Introduction: The aim of this research work was to compare the radiographic periapical lesions in teeth of diabetic and nondiabetic rats and do an analysis of the metabolic differences of these animals. Methods: 16 male Wistar rats divided into two groups: Group I (n = 8) group rats received chow and filtered water; Group II (n = 8) rats received hypercaloric diet during a 10-week period. After 6 weeks the start of administration of the diet, periapical lesions were induced in the first molars with coronary opening, pulp removel and root canal exposure to the oral environment for a period of 28 days. After this period, the animals were euthanized, blood was made collection was perfomed, followed by liver and abdominal fat removal and, subsequently, the mandible was removed to perform radiographic analysis. Data were subjected to statistical analysis with a significance level set at α=0:05. The difference between groups was analyzed by Student's t-test. Results: There was no statistical difference between diabetic and nondiabetic rats (P>0.05) in radiographic analysis. In blood test statistical difference between diabetic and non-diabetic mice (P<0.05) in the level of catalase cosumo weekly weighed and feed was observed. Conclusion: The induction of diabetes with a high calorie diet for a period of 10 weeks did not show differences in the sizes of periapical lesions evaluated in these animals. In addition, the metabolic differences in these animals were not observed, except in the level of catalase, weekly weighing and feed intake. / Introdução: O objetivo desse trabalho de pesquisa foicomparar radiograficamente as lesões periapicais em dentes de ratos diabéticose não diabéticos e fazer uma análise das diferenças metabólicas desses animais. Métodos: Foram utilizados 16 ratos machos Wistar divididos em dois grupos: no grupo I (n=8) os ratos receberam ração e água filtrada; no grupo II (n=8) os ratos receberam ração hipercalórica, durante o período de 10 semanas. Após 6 semanas do início da administração da dieta, lesões periapicais foram induzidas nos primeiros molares inferiores, com abertura coronária, remoção da polpa e exposição do canal radicular ao meio bucal por um período de 28 dias. Após este período, os animais foram eutanasiados, foi feita a coleta sanguínea, remoção do fígado, remoção da gordura abdominale, posteriormente, amandíbula foi removida para realização da análise radiográfica.Os dados foram submetidos à análise estatística com nível de significância fixado em α=0.05. A diferença entre os grupos foi analisada pelo teste T-Student.Resultados: Não houve diferença estatística entre ratos diabéticos e não diabéticos (P>0.05) para análise radiográfica. Na análise sanguínea foi observada diferença estatística entre ratos diabéticos e não diabéticos (P<0.05) no nível de catalase, pesagem semanal e cosumo de ração. Conclusão:A indução da diabetes com uma dieta hipercalórica, por um período de 10 semanas não demostrou diferenças nos tamanhos das lesões periapicais avaliadas nesses animais. Além disso, as diferenças metabólicas nesses animais não foram observadas, com exceção do nível de catalase, pesagem semanal e consumo de ração.

O presente trabalho teve por objetivo investigar a microbiota de canais radiculares relacionadas ao insucesso do tratamento endodôntico, buscando a identificação e a quantificação destes micro-organismos. Foram selecionados 36 dentes com infecção endodôntica persistente. O material obturador foi removido do canal radicular e amostras microbiológicas foram coletadas dos canais com o auxílio de limas tipo Hedströen e cones de papel absorvente estéril. A técnica do Checkerboard DNA-DNA hybridization foi utilizada para detecção de até 79 espécies bacterianas em cada amostra, utilizando sondas de DNA específicas. Os dados microbiológicos foram expressos em percentagem média (prevalência), proporção e nível médio de cada espécie em cada amostra. Os testes t independente e de correlação de Pearson foram usados para correlacionar a contagem das bactérias testadas com os dados clínicos (p&#8804; 0,05). Foi encontrada uma média de 11 espécies por amostra. E. faecium (36%), S. epidermidis (36%), E. saburreum (28%), P. micra (28%), S. sanguis (28%), C. sputigena (28%), L. buccalis (28%), E. faecalis (28%) e S. warneri (28%) foram as espécies mais prevalentes, e as espécies encontradas em níveis médios mais altos foram E. faecium, D. pneumosintes, S. epidermidis, H. pylori e C. sputigena. T. socranskii (3%), F. periodonticum (3%), C. gingivalis (3%), S. ixodetis (3%) apresentaram prevalências mais baixas. E. faecium e S. epidermidis apresentaram os maiores valores de prevalência, níveis médios e proporção. Não houve correlação entre a microbiota detectada nas amostras com os sinais e sintomas clínicos apresentados pelos pacientes, porém nas lesões periapicais de maior área foi detectada contagem significativamente maior de bacilos e espécies Gram-negativas (p<0,05). Baseado nos resultados obtidos é possível concluir que a microbiota presente em dentes com periodontite apical persistente possui perfil misto e complexo, e que uma maior área de lesão perirradicular pode estar associada a contagem elevada de bacilos e de espécies Gram-negativas. / The present study investigated the composition of the root canal microbiota in endodontic failures, aiming to identify and quantify these microorganisms. Thirty six teeth with persistent endodontic infection were selected. The root-filling materials were removed and microbiological samples were taken from the root canals with a Hedströen-type file and sterile paper points. The Checkerboard DNA-DNA hybridization technique was used for the detection of 79 bacterial species in each sample, using specific DNA probes. Microbiological data were express in mean prevalence, proportions and levels of each species in each sample. t independent test and Pearson correlation test were use to correlate bacterial counts and clinical conditions (p&#8804; 0,05). There were found a mean of 11 different species per sample. E. faecium (36%), S. epidermidis (36%), E. saburreum (28%), P. micra (28%), S. sanguis (28%), C. sputigena (28%), L. buccalis (28%), E. faecalis (28%) and S. warneri (28%) were the most prevalent species, and the species found in highest mean levels were E. faecium, D. pneumosintes, S. epidermidis, H. pylori and C. sputigena. T. socranskii (3%), F. periodonticum (3%), C. gingivalis (3%) and S. ixodetis (3%) were found in low prevalence. E. faecium and S. epidermidis presented the highest values of prevalence, means levels and proportions. No correlation was found between the detected microbiota and clinical findings; however in periapical lesions with highest areas, higher levels of rods and Gram-negative species were detected (p<0.05). Based on these results it may be concluded that the microbiota in teeth with persistent apical periodontitis presents a mixed and complex profile, and periapical lesions with larger area might be high associated with higher counts of rods and Gram-negative species.

O principal objetivo do tratamento endodôntico em dentes com infecções primárias é a cura da periodontite apical, o que ocorre geralmente após a máxima redução de micro-organismos do canal radicular. Métodos microbiológicos moleculares são os métodos de escolha para avaliar a redução de micro-organismos após o tratamento endodôntico por serem mais sensíveis, específicos e precisos do que os métodos baseados em cultura bacteriológica. Entretanto, poucos estudos clínicos avaliaram a eficácia antimicrobiana do tratamento endodôntico por métodos moleculares. Além disso, até o presente momento, não há nenhum estudo correlacionando esses dados com o sucesso do tratamento endodôntico. Portanto, os objetivos do presente estudo foram: (a) avaliar in vivo, por métodos moleculares quantitativos, a concentração de bactérias nos canais radiculares e sua, correlação com aspectos clínicos e radiográficos; (b) correlacionar a redução bacteriana após o tratamento endodôntico com reparo apical após controle radiográfico e tomográfico. Trinta e quatro pacientes portadores de dentes com necrose pulpar e periodontite apical foram selecionados para o estudo. O protocolo de antissepsia consistiu em realizar o Preparo Químico-Cirúrgico (PQC) com sistema Reciproc e NaOCl 2,5%; irrigação final com EDTA-T 17%; e medicação intracanal com pasta de hidróxido de cálcio por 14 dias antes da obturação dos canais radiculares. Foram realizadas coletas microbiológicas dos canais radiculares no início do tratamento e na segunda sessão, após a remoção da medicação intracanal antes da obturação. As amostras microbiológicas foram analisadas por Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa (qPCR) para detecção e quantificação de bactérias utilizando iniciadores universais para o domínio Bactéria. Para análise do sucesso do tratamento endodôntico, foram analisados aspectos clínicos, radiográficos e tomográficos após um período mínimo de controle de 1 ano. Os casos foram classificados em 4 categorias: ausência de rarefação óssea periapical, redução ou aumento e incerto. Bactérias foram observadas em 100% das amostras iniciais coletadas, com concentrações medianas de 1,68 x 106 cópias de DNA. A análise estatística de regressão logística não apresentou correlação entre concentrações de DNA bacteriano com dados clínicos. Após o tratamento endodôntico, as medianas das concentrações de bactérias foram de 8.72 x 102, os resultados mostraram que houve diminuição significativa na concentração de DNA bacteriano (p<0,05), correspondendo a porcentagem de redução de 99.98% nos canais radiculares após os procedimentos de antissepsia. Retornaram para o controle, 20 dos 34 pacientes (58,82%), entre 13 a 22 meses após o tratamento endodôntico. Dois dentes foram extraídos, restando um total de 18 dentes para análise clínica e radiográfica. O sucesso classificado por ausência ou redução da rarefação óssea na radiografia periapical foi observada em 16 dos 18 dentes (88,83%). Dos 2 casos de insucesso radiográfico, um apresentou elevada quantidade de bactérias (>104) persistentes após os procedimentos de antissepsia e um caso apresentou obturação deficiente. Entretanto, a análise estatística de regressão logística não identificou nenhum fator específico associado ao insucesso endodôntico. A análise tomográfica foi realizada em 12 dos 18 pacientes. Os achados tomográficos confirmaram ausência/ redução da rarefação periapical verificada na radiografia, com exceção de um caso onde não houve redução da área da rarefação. Conclui-se que dentes com necrose pulpar e periodontite apical apresentam uma elevada concentração de bactérias no sistema de canais radiculares. O tratamento endodôntico foi eficaz em reduzir significativamente a quantidade de bactérias dos canais radiculares e promover uma elevada taxa de sucesso endodôntico. / The objectives of the endodontic treatment of teeth with primary infections is the healing of apical periodontitis, which usually occurs after the maximum reduction of micro-organisms in the root canal. Molecular methods are the methods of choice for assessing the reduction of micro-organisms after endodontic treatment to be more sensitive, specific and accurate than methods based on bacteriological culture. The objectives of this study were to evaluate in vivo by molecular methods, the concentration of bacteria in root canals and correlation of bacterial reduction after endodontic treatment with apical repair after radiographic control and CBCT. Thirty four teeth with apical periodontitis, with radiographic evidence of periapical were selected for this study. The root canal preparation of all the teeth was carried out with reciprocating files and 2.5% NaOCl during preparation; and 17% EDTA for smear layer removal. The root canals were medicated with calcium hydroxide for 14 days. Microbiological sampling were performed before the preparation and after intracanal medication. The samples were analyzed by real time PCR, for the detection and quantification of bacteria,. Bacteria were observed in 100% of the initial samples. . Bacteria were observed in 100% of the initial samples, with median concentrations of 1.68 x 106 copies of the DNA. After endodontic treatment, the median bacterial concentrations were 8.72 x 102, the results showed a significant decrease in the concentration of bacterial DNA (p <0.05), corresponding to 99.98% reduction in the percentage of root canals after procedures of antisepsis. 13 to 19 months after treatment, the teeth were examined by using periapical radiography (PA) and cone-beam computed tomography (CBCT). Area and volume of the periapical lesions were measured, and the outcome was presented in 4 categories: absence, reduction or enlargement of the radiolucency, or uncertain. Lesions were classified as reduced or enlarged when the change in size of the radiolucency was 20% or more. The recall rate was 58,82%, and 18 teeth were analyzed. Success classified by the absence or reduction of bone thinning in periapical radiography was observed in 16 of the 18 teeth (88.83%). CT findings confirmed the absence / reduction of periapical rarefaction observed on radiographs, except for one case. Conclude that teeth with pulp necrosis and apical periodontitis have a high concentration of bacteria in the root canal system. The endodontic treatment was effective in significantly reducing the amount of bacteria from root canals and to promote a high rate of success endodontic.

A periodontite apical é um processo inflamatório que ocorre na região do periápice, em decorrência de contaminação microbiana do sistema de canais que se origina a partir da necrose pulpar ou canais radiculares tratados inadequadamente. Estudos recentes avaliando os fatores genéticos envolvidos no desenvolvimento da periodontite apical crônica (PAC) relatam forte relação com uma predisposição genética do indivíduo e determinam que variantes polimórficas em certos genes envolvidos na remodelação da matriz óssea poderiam contribuir na persistência desta. As metaloproteinases da matriz (MMPs) são enzimas que estão fortemente associadas com os níveis de inflamação e desempenham um papel importante na remodelação e reabsorção óssea, e níveis elevados de MMPs têm relação com a deficiência de reparo da lesão induzindo a PAC. Além disso, as MMPs também participam do complexo desenvolvimento raniofacial o que faz com que também sejam consideradas para a ocorrência de malformações faciais. O objetivo deste trabalho foi determinar se variantes polimórficas nos genes MMP-2 e MMP-3, envolvidos na resposta inflamatória estão associados a permanência de periodontite apical persistente após o tratamento endodôntico em indivíduos com fissura labiopalatina. Foram selecionados para este estudo 180 indivíduos divididos em 3 grupos: GI: 34 indivíduos com fissura labiopalatina, não sindrômicos, com história de PAC relacionada ao tratamento endodôntico; GII: 45 indivíduos sem fissura labiopalatina, não sindrômicos com história de PAC e GIII: grupo controle composto por 101 indivíduos sem fissura e sem relato de PAC. Como critério de inclusão para o diagnóstico de PAC foram considerados os escores 4 e 5 do índice PAI (PeriApical Index) analisado em radiografias periapicais de controle de um ano ou mais após o tratamento dos dentes envolvidos. Foram selecionadas para a genotipagem 3 variantes polimórficas no gene MMP-2 (rs243865, rs2285053 e rs2287074) e 2 no gene MMP-3 (rs679620 e rs522616). Os resultados foram analisados usando o software SDS 1.7 (Applied Biosystems) e os dados foram tabulados no programa Excel 8.0. As comparações entre as frequências dos genótipos e alelos foram realizadas através do teste do qui-quadrado (2) e Odds Ratio com intervalo de confiança de 95% (IC). Valores de p<0,05 foram considerados estatisticamente significativos. Das variantes polimórficas pesquisadas neste grupo populacional brasileiro, foi encontrada associação positiva do rs679620 no gene MMP-3 com a fissura labiopalatina e PAC somente quando comparado com o grupo com PAC e sem fissura. Sendo encontrada associação positiva também do rs522616 no gene MMP-3 com PAC e sem fissura, somente no comparativo com o grupo controle. Não foi encontrada nenhuma associação positiva das variantes no gene MMP-2 (rs243865, rs2285053 e rs2287074) nem com PAC nem com fissura labiopalatina. Dessa forma, são necessários estudos semelhantes analisando outras variantes polimórficas em outros genes envolvidos na cascata de sinalização da inflamação e na embriologia craniofacial, com amostras maiores, para esclarecer o papel do fator genético tanto para a periodontite apical crônica quanto para a fissura / Apical Periodontitis is an inflammatory process on periapical tissues, due to a microbial contamination of the canals system, arising from pulp necrosis or failed root canal treatment. Recent studies evaluating genetic factors involved on chronic apical periodontitis (CAP) show real relation with a genetic predisposition in individuals and determine whether polymorphic variability in some genes involved on bone matrix remodeling could contribute on the disease persistence. Matrix metalloproteinases (MMPs) are enzymes really associated with inflammation levels and take an important part of bone remodeling and resorption and high levels of MMPs have a relation with the lesion repair deficiency inducing CAP. Besides that, MMPs also participate on craniofacial development; being considered to the occurrence of some facial anomalies. The aim of this study was to determine whether polymorphic variability on genes MMP-2 e MMP-3 involved on inflammatory response is associated with the permanency of persistant apical periodontitis after endodontic therapy on individuals with cleft lip and/or palate. One hundred and eighty individuals were selected to this study, which was divided in 3 groups: GI: 34 individuals with cleft lip and/or palate, nonsyndromic, with CAP related to endodontic treatment; GII: 45 individuals without cleft lip and/or palate, nonsyndromic, with CAP, GIII: control group composed by 101 individuals without cleft and without report of chronic apical periodontitis. As inclusion criteria to CAP diagnosis were considered 4 and 5 of PAI score (PeriApical Index) analyzed on control periapical radiographies after one year or more after treatment of the teeth involved. Were selected for genotyping 3 polymorphic variabilities on gene MMP-2 (rs243865, rs2285053 e rs2287074) and 2 on gene MMP-3 (rs679620 e rs522616) were selected to genotyping. Results were analyzed by software SDS 1.7 (Applied Biosystems) and data were tabulated on 8.0 Excel program. Comparison among genotype frequencies and alleles were performed through qui square test (2) and Odds Ratio with 95% confidence. Values of p<0,05 were considered statistically significant. From polymorphic variability evaluated on this Brazilian group, it was only observed a positive association between rs679620 on MMP-3 gene with cleft lip and palate and chronic apical periodontitis only when compared with chronic apical periodontitis group and without cleft lip and palate. A positive association was also found on rs522616 gene MMP-3 with chronic apical periodontitis and without cleft lip and palate, only when compared to control group. It was not found any positive association of the variability of MMP-2 (rs243865, rs2285053 e rs2287074) gene neither with chronic apical periodontitis nor with cleft lip and palate. Therefore, other studies are required to analyze other polymorphic variability on other genes involved on inflammation cascade of signaling and craniofacial embryology with more samples, to a better understanding of genetic influence not only on chronic apical periodontitis but also on cleft lip and/or palate

O objetivo deste trabalho foi comparar a eficácia da Tomografia Computadorizada Cone Beam e a Radiografia Periapical como métodos de proservação de lesões periapicais após o tratamento endodôntico. Foram avaliadas no estudo Radiografias e Tomografias de 1.462 indivíduos com fissura labiopalatina no Hospital de Reabilitação de Anomalias Craniofaciais Universidade de São Paulo, que compareceram para o tratamento endodôntico entre os anos 2009 e 2011. De acordo com os critérios de inclusão, foram selecionados 46 dentes unirradiculares com lesão periapical, os quais foram divididos nos grupos: avaliação Radiográfica (Grupo I) e avaliação Tomográfica (Grupo II). Os dados foram analisados por meio do escore PAI para as alterações periapicais encontradas. Nos resultados observou-se que houve diferença estatisticamente significativa nos grupos estudados. Em 34 casos os escores atribuídos às Tomografias dos dentes avaliados foram maiores do que os escores atribuídos às Radiografias Periapicais dos mesmos dentes avaliados, comprovando a maior precisão da Tomografia Computadorizada Cone Beam. Desta forma, a análise dos resultados obtidos neste trabalho permite constatar que a Tomografia Computadorizada Cone Beam é mais eficaz na proservação de lesões periapicais do que a Radiografia Periapical após o tratamento endodôntico em pacientes com fissura labiopalatina. / The aim of this study was to compare the effectiveness of Cone Beam Computed Tomography and periapical radiography as a follow-up method of periapical lesions after endodontic treatment. We evaluated in the study radiographs and tomography scans of 1,462 individuals with cleft lip and palate at the Hospital of Rehabilitation of Craniofacial Anomalies - University of Sao Paulo who came for treatment endodontic between the years 2009 and 2011. According to inclusion criteria were selected 46 single-rooted teeth with periapical lesions, which were divided into groups radiographic evaluation (Group I) and tomographic evaluation (Group II). Data were analyzed using the PAI score for periapical changes found. The results were observed that statistically significant differences in the groups studied. In 34 cases the CT scores attributed to the teeth evaluated were higher than the scores attributed to the radiographs of same teeth evaluated, demonstrating the greater precision of Cone Beam Computed Tomography. Thus, analysis of results obtained in this work demonstrates that the Cone Beam Computed Tomography is more effective in follow-up of periapical lesions than periapical radiography after endodontic treatment in patients with cleft lip and palate.

Considerando-se a necessidade da obturação tridimensional e o adequado selamento marginal do sistema de canais radiculares, como fatores decisivos para o êxito da terapia endodôntica, este estudo objetivou avaliar as respostas inflamatórias periapicais resultantes da infiltração coronária em dentes de cães obturados com diferentes cimentos resinosos (AH Plus®, RealSeal® e RealSeal SE®) e técnicas obturadoras (condensação lateral e termoplástica). Para tanto, pré-molares e incisivos centrais e laterais de 5 cães tiveram o tratamento endodôntico realizado empregando-se limas de NiTi e creme de Endo PTC associado ao hipoclorito de sódio a 1%, estabelecendo-se como limite de instrumentação à distância de 1mm a 1.5mm aquém do vértice radiográfico. A seguir os condutos foram obturados de acordo com os grupos experimentais (n=12) e grupos controles (n=10): GI- AH Plus/condensação lateral, GII- AH Plus/termoplástificação, GIIIRealSeal/ condensação lateral, GIV- RealSeal/ termoplástificação, GV- RealSeal SE/condensação lateral, GVI- RealSeal SE/ termoplástificação, Grupo controle positivo e Grupo controle negativo. As cavidades coronárias ficaram expostas ao meio bucal por um período de 75 dias e, passado este período experimental, os cães foram eutanásiados por superdosagem de anestésico. Foi realizada a remoção cirúrgica das partes correspondentes aos pré-molares e incisivos da maxila e da mandíbula, fixação das mesmas em solução de formol a 10% por 72h e desmineralização em solução de ácido fórmico a 20% + citrato de sódio a 10% pelo período mínimo de 90 dias. Posteriormente, realizou-se a rotina histológica com cortes seriados com espessura de 6m e estes foram corados com hematoxilina e eosina (HE). Cada corte histológico foi digitalizado e analisado em relação à existência de patologia periapical por três avaliadores independentes. Os dados obtidos foram confrontados estatisticamente utilizando o teste de Kruskal-Wallis seguido do teste comparativo de Dunn, observando-se que em relação às técnicas, a termoplástificação por ondas contínuas de condensação associada à técnica de injeção mostrou melhores condições periapicais quando comparada à técnica de condensação lateral (p=0.0055), sendo que a utilização desta técnica resultou em reações inflamatórias mais intensas para o cimento RealSeal SE (p=0.002). Em relação aos cimentos avaliados, o RealSeal SE mostrou-se menos eficaz em evitar a percolação, produzindo maiores níveis de inflamação crônica independentemente do sistema de obturação (p=0.0088). / Considering the need for three-dimensional obturations and adequate marginal sealing of the radicular canal system as being decisive factors for successful endodontic therapy, this study had as its objective the evaluation of periapical inflammatory responses resulting from coronary infiltration in dog\'s teeth obturated using different resin sealers (AH Plus, RealSeal and RealSeal SE) and different obturation techniques (lateral condensation and thermoplastic). For this study, premolars, central and lateral incisors from five dogs had endodontic treatment employing NiTi files and Endo PTC cream associated with 1% sodium hypochlorite. The working length was established at a distance of 1.0 to 1.5mm short of the radiographic apex. After this, the teeth were obturated according to their experimental groups (n=12) and control groups (n=10). The groups were defined as follows: GI - AH Plus/lateral condensation, GII - AH Plus/thermoplastic, GIII - RealSeal/lateral condensation, GIV - RealSeal/thermoplastic, GV - RealSeal SE/lateral condensation, GVI - RealSeal SE/ thermoplastic, a positive control group and a negative control group. The coronal access were left exposed to the oral environment for a period of seventy-five days, and after this experimental period, the dogs were euthanized by anesthetic overdose. The parts corresponding to the premolars and the maxilar incisors were surgically removed. These were then submitted to a solution of 10% formol for 72 hours and then demineralized in a solution of 20% formic acid and 10% sodium citrate for a minimum period of ninety days. Before hand, a histological routine of serial cuts having a width of 6m was undertaken and these were colored with hematoxilin and eosin (HE). Each histological cut was digitalized and analyzed with respect to the existence of periapical inflammation by three independent evaluators. The data obtained was statistically compared, firstly using the Kruskal-Wallis test and then the comparative Dunn test, where it was noted that in relation to the techniques, thermoplastification by continuous wave of condensation associated with the injection technique showed better periapical conditions than what was seen for the lateral condensation technique (p=0.0055). On the other hand, for the sealers evaluated, the condensation technique resulted in more intense inflammatory reactions when the sealer RealSeal SE was used (p=0.002). In relation to the sealers evaluated, RealSeal SE was seen to be less effective against percolation, thus producing greater levels of chronic inflammation irrespective of the obturation system employed (p=0.0088).

Este estudo identificou a presença e a viabilidade de Streptococcus spp., Propionibacterium acnes e Enterococcus faecalis antes e após os procedimentos endodônticos, utilizando o método de reação de cadeia de polimerase (PCR) baseado em RNA ribossômico (rRNA) e seus respectivos genes (rDNA). Foram coletadas amostras de 20 dentes com infecção primária antes (S1) e após o preparo químico-cirúrgico (S2), e depois do emprego do Ca(OH)2 como medicação intracanal (S3). DNA e RNA foram extraídos da mesma amostra de canal radicular e utilizados como moldes para reação de PCR com iniciadores específicos para a região 16S rRNA das espécies analisadas. Streptococcus espécies foram detectados em 20% e 25% das amostras S1 utilizando os métodos baseados em rRNA e rDNA, respectivamente; enquanto P. acnes foi detectado apenas pela análise de rRNA, estando presente em 10% das amostras S1. Após o preparo químico-cirúrgico, Streptococcus spp. foram detectado em 10% das amostras S2 quando se utilizou rDNA, porém não foi detectado pelo método baseado em rRNA, indicando ausência de células viáveis. Por outro lado, P. acnes foi detectado por ambos os métodos nas amostras S2, com prevalência de 10% e 5% quando se utilizou rRNA e rDNA como molde para PCR, respectivamente. Nas amostras S3, P. acnes foi a única espécie detectada nos ensaios baseados em rRNA, presente em 10% dos casos, enquanto o método baseado em rDNA falhou em detectar essa espécie. Por sua vez, E. faecalis não foi detectado em nenhuma amostra pelos métodos utilizados. Portanto, concluise que a suscetibilidade bacteriana aos procedimentos endodônticos varia entre as espécies Gram-positivas. Enquanto Streptococcus spp. foram suscetíveis, P. acnes persistiu ativo em canais radiculares após o preparo químico-cirúrgico e medicação intracanal. Esses dados sugerem que há necessidade de novas estratégias para a eliminação de espécies resisitentes ao tratamento endodôntico. / This study identified the presence and viability of Streptococcus spp., Enterococcus faecalis and Propionibacterium acnes before and after endodontic procedures, using the polymerase chain reaction (PCR) based on ribosomal RNA (rRNA) and their genes (rDNA ). Samples of 20 teeth with primary infection were collected before (S1) and after chemical-surgical preparation (S2), and after Ca(OH)2 as temporary dressing (S3). DNA and RNA were extracted from the same root canal sample and used as templates for PCR with specific primers for 16S rRNA region of the analyzed species. Streptococcus species were detected in 20% and 25% of the S1 samples using methods based on rRNA and rDNA, respectively; while P. acnes was only detected by analysis of rRNA, present in 10% of the samples S1. After chemicalsurgical preparation, Streptococcus spp. were detected in 10% of S2 samples when using rDNA as template, but they were not detected by the method based on rRNA, indicating the absence of viable cells. Furthermore, P. acnes was detected by both methods in samples S2, with a prevalence of 10% and 5% when using as template rRNA and rDNA for PCR, respectively. In S3 samples, P. acnes was the only species detected in assays based on rRNA, present in 10% of cases, while the rDNA-based method failed to detect this species. E. faecalis was not detected in any sample by the methods used. Therefore, it is concluded that bacterial susceptibility to endodontic procedures may vary among Gram-positive species. While Streptococcus spp. were susceptible, P. acnes persisted active in root canals after chemicalsurgical preparation and dressing. These data suggest the need for new strategies to eliminate resisitant species to endodontic treatment.

Este trabalho teve o objetivo de avaliar a capacidade da bactéria Enterococcus faecalis em induzir periodontite apical no modelo experimental canino; verificar se o preparo químico-mecânico afeta a sobrevivência dessa bactéria no sistema de canais radiculares e avaliar o reparo desses dentes por meio de radiografia periapical e tomografia computadorizada cone beam. Dentes com e sem tratamento endodôntico foram avaliados por meio de microscopia confocal de varredura a laser. Para tal, foram utilizados 2 cães. A bactéria Enterococcus faecalis foi inoculada nos canais de 4 pré-molares superiores, 11 prémolares inferiores e 9 incisivos superiores. As câmaras pulpares foram seladas e, após 60 dias, os canais das raízes distais dos pré-molares e de 7 incisivos superiores foram submetidos a tratamento endodôntico em sessão única e os canais das raízes mesiais dos pré-molares e 2 incisivos superiores foram deixados sem tratamento (controle). Amostras microbiológicas foram feitas antes e após o preparo químico-mecânico. O reparo foi avaliado após 6 meses do tratamento mediante radiografias periapicais e por tomografia computadorizada cone beam. A comparação entre as imagens obtidas após o período experimental pelos 2 métodos foi feita por medições da área em mm2 de cada lesão encontrada, utilizando o software ImageTool Os resultados mostraram que a presença de periodontite apical crônica foi verificada em todos os dentes inoculados, independentemente da colonização pela bactéria Enterococcus faecalis ou pela flora mista. O preparo químico-mecânico reduziu significativamente o número de bactérias no interior dos canais radiculares (p<0.05). Os resultados radiográficos e tomográficos demonstraram lesões de menor diâmetro nos dentes tratados endodonticamente em comparação ao grupo controle (p<0.05). A comparação entre os métodos demonstrou diferença estatística entre eles sendo evidenciada áreas radiolúcidas maiores utilizando a tomografia cone beam em comparação com a radiografia periapical (p<0.05). Concluiu-se que a bactéria Enterococcus faecalis induziu periodontite apical crônica similarmente à flora mista; o tratamento endodôntico reduziu o número de bactérias cultiváveis significativamente embora sem relação com o reparo radiográfico. Os dentes tratados em sessão única apresentavam lesões menores em comparação aos não-tratados e as áreas das lesões observadas na TC cone beam foram maiores do que as áreas encontradas nas radiografias periapicais. A microscopia confocal e o método proposto neste estudo se mostraram eficazes para determinar, qualitativamente, a viabilidade bacteriana e a distribuição de ácidos nucléicos bacterianos dentro dos túbulos dentinários. Houve diferença entre a dentina infectada in vitro com o padrão de infecção in vivo, caracterizada pela presença de biofilmes aderidos à parede do canal radicular. / The aims of this study were to evaluate the Enterococcus faecalis ability to induce apical periodontitis in dogs root canals, to verify the bacterias ability to survive to the cleaning and shaping procedures and to assess the healing of the induced apical periodontitis by periapical radiograph and cone beam computed tomography. Also, endodontically treated and non-treated teeth were evaluated by confocal laser scanning microscope. Two mongrel dogs were used in the experiment. Enterococcus faecalis strain was inoculated into the root canals of 4 maxillary premolars, 11 mandibular premolars and 9 maxillary incisors. After 60 days the root canals of the distal roots of the mandibular and maxillary pre-molars and 7 maxillary incisors were endodontically treated. The premolars mesial root canal and 2 maxillary incisors were used as control (no treatment). Microbiologic samples were done after and before the cleaning and shaping procedure. The healing was evaluated after 6 months by periapical radiographs and cone beam computed tomography. The comparison between obtained images after the experimental period by the two methods was done using measures of the lesion area in mm2 with ImageTool software. The results showed the presence of chronic apical periodontitis in every inoculated teeth, with Enterococcus faecalis or mixed infection. The cleaning and shaping procedures reduced the number of bacteria of the root canals (p<0.05). The radiographic and tomographic results showed the lower diameter lesion in endodontically treated teeth than in the control group (p<0.05). The comparison between the methods showed statistical difference and greater radiolucent areas were evident in cone beam computed tomography images (p<0.05). It is possible to conclude that the bacteria Enterococcus faecalis induced chronic apical periodontitis as well as the mixed microflora; the endodontic treatment reduced the number of cultivable bacteria in a significant way, but with no relation to the radiographic healing. The treated teeth in only one session presented smaller lesions in comparison to the non-treated teeth and the lesions area in cone beam computed tomography were bigger than the areas found in periapical radiograph. The confocal microscopy and the proposed method of this study showed to be efficient to determine the bacterial ability and the distribution of bacterial nucleic acids inside the dentin tubules. There was difference between in vitro infected dentin with the in vivo infection pattern, which presents biofilm attached to the root canal walls.

Protocolos complementares de desinfecção estão sendo investigados com o objetivo de promover uma maior redução de bactérias viáveis após o preparo químico-cirúrgico dos canais radiculares. Este estudo clínico randomizado comparou o efeito da ativação ultrassônica da pasta de hidróxido de cálcio com o da pasta não ativada na redução da atividade metabólica de bactérias nos canais radiculares. Vinte pacientes com necrose pulpar e periodontite apical assintomática foram alocados de forma randomizada em dois grupos de acordo com o protocolo de medicação intracanal: Grupo UA - ativação ultrassônica da pasta de hidróxido de cálcio (n=10) e Grupo NA - não ativação da pasta (n=10). Amostras microbiológicas dos canais radiculares foram coletadas após os procedimentos de: cirurgia de acesso (S1), preparo químico-cirúrgico (S2), irrigação ultrassônica passiva (PUI) (S3) e medicação intracanal entre sessões com pasta de hidróxido de cálcio, com ou sem ativação ultrassônica (S4). As amostras endodônticas foram submetidas à extração de DNA e RNA. O RNA foi submetido à reação de transcrição reversa para confecção de DNA complementar (cDNA). O efeito dos procedimentos endodônticos na redução bacteriana foi determinado por qPCR baseada em rDNA, utilizando iniciadores universais para a região 16S rRNA do domínio Bacteria. A atividade metabólica das bactérias foi calculada pela razão rRNA/rDNA baseados nos dados dos ensaios de qPCR. Bactérias foram consideradas metabolicamente ativas quando a razão era maior ou igual a 1. A análise intragrupo foi realizada pelos testes de Wilcoxon e Q de Cochran; enquanto a análise entre os grupos foi realizada pelos testes de Mann-Whitney e Exato de Fisher (P < 0,05). As amostras S1 apresentaram uma mediana de 2,38 x 106 e 1,60 x 105 cópias de rDNA nos grupos UA e NA, respectivamente. Após o preparo químico-cirúrgico houve uma redução significativa de rDNA bacteriano nos dois grupos (UA: 2,14 x 103; NA: 7,48 x 103; P < 0,01 para ambos). Porém, 80% e 90% dos casos permaneceram com bactérias metabolicamente ativas após o preparo químico-cirúrgico nos grupos UA e NA, respectivamente. A PUI contribuiu para a redução do número de canais com bactérias ativas nos dois grupos (UA: 60%; NA: 50%). No grupo UA, esse número caiu para 30% após o protocolo da medicação intracanal com ativação ultrassônica, com uma diferença significativa entre S1 e S4 (P < 0,05). Por outro lado, no grupo NA, 60% dos canais continham bactérias metabolicamente ativas. A análise entre os grupos revelou uma diferença significativa entre os protocolos de medicação intracanal quanto ao metabolismo bacteriano em S4 (P < 0,05). Concluiu-se que a ativação ultrassônica da pasta de hidróxido de cálcio foi mais efetiva do que a pasta não ativada em reduzir o metabolismo bacteriano. / Complementary disinfection protocols have been investigated with the objective of promoting a greater reduction of viable bacteria after the chemical-surgical preparation of the root canals. This randomized clinical study compared the effect of the ultrasonic activation of the calcium hydroxide paste with an nonactivated paste in reducing the metabolic activity of bacteria in the root canals. Twenty patients with pulp necrosis and asymptomatic apical periodontitis were randomized into two groups according to the intracanal medication protocol: UA group - ultrasonic activation of calcium hydroxide paste (n = 10) and NA group - no activated paste (n = 10). Microbiological samples of the root canals were collected following the procedures of: access (S1), chemical-surgical preparation (S2), passive ultrasonic irrigation (PUI) (S3) and intracanal medication with calcium hydroxide paste, with or without activation (S4). The endodontic samples were submitted to DNA and RNA extraction. RNA was subjected to the reverse transcription reaction to make complementary DNA (cDNA). The effect of endodontic procedures on bacterial reduction was determined by rDNA-based qPCR using universal primers for the 16S rRNA region of the Bacteria domain. The metabolic activity of the bacteria was calculated by the rRNA/rDNA ratio based on qPCR assay data. Bacteria were considered to be metabolically active when the ratio was positive (greater than or equal to 1). Intragroup analysis was performed by the Wilcoxon and Cochran`s Q testes; while the analysis between the groups was performed by the Mann-Whitney test and Fisher\'s exact test (P <0.05). Samples S1 presented a median of 2.38 x 106 and 1.60 x 105 copies of rDNA in the UA and NA groups, respectively. After the chemical-surgical preparation, there was a significant reduction of bacterial rDNA in both groups (UA: 2.14 x 103, NA: 7.48 x 103, P <0.01 for both). However, 80% and 90% of the cases remained with metabolically active bacteria after the chemical-surgical preparation in the UA and NA groups, respectively. PUI contributed to the reduction of the number of canals with active bacteria in both groups (UA: 60%, NA: 50%). In the UA group, this number dropped to 30%, with a significant difference between S1 and S4 (P <0.05). Analysis between the groups revealed a significant difference between intracanal medication protocols for bacterial metabolism in S4 (P <0.05). It was concluded that the ultrasonic activation of the calcium hydroxide paste was more effective than the nonactivated paste in reducing the bacterial metabolism.

O objetivo deste estudo foi avaliar a taxa de detecção, quantidade e atividade metabólica de Propionibacterium acnes, antes e após os procedimentos endodônticos de desinfecção, utilizando métodos moleculares baseados em rRNA e rDNA. Foram selecionados 22 pacientes com necrose pulpar e periodontite apical assintomática. Amostras microbiológicas foram coletadas dos canais radiculares após a cirurgia de acesso (S1), após o preparo químico-cirúrgico realizado com Sistema Reciproc e NaClO- 2,5% (S2) e após medicação intracanal com Ca(OH)2 por 14 dias (S3). As amostras dos canais radiculares foram submetidas à extração de DNA e RNA. O RNA foi submetido à reação de transcrição reversa (RT) para confecção de DNA complementar (cDNA). DNA e cDNA foram submetidos a reações de qPCR utilizando iniciadores complementares à sequência de 16S rRNA de P. acnes. O efeito dos procedimentos endodônticos na redução bacteriana foi determinado por qPCR baseada em rDNA. A atividade metabólica bacteriana foi calculada pela razão rRNA/rDNA baseados nos dados dos ensaios de qPCR. Os dados foram analisados pelo teste de Wilcoxon para análise entre as amostras e teste de McNemar para comparação da taxa de detecção dos métodos baseados em rDNA e rRNA, com nível de significância de 5%. A taxa de detecção de P. acnes nas amostras endodônticas foi maior pelo método baseado em rRNA do que pelo método baseado em rDNA (P < 0,0001). P. acnes foi detectado em 36,4% (8/22) e 90,9% (20/22) das amostras S1 utilizando qPCR baseado em rDNA e rRNA, respectivamente. Nas amostras S2, P. acnes foi detectado em 36,4% (8/22) das amostras utilizando o método baseado em rDNA e em 86,4% (19/22) pelo método baseado em rRNA. Nas amostras S3, P. acnes persistiu em níveis detectáveis em todas as amostras positivas em S2. Na análise quantitativa, o nível médio de P. acnes foi 1,28 x 103 cópias de rDNA nas amostras S1. Não houve uma alteração significante dos níveis bacterianos nas amostras S2 e S3 quando comparadas às amostras S1 (P > 0,05). O número de cópias de rRNA foi maior do que o de rDNA em todas as amostras (P < 0,0001). Em S1, o valor mediano da razão rRNA/rDNA foi 7,93 (intervalo de 2,03 a 2,04 x 102). Essa razão permaneceu positiva em S2 (mediana 16,40, intervalo de 2,21 a 4,87 x 102) e S3 (mediana 25,34, intervalo de 0,58 a 1,05 x 103), sem diferença estatística na comparação entre as amostras S1-S2 e S2-S3 (ambos P > 0,05). Baseados nesses achados, concluiu-se que o ensaio de qPCR baseado em rRNA revelou uma alta prevalência de P. acnes nas infecções endodônticas primárias e que este permaneceu metabolicamente ativo nos canais radiculares após o preparo químico-cirúrgico e medicação intracanal. / This study aimed to evaluate the detection rate, quantity and metabolic activity of Propionibacterium acnes before and after endodontic disinfection procedures using RNA- and DNA-based molecular methods. Twenty-two patients with pulp necrosis and asymptomatic apical periodontitis were selected. The microbiological samples were collected from the root canals after access cavity (S1), after the chemo-mechanical preparation performed with the Reciproc System and NaClO- 2.5% (S2) and after intracanal medication with Ca(OH)2 for 14 days (S3). The root canal samples were submitted to DNA and RNA extraction. Complementary DNA (cDNA) was synthetized using the reverse transcription reaction. cDNA and genomic DNA were subjected to qPCR with primers complementary for P. acnes 16S rRNA sequence. The effect of endodontic procedures on bacterial reduction was determined by rDNA-based qPCR. The bacterial metabolic activity was calculate by the rRNA / rDNA ratio based on qPCR assays. Data were analysed by the Wilcoxon test for analysis between samples and McNemar test for detection rate of RNA- and DNA-based molecular methods, with a significance level of 5%. The detection rate of P. acnes in endodontic samples was higher by the rRNA-based method than by the rDNA-based method (P < 0.0001). P. acnes was detected in 36.4% (8/22) e 90.9% (20/22) of the S1 samples using on rDNA- and rRNA- based qPCR, respectively. In S2 samples, P. acnes was detected in 36.4% (8/22) of the samples using the rDNA based method and 86.4% (19/22) by the rRNA based method. In S3 samples, detectable levels of P. acnes persisted in all S2-positive samples. Quantitative analysis of S1 samples revealed that the mean level of P. acnes was 1.28 x 103 rDNA copies per sample. There was no significant change in bacterial levels in S2 and S3 samples when compared to S1 samples (P> 0.05). The number of rRNA copies was greater than the rDNA ones in all samples (P < 0.0001). In S1, the median value of the rRNA / rDNA ratio was 7.93 (range: 2.03 - 2,04 x 102). This ratio remained positive in S2 samples (median 16.40, range: 2.21 - 4.87 x 102) and in S3 (median 25.34, range: 0.58 - 1.05 x 103), with no statistical difference in the comparisons between S1-S2 and S2-S3 samples (both P> 0.05). Based on these findings, it was concluded that the rRNA-based qPCR assay revealed a high prevalence of P. acnes in primary endodontic infections and that it remained metabolically active in the root canals after chemical-surgical preparation and intracanal medication.