Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2019-02-06T16:42:48Z No. of bitstreams: 1 Amanda Feba Tetila.pdf: 624432 bytes, checksum: 02fdc1e6bd21bfbcd706448afe017b9c (MD5) / Made available in DSpace on 2019-02-06T16:42:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amanda Feba Tetila.pdf: 624432 bytes, checksum: 02fdc1e6bd21bfbcd706448afe017b9c (MD5) Previous issue date: 2018-09-28 / Tissue engineering, as well as regenerative medicine, are fields that have been growing in recent years, aiming to repair, regenerate or replace damaged tissues and organs. PRP has been extensively studied in the areas of plastic surgery and dermatology with a focus on scar remodeling. Numerous studies with are still being done in search of new findings related to this blood element. Evidence is proving to favor the use of statins in skin lesions. In addition to lowering cholesterol, statins improve endothelial function, increase the stability of atherosclerotic plaques, and inhibit the inflammatory process. In this sense, the present study analyzed the collagen fibers of rabbit wounds after PRP treatment associated or not to RSV. The hypothesis is that serial use of RSV associated with PRP may improve the amount of neoformed collagen fibers after experimentally induced injury. 8 male New Zealand rabbits treated with autologous PRP, rosuvastatin (RSV) and association (PRP + RSV) were used to prepare the four wounds on the back of each rabbit. The treated wound was treated with 0.9% sodium chloride solution and the others treated with PRP isolated and / or associated with RSV. The dressings were changed every 4 days with application of PRP and rosuvastatin until 16 days of experiment. Biopsies were made at 0,7,10,14 and 17 days for histopathological evaluation of the scar tissue. Regarding the histopathological evaluation, at the end of 17 days of treatment, there was re-epithelialization in 100% of the wounds that received PRP only, opposing with 50% only with rosuvastatin and 75% when there was an association of the biomaterial with the statin. The combination of rosuvastatin and PRP inhibited blood loss. The use of PRP alone provided 62.5% of neovascularization, against 50% in wounds that had association of treatments. With regard to the percentage of collagen fibers at 170 days, all wounds had a higher percentage of fibers when compared to the control (78.27 ± 4.69). Although statistically equal, it was observed that the wound that received only RSV had the lowest amount of collagen fibers (85.98 ± 3.51). Wounds that received PRP or PRP and RSV presented 90.07 ± 6.20 and 90.76 ± 3.51, respectively. It is concluded that the PRP has greater activity in the first seven days of the lesion and that the treatment with RSV, alone or associated with PRP did not potentiate the other phases of healing, nor did it increase the percentage of collagen fibers. / A engenharia tecidual, assim como a medicina regenerativa são campos que vêm crescendo nos últimos anos, tendo o objetivo de reparar, regenerar ou substituir tecidos e órgãos lesados. O PRP tem sido bastante estudado nas áreas de cirurgia plástica e dermatologia com enfoque na remodelação de cicatrizes. Numerosos estudos com ainda estão sendo feitos em busca de novas descobertas relacionadas a esse elemento sanguíneo. Evidências estão se mostrando favoráveis ao uso de estatinas em lesões de pele, Além de reduzir o colesterol, as estatinas melhoram a função endotelial, aumentam a estabilidade das placas ateroscleróticas e inibem o processo inflamatório. Neste sentido, o presente estudo analisou as fibras colágenas de feridas de coelhos após tratamento PRP associado ou não à RSV. A hipótese baseia-se que o uso seriado da RSV associado ao PRP possa melhorar a quantidade das fibras colágenas neoformadas após lesão experimentalmente induzida. Foram utilizados 8 coelhos da raça Nova Zelândia, machos, adultos, tratados com PRP autólogo, rosuvastatina (RSV) e associação (PRP+RSV) Para confecção das quatro feridas no dorso de cada coelho utilizou-se um punch de 8mm. A ferida considerada controle foi tratada com solução de cloreto de sódio a 0,9%® e as demais tratadas com PRP isolado e/ou associado à RSV. Os curativos forma trocados a cada 4 dias com aplicação do PRP e rosuvastatina até completarem 16 dias de experimento. Aos 0,7,10,14 e 17 dias foram feitas biópsias para avaliação histopatológica do tecido cicatricial. Com relação à avaliação histopatológica, verificou-se que, ao final de 17 dias de tratamento, houve reepitelização em 100% das feridas que receberam somente PRP, contrapondo com 50% só com rosuvastatina e 75% quando houve associação do biomaterial com a estatina. A associação da rosuvastatina ao PRP inibiu a perda de sangue. O uso do PRP isolado proporcionou 62,5% de neovascularização, contra 50% nas feridas que tiveram associação dos tratamentos. Com relação porcentagem de fibras colágenas ao 170 dia, todas as feridas apresentaram maior porcentagem de fibras quando comparadas ao controle (78,27±4,69). Embora estatisticamente iguais, observou-se que a ferida que recebeu somente a RSV apresentou a menor quantidade de fibras colágenas(85,98±3,51). Já as feridas que receberam PRP ou PRP e RSV apresentaram, respectivamente 90,07±6,20 e 90,76±3,51. Conclui-se que o PRP possui maior atividade nos sete primeiros dias da lesão e que o tratamento com a RSV, sozinho ou associado ao PRP não potencializou as demais fases da cicatrização, nem aumentou a porcentagem de fibras colágenas.

Um dos desafios recorrentes na prática clínica da Oncologia é o processo de repopulação, no qual células tumorais resistentes à terapia são capazes de proliferar e reconstituir o tumor. No entanto, os mecanismos envolvidos neste fenômeno ainda foram pouco explorados, sendo necessário melhor compreendê-los para evitar a falha terapêutica. Melanomas são bons modelos para estudar repopulação devido às baixas taxas de sobrevida livre de progressão e às altas taxas de resistência às terapias associadas a este tipo de tumor sólido. Sabe-se que a exposição de células tumorais a condições estressoras do microambiente, como hipóxia e hipóxia/reoxigenação, bem como ao próprio tratamento antitumoral, são pressões seletivas frequentemente encontradas em tumores sólidos que favorecem a resistência às terapias e a repopulação tumoral. Estudos prévios indicam que a sinalização mediada pelo Fator de Ativação de Plaquetas (PAF), um lipídio bioativo relacionado à diversas funções fisiológicas, e de seu receptor, PAFR, está associada com a resistência de células de melanoma aos tratamentos citotóxicos e com crescimento tumoral. Portanto, este trabalho teve como objetivo investigar o envolvimento da sinalização de PAFR frente às condições estressoras descritas acima no fenômeno de repopulação de melanomas. Os resultados de espectrometria de massa indicaram que hipóxia aumentou a geração de PAF nas linhagens de melanoma humano SKmel05 e A375, mas não na A375M, embora este aumento não tenha sido observado após a reoxigenação. Além disso, mostraram que SKmel37 exibiu os maiores níveis basais de PAF, aumentando substancialmente sua geração em diferentes tempos de exposição à hipóxia e hipóxia/reoxigenação. Investigamos também a geração de outros ligantes de PAFR, porém nenhum deles foi encontrado nas amostras. Os resultados de detecção de PAFR por Western Blot e/ou citometria de fluxo revelaram que os níveis proteicos não foram modulados por estas condições em nenhuma das linhagens e que, em termos basais, SKmel37 e SKmel05 apresentaram os maiores níveis. Estas linhagens foram, portanto, submetidas a ensaios de proliferação, os quais evidenciaram que frente ao tratamento com o antagonista de PAFR, WEB2086, em condições de hipóxia e hipóxia/reoxigenação, apenas as células SKmel37 tiveram sua proliferação reduzida e morfologia associada à morte. Ensaios de incorporação de iodeto de propídio indicaram que o tratamento destas células expostas à hipóxia/reoxigenação com WEB2086 levou a acúmulo em SG2M, morte celular e sensibilização à cisplatina. Além disso, imunofluorescência de cortes congelados de tumores induzidos com SKmel37 revelou que houve acúmulo de PAFR em áreas hipóxicas e em seu entorno. Em relação ao modelo de exposição à tratamentos antitumorais, por sua vez, curvas de concentração e tempo com Vemurafenib mostraram que SKmel37 e A375 foram resistentes à droga, ao passo que SKmel05 e UACC62 foram sensíveis. Além disso, WEB2086 potencializou o efeito de morte induzido por Vemurafenib nas linhagens sensíveis, mas não afetou as resistentes. Considerando os aspectos clínicos de resposta inicial com posterior desencadeamento de repopulação, seguimos com as linhagens sensíveis e verificamos por citometria que esta droga aumentou ROS em ambas as linhagens, mas só aumentou PAFR extracelular na SKmel05. O tratamento combinado potencializou a geração de ROS e levou a ativação de caspase3/7 apenas na SKmel05. Esta linhagem foi então submetida a ensaios clonogênicos cujos resultados mostraram que o tratamento com Vemurafenib reduziu o número de clones e que WEB2086 não potencializou este efeito. Assim, o conjunto de resultados apresentados evidencia que a sinalização de PAFR participa dos desfechos de sobrevivência frente à hipóxia/reoxigenação e/ou tratamentos antitumorais, podendo, de alguma forma, contribuir com a repopulação de melanomas / One of the recurrent challenges in the clinical practice of Oncology is the process of repopulation, in which therapy-resistant tumor cells can proliferate and reconstitute the tumor. However, the mechanisms involved in this phenomenon were still little explored. The understanding of these events is, therefore, needed to avoid therapeutic failure. Melanomas are good models for studying repopulation due to the low rates of progression-free survival and the high rates of resistance to therapies associated to this type of solid tumor. It is known that the exposure of tumor cells to microenvironmental stress conditions, such as hypoxia and hypoxia/reoxygenation, as well as the exposure to antitumor treatment itself, are selective pressures frequently found in solid tumors that favor therapy resistance and tumor repopulation. Previous studies have indicated that the signaling mediated by the Platelet Activation Factor (PAF), a bioactive lipid related to various physiological functions, and its receptor, PAFR, is associated with resistance of melanoma cells to cytotoxic treatments and with tumor growth. Therefore, the aim of this study was to investigate the involvement of PAFR signaling upon the adverse conditions described above in the phenomenon of melanoma repopulation. Mass spectrometry results indicated that hypoxia increased the generation of PAF in human melanoma cell lines SKmel05 and A375, but not in A375M, although this increase was not observed after reoxygenation. In addition, they showed that SKmel37 exhibited the highest PAF basal levels, whose generation increased substantially after different times of hypoxia and hypoxia/reoxygenation exposure. We also investigated the generation of other PAFR ligands, but none were found in the samples. The results of PAFR detection by Western Blot and/or flow cytometry revealed that protein levels were not modulated by these conditions in any of the cell lines and that, at baseline, SKmel37 and SKmel05 showed the highest levels. These lines were therefore submitted to proliferation assays, which showed that the treatment with the PAFR antagonist, WEB2086, under conditions of hypoxia and hypoxia/reoxygenation, led to proliferation reduction and death-associated morphology in SKmel37 cells only. Propidium iodide incorporation studies indicated that the treatment of these cells exposed to hypoxia/reoxygenation with WEB2086 led to accumulation in SG2M, cell death and cisplatin sensitization. In addition, immunofluorescence of frozen sections of SKmel37-induced tumors revealed that PAFR was found accumulated in hypoxic areas and its surroundings. Regarding the model of exposure to antitumor treatments, concentration and time curves with Vemurafenib showed that SKmel37 and A375 were resistant to the drug, whereas SKmel05 and UACC62 were sensitive. In addition, WEB2086 potentiated the effect of Vemurafenib-induced death on sensitive cell lines but did not affect the resistant ones. Considering the clinical aspects of initial response with subsequent repopulation triggering, we continued using the sensitive cell lines and we verified by cytometry that this drug increased ROS in both cell lines but only increased extracellular PAFR in SKmel05. The combined treatment potentiated the generation of ROS and led to the activation of caspase3/7 in SKmel05 only. This cell line was then submitted to clonogenic assays whose results showed that treatment with Vemurafenib reduced the number of clones and that WEB2086 did not potentiate this effect. Thus, the set of results presented highlights that PAFR signaling participates in the survival outcomes upon hypoxia/reoxygenation and/or antitumor treatments, and may, in some way, contribute to the repopulation of mel

Determina los títulos anti-A y anti-B isotipo IgM e IgG en 339 muestras de plasma de donantes de plaquetas por aféresis del grupo O. Doscientos ochenta y siete (287) son donantes masculinos y cincuenta y dos (52) son donantes femeninos. Su edad oscilaba entre 18 y 59 años. La determinación de anticuerpos anti-A y anti-B se realizó utilizando el método de aglutinación directa para anticuerpos IgM y adherencia en fase sólida para anticuerpos IgG. El valor crítico establecido para determinar a donantes con alto título de anticuerpos fue para IgM >= 64 y para IgG >=256. Los donantes son categorizados en grupos etarios y género. Nuestros resultados mostraron que los títulos anti-A oscilaron entre 4 y 2048 (título medio: 64), mientras que los títulos anti-B oscilaron entre 1 y 512 (título medio: 32). El título medio para IgM Anti-A fue 32 y para IgM Anti-B fue 16, para el isotipo IgG, el título medio para Anti-A y Anti-B fue 64. La frecuencia de los donantes de plaquetas por aféresis grupo O, con "alto título" anti-A y anti-B fue, 44,5% y 21,8% respectivamente. No hubo diferencias estadísticamente significativas entre los donantes, cuando se dividieron en grupos etarios, sin embargo, si se halló relación entre el género y la presencia de anticuerpos con alto título. En conclusión, los concentrados de plaquetas obtenidos por aféresis, provenientes de donantes con alto título de anticuerpos, deben transfundirse en receptores isogrupo siempre que sea posible para evitar reacciones posts transfusionales, para ello, cada institución debería establecer una política de manejo de estos hemocomponentes. / Tesis

INTRODUCCIÓN: Los factores de crecimiento y otras moléculas con capacidad osteoinductora pueden considerarse biomateriales que poseen actividad importante en los procesos de reparación y regeneración de los seres vivos. Esta capacidad puede utilizarse para favorecer, asegurar y aumentar lo procesos de reparación del tejido óseo. En esta tesis doctoral se realiza el estudio de la aplicación aislada en un defecto óseo, de un compuesto rico en plaquetas y factores de crecimiento, el plasma rico en plaquetas (PRP).MATERIAL Y MÉTODO: Hemos realizado un estudio experimental prospectivo, comparativo bilateral y controlado, interviniendo quirúrgicamente 30 conejos raza Nueva Zelanda, a los que se practicó defectos cavitarios de 6mm de diámetro en la metáfisis proximal de tibia y defecto un diafisarios de 6mm en el peroné. Los animales fueron divididos en 2 grupos de 15 individuos que recibieron como ttº plasma rico en plaquetas (PRP) o plasma pobre en plaquetas (ppp) en sus tibias y peroné derechos. La tibia y peroné izquierdo se utilizó como grupo control sin recibir ningún tipo de tratamiento. Los resultados se obtuvieron por medio de estudios radiológicos, TAC e histológico a las 8, 12 y 16 semanas.RESULTADOS: El estudio de las imágenes de reconstrucción de TAC, densidad mineral ósea y el análisis cualitativo de la histología reveló una mejoría del grupo tratado con plasma pobre en plaquetas (ppp) sin ser las diferencias estadísticamente significativas. Los procesos de reparación se realizaron fundamentalmente por una osificación membranosa sin observarse focos de osificación endocondral. El estudio estadístico de las diferentes variables en función del tiempo de evolución y tipo de tratamiento empleado no presentó ninguna diferencia significativa. (P < 0.05).CONCLUSIÓN: El plasma rico en plaquetas, sustancia o compuesto autólogo, seguro y fácil de obtener, en nuestro modelo experimental de defectos óseos en el animal de experimentación no se comporta como un sustitutivo óseos con capacidad osteoinductora ni osteopromotora. / INTRODUCTION: Growth factors and others molecules with osteoinductive capacity could be considered biomaterials with an important role in the biological prossess of healing in the human body. These properties could be potentially employed to enhance bone healing. Platelet rich plasma and growth factors alone were studied in an experimental bone defect model in this PhD Thesis.MATERIAL AND METHOD: A prospective, comparative bilateral and controlled experimental study was performed. A bone cavitary defect of diameter 6 mm. in the proximal tibial methaphyses and a 6 mm diaphysal fibula defect was made on 30 New Zealand white rabbits. The animals were divided in two groups of 15 rabbits that received, as treatment of the defect, platelet rich plasma (PRP) or platelet poor plasma (ppp) in the right tibia and fibula. The left tibia and fibula were untreated as a control group. The results were evaluated with a radiological, CTScan and histological studies at 8, 12 and 16 weeks.RESULTS: The 3D images from CTscan reconstruction, bone mineral density (BMD) and cualitative histological studies demonstrated an improvement in the platelet poor plasma group (ppp) without statistically significant differences. The bone regeneration was obtained from a membranous process without encondral reaction. The statistical study of different variables in relation to time and type of treatment revealed no significant differences (P < 0.05).CONCLUSION: Platelet rich plasma, easy to obtain, safe and autologous compound does not work as bone substitute with an osteoinduction capability in our bone defect experimental animal model.

Orientador: Yasmin Rodarte Carvalho / Banca: Rubens Guimarães Filho / Banca: Carla Roberta Tim / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Mônica Ghislaine Oliveira Alves / Resumo: Estudos anteriores sugerem que o ácido hialurônico (AH) e o plasma rico em plaquetas (PRP) têm potencial para melhorar o processo de cicatrização da cartilagem e diminuir a progressão da osteoartrite. No entanto, poucas pesquisas avaliam seu efeito sinérgico. Este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito do AH associado ao PRP na regeneração do disco articular e da superfície osteocondral da articulação temporomandibular (ATM). A osteoartrite será induzida por meio da perfuração bilateral do disco articular de coelhos. Quarenta coelhos foram divididos em 4 grupos, conforme o procedimento: sem lesão(SL)/sem tratamento(ST) (n=4), lesão(L)/sem tratamento (ST) (n=12), L/AH (n=12), L/AH+PRP (n=12). Quatro coelhos do grupo SL/ST foram eutanasiados no tempo zero. Após 8 e 24 semanas da perfuração dos discos articulares, seis coelhos dos grupos L/ST, L/AH e L/AH+PRP foram eutanasiados. O disco articular foi avaliado radiograficamente para visualizar possíveis calcificações. Foi realizada análise macroscópica e histológica do disco e do côndilo mandibular. Foi utilizada a análise histoquímica por Picrosirius Red para avaliar a presença de colágeno I e III e a análise imuno-histoquímica do colágeno I e II. As porcentagens de marcação obtidas nas análises histoquímica e imuno-histoquímica foram avaliadas estatisticamente, adotando-se o nível de significância de 5%. Macroscopicamente, o disco articular nos grupos tratados apresentou, na maioria dos espécimes, preenchimento parcial ou ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract : Previous studies have suggested that hyaluronic acid (HA) and platelet-rich plasma (PRP) have the potential to improve the healing process of cartilage and decrease the progression of osteoarthritis. However, few studies have evaluated their synergistic effect. This study aims at evaluating the effect of HA associated with PRP on the regeneration of the articular disc and the osteochondral surface of the temporomandibular joint (TMJ). Osteoarthritis was induced by means of bilateral perforation of the articular disc of rabbits. Forty rabbits were divided into 4 groups, according to the procedure: without lesion (WL)/without treatment (WT) (n = 4), lesion (L)/without treatment (WT) (n = 12), L/HA (n = 12), L/ HA+PRP (n = 12). Four rabbits from group G1 were euthanized at time zero. After 8 and 24 weeks of joint disc perforation, six rabbits from groups L/WT, L/HA and L/HA+PRP were euthanized. The articular disc was evaluated radiographically to visualize possible calcifications. Macroscopic and histological analysis of the disc and the mandibular condyle were performed. The histochemical analysis by Picrosirius Red was used to evaluate the presence of collagen I and III, as well as the immunohistochemical analysis was used to evaluate the expression of collagen I and II. The percentages of staining obtained from the histochemical and immunohistochemical analysis were statistically evaluated, adopting the significance level of 5%. Macroscopically, the articular disc in the treated groups presented in most of the specimens partial or total filling of the defect created. The condyles presented, in most of the specimens, degeneration of the osteochondral surface. Radiographically, after 24 weeks of disc perforation, foci of radiopacity were observed in the untreated and in some of the specimens of treated groups. Histological analysis confirmed the presence ......(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: José Carlos Silva Camargo Filho / Banca: Luiz Carlos Marques Vanderlei / Banca: Mário Jefferson Quirino Louzada / Resumo: O tratamento de lesões musculares geralmente resulta na interrupção da atividade esportiva, por isso estudos que visam antecipar o retorno à atividade, com o adequado reparo tecidual se tornam importantes. Sendo assim, o presente estudo objetivou avaliar o efeito da terapia a laser de baixa intensidade (LLLT) associada ou não ao plasma rico em plaquetas (PRP) no tratamento de lesão muscular. Foram utilizados 42 animais separados em seis grupos (n=7): Controle (C), Controle Lesão Aguda (CLA), Controle Lesão (CL), Lesão LLLT (LLt), Lesão PRP (LP), e Lesão LLLT e PRP (LLtP). A lesão muscular foi induzida por estiramento no músculo gastrocnêmio e, os animais dos grupos LP e LLtP, receberam a aplicação do PRP imediatamente após a lesão, o LLLT foi aplicado diariamente por sete dias. Os animais foram eutanasiados no sétimo dia após a lesão, exceto o grupo CLA, que foi eutanasiados 48 horas após a lesão. Lâminas histológicas do músculo gastrocnêmio foram confeccionadas sem corante para análise por Raman e coradas com Hematoxilia e Eosina (HE) e Picrosirius, que foram analisadas histologicamente, e por meio da dimensão fractal (DF), analisando o infiltrado inflamatório e o colágeno. A análise de NAD e NADH foi realizada por espectroscopia de RAMAN... / Abstract: Treatment of muscle injuries usually results in the interruption of sports practice, so studies aimed at anticipating the return to activity, with proper tissue repair become important. Therefore, this study intended to evaluate the effect of low level laser therapy (LLLT) associated or not with platelet-rich plasma (PRP) in the treatment of muscle injury. Forty two animals were used divided into six groups (n=7), Control (C), Acute Injury Control (CLA), Injury Control (CL), Injury LLLT (LLT), injury PRP (LP), and injury LLLT and PRP (LLtP). Muscle injury were induced by stretching the gastrocnemius muscle and the animals of groups LLtP and LP received the application of PRP immediately after the injury. The LLLT were applied daily for seven days. The animals were euthanized seven days after the injury, except the CLA group, which were euthanized 48 hours after injury. Histological slides of the gastrocnemius muscle were prepared without stained for Raman analyze and stained by Hematoxylin and eosin (HE), and Picrosirius witch are analyzed by fractal dimension (DF), analyzing the inflammatory infiltrated and collagen. Analysis of NADH and NAD were performed by Raman spectroscopy... / Mestre

Orientador: Fabio Luiz Camargo Villela Berbert / Resumo: O melhor tratamento para dentes permanentes avulsionados é o reimplante imediato, porém, quando o dente permanece fora do alvéolo por longo período, o prognóstico pode ser prejudicado. Condutas têm sido buscadas na tentativa de melhorar os problemas decorrentes de reimplantes tardios. A laserterapia, devido à sua propriedade anti-inflamatória, e o plasma rico em plaquetas (PRP), devido à liberação de fatores de crescimento, são boas alternativas visando atenuar o processo inflamatório e auxiliar o processo de reparo. Avaliou-se os efeitos da laserterapia, da aplicação do PRP e da associação de ambos sobre o reimplante tardio de incisivos superiores de ratos. Cinquenta animais foram divididos em dez grupos experimentais (n=5): grupo controle onde o incisivo superior direito não recebeu alguma intervenção, e nove grupos onde houve a extração dentária simulando uma avulsão seguida do reimplante após 40 minutos. Em um desses grupos, a polpa foi mantida no canal radicular, e os demais foram submetidos à um protocolo de tratamento, de acordo com a condição da cavidade pulpar (manutenção da polpa, preenchimento com hidróxido de cálcio ou preenchimento com PRP) e tratamento do alvéolo/periodonto (coágulo ou PRP com ou sem laserterapia). As avaliações foram realizadas por meio de análise histológica e histoquímica após 30 dias e por microtomografia computadorizada (micro-CT) sobrepondo-se as imagens dos períodos imediato e 30 dias após o reimplante. Os dados obtidos a ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The best treatment for avulsed permanent teeth is immediate replantation, but when the tooth remains outside the alveolus for a long period, the prognosis may be impaired. Pipelines have been sought in an attempt to improve the problems arising from late reimplants. Laser therapy, due to its anti-inflammatory property, and platelet-rich plasma (PRP), due to the release of growth factors, are good alternatives aimed at attenuating the inflammatory process and assisting the repair process. The effects of laser therapy, the application of PRP and the association of both on the delayed replantation of upper incisors of rats were evaluated. Fifty animals were divided into ten experimental groups (n = 5): control group where the right upper incisor did not receive any intervention, and nine groups where the dental extraction was performed simulating an avulsion followed by reimplantation after 40 minutes. In one of these groups, the pulp was maintained in the root canal, and the others were submitted to a treatment protocol, according to the condition of the pulp cavity (pulp maintenance, calcium hydroxide filling or filling with PRP) and treatment of the pulp. Alveolus / periodontium (clot or PRP with or without laser therapy).The evaluations were performed through histological and histochemical analysis after 30 days and by computerized microtomography (micro-CT) overlapping the images of the periods immediately and 30 days after the replantation. The data obtained from the histological and histochemical evaluations were analyzed by the ANOVA and Tukey tests and the microtomographic data by the Kruskall Wallis and Dunn tests, with a significance level of 5%. After histological and histochemical analysis, it was verified that there was no statistically significant difference between groups regarding the number of clasts/mm ...(Complete abstract electronic access below) / Doutor

Danos mitocondriais e diminuição nos níveis de ATP têm sido recentemente atribuídos à sertralina. Nós investigamos o efeito da sertralina em plaquetas humanas, já que estas células demonstram várias similaridades funcionais com neurônios e astrócitos. Os efeitos da sertralina em diferentes parâmetros foram investigados em plaquetas lavadas de 18 voluntários saudáveis do sexo masculino, depois de 24h de exposição ao fármaco. A toxicidade da sertralina foi observada apenas nas concentrações mais altas, 30 e 100μM, nas quais a viabilidade das plaquetas foi significantemente reduzida a 76 ± 3% e 20 ± 2 %, respectivamente. As mesmas concentrações reduziram o ATP a 73 ± 3% e 13 ± 2 %, respectivamente. Os valores basais de glicogênio não foram afetados significativamente pelo tratamento com sertralina. A captação de glutamato foi reduzida de forma significativa após o tratamento com 3, 30 e 100 μM, em 28 ± 6 %, 32 ± 5% e 54 ± 4 %, respectivamente. Nosso estudo demonstra que a sertralina em concentrações terapêuticas não compromete a viabilidade plaquetária, porém seu uso não pode ser considerado isento de risco, pois em um cenário no qual os níveis de glutamato extracelular estão potencialmente aumentados, a sertralina poderia agravar uma condição excitotóxica / Mitochondrial damage and fall in ATP levels have been recently attributed to sertraline. We investigated the effect of sertraline on human platelets, since these cells display several functional similarities with neurons and astrocytes. The effects of sertraline on different parameters were investigated in washed platelets from 18 healthy male volunteers, after 24 h of drug exposure. Sertraline toxicity was observed only at the highest concentrations, 30 and 100 μM, which significantly reduced platelet viability to 76 ± 3% and 20 ± 2%, respectively. The same concentrations significantly decreased total ATP to 73 ± 3% and 13 ± 2%, respectively. Basal values of glycogen were not significantly affected by sertraline treatment. The glutamate uptake was significantly reduced after treatment with 3, 30 and 100 μM, by 28 ± 6%, 32 ± 5% and 54 ± 4%, respectively. Our study showed that sertraline at therapeutic concentrations does not compromise platelet viability, but its use may not be without risk, since in a scenario where extracellular glutamate levels are potentially increased, sertraline might aggravate an excitotoxic condition.

Muito se tem investido em pesquisa na compreensão dos processos e fenômenos envolvidos nas diversas fases da reparação tissular e, principalmente, no desenvolvimento de recursos e tecnologias com o objetivo de favorecer os avanços no tratamento de feridas. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos biológicos da associação células-tronco mesenquimais (CTMs) e plasma rico em plaquetas (PRP) como adjuvantes da cicatrização cutânea de feridas padronizadas em coelhos. Foram utilizados 37 coelhos Nova Zelândia, dentre os quais, 36 foram distribuídos em seis grupos: grupo controle (GC), grupo células-tronco mesenquimais (GCTM), grupo plasma rico em plaquetas na forma líquida (GPRPLIQ), grupo plasma rico em plaquetas na forma de gel (GPRPGEL), grupo associação células-tronco mesenquimais e plasma rico em plaquetas na forma liquida (GCTM+PRPLIQ), grupo associação células-tronco mesenquimais e plasma rico em plaquetas na forma de gel (GCTM+PRPGEL). Após indução de lesões cutâneas agudas e padronizadas, os animais receberam o tratamento de acordo com o grupo que compunham. Macroscopicamente, a cada dois dias, foram analisadas as medidas das lesões e calculadas a área e a taxa de cicatrização das mesmas. Amostras para análise microscópica foram coletadas em sete e 14 dias e avaliadas quanto à presença de células inflamatórias, angiogênese, formação de fibrose colagênica, proliferação epitelial e fibroblástica. Com base nos resultados obtidos foi possível concluir que: 1) a associação CTM e PRP em suas frações terapêuticas (CTM+PRPGEL e CTM+PRPLIQ) não acelerou o processo de cicatrização de feridas cutâneas agudas, na avaliação morfométrica aos 14 dias de pós-operatório; 2) a aplicação local da CTM e das frações de PRP quando utilizadas de maneira isolada não conseguiram acelerar o tempo necessário ao processo cicatricial na avaliação morfométrica aos 14 dias de pósoperatório; 3) a utilização do PRP na sua forma líquida obteve índices de epitelização menores em relação ao controle em avaliações histopatológicas aos 14 dias de pósoperatório; 4) à exceção do ocorrido com o grupo PRP líquido, os demais tratamentos não alteraram significativamente as fases inflamatória, proliferativa e inicial do remodelamento, segundo dados histopatológicos; 5) a terapia com as células-tronco mesenquimais promoveu cicatrizes esteticamente melhores na avaliação clínica, especialmente aos 14 dias de observação. Sugere-se a necessidade de novos estudos e a utilização de outras ferramentas diagnósticas para melhores subsídios de interpretação sobre os resultados encontrados. / Much has been invested on research regarding comprehension of the processes and phenomena that are involved in several stages of tissue repairing and mainly on resources and technologies development in order to support advances on wound healing. This study has been performed in order to evaluate the biological effects of mesenchymal stem cells (CTM) and platelet rich plasma (PRP) association as adjuvants on skin healing of standardized wounds in rabbits. Thirty-seven New Zealand rabbits have been used and, among these animals, 36 were allocated into six groups: control group (GC), mesenchymal stem cells group (GCTM), liquid platelet rich plasma group (GPRPLIQ), gel platelet rich plasma group (GPRPGEL), mesenchymal stem cells associated with liquid platelet rich plasma group (GCTM+PRPLIQ) and mesenchymal stem cells associated with gel platelet rich plasma group (GCTM+PRPGEL). After the induction of acute and standardized skin wounds, animals received the treatment according to the group they belonged to. Macroscopically, every two days, wounds measures were taken to calculate their area and healing rate. Samples for microscopically analysis were collected on day 7 and on day 14 and were evaluated for the presence of inflammatory cells, angiogenesis, collagen fibrosis formation, epithelial and fibroblastical proliferation. Basing on the results it was concluded that: 1) CTM and PRP in its two therapeutic fractions association (GCTM+PRPLIQ and GCTM+PRPGEL) did not accelerate the healing process of acute skin wounds, on morphometric assessment at 14 days after surgery; 2) local injection of CTM and PRP fractions when isolated did not accelerate the time required for wound healing on morphometric assessment at 14 days after surgery; 3) PRP application on its liquid fraction showed lower levels of epithelization related to control on histopathological evaluation at 14 days after surgery; 4) except GPRPLIQ, other treatments did not alter significantly inflammatory, proliferative nor initial remodeling phases, based on histopathological data; 5) CTM therapy promoted aesthetically better scars on clinical evaluation, especially at 14 days of observation. It is suggested the requirement of further studies and use of different diagnostic tools to obtain better interpretation of the achieved results.

A hemoterapia veterinária tem evoluído muito nos últimos anos, sempre seguindo os padrões de hemoterapia humana. Ao mesmo tempo em que a transfusão de concentrado de plaquetas tem sido cada vez mais requisitada em medicina veterinária ainda são escassas as pesquisas com alvo no concentrado de plaquetas canino. Este trabalho apresenta uma revisão da literatura sobre os aspectos estruturais e funcionais das plaquetas, indicações do uso de concentrado de plaquetas em cães, métodos de preparo e características desejadas em um concentrado de plaquetas; além de uma revisão sobre metabolismo, lesões plaquetárias de armazenamento e o uso da citometria de fluxo para avaliação de plaquetas. O presente estudo teve como objetivo padronizar técnicas de avaliação do concentrado de plaquetas canino relatando as mudanças observadas durante 5 dias de armazenamento. Para tal, foram avaliados aspectos de morfologia, ativação, função, metabolismo e indicadores de lesão mitocondrial e morte celular em CP canino através de técnicas de agregação plaquetária, bioquímica celular e citometria de fluxo durante o armazenamento. Foram utilizadas 22 bolsas de CP canino, avaliadas nos dias 1, 3 e 5 após a coleta. Todas as bolsas apresentaram-se negativas quanto ao isolamento de micro-organismos. Houve diminuição significativa da concentração de glicose, pCO2, bicarbonato, ATP, pH e swirling; aumento da concentração de lactato e da pO2; poucos sinais de ativação plaquetária; e diminuição do potencial de membrana mitocondrial no final do período estudado. Não foram observadas mudanças nos testes de exposição de fosfatidilserina e caspase durante o período avaliado. As sondas MitoTracker Green e MitoTracker Red podem ser utilizadas na avalição de lesão mitocondrial de plaquetas com resultados fidedignos. Foram padronizadas técnicas que não foram descritas na avaliação de plaquetas caninas, e que poderão ser utilizadas em outros estudos sobre o tema. Com este trabalho, é possível ter dados concretos a respeito das alterações metabólicas ocorridas ao longo do período de armazenamento. Estes dados servem como base para outros estudos in vitro e in vivo relacionados ao uso de concentrado de plaquetas. Espera-se gerar conhecimento e motivar mais pesquisas nas áreas de hematologia e hemoterapia veterinária. / Veterinary hemotherapy has evolved in the last years, following standards of human blood therapy. While the transfusion of platelet concentrate has been increasingly requested in veterinary medicine are insufficient studies on concentrate of canine platelets. This paper presents a review about structural and functional aspects of platelets, indications for the use of platelet concentrates in dogs, preparation methods and characteristics desired in a platelet concentrate; metabolism, platelet storage lesion and the use of flow cytometry to evaluate platelets. This study aimed to standardize canine platelet concentrate techniques reporting observed changes in 5 days of storage. For this purpose, were evaluated morphology, activation, function, metabolism, indicators of mitochondrial damage and cell death through the use of platelet aggregation techniques, biochemistry and cell flow cytometry. We evaluate standard techniques no earlier used in the evaluation of canine platelets, which can be used in other studies on the subject. For this, 22 canine platelet concentrates were evaluated on days 1, 3 and 5 after collection. All samples were negative for contamination. There was observed a significant decrease in glucose concentration, pCO2, bicarbonate, ATP, pH and swirling; enchance lactate and pO2 concentrations; few platelet activation signals; and decreased mitochondrial membrane potential in the end of the study period. There were no changes in phosphatidylserine and caspase exposure tests during the study period. The results reveal the the MitoTracker Green and MitoTracker Red dyes can be used in evaluation of platelets mitochondrial injury with reliable results. With this work, it was possible to have concrete information about the metabolic changes in canine platelet concentrate during the storage period. These data serve as a basis for other in vitro and in vivo studies regarding the use of canine platelet concentrate. The expectation of this research was to generate knowledge and encourage more research in hematology and veterinary hemotherapy.