A doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa e a principal causa de demência em idosos. Os mecanismos fisiopatológicos mais envolvidos na DA são: o acúmulo do peptídeo beta amiloide (A?) em agregados extracelulares, e a formação dos emaranhados neurofibrilares (ENF). A Proteína Precursora do Amiloide (APP) é clivada pelas secretases alfa (ADAM10), beta (BACE1) e y (Presenilina 1 [PSEN1]). As plaquetas contêm 95% da APP circulante e possuem toda a maquinaria necessária para estudar perifericamente a APP e suas secretases. A pesquisa de biomarcadores na DA tem como objetivo identificar, em vida, os indicadores do processo patogênico em fluídos corporais e/ou por métodos de imagem cerebral. O objetivo do presente estudo foi investigar proteínas envolvidas no metabolismo da APP em plaquetas de pacientes com DA e o potencial de modificação destas vias pela ação do tratamento com cloridrato de donepezila. Para tanto foram analisadas amostras de 23 pacientes com DA leve ou moderada, avaliados antes e depois de 6 meses de tratamento e 38 indivíduos idosos cognitivamente saudáveis (controles). As variáveis de desfecho estudadas foram: (1) expressão protéica de ADAM10, BACE1 e PSEN1; (2) expressão protéica dos metabólitos secretados da APP de 110 e 130kDa, possibilitando o cálculo da razão de APP (rAPP); e (3) atividade enzimática das APP-secretases ADAM10 e BACE1. Foram utilizados os métodos de western blotting e o fluorimétrico. Encontramos, nos pacientes com DA pré-tratamento, uma diminuição da rAPP em relação aos controles; porém, não identificamos diferenças após seis meses de tratamento. Os níveis de ADAM10 mostraram-se menores em pacientes com DA na avaliação basal quando comparados aos controles, mas também sem modificação com o tratamento, o tratamento mostrou-se associado a uma redução da expressão de BACE1 em pacientes com DA, embora não tenhamos encontrado diferenças entre pacientes e controles na avaliação basal. A expressão de PSEN1 mostrou-se menor nos pacientes com DA pré-tratamento quando comparada aos controles, sem contudo haver alteração em resposta ao tratamento. Quanto à atividade enzimática de ADAM10 e BACE1, não observamos diferenças nos valores pré e pós-tratamento. Nossos achados reforçam a utilidade da utilização de plaquetas como matriz biológica para o estudo do metabolismo da APP em tecidos periféricos e para a investigação de efeitos modificadores da patogenia da DA a partir do tratamento com drogas antidemência / Alzheimer\'s disease (AD) is a neurodegenerative disease and the major cause of dementia in the elderly. The main mechanisms in AD are: extracellular aggregates of beta amyloid peptide (Abeta) and neurofibrillary tangles formation (NFT). Amyloid Precursor Protein (APP) is cleaved by the secretases alfa (ADAM10), beta (BACE1) and ? (Presenilin 1 [PSEN1]). Platelets containing 95% of the circulating APP and possess all the machinery necessary to study peripherically APP and its secretases. The search for biomarkers in AD aims to identify, in life, the pathogenic process indicators in body fluids and/or brain image methods. The aim of this study was to investigate proteins involved in APP metabolism in platelets of AD patients, and the potential modification of these pathways by treatment with Donepezil hydrochloride. Therefore, 23 patients with mild to moderate AD evaluated before and after 6 months treatment and 38 healthy elderly subjects (controls) were analyzed. Outcome variables were: (1) ADAM10, BACE1 and PSEN1 expression; (2) APP secreted metabolites expression (110 and 130kDa), allowing the APP ratio (rAPP) estimate; (3) APP-secretase ADAM10 and BACE1 enzymatic activity. Western blotting and fluorimetric methods were used. We found in AD patients pre-treatment, a decrease of rAPP compared to controls; however, we did not identify differences of this parameter after six months of treatment. The ADAM10 levels were lower in AD patients at baseline when compared to controls, however no differences were observed after treatment. Treatment was associated with a reduction of BACE1 expression in AD patients, although we have not found differences between patients and controls at baseline. PSEN1 expression was lower in pre-treatment AD patients compared to controls. No differences were observed after treatment. Concerning to BACE1 and ADAM10 enzymatic activity, we did not observe differences in pre and post-treatment. Our findings strengthen the use of platelets as a biological matrix for the APP metabolism as well as the modifying effects on AD pathogenicity of antidementia drugs

O uso do plasma rico em plaquetas pode apresentar resultados favoráveis na reparação por se constituir em fonte natural de fatores de crescimento, que podem acelerar a reparação dos tecidos. A proposição desta pesquisa foi analisar os efeitos do plasma rico em plaquetas no processo de reparação tecidual. Foram realizadas feridas dérmicas padronizadas, com a utilização de punch, para excisão do fragmento de pele, com 5mm de diâmetro e 2mm de profundidade, no dorso de 48 ratos. Destes, 40 foram utilizados para análise microscópica e 8 ratos para análise macroscópica. Os animais foram divididos em dois grupos, conforme o tratamento realizado: em um grupo (teste), as feridas foram tratadas com plasma rico em plaquetas e em outro (controle), foi utilizado soro fisiológico. Além disso, utilizamos 5 ratos para a determinação do número de plaquetas presentes no plasma rico em plaquetas. Estas análises foram realizadas no analisador automático de células sangüíneas ABC Vet (ABX DIAGNOSTICS). Dos 40 ratos utilizados para análise microscópica, 5 ratos (grupo teste) e 5 ratos (grupo controle) foram sacrificados nos períodos de 24 horas, 3 dias, 7 dias e 14 dias. Nos 8 ratos utilizados para análise macroscópica, sendo 4 ratos (grupo teste) e 4 ratos (grupo controle), as feridas foram fotografadas nos períodos baseline, 24 horas, 3 dias, 7 dias e 14 dias e as imagens foram analisadas por software de morfometria (ImageLab2000®). Os espécimes foram processados para análises macroscópica e microscópica. As análises histomorfológica e histomorfométrica mostraram que a reparação das feridas evolui de forma similar em ambos os grupos. Os resultados desta pesquisa sugeriram que embora não ofereçam efeitos tóxicos ou prejudicial sobre os tecidos moles, o PRP não favorece a reparação de feridas dérmicas, em ratos. / The employ of platelet-rich plasma can present favorable outcomes in healing to consist of natural source of growth factors for acceleration tissue healing. The purpose of this research was to analyze the effects of platelet-rich plasma on tissue healing. Standard dermical wounds were made with a punch to excise a skin fragment with 5 millimeters diameter and 2 milliners depth, in the back of 48 rats. Of these, 40 had been used for microscopical analysis and 8 rats for macroscopic analysis. The animals had been divided in two groups according to treatment: in a group (test), the wounds had been dealt with platelet-rich plasma and in another one (control), saline was used. Also, we use 5 rats for the determination of the number of platelets present in the platelet-rich plasma. These analyses had been carried through in the automatic analyzer of sanguine cells ABC Vet (ABX DIAGNOSTICS). Of the 40 rats used for microscopical analysis, 5 rats (group test) and 5 rats (group control) ware sacrificed in the 24 hours, 3 days, 7 days and 14 days. In the 8 rats used for macroscopic analysis, being 4 rats (group test) and 4 rats (group control), the wounds had been photographed in the baseline , 24 hours, 3 days, 7 days and 14days and the images had been analyzed by morphometry software (ImageLab2000®). The specimens had been processed for macroscopic and microscopic analysis. All the data had been submitted to a quantitative analysis and the date got by the software had been also submitted to statistic analysis. The results of this research had suggested that, even so do not produce toxic or harmful effect, the PRP does not act on the dermal wound healing in rats.

Plaquetas são fragmentos celulares anucleados, derivados de megacariócitos, que estão envolvidos em diversos processos fisiológicos e patológicos, como coagulação, inflamação, trombose, aterosclerose, e metástase e angiogênese tumorais. Para executar estas funções, plaquetas ativadas secretam uma fração solúvel de moléculas presentes em seus conteúdos granulares, que passam a interagir com outras moléculas e células adjacentes ao local da injúria, e com os próprios receptores plaquetários. No entanto, os mecanismos que regem a secreção em plaquetas ainda são pouco conhecidos. Neste sentido, o objetivo deste estudo foi analisar comparativamente a agregação de plaquetas ativadas por dois diferentes agonistas enzimáticos: a trombina, um dos mais importantes agonistas plaquetários, e a PA-BJ, uma serinoproteinase do veneno da Bothrops jararaca, que assim como a trombina, ativa plaquetas através dos receptores PAR-1 e PAR-4. Neste estudo foram utilizadas abordagens de espectrometria de massas e de bioinformática para caracterizar alterações nos proteomas do sedimento de plaquetas não ativadas e ativadas, e também, para em paralelo analisar as frações proteicas e peptídicas presentes no sobrenadante (secretoma). Nas análises do sedimento de plaquetas ativadas tanto por PA-BJ quanto por trombina, foi verificada a menor abundância das proteínas PBP, PF4, proteína S, fibronectina, fator V e alfa-1 antitripsina, entre outras, e que também foram identificadas no sobrenadante (secretadas), e o aumento de abundância das proteínas ADAM-10, tromboxano A2 sintase, integrina αlIb, miosina-9 e fosforilase b, que estão diretamente envolvidas na ativação/agregação. Por outro lado, verificamos que na secreção plaquetária induzida por trombina ocorreu o aumento de abundância de proteínas envolvidas na regulação da formação do coágulo, como a proteína S, PAI1 e antitrombina III, sugerindo que nos eventos disparados pela trombina, exista uma regulação rigorosa de sua ação no local da injúria vascular. Já na secreção induzida por PA-BJ, verificamos o aumento significativo das proteínas amiloide beta A4 e do fibrinogênio, envolvidas na ativação/agregação plaquetária, além da liberação e ativação de MMP1, indicando que esta metaloproteinase atue sinergicamente com a PA-BJ para a formação e estabilização do agregado plaquetário. Nas análises do secretoma de plaquetas não ativadas, identificamos pela primeira vez, a presença das proteínas catalase, anidrase carbônica, inibidor de elastase leucocitária e a glicoproteína rica em histidina, que estão envolvidas na inibição e regulação da ativação plaquetária. A análise da fração peptídica do sobrenadante plaquetário permitiu avaliar pela primeira vez o degradoma gerado no processo de agregação por PA-BJ e trombina. O conjunto de peptídeos resultante da ativação plaquetária pela PA-BJ é maior e mais complexo do que aquele gerado pela ação da trombina, sugerindo que as vias ativadas por ambas sejam diferenciais e sujeitas a diferentes controles de regulação da proteólise. Além disso, a degradação seletiva de algumas proteínas, e o conjunto de peptídeos gerados, poderiam ter um papel no controle da ativação e agregação plaquetárias. Em conjunto, nossos resultados demostram que, embora a PA-BJ e a trombina induzam a agregação plaquetária mediada pelos receptores PAR-1 e PAR-4, estas enzimas induzem vias diferentes, alterando a secreção plaquetária para levar à agregação. / Platelets are anucleated cell fragments derived from megakaryocytes which are involved in many physiological and pathological processes, such as coagulation, inflammation, thrombosis, atherosclerosis, and tumor angiogenesis and metastasis. To perform these functions, activated platelets secrete a soluble fraction of molecules present in their granules, which then interact with other molecules and cells adjacent to the site of injury, and with platelet receptors. However, the mechanisms governing secretion in platelets are still poorly understood. Therefore, the objective of this study was to comparatively analyze the aggregation of platelets activated by two different enzyme agonists: thrombin, one of the most important platelet agonists, and PA-BJ, a serine proteinase from Bothrops jararaca venom, which, like thrombin, causes platelet aggregation mediated by the receptors PAR-1 and PAR-4. For this purpose, approaches of mass spectrometry and bioinformatics were used to characterize changes in the proteome of non-activated and activated platelets, and also to analyze proteins and peptides present in the supernatant of aggregated platelets (secretome). In the analysis of the sediment of platelets activated by PA-BJ and thrombin, various proteins, such as PBP, PF4, protein S, fibronectin, factor V, and alpha-1 antitrypsin, were detected in lower abundance while they were also identified as secreted, in the supernatant; likewise, proteins that are directly involved in the activation/aggregation, such as ADAM-10, thromboxane A2 synthase, integrin αIIb, myosin-9 and phosphorylase b were identified in higher abundance in platelets activated by PA-BJ and thrombin. Moreover, we found that in the thrombin-induced platelet secretion there was increased abundance of proteins involved in the regulation of blood clot formation, such as protein S, and antithrombin III PAI1, suggesting that in the events triggered by thrombin, there is strict regulation of its action at the site of vascular injury. In the analysis of the secretion induced by PA-BJ, we found a significant increase in amyloid beta A4 protein and fibrinogen, which are involved in the platelet activation/aggregation, in addition to the release and activation of MMP-1, indicating that this metalloproteinase acts synergistically with PA-BJ in the formation and stabilization of the platelet thrombus. In the analysis of the non-activated platelet secretome, we identified for the first time the presence of catalase, carbonic anhydrase, leukocyte elastase inhibitor and histidine-rich glycoprotein, which are involved in the inhibition and regulation of platelet activation. The analysis of the peptide fraction of the supernatant of activated platelets enabled the characterization, for the first time, of the degradome generated in the process of aggregation by thrombin and PA-BJ. The resulting set of peptides generated upon platelet activation by PA-BJ is larger and more complex than that generated by the action of thrombin, suggesting that the pathways activated by both are differential and are subject to different controls of proteolysis. Furthermore, the selective degradation of some proteins, and the set of generated peptides could play a role in the control of platelet activation and aggregation. Taken together, our findings demonstrate that although both PA-BJ and thrombin induce platelet aggregation via PAR-1 and PAR-4, these enzymes activate different pathways to cause platelet secretion and aggregation.

Objetivos: Comparar dois modelos de hipertensão pulmonar (monocrotalina isoladamente e pneumonectomia com monocrotalina) em relação à gravidade hemodinâmica, estrutura das artérias pulmonares, marcadores inflamatórios - interleucina-1 (IL-1) e fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF) - e sobrevida em 45 dias. Métodos: Total de 80 animais analisados em 2 protocolos de estudo: análise estrutural e análise de sobrevida. Foram divididos em 4 grupos [controle (C), monocrotalina (M), Pneumonectomia com monocrotalina (PM) e pneumonectomia (P)]. Após 28 dias, os animais foram cateterizados, sendo obtidos os valores hemodinâmicos. Após foram sacrificados, sendo obtidos os tecidos cardíaco e pulmonar. O ventrículo direito (VD) foi dissecado do septo interventricular e a relação do seu peso sobre o peso do ventrículo esquerdo (VE+S) com o septo foi obtida como índice de hipertrofia de VD. No tecido pulmonar foram realizadas as análises histológicas (área da camada média das artérias pulmonares) e dosados os peptídeos IL-1 e PDGF através da técnica de ELISA. Para o estudo de sobrevida os animais foram observados por 45 dias. Resultados: Os grupos M e PM apresentaram hipertensão pulmonar em relação aos demais. Houve aumento significativo da relação VD/VE+S no grupo PM em relação aos demais. Não houve diferença significativa entre os grupos M e PM na área da camada média das artérias pulmonares, nas dosagem de IL-1 e PDGF e na sobrevida. Conclusões: Com os resultados obtidos não podemos afirmar que o modelo de pneumonectomia com monocrotalina é superior ao modelo de monocrotalina / Objectives: To compare two models of pulmonary hypertension (monocrotaline and pneumonectomy with monocrotaline alone) in relation to the hemodynamic severity, structure of the pulmonary arteries, inflammatory markers - interleukin-1 (IL-1) factor and platelet-derived growth factor (PDGF) - and survival at 45 days. Methods: Total of 80 animals were analyzed in two study protocols: structural analysis and survival analysis. They were divided into four groups [control (C), monocrotaline (M), Pneumonectomy with monocrotaline (PM) and pneumonectomy (P)]. After 28 days, the animals were catheterized, and the hemodynamic values obtained. Then, they were euthanized and obtained the heart and lung tissues. The right ventricle (RV) was dissected from the interventricular septum and the ratio of its weight on the weight of the left ventricle (LV + S) with the septum was obtained as an index of RV hypertrophy. In lung tissue histological analyzes were performed (area of the middle layer of the pulmonary arteries) and the peptides IL-1 and PDGF measured by ELISA. To the survival study , the animals were observed for 45 days. Results: The groups M and PM show pulmonary hypertension in relation to the others. A significant increase in the RV / LV + S was observed in PM in relation to M, and M and PM in relation to the others. There was no significant difference between groups M and PM in the medial layer of pulmonary arteries, the dose of IL-1 and PDGF, and survival

Enfermidade muito observada nas articulações dos equinos, o processo degenerativo articular crônico na articulação tibio-társica pode ser de origem primária, ou secundária à osteocondrose dissecante. A confirmação diagnóstica é feita por avaliação radiográfica. Importantes aliados diagnósticos são a avaliação do líquido sinovial, a avaliação ultrassonografia e a cirurgia de video-artroscopia, sendo esta última o tratamento para a enfermidade. Por sua evolução crônica e às vezes assintomática, a osteocondrose dissecante causa alterações no ambiente articular, como a perda de matriz cartilagínea, o que limita o potencial atlético do animal, acarretando em queda na performace e perdas econômicas. É comum o uso terapêutico intra-articular no periodo pós operatório recente de substâncias autólogas como o plasma rico em plaquetas (PRP), bem como o uso ácido hialurônico (HA), como adjuvante para o tratamento cirúrgico. O presente trabalho objetiva comparar e avaliar estes tratamentos. Foram utilizados 18 equinos, com idade variando entre 2 a 6 anos de idade, da raça Brasileiro de Hipismo, com peso corpóreo entre 400 e 650 kg, oriundos do mesmo criatório, com osteocondrose dissecante, na crista intermédia do osso tíbia. Estes animais no décimo dia pós operatório são dividos em três grupos experimentais: grupo AH, grupo PRP e grupo RCL como controle. Dados clínicos, ultrassonográficos e laboratoriais foram coletados em tempos definidos. Os resultados demonstraram que os animais do grupo controle - grupo RCL, que receberam solução de ringer com lactato intraarticular, apresentaram respostas clínicas e laboratoriais que indicaram menor indução do processo inflamatório ao ambiente articular quando comparado aos grupos PRP e AH. Os animais que receberam PRP apresentaram maior efusão sinovial e resposta positiva ao teste de flexão quando comparados aos animais que receberam AH; ao passo que a administração intra-articular de AH induziu maiores alteração citológica do líquido sinovial quando comparadas aos animais que receberam PRP. / One of the most commom diseases in the equine joint, the degenerative joint disease in the tibio tarsal joint could be a primary disease, or secondary to osteochondrosis dissecans. The diagnosis is made by radiographic study. Allies in diagnosing this disease includes sinovial fluid evaluation, ultrasonographic evaluation and video arthroscopy surgery, which is the way to treat this disease. The osteochondrosis dissecans has a chronic evolution, and several times asymptomatic, which causes an alteration on articular environment that contributes to a loss in the cartilage matrix. Resulting in the limited development of the athletic potential of the animal, poor performance and economic losses. Is common to use therapeutical autholog substances intra articular as the platelet rich plasma, and hialuronic acid, in the early post surgical treatment as an adjuvant therapy to the surgical treatment. This study reaches to compare and evaluate those treatments. Were used 18 horses, with ages between 2 to 6 years old, Brasileiro de Hipismo breed, weighting between 400 and 650 kg, from the same breeding center, with osteochondrosis dissecans fragments from the intermediate tibial crest. Those patients, 10 days after the video arthroscopy surgery, were divided in three experimental groups: AH group, PRP group, and RCL group as control group. Laboratorial data, clinical signs and ultrassonographic exam were performed. The results proved that RCL group had show less induction of inflamatory process on articular enviroment, when we compare with PRP group and AH group. The PRP group had shown more synovial effusion, and more sensibility to the flexion test when we compare to AH group; but the AH group had shown more laboratorial alterations when we compare to the PRP group.

A depressão é o mais comum dos distúrbios afetivos. Afeta ao menos 10% da população idosa do Brasil. Nos idosos, alguns fatores ligados ao metabolismo parecem estar bastante relacionados a esse transtorno, como uma menor concentração de noradrenalina e serotonina (5-HT) e uma maior atividade da monoaminooxidase em relação a adultos jovens. Os inibidores seletivos da recaptação da serotonina (ISRS), principalmente a sertralina, são a primeira opção no tratamento da fase aguda e manutenção dos episódios depressivos em idosos. As plaquetas vêm sendo amplamente utilizadas como modelo para estudar na periferia alterações que ocorrem no sistema nervoso central. A 5-HT apesar de ser primordialmente expressa no cérebro, também pode ser encontrada em plaquetas. Este neurotransmissor está envolvido em inúmeros aspectos do funcionamento normal do cérebro desde a regulação do humor até a regulação hormonal. A deficiência nos níveis de 5-HT pode estar intimamente ligada a alguma anormalidade na atividade da glicogênio sintase quinase 3B(GSK3B). Esta enzima exerce funções no metabolismo celular que vão desde sobrevivência celular, metabolismo e processamento de proteínas, até processos cognitivos. A atividade da GSK3B é estreitamente regulada pela fosforilação. Fosforilação no sítio ser9 inativa a enzima, enquanto que a desfosforilação neste mesmo sítio ativa a enzima. Diversos estudos têm mostrado que a forma inativa da enzima exerce um efeito neuroprotetor. O objetivo do presente estudo foi verificar a influência do tratamento com sertralina, em pacientes idosos com diagnóstico de depressão maior, sobre a 5- HT e GSK3B após 3 e 12 meses de tratamento. A quantificação da 5-HT foi realizada por HPLC e da GSK3B plaquetária, pelos métodos de ELISA e blotting, que se revelaram equivalentes. Após um ano de tratamento encontramos uma diminuição da 5-HT plaquetária nos pacientes com depressão maior com relação aos níveis basais, bem como um aumento da forma total da enzima GSK3B (GSKT), uma diminuição da forma fosforilada (pGSK) e da razão entre pGSK e GSKT (rGSK). Quando comparados os níveis de GSK3B de pacientes tratados por um ano e controles, observamos uma maior expressão de GSKT em pacientes; enquanto a pGSK e rGSK se mostraram equivalentes. Pudemos observar, portanto, uma modulação da 5-HT e da GSK3B pelo uso de sertralina. Essa modulação pode indicar que a ação antidepressiva deste fármaco pode estar associada a essas vias de sinalização / Depression is the most common affective disorders. It affects at least 10% of the elderly population of Brazil. In the elderly, some factors related to metabolism appear to be closely related to this disorder, such as lower concentration of noradrenaline and serotonin (5-HT) and increased monoamine oxidase activity in relation to young adults. The selective serotonin reuptake inhibitors (SSRI), especially sertraline are the first choice in treating acute and maintenance of depressive episodes in the elderly. Platelets have been widely used as a model to study in peripheral changes that occur in Central Nervous System. Although 5-HT is primarily expressed in the brain, it can also be found in platelets. This neurotransmitter is involved in numerous aspects of normal brain function since the regulation of mood to the hormonal regulation. A deficiency in 5-HT levels may be closely related to an abnormality in glycogen synthase kinase 3B (GSK3B) activity. This enzyme plays several functions in cell metabolism, ranging from cell survival, metabolism and protein processing, to cognitive processes. The GSK3B activity is tightly regulated by phosphorylation. Phosphorylation on Ser9 site inactives the enzyme, whereas dephosphorylation in the same site actives the enzyme. Several studies have shown that the inactive form of the enzyme plays a neuroprotective effect. The objective of this study was to investigate the influence of sertraline in elderly patients diagnosed with major depression, on platelet 5-HT and GSK3B after 3 and 12 months of treatment. Quantification of 5-HT was performed by HPLC and GSK3B by ELISA and western blotting. The methods for platelet GSK3B determination showed to be equivalent. After one year of treatment we found a decrease of platelet 5-HT in patients with major depression relative to their baseline levels, as well as an increase in the total form of GSK3B enzyme (GSKT), a decrease in phosphorylated form (pGSK) and the ratio between pGSK and GSKT (rGSK). Comparing the levels of GSK3B of patients with one year of treatment and controls, we found a higher GSKT expression in patients; while pGSK and rGSK showed to be equivalent. Therefore we observed a modulation of 5-HT and GSK3B by sertraline. This modulation may indicate that the antidepressant action of this drug may be associated with these signaling pathways

A cicatrização do tendão é um complexo processo que envolve uma variedade de moléculas reguladoras. Como exemplos temos os fatores de crescimento positivamente correlacionados com a expressão de genes responsáveis pela síntese da matriz extracelular, bem como os proteoglicanos que atuam como organizadores dos tecidos capazes de modular o crescimento e a maturação celular de tecidos especializados. No intuito de reparar o tendão com lesão existem várias opções de tratamento, mas nenhuma tem sido relatada como plenamente eficaz. Sendo assim, na busca de tratamentos regenerativos e não apenas reparativos, o objetivo deste trabalho foi investigar a influência do plasma rico em plaquetas (PRP) no processo de cicatrização do tendão flexor digital superficial de equinos, utilizando-se deste tratamento isoladamente ou associado ao laser terapêutico. Com essa finalidade, 26 membros torácicos de equinos foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos distintos: o grupo 1 (G1) foi composto por oito membros torácicos sadios provenientes de cadáveres frescos; no grupo 2 (G2) em seis membros foi induzida a tendinite, sem a realização de qualquer tipo de tratamento; no grupo 3 (G3) a tendinite também foi induzida em seis membros, os quais receberam o tratamento com o PRP; e no grupo 4 (G4) a tendinite foi induzida em seis membros torácicos que receberam o tratamento com o PRP associado ao laser terapêutico. Os animais foram avaliados clinicamente e ultrassonograficamente. Já as amostras do tecido tendíneo, obtidas por biópsia guiada por ultrassom, foram avaliadas por imunoistoquímica quanto a presença dos proteoglicanos: decorim, biglicam, fibromodulim e agrecam, Nessas amostras também foi realizada a análise da birrefringência do colágeno. Na avaliação clínica verificou-se que o grupo G4 foi o único que não mais apresentou sensibilidade à palpação no local da lesão ao término do experimento. Já na avaliação ultrassonográfica, os tendões dos membros torácicos dos grupos G3 e G4 que receberam os tratamento com PRP demonstraram melhora na ecogenicidade tanto do tendão como da lesão. Além disso, os tendões do grupo G4 apresentaram melhora no paralelismo das fibras de colágeno. Na avaliação imunoistoquímica os resultados demostraram que o biglicam, o fibromodulim e o agrecam tiveram sua expressão aumentada nas amostras do grupo G4 tratados com a associação PRP e laser quando comparados com as amostras do tendão hígido do grupo G1. Já no grupo G2 observou-se apenas o aumento da expressão de agrecam em relação ao G1. Na análise da birrefringência do colágeno o maior valor de retardo óptico (OR) foi apresentado também nas amostras do grupo tratado com a associação do PRP e laser (G4). Durante o processo de regeneração de um tendão lesado há uma tendência para o aumento dos valores de OR, o que representa uma melhora na organização do colágeno. Provavelmente, o laser foi capaz de produzir um aumento na síntese de colágeno e uma melhor agregação e alinhamento das fibras de colágeno. Assim, concluímos que o tratamento com PRP associado ao laser demonstrou melhora clínica, ultrassonográfica, de birrefringência e na expressão de proteoglicanos da matriz extracelular, o que não ocorreu quando utilizado isoladamente. / Tendon healing is a complex process involving a variety of regulatory molecules. Growth factors are a family of such molecules; and their presence is positively correlated with the expression of genes responsible for extracellular matrix synthesis. Proteoglycans more than extracellular matrix components are tissue organizers capable of modulating cell growth and maturation in specialized tissues. In order to repair the tendon injury there are several treatment options, but none has been reported as fully effective. In this scenario, regenerative approaches are currently preferred over reparative therapeutic procedures. Therefore, the aim of this study was to investigate the influence of platelet-rich plasma (PRP) in the healing of the equine superficial digital flexor tendon, using this treatment, alone or associated with the laser therapy. For this purpose, 26 equine forelimbs were randomly divided into four groups: group 1 (G1) consisted of eight healthy forelimbs from fresh cadavers; in group 2 (G2), tendinitis was induced in six forelimbs, without performing any type of treatment; in group 3 (G3), tendinitis was also induced in six forelimbs which received PRP treatment; and in group 4 (G4), tendinitis was induced in six forelimbs that received treatment with PRP associated with laser therapy. All animals were evaluated clinically and sonographically. Additionally, tendon tissue samples were obtained by ultrasound-guided biopsy, and assessed by immunohistochemistry to determine proteoglycans expression (decorin, biglycan, fibromodulin and aggrecan). These samples were further analyzed for collagen organization through birefringence. In the clinical evaluation, only G4 animals had absent painful response to direct digital palpation at the end of the experiment. During sonographic evaluation, it was observed that tendons from groups G3 and G4, that received the treatment with PRP, demonstrated improvement in both tendon and lesion echogenicity. Furthermore, tendons from the G4 group showed improvement in axial alignment of collagen fibers. The results showed an increase in biglycan, fibromodulin and aggrecan expression at immunohistochemical evaluation of G4 samples, when compared with healthy tendon samples (G1). In tendons from the G2 group only an increased aggrecam expression compared to G1 was observed. Though the analysis of the collagen birefringence, the highest value of optical retardation (OR) was also presented in the samples of the group treated with the combination of PRP and laser (G4). During the regeneration process of an injured tendon, there is a trend to increase OR values, which represents an improvement of the collagen organization. Probably, the laser was able to induce an increased synthesis and a better aggregation and alignment of collagen. So, we conclude that the animals treated with PRP associated with laser therapy improved clinically and sonographically. Moreover, this treatment improved the arrangement of collagen fibril and enhanced the proteoglycans expression in the extracellular matrix, what did not occur when PRP treatment was used alone.

A esquizofrenia é uma doença crônica, grave e incapacitante que afeta cerca 24 milhões de pessoas em âmbito mundial. É caracterizada por uma desorganização no pensamento que prejudica a funcionalidade do indivíduo. Existem intervenções que são efetivas e contribuem para a diminuição da prevalência do transtorno, pois ajudam o portador a levar uma vida produtiva e integrada à sociedade, porém devem ser ministradas nos estágios iniciais da doença. No entanto, existe uma grande dificuldade em se diagnosticar a esquizofrenia precocemente devido a sua complexidade e às sutilezas dos seus sintomas apresentados antes do surgimento da psicose. O cérebro não é acessível a exames invasivos in vivo e por esse motivo a exploração de fluidos periféricos é de grande importância. As plaquetas e neurônios serotonérgicos possuem características bioquímicas e morfológicas em comum que possibilitam a comparação entre a estrutura e a função de ambos e, por causa dessa similaridade, muitos trabalhos utilizam plaquetas como modelo para o estudo de doenças neuropsiquiátricas, inclusive a esquizofrenia. A detecção precoce da esquizofrenia é um objeto de investigação atual e relevante não somente para revolucionar os meios atuais de diagnóstico, mas também para desenvolver novos tratamentos aplicados aos estágios iniciais da doença, diferenciar os subgrupos de doentes e monitorar as intervenções preventivas. A proposta do presente trabalho é fazer o estudo da expressão de proteínas em plaquetas de pacientes esquizofrênicos e controles com o objetivo de identificar proteínas candidatas a biomarcadores utilizando técnicas proteômicas quantitativas e confiáveis, como 2D-DIGE e a espectrometria de massas. / Schizophrenia is a disabling, serious, and chronic illness, which affects about 24 million people worldwide. It is characterized by a severe disorganization of the thoughts that harms the social life of patients becoming them dependent of the family and/or government. There are effective treatments that contribute to decrease the prevalence of the disorder because they improve the life and social conditions of the patients, but they are only advantageous if the intervention is made in the early stages of the disease. It is difficult to obtain early diagnosis due to the complexity of the disease and its insidious symptoms before the beginning of the psychosis. The brain is not easily accessed in vivo and, because of this, it is very important to study the peripheral tissues like blood, which makes the use of the platelets very interesting. Furthermore, platelets and serotonergic neurons share biochemical and morphological characteristics that allows the comparison between structure and function of both. From these similarities many authors has used platelets as a neuron model to study many neurodegenerative diseases including schizophrenia. The early detection of schizophrenia is a current and suitable goal, not only to improve the early diagnosis but also to develop new treatments, differentiate the subtypes, and monitor the preventive interventions. The purpose of this project is to do a comparative screening of expressed proteins in platelets from schizophrenics and controls with the objective of finding differently expressed proteins that could be candidates to biomarkers using 2D-DIGE and mass spectrometry.

Submitted by PPG Medicina e Ci?ncias da Sa?de (medicina-pg@pucrs.br) on 2017-11-23T10:48:18Z No. of bitstreams: 1 FRANCIELE_DIETRICH_TES.pdf: 3499792 bytes, checksum: c6cf1d1c8ad84ed3af5c5b4a075c3eb9 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-12-01T11:50:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FRANCIELE_DIETRICH_TES.pdf: 3499792 bytes, checksum: c6cf1d1c8ad84ed3af5c5b4a075c3eb9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-01T11:54:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FRANCIELE_DIETRICH_TES.pdf: 3499792 bytes, checksum: c6cf1d1c8ad84ed3af5c5b4a075c3eb9 (MD5) Previous issue date: 2017-07-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The increasing incidence of tendon injuries is a constant challenge in orthopaedic medicine. The use of platelet-rich plasma (PRP) is a strategy widely explored in the clinic because it is believed to accelerate the tendon repair process. However, the PRP clinical efficacy is uncertain, and more studies that aim to a better understanding of this treatment are needed. The aim of this research was to evaluate the PRP effect on the Achilles tendon (AT) repair of rats. A total of 242 rats were used, where 181 animals were randomly distributed in 6 different experiments. The remaining animals were used as blood donors (n=49) and for flow cytometry (n=12). The lesion was performed by transection of the right AT. The repair evaluation occurred after 11 and 14 postoperative days, with a mechanical testing machine. Peak force was considered the primary variable. Variations in the PRP production protocols, leukocyte concentration and physical activity of the rats were tested. ELISA test was performed to quantify platelet-derived growth factor (PDGF-AB) present in PRP. Pathogenfree animals and animals contaminated with Staphylococcus aureus (S. aureus) were used. Standard PRP platelet concentration was at least 5 times higher than that of the peripheral blood, and it was possible to have either a high or a low leukocyte concentration in the preparation. PDGF-AB levels in inactivated PRP were 7.3 ?g/mL (SD 6.0; n=4) and in plasma were below the detection levels (0.03 ng/mL). In the experiments performed with pathogen-free rats, no significant effect of PRP could be observed on tendon repair. In the same way, no significant difference could be found in the rats treated with PRP with higher or lower leukocyte concentration. In contrast, rats contaminated with S. aureus showed increased tendon force after PRP treatment. Significant interaction between bacteriological status and PRP treatment was verified (p=0.003). It was further observed that healthy rats had higher levels of cytotoxic T cells in their spleens. The difference in response to treatment in contaminated rats suggests that the PRP effect is dependent on the immune status of the animals. This is the first study that suggests the possibility of interaction between microbiota and tendon repair. Extrapolation of this treatment to the clinic remains dubious. / A crescente incid?ncia de les?es tend?neas constituem um desafio constante na medicina ortop?dica. A utiliza??o do plasma rico em plaquetas (PRP) ? uma estrat?gia amplamente explorada na cl?nica por creditar-se que acelera o processo de reparo tend?neo. Contudo, a efic?cia cl?nica do PRP ? question?vel, e mais estudos que visem uma melhor compreens?o deste tratamento s?o necess?rios. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o efeito do PRP no reparo do tend?o de Aquiles (TA) de ratos. Um total de 242 ratos foram utilizados, sendo 181 animais randomicamente distribu?dos em 6 diferentes experimentos. Os animais restantes foram utilizados como doadores sangu?neos (n= 49) e para realiza??o de citometria de fluxo (n=12). A les?o foi executada atrav?s de transec??o do TA direito. A avalia??o do reparo foi feita 11 e 14 dias p?s-cir?rgico, atrav?s de m?quina de teste mec?nico. O pico de for?a foi considerado a vari?vel principal. Varia??es no protocolo de produ??o de PRP, concentra??o de leuc?citos e atividade f?sica dos ratos foram testados. O teste de ELISA foi realizado a fim de quantificar o fator de crescimento derivado das plaquetas (PDGF-AB) presente no PRP. Foram utilizados animais livres de pat?genos e animais contaminados com Staphylococcus aureus (S. aureus). A concentra??o plaquet?ria do PRP padr?o foi pelo menos 5 vezes maior que a do sangue perif?rico, e foi poss?vel obtermos tanto uma alta ou baixa concentra??o de leuc?citos no preparado. Os n?veis de PDGF-AB no PRP inativado foram de 7.3 ?g/mL (DP 6.0; n=4) e no plasma sangu?neo foram abaixo dos n?veis de detec??o (0.03 ng/mL). Nos experimentos realizados com ratos livres de pat?genos, nenhum efeito significativo do PRP p?de ser observado no reparo tend?neo. Da mesma forma, nenhuma diferen?a significativa p?de ser encontrada nos ratos tratados com PRP com alta ou baixa concentra??o de leuc?citos. Em contraste, os ratos contaminados com S. aureus demonstraram aumento da for?a tend?nea ap?s o tratamento com PRP. Significante intera??o entre estado bacteriol?gico e tratamento PRP foi verificada (p=0.003). Observou-se ainda, que ratos saud?veis possu?am maiores n?veis de c?lulas T citot?xicas em seus ba?os. A diferen?a na resposta ao tratamento em ratos contaminados sugere que o efeito do PRP ? dependente do estado imune dos animais. Esse ? o primeiro estudo que sugere a possibilidade de intera??o entre microbiota e reparo tend?neo. A extrapola??o deste tratamento para a cl?nica permanece d?bia.

A cicatrização das lesões ligamentares é lenta e muitas vezes ineficiente. Uma vez lesado, o ligamento suspensor do boleto (LSB) dificilmente recupera suas propriedades biomecânicas originais. A desmite do LSB proximal dos membros torácicos ocorre em cavalos de todas as raças e todas as disciplinas esportivas. O objetivo deste trabalho foi avaliar clinicamente e por ultrassonografia, a influência do plasma rico em plaquetas (PRP), e do PRP associado ao LASER terapêutico, na cicatrização da região proximal do LSB, em cavalos com desmite induzida por colagenase. Para isto foram utilizados 18 animais sem raça definida, distribuídos em três grupos. O G1 foi formado por seis animais, submetidos a indução da desmite na região proximal do LSB, que não receberam qualquer tratamento. O G2 foi formado por seis animais, que foram submetidos a desmite induzida e após três semanas receberam aplicação intralesional de PRP guiada pelo ultrassom. O G3 foi formado por seis animais, que após indução da desmite receberam tratamento com LASER terapêutico a partir da segunda semana, e na terceira semana pós-lesão receberam aplicação intralesional de PRP guiada pelo ultrassom. A indução da desmite foi realizada por meio de infiltração guiada pelo ultrassom na região proximal do LSB, sendo este considerado o tempo 0. A cada semana e até a semana oito, os cavalos foram avaliados clinicamente, por ultrassonografia e por análise cinemática, ao trote em linha reta. Houve diferença significativa na comparação entre grupos para as variáveis aumento de volume na avaliação clínica, e área no corte transversal do ligamento e, área no corte transversal da lesão na avaliação ultrassonográfica. Na comparação entre os diferentes momentos de observação as variáveis aumento de volume e dor à palpação do G2 e G3 mostraram escores maiores quando comparados ao G1, sendo que o G2 apresentou escore maior que o G3. Ultrassonograficamente, a ecogenicidade da lesão mostrou diminuição dos escores, a partir da quinta semana de avaliação nos grupos tratados. As demais variáveis clínicas ou ultrassonográficas, bem como a análise cinemática da claudicação não mostraram diferenças significativas entre os grupos. O PRP, apesar de ocasionar inflamação leve e transitório após infiltração, influenciou positivamente o processo de cicatrização da parte proximal do LSB, com um efeito analgésico adicional quando associado ao LASER terapêutico. / The healing process of injured ligaments is slow and often inefficient. Once damaged the suspensory ligament (SL) hardly recover their original biomechanical properties. The forelimb proximal suspensory ligament desmitis occurs in horses of all breeds and all sports. The aim of this study was to evaluate clinically and ultrasonographically, the influence of platelet-rich plasma (PRP), and PRP associated with LASER therapy, on the healing process of the proximal region of the SL in horses with collagenase-induced demitis. For this purpose it were used 18 cross breed horses divided into 3 groups. G1 was composed of six horses subjected to induction of proximal suspensory desmitis, with no treatment. G2 was composed of six horses subjected to desmitis induction and after three weeks they received ultrasound-guided intralesional injection of PRP. G3 was composed of six horses subjected to desmitis induction and after two weeks they received laser therapy and one week later they received intralesional guided-ultrasound injection of PRP. Induction of desmitis was made using ultrasound-guided infiltration in PSL, which was considered day zero. Horses were evaluated clinically, in straight line trot for cinematic analysis and ultrasonographically, every week until eighth week. There were significant difference between groups for swelling, the cross-sectional area of the ligament, and the cross-sectional area of the injury on ultrasound evaluation. Comparing the different times of observation, descriptively were a difference for G2 and G3 in the clinical variables that evaluated swelling and pain on palpation, showed higher scores compared to the G1, and G2 had higher scores than the G3. Sonographically, the echogenicity of the lesion showed decreased scores from the fifth week of evaluation in the treated groups. The other clinical variables or ultrasound, as well as the kinematic analysis of lameness showed no significant differences between groups. PRP, although causing transient and mild inflammation after infiltration, positively influenced the healing process of the proximal part of the SL, with additional analgesic effect when combined with laser therapy.