Pesquisas recentes investigando o receptor ativado por protease do tipo 2 (PAR-2) sugerem uma associação entre este receptor e a inflamação periodontal. Além disso, é sabido que a gingipaína, protease bacteriana secretada por um importante periodontopatógeno, Porphyromonas gingivalis (Pg), tem a capacidade de ativar o PAR-2. Ademais, um estudo anterior do grupo, verificou que quanto mais profunda a bolsa periodontal, maior era a expressão do receptor PAR-2. No entanto, não é sabido se a expressão de PAR-2 é proporcional a severidade de doença periodontal e a quantidade de gingipaína expressa na bolsa periodontal. Desta forma, o presente estudo, verificou no fluido gengival a correlação entre a expressão gênica de PAR-2 (Real Time-PCR) com os parâmetros clínicos periodontais, e a expressão gênica da protease gingipaína em pacientes com periodontite crônica severa e moderada, antes e após o tratamento periodontal não-cirúrgico. A expressão de PAR-2 e da protease gingipaína foi estatisticamente maior nos pacientes do grupo periodontite crônica severa (PS) em comparação com os pacientes do grupo periodontite crônica modera (PM) e controle (C). Além disso, o tratamento periodontal levou à redução significativa (p<0.05) da expressão de PAR-2 nos pacientes com periodontite crônica moderada. Em conclusão, dentro dos limites do presente estudo, nós demonstramos que a severidade da doença periodontal e a expressão de gingipaína influenciaram a expressão de PAR-2 no fluido gengival de pacientes com periodontite crônica. / Recent studies investigating the protease-activated receptor type 2 (PAR-2) suggest an association between the receptor and periodontal inflammation. In addition, it is known that gingipain, a bacterial protease secreted by an important periodontopathogen, Porphyromonas gingivalis (Pg), has the ability to activate PAR- 2. Furthermore, a previous study from our group found that the deeper the periodontal pocket, the higher the expression of the PAR-2 receptor. However, it is not known whether the expression of PAR-2 is associated to the severity of periodontal disease and the amount of gingipain expressed in the periodontal pocket. Thus, the present study verified, in the gingival fluid, the correlation between the PAR-2 gene expression (Real Time-PCR) with the clinical periodontal parameters, and the gene expression of the gingipain protease in patients with moderate and severe chronic periodontitis before and after non-surgical periodontal treatment. PAR-2 expression and gingipain protease were statistically more expressed in patients of the severe chronic periodontitis group (PS) compared with those in the moderate chronic periodontitis group (PM) and control group (C). Furthermore, periodontal treatment led to a significant reduction (p <0.05) in the expression of PAR-2 in patients with moderate chronic periodontitis. In conclusion, within the limits of the present study, we demonstrated that the severity of periodontal disease and the expression of gingipain influenced the PAR-2 expression in the gingival fluid of patients with chronic periodontitis.

O receptor ativado por protease do tipo 1 (PAR1) parece estar associado ao reparo periodontal, enquanto o tipo 2 (PAR2) com a inflamação periodontal. Esses receptores podem ser ativados pelas proteases gingipaina, uma protease secretada pela Porphyromonas gingivalis, um importante periodontopatógeno, e pela proteinase-3 de neutrófilos (P3), que é liberada por neutrófilos quando expostos a um estímulo inflamatório. Uma vez que o diabetes é reconhecido como um fator de risco importante para a doença periodontal, o objetivo deste estudo foi investigar a expressão de PAR1 e de PAR2 e de seus ativadores, gingipaina e P3 no fluido gengival (FG) de pacientes diabéticos com periodontite crônica, antes e após tratamento periodontal não cirúrgico. Amostras de FG e os parâmetros clínicos, como profundidade de sondagem (PS), nível clínico de inserção (NCI), sangramento à sondagem (SS) e índice de placa (IP) foram coletados de pacientes sistemicamente saudáveis e de pacientes com diabetes mellitus do tipo 2 (DMT2) com periodontite crônica , no baseline e após o tratamento periodontal não cirúrgico. As expressões gênicas de PAR1, PAR2, gingipaina e P3 no FG foram quantificadas por qPCR. Os parâmetros clínicos melhoraram significativamente após a terapia periodontal (p <0,01). O diabetes levou ao aumento da expressão de PAR1 no fluido gengival e na presença da periodontite crônica diminuiu significativamente a expressão de PAR1, PAR2 e P3 (p<0,05). Além disso, o tratamento periodontal não cirúrgico em diabéticos resultou no aumento da expressão de PAR1 e de PAR2 (p<0,05). Dentro dos limites do presente estudo, sugerimos que os PARs podem estar associados com a inflamação periodontal em diabéticos. / Protease activated receptor type 1 (PAR1) seems to play a role in periodontal repair, while PAR2 is associated with periodontal inflammation. These receptors can be activated by gingipain, a protease released from Porphyromonas gingivalis, an important periodontal pathogen, and neutrophil proteinase-3 (P3), which is released by neutrophils when exposed to an inflammatory stimulus. Since diabetes is known risk factor to periodontal disease, the aim of this study was to investigate PAR1 and PAR2 mRNA expression at the gingival crevicular fluid (GCF) in diabetic patients with chronic periodontitis, before and after non-surgical periodontal treatment. GCF samples and clinical parameters consisting of measuring probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), bleeding on probing (BOP) and plaque index (PI) were collected from systemically healthy patients and patients with type 2 diabetes mellitus with chronic periodontitis, at baseline and after nonsurgical periodontal treatment. PAR1 and PAR2, as well the expression of the activators gingipain and P3 at the GCF were quantified by qPCR. The clinical parameters improved significantly after periodontal therapy (p <0.01). Diabetes led to increased expression of PAR1 in the GCF, and the presence of chronic periodontitis significantly decreased the expression of PAR1, PAR2 and P3 (p <0.05). Moreover, non-surgical periodontal treatment in diabetics resulted in increased expression of PAR1 and PAR2 (p <0.05). Within the limits of this study, we suggest that PARs may be associated with periodontal inflammation in diabetics.

Hoje em dia existe um consenso de que a prevenção e o tratamento de doenças periodontais são importantes na redução de mortalidade e morbidade associadas à doença cardíaca, e uma correlação entre aterosclerose e doença periodontal ainda é desconhecida. Neste estudo, a presença de Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Fusobacterium nucleatum, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Campylobacter rectus e Enterococcus faecalis em placas de ateroma de artérias coronárias foram detectadas. Trinta pacientes programados para endarterectomia, 28 pacientes com periodontite crônica e 2 sem doença periodontal foram incluídos no estudo. DNA bacteriano foram extraídos dos ateromas e a presença de bactérias periodontais foram detectadas através da reação em cadeia da polimerase. DNA bacteriano periodontal foi encontrado em 28 amostras de ateroma de pacientes periodontais: P. gingivalis em 14 (50%); P. nigrescens em 4 (14,3%), P. intermedia em 3 (10,7%); E. faecalis em 3 (10,7%), T. forsythia em 2 (7,1%); A. actinomycetemcomitans em 2 (7,1%); C. rectus em 2 (7,1%); T. denticola em 1 (3,6%); e P. endodontalis em 1 (3,6%). Fusobacterium nucleatum não foi encontrado em nenhuma das amostras analisadas. Em duas amostras de ateroma de pacientes sem doença periodontal, P. gingivalis e E. faecalis foram observadas em uma amostra e P. intermedia em ambas as amostras. Nossos resultados sugerem que a presença de P. gingivalis em ateroma de artérias coronárias pode apresentar um envolvimento com aterosclerose e parecendo ser um microrganismo da relação aterosclerose e periodontite crônica. / Nowadays there is a consensus that prevention and treatment of periodontal diseases are important in the reduction of mortality and morbidity associated to cardiovascular diseases, and a correlation between atherosclerosis and periodontal disease is still unclear. In this study, the presence of Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Fusobacterium nucleatum, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Campylobacter rectus and Enterococcus faecalis in atheroma plaques from coronary arteries was determined. Thirty patients scheduled for endarterectomy, 28 patients with chronic periodontitis and 2 without periodontal diseases were included in this study. Bacterial DNA was extracted from atheroma and periodontal bacteria detection was done by polymerase chain reaction. Periodontal bacterial DNA was found in 28 atheroma samples from periodontal patients: P. gingivalis in 14 (50%); P. nigrescens in 4 (14.3%); P. intermedia in 3 (10.7%); E. faecalis in 3 (10.7%), T. forsythia in 2 (7.1%); A. actinomycetemcomitans in 2 (7.1%); C. rectus in 2 (7.1%); T. denticola in 1 (3.6%); and P. endodontalis in 1 (3.6%) samples. Fusobacterium nucleatum was not detected in any atheroma analyzed. In two atheroma samples from patients without periodontal disease, P. gingivalis and E. faecalis were observed in one sample and P. intermedia in both samples. Our results suggest that the presence of P. gingivalis in atheroma from coronary arteries may be involved in atherosclerosis, and it appears to be a relationship microorganism atherosclerosis and chronic periodontitis.

A periodontite crônica (PC) é uma doença infecciosa resultando em inflamação das estruturas de suporte dos dentes, perda progressiva de inserção e perda óssea. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) como adjuvante ao tratamento periodontal cirúrgico (TPC) em pacientes diagnosticados com periodontite crônica avançada generalizada (PCAG). Em um modelo tipo boca divida, 20 pacientes com diagnóstico clinico de PCAG receberam inicialmente preparo básico periodontal não cirúrgico com sessões periódicas de raspagem a alisamento radicular (RAR). Depois disso, os sítios com indicação de terapia cirúrgica foram tratados com TFDa associada a raspagem e alisamento radicular (RAR) a retalho ou apenas RAR a retalho. Para protocolo da TFDa, foi utilizada uma fonte de luz laser 660nm de comprimento de onda associada ao fotossentitizador fenotiazida. Todos os pacientes foram acompanhados por mais 90 dias após a terapia cirúrgica. Nos períodos baseline, pós-terapia básica e 90 dias após a terapia cirúrgica foi realizada a avaliação clinica de índice de placa, profundidade de sondagem (PS), nível de inserção clinico relativo e sangramento a sondagem, além da coleta de amostras de biofilme subgengival para a identificac ao e quantificac ao das especies bacterianas atraves da tecnica de Checkerboard DNA-DNA Hybridization. Foi observado redução significante na PS no grupo teste. A utilização da TFDa demonstrou ser superior na redução de patógenos periodontais, principalmente na bactéria do complexo vermellho: T. denticola. Ambos tratamentos foram eficientes no controle da PCAG, porém a TFDa parece possuir maior estabilidade no controle dos parâmetros clinicos e microbiológicos. / Chronic periodontitis (CP) is an infectious disease resulting in inflammation of the teeth support structures, progressive insertion loss and bone loss. The aim of this study was to evaluate the effects of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) as an adjunct to surgical periodontal treatment (SPT) in patients diagnosed with generalized severe chronic periodontitis (SCP). In one kind mouth Split model, 20 patients with clinical diagnosis of SCP initially received nonsurgical periodontal basic preparation with regular sessions of scaling the root planing (SRP). After that, the sites with indication for surgical treatment were treated with aPDT associated with scaling and root planing (SRP) flap or just SRP flap. For aPDT protocol was used a source of laser light of 660nm wavelength associated with phenothiazine photosensitizer. All patients were followed up for 90 days after surgical therapy. In the baseline period, post basic treatment and 90 days after surgical therapy was performed the clinical evaluation of plaque index, probing depth (PD), level of clinical insertion relative and bleeding on probing, in addition to collecting biofilm samples for the identification and quantification of bacterial species using the technique of checkerboard DNA-DNA hybridization. All treatments resulted in clinical improvement. There was significant reduction in PD in the test group. Use of aPDT demonstrated to increase reducing periodontal pathogens, especially bacteria in red complex: Treponema denticola. Both treatments were effective in controlling the SCP, however aPDT seems to have greater stability in the control of clinical and microbiological parameters.

A doença periodontal é uma doença infecciosa na qual em resposta à microbiota subgengival, o hospedeiro libera uma série de citocinas inflamatórias que levam à degradação dos tecidos periodontais. Esses mediadores não se restringem ao nível gengival e disseminam-se pelo organismo, causando impacto na saúde sistêmica. Atualmente, tem sido sugerido que a inflamação associada ao câncer é similar àquela vista em inflamações crônicas. Citocinas dentro de processos neoplásicos podem atuar na resposta imune antitumoral ou estimular o desenvolvimento do câncer. Desta forma, este trabalho objetivou caracterizar o perfil inflamatório apresentado por pacientes portadoras de câncer de mama com e sem periodontite crônica, avaliando os parâmetros clínicos periodontais (índice de placa IP, sangramento à sondagem SS, profundidade de sondagem PS, nível clínico de inserção NCI) e ao dosar as citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, TNF-&alpha;, IFN-y, TGF-&beta; e IL-1&beta; em fluido crevicular gengival (FCG). Para isso, foram selecionadas 90 mulheres voluntárias, alocadas em 4 grupos: saudáveis (SAU) (n=20), doença periodontal (DP) (n=20), câncer de mama (CAN) (n=25) e câncer de mama com DP (CAN-DP) (n=25). As concentrações das citocinas foram determinadas pela metodologia LUMINEX. Além disso, foram realizados exames laboratoriais como proteína C-reativa, glicemia em jejum, triglicérides, colesterol total, colesterol LDL e HDL e leucograma em amostras de sangue periférico. Todos dados foram estatisticamente analisados. Os grupos DP e CAN-DP apresentaram maiores valores de IP, SS, PS e NCI (p<0,05). Entre os quatro grupos, não houve diferença significativa nos exames hematológicos (p>0,05), exceto o grupo DP que apresentou níveis de neutrófilos mais elevados que os grupos SAU, CAN e CAN-DP (p<0,05). Não houve diferença estatística nos níveis de IL-2, IL-4, TNF-&alpha;, IFN-y e IL-10 entre os quatro grupos (p>0,05). O grupo DP apresentou significantes níveis de IL-17 e TGF-&beta;, IL-6 e IL-1&beta; em relação ao grupo SAU (p<0,05). No grupo CAN-DP, níveis IL-17 e TGF-&beta; foram estatisticamente maiores do que no grupo CAN (p<0,05). As citocinas IL-6 e IL-1&beta; também estavam mais elevado no CAN-DP, porém sem diferença em relação ao grupo CAN (p>0,05). Mulheres com câncer de mama e doença periodontal apresentaram um perfil de citocinas com características pró-inflamatórias, evidenciado pela significante expressão do perfil Th17/IL-17. Além disso, o perfil Treg (TGF-&beta;) também estava aumentado. A combinação Th17/IL-17 e Treg (TGF-&beta;) pode ter impacto nas atividades pró-tumorigênicas no microambiente tumoral. Diante disso, a doença periodontal comportou-se como um fonte de mediadores inflamatórios relacionados com imunopatogênese do câncer de mama. / Periodontal disease is an infectious disease which in response to subgingival microbiota, the host releases a number of inflammatory cytokines that lead to degradation of periodontal tissues. These mediators are not restricted to the gingival level, and spread on blood, causing systemic health impact. Currently, it has been suggested that inflammation associated with cancer is similar to those seen in chronic inflammation. Cytokines in neoplastic processes may act in anti-tumor immune response or stimulate cancer development. Thus, this study aimed to characterize the inflammatory profile presented by patients with breast cancer with and without chronic periodontitis, evaluating the clinical periodontal parameters (plaque index - PI, bleeding on probing - BOP, probing depth - PD, clinical attachment level - CAL) and dose cytokines IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, TNF-&alpha;, IFN-y, TGF-&beta; and IL-1&beta; in gingival crevicular fluid (GCF). Ninety volunteers women were selected, divided into 4 groups: healthy (H) (n=20), chronic periodontitis (CP) (n=20), breast cancer (BC) (n=25) and breast cancer with CP (BC-CP) (n=25). Concentrations of cytokines were determined by Luminex method. In addition, laboratory tests were performed as C-reactive protein, fasting blood glucose, triglycerides, total cholesterol, LDL and HDL cholesterol and white blood cell count in peripheral blood samples. All data were statistically analyzed. CP and BC-CP groups had higher values PI, BOP, PD, and CAL (p<0.05). Among four groups, there was no significant difference in blood tests (p>0.05), except the PC group that showed higher levels of neutrophils than H, BC, BC-CP groups (p<0.05). There was no statistical difference in IL-2 levels, IL-4, TNF-&alpha;, IFN-y- and IL-10 among the four groups (p>0.05). CP group showed significant levels of IL-17 and TGF&beta;, IL-6 and IL-1&beta; compared to H group (p<0.05). In CAN-PD group, IL-17 and TGF-&beta; levels were significantly higher than the CAN group (p<0.05). IL-6 and IL-1&beta; cytokines were also higher in CAN-DP, but without difference compared to the CAN group (p>0.05). Women with breast cancer and periodontal disease showed a pro-inflammatory profile of cytokines, as evidenced by significant expression profile Th17/IL-17. Furthermore, Treg profile (TGF-&beta;) was also increased. Th17/Treg and IL-17 (TGF-&beta;) in combination may have an impact on pro-tumorigenic activities in the tumor microenvironment. Therefore, periodontal disease behaved as a source of inflammatory mediators related to breast cancer immunopathogenesis.

A periodontite é causada por bactérias patogênicas, podendo ser tratada com sucesso por meio de procedimentos que incluem instruções de higiene oral, eliminação de fatores retentivos de biofilme, raspagem e alisamento radicular (RAR), combinados ou não com cirurgias periodontais. A literatura tem relatado que os pacientes fumantes apresentam uma resposta inferior ao tratamento periodontal convencional, cirúrgico ou não, quando comparados aos pacientes não-fumantes. Assim, justifica-se a avaliação de terapias complementares aos procedimentos convencionais de raspagem e alisamento radicular (RAR) nesses pacientes. Estudos in vitro e in vivo têm demonstrado o potencial da terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) contra as bactérias periodontopatogênicas. Desta forma, o presente estudo visou analisar a ação complementar da TFDa à RAR em pacientes fumantes portadores de periodontite crônica. Foram selecionados 20 pacientes fumantes com periodontite crônica, apresentando um par de dentes contralaterais com sangramento à sondagem e profundidade de sondagem maior ou igual a 5 mm. Cada par de dentes foi aleatoriamente dividido em grupo controle (GC), no qual foi realizada a RAR e em grupo teste (GT), no qual além da RAR foi realizada a TFDa, em aplicação única. Parâmetros clínicos de índice de placa (IP), sangramento à sondagem (SS), profundidade de sondagem (PS), nível clínico de inserção relativo (NCI), recessão gengival (RG) foram registrados no exame inicial, 4 e 12 semanas após o tratamento periodontal. Além disso, no exame inicial e 1, 4 e 12 semanas após o tratamento periodontal foram coletadas amostras de biofilme subgengival para a identificação e quantificação das espécies bacterianas através da técnica de Checkerboard DNA-DNA Hybridization e também de fluido crevicular gengival (FCG) para a quantificação da Interleucina-1 beta (IL-1&beta;) e Metaloproteinase 8 (MMP-8) por meio do teste ELISA. Houve uma redução estatisticamente significante na PS (GT: 1,81±0,52 mm / GC: 1,58±1,28 mm; p<0,001) e um ganho estatisticamente significante no NCI (GT: 1,60±0,92 mm/GC: 1,41±1,58 mm; p<0,001) para ambos os grupos. Diferenças estatisticamente significantes não foram observadas nas comparações entre os grupos. A concentração de IL-1&beta; no FCG foi maior no GC no exame realizado 1 semana após o tratamento periodontal (GT: 24,65±18,85 pg/&mu;L / GC-34,07±24,81 pg/&mu;L; p=0,048) e a concentração de MMP-8 foi maior também no GC 12 semanas após o tratamento periodontal (GT: 303,31±331,62 pg/&mu;L / CG: 534,23±647,37 pg/&mu;L; p=0,024). Não houve diferenças estatisticamente significantes na análise intragrupos. As 40 espécies bacterianas avaliadas foram detectadas em diferentes níveis no exame inicial, sem diferenças estatisticamente significantes entre os grupos. Após o tratamento periodontal, o nível de algumas bactérias diminuiu enquanto outras espécies apresentaram um aumento. Apesar dessa variação, a análise estatística não foi capaz de identificar diferenças estatisticamente significantes nas comparações intra e intergrupos. Assim, este estudo não foi capaz de demonstrar que o efeito adjunto da TFDa (em aplicação única) associada à RAR melhora os parâmetros clínicos em pacientes fumantes. Contudo, a TFDa foi capaz de reduzir significativamente a concentração de IL-1&beta; (no exame de uma semana) e MMP-8 (no exame de 12 semanas), sugerindo uma possível vantagem na cicatrização periodontal. Isso não foi confirmado, no entanto, pela analise microbiológica, que mostrou que nenhum dos tratamentos reduziu significamente os níveis bacterianos. / Periodontitis is caused by pathogenic bacteria and it can be successfully treated by procedures that include oral hygiene instructions, elimination of plaque retentive factors and scaling and root planing (SRP) alone or in combination with periodontal surgery. The literature has reported that smokers present a poorer response to conventional periodontal treatment when compared with nonsmoking patients. Thus, it is appropriate to evaluate adjunctive therapies to conventional treatment of scaling and root planing (SRP) in these patients. In vitro and in vivo studies have demonstrated the potential of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) against periodontopathic bacteria. Thus, this study aimed to analyze the adjunctive action of aPDT to SRP in smokers with chronic periodontitis. We selected 20 smokers with chronic periodontitis, presenting a pair of contralateral teeth with bleeding on probing and probing depth greater than or equal to 5 mm. Each pair of teeth was randomly alocated on control group (CG), in which SRP was performed, and on test group (TG), in which PDT was performed in addition to SRP. Clinical parameters of plaque index (PI), bleeding on probing (BOP), probing depth (PD), relative clinical attachment level (CAL), gingival recession (GR) were recorded at the baseline and 4 and 12 weeks after periodontal treatment. Moreover, at baseline and 1, 4 and 12 weeks after periodontal treatment, subgingival plaque samples were collected for identification and quantification of periodontopathic bacteria using Checkerboard DNA-DNA hybridization technique, as well as gingival crevicular fluid (GCF) samples for quantification of Interleukin-1 beta (IL-1&beta;) and metalloproteinase 8 (MMP-8) using ELISA. There was a statistically significant reduction in PD (GT-1.81 ± 0.52 mm / GC-1.58 ± 1.28 mm, p <0.001) and a statistically significant gain in CAL (GT-1.60 ± 0, 92 mm / GC-1.41 ± 1.58 mm, p <0.001) for both groups. Statistically significant differences were not observed in comparisons between groups. The concentration of IL-1&beta; in GCF was higher in GC in the examinations performed 1 week after periodontal treatment (GT-24, 65 ± 18.85 pg / &mu;L / GC-34, 07 ± 24.81 pg / &mu;L, p = 0.048) and MMP-8 was also higher in GC 12 weeks after periodontal treatment (GT-303, 31 ± 331.62 pg / &mu;L / CG-534, 23 ± 647.37 pg / &mu;L, p = 0.024). There was no statistically significant differences in the intra-groups analyses. The 40 bacterial species tested were detected at different levels at baseline, with no statistically significant differences between groups. After periodontal treatment, the level of some bacterial species had decreased while others presented an increasing. Despite this variation, statistical analysis was not able to identify statistically significant differences in comparisons within and between groups. Thus, the present study failed to demonstrate that the adjunctive effect of a single episode of aPDT to SRP improves clinical parameters in smokers. However, it resulted in a significantly suppression of IL-1&beta; and of MMP-8, suggesting an advantage on periodontal healing. This has not been confirmed, on the other hand, by the microbiological analysis, which showed that none of the treatments was able to significantly reduce the bacteria levels

Pesquisas recentes investigando o receptor ativado por protease do tipo 2 (PAR-2) sugerem uma associação entre este receptor e a inflamação periodontal. Além disso, é sabido que a gingipaína, protease bacteriana secretada por um importante periodontopatógeno, Porphyromonas gingivalis (Pg), tem a capacidade de ativar o PAR-2. Ademais, um estudo anterior do grupo, verificou que quanto mais profunda a bolsa periodontal, maior era a expressão do receptor PAR-2. No entanto, não é sabido se a expressão de PAR-2 é proporcional a severidade de doença periodontal e a quantidade de gingipaína expressa na bolsa periodontal. Desta forma, o presente estudo, verificou no fluido gengival a correlação entre a expressão gênica de PAR-2 (Real Time-PCR) com os parâmetros clínicos periodontais, e a expressão gênica da protease gingipaína em pacientes com periodontite crônica severa e moderada, antes e após o tratamento periodontal não-cirúrgico. A expressão de PAR-2 e da protease gingipaína foi estatisticamente maior nos pacientes do grupo periodontite crônica severa (PS) em comparação com os pacientes do grupo periodontite crônica modera (PM) e controle (C). Além disso, o tratamento periodontal levou à redução significativa (p<0.05) da expressão de PAR-2 nos pacientes com periodontite crônica moderada. Em conclusão, dentro dos limites do presente estudo, nós demonstramos que a severidade da doença periodontal e a expressão de gingipaína influenciaram a expressão de PAR-2 no fluido gengival de pacientes com periodontite crônica. / Recent studies investigating the protease-activated receptor type 2 (PAR-2) suggest an association between the receptor and periodontal inflammation. In addition, it is known that gingipain, a bacterial protease secreted by an important periodontopathogen, Porphyromonas gingivalis (Pg), has the ability to activate PAR- 2. Furthermore, a previous study from our group found that the deeper the periodontal pocket, the higher the expression of the PAR-2 receptor. However, it is not known whether the expression of PAR-2 is associated to the severity of periodontal disease and the amount of gingipain expressed in the periodontal pocket. Thus, the present study verified, in the gingival fluid, the correlation between the PAR-2 gene expression (Real Time-PCR) with the clinical periodontal parameters, and the gene expression of the gingipain protease in patients with moderate and severe chronic periodontitis before and after non-surgical periodontal treatment. PAR-2 expression and gingipain protease were statistically more expressed in patients of the severe chronic periodontitis group (PS) compared with those in the moderate chronic periodontitis group (PM) and control group (C). Furthermore, periodontal treatment led to a significant reduction (p <0.05) in the expression of PAR-2 in patients with moderate chronic periodontitis. In conclusion, within the limits of the present study, we demonstrated that the severity of periodontal disease and the expression of gingipain influenced the PAR-2 expression in the gingival fluid of patients with chronic periodontitis.

O receptor ativado por protease do tipo 1 (PAR1) parece estar associado ao reparo periodontal, enquanto o tipo 2 (PAR2) com a inflamação periodontal. Esses receptores podem ser ativados pelas proteases gingipaina, uma protease secretada pela Porphyromonas gingivalis, um importante periodontopatógeno, e pela proteinase-3 de neutrófilos (P3), que é liberada por neutrófilos quando expostos a um estímulo inflamatório. Uma vez que o diabetes é reconhecido como um fator de risco importante para a doença periodontal, o objetivo deste estudo foi investigar a expressão de PAR1 e de PAR2 e de seus ativadores, gingipaina e P3 no fluido gengival (FG) de pacientes diabéticos com periodontite crônica, antes e após tratamento periodontal não cirúrgico. Amostras de FG e os parâmetros clínicos, como profundidade de sondagem (PS), nível clínico de inserção (NCI), sangramento à sondagem (SS) e índice de placa (IP) foram coletados de pacientes sistemicamente saudáveis e de pacientes com diabetes mellitus do tipo 2 (DMT2) com periodontite crônica , no baseline e após o tratamento periodontal não cirúrgico. As expressões gênicas de PAR1, PAR2, gingipaina e P3 no FG foram quantificadas por qPCR. Os parâmetros clínicos melhoraram significativamente após a terapia periodontal (p <0,01). O diabetes levou ao aumento da expressão de PAR1 no fluido gengival e na presença da periodontite crônica diminuiu significativamente a expressão de PAR1, PAR2 e P3 (p<0,05). Além disso, o tratamento periodontal não cirúrgico em diabéticos resultou no aumento da expressão de PAR1 e de PAR2 (p<0,05). Dentro dos limites do presente estudo, sugerimos que os PARs podem estar associados com a inflamação periodontal em diabéticos. / Protease activated receptor type 1 (PAR1) seems to play a role in periodontal repair, while PAR2 is associated with periodontal inflammation. These receptors can be activated by gingipain, a protease released from Porphyromonas gingivalis, an important periodontal pathogen, and neutrophil proteinase-3 (P3), which is released by neutrophils when exposed to an inflammatory stimulus. Since diabetes is known risk factor to periodontal disease, the aim of this study was to investigate PAR1 and PAR2 mRNA expression at the gingival crevicular fluid (GCF) in diabetic patients with chronic periodontitis, before and after non-surgical periodontal treatment. GCF samples and clinical parameters consisting of measuring probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), bleeding on probing (BOP) and plaque index (PI) were collected from systemically healthy patients and patients with type 2 diabetes mellitus with chronic periodontitis, at baseline and after nonsurgical periodontal treatment. PAR1 and PAR2, as well the expression of the activators gingipain and P3 at the GCF were quantified by qPCR. The clinical parameters improved significantly after periodontal therapy (p <0.01). Diabetes led to increased expression of PAR1 in the GCF, and the presence of chronic periodontitis significantly decreased the expression of PAR1, PAR2 and P3 (p <0.05). Moreover, non-surgical periodontal treatment in diabetics resulted in increased expression of PAR1 and PAR2 (p <0.05). Within the limits of this study, we suggest that PARs may be associated with periodontal inflammation in diabetics.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-09-15T16:06:05Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Soraya Castro Trindade.pdf: 1012276 bytes, checksum: e039010222f6877bd5937655b190d8e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T16:06:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Soraya Castro Trindade.pdf: 1012276 bytes, checksum: e039010222f6877bd5937655b190d8e2 (MD5) / A periodontite é uma doença inflamatória bucal causada por agentes multifatoriais intrínsecos e extrínsecos, incluindo bactérias Gram-negativas, como Porphyromonas gingivalis. Este estudo foi realizado para avaliar os níveis séricos de IgA, IgG e subclasses de IgG reativos a Porphyromonas gingivalis ATCC33277. Foram examinados 89 pacientes, divididos em quatro grupos: 29 com periodontite crônica (PC), 12 com periodontite agressiva (PA), 22 com gengivite ou periodontite leve (GP), e 26 com periosonto clinicamente sadio (PS). A resposta imune humoral foi avaliada por testes de ELISA, para verificar os níveis séricos de IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 e IgA reativos ao extrato sonicado bruto de P. gingivalis ATCC 33277 e à fração IV obtida por cromatografia. Os níveis de IgA, IgG (p<0,01), IgG2, IgG3 and IgG4 à fração IV foram maiores no grupo PC que no grupo SP. O grupo PC apresentou níveis mais altos de IgG and IgG4 reativas a ambos os antígenos que o grupo GP e níveis mais altos de IgG and IgG4 reativas ao extrato sonicado bruto que o grupo PA. Foram encontradas diferenças estatisticamente significantes nos níveis de IgG reativa às duas preparações de Pg (p<0,01), IgG2 reativa à fração IV (p<0,01), IgG3 reativa à fração IV (p<0,05) e IgG4 reativa ao extrato bruto e à fração IV (p<0,05) entre os grupos PA e SP. Os níveis de IgG1 ao extrato sonicado bruto foram maiores no grupo GP que no grupo AP (p<0,05). Os resultados sugerem que o ELISA indireto para a detecção de IgG total e IgG4 reativas aos dois antígenos e IgG3 reativa à fração IV permitiram as melhores condições de discriminação entre os grupos, com a IgG4 reativa à fração IV apresentando o melhor desempenho. A produção de anticorpos na periodontite agressiva não apresentou um padrão definido em relação aos isotipos estudados.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-14T17:42:57Z No. of bitstreams: 1 TESE PAULO CIRINO.pdf: 7207721 bytes, checksum: ef397ea71a14afb1814dc8df4c501c60 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-03-23T12:45:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE PAULO CIRINO.pdf: 7207721 bytes, checksum: ef397ea71a14afb1814dc8df4c501c60 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T12:45:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE PAULO CIRINO.pdf: 7207721 bytes, checksum: ef397ea71a14afb1814dc8df4c501c60 (MD5) / CAPES / A periodontite é uma doença multifatorial, com participação significativa do hospedeiro, fatores ambientais e bacterianos. Sua fase inicial é resultante de uma microbiota multiespécie sinérgica e disbiótica, onde patógenos conhecidos como patógenos-chave possuem efeitos em toda comunidade e são componentes críticos no desenvolvimento do processo disbiótico. Nesta categoria encontra-se Porphyromonas gingivalis, um bacilo gram-negativo anaeróbico, associado as formas crônicas generalizadas da doença. A resposta do hospedeiro durante a periodontite é complexa, com elementos da imunidade inata e adaptativa que levam à inflamação crônica e destruição progressiva dos tecidos periodontais de suporte. O presente estudo objetivou avaliar a produção de citocinas e o perfil de expressão gênica em cultura de Células Mononucleares de Sangue Periférico (CMSP) de indivíduos com periodontite crônica, frente à proteína recombinante HmuY (rHmuY) de Porphyromonas gingivalis. As células de 46 voluntários, 26 sem periodontite (SP) e 20 com periodontite crônica (PC), foram cultivadas in vitro na ausência de estimulação antigênica e sob estímulos de Pokeweed e de rHmuY por 48 horas. Após o cultivo celular, foi realizado o ensaio imunoenzimático ELISA para avaliar a produção das citocinas IL-1beta, IL-4, IL-10 e IL-18 por CMSP nos sobrenadantes de cultura. Ainda, foi utilizado o arranjo de PCR em tempo real customizado para avaliar a expressão de mRNA de genes relacionados à apoptose, citocinas, quimiocinas e receptores, além de proteínas de choque térmico, fatores de transcrição e inibidor de transcrição. Não foram encontradas diferenças entre os grupos SP e PC na produção de IL-4 e IL- 1beta por CMSP estimuladas com rHmuY. Níveis mais elevados de IL-18 foram significativamente induzidos por HmuY e na ausência de estimulação em células do grupo PC. Os níveis de IL-10 foram reduzidos no grupo PC nas células estimuladas com HmuY e houve uma tendência para significância estatística para níveis baixos desta citocina nas células não estimuladas do grupo PC. A expressão de mRNA para CCL2 aumentou significativamente em CMSP sob estímulo HmuY e o mRNA para NFKBIL1 diminuiu significativamente nestas células sob o mesmo estímulo no grupo PC. Entretanto, houve uma tendência para significância estatística para níveis baixos de expressão de mRNA para IL-10 e IL-18 em CMSP em PC. Em comparação com os controles SP, os pacientes do grupo PC apresentaram baixos níveis de expressão de genes relacionados a apoptose (FAS, FAS-LG, TNFSF10 (TRAIL), BAK1, CASP9 e APAF1) quando as CMSP foram estimuladas com HmuY. Ainda, as células de pacientes do grupo PC apresentaram baixos níveis de expressão do gene CASP7 quando as células não foram estimuladas. Nossos achados sugerem que HmuY de Porphyromonas gingivalis pode ter um papel importante na modulação das vias intrínseca e extrínseca de apoptose e que esta proteína estimula resposta inflamatória no hospedeiro. / Periodontitis is a multifactorial disease, with significant participation of the host, environmental factors and bacterial. Its early stage results from a synergistic and disbiotic multispecies microorganisms where known as “keystone” have effects throughout the community and are critical components in the development of disbiotic process. This category is Porphyromonas gingivalis, an anaerobic gram-negative bacilli associated chronic generalized forms of the disease. The host response during periodontitis is complex with components of the innate and adaptive immune system that lead to chronic inflammation and progressive destruction of periodontal tissue support. This study aimed to evaluate the production of cytokines and the profile of gene expression in culture of Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC) of patients with chronic periodontitis, under stimulation of Porphyromonas gingivalis recombinant protein HmuY (rHmuY). The cells of 46 volunteers, 26 non-periodontitis (NP) and 20 chronic periodontitis (CP) were cultured in vitro in the absence of antigenic stimulation and under Pokeweed and rHmuY stimuli for 48 hours. After cell culture, the enzyme immunoassay ELISA was conducted to evaluate the production of cytokines IL-1b, IL-4, IL-10 and IL-18 by PBMC in culture supernatants. Further, PCR was used arrangement in real time customized to evaluate the mRNA expression of apoptosis related genes, cytokines, chemokines and receptors, and heat shock proteins, transcription factors and transcription inhibitor. No differences were found between the NP and CP groups in IL-4 and IL-1beta by PBMC stimulated with rHmuY. Higher levels of IL-18 were significantly induced HmuY in the absence of stimulation in cells of CP group. IL-10 levels were reduced in CP group in cells stimulated with HmuY and there was a trend towards statistical significance for low levels of this cytokine in unstimulated cells CP group. The expression of mRNA for CCL2 increased significantly in PBMC under HmuY stimulus and the mRNA for NFKBIL1 decreased significantly in these cells under the same stimulus in the CP group. However, there was a borderline significance for low levels of mRNA expression for IL-10 and IL-18 in PBMC of CP. Compared to the NP controls, patients in the CP group had low gene expression levels related apoptosis (FAS, FAS-LG, TNFSF10 (TRAIL), BAK1, CASP9 and APAF1) when PBMC were stimulated with HmuY. Further, cells in the CP group patients showed low levels of expression of the gene CASP7 when the cells were not stimulated. Our findings suggest that HmuY of Porphyromonas gingivalis can play an important role in the modulation of intrinsic and extrinsic pathways of apoptosis and that this protein stimulates inflammatory response in the host.