Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T05:14:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_AngelicaCostaAranhaCamacho_M.pdf: 3142690 bytes, checksum: 8065b10475eb506444c228857930fc87 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A obesidade é hoje considerada um problema de saúde pública. Essa condição é caracterizada pelo aumento do peso corporal, mais especificamente do tecido adiposo branco. A adipogênese (diferenciação do pré-adipócito em adipócito) é um fenômeno complexo e não muito bem caracterizado. Recentes estudos mostraram que os préadipócitos estão localizadas nas paredes dos vasos que irrigam o tecido adiposo. Estas células estão presentes exclusivamente neste tecido e expressam alguns marcadores, dentre eles o PDGFRß. O PDGFRß é um receptor tirosina quinase cujo papel na migração, proliferação e diferenciação de diversos tipos celulares tem sido extensivamente estudado. O AG1296 (6,7- dimetoxi-2-fenil-quinoxalina) é um potente inibidor do receptor PDGF, pertencente à classe da quinoxalinas. Deste modo, levando-se em consideração o papel do receptor PDGF no crescimento e proliferação celulares e o fato de que as células PDGFR_ positivas provenientes do tecido adiposo possuem alto potencial adipogênico, neste estudo investigamos o efeito do AG1296 na adipogênese de camundongos submetidos à dieta hiperlipídica e à dieta padrão. Nós também investigamos se essa inibição afetaria a sensibilidade à insulina desses grupos estudados. Para tanto, camundongos Swiss machos com seis semanas de vida foram divididos em quatro grupos: o grupo Controle que recebeu dieta padrão, o grupo C+AG1296 que recebeu dieta padrão e tratamento com AG1296, o grupo DH que recebeu dieta hiperlipídica somente e o grupo DH+AG1296 que recebeu dieta hiperlipídica e tratamento com AG1296. Peso corpóreo e ingestão alimentar foram medidos diariamente durante o tratamento (7 ou 15 dias). Através de Western blot, foram quantificadas as principais proteínas pró-adipogênicas (SREBP-1c, C/EBP? e PPAR?) e a fosforilação das principais proteínas da via da insulina (IR, IRS1 e AKT). Nossos resultados indicaram que nos animais controle, após 15 dias de tratamento com AG1296, houve uma redução nas três frações de tecido adiposo, associada a uma redução em algumas das proteínas adipogênicas, além de uma melhora na sinalização insulínica em fígado e músculo e uma redução na glicemia de jejum. Além disso, nos animais submetidos à dieta hiperlipídica, após 7 dias de tratamento com AG1296, foi possível observar uma redução nas proteínas adipogênicas e uma redução na fração epididimal do tecido adiposo. Houve também uma melhora na sinalização insulínica e na tolerância à glicose. Com isso, podemos sugerir que a inibição do PDGFRß pode ter um papel importante na adipogênese e na sinalização insulínica e pode ser um alvo potencial para prevenção da obesidade e resistência à insulina / Abstract: Obesity can be defined as a disease in which body fat is excessively accumulated. Adipogenesis is a complex and not completely known phenomenon. Recent studies showed that adipocyte progenitor cells are exclusively found in adipose tissue and express some markers like PDGFRß (Platelet-derived growth factor ß). AG1296 (6,7-dimethoxy-2-phenyl-quinoxaline) is a potent and selective inhibitor of PDGF receptor kinase. In this context, the main objective of this work was to investigate if the inhibition of PDGF receptor through AG1296 would be able to affect white adipose tissue generation in high-fat-diet-fed and standard-chow-fed mice. We also investigated if this inhibition would have an effect on the insulin sensitivity in these studied groups. For this purpose, six-week-old male Swiss mice were divided into four groups and assigned to receive the following diet and/or treatment: the control group (C) received standard rodent diet, the second group (C + AG1296) received standard rodent diet plus AG1296 (50 mg/Kg/day by gavage), the third group (HFD) received high fat diet (55% calories from fat, 29% calories from carbohydrate and 16% from protein) and the fourth group (HFD+AG1296) received high fat diet plus AG1296. Body weight and food intake were measured during the treatment (7 and 15 days). After that, tissues (epididymal, retroperitoneal and mesenteric adipose tissue, liver and muscle) were extracted and processed. Through Western blot analysis, we were able to quantify the main proteins related to adipogenesis (SREBP-1c, C/EBP? e PPAR?) and the phosphorylation of the main proteins from insulin pathway (IR, IRS1 and Akt). Our results indicated that on control mice, after 15 days of treatment with AG1296, there was a reduction on adipose fat pad, associated with reduction in some adipogenic proteins, an increase in insulin signaling in liver and muscle and a reduction in fasting plasma glucose. Futhermore, on mice fed a high fat diet, after 7 days of treatment with AG1296, it was possible to observe a reduction on adipogenesis proteins and a reduction in epididymal fat pad. Also, there was an improvement in insulin signaling pathway and in glucose tolerance. In conclusion, our results suggest that PDGFRß inhibition might have an important role in adipogenesis and in insulin signaling and could be a potential target for preventing obesity and insulin resistance / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Ciências

Orientador: Gabriel Hessel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T13:44:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alcantara_RobertaVacaride_D.pdf: 665519 bytes, checksum: b1cdfc8920d36cc06cf754f99e2c24af (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Objetivo: Identificar preditores não invasivos de varizes esofágicas em crianças e adolescentes com hepatopatia crônica e obstrução extra-hepática da veia porta (OEHVP). Casuística e métodos: Estudo prospectivo que incluiu 53 crianças e adolescentes com hepatopatia crônica ou OEHVP, sem antecedente de hemorragia digestiva ou tratamento de varizes esofágicas (VE), com até 20 anos de idade. Dois grupos foram formados: grupo I (35 pacientes com hepatopatia crônica) e grupo II (18 com OEHVP). Foram realizados hemograma, RNI, albumina, bilirrubina total, ultrassonografia de abdome e endoscopia digestiva alta. O índice esplênico (IE) foi determinado dividindo a dimensão longitudinal do baço pelo limite superior dos valores de referência da literatura. As variáveis foram comparadas quanto à presença ou não de VE, varizes gástricas (VG) e gastropatia da hipertensão portal (GHP) através de análise univariada (? ², exato de Fischer e Wilcoxon) e multivariada (regressão logística). A acurácia foi determinada a partir da área sob a curva ROC. Resultados: As VE foram observadas em 48,5% dos pacientes do grupo I e em 83,3% do grupo II. Plaquetopenia (p=0,0015), esplenomegalia (p=0,0003), razão plaquetas/IE (p=0,0007), presença de shunt esplenorrenal (p=0,0329) e a espessura do ligamento venoso (p=0,0151) se mostraram indicadores preditivos de VE entre os pacientes do grupo I. Após análise multivariada, a plaquetopenia (odds=21,7) se manteve um indicador independente da presença de VE entre os pacientes com hepatopatia crônica. Entre os pacientes do grupo II observou-se diferença estatística quanto à presença de varizes na vesícula (p=0,0245) e espessura da parede da vesícula biliar (p=0,0289). O número de plaquetas (p=0,0369), o IE (p=0,0041) e a razão plaquetas/IE (p=0,0192) se mostraram indicativos de VG entre os pacientes do grupo I. A presença de plaquetopenia foi maior entre os pacientes do grupo II com VG (p=0,0216). GHP foi estatisticamente maior entre os pacientes do grupo I com plaquetopenia (p=0,0286), presença de shunt esplenorrenal (p=0,0384), menor razão plaquetas/IE (p=0,0369) e maior espessura do ligamento venoso (p=0,0226). Conclusões: O número de plaquetas, o índice esplênico, a razão plaquetas/IE, a presença de shunt esplenorrenal e a espessura do ligamento venoso foram indicativos de VE entre os pacientes com hepatopatia crônica. A presença de varizes na vesícula e maior espessura da parede da vesícula foram indicativos de VE entre os pacientes com OEHVP. Plaquetopenia, esplenomegalia e menor razão plaquetas/IE foram indicativos de VG entre os pacientes do grupo I. Plaquetopenia foi indicativa de VG entre os pacientes do grupo II. Plaquetopenia, presença de shunt esplenorrenal, RNI alargado, menor razão plaquetas/IE e maior espessura do ligamento venoso foram indicativos de GHP entre os pacientes com hepatopatia crônica / Abstract: Aim: Identify non-invasive predictors of esophageal varices in children and adolescents with chronic liver disease and extra hepatic portal venous obstruction (EHPVO). Casuistic and methods: Prospective evaluation of 53 patients younger than 20 with chronic liver disease or EHPVO and no history of bleeding or prophylactic treatment of esophageal varices (EV). They were divided in 2 groups: group I (35 with chronic liver disease) and group II (18 with EHPVO). Their blood count, INR, albumin, bilirubin, abdominal ultrasound and upper endoscopy results were taken. A splenic index (SI) was determined by dividing the patients' spleen dimension by its uppermost limit according to their age. The variables were compared to the presence of EV, gastric varices (GV) and portal hypertensive gastropathy (PHG). The univariate (?² test, Fischer's exact test and Wilcoxon rank sum test) and multivariate (logistic regression) analysis were performed. A ROC curve was constructed and the area under the ROC was calculated. Results: EV were observed in 48,5% of group I patients and in 83,3% of group II patients. Low platelet count (p=0,0015), splenomegaly (p=0,0003), SI (p=0,0007), splenorenal shunt (p=0,0329) and lesser omental thickness (p=0,0151) were statistically predictors of EV among group I patients. The multivariate analysis showed low platelet count (odds=21,7) as an independent predictor of EV in patients with chronic liver disease. Gallbladder varices (p=0,0245) and gallbladders' wall thickness (p=0,0289) statistically predicted EV among group II patients. Platelet count (p=0369), SI (p=0,0041) and platelet/SI ratio (p=0192) were significant predictors of GV among group I patients. Low platelet count predicted GV among group II patients (p=0,0216). PHG occurred more often among group I patients who had low platelet count (p=0,0286), splenorenal shunt (p=0,0384), lower platelet/SI ratio (p=0,0369) and thicker lesser omental thickness (p=0,0226). Conclusions: Platelet count, splenic index, platelet/SI ratio, splenorrenal shunt and lesser omental thickness were indicative of EV among children and adolescents with chronic liver disease. Gallbladder varices and thicker gallbladders' wall were indicative of EV among EHPVO patients. Low platelet count, splenomegaly and lesser platelet/SI ratio were indicative of GV among group I patients. Low platelet count was indicative of GV among group II patients. Low platelet count, splenorenal shunt, bigger INR, lesser platelet/SI ratio and thicker lesser omentum were indicative of PHG among chronic liver disease patients / Doutorado / Pediatria / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-27T09:34:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Shimojo_AndreaArrudaMartins_D.pdf: 2752681 bytes, checksum: 11e9996d95e39a313bd958eee397ff40 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Este trabalho teve como objetivo estudar o desempenho in vitro do plasma rico em plaquetas (PRP) com scaffolds de ácido hialurônico (AH) ou quitosana (CHT) como um scaffold compósito para a proliferação e diferenciação osteogênica de células tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano (h-AdMSCs). O PRP é um produto autólogo obtido do sangue total (WB). O ácido hialurônico é um glicosaminoglicano e principal componente do fluido sinovial. A quitosana é um polissacarídeo natural encontrado principalmente na carapaça de crustáceos. O PRP puro (P-PRP, rico em plaquetas e pobre em leucócitos) foi obtido a partir da centrifugação controlada do WB, e ativado com os agonistas soro autólogo e cálcio. Os scaffolds foram estruturados em micropartículas ou esponjas, para atender os requisitos de formulações injetáveis ou sólidas, respectivamente. Nesse contexto, os seguintes scaffolds foram preparados e caracterizados: sólidos porosos (esponjas) de quitosana não estabilizados (PCHTs) e estabilizados (SPCHTs); micropartículas de quitosana-tripolifosfato de sódio (iCHT-TPPs); micropartículas e esponjas de ácido hialurônico autorreticulado (ACPs) e de ácido hialurônico reticulado com 1,4-butanodiol diglicidil éter (HA-BDDE); e esponjas e micropartículas de ACP e CHT (PECs). PCHTs foram preparados por congelamento e liofilização de soluções de CHT, variando a concentração e as condições de congelamento. As estabilizações foram realizadas pelo tratamento dos PCHTs com hidróxido de sódio, série de etanol ou reticulação com tripolifosfato. Os iCHT-TPPs foram preparados por reticulação iônica de quitosana com TPP em diferentes razões mássicas. ACPs foram obtidos por autoesterificação organocatalisada. HA-BDDE foi preparado por eterificação dos grupos hidroxílicos do HA com o epóxido BDDE. PECs foram preparados por reticulação iônica do ACP com a CHT. Para a preparação de scaffolds compósitos, P-PRP ativado contendo h-AdMSCs foi imediatamente pipetado sobre a superfície dos scaffolds. Os resultados mostraram que os scaffolds não apresentam citotoxicidade. Micrografias obtidas por microscopia eletrônica de varredura mostraram compatibilidade estrutural com as redes de fibrina formadas no interior dos poros ou na superfície de scaffolds compósitos. Os scaffolds compósitos estimularam o crescimento de h-AdMSCs e a diferenciação osteogênica. Os scaffolds compósitos também promoveram liberação gradual dos fatores de crescimento PDGF-AB e TGF-?1. Assim, concluímos que os scaffolds compósitos estudados neste trabalho são promissores para engenharia de tecidos, particularmente para a cicatrização e regeneração óssea, no âmbito da medicina regenerativa / Abstract: This work aimed to study the in vitro performance of platelet-rich plasma (PRP) with scaffolds of hyaluronic acid (HA) and/ or chitosan (CHT) as a composite scaffold for proliferation and osteogenic differentiation of human adipose-derived mesenchymal stem cells (h-AdMSCs). The PRP is an autologous product obtained from whole blood (WB). Hyaluronic acid is a glycosaminoglycan and the main component of the synovial fluid. Chitosan is a natural polysaccharide found mainly in the carapace of crustaceans. The pure PRP (P-PRP, rich in platelet and poor in leukocytes) was obtained from controlled centrifugation of WB, and activated with the agonists autologous serum and calcium. The scaffolds were structured in microparticles or sponges, to comply the requirements of injectable or solid formulations, respectively. In this context, the following scaffolds were prepared and characterized: chitosan porous solid (sponge) unstabilized (PCHTs) and stabilized (SPCHTs); chitosan-sodium tripolyphosphate microparticles (iCHT-TPPs); microparticles and sponges of auto-crosslinked hyaluronic acid (ACPs) and of hyaluronic acid crosslinked with 1,4-butanediol diglycidyl ether (HA-BDDE); and microparticles and sponges of ACP and CHT (PECs). PCHTs were prepared by freezing and lyophilization of CHT solutions, varying the concentration and freezing conditions. Stabilization was performed by treating the PCHTs with sodium hydroxide, an ethanol series or by crosslinking with tripolyphosphate. The iCHT-TPPs were prepared by ionic crosslinking of chitosan with TPP at different mass ratios. ACPs was prepared by organocatalyzed auto-esterification. HA-BDDE was prepared by etherification of the hydroxyl groups of HA with the epoxide BDDE. PECs were prepared by ionic crosslinking of ACP with CHT. For the preparation of composite scaffolds, activated P-PRP containing h-AdMSCs was immediately pipetted onto the surface of the scaffolds. The results showed that the scaffolds do not exhibit cytotoxicity. Micrographs obtained by scanning electron microscopy (SEM) showed structural compatibility with fibrin networks formed inside the pores or on the surface of scaffolds. The composite scaffolds stimulated the growth of h-AdMSCs and osteogenic differentiation. Composite scaffolds also promoted gradual release of growth factors PDGF-AB and TGF-?1 and osteogenic differentiation. Thus, we conclude that the composite scaffolds studied in this work are promising for tissue engineering, particularly for healing and bone regeneration in regenerative medicine / Doutorado / Engenharia Química / Doutora em Engenharia Quimica

A cicatrização das lesões ligamentares é lenta e muitas vezes ineficiente. Uma vez lesado, o ligamento suspensor do boleto (LSB) dificilmente recupera suas propriedades biomecânicas originais. A desmite do LSB proximal dos membros torácicos ocorre em cavalos de todas as raças e todas as disciplinas esportivas. O objetivo deste trabalho foi avaliar clinicamente e por ultrassonografia, a influência do plasma rico em plaquetas (PRP), e do PRP associado ao LASER terapêutico, na cicatrização da região proximal do LSB, em cavalos com desmite induzida por colagenase. Para isto foram utilizados 18 animais sem raça definida, distribuídos em três grupos. O G1 foi formado por seis animais, submetidos a indução da desmite na região proximal do LSB, que não receberam qualquer tratamento. O G2 foi formado por seis animais, que foram submetidos a desmite induzida e após três semanas receberam aplicação intralesional de PRP guiada pelo ultrassom. O G3 foi formado por seis animais, que após indução da desmite receberam tratamento com LASER terapêutico a partir da segunda semana, e na terceira semana pós-lesão receberam aplicação intralesional de PRP guiada pelo ultrassom. A indução da desmite foi realizada por meio de infiltração guiada pelo ultrassom na região proximal do LSB, sendo este considerado o tempo 0. A cada semana e até a semana oito, os cavalos foram avaliados clinicamente, por ultrassonografia e por análise cinemática, ao trote em linha reta. Houve diferença significativa na comparação entre grupos para as variáveis aumento de volume na avaliação clínica, e área no corte transversal do ligamento e, área no corte transversal da lesão na avaliação ultrassonográfica. Na comparação entre os diferentes momentos de observação as variáveis aumento de volume e dor à palpação do G2 e G3 mostraram escores maiores quando comparados ao G1, sendo que o G2 apresentou escore maior que o G3. Ultrassonograficamente, a ecogenicidade da lesão mostrou diminuição dos escores, a partir da quinta semana de avaliação nos grupos tratados. As demais variáveis clínicas ou ultrassonográficas, bem como a análise cinemática da claudicação não mostraram diferenças significativas entre os grupos. O PRP, apesar de ocasionar inflamação leve e transitório após infiltração, influenciou positivamente o processo de cicatrização da parte proximal do LSB, com um efeito analgésico adicional quando associado ao LASER terapêutico. / The healing process of injured ligaments is slow and often inefficient. Once damaged the suspensory ligament (SL) hardly recover their original biomechanical properties. The forelimb proximal suspensory ligament desmitis occurs in horses of all breeds and all sports. The aim of this study was to evaluate clinically and ultrasonographically, the influence of platelet-rich plasma (PRP), and PRP associated with LASER therapy, on the healing process of the proximal region of the SL in horses with collagenase-induced demitis. For this purpose it were used 18 cross breed horses divided into 3 groups. G1 was composed of six horses subjected to induction of proximal suspensory desmitis, with no treatment. G2 was composed of six horses subjected to desmitis induction and after three weeks they received ultrasound-guided intralesional injection of PRP. G3 was composed of six horses subjected to desmitis induction and after two weeks they received laser therapy and one week later they received intralesional guided-ultrasound injection of PRP. Induction of desmitis was made using ultrasound-guided infiltration in PSL, which was considered day zero. Horses were evaluated clinically, in straight line trot for cinematic analysis and ultrasonographically, every week until eighth week. There were significant difference between groups for swelling, the cross-sectional area of the ligament, and the cross-sectional area of the injury on ultrasound evaluation. Comparing the different times of observation, descriptively were a difference for G2 and G3 in the clinical variables that evaluated swelling and pain on palpation, showed higher scores compared to the G1, and G2 had higher scores than the G3. Sonographically, the echogenicity of the lesion showed decreased scores from the fifth week of evaluation in the treated groups. The other clinical variables or ultrasound, as well as the kinematic analysis of lameness showed no significant differences between groups. PRP, although causing transient and mild inflammation after infiltration, positively influenced the healing process of the proximal part of the SL, with additional analgesic effect when combined with laser therapy.

Animais hematófagos possuem em sua saliva substâncias que permitem a fluidez do sangue, para o sucesso de sua alimentação. Com isso, têm sido descritos diversos componentes com atividades nos diferentes processos hemostáticos (coagulação, fibrinólise e agregação plaquetária). O complexo salivar da sanguessuga Haementeria depressa vem sendo estudado através de bioquímica clássica e análises transcriptômica e proteômica deste tecido determinaram o perfil dos transcritos e das proteínas produzidas. Dentre os transcritos mais abundantes foram encontrados três clones (H06A09, H06A02 e L02F02) que apresentaram 45%, 87% e 94% de similaridade ao LAPP, um inibidor de agregação plaquetária da sanguessuga Haementeria officinallis, a produção destes componentes pelo tecido foi confirmada pela análise proteômica. O LAPP é um inibidor que age pela via do colágeno e possui cerca de 14 kDa e pI de 4,0 e inibe a ligação da plaqueta ao colágeno tanto pelo epítopo do FvW quanto pelo domínio <font face=\"Symbol\">a2<font face=\"Symbol\">b1. Assim, o objetivo do presente trabalho foi clonar, expressar e caracterizar a proteína recombinante ativa, a partir do clone H06A09 para estudos de atividade desta molécula. Para obter a proteína recombinante de interesse inicialmente a clonagem do transcrito foi realizada com sucesso em vetor pAE, porém, a expressão em sistema procarioto apresentou alguns obstáculos já que a molécula não tinha atividade. Uma nova estratégia foi proposta, sendo realizada clonagem em vetor pPIC9K e expressão em sistema eucariótico (leveduras Pichia pastoris - GS115). Após a utilização de diferentes metodologias para estabelecimento das melhores condições para expressão neste sistema, foi eleito o protocolo onde a proteína recombinante era expressa a 28 °C, sob agitação de 260 rpm, e indução por 0,5% de Metanol a cada 24h, durante 72h de expressão. A molécula recombinante expressa e secretada foi submetida a diferentes metodologias para purificação, assim, determinou-se que a estratégia utilizada que melhor isolou a proteína foi a submissão do sobrenadante da expressão à diálise e concentração em sistema de ultrafiltração (Amicon 5 kDa Millipore) seguida de uma cromatografia de gel filtração em Superdex 75 (GE), sistema FPLC, com coleta fracionada. Ensaios de agregação plaquetária confirmaram a atividade inibitória da proteína recombinante tanto em sangue total como em PRP (plasma rico em plaqueta) e plaqueta lavada, especificamente quando o agonista era o colágeno, apresentando IC50 para PRP e plaqueta lavada de 20 e 712 ng, respectivamente. Ensaios por citometria de fluxo indicaram que a proteína recombinante, diferente do LAPP, age na inibição da agregação plaquetária induzida por colágeno, pela ligação à subunidade Ib<font face=\"Symbol\">a do complexo GPIb-IX-V, complexo este que usa o FvW como ponte entre a plaqueta e o colágeno, firmando assim a interação da plaqueta ao subendotélio e posterior agregação. Desta forma, o presente trabalho caracteriza o primeiro inibidor recombinante de agregação plaquetária pela via do colágeno proveniente de sanguessugas Haementeria depressa, e comprova que apesar de apresentar 45% de similaridade estrutural ao LAPP é um inibidor com características funcionais diferentes, e com grande potencial a ser estudado. / Hematophagous animals have in their saliva substances that maintain the blood fluidity to the success of their feeding. Therefore, components have been described by their activities in the hemostatic processes (coagulation, fibrinolysis and platelet aggregation).The salivary complex of Haementaria depressa leech has been studied by classical biochemical and transcriptomic and proteomic analysis of this tissue determined the profile of transcripts and proteins produced by it. Among the most abundant transcripts were found three clones (H06A09, H06A02 e L02F02) that showed 45%, 87% e 94% of similarity to LAPP, an inhibitor of platelet aggregation from Haementeria officinallis, the components production was confirmed by proteomic analysis. LAPP is a inhibitor that acts by collagen pathway and has around 14 kDa and pI of 4.0, and inhibits the binding of platelet to collagen by both the epitope domain of vWF as the <font face=\"Symbol\">a2<font face=\"Symbol\">b1. Thereby, the aim of this study was to clone, express and characterize the active recombinant protein from the clone H06A09 for studies of activity of this molecule. To obtain the recombinant protein initially cloning of transcript was successfully performed in pAE vector, however, the protein expressed in prokaryotic system presented some obstacles not presenting activity. A new strategy was proposed, being held in pPIC9K vector and expression in eukaryotic system - yeast Pichia pastoris (GS115). After using different methodologies to establish the best conditions for expression in this system, was elected the protocol where the recombinant protein was expressed in 28 °C, under agitation of 260 rpm, and 0.5% methanol induction every 24 hours during 72 hours of expression. The recombinant molecule was expressed in soluble portion and was subjected to differents methods for purification, so it was determined that the best strategy to isolation of the protein was the concentration and dialysis of the expression supernatant by ultrafiltration system (Amicon 5 kDa Millipore) followed by gel filtration chromatography on Superdex 75 (GE), FPLC system. Tests confirmed the platelet aggregation inhibitory activity of the recombinant protein in whole blood, PRP (platelet rich plasma) and in washed platelets, specifically when the agonist was collagen, with IC50 to PRP and washed platelet of 20 and 712 ng, respectively. Assays by flow cytometry indicated that the recombinant protein, different from LAPP, acts to inhibit platelet aggregation induced by collagen, by the binding to the Ib<font face=\"Symbol\">a subunit of the GPIb-IX-V complex, this complex uses the vWF as a bridge between the platelet and collagen, thus firming the interaction of the subendothelium and subsequent platelet aggregation. Thus, this study characterized the first recombinant inhibitor of platelet aggregation through collagen pathway from Haementeria depressa leeches, and proves that despite having 45% structural similarity to the LAPP is an inhibitor with different functional characteristics, and with great potential to be studied.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dheywid.pdf: 151244 bytes, checksum: 67957de7a93f293ea07766dba8d943a1 (MD5) Previous issue date: 2012-10-01 / Cefovecin is the newest semisynthetic cephalosporin. The drug is indicated for treatment of skin and urinary infections. The aim of this study was to evaluate the influence of cefovecin therapy on the hemogram, platelet distribution width (PDW) and platelet count, blood gas, serum proteins, and on the activity of urea and creatinine. Ten healthy dogs (males n=4; females n=6), average weight of 10.03±3.54 kg were used. The animals were kept in individual cages all over the experiment. The dogs were nourished with a commercial feed ad libitum drinking. The animals were submitted to the clinical and laboratory examinations as an inclusion criterion for the experiment. Sodium cefovecin (Convenia®) was subcutaneously administered (8mg/kg) to the dogs. Clinical evaluation and laboratorial analysis was performed prior and at 1, 2, 3, 7, 14 and 21 days post treatment (dpt). Despite to be in accordance with the reference values, a statistically significant (p<0.05) decrease in total serum protein, globulin, hemoglobin and packed cell volume was observed at the 21 dpt. The platelet distribution width (PDW) and platelet count were increased at seven and 21 days (p>0.05), respectively. No changes in urea and creatinine activities, blood gas and leukocyte values were observed in the dogs after the administration of cefovecin. In conclusion, cefovecin can be administered in healthy dogs without causing significant laboratory abnormalities / A cefovecina é a mais nova droga semissintética cefalosporina. O fármaco é indicado para tratamento de infecções de pele e do trato urinário. O objetivo do estudo foi avaliar a influência da terapia com cefovecina sobre os valores do hemograma, distribuição do diâmetro das plaquetas (PDW), contagem plaquetária, hemogasometria, proteínas séricas e sobre a atividade de uréia e creatinina. Foram usados dez cães hígidos (machos n=4; fêmeas n=6), com peso médio de 10,03±3,54 Kg. Os animais permaneceram durante todo o experimento em baias individuais, recebendo ração comercial duas vezes ao dia e água a vontade. Como critérios de inclusão dos animais para o experimento, foram realizados exames clínicos e laboratoriais. Os cães receberam cefovecina sódica (Convenia®) subcutânea, na dose de 8mg/Kg e foram acompanhados clínica e laboratorialmente com 1, 2, 3, 7, 14 e 21 dias pós tratamento (dpt). Apesar dos valores permanecerem dentro da faixa de normalidade para a espécie, houve uma diminuição significativa (P<0,05) nos valores da proteína sérica, globulinas, hemoglobina e volume globular aos 21(dpt). O diâmetro das plaquetas (PDW), bem como sua contagem diminuíram aos 7 e 21 dias (P>0,05), respectivamente. Não houve alterações nas atividades de uréia e creatinina, hemogasometria e valores leucocitários após a administração da cefovecina. Conclui-se que a cefovecina pode ser administrada em cães saudáveis sem causa anormalidades laboratoriais significantes.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eliane Szucs dos Santos.pdf: 555010 bytes, checksum: f044d26303edd21acc2a719c316c5aa3 (MD5) Previous issue date: 2013-11-14 / In order to evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) autologous gel on wound healing in experimental models in vivo, wounds were induced on the back of rabbits with the aid of a punch 8mm, using the right side as the control (A) treated with 0.9% NaCl and the left (B) treated with autologous PRP gel. Lesions were evaluated for a period of 17 days. It was used six white New Zealand rabbits (n=3 males and n=3 females), adult, weighing 3.0 ± 1.0 kg. On days 0, 3, 7, 10, 14 and 17, the animals were evaluated for weight and behavior, and the wounds were evaluated morphologically and morphometrically. On the 17th day the wounds was biopsied for histopathological evaluation. The morphology of the wounds evaluated statistically by the methods of Mauchly and contrasts by Sidak method and t-test. Macroscopically was evident early healing of the wound treated with autologous PRP gel in relation to the control, which was also confirmed in the histological analysis. It was concluded that PRP is effective and accelerates the healing process when applied in short intervals and in series, confirming the therapeutic potential for cutaneous lesions. It may also be an alternative treatment of wounds. / Com o objetivo de avaliar o efeito do plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo na forma gel sobre a cicatrização de feridas cutâneas em modelos experimentais in vivo, foram induzidas feridas no dorso de coelhos com auxílio de um punch de 8mm, sendo o lado direito considerado controle (A) e tratado com NaCl 0,9% e o lado esquerdo (B) tratado com gel autólogo de PRP. As lesões foram avaliadas por um período de 17 dias. Foram utilizados seis coelhos brancos da raça Nova Zelândia (n=3 machos; n=3 fêmeas), adultos, pesando 3,0±1,0 kg. Nos dias 0, 3, 7, 10, 14 e 17, os animais foram avaliados quanto ao peso e comportamento, e as feridas morfológica e morfometricamente. No 17º dia foi feita biópsia para avaliação histopatológica. A morfometria das feridas foi avaliada estatisticamente pelos métodos de Mauchly e contrastes pelo método Sidak e teste t-pareado. Macroscopicamente foi evidente a cicatrização precoce da ferida tratada com PRP gel autólogo em relação à controle, o que também foi comprovado nas análises histológicas. Concluiu-se que o PRP é eficaz e acelera o processo de cicatrização, quando aplicado em intervalos curtos e de forma seriada, comprovando seu potencial terapêutico sobre lesões cutâneas. Pode ainda ser uma alternativa de tratamento de feridas.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Diane de Vasconcelos.pdf: 426778 bytes, checksum: a79e736afc3105a358ff39a7fe06c74e (MD5) Previous issue date: 2014-09-23 / Over the years, the platelet-rich plasma (PRP) autologous has been used to great advantage in the healing of acute and chronic wounds. However, some situations make it impossible to use this source, should be considered as alternatives to PRP homologous or heterologous. Aiming to evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) in autologous, heterologous and homologous form gel on cutaneous wound healing in vivo, 24 rabbits (9 males and 9 females) divided into three groups were used for the experiment and 6 animals (3 males and 3 females) were donors PRP. For the heterologous group, used a dog, adult mongrel to obtain PRP. The lesions were performed using a punch of 8 mm, and the right side was treated with 0.9% NaCl ® (A) and left side (B) applied PRP gel (GA = autologous, GHE=heterologous, and GHO = homologous). Lesions were evaluated for a period of 17 days. On days 0, 3, 7, 10, 14 and 17 animals were clinically evaluated by weight and pain, and on day 17 biopsies were taken for histopathological assessment of wounds. The percentage of contraction was evident in side B (treated) in all groups, which was also confirmed in the microscopic analysis of histological sections. Thus, it was concluded that the PRP, regardless of source, improves and accelerates the healing process, demonstrating their therapeutic potential on skin lesions and can be used in patients with impaired wound healing. / Ao longo dos anos, o plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo tem sido utilizado com grandes vantagens na cicatrização de feridas agudas e crônicas. No entanto, algumas situações inviabilizam o uso desta fonte, devendo ser consideradas outras alternativas de PRPs como homóloga ou heteróloga. Com o objetivo de avaliar o efeito do plasma rico em plaquetas (PRP) na forma gel autólogo, heterólogo e homólogo sobre a cicatrização de feridas cutâneas in vivo, foram utilizados 24 coelhos (9 machos e 9 fêmeas) divididos em 3 grupos para o experimento e 6 animais (3 machos e 3 fêmeas) foram doadores de PRP. Para o grupo heterólogo, utilizou-se um cão, adulto, sem raça definida para obtenção do PRP. As lesões foram feitas com auxílio de um punch de 8 mm, sendo que o lado direito foi tratado com NaCl 0,9%® (A) e o lado esquerdo (B) aplicado gel de PRP (GA=autólogo; GHE=heterólogo e GHO=homólogo). As lesões foram avaliadas por um período de 17 dias. Nos dias 0, 3, 7, 10, 14 e 17 os animais foram avaliados clinicamente por meio de peso e dor, e no 17º dia foi feita biópsia para avaliação histopatológica das feridas. O percentual de contração foi evidente no lado B (tratado), o que também foi comprovado nas análises microscópicas dos cortes histológicos. Com isso, concluiu-se que o PRP, independente da fonte, melhora e acelera o processo de cicatrização, comprovando seu potencial terapêutico sobre as lesões cutâneas, podendo ser utilizado em pacientes com dificuldades de cicatrização.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dheywid.pdf: 151244 bytes, checksum: 67957de7a93f293ea07766dba8d943a1 (MD5) Previous issue date: 2012-10-01 / Cefovecin is the newest semisynthetic cephalosporin. The drug is indicated for treatment of skin and urinary infections. The aim of this study was to evaluate the influence of cefovecin therapy on the hemogram, platelet distribution width (PDW) and platelet count, blood gas, serum proteins, and on the activity of urea and creatinine. Ten healthy dogs (males n=4; females n=6), average weight of 10.03±3.54 kg were used. The animals were kept in individual cages all over the experiment. The dogs were nourished with a commercial feed ad libitum drinking. The animals were submitted to the clinical and laboratory examinations as an inclusion criterion for the experiment. Sodium cefovecin (Convenia®) was subcutaneously administered (8mg/kg) to the dogs. Clinical evaluation and laboratorial analysis was performed prior and at 1, 2, 3, 7, 14 and 21 days post treatment (dpt). Despite to be in accordance with the reference values, a statistically significant (p<0.05) decrease in total serum protein, globulin, hemoglobin and packed cell volume was observed at the 21 dpt. The platelet distribution width (PDW) and platelet count were increased at seven and 21 days (p>0.05), respectively. No changes in urea and creatinine activities, blood gas and leukocyte values were observed in the dogs after the administration of cefovecin. In conclusion, cefovecin can be administered in healthy dogs without causing significant laboratory abnormalities / A cefovecina é a mais nova droga semissintética cefalosporina. O fármaco é indicado para tratamento de infecções de pele e do trato urinário. O objetivo do estudo foi avaliar a influência da terapia com cefovecina sobre os valores do hemograma, distribuição do diâmetro das plaquetas (PDW), contagem plaquetária, hemogasometria, proteínas séricas e sobre a atividade de uréia e creatinina. Foram usados dez cães hígidos (machos n=4; fêmeas n=6), com peso médio de 10,03±3,54 Kg. Os animais permaneceram durante todo o experimento em baias individuais, recebendo ração comercial duas vezes ao dia e água a vontade. Como critérios de inclusão dos animais para o experimento, foram realizados exames clínicos e laboratoriais. Os cães receberam cefovecina sódica (Convenia®) subcutânea, na dose de 8mg/Kg e foram acompanhados clínica e laboratorialmente com 1, 2, 3, 7, 14 e 21 dias pós tratamento (dpt). Apesar dos valores permanecerem dentro da faixa de normalidade para a espécie, houve uma diminuição significativa (P<0,05) nos valores da proteína sérica, globulinas, hemoglobina e volume globular aos 21(dpt). O diâmetro das plaquetas (PDW), bem como sua contagem diminuíram aos 7 e 21 dias (P>0,05), respectivamente. Não houve alterações nas atividades de uréia e creatinina, hemogasometria e valores leucocitários após a administração da cefovecina. Conclui-se que a cefovecina pode ser administrada em cães saudáveis sem causa anormalidades laboratoriais significantes.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eliane Szucs dos Santos.pdf: 555010 bytes, checksum: f044d26303edd21acc2a719c316c5aa3 (MD5) Previous issue date: 2013-11-14 / In order to evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) autologous gel on wound healing in experimental models in vivo, wounds were induced on the back of rabbits with the aid of a punch 8mm, using the right side as the control (A) treated with 0.9% NaCl and the left (B) treated with autologous PRP gel. Lesions were evaluated for a period of 17 days. It was used six white New Zealand rabbits (n=3 males and n=3 females), adult, weighing 3.0 ± 1.0 kg. On days 0, 3, 7, 10, 14 and 17, the animals were evaluated for weight and behavior, and the wounds were evaluated morphologically and morphometrically. On the 17th day the wounds was biopsied for histopathological evaluation. The morphology of the wounds evaluated statistically by the methods of Mauchly and contrasts by Sidak method and t-test. Macroscopically was evident early healing of the wound treated with autologous PRP gel in relation to the control, which was also confirmed in the histological analysis. It was concluded that PRP is effective and accelerates the healing process when applied in short intervals and in series, confirming the therapeutic potential for cutaneous lesions. It may also be an alternative treatment of wounds. / Com o objetivo de avaliar o efeito do plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo na forma gel sobre a cicatrização de feridas cutâneas em modelos experimentais in vivo, foram induzidas feridas no dorso de coelhos com auxílio de um punch de 8mm, sendo o lado direito considerado controle (A) e tratado com NaCl 0,9% e o lado esquerdo (B) tratado com gel autólogo de PRP. As lesões foram avaliadas por um período de 17 dias. Foram utilizados seis coelhos brancos da raça Nova Zelândia (n=3 machos; n=3 fêmeas), adultos, pesando 3,0±1,0 kg. Nos dias 0, 3, 7, 10, 14 e 17, os animais foram avaliados quanto ao peso e comportamento, e as feridas morfológica e morfometricamente. No 17º dia foi feita biópsia para avaliação histopatológica. A morfometria das feridas foi avaliada estatisticamente pelos métodos de Mauchly e contrastes pelo método Sidak e teste t-pareado. Macroscopicamente foi evidente a cicatrização precoce da ferida tratada com PRP gel autólogo em relação à controle, o que também foi comprovado nas análises histológicas. Concluiu-se que o PRP é eficaz e acelera o processo de cicatrização, quando aplicado em intervalos curtos e de forma seriada, comprovando seu potencial terapêutico sobre lesões cutâneas. Pode ainda ser uma alternativa de tratamento de feridas.