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Estudo comparativo entre agregação plaquetária por turbidimetria e impedância elétrica em relação a pacientes sob terapia antiplaquetária a base de ácido acetilsalicílico / Comparative study between platelet aggregation by turbidimetric and impedance methods in patients under acetylsalicilic acyd antiplatelet therapyLeonardo Lorenzo da Silva 29 September 2010 (has links)
A adesão de plaquetas nas paredes dos vasos sanguíneos e subsequente agregação são eventos cruciais tanto na hemorragia e quanto na trombose. A hiperagregação (agregação excessiva) das plaquetas pode causar a formação de um trombo e a posterior oclusão dos vasos sanguíneos levando a um processo isquêmico. A terapia antiplaquetária com ácido acetilsalicílico reduz em até 25% o risco de infartos do miocárdio não-fatais, acidentes vasculares cerebrais isquêmicos ou mortes de causa vascular em pacientes de alto risco, independentemente do sexo ou idade. Para avaliar laboratorialmente a eficácia dessa terapêutica, o método mais utilizado é o teste de agregação plaquetária, que pode ser feito em duas metodologias, a turbidimétrica e a por impedância elétrica. Com esse cenário, o objetivo do estudo é comparar essas duas metodologias para a monitorização do tratamento. Para isso foram utilizadas amostras de sangue de 30 pacientes adultos (média de 42 anos) de ambos os sexos que fazem uso regular do fármaco e analisadas através das duas metodologias, tendo seus resultados analisados e comparados. Os resultados do estudo mostraram pouca diferença estatística significante (p<0,05) entre os dois métodos nos principais agentes estimulantes, indicando que o método de impedância elétrica pode ser utilizado em rotina laboratorial em substituição, ou em complementação, com a metodologia turbidimétrica para monitorar a terapia antiplaquetária a base de ácido acetilsalicílico / The adhesion of platelets in the blood vessel wall and subsequent aggregation are crucial events in both bleeding and thrombosis. The hyperaggregation (excessive aggregation) of platelets can cause the formation of a thrombus and subsequent occlusion of blood vessels leading to an ischemic process. Antiplatelet therapy with acetylsalicylic acyd reduces by 25% the risk of myocardial infarctions, non-fatal strokes or deaths from vascular causes in patients at high risk, regardless of sex or age. To laboratory evaluation of the effectiveness of this therapy, the method most used is the platelet aggregation test, which can be done in two methods, the turbidimetric and electrical impedance. With this scenario, the objective of the study is to compare these two methodologies for monitoring the treatment. For such purpose, blood samples from 30 adult patients (mean 42 years) of both sexes who make regular use of the drug was analyzed using the two methodologies, and their results was analyzed and compared. The studys results showed little difference statistically significant (p <0.05) between the two methods with the main stimulant agents, indicating that the method of electrical impedance can be used in routine laboratory instead or complementing the methodology of turbidimetric for monitor antiplatelet therapy by acetylsalicylic acyd
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Células-tronco mesenquimais e plasma rico em plaquetas como adjuvantes da cicatrização de lesões cutâneas experimentais em coelhos Nova ZelândiaGarcez, Tuane Nerissa Alves January 2012 (has links)
Muito se tem investido em pesquisa na compreensão dos processos e fenômenos envolvidos nas diversas fases da reparação tissular e, principalmente, no desenvolvimento de recursos e tecnologias com o objetivo de favorecer os avanços no tratamento de feridas. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos biológicos da associação células-tronco mesenquimais (CTMs) e plasma rico em plaquetas (PRP) como adjuvantes da cicatrização cutânea de feridas padronizadas em coelhos. Foram utilizados 37 coelhos Nova Zelândia, dentre os quais, 36 foram distribuídos em seis grupos: grupo controle (GC), grupo células-tronco mesenquimais (GCTM), grupo plasma rico em plaquetas na forma líquida (GPRPLIQ), grupo plasma rico em plaquetas na forma de gel (GPRPGEL), grupo associação células-tronco mesenquimais e plasma rico em plaquetas na forma liquida (GCTM+PRPLIQ), grupo associação células-tronco mesenquimais e plasma rico em plaquetas na forma de gel (GCTM+PRPGEL). Após indução de lesões cutâneas agudas e padronizadas, os animais receberam o tratamento de acordo com o grupo que compunham. Macroscopicamente, a cada dois dias, foram analisadas as medidas das lesões e calculadas a área e a taxa de cicatrização das mesmas. Amostras para análise microscópica foram coletadas em sete e 14 dias e avaliadas quanto à presença de células inflamatórias, angiogênese, formação de fibrose colagênica, proliferação epitelial e fibroblástica. Com base nos resultados obtidos foi possível concluir que: 1) a associação CTM e PRP em suas frações terapêuticas (CTM+PRPGEL e CTM+PRPLIQ) não acelerou o processo de cicatrização de feridas cutâneas agudas, na avaliação morfométrica aos 14 dias de pós-operatório; 2) a aplicação local da CTM e das frações de PRP quando utilizadas de maneira isolada não conseguiram acelerar o tempo necessário ao processo cicatricial na avaliação morfométrica aos 14 dias de pósoperatório; 3) a utilização do PRP na sua forma líquida obteve índices de epitelização menores em relação ao controle em avaliações histopatológicas aos 14 dias de pósoperatório; 4) à exceção do ocorrido com o grupo PRP líquido, os demais tratamentos não alteraram significativamente as fases inflamatória, proliferativa e inicial do remodelamento, segundo dados histopatológicos; 5) a terapia com as células-tronco mesenquimais promoveu cicatrizes esteticamente melhores na avaliação clínica, especialmente aos 14 dias de observação. Sugere-se a necessidade de novos estudos e a utilização de outras ferramentas diagnósticas para melhores subsídios de interpretação sobre os resultados encontrados. / Much has been invested on research regarding comprehension of the processes and phenomena that are involved in several stages of tissue repairing and mainly on resources and technologies development in order to support advances on wound healing. This study has been performed in order to evaluate the biological effects of mesenchymal stem cells (CTM) and platelet rich plasma (PRP) association as adjuvants on skin healing of standardized wounds in rabbits. Thirty-seven New Zealand rabbits have been used and, among these animals, 36 were allocated into six groups: control group (GC), mesenchymal stem cells group (GCTM), liquid platelet rich plasma group (GPRPLIQ), gel platelet rich plasma group (GPRPGEL), mesenchymal stem cells associated with liquid platelet rich plasma group (GCTM+PRPLIQ) and mesenchymal stem cells associated with gel platelet rich plasma group (GCTM+PRPGEL). After the induction of acute and standardized skin wounds, animals received the treatment according to the group they belonged to. Macroscopically, every two days, wounds measures were taken to calculate their area and healing rate. Samples for microscopically analysis were collected on day 7 and on day 14 and were evaluated for the presence of inflammatory cells, angiogenesis, collagen fibrosis formation, epithelial and fibroblastical proliferation. Basing on the results it was concluded that: 1) CTM and PRP in its two therapeutic fractions association (GCTM+PRPLIQ and GCTM+PRPGEL) did not accelerate the healing process of acute skin wounds, on morphometric assessment at 14 days after surgery; 2) local injection of CTM and PRP fractions when isolated did not accelerate the time required for wound healing on morphometric assessment at 14 days after surgery; 3) PRP application on its liquid fraction showed lower levels of epithelization related to control on histopathological evaluation at 14 days after surgery; 4) except GPRPLIQ, other treatments did not alter significantly inflammatory, proliferative nor initial remodeling phases, based on histopathological data; 5) CTM therapy promoted aesthetically better scars on clinical evaluation, especially at 14 days of observation. It is suggested the requirement of further studies and use of different diagnostic tools to obtain better interpretation of the achieved results.
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Perfil Imunoistoquímico do Câncer de Colo UterinoPIRES, Guacyra Magalhães 28 February 2012 (has links)
Submitted by Lucelia Lucena (lucelia.lucena@ufpe.br) on 2015-03-13T19:15:10Z
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Previous issue date: 2012-02-28 / Introdução: O câncer de colo uterino é um importante problema de saúde pública mundial,
terceira causa de morte por câncer em mulheres. Os receptores de membrana com atividade
intrínseca de tirosina quinase controlam funções celulares como proliferação e diferenciação
celular através da ativação de vias intracelulares de transdução de sinal, relacionando-se com
a angiogênese que desempenha papel crucial no crescimento tumoral e promoção de
metástases. Objetivos: Identificar características histopatológicas de amostras de câncer de
colo uterino; verificar a expressão e o grau de expressão dos marcadores imunoistoquímicos
VEGF (fator de crescimento vascular endotelial), PDGFR- (receptor do fator de
crescimento derivado de plaquetas), EGFR (receptor do fator de crescimento epidérmico);
descrever associação entre características histopatológicas e perfil imunoistoquímico.
Métodos: Estudo transversal, retrospectivo. Coleta de dados no Laboratório Romualdo Lins,
Caruaru, Pernambuco, entre setembro de 2010 e junho de 2011. 31 blocos de parafina de
espécimes exclusivos de carcinomas de colo uterino obtidos unicamente por histerectomia.
Excluídos: espécimes obtidos por biópsia ou conização; os cedidos para revisão em outro
laboratório e não devolvidos; insuficiência de material ou presença de desgaste
comprometendo realização de revisão histológica e imunoistoquímica. Dados organizados em
planilha Excel® e analisados com programa SPSS®, versão 17.0. Realizadas revisões
histopatológicas e reações imunoistoquímicas para os marcadores VEGF, PDGFR- e EGFR.
Para análise dos dados, utilizamos teste Qui-quadrado, teste exato de Fisher, teste t de Student
ou teste de Mann-Whitney, considerando nível de significância de 0,05 para rejeição da
hipótese nula, conforme distribuição de frequência obedecesse às Regras de Cochran.
Resultados: A média de idade foi 46,74 anos. 6 (19,35%) tumores microinvasivos (margens
livres e ausência de comprometimento linfovascular em 100% dos espécimes) e 25 (80,65%)
tumores invasivos. Tumores invasivos predominaram como pouco diferenciados. Os tumores
mais frequentemente foram negativos para PDGFR- e positivos para VEGF. Em relação ao
grau de positividade, predominaram tumores com expressão mínima do PDGFR- ,
decrescendo as expressões moderada e forte, diferindo dos outros dois marcadores. Para
VEGF, os tumores mais frequentemente tiveram expressão moderada; para EGFR, expressão
forte. Todas essas diferenças alcançaram significância estatística. Para EGFR, houve
diferença significante (p=0,010) entre expressão mínima e expressões moderada/forte,
predominando menor expressão nos tumores microinvasivos e forte expressão nos tumores
invasivos. Para PDGFR- , identificou-se diferença significante (p=0,043) na positividade,
dado que tumores invasivos mais frequentemente expressavam positividade deste marcador.
Tumores triplo positivo são significantemente mais frequentes em presença de invasão
linfovascular e têm grau pouco diferenciado quando comparados aos tumores positivos apenas
para EGFR e PDGFR- . Conclusão: A positividade dos marcadores imunoistoquímicos,
especialmente no grupo triplo positivo, sugere que há correlação com fatores de pior
prognóstico. Demonstrada correlação entre o grau de expressão do EGFR e os tumores
invasivos, bem como a positividade do PDGFR- e os tumores invasivos. Os dados
encontrados sugerem suporte para futuros estudos com uso de drogas alvo moleculares, com
possibilidade de alterar o prognóstico das pacientes portadores de câncer de colo uterino ou
ajudar a separar as pacientes com tumores com pior prognóstico, que necessitem de uma
abordagem terapêutica mais agressiva.
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Modulação da adesão plaquetaria de ratos tratados com lipopolissacarideo por especies reativas de oxigenio e nitrogenio / Reactive oxygen and nitrogen species modulate the ex-vivo effects of LPS on platelet adhesion to fibrinogenCasarin, Andre Luiz 15 August 2018 (has links)
Orientador: Sisi Marcondes Paschoal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T13:49:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2010 / Resumo: A sepse é um problema grave enfrentado em hospitais e por isso é importante mais estudos que possam esclarecer melhor a sua fisiopatologia. Alguns estudos indicam que as plaquetas podem ter um papel importante nesta condição, já que a gravidade da sepse relaciona-se positivamente com o estado de ativação destes elementos. O LPS é uma substância bastante utilizada no estudo da sepse, uma vez que mimetiza vários efeitos observados neste quadro como a grande produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e nitrogênio (ERNs). Portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar as ações do tratamento de ratos com LPS na adesão plaquetária, bem como o envolvimento de EROs e ERNs na modulação deste(s) efeito(s). Para tanto, ratos foram injetados com LPS (1 mg/kg, i.p.) e após 2h a 48h a adesão plaquetária foi avaliada. As plaquetas aderidas aos poços foram quantificadas através da determinação da atividade da fosfatase ácida. Para investigar o papel do NO e de EROs no(s) efeito(s) do LPS na adesão plaquetária, foram realizados co-tratamentos de ratos com o inibidor da óxido sintase L-NAME ou com antioxidante N-acetilcisteína (NAC), bem como a incubação de plaquetas in vitro com o sequestrador de O2- PEG-SOD. Os níveis de GMPc em plaquetas foram determinados por radioimunoensaio. O tratamento de ratos com LPS aumentou a adesão de plaquetas não-ativadas ao fibrinogênio e diminuiu a adesão de plaquetas ativadas por trombina. O tratamento crônico dos ratos com L-NAME (20 mg/kg/dia) por 7 dias antes da injeção com LPS reduziu o aumento da adesão de plaquetas não-ativadas, mas não afetou a adesão de plaquetas ativadas. Os níveis de GMPc em plaquetas de ratos tratados com LPS foram semelhantes aos observados em animais tratados com salina. Os níveis intraplaquetários de GMPc em plaquetas não-ativadas de grupo controle ou no que recebeu o LPS foram reduzidos pelo tratamento crônico do animais com L-NAME. Entretanto, em plaquetas ativadas, o tratamento dos animais com L-NAME reduziu os níveis de GMPc somente no grupo tratado com LPS em 6h. A incubação de plaquetas não-ativadas com PEG-SOD (30 U/ml) reduziu o aumento da adesão de plaquetas de ratos tratados com LPS para níveis semelhantes aos do grupo controle, mas não modificou a adesão de plaquetas ativadas, seja a dos animais controle ou dos injetados com LPS. O tratamento de ratos com NAC (150 mg/kg, i.p.) 30 min após a injeção com LPS impediu o aumento da adesão de plaquetas não-ativadas de ratos injetados com LPS e reduziu o efeito inibitório do LPS na adesão de plaquetas ativadas por trombina. Em conclusão, o tratamento de ratos com LPS apresenta um efeito ambíguo na adesão plaquetária, já que aumenta a adesão de plaquetas não ativadas e reduz a adesão de plaquetas ativadas por trombina. O óxido nítrico (NO) modula o efeito estimulatório do LPS na adesão de plaquetas não ativadas através de mecanismos independentes de GMPc, mas não participa do efeito inibitório do LPS na adesão de plaquetas ativadas. Por outro lado, a geração sistêmica de EROs em ratos tratados com LPS modula a adesão de plaquetas não ativadas ou ativadas por trombina. / Abstract: Platelets are known as hemostatic regulators, but multiple studies have shown that platelets are important in inflammatory reactions including sepsis. Lipopolysaccharide (LPS) is a component of the outer membrane of Gram negative bacteria and has a pivotal role in inducing Gram negative sepsis. LPS triggers the production of various substances including nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS) that are involved in the organ failure and death. Therefore, we investigate the role of NO and ROS in modulating the platelet adhesion of LPS-treated rats using the model of platelet adhesion to fibrinogen-coated plates. Wistar rats were injected with LPS (1 mg/kg, i.p.) and 2 to 48h thereafter the platelet adhesion was evaluated. Microtiter plates were coated with fibrinogen, and rat washed platelet suspension (6 x 10(6) platelets) was added to each well. Adherent platelets were quantified through measurement of acid phosphatase activity. Treatment of rats with LPS significantly increased spontaneous platelet adhesion to fibrinogen-coated plates when compared to the control rats. In contrast, in thrombin-stimulated platelets LPS reduced platelet adhesion at 6 to 48h. Chronic treatment of rats with the nitric oxide sinthase inhibitor L-NAME (20 mg/kg/day) for 7 days before injection with LPS reduced the increase of non-activated platelet adhesion, whereas in thrombin-activated cells no differences were found. The cGMP levels in non-activated platelets of control or LPS-treated rats were reduced by chronic treatment of animals with L-NAME. However, the levels of cGMP in thrombin-activated platelets were reduced by L-NAME only in platelets 6h after LPS-treatment. The incubation of non-activated platelets with the O2- scavenger PEG-SOD reversed the stimulatory effect of LPS on spontaneous adhesion, but did not affected the stimulated-platelet adhesion of non-treated or LPS-treated groups. Moreover, the treatment of rats with the antioxidant N-acetylcysteine (NAC, 150 mg/kg, i.p.) 30 min after LPS injection prevented the increase of non-activated platelet adhesion as well as significantly reduced the inhibitory effect of LPS on thrombin-stimulated adhesion. Our findings suggest that NO modulates the stimulatory effect of LPS on non-activated platelet adhesion through GMPc-independent mechanisms, but it does not take part on the inhibitory effect of LPS on thrombin-activated platelet adhesion. In addition, the systemic generation of ROS in the LPS-treated rats plays an important role in both non-activated and thrombin-activated platelet adhesion. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia
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Efeito do implante autólogo do plasma rico em plaquetas associado ao laser de baixa intensidade na reparação das tendinites em equinos / Effect of autologous platelet-rich plasma combined with low-level laser in equine tendinitisAna Guiomar Reis Schultz 30 April 2014 (has links)
A cicatrização do tendão é um complexo processo que envolve uma variedade de moléculas reguladoras. Como exemplos temos os fatores de crescimento positivamente correlacionados com a expressão de genes responsáveis pela síntese da matriz extracelular, bem como os proteoglicanos que atuam como organizadores dos tecidos capazes de modular o crescimento e a maturação celular de tecidos especializados. No intuito de reparar o tendão com lesão existem várias opções de tratamento, mas nenhuma tem sido relatada como plenamente eficaz. Sendo assim, na busca de tratamentos regenerativos e não apenas reparativos, o objetivo deste trabalho foi investigar a influência do plasma rico em plaquetas (PRP) no processo de cicatrização do tendão flexor digital superficial de equinos, utilizando-se deste tratamento isoladamente ou associado ao laser terapêutico. Com essa finalidade, 26 membros torácicos de equinos foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos distintos: o grupo 1 (G1) foi composto por oito membros torácicos sadios provenientes de cadáveres frescos; no grupo 2 (G2) em seis membros foi induzida a tendinite, sem a realização de qualquer tipo de tratamento; no grupo 3 (G3) a tendinite também foi induzida em seis membros, os quais receberam o tratamento com o PRP; e no grupo 4 (G4) a tendinite foi induzida em seis membros torácicos que receberam o tratamento com o PRP associado ao laser terapêutico. Os animais foram avaliados clinicamente e ultrassonograficamente. Já as amostras do tecido tendíneo, obtidas por biópsia guiada por ultrassom, foram avaliadas por imunoistoquímica quanto a presença dos proteoglicanos: decorim, biglicam, fibromodulim e agrecam, Nessas amostras também foi realizada a análise da birrefringência do colágeno. Na avaliação clínica verificou-se que o grupo G4 foi o único que não mais apresentou sensibilidade à palpação no local da lesão ao término do experimento. Já na avaliação ultrassonográfica, os tendões dos membros torácicos dos grupos G3 e G4 que receberam os tratamento com PRP demonstraram melhora na ecogenicidade tanto do tendão como da lesão. Além disso, os tendões do grupo G4 apresentaram melhora no paralelismo das fibras de colágeno. Na avaliação imunoistoquímica os resultados demostraram que o biglicam, o fibromodulim e o agrecam tiveram sua expressão aumentada nas amostras do grupo G4 tratados com a associação PRP e laser quando comparados com as amostras do tendão hígido do grupo G1. Já no grupo G2 observou-se apenas o aumento da expressão de agrecam em relação ao G1. Na análise da birrefringência do colágeno o maior valor de retardo óptico (OR) foi apresentado também nas amostras do grupo tratado com a associação do PRP e laser (G4). Durante o processo de regeneração de um tendão lesado há uma tendência para o aumento dos valores de OR, o que representa uma melhora na organização do colágeno. Provavelmente, o laser foi capaz de produzir um aumento na síntese de colágeno e uma melhor agregação e alinhamento das fibras de colágeno. Assim, concluímos que o tratamento com PRP associado ao laser demonstrou melhora clínica, ultrassonográfica, de birrefringência e na expressão de proteoglicanos da matriz extracelular, o que não ocorreu quando utilizado isoladamente. / Tendon healing is a complex process involving a variety of regulatory molecules. Growth factors are a family of such molecules; and their presence is positively correlated with the expression of genes responsible for extracellular matrix synthesis. Proteoglycans more than extracellular matrix components are tissue organizers capable of modulating cell growth and maturation in specialized tissues. In order to repair the tendon injury there are several treatment options, but none has been reported as fully effective. In this scenario, regenerative approaches are currently preferred over reparative therapeutic procedures. Therefore, the aim of this study was to investigate the influence of platelet-rich plasma (PRP) in the healing of the equine superficial digital flexor tendon, using this treatment, alone or associated with the laser therapy. For this purpose, 26 equine forelimbs were randomly divided into four groups: group 1 (G1) consisted of eight healthy forelimbs from fresh cadavers; in group 2 (G2), tendinitis was induced in six forelimbs, without performing any type of treatment; in group 3 (G3), tendinitis was also induced in six forelimbs which received PRP treatment; and in group 4 (G4), tendinitis was induced in six forelimbs that received treatment with PRP associated with laser therapy. All animals were evaluated clinically and sonographically. Additionally, tendon tissue samples were obtained by ultrasound-guided biopsy, and assessed by immunohistochemistry to determine proteoglycans expression (decorin, biglycan, fibromodulin and aggrecan). These samples were further analyzed for collagen organization through birefringence. In the clinical evaluation, only G4 animals had absent painful response to direct digital palpation at the end of the experiment. During sonographic evaluation, it was observed that tendons from groups G3 and G4, that received the treatment with PRP, demonstrated improvement in both tendon and lesion echogenicity. Furthermore, tendons from the G4 group showed improvement in axial alignment of collagen fibers. The results showed an increase in biglycan, fibromodulin and aggrecan expression at immunohistochemical evaluation of G4 samples, when compared with healthy tendon samples (G1). In tendons from the G2 group only an increased aggrecam expression compared to G1 was observed. Though the analysis of the collagen birefringence, the highest value of optical retardation (OR) was also presented in the samples of the group treated with the combination of PRP and laser (G4). During the regeneration process of an injured tendon, there is a trend to increase OR values, which represents an improvement of the collagen organization. Probably, the laser was able to induce an increased synthesis and a better aggregation and alignment of collagen. So, we conclude that the animals treated with PRP associated with laser therapy improved clinically and sonographically. Moreover, this treatment improved the arrangement of collagen fibril and enhanced the proteoglycans expression in the extracellular matrix, what did not occur when PRP treatment was used alone.
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Busca de biomarcadores para esquizofrenia em plaquetas utilizando eletroforese diferencial em gel bidimensional (2D-DIGE) e espectrometria de massas / Search for schizophrenia biomarkers in platelets using two dimensional differential gel electrophoresis and mass spectrometry analysisSheila Barreto Guterres 30 August 2011 (has links)
A esquizofrenia é uma doença crônica, grave e incapacitante que afeta cerca 24 milhões de pessoas em âmbito mundial. É caracterizada por uma desorganização no pensamento que prejudica a funcionalidade do indivíduo. Existem intervenções que são efetivas e contribuem para a diminuição da prevalência do transtorno, pois ajudam o portador a levar uma vida produtiva e integrada à sociedade, porém devem ser ministradas nos estágios iniciais da doença. No entanto, existe uma grande dificuldade em se diagnosticar a esquizofrenia precocemente devido a sua complexidade e às sutilezas dos seus sintomas apresentados antes do surgimento da psicose. O cérebro não é acessível a exames invasivos in vivo e por esse motivo a exploração de fluidos periféricos é de grande importância. As plaquetas e neurônios serotonérgicos possuem características bioquímicas e morfológicas em comum que possibilitam a comparação entre a estrutura e a função de ambos e, por causa dessa similaridade, muitos trabalhos utilizam plaquetas como modelo para o estudo de doenças neuropsiquiátricas, inclusive a esquizofrenia. A detecção precoce da esquizofrenia é um objeto de investigação atual e relevante não somente para revolucionar os meios atuais de diagnóstico, mas também para desenvolver novos tratamentos aplicados aos estágios iniciais da doença, diferenciar os subgrupos de doentes e monitorar as intervenções preventivas. A proposta do presente trabalho é fazer o estudo da expressão de proteínas em plaquetas de pacientes esquizofrênicos e controles com o objetivo de identificar proteínas candidatas a biomarcadores utilizando técnicas proteômicas quantitativas e confiáveis, como 2D-DIGE e a espectrometria de massas. / Schizophrenia is a disabling, serious, and chronic illness, which affects about 24 million people worldwide. It is characterized by a severe disorganization of the thoughts that harms the social life of patients becoming them dependent of the family and/or government. There are effective treatments that contribute to decrease the prevalence of the disorder because they improve the life and social conditions of the patients, but they are only advantageous if the intervention is made in the early stages of the disease. It is difficult to obtain early diagnosis due to the complexity of the disease and its insidious symptoms before the beginning of the psychosis. The brain is not easily accessed in vivo and, because of this, it is very important to study the peripheral tissues like blood, which makes the use of the platelets very interesting. Furthermore, platelets and serotonergic neurons share biochemical and morphological characteristics that allows the comparison between structure and function of both. From these similarities many authors has used platelets as a neuron model to study many neurodegenerative diseases including schizophrenia. The early detection of schizophrenia is a current and suitable goal, not only to improve the early diagnosis but also to develop new treatments, differentiate the subtypes, and monitor the preventive interventions. The purpose of this project is to do a comparative screening of expressed proteins in platelets from schizophrenics and controls with the objective of finding differently expressed proteins that could be candidates to biomarkers using 2D-DIGE and mass spectrometry.
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INVESTIGAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIAGREGANTE IN VITRO DE PEPTÍDEOS INIBIDORES DA PROTEÍNA DISSULFETO ISOMERASE / ACTIVITY RESEARCH ANTIPLATELET PLATELET IN VITRO PEPTIDE INHIBITORS PROTEIN DISULFIDE ISOMERASE.Sena, Elyjany Morais Lima 17 October 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-10-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Protein disulfide isomerase (PDI) plays an important role in platelet aggregation involving thiol containing surface proteins in both dependent pathways and independent of ADP. Recently it has been shown that one dodecapeptide (CXXC) containing the catalytic motif PDI was able to decrease the reductase activity of PDI opening the perspective of using the same as antithrombotic therapeutic agent. This study aimed to investigate the effects of peptides PDI - like on platelet aggregation in vitro and molecular mechanism of action of the same. For in silico analysis using a molecular docking program, it was observed that the CXXC peptide as well as its control peptide, scrambled (SCR) and AXXA were all capable of binding to the substrate site of the lligação PDI. Posteriorly, Western blot, it was demonstrated that the peptide CXXC (25 M) induced a slight but significant reduction of free thiols marking PDI suggesting physical association between the peptide and the protein. The same was not observed in samples incubated with Scr and AXXA peptides at the same concentration. In platelet aggregation assays, the platelet-rich plasma (PRP) was pre-incubated with the CXXC, Scr and AXXA peptides using ADP (5 M) as aggregating agent. CXXC found that the peptide reduced the maximum aggregation by 14%, 27% and 30% at concentrations of 3, 10 and 30μM, respectively. The Scr AXXA peptide and the peptide had no effect on platelet aggregation induced by ADP in the same concentrations. Thus, all the data presented here suggest that the CXXC peptide is associated with PDI surface and partially inhibits platelet aggregation via mechanisms mediated by thiol-disulfide exchange. / A Proteína dissulfeto isomerase (PDI) desempenha um importante papel na agregação de plaquetas, envolvendo proteínas tiólicas de superfície tanto em vias dependentes, quanto independentes de ADP. Recentemente foi demostrado que um dodecapeptídeo (CxxC), contendo o motivo catalítico da PDI, era capaz de diminuir a atividade redutase da PDI, abrindo a perspectiva do uso do mesmo como agente terapêutico antitrombótico. Assim, este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos de peptídeos PDI símile sobre a agregação plaquetária in vitro e o mecanismo molecular de ação dos mesmos. Por análises in silico utilizando um programa de ancoragem molecular, observou-se que o peptídeo CxxC, bem como os seus peptídeos controle, scrambled (Scr) e AxxA, foram todos capazes de se ligar ao sítio de lligação do substrato na PDI. Posteriomente, por western blot ,demonstrou-se que o peptídeo CxxC (25 M) promoveu uma discreta, mas importante, redução da marcação de tióis livres da PDI sugerindo associação física entre o peptídeo e a proteína. O mesmo não foi observado nas amostras incubadas com os peptídeos Scr e AxxA, na mesma concentração. Nos ensaios de agregação plaquetária, o plasma rico em plaquetas (PRP) foi pré-incubado com os peptídeos CxxC, Scr e AxxA utilizando ADP (5M) como agente agregante. Encontramos que o peptídeo CxxC reduziu a agregação máxima em 14%, 27% e 30% nas concentrações de 3, 10 e 30μM, respectivamente. O peptídeo Scr e o peptídeo AxxA, não afetaram a agregação plaquetária induzida por ADP nas mesmas concentrações. Sendo assim, o conjunto dos dados aqui apresentados sugerem que o peptídeo CxxC associa-se à PDI de superfície e inibe parcialmente a agregação plaquetária via mecanismos mediados por trocas tiol-dissulfeto.
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Efeito do plasma rico em plaquetas na regeneração do terço central do ligamento da patela: estudo prospectivo randomizado / Platelet-rich plasma in the regeneration of the patellar ligament after harvesting its central third: a prospective randomized studyAdriano Marques de Almeida 23 May 2011 (has links)
INTRODUÇÃO: O plasma rico em plaquetas (PRP) é utilizado em medicina esportiva para aumentar e acelerar o processo de reparação tecidual em lesões tendineas e ligamentares, no intuito de proporcionar um retorno mais rápido às atividades esportivas. No entanto faltam estudos com alto nível de evidência comprovando sua eficácia no tratamento destas lesões. Com o objetivo de estudar o efeito da aplicação do PRP no sitio doador de enxerto do ligamento da patela para reconstrução do ligamento cruzado anterior (LCA), realizamos ressonância magnética aos seis meses de pós-operatório para avaliar o ligamento da patela. Também aplicamos questionários de função do joelho e realizamos teste isocinético após seis meses da cirurgia. MÉTODOS: O presente estudo prospectivo, randomizado, avaliador cego incluiu 27 pacientes. Comparamos doze pacientes em que foi utilizado o PRP no defeito criado no terço central do ligamento da patela para retirada de enxerto com quinze pacientes do grupo controle. Aos seis meses de cirurgia realizamos ressonância magnética, em que foi avaliada a área não regenerada do defeito no terço central do ligamento da patela, a área de secção transversa do ligamento e a altura da patela pelo índice de Insall- Salvati. Realizamos teste isocinético e aplicamos questionários específicos de função do joelho. Quantificamos a dor pós-operatória imediata com escala visual analógica (EVA) de dor. RESULTADOS: Aos seis meses de pós-operatório a área não regenerada do defeito no terço central do ligamento da patela foi 4,95 mm2 no grupo PRP e 9,38 mm2 no grupo controle (p=0,046, teste t de Student). A área de secção transversa do ligamento da patela no grupo PRP foi de 173,05 mm2 e no grupo controle 176,29 mm2 (p=0,856). O índice de Insall-Salvati nos grupos PRP e controle foi de 1,04 e 1,06, respectivamente (p=0,808). Não houve diferença entre os grupos nos resultados dos questionários e teste isocinético. Nos pacientes em que foi utilizado o PRP houve menos dor pós-operatória imediata (p=0,02). CONCLUSÃO: Concluímos, nessa amostra, que o uso do PRP no defeito do terço central do ligamento da patela na reconstrução do LCA, nos primeiros seis meses; determinou maior regeneração do defeito; diminuiu a intensidade da dor pós-operatória imediata; não ocasionou alterações estruturais na avaliação por ressonância magnética; e não modificou os resultados clínicos e funcionais da cirurgia / INTRODUCTION: Platelet-rich plasma (PRP) has been used in sports medicine to improve and accelerate ligaments and tendons healing, in an effort to provide a faster return to sports activities. However there is a lack of high evidence level studies to support its use. With the purpose to study the effect of PRP, patellar ligament was evaluated six months after harvesting its central third with magnetic resonance imaging (MRI). We also applied specific questionnaires of knee function and isokinetic testing. METHODS: This blinded, randomized, prospective study included 27 patients. Twelve patients in whom we added PRP in the patellar ligament after harvesting its central third for ACL reconstruction were compared to fifteen patients in the control group. After six months we evaluated the non-regenerated area of the patellar ligament, the cross section area of the patellar ligament and its length (Insall-Salvati index) with MRI. We also evaluated the results of isokinetic testing and specific questionnaires of knee function. Immediate post-operative pain was evaluated with visual analogical scale (VAS) score. RESULTS: The non-regenerated area of the patellar ligament was 4,95 mm2 in the PRP group and 9,35 mm2 in the control group (p=0,046 test). The cross section area of the patellar ligament in the PRP group was 173,05 mm2 and in the control group 176,29 mm2 (p=0,856). The Insall- Salvati index in the PRP and control group was 1,04 and 1,06, respectively (p=0,806). There was no difference between the groups in the questionnaires and isokinetic testing results. PRP group patients had less post-operative pain (p=0,02). CONCLUSION: We concluded, in this sample, that the use of PRP in the patellar ligament after harvesting its central third for ACL reconstruction, in the first six months: improved the ligament regeneration; reduced the intensity of immediate post-operative pain; did not cause structural changes in the patellar ligament in MRI; and did not modify the clinical and functional results of the procedure
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Aférese x centrifugação do sangue total: análise de custo-efetividade entre os distintos procedimentos para produção do concentrado de plaquetas / Apheresis x total blood centrifugation: cost-effectiveness analysis between the different procedures for the production of platelet concentratesVanessa de Oliveira Rodrigues 04 December 2017 (has links)
A centrifugação é o principal método utilizado para fracionar o Sangue Total (ST) nos componentes sanguíneos: Concentrados de Hemácias (CH), Concentrados Plaquetas (CP), Plasma e Crioprecipitado, (também chamados de Hemocomponentes). Com intuito de prevenir ou controlar hemorragias, os CP obtidos por centrifugação tornaram-se o padrão no atendimento inicial aos pacientes com baixas contagens de plaquetas. Porém, para obter uma unidade terapêutica (UT), no Hemocentro RP, é necessário agregar seis CP, formando o Pool de CPST (PCP), o que leva a exposição do receptor a vários doadores diferentes. O CP obtido por aférese (CPAF), advindo de equipamento que permite a seleção já na coleta, fornece a dose necessária em apenas uma doação. Baseado no levantamento de dados internos do Hemocentro de RP o presente estudo analisou, através da metodologia de Custeio Baseado em Atividade (ABC), os custos atribuídos às distintas metodologias para a produção dos CP, sabendo que no Hemocentro RP, os CP são dispensados como UT independente da forma de obtenção. Os resultados obtidos foram utilizados na Análise de Custo-Efetividade, evidenciando que a coleta por Centrifugação de ST com a produção de PCP foi mais custo efetiva em 2015 do que a coleta de aférese, porém, por uma diferença relativamente pequena, devido ao grande percentual de obtenção de dupla Unidade Terapêutica (CPAF2). / Centrifugation is the main method used for fractionating Total Blood (TB) to blood components: Red Cells Concentrate (CR), Platelet Concentrates (PC), Plasma and Cryoprecipitate (also called Hemocomponents). In order to prevent or control bleeding, CPs obtained by centrifugation became the standard treatment of patients with low platelet counts. However, to obtain a therapeutic unit (TU), at Hemocentro RP, it is necessary to get together six PCs, forming a Pool of TBPC (PCP), exposing the receptor to several different donors. PC obtained by apheresis (CPAF), which is provided by a equipment that allows selective collection, achieve the dose necessary for the selection in just one donation. Based on the collection of internal data from the Hemocentro RP, the present study analyzed, through the methodology of ActivityBased Costing (ABC), the costs attributed to the different methodologies for the production of PCs knowing that in the Hemocenter RP PCs are dispensed as TU independent of the way of obtaining. The results obtained were used in the CostEffectiveness Analysis, showing collecting by TB Centrifugation producing PC is more cost-effective, however CPAF was almost as effective as in 2015, a great achievement of Dual Therapeutic Unit in a single donation (CPAF2).
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Efeito da pravastatina na agregação e número de plaquetas circulante em ratos tratados e não tratados com LPS / Effect of aggregation in pravastatin and current number of plates in rats treated and untreated with LPSNaime, Ana Carolina Antunes, 1987- 24 August 2018 (has links)
Orientador: Sisi Marcondes Paschoal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T17:43:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2014 / Resumo: A sepse leva a uma alta taxa de mortalidade em hospitais de todo o mundo e por se tratar de um quadro clínico muito complexo ainda não há tratamento eficaz para o mesmo. Nas últimas décadas tem-se dado destaque para o papel das plaquetas na sepse, já que a gravidade do quadro correlaciona-se com o número de plaquetas circulantes e seu estado de ativação. Uma vez que as estatinas têm sido usadas clinicamente com muito sucesso no tratamento de doenças inflamatórias, decidimos investigar o efeito da pravastatina em plaquetas de ratos sadios e em modelo experimental de sepse induzida por lipopolissacarídeo (LPS). Para tanto, ratos foram tratados com solução salina ou pravastatina 20 mg/kg (gavagem, uma vez ao dia durante 7 dias). No sexto dia, os ratos de ambos os grupos receberam uma única injeção de salina ou de LPS (1 mg/kg, i.p.) e após 48h o sangue arterial foi coletado. A determinação plasmática de TNF-'alfa' e trombopoietina foi feita por ELISA. O número de megariócitos foi determinado pela histologia da medula óssea. A agregação plaquetária foi induzida por ADP (1-10 µM). A formação de espécies reativas de oxigênio (EROs) e GMPc foi analizada em plaquetas por citometria de fluxo utilizando a sonda fluorescente DCFH-DA e por kit comercial, respectvamente. Também foi avaliada a atividade enzimática da SOD e glutationa peroxidase (GPx) em plaquetas através de kits comerciais. Nos ratos injetados com salina, a pravastatina aumentou 3,7 vezes os níveis plasmáticos de TNF-'alfa'. Além disso, a pravastaina reduziu 36% o número de plaquetas circulantes. A agregação plaquetária induzida por ADP foi significativamente reduzida por esta estatina, a qual foi acompanhada de uma redução dos níveis intraplaquetários de GMPc. Apesar do aumento marcante da atividade enzimática da SOD e da GPx, a pravastatina aumentou 2,4 vezes a quantidade de EROs em plaquetas de ratos injetados com salina. A pravastatina reduziu o número aumentado de leucócitos totais observado em ratos injetados com LPS para os mesmos valores encontrados em ratos injetados com salina. A concentração plasmática aumentada de TNF-? também foi reduzida pelo pré-tratamento com pravastatina, mas ainda permaneceu significativamente maior do que a observada em ratos injetados com salina. O LPS reduziu 6.8 vezes o número de plaquetas circulantes, o qual foi acompanhado por aumento do número de megacariócitos e redução de trombopoetina. O pré-tratamento com pravastatina restaurou os valores de trombopoetina e megacariócitos, mas não preveniu a queda do número de plaquetas circulantes. A agregação plaquetária induzida por ADP foi inibida por LPS e restaurada pela pravastatina. A quantidade de EROs em plaquetas de ratos injetados com LPS foi 2,2 vezes maior do que a observada em ratos injetados com salina, o qual foi acompanhado por um aumento significativo da atividade enzimática da SOD e da GPx. O pré-tratamento com pravastatina dos ratos injetados com LPS não modificou da quantidade de EROs intraplaquetária, mas reduziu de forma marcante a atividade enzimática da SOD e da GPx. Portanto, nossos resultados mostram que a administração de pravastatina em animais sadios, além de levar a trombocitopenia e estresse oxidativo plaquetário, promove um aumento dos níveis plasmáticos de TNF-?, o que poderia incorrer em danos teciduais a longo prazo. A pravastatina restaura a agregação plaquetária e melhora o quadro inflamatório dos ratos injetados com LPS. Entretanto, esta estatina não previne a queda acentuada do número de plaquetas circulantes, marcador importante para avaliação da gravidade da sepse, e nem reduz o estresse oxidativo plaquetário, o que poderia contribuir para a disfunção de diferentes tecidos. Sendo assim, a pravastatina não parece ser uma boa opção no tratamento da sepse / Abstract: Sepsis is still a cause of high mortality in hospitals all over the world. It is a very complex clinical condition and up to now there is no effective treatment. In the last decades works have been plublished describing the important role of platelets in sepsis, since the severity of the condition is correlated to the number of circulating platelets and their activation state. Statins, besides their action on lowering the cholesterol levels, have been successfully used in the treatment of inflammatory diseases. Therefore, in the present study we decided to investigate the effect of pravastatin in platelets of healthy rats and in model of experimental sepsis induced by lipopolysaccharide (LPS). Rats were treated with saline or pravastatin (20 mg/kg, gavage once daily for 7 days). On the sixth day, the rats in both groups received a single injection of saline or LPS ( 1 mg / kg, i.p.) and after 48h the arterial blood was collected. Plasmatic TNF-? and thrombopoietin concentrations were measured by ELISA. The number of megakaryocytes was determined by histology of the bone marrow. Platelet aggregation was induced by ADP (1-10 mM ). The formation of reactive oxygen species (ROS) and cGMP in platelets was analyzed by flow cytometry using DCFH-DA and by commercial kits, respectively. We also analyzed the enzymatic activity of SOD and glutathione peroxidase ( GPx ) in platelets using commercial kits. In rats injected with saline, pravastatin increased 3.7 fold the plasma levels of TNF-'alfa'. Furthermore, pravastaina reduced 36% the number of circulating platelets. Platelet aggregation induced by ADP was significantly reduced by this statin, which was accompanied by a reduction in the intraplatelet cGMP levels. Despite the marked increase in enzymatic activity of SOD and GPx, pravastatin increased 2.4 fold the amount of ROS in platelets of saline-injected rats. Pravastatin reduced the increased number of total leukocytes in LPS-injected to the same values found in rats injected with saline. Increased TNF-'alfa' plasma concentration was also reduced by pre-treatment with pravastatin, but it still remained significantly higher than that observed in saline-injected rats. LPS reduced 6.8 fold the number of circulating platelets, which was accompanied by increased numbers of megakaryocytes and reduced thrombopoietin concentration. Pre-treatment with pravastatin restored the values of thrombopoietin and megakaryocytes, but did not prevent the drop in circulating platelets. ADP-induced platelet aggregation was inhibited by LPS and restored by pravastatin. The amount of ROS in platelets of LPS-injected rats was 2.2 fold higher than that observed in rats injected with saline, which was accompanied by significant increase in SOD and GPx activity. The pretreatment with pravastatin of LPS-injected rats did not change the amount of intraplatelet ROS but markedly reduced SOD and GPx activity. Therefore, our results show that administration of pravastatin in healthy animals, in addition to lead thrombocytopenia and platelet oxidative stress, it promotes an increase in TNF-'alfa' levels, which could result in tissue injury in long-term. Pravastatin restores platelet aggregation and improves the inflammatory condition of LPS-injected rats. However, this statin does not prevent sharp drop in the number of circulating platelets, an important marker for evaluating the severity of sepsis, and neither reduces platelet oxidative stress, which could contribute to the dysfunction of different tissues. Thus, pravastatin does not seem to be a good option in the treatment of sepsis / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia
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