Patients on peritoneal dialysis (PD) are reliant on the peritoneum to provide a semi-permeable barrier to allow for dialysis (solute clearance), salt and water removal (ultrafiltration). PD patients are at risk of developing peritoneal fibrosis and angiogenesis which can lead to a decline in peritoneal membrane function. Specifically, PD patients develop increased solute transport and decreased osmotic conductance leading to ultrafiltration failure. Peritoneal angiogenesis is the leading factor that results in augmented peritoneal membrane solute transport which is associated with worse outcomes – increased risk of mortality and PD technique failure. Transforming growth factor beta (TGFB) is one of the primary cytokines involved in inducing epithelial to mesenchymal transition (EMT) and fibrosis. We hypothesize that PD leads to injury of the epithelial lining of the peritoneum – the mesothelial cells. These cells undergo a transition process and transitioned mesothelium are a source for angiogenic and fibrogenic growth factors. Matrix Metalloproteinase (MMP) 9 is an angiogeneic factor and has been observed to correlate with increased expression of vascular endothelial growth factor (VEGF). MMP9 has the ability to cleave and activate membrane bound factors such as E-cadherin and b-catenin respectively. There is substantial evidence that the canonical WNT/b-catenin pathway is active during fibrosis, and angiogenesis in different biological contexts. Thus, we investigated the role of MMP9 and WNT signaling in peritoneal angiogenesis. Limited evidence exists describing the role of noncanonical WNT signaling but some reports suggest that non-canonical WNT signaling inhibits WNT/b-catenin signaling. Non-canonical WNT5A has differential effects based on receptor context and has been shown to block WNT/b-catenin signaling in the presence of Receptor Tyrosine Kinase Like Orphan Receptor 2 (Ror2). The overall hypothesis of this PhD thesis is that MMP9 and WNT signaling play a key role in inducing peritoneal angiogenesis and are associated with changes in peritoneal membrane function. We expect WNT5A and Ror2 to protect against peritoneal membrane injury. From the overnight effluent of stable PD patients, we cultured mesothelial cells and assayed these for expression of MMP and WNT related genes. MMP9 and WNT1 gene expression were observed to be strongly correlated with peritoneal membrane solute transport in patients on PD. WNT2 mRNA was also positively correlated with peritoneal solute transport. We overexpressed MMP9 in the mouse peritoneum to demonstrate its role in angiogenesis and confirmed these findings using MMP9 -/- mice. In addition to this, we have shown a novel mechanism by which MMP9 induces angiogenesis by E-cadherin cleavage and b-catenin mediated signaling. The observed cross-talk between MMP9 and b-catenin prompted investigation of the activation of canonical WNT/b-catenin signaling in development of peritoneal membrane injury. In an experimental model of TGFB induced pertioneal injury, we confirmed the activation of WNT/b-catenin signaling. In addition to this we, we blocked the WNT pathway and observed that WNT/b-catenin signaling is required to induce peritoneal angiogenesis. WNT5A mRNA was downregulated during TGFB induced injury suggesting a more protective role. Furthermore, several studies have demonstrated its ability to antagonize the WNT/b-catenin signaling pathway. We demonstrated that WNT5A protected against angiogenesis by blocking the canonical WNT pathway. WNT5A is thought to antagonize the WNT/b-catenin signaling pathway by signaling through receptor Ror2. In cell culture, we overexpressed TGFB and blocked Ror2. This resulted in elevated levels of VEGF and fibronectin suggesting that Ror2 is involved in mediating protection. Therefore, Ror2 possesses the ability to regulate VEGF and may be a potential candidate by which WNT5A mediates its protective effects. In conclusion, our findings identified MMP9 and WNT1 as potential biomarkers of increased peritoneal solute transport in patients that are on PD. We have also found a novel mechanism by which MMP9 interacts with b-catenin to induce peritoneal angiogenesis and have provided a first look at WNT/b-catenin signaling in peritoneal angiogenesis. Lastly, we have shown WNT5A to protect against peritoneal angiogenesis. Taken together, our findings are not only significant to the realm of PD research but hold wide applicability to research in the biomedical sciences. / Thesis / Doctor of Philosophy (PhD)

Bakgrund: Kronisk njursvikt är en diagnos som kräver livslång behandling. Peritonealdialys är en form av behandling som patienter sköter självständigt i hemmet och är en komplex vård. För att sjuksköterskan ska kunna ge god omvårdnad till denna patientgrupp är det viktigt att sjuksköterskan har förståelse för patienternas upplevelse av att leva med peritonealdialys behandling.Syfte: Syftet var att beskriva patienters upplevelser av att leva med peritonealdialys behandling.Metod: En allmän litteraturöversikt med en induktiv ansats som genomfördes med stöd av 11 resultatartiklar. Resultat: Ur resultatet framkom två huvudkategorier: erfarenhet av egenvård och inverkan på det vardagliga livet.Konklusion: Peritonealdialys behandling leder till en livsomvälvande omställning i livet för individen som drabbas av kronisk njursvikt. Ansvaret över sin hälsa blir en livsstil som behöver anpassas efter behandlingen. Genom dessa erfarenheter kan resultatet bidra till en ökad inblick och förståelse för hur vården kan anpassas för dessa patienter. / Background: Chronic kidney failure is a diagnosis that requires lifelong treatment. Peritoneal dialysis is a form of treatment that patients manage independently at home and is a complex treatment. In order for the nurse to be able to provide good care to this patient group, it is important that the nurse has an understanding of the patients' experience of living with peritoneal dialysis treatment.  Purpose: The purpose was to describe patients' experiences of living with peritoneal dialysis treatment.  Method: A general literature review with an inductive approach was carried out with the support of 11 results articles.  Results: Two main categories emerged from the results: experience of selfcare and impact on everyday life.  Conclusion: Peritoneal dialysis treatment leads to a life-changing adjustment in the life of the individual who suffers from chronic kidney failure. Responsibility for one's health and treatment becomes a lifestyle that needs to be adapted to the care. Through these experiences, the results can contribute to an increased insight and understanding of how care can be adapted for these patients.

La maladie rénale chronique (MRC) induit des anomalies du métabolisme phosphocalcique, avec des conséquences à la fois osseuses, vasculaires et biologiques. La prise en charge optimale de ces désordres représente un challenge quotidien pour le néphrologue pédiatre, à la fois sur le court terme (équilibre biologique) et sur le long terme (prévention des fractures, optimisation de la croissance et limitation de l’apparition des calcifications vasculaires). Peu d’outils sont actuellement disponibles pour évaluer ces atteintes, et de nouveaux outils prometteurs, à la fois biologiques (FGF23) et radiologiques (HR-pQCT) apparaissent. Néanmoins, les données pédiatriques sur ces outils restent rares. Cette thèse de doctorat a permis d’évaluer ces nouveaux moyens chez ces enfants MRC, notamment en évaluant l’HR-pQCT dans cette population, et en déterminant des valeurs de référence du FGF23 en fonction de l’âge, du sexe et de la fonction rénale. Nous avons pu aussi montrer que les concentrations circulantes de FGF23 ne sont pas dépendantes du sexe dans une population pédiatrique, mais qu’elles augmentent avec l’âge et l’indice de masse corporelle, mais aussi en cas d’antécédent de transplantation d’organe solide ou de traitement par corticostéroïdes. D’un point de vue plus fondamental, nous avons pu montrer que dans des monocytes issus de donneurs sains, une exposition au FGF23 induit une diminution de l’expression des 2 enzymes principales impliquées dans le métabolisme de la vitamine D (1α hydroxylase et 24 hydroxylase), en induisant également une diminution du peptide antimicrobien cathélicidine. Ces résultats permettent donc de décrire un nouveau rôle pour le FGF23 dans la régulation de l’immunité innée / Chronic kidney disease can induce mineral and bone disorders (CKD-MBD), with deleterious consequences for bone and vessels. The management of such abnormalities can be challenging, from the daily biological balance between calcium, phosphorus and PTH levels, to the long-term prevention of morbidities such as fractures, growth impairment and vascular calcifications. Some tools can help to accurately assess CKD-MBD, e.g., new bone imaging techniques (HR-pQCT) and FGF23, but they are rarely used in pediatric populations. In addition to evaluating HR-pQCT in CKD children and healthy controls, this PhD thesis allowed us to determine reference values for circulating FGF23 levels depending on age, gender and renal function; we also showed that FGF23 levels increased not only with age and BMI, but also in cases of solid organ transplant or corticosteroids therapy. We have also showed in vitro that FGF23 could inhibit the two key enzymes of vitamin D metabolism (1α hydroxylase et 24 hydroxylase) in monocytes issued from healthy donors, with in turn a decreased synthesis of the antimicrobial cathelicidin. These later results highlight a new role for FGF23 in innate immunity, and may bring new insights in the understanding of FGF23 deregulation during CKD

O carvedilol é um fármaco utilizado na terapêutica da hipertensão e da insuficiência cardíaca congestiva. É disponível para uso clínico como racemato e seus enantiômeros apresentam atividade semelhante sobre os receptores 1-adrenérgicos, sendo que o enantiômero S-(-) é mais ativo como antagonista dos receptores adrenérgicos. O presente estudo visa investigar a influência do Diabetes mellitus (DM) tipo 2 e da insuficiência renal crônica (IRC) em pacientes em diálise peritoneal ambulatorial contínua (DPAC) na farmacocinética enantiosseletiva e na farmacodinâmica do carvedilol em pacientes hipertensos. Os pacientes hipertensos investigados divididos nos grupos controle (n=8), DM tipo 2 (n=8) e IRC em DPAC (n=6) receberam dose única p.o. de 25 mg de carvedilol racêmico. Os enantiômeros do carvedilol e metabólitos 4-hidroxifenil e O-desmetilcarvedilol foram analisados no sistema LC-MS/MS empregando coluna quiral e fase móvel constituída por mistura de metanol: ácido acético: dietilamina. O método foi linear no intervalo de concentrações de 0,1-100 ng de cada enantiômero do carvedilol/mL de líquido de diálise, 0,2-200 ng de cada enantiômero do carvedilol/mL de plasma, 2,5-2500 ng de cada enantiômero do carvedilol, 4-hidroxifenil e O-desmetilcarvedilol/mL de urina. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados empregando o programa WinNonlin. O teste de Wilcoxon foi usado para avaliar as razões enantioméricas dentro dos grupos e o teste de Mann-Whitney foi utilizado para avaliar as diferença dos parâmetros farmacocinéticos entre os grupos. Na investigação do fenótipo oxidativo tipo metoprolol todos os pacientes incluídos no estudo foram fenotipados como metabolizadores extensivos. Os pacientes investigados com DM tipo 2 comparados com o grupo controle não apresentaram alterações na farmacocinética e farmacodinâmica (PK-PD) do carvedilol. Os pacientes com IRC em DPAC apresentaram valores de clearance (CL/F) dos enantiômeros R-(+) - e S-(-)-carvedilol de 25,17 e 27,89 L/h, respectivamente, sendo significativamente inferiores aos obtidos para os pacientes do grupo controle (76,76 e 142,0 L/h). As razões de AUCR/S foram de 2,27 para os pacientes do grupo controle e de 0,97 para os pacientes com IRC em DPAC. Os pacientes com IRC em DPAC não mostraram enantiosseletividade na farmacocinética do carvedilol em razão do acúmulo plasmático preferencial do enantiômero com atividade -bloqueadora S-(-)-carvedilol. / Carvedilol is used for the treatment of hypertension and congestive heart failure. The drug is available for clinical use as the racemate and its enantiomers exert similar activity on 1-adrenergic receptors, whereas the S-(-) enantiomer is more active as a -adrenergic receptor antagonist. The aim of the present study was to investigate the influence of type 2 Diabetes mellitus (DM) and chronic renal failure (CRF) on patients receiving continuous ambulatory peritoneal dialysis (CAPD) on the enantioselective pharmacokinetics and pharmacodynamics of carvedilol in hypertensive patients. The hypertensive patients were divided into a control (n=8), type 2 DM (n=8) and CRF on CAPD (n=6) group and received a single oral dose of 25 mg racemic carvedilol. The enantiomers of carvedilol and of the metabolites 4-hydroxyphenyl and O-desmethylcarvedilol were analyzed by LC-MS/MS using a chiral column and a mobile phase consisting of a mixture of methanol:acetic acid-diethylamine. The method was linear within the following concentration ranges: 0.1-100 ng of each carvedilol enantiomer/mL dialysis fluid, 0.2-200 ng of each carvedilol enantiomer/mL plasma, and 2.5-2500 ng of each enantiomer of carvedilol, 4-hydroxyphenyl carvedilol and O-desmethyl carvedilol/mL urine. The pharmacokinetic parameters were calculated using the WinNonlin program. Enantiomer ratios within groups were evaluated by the Wilcoxon test and the Mann-Whitney test was used to determine differences in the pharmacokinetic parameters between groups. Determination of the metoprolol type oxidation phenotype showed that all patients included in the study were extensive metabolizers. Patients with type 2 DM presented no changes in the pharmacokinetics or pharmacodynamics of carvedilol when compared to the control group. Clearance (CL/F) of the R-(+)- and S-(-)-carvedilol enantiomers was significantly lower in patients with CRF on CAPD (25.17 and 27.89 L/h, respectively) compared to the control group (76.76 and 142.0 L/h). The AUCR/S ratios were 2.27 for control patients and 0.97 for patients with CRF on CAPD. Patients with CRF on CAPD showed no enantioselectivity in the pharmacokinetics of carvedilol due to the preferential plasma accumulation of the enantiomer with -blocker activity, S-(-)-carvedilol.

Introdução: Diálise peritoneal (DP) é modalidade de terapia renal substitutiva útil em crianças em estágio final de doença renal. O estado nutricional e o crescimento são considerados como marcadores prognósticos na adequação em diálise pediátrica, que dependem da sua prescrição, do controle da volemia e pressão arterial e do manejo dos distúrbios metabólicos e eletrolíticos. Objetivo: Descrever a prescrição da DP e parâmetros de adequação dos pacientes seguidos na Unidade de Nefrologia Pediátrica do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP; analisar os resultados hemodinâmicos e antropométricos iniciais e finais; comparar os parâmetros observados na adequação da DP com aqueles sugeridos pela literatura em DP Crônica pediátrica. Métodos: Análise retrospectiva baseada na avaliação de prontuário durante o período entre janeiro de 1998 e maio de 2005, incluindo pacientes em DP por mais de 6 meses. Dados antropométricos, pressão arterial sistêmica, volume de infusão, pressão intra-abdominal (PIA), Teste do Equilíbrio Peritoneal (PET) e Kt/V semanal de uréia e mudanças de prescrição dialítica peritoneal foram analisadas. Resultados: foram analisados dados de 30 pacientes pediátricos, 17/30 (56,7%) sexo masculino. Uropatia foi a etiologia de doença renal crônica em 66,7% dos pacientes. A membrana peritoneal foi caracterizada como alto transportador em 5/18 pacientes, médio/alto transportador em 9/18 pacientes, médio/baixo transportador em 1/18 pacientes e baixo transportador em 3/18 pacientes. O Kt/V de uréia semanal foi > 2,1 em todos os pacientes em que este índice foi coletado. Pressão arterial sistêmica acima do p95 foi observada em 5/30 pacientes. Quatro dos cinco pacientes com hipertensão arterial apresentavam glomerulopatia como etiologia de doença renal crônica. O índice de massa corpórea e o índice de peso para estatura iniciais e finais foram preservados na maioria dos pacientes. Conclusão: Manejo clínico ótimo parece ser mais importante para adequação de DP pediátrica que índices de adequação baseados em estimativa de remoção de pequenos solutos. / I ntroduction: Peritoneal dialysis (PD) is an useful modality of renal replacement therapy in pediatric end-stage renal disease. Growth and nutritional state are considered outcome markers of adequacy in pediatric dialysis, which depends on the dialysis prescription, volume and blood pressure control and management of metabolic and electrolyte disorders. Objective: To describe the PD prescription and adequacy parameters of patients followed by the Pediatric Nephrology Unit of \"Instituto da Criança\" of \"Hospital das Clínicas\" of University of São Paulo; to analyze initial and final anthropometric and hemodynamic results; to compare the observed PD adequacy parameters with those suggested by the pediatric chronic PD literature. Methods: Retrospective analysis based on patients\' files evaluation covering the period between January 1998 and May 2005 and including patients on PD for more than 6 months. Data on anthropometry, systemic blood pressure, infusion volume, intraperitoneal pressure (IPP), peritoneal equilibration test (PET), weekly Kt/V urea and changes in peritoneal dialysis prescription were analyzed. Results: Data from 30 pediatric patients were analyzed, 17/30 (56,7%) boys. Uropathy was the etiology of chronic renal disease in 66,7% patients. The infusion volume was > 1000 ml/m2 in 9 patients. The peritoneal membrane was characterized as a high transporter in 5/18 patients, high/average transporter in 9/18 patients, low/average transporter in 1/18 patients and low transporter in 3/18 patients. The weekly Kt/V urea was >2,1 in all patients for whom this parameter was collected. Systemic blood pressure was above p95 in 5/30 despite antihypertensive medication. Four of 5 patients with high blood pressure had chronic renal failure related to glomerulopathy. The initial and final body mass index and weight to height index were preserved in most of the patients. Conclusion: Optimal clinical management seems to be more important for pediatric PD adequacy than adequacy indexes based on estimation of small solute removal.

Em pacientes submetidos à diálise peritoneal (DP), alterações morfofuncionais da membrana peritoneal (MP) ocorrem de forma progressiva ao longo dos anos. Estas alterações caracterizam-se, morfologicamente, por perda da camada mesotelial, inflamação, neoangiogênese e fibrose peritoneal (FP) e, funcionalmente, pela queda na ultrafiltração. Tais alterações implicam diretamente em perda da eficiência dessa terapia renal substitutiva. Até o momento, não existe tratamento específico capaz de prevenir ou reverter esta situação. As células tronco mesenquimais (CTm) têm mostrado efeitos terapêuticos benéficos em doenças associadas à fibrose. A participação das CTm no reparo tecidual está principalmente relacionada à sua atividade parácrina, através da liberação de fatores solúveis e vesículas extracelulares (VE). As VE liberadas são importantes na intercomunicação célula-célula e possivelmente contribuem para o efeito terapêutico das CTm ao entregar seu conteúdo (mRNAs, miRNAs, proteínas) para as células alvo. Assim, o objetivo central do presente estudo foi comparar o possível efeito terapêutico das CTm de tecido adiposo (CTmTA) e de VE derivadas de CTmTA na prevenção da FP experimental em ratos. A FP foi induzida em ratos Wistar machos através de injeções intraperitoneais (IP) de gluconato de clorexidina (GC) a 0,1%, em dias alternados, por um período de 30 dias. As CTmTA utilizadas foram obtidas de tecido adiposo gonadal de rato Wistar, cultivadas e expandidas até a 4ª passagem e caracterizadas de acordo com a sua capacidade de aderência ao plástico, presença de marcadores de superfície e pela diferenciação celular in vitro. As VE derivadas de CTmTA foram isoladas por ultracentrifugação. Os protocolos de isolamento por ultracentrifugação e caracterização por microscopia eletrônica, rastreamento de nanopartículas e quantificação das proteínas totais das VE foram padronizados e estabelecidos no laboratório. Os tratamentos com 2x106 CTmTA ou com 30 ug VE foram administrados por injeções de IP. Os animais do estudo foram divididos em 4 grupos: Grupo Controle (n = 8), animais que receberam apenas injeções IP de solução fisiológica; Grupo FP (n = 9), animais que receberam injeções IP de GC para indução da FP e foram tratados com solução fisiológica; Grupo FP + CTmTA (n = 8), animais que receberam injeções IP de GC para indução da PF e foram tratados com 2x106 CTmTA, no 3º e 10º dias, via IP, e Grupo FP + VE (n = 8), animais que receberam injeções IP de GC para indução da FP e foram tratados com 30 ug de VE, IP no 3º e 10º dias, via IP. Após 30 dias da indução de FP, os animais foram submetidos ao teste de função peritoneal e, em seguida, à eutanásia para coleta de amostras de tecido do peritôneo. As amostras do peritôneo parietal foram direcionadas para análises histológicas, imunohistoquímicas, de imunofluorescência e biologia molecular. No Grupo FP, como esperado, houve um aumento significativo da espessura da MP. Os tratamentos com CTmTA e VE preveniram o espessamento da MP, mantendo a espessura similar à do Grupo Controle. Os tratamentos com CTmTA e VE bloquearam o aumento do número de miofibroblastos, da expressão de fibronectina e de fatores envolvidos na FP (TGF-beta e FSP-1), observados nos animais do Grupo FP. Além disso, a expressão gênica de Smad3, que está associada à ativação de genes pró-fibróticos, estava aumentada no Grupo FP e foi reduzida nos grupos tratados. Por outro lado, a expressão gênica de Smad7, um gene associado à contrarregulação do TGF-beta, estava reduzida no Grupo FP e foi aumentada nos grupos que receberam tratamento. Os tratamentos com CTmTA e VE também apresentaram efeitos anti-inflamatórios, reduzindo o número de macrófagos e de linfócitos na MP e diminuindo a expressão do TNF-alfa, uma citocina pró-inflamatória, quando comparados ao Grupo FP. Com relação a análise funcional, o grupo tratado com VE apresentou melhora na capacidade de ultrafiltração. No entanto, os tratamentos com CTmTA e VE não alteraram o transporte de glicose pela MP em relação ao Grupo FP. Outro aspecto dos efeitos dos tratamentos CTmTA e VE diz respeito à neoangiogênese na MP, importante fator relacionado a capacidade de ultrafiltração. Apesar dos grupos tratados com CTmTA e VE apresentarem diminuição significativa da expressão de VEGF na MP, não foi constatada diferença na densidade capilar na MP destes grupos, em relação ao Grupo FP. Em conclusão, no modelo experimental de FP, os tratamentos com CTmTA e VE apresentaram efeito anti-inflamatório e foram igualmente eficientes no bloqueio do processo de FP. O tratamento com VE mostrou melhor capacidade de preservação da função peritoneal, com aumento da capacidade de ultrafiltração. Portanto, os tratamentos com CTmTA ou com VE derivadas de CTmTA apresentam potencial terapêutico e constituem uma nova abordagem, ainda pouco explorada, na prevenção do desenvolvimento da FP associada à DP / In patients undergoing peritoneal dialysis (PD), morphofunctional changes of the peritoneal membrane (PM) occur progressively over the years. These modifications are morphologically characterized by loss of the mesothelial layer, inflammation, neoangiogenesis and peritoneal fibrosis (PF), and functionally, by the reduction in ultrafiltration (UF). Moreover, these changes directly imply in failure of treatment. Currently, there is no clinical alternative to prevent or reverse this situation. In this context, mesenchymal stem cells (MSC) have shown beneficial therapeutic effects in diseases associated with fibrosis. The participation of MSC in tissue repair is related to their paracrine activity, through the release of soluble factors and extracellular vesicles (EV). The EV released are important to cell-to-cell communication and the possibility to contribute to the therapeutic effect of MSC, by delivering their content (mRNAs, miRNAs, proteins) to the target cells. Therefore, the aim of this study was to compare the possible therapeutic effect of MSC versus EV derived from MSC for prevention of experimental PF fibrosis in rats. PF was induced in male Wistar rats by intraperitoneal (IP) injections of 0.1% chlorhexidine gluconate (CG) on alternate days, for a period of 30 days. The MSC used were obtained from Wistar rats gonadal adipose tissue (ASC), cultured and expanded to the 4th passage and characterized according to their ability to adhere to plastic, presence of membranes markers and by cell differentiation in vitro. EV derived from ASC were isolated by ultracentrifugation. The protocols of ultracentrifugation and characterization by electron microscopy, nanoparticle tracking and quantification of total proteins from EV were standardized and established in the laboratory. Both treatments using ASC (2x106 cells) or EV (30 ug) were administered via IP injections. The animals were divided into four groups: Control group (n = 8), animals that received only IP injections of physiological solution; PF group (n = 9), animals that received IP injections of CG to induce PF and were treated with physiological solution; PF+ASC group (n = 8), animals that received IP injections of CG for induction of PF and were treated with 2x106 ASC, at the 3rd and 10th day, by IP delivery; PF+EV group (n = 8), animals that received IP injections of CG for induction of PF and were treated with 30 ug of EV at the 3rd and 10th day, by IP delivery. After 30 days of PF induction, the animals were submitted to the peritoneal function test and then, to euthanasia to collect tissue samples from the peritoneum. The samples were analyzed by histology immunohistochemistry, immunofluorescence, and also by molecular biology. In the FP group, there was a significant increase in the thickness of the PM. Both treatments with ASC or EV prevented increase in PM thickness. Importantly, ASC and EV treatments blocked the increased number of myofibroblast, fibronectin expression and the factors involved in PF (TGF-beta and FSP-1) observed in the PF group. In addition, the Smad3 gene expression, which is associated with activation of pro-fibrotic genes, was increased in the PF group and decreased in the treatments groups. Conversely, the gene expression of Smad7, a gene associated with TGF-beta against regulation, was decreased in the PF group and increased in the animals that received the treatment. ASC and EV injections also showed anti-inflammatory effects, reducing the infiltration of macrophages and lymphocytes into the PM and decreasing the expression of TNF-alpha, a proinflammatory cytokine. The treatments with ASC and EV did not alter the glucose transport by the PM in relation to the PF group, but promoting an increase of the UF capacity. Only the EV treated group showed an increase in UF capacity. Another aspect of the effects of ASC and EV treatments concerns to neoangiogenesis in the PM, an important factor related to the UF capacity. Although the treated groups showed a significant decrease of the VEGF expression in the PM, no difference in the capillary density was observed in relation of PF group. In conclusion, in the experimental model of FP, treatement with ASC or EV showed anti- inflammatory effects and were equally efficient in blocking the PF process. However, the treatment with EV showed a better capacity of preservation of the peritoneal function, with increased capacity of UF. Therefore, the use of ASC and EV potentially represents a new therapeutic approach in preventing the development of PF associated with PD

Pacientes submetidos por longos períodos à diálise peritoneal (DP) podem evoluir com fibrose e redução da capacidade de ultrafiltração da membrana peritoneal (MP). Essas alterações da MP são desencadeadas pela exposição prolongada às soluções de diálise peritoneal, peritonites de repetição e irritantes químicos que induzem inflamação, neoangiogênese e fibrose da MP. A ativação da via Transforming Growth Factor (TGF-beta)/Smad é um fundamental mecanismo mediador da fibrogênese peritoneal. Sendo assim, drogas que inibam a via TGF-beta/Smad são de especial interesse no tratamento da FP. O ácido valpróico (VPA) é um inibidor das histona desacetilases (iHDAC), enzimas que regulam a conformação da cromatina e a expressão gênica, com atividade anti-inflamatória e antifibrótica. O presente estudo tem como objetivo principal avaliar o efeito do VPA em um modelo experimental de fibrose peritoneal em ratos. Vinte e quatro ratos Wistar machos (peso inicial de 280 - 320g) foram dividos em 3 grupos experimentais: CONTROLE (n=8), animais normais que receberam injeções de salina intraperitoneal (IP); FP (n=8), animais que recereberam injeções IP de gluconato de clorexidina (GC) diariamente por 15 dias para indução de fibrose peritoneal; FP+VPA (n=8), animais com FP e tratados com VPA. O ácido valpróico (300mg/kg) foi administrado por gavage diariamente por 15 dias, simultaneamente à indução de fibrose peritoneal. Ao fim dos experimentos, amostras do tecido peritoneal foram coletadas para realização de histologia, imunho-histoquímica (IH), imunofluorescência (IF) e biologia molecular. A análise da MP dos animais do grupo FP revelou um espessamento significativo da camada submesotelial devido ao acúmulo de matriz extracelular e infiltrado inflamatório. O tratamento com VPA foi capaz de prevenir significativamente o espessamento da MP, mantendo a espessura do peritôneo do grupo FP+VPA similar a do grupo CONTROLE. Com relação à função peritoneal, a administração de VPA evitou a queda da ultrafiltração e aumento do transporte peritoneal de glicose induzidos pelo GC. Além disso, o VPA impediu o aumento da expressão de miofibroblastos e de fatores associados à fibrose (TGF-beta, FSP-1 e fibronectina) induzidos pelo GC. Interessantemente, o VPA reduziu de maneira significativa a expressão da Smad3, mediador intracelular crítico da sinalização TGF-beta/Smad, em relação ao grupo FP. Por outro lado, os animais tratados com VPA apresentaram um aumento da expressão peritoneal de fatores antifibróticos como a BMP-7 e Smad7, proteínas que contrarregulam as ações do TGF-beta. Além de atenuar a fibrose peritoneal, o VPA apresentou efeitos anti-inflamatório e antiangiogênico, demonstrado pela menor expressão de citocinas pró-inflamatórias, fatores quimiotáticos para macrófagos (MCP-1) e VEGF no grupo FP+VPA quando comparado ao grupo FP. Em resumo, o VPA foi capaz de bloquear o espessamento por fibrose da MP e preservar a sua função, além de proteger o peritônio contra a neoangiogênese e inflamação. Além disso, o VPA induziu um aumento da expressão de fatores antifibróticos na MP. Os resultados apresentados neste trabalho chamam a atenção para mecanismos envolvidos nas modificações da MP induzidas pela DP ainda pouco explorados e que podem constiuir potenciais alvos na prevenção do desenvolvimento da fibrose peritoneal associada à DP / Long term peritoneal dialysis (PF) can induce peritoneal fibrosis and loss of ultrafiltration capacity of peritoneal membrane (PM). These peritoneal changes are due to prolonged exposure to peritoneal dialysis solutions, chemical irritants and acute peritonitis episodes that induce inflammation, neoangiogenesis and PM fibrosis. The Transforming Growth Factor (TGF-?) is the main mediator involved in the development of peritoneal fibrosis. Thus, drugs that inhibit the TGF-?/Smad pathway or inflammation are of particular interest in the treatment of PF. Valproic acid (VPA) is an histone deacetylase (HDAC) inhibitor. HDACs are enzymes that regulate chromatin conformation and gene expression. Recent studies have described HDACi as promising drugs in the treatment of inflammatory and fibrotic diseases. The main aim of this study was to evaluate the effect of VPA in an experimental model of peritoneal fibrosis in rats. Twenty four Wistar rats (initial weight of 280-320g) were divided into three experimental groups: CONTROL (n = 8), normal animals that received only saline ip; FP (n = 8), peritoneal fibrosis was induced by daily Gluconate Clorhexedine (GC) intraperitoneal (IP) injections for 15 days; FP+VPA (n = 8), animals with peritoneal fibrosis and treated with VPA. Daily valproic acid (300mg/kg) doses were administered by gavage simultaneously with the induction of peritoneal fibrosis in the FP+VPA group. At the end of experiments, the animals were submitted to euthanasia and samples of peritoneal tissue were collected for histology, immunocytochemistry, immunofluorescence, and molecular biology. Also, a functional peritoneal test was performed. The FP group showed a significant thickening of PM due to the accumulation of extracellular matrix and inflammatory cellular infiltration. VPA treatment was able to significantly prevent PM thickening, maintaining the peritoneal thickness of the VPA group similar to that of the CONTROL group. The VPA administration also preserved peritoneal function in the FP+VPA group, avoiding the reduction of ultrafiltration and increasing of peritoneal glucose transport induced by GC. According to the histological changes mentioned above, the VPA hampered the upregulation of the pro-fibrotic genes (TGF-beta, FSP-1, and fibronectin) and increase in the myofibroblasts expression induced by GC injections. Interestingly, the peritoneal expression of phosphorylated Smad3 detected by immunohistochemistry and Smad3 mRNA was significantly higher in the FP group. However, this effect was attenuated by VPA treatment. On the other hand, VPA was able to induce an increase in the expression of the antifibrotic factors, such as BMP-7 and Smad7, in the peritoneal membrane. Besides its antifibrotic activity, VPA also showed anti-inflammatory and anti-angiogenic effects. Animals of the FP+VPA group showed a significant reduction of the PM expression of pro-inflmmatory cytokines, macrophage chemoattractants and, VEGF expression when compared with FP group. In conclusion, we have shown that VPA inhibits the progression of peritoneal fibrosis in a CG-induced peritoneal fibrosis model in rats. VPA inhibited different and important mechanisms involved in peritoneal membrane modifications induced by PD, as activation of TGF-beta/Smad pathway, inflammation, and angiogenesis. Notably, VPA induced the expression of antifibrotic factors. Our results are very interesting and shed lights on a new perspective for the treatment of peritoneal fibrosis. However, this is an exploratory study and future studies are needed before to translate this experimental finding into clinical application

Os pacientes com Doença Renal Crônica (DRC) terminal dependem de tecnologias terapêuticas avançadas para sobreviver, a exemplo da Diálise Peritoneal (DP). Estes pacientes apresentam limitações no seu cotidiano e vivenciam inúmeras perdas, incapacidades e mudanças biopsicossociais e econômicas que interferem na qualidade de vida. Os aspectos da saúde relacionados à qualidade de vida destes pacientes podem ser influenciados pela DRC terminal, bem como pela DP, impactando na Qualidade de Vida Relacionada à Saúde (QVRS) dos pacientes. Objetivos: Caracterizar os adultos e idosos em DP atendidos em Ribeirão Preto-SP, de dezembro de 2009 a março de 2010; descrever a QVRS destes pacientes por meio do Kidney Disease and Quality of Life-Short Form (KDQOL-SFTM) e comparar a QVRS dos pacientes em Diálise Peritoneal Ambulatorial Contínua (DPAC) e em Diálise Peritoneal Automatizada (DPA). Material e Método: Estudo seccional e populacional realizado nos dois serviços que oferecem o tratamento de DP em Ribeirão Preto. Foram incluídos no estudo 82 pacientes que atenderam aos seguintes critérios: ter 18 anos ou mais de idade; apresentar-se em tratamento por DPAC ou DPA por três meses ou mais; ter resultado satisfatório na avaliação cognitiva e não se encontrar hospitalizado por complicações agudas ou em tratamento de peritonite. Para a coleta de dados que ocorreu de dezembro de 2009 a março de 2010, foi utilizado um questionário para caracterização dos pacientes, o Miniexame do Estado Mental e o KDQOL-SFTM. Os dados foram analisados por meio de análise exploratória uni e bivariada, análise confirmatória bivariada e análise multivariável por regressão linear múltipla das dimensões de QVRS de interesse. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética e Pesquisa do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - Universidade de São Paulo. Resultados: Dos pacientes, 36 eram adultos e 46 idosos, 44 realizavam DPAC e 38, DPA. As dimensões que obtiveram maiores escores refletindo melhor QVRS foram: estímulo por parte da equipe de diálise, suporte social e função cognitiva; e as dimensões que obtiveram menores escores refletindo pior QVRS foram: situação de trabalho, função física e sobrecarga da doença renal. Foi encontrada pequena variação da QVRS entre os pacientes em DPAC e em DPA sem significância estatística. Foi verificado maior número de correlação da QVRS com idade, número de comorbidades e de complicações. Na regressão linear múltipla, foi constatada associação dos fatores que impactaram negativamente a QVRS: maior idade com funcionamento físico; ter diabetes com sobrecarga da doença renal; realizar DPA com sobrecarga da doença renal; maior número de comorbidades e complicações com funcionamento físico, com função física e com sobrecarga da doença renal. Conclusão: As variáveis que tiveram maior impacto na QVRS foram a idade, o trabalho, as comorbidades e as complicações. Os resultados deste estudo podem favorecer o atendimento das necessidades e peculiaridades dos pacientes em DP. / Patients with end-stage Chronic Kidney Disease (CKD) depend on therapeutic strategies such as Peritoneal Dialysis (PD) in order to survive. These patients have everyday limitations and go through uncountable losses, disabilities, biopsychosocial and economic changes which interfere with their quality of life. The health aspects related to the quality of life of these patients can be influenced by endstage CKD, as well as by PD, leading to an impact in Health-Related Quality of Life (HRQL). Aims: To characterize adult and elderly patients on PD treated in Ribeirão Preto-SP from december 2009 through march 2010; to describe HRQL of these patients using the Kidney Disease and Quality of Life-Short Form (KDQOL-SFTM) and to compare HRQL of patients on Continuous Ambulatory Peritoneal Dialysis (CAPD) and on Automated Peritoneal Dialysis (APD). Material and Methods: Cross-sectional population-based study carried out in two services which offer PD in Ribeirão Preto. Eighty-two patients were included in the study with the following criteria: being 18 years old or older, attending CAPD or APD during 3 months or more, having satisfactory results in the cognitive assessment and not being hospitalized due to acute complications or under peritonitis treatment. Data collection was carried out from december 2009 through march 2010 by using a questionnaire for patient characterization, the Mini-mental state examination and the KDQOL-SFTM. The dimensions of HRQL were analyzed by uni- and bivariate exploratory analysis, bivariate confirmatory analysis and multivariate multiple linear regression analysis. The research project has been approved by the Ethics and Research Committee of Hospital das Clínicas, University of São Paulo at Ribeirão Preto Medical School. Results: Thirty-six of the patients were adults and 46 were elderly, 44 were on CAPD and 38 were on APD. The dimensions which scored higher, thus reflecting better HRQL, were: dialysis staff encouragement, social support and cognitive function; the dimensions which scored lower, thus reflecting worse HRQL, were work status, rolelimitations physical and burden of kidney disease. No statistically significant difference between CAPD and APD patients was found. A higher correlation between HRQL and age, number of comorbidities and complications was found. In multiple linear regression, an association of factors which negatively impact on HRQL was found: higher age with symptoms; having diabetes with burden of kidney disease; being on APD with burden of kidney disease; higher number of comorbidities with physical functioning, with role-limitations physical and with burden of kidney disease. Conclusion: The variables which mostly impacted on HRQL were age, work, comorbidities and complications. The results of this study may favor the treatment of the needs and peculiarities of patients on PD.

Estudo quantitativo, descritivo, transversal, visando avaliação da estrutura, do processo e do resultado em diálise peritoneal domiciliar. Participaram 90 pacientes em diálise peritoneal domiciliar de municípios em Sergipe de novembro de 2011 a julho de 2012. Foi empregado o referencial teórico da Avaliação de Cuidados em Saúde proposta por Donabedian (1980). A coleta de dados foi realizada por meio de entrevista e observação sistematizada em domicílios com pacientes e cuidadores e por meio de consulta aos prontuários de saúde. Foram utilizados os programas Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) versão 20 e Epi info versão 3.5.1 do Centers for Disease Control and Prevention- CDC e para a análise testes paramétricos e não paramétricos. Em relação ao componente estrutura o espaço predominante para a realização da diálise peritoneal foi o quarto (98,9%). Havia rachaduras nas paredes em 15,5% e infiltrações em 11,1% dos domicílios. A água era tratada em 87,7% das casas e com rede de esgotamento sanitário em 76,6%. Em 76,6% das residências constatou-se a existência de pia para higienização das mãos localizada no quarto. Quanto aos pacientes 41,1% estavam na faixa etária entre 60 a 79 anos, 56,7% do sexo masculino, baixa escolaridade 40,0% e renda per capta menor que um salário mínimo para 64,5%. As comorbidades mais prevalentes foram a hipertensão arterial e o diabetes mellitus. Quanto ao componente processo, faltas as consultas médicas foram de 38,9%. 51,1% pacientes realizavam DPA e 53,3% utilizavam o cateter Tenckhoff cuff duplo. Constatou-se a falta de registro nos prontuários da troca do equipo obedecendo a o prazo de validade para 43,3% dos pacientes. A solução dialítica em 26,7% das casas estava armazenada diretamente sobre o piso. 11,1% dos pacientes não tinham registro do dialisato efluente após o procedimento dialítico. Quanto ao componente resultado constatou-se que 42,1% apresentaram um ou mais episódios de peritonite. Pacientes com dois anos ou mais de tratamento apresentaram maior chance de peritonite (p = 0,01). A mediana de tempo da terapia foi de 23 meses. Houve associação entre ocorrência de peritonite e as variáveis integridade das paredes (p<0,026), troca do equipo fora da validade (p<0,049) e número de faltas nas consultas médicas, (p= 0,01). Quanto à infecção no orifício de saída do cateter peritoneal (IOS), 62,2% pacientes tiveram um ou mais episódios. Houve associação entre IOS e renda familiar (p< 0,019), não capacitação do cuidador ou paciente (p<0,028) e tempo de tratamento (p=0,015). 16,7% dos pacientes apresentaram como complicações mecânicas a drenagem inadequada. 88,9% dos pacientes referiram estar satisfeitos com a diálise peritoneal no domicílio. Os componentes relacionados à estrutura, processo e resultado mostraram que pacientes e cuidadores estão expostos a riscos que podem agravar o estado de saúde. Ressalta-se a importância da visita domiciliar e a educação permanente, como também o estabelecimento de parcerias com os profissionais da Estratégia de Saúde da Família sob a supervisão do enfermeiro da Clínica de Diálise, a fim de desenvolver ações de cuidado seguro para a prevenção de complicações no paciente em diálise peritoneal domiciliar. / This is a quantitative, descriptive and cross-sectional study, aimed at the assessment, the structure, the process and the outcome in peritoneal dialysis at home. The participants were 90 patients undergoing peritoneal dialysis at home in municipalities of the Sergipe State during the period from November 2011 to July 2012. The theoretical framework of the Health Care Assessment, proposed by Donabedian (1980), was employed. Data collection was performed through interviews and systematic observation in households with patients and caregivers and through consultations with medical records. We used the programs Statistical Package for Social Sciences (SPSS), version 20, and Epi Info, version 3.5.1, from the Centers for Disease Control and Prevention (CDC), and, for analysis, parametric and non-parametric tests. Regarding the component \'structure\', the predominant space for the accomplishment of peritoneal dialysis was the room (98,9%). There were cracks in the walls in 15,5% and infiltration in 11,1% of households. The water was treated in 87,7% of the houses and there was a sewage system in 76,6% of them. 76,6% of the surveyed households had a sink for hand -washing located in the room. As for patients, 41,1% were aged between 60 and 79 years, 56,7% were males, 40,0% had low schooling and 64,5% had a per capita income lower than a minimum wage. The most prevalent comorbidities were arterial hypertension and diabetes mellitus. Regarding the component \'process\', the absences to medical visits reached 38.9%. 51,1 % of patients performed APD and 53,3 % used the double Tenckhoff cuff catheter. It was found a lack of registration in the medical records of the exchange of the unit in line with the expiration date to 43,3 % of patients. The dialytic solution in 26,7 % of homes was directly stored on the floor. 11,1% of patients had no record of the effluent dialysate after the dialysis procedure. Regarding the component \'outcome\', it was found that 42,1% showed one or more episodes of peritonitis. Patients with two or more years of treatment showed a higher chance of peritonitis (p=0,01). The median of therapy time was of 23 months. There was an association between the occurrence of peritonitis and the variables \'integrity of walls\' (p<0,026), \'exchange of unit out of date\' (p<0,049) and \'number of absences in medical consultations\' (p = 0,01). Regarding infections in the exit orifice of the peritoneal catheter (IOS), 62,2 % of patients had one or more episodes. There was an association between \'IOS\' and \'family income\' (p<0,019), \'lack of training of the caregiver or the patient\' (p<0,028) and \'treatment time\' (p= 0,015). 16,7% of patients showed inadequate drainages as mechanical complications. 88,9% of patients reported being satisfied with peritoneal dialysis at home. The components related to the structure, process and outcome showed that patients and caregivers are exposed to risks that may aggravate the health condition. It should be emphasized the importance of home visits and continuing education, as well as the establishment of partnerships with professionals of the Family Health Strategy, under the supervision of the Dialysis Clinic\'s nurse, in order to develop actions for safe care to prevent complications in patients undergoing peritoneal dialysis at home.

Orientador: André Luis Balbi / Resumo: A Diálise Peritoneal Contínua (DPC) e a Hemodiálise (HD) diária são opções para o tratamento de pacientes com Lesão Renal Aguda (LRA). A DPC pode causar alterações na função respiratória principalmente relacionadas ao aumento da Pressão Intra-Abdominal (PIA) e a HD pode levar a hipoxemia pelo contato do sangue com o circuito extracorpóreo e pela disfusão do CO2 no dialisato. No entanto, ambos os métodos podem melhorar a mecânica respiratória e a oxigenação pela retirada de líquidos e consequentemente redução do edema pulmonar. O objetivo principal deste estudo foi comparar os efeitos da DPC e da HD diária na mecânica ventilatória e oxigenação de pacientes com LRA sob Ventilação Mecânica Invasiva (VMI). Metodologia: Estudo tipo coorte prospectivo que avaliou 154 pacientes, sendo 37 em DPC e 94 em HD. Foram avaliados, por até 3 dias, os parâmetros de mecânica respiratória como Complacência Estática (Cest) e Resistência do Sistema Respiratório (Rsr) e também o Índice de Oxigenação (IO). Os pacientes foram avaliados nos momentos 1, 2 e 3 (pré-diálise) e 1, 2 e 3 (pós-diálise) em relação a Cest e Rsr e nos momentos 1, 2 e 3 em relação ao IO. Para comparação entre as características clínicas iniciais dos pacientes foram utilizados os testes t de student, qui-quadrado e exato de fisher. Para comparação das variáveis Cest, Rsr e IO no tempo foi utilizado o modelo Anova de medidas repetidas, seguido do teste de comparações múltiplas de Wald ou Tukey. Foi considerado um nível de signif... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Continuous Peritoneal Dialysis (CPD) and daily Hemodialysis (HD) are options for the treatment of Acute Kidney Injury (AKI) patients. The CPD can cause changes in respiratory function mainly related to increase Intra-Abdominal Pressure (IAP) and HD can lead to hypoxemia due to blood contact with the extracorporeal circuit and the diffusion of CO2 in the dialysate. However, both methods can improve respiratory mechanics and oxygenation due to the fluid removal and consequently reduced pulmonary edema. The aim of this study was to compare the effects of the CPD and daily HD on respiratory mechanics and oxygenation of AKI patients undergoing Invasive Mechanical Ventilation (IMV). Methodology: A prospective cohort study evaluated 154 patients, 37 on CPD and 94 on HD. The respiratory mechanics parameters such as Static Compliance (Cest) and Resistance of the Respiratory System (Rsr) and Oxygenation Index (OI) were assessed for three days. Patients were evaluated at moments 1, 2 and 3 (pre-dialysis) and 1, 2 and 3 (post-dialysis) in relation to Cest and Rsr and at times 1, 2 and 3 in relation to the IO. The student t test, chi-square and fisher exact were used to compare the baseline patients characteristics. ANOVA model for repeated measures was used to compare the variables Cest, Rsr and OI, followed by the multiple comparison Tukey or Wald Test. Significance level was 5%. Results: Comparing the initial clinical parameters between the two groups, all characteristics were simi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor