μg/mL não deslocou a ligação de [3H]-flunitrazepam, indicando que o efeito ansiolítico é mediado pelo sítio benzodiazepínico mas não pela interação direta das substâncias presentes no extrato com este sítio. Na dose de 600 mg/kg não foi observado efeito ansiolítico para o extrato, porém foi verificada uma redução da atividade motora dos animais, indicando um efeito sedativo. EXT 300 e 600 e FLA 300 prolongaram o tempo de sono barbitúrico e SAP (300-900 mg/kg) não apresentou efeito neste teste. Os dados obtidos demonstraram que P. alata apresentou efeito hipnótico-sedativo e ansiolítico em camundongos, os quais parecem ser mediados pela ativação do complexo receptor benzodiazepínico/GABAA e podem estar relacionados com a presença de flavonóides e saponinas. / Passiflora alata Curtis (PASSIFLORACEAE) is used in folk medicine and also by pharmaceutical industry, as raw material in phytotherapy, due its tranquilizing properties. The aims of this work were to evaluate, in mice, the central nervous system general activity and the anxiolytic effect of a hydroethanolic extract (70%) (EXT) and two enriched fractions (saponin fraction – SAP – and flavonoid fraction – FLA), obtained from leaves of P. alata and, also, to investigate the GABAA receptor complex involvement on the observed effects. The extract and the fractions were administrated acutely, by oral route, and evaluated on elevated plus maze, barbiturate sleeping time, locomotor activity, rota-rod, and pentilenotetrazole-induced seizures tests. FLA 300 mg/kg and SAP 300 and 900 mg/kg produced an anxiolyticlike effect on elevated plus maze test. FLA (IC50=181,2 μg/mL) and SAP (IC50=23,4 μg/mL) inhibited the [3H]-TBOB binding to rat cerebral sinaptosomal membranes added of GABA (0,3 μM), which is an indicative of a positive modulation of the chloride channel activated by GABA, but this effect is not mediated by the benzodiazepine binding site, once these fractions in concentrations up to 300 μg/mL did not displaced the [3H]-flunitrazepam. The hidroethanolic extract (EXT) showed anxiolytic-like effect (300 mg/kg) on elevated plus maze test which was prevented by flumazenil (6 mg/kg, i.p.). However, in concentrations up to 1000 μg/mL this extract showed no potency in displacing the [3H]-flunitrazepam binding, indicating that the anxiolytic-like effect is mediated by activation of benzodiazepine binding site, but not by a direct interaction of the compounds presented in this extract at this site. At 600 mg/kg this extract did not show anxiolytic effect but it decreased the motor activity, pointing to a sedative effect. EXT 300 and 600 mg/kg and FLA 300 mg/kg increased the barbiturate sleeping time while SAP (300-900 mg/kg) presented no effects in this test. Taken account of these results, P. alata presented anxiolytic and hypnoticsedative effects in mice. These effects may be mediated by the activation of benzodiazepine/GABAergic complex, and can be related to the presence of both flavonoids and saponins.

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:15:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RoseanoMS_DISSERT.pdf: 998724 bytes, checksum: 0dca9ffcac3f9ed7130eddfb95d703e7 (MD5) Previous issue date: 2012-09-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was to evaluate the combination of three forms of grafting methods and use of protective grafting with moist chamber in the production of yellow passion fruit seedlings. The experimental design was a randomized complete block in a 3x2 factorial arrangement with six replications, each plot consisting of nine plants, where the factors were the combinations of three embodiments of the method of grafting (cleft, side slit and simple slot) with the use of grafting protection with moist chamber or not using it. Seeds from FB 100 passion fruit cultivar were used for production of rootstock plants. On the other hand, seeds from the rounded-yellow cultivar (Topseed® Company) were used for production of scions. Grafting were performed 70 days after sowing. After 21 days, grafts were removed from the protection of the moisture chamber. At this time, the effectiveness of grafts was evaluated. At 28, 42 and 56 days after grafting it was evaluated the amount of plants remained alive. Fifty six days after grafting it was evaluated the number of leaves, graft and rootstock diameter, plant height and shoot dry weight. There was a significant interaction for different types of grafting and use of moist chamber at 21 days after grafting. Types of grafting with the highest percentage of graft effectiveness were: cleft (94.45%) and side slit (91.67%). There was no influence on the use of protection with moist chamber for cleft and side slit. Cleft type grafting showed a decrease in the rate of fixation when not using moist chamber protection. Cleft grafting and side slit showed the higher rates of survival with 86.12% and 91.67% respectively for the 28, 42 and 56 days after grafting. Plants from grafts protected with moist chamber had the highest average survival percentage (79.63%) for 28, 42 and 56 days after grafting. The use of moist chamber caused a decrease in plant growth showing that there is a need for plants to remain in it much less than the used in the trial. Cleft and side slit grafting types associated with the use of protection promoted by moist chamber lowest rates of fixation and survival of seedlings of yellow passion / O objetivo deste trabalho foi avaliar a combinação de três formas de realização da enxertia pelo método de garfagem e uso da proteção da enxertia com câmara úmida na a produção de mudas de maracujazeiro-amarelo. O delineamento experimental adotado foi o de blocos completos casualizados em esquema fatorial 3x2, com seis repetições, sendo cada parcela constituída de nove plantas, onde os fatores foram as combinações de três formas de realização da enxertia pelo método de garfagem (fenda cheia, fenda lateral e fenda simples) e utilização e não do uso da proteção da enxertia com câmara úmida. Para produção das mudas dos porta-enxertos e enxertos foram utilizadas sementes da cultivar FB 100 e redondo-amarelo da marca comercial Topseed® respectivamente. As enxertias foram realizadas aos 70 dias após a semeadura. Aos 21 dias após as enxertias foram retiradas as proteções por câmara úmida e avaliado a porcentagem de pegamento. Aos 28, 42 e 56 dias após a enxertia foi avaliado a sobrevivência em porcentagem de plantas que permaneceram vivas. Aos 56 dias após a enxertia avaliou-se o número de folhas, diâmetro do enxerto e porta-enxerto, altura da planta e massa seca da parte aérea. Verificou-se interação significativa para os diferentes tipos de enxertia e uso da câmara úmida aos 21 dias após a enxertia, os tipos de enxertia que apresentaram as maiores porcentagem de pegamento foram: fenda cheia (94,45%) e fenda lateral (91,67%). Não houve influência do uso da proteção com câmara úmida para as enxertias tipo fenda cheia e lateral. Com a realização da enxertia do tipo fenda simples, verificou-se diminuição da taxa de pegamento quando não se utiliza a proteção. Os tipos de enxertia por fenda cheia e fenda lateral apresentaram os maiores índices de sobrevivência e permaneceram em 86,12% e 91,67% respectivamente para os 28, 42 e 56 dias após a enxertia. As plantas provenientes de enxertos protegidos com câmara úmida apresentaram a maior média de porcentagem de sobrevivência (79,63%) para os 28, 42 e 56 dias após a enxertia. O uso da câmara úmida promoveu um decréscimo no crescimento das plantas, sendo necessário um menor tempo de permanência da proteção sobre as plantas. As enxertias de garfagem tipo fenda cheia e lateral associadas ao uso da proteção com câmara úmida promoveram os melhores índices de pegamento e sobrevivência das mudas de maracujazeiro-amarelo