Resumo:o presente trabalho teve por objetivo isolar células mesenquimais da geléia de Wharton do cordão umbilical canino e avaliar, in vitro, o efeito do plasma rico em plaquetas (PRP) e da matriz óssea desmineralizada (MOD) na diferenciação osteogênica destas células na ausência de meio osteoindutor. As células foram isoladas e caracterizadas como células mesenquimais indiferenciadas com fenótipo semelhante a de fibroblastos e fenótipo característico confirmado pela citometria de fluxo com CD44+, CD105+, CD271+, CD34- e CD45-; além da habilidade de diferenciação em adipócitos, condrócitos e osteócitos. Com exceção do grupo controle (células mesenquimais), em todos os grupos, G-PRP (células mesenquimais e PRP), G-MOD (células mesenquimais e MOD) e G-PRP+MOD (células mesenquimais e PRP + MOD), houve diferenciação osteoblástica com produção de matriz óssea mineralizada, confirmada pela coloração vermelho de Alizarina. A dosagem de fosfatase alcalina (FA) aumentou aos 14 dias em todos os grupos, com redução temporal subsequente. Proteínas ósseas foram expressas na reação em cadeia da polimerase em tempo real e puderam confirmar a diferenciação óssea em todos os grupos. A osteopontina teve sua maior expressão no G-PRP aos sete dias, seguido do grupo G-PRP+MOD... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:This study aimed to isolate MSCs from canine Wharton's jelly umbilical cord and evaluate in vitro the effect of PRP and the MOD in osteogenic differentiation of these cells in the absence of osteogenic medium. Cells were isolated and characterized as undifferentiated mesenchymal cells with a phenotype fibroblasts-like and characteristic phenotype of confirmed by flow cytometry with CD44 +, CD105 +, CD271 +, CD34-and CD45-, plus the ability to differentiate into adipocytes, chondrocytes and osteocytes. Except for the control group (MSCs), in all groups, G-PRP (PRP and MSCs), G-DBM (DBM and MSCs) and G-PRP + DBM (MSCs and PRP + DBM) was differentiation osteoblastic with production of mineralized bone matrix confirmed by Alizarin red staining. The measurement of alkaline phosphatase (AP) increased up to 14 days in all groups. Bone proteins were expressed in the polymerase chain reaction in real time and were able to confirm the differentiation bone in all groups. Osteopontin had its greatest expression in G- PRP to seven days followed by G-PRP + DBM, at other times the G-PRP + DBM had higher expression than the other groups. The osteocalcin and Runx2 were expressed more intensely in the G-PRP + DBM at the end of the experiment. It can be concluded that the PRP and DBM are capable of promoting osteogenesis mesenchymal cells in Wharton's jelly of the umbilical cord with canine, with advantage in the presence of DBM / Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Banca: Rita Cássia Menegati Dornelles / Banca: Márcio Mateus Beloti / Doutor

Orientador: Cláudia Valéria Seullner Brandão / Banca: Sheila Canevese Rahal / Banca: Carlos Roberto Teixeira / Banca: Fernando de Biasi / Banca: Bruno Watanabe Minto / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar clínica e histologicamente, os efeitos do uso do PRP na viabilidade de enxertos cutâneos autólogos e homólogos de espessura total em coelhos. Para isso foram constituídos quatro grupos experimentais (n=9), designados como: G1: o enxerto autólogo tratado com o PRP; G2: enxerto autólogo; G3: enxerto homólogo tratado com PRP e G4: enxerto homólogo. Deste modo, cada coelho foi submetido ao tratamento com PRP e seu controle dos enxertos autólogos e homólogos, totalizando 36 amostras. Todas a etapas foram documentadas para a avaliação clínica macroscópica e no 19º dia foi coletado da área central, um fragmento de cada enxerto para a avaliação histomorfológica. O tratamento do enxerto autólogo com o PRP promoveu influência positiva na fase inicial ou de "pega" do enxerto, demonstrada por coloração avermelhada à avaliação macroscopia e aspecto cosmético comparado aos demais tratamentos. Na avaliação histomorfométrica, o número de macrófagos foi superior nos enxertos homólogos em relação aos autólogos. Porém, não houve diferença no número de macrófagos e fibroblastos com a instituição do tratamento com PRP. O tratamento do enxerto autólogo com o PRP, na forma líquida, promove influência positiva na fase inicial ou de "pega" do enxerto / Abstract: The objective of this study was to evaluate clinically and histologically, the effect of PRP on the viability of the autologous and homologous full thickness grafts in rabbits. Four experimental groups (n=9) were studied and designated as G1: autologous graft treated with PRP; G2: autograft; G3: homograft treated with PRP and G4: homograft. Each rabbit was subjected to treatment with PRP and its control of autologous and homologous grafts, representing 36 samples. All steps were documented for the macroscopic clinical assessment and at 19th postoperative days, skin biopsy was collected from the central area, for histomorphological evaluation. The treatment of graft with PRP resulted positive influence in the initial phase or "handle" of the graft, demonstrated by the reddish macroscopic and cosmetic appearance compared to others treatments. The histomorphometric evaluation, the number of macrophages in the grafts was higher in homologs compared to autologous. However, there was no difference in the number of macrophages and fibroblasts with the PRP treatment. The treatment of the graft with PRP in liquid form, promotes a positive influence on the initial phase or "take" of the graft / Mestre

As queimaduras são eventos comuns e recorrentes no dia a dia dos atendimentos médicos. Há uma constante busca para entender a sua fisiopatologia, no intuito de minimizar seus resultados devastadores. Plasma rico em plaquetas (PRP) é um concentrado de plaquetas com capacidade de liberação local de múltiplos fatores de crescimento (FC) que aceleram a cicatrização. Este estudo consiste em dois experimentos: o primeiro visa validar um modelo experimental para a criação de queimaduras de tamanho e profundidade padronizados e, o segundo, avalia o uso de PRP em queimaduras. Para o desenvolvimento de queimaduras na validação do modelo experimental, foi idealizado um equipamento que permitisse o controle preciso da temperatura, além da utilização em conjunto de uma técnica inovadora de fixação que garante pressão constante no momento das queimaduras. Para o primeiro experimento, foram utilizados 12 ratos, por grupo, submetidos a queimaduras de 60 oC, 70 oC ou 80 oC por dez segundos, com um equipamento que desenvolvemos. Metade dos animais de cada grupo foi morta no terceiro dia e suas feridas foram analisadas por histologia, e, na outra metade, a ferida foi mensurada e acompanhada até o seu fechamento. No uso de PRP em queimaduras, foram avaliadas queimaduras de segundo grau (SG), segundo grau com diabetes mellitus induzido (SGD) e queimaduras de terceiro grau (TG). Noventa animais foram distribuídos em três grupos (SG, SGD e TG), onde, em cada um, dez animais foram tratados, dez serviram de controle e dez foram utilizados para o preparo do PRP. As áreas das feridas foram acompanhadas até o vigésimo primeiro dia, quando os animais foram mortos e biópsias de pele foram realizadas. Os resultados da validação do modelo mostram que as queimaduras produzidas com 60 oC foram de SG superficial (28% da derme envolvida); com 70 oC foram de SG profundo (72% da derme envolvida); e com 80 oC foram de TG (100% da derme envolvida). Em relação ao uso de PRP em queimaduras, observou-se que nos grupos tratados SG e SGD houve aceleração do fechamento da ferida e redução no número de células CD31, CD163, CD68, MPO e TGF-β positivas, e aumento do número de células MMP2 positivas. A neoepiderme foi mais fina nos controles dos grupos SG e SGD, e o tecido de granulação foi reduzido nos controles SGD e TG. O modelo utilizado é seguro e confiável para produzir queimaduras regulares e uniformes, de diâmetros variados, pela capacidade do controle fino da temperatura e pelo posicionamento do animal, e reprodutíveis. PRP parece acelerar a cicatrização de queimaduras de SG e SGD, mas não de TG. / Burns are common and recurring events in the daily lives of medical care. There is a constant search to understand itsphysiopathology, in order to minimize its devastating results. Platelet-rich plasma (PRP) is a platelet concentrate with capacity of local release of multiple growth factors (FC) that accelerate healing. This study consists in two experiments: the first to validate an experimental model for the creation of standardized burns in size and depth and the second to evaluate the use of PRP in burns. The burns were achieved in an experimental burn model using an equipment that we developed and allows precise temperature control and in association with a innovative fixation technique that creates a constant pressure. Twelve rats per group underwent burns at 60oC, 70oC or 80oC for 10 seconds, with a device that we developed. Half of the animals of each group was killed on the third day and their wounds were analyzed by histology, and in the other half the wounds were measured and monitored until their closure. In the use of PRP in burns, second degree burns (SD), second degree burns with induced diabetes mellitus (SDD) and third degree burns (TD) were evaluated. Ninety animals were divided into three groups (SD, SDD, and TD) and in each one10 animals were treated, 10 animals served as controls, and 10 animals were used for PRP preparation. The wound areas were accompanied until the twenty-first day, when the animals were killed and skin biopsies were obtained. The results of the validation of the model show that the burns derived from 60oC were of superficial SD (28% of the dermis involved); for 70 C they were deep SD (72% of the dermis involved); and for 80oC they were TD (100% of the dermis involved). Regarding the use of PRP in burns, it was observed that in the SD and SDD treated groups the wound closure was accelerated and there was reduction in the number of CD31, CD163, CD68, MPO, and TGF-β positive cells, and increasing of the number of MMP2 positive cells. The neoepidermis was thinner in control of both SD and SDD groups, and the granulation tissue was reduced in both control SDD and TD. The model used is safe and reliable to produce regular and uniform burns of varying diameters, by its ability of the fine control of temperature, by the animal positioning, and by its reproducibility. PRP appears to accelerate the healing of burns of SD and SDD, but not TD.

Universidade do Estado do Rio de Janeiro / Estudos publicados nas duas últimas décadas sugerem um aumento do risco de doença cardiovascular (DCV) em pacientes com periodontite, mas os mecanismos fisiopatológicos dessa associação ainda não estão completamente esclarecidos. Uma vez que foi demonstrado aumento da ativação plaquetária e do estresse oxidativo na periodontite, o objetivo do presente estudo foi investigar a via L-arginina-óxido nítrico (NO)- guanosina monofosfato cíclica (GMPc) e parâmetros de estresse oxidativo em plaquetas de pacientes com periodontite, bem como avaliar o efeito do tratamento periodontal não-cirúrgico nessas variáveis. Um total de 10 pacientes sem periodontite (periodontalmente saudáveis ou com gengivite) e 10 pacientes com periodontite participaram do estudo. A avaliação clínica, laboratorial e experimental foi realizada no início do estudo e 90 dias após realização da terapia periodontal básica (grupo periodontite). A avaliação clínica periodontal incluiu registros de: profundidade de bolsa à sondagem (PBS), nível de inserção (NIC), percentual de placa e percentual de sangramento à sondagem. Os seguintes experimentos foram realizados: influxo de L-arginina; atividade e expressão das enzimas óxido nítrico sintase e da arginase; expressão das enzimas guanilato ciclase solúvel e fosfodiesterase 5; determinação dos níveis intraplaquetários de GMPc; agregação plaquetária; avaliação do estresse oxidativo (atividade oxidante total, atividade das enzimas antioxidantes catalase e da superóxido dismutase - SOD); medição dos níveis de proteína C reativa (CRP) e de fibrinogênio. Os resultados obtidos no início do estudo demonstraram ativação do influxo de L-arginina em plaquetas via sistema y+L nos pacientes com periodontite, bem como concentrações intraplaquetárias de GMPc diminuídas e aumento sistêmico da CRP. Após o tratamento periodontal, observou-se redução do percentual de sítios com PBS ≥ 6 mm, NIC 4-5 mm e NIC ≥ 6 mm, aumento nos níveis de GMPc, para níveis comparáveis aos dos pacientes sem periodontite, acompanhado por uma maior atividade das enzimas antioxidantes SOD e catalase. Os demais parâmetros avaliados não apresentaram alterações significativas tanto pré- quanto pós-tratamento. Esses resultados considerados em conjunto sugerem uma menor biodisponibilidade de NO em plaquetas na periodontite e que o tratamento periodontal não-cirúrgico foi capaz de reverter este quadro por um aumento das defesas antioxidantes. Portanto, alterações na via L-arginina-NO-GMPc e no estresse oxidativo podem levar à disfunção plaquetária, que poderia contribuir para um maior risco de DCV nos pacientes com periodontite. / Studies published over the last two decades have suggested an increase of cardiovascular disease (CVD) risk on periodontitis patients, but the physiopathological mechanisms involved in this association are not yet clear. Since it has been demonstrated an enhancement on both platelet activation and oxidative stress on periodontitis patients, the aim of this study was to investigate the L-arginine-nitric oxide (NO)-cyclic guanosine monophosphate (cGMP) pathway on platelets from periodontitis patients, and the effect of non-surgical periodontal treatment in these variables. A total of 10 patients without periodontitis (periodontal healthy controls or gingivitis patients) and 10 periodontitis patients were included in this study. The clinical, laboratorial, and experimental evaluations were performed at the beginning of the study and 90 days after the basic periodontal therapy (periodontitis group). The clinical periodontal evaluation included the measurements of probing pocket depth (PPD), clinical attachment level (CAL), plaque percentage, and percentage of bleeding on probing. The following experiments were performed: L-arginine influx; nitric oxide synthase and arginase enzymes activity and expression; expression of guanylate cyclase and phosphodiesterase-5 enzymes; measurement of intraplatelet cGMP levels; platelet aggregation; oxidative stress evaluation (total oxidant activity and activity of both antioxidant enzymes catalase and superoxide dismutase SOD); measurement of C reactive protein (CRP) and fibrinogen. The initial results demonstrated an activation of L-arginine influx in platelets from periodontitis patients via y+L system, reduced intraplatelet cGMP levels and increased CRP. After periodontal treatment, it was observed reduction on percentage of sites with PPD ≥ 6 mm, CAL 4-5 mm and CAL ≥ 6 mm, enhancement on cGMP levels, to levels comparables to patients without periodontitis, accompanied by a higher activity of both antioxidant enzymes SOD and catalase. The other evaluated parameters did not showed significant alterations before and after periodontal treatment. The present results suggested a decreased NO biodisponibility in platelets from periodontitis patients and that the non-surgical periodontal treatment was effective to revert this condition, due to an enhancement on antioxidant defence. Therefore, alterations on L-arginine-NO-cGMP pathway and oxidative stress may lead to platelet dysfunction, which could contribute to a higher risk of CVD in periodontitis patients.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A depressão é uma doença grave que vem se tornando mais prevalente na população mundial e no Brasil. Segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS), é a quarta doença mais incapacitante e estima-se que em 2020 ocupe o segundo lugar, ficando atrás apenas das doenças cardiovasculares (DCV), que são a principal causa de morte no mundo. O Transtorno depressivo maior (TDM) se caracteriza por humor deprimido, tristeza intensa ou desânimo ou perda de interesse ou de prazer por quase todas as atividades por, pelo menos, duas semanas. Além disso, tem um elevado índice de mortalidade cardiovascular, e esta associação parece ser multifatorial e altamente complexa, e ainda não está completamente elucidada. Recentes estudos sugerem que a ocorrência de aterotrombose e eventos cardiovasculares no TDM está associada a uma diminuição na biodisponibilidade do óxido nítrico (NO), um potente vasodilatador, anti-agregante plaquetário e neurotransmissor. O NO é um gás formado a partir da L-arginina, pela ação da família de enzimas NO sintases (NOS), e vai ocasionar um aumento de guanosina monofosfato cíclica (GMPc), que é posteriormente degradada pelas fosfodiesterases (PDE). A L-arginina participa em outras vias além da produção de NO, como a arginase. O estresse oxidativo também tem uma participação no desenvolvimento dos transtornos psiquiátricos e nas DCV, e pode reduzir a meia-vida do NO. O objetivo deste estudo é investigar a via NO-GMPc, o ciclo da uréia, marcadores de estresse oxidativo e de inflamação em plaquetas e a sua associação com a função plaquetária no TDM. Participaram da pesquisa nove pacientes com diagnóstico de depressão leve a moderada do Serviço de Psicologia Aplicada (SPA/UERJ) e onze indivíduos saudáveis pareados por idade como controles. Este projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética e Pesquisa do Hospital Universitário Pedro Ernesto (1436-CEP/HUPE). A agregação plaquetária, a expressão e atividade da arginase II, a expressão da PDE 5, marcadores de estresse oxidativo (níveis de TBARS, carbonilação de proteínas, expressão da NADPH oxidase e da glutationa peroxidase (GPx) e atividade desta e da catalase (CAT), ambas enzimas anti-oxidantes) nas plaquetas e no soro, e o fibrinogênio sistêmico foram investigados. No presente estudo observou-se um aumento da agregação plaquetária induzida por ADP em pacientes com TDM comparados aos controles. Uma ativação da arginase II em plaquetas sem qualquer alteração na sua expressão foi demonstrada em pacientes com TDM. Além disso, um aumento na carbonilação de proteínas e na expressão de GPx, de NADPH e de PDE5 foi observado em plaquetas de pacientes com TDM. A produção de TBARS, a atividade de GPx e CAT nas plaquetas e no soro não foram afetados pelo TDM. Não houve diferença nos níveis de fibrinogênio entre pacientes com TDM e controles. A ativação da arginase, somada ao estresse oxidativo, reduziria a biodisponibilidade de NO levando à disfunção plaquetária nos pacientes com TDM. O presente estudo acrescenta dados importantes para a compreensão dos mecanismos celulares envolvidos na relação TDM e DCV. Além disso, abre caminho para a utilização de novas ferramentas farmacológicas, como os antioxidantes, para o tratamento do TDM. / Depression is a serious disease that is becoming increasingly prevalent in the world and in Brazil. According to World Health Organization (WHO), it is fourth cause of disability and it is estimated that in 2020 will occupy the second place, only after cardiovascular diseases (CVD), which are the main cause of death worldwide. The major depressive disorder (MDD) is characterized by depressed mood, intense sadness or discouragement or loss of interest or pleasure in almost all activities for at least 2 weeks. Moreover, it has high cardiovascular mortality rate, and this association seems to be multifactorial and complex, which is not completely elucidated. Recent studies suggest that atherothrombosis occurrence and cardiovascular events in MDD are associated to a reduced nitric oxide (NO) bioavailability, a potent vasodilator, inhibitor of platelet aggregation and neurotransmissor. NO is formed from L-arginine by a family of enzymes called NO synthases increasing cGMP concentration which is degraded by phosphodiesterases (PDE). L-arginine is also consumed in pathways other than NO production, such as arginase. Oxidative stress participates in the development of cardiovascular and psychiatric diseases, reducing NO half-life. Nine patients who met mild to moderate depression criteria from Applicated Psychology Service/UERJ and eleven healthy control subjects matched for age participated in this investigation. Ethical approval was obtained from the Pedro Ernesto Hospital Ethical Committee, UERJ (1436 - CEP/HUPE) before the beginning of the study. The aim of this study is to investigate the NO-cGMP pathway, the urea cycle, oxidative stress and inflammation in platelets and its association with platelet function in depression. The platelet aggregation, expression and activity of arginase II, expression of phosphodiesterase 5 (PDE5), oxidative stress markers (TBARS production, protein carbonylation, NADPH oxidase expression and anti-oxidant enzymes glutathione peroxidase (GPx) and catalase (CAT) activities) in platelets and in serum, and systemic fibrinogen, were investigated in untreated patients with MDD (n = 9) and healthy controls (n = 11). In the present study, an increased in platelet aggregation induced by ADP was observed in patients with MDD compared to controls. An activation of arginase II in platelets without any change in its expression was demonstrated in platelets from patients with MDD. Moreover, an increase in the protein carbonylation and GPx, NADPH and PDE5 expressions were observed in platelets from patients with MDD. TBARS production, catalase and GPx activities in serum and platelets were not affected by MDD. No difference was found in fibrinogen levels between MDD patients and controls. The activation of arginase, together with oxidative stress, reduces the bioavailability of NO which can lead to platelet dysfunction in patients with MDD. The present study adds important data for understanding the cell mechanisms linking MDD and CVD. Moreover, it opens the way for the use of new pharmacological tools like antioxidants for the treatment of MDD.

Muito se tem investido em pesquisa na compreensão dos processos e fenômenos envolvidos nas diversas fases da reparação tissular e, principalmente, no desenvolvimento de recursos e tecnologias com o objetivo de favorecer os avanços no tratamento de feridas. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos biológicos da associação células-tronco mesenquimais (CTMs) e plasma rico em plaquetas (PRP) como adjuvantes da cicatrização cutânea de feridas padronizadas em coelhos. Foram utilizados 37 coelhos Nova Zelândia, dentre os quais, 36 foram distribuídos em seis grupos: grupo controle (GC), grupo células-tronco mesenquimais (GCTM), grupo plasma rico em plaquetas na forma líquida (GPRPLIQ), grupo plasma rico em plaquetas na forma de gel (GPRPGEL), grupo associação células-tronco mesenquimais e plasma rico em plaquetas na forma liquida (GCTM+PRPLIQ), grupo associação células-tronco mesenquimais e plasma rico em plaquetas na forma de gel (GCTM+PRPGEL). Após indução de lesões cutâneas agudas e padronizadas, os animais receberam o tratamento de acordo com o grupo que compunham. Macroscopicamente, a cada dois dias, foram analisadas as medidas das lesões e calculadas a área e a taxa de cicatrização das mesmas. Amostras para análise microscópica foram coletadas em sete e 14 dias e avaliadas quanto à presença de células inflamatórias, angiogênese, formação de fibrose colagênica, proliferação epitelial e fibroblástica. Com base nos resultados obtidos foi possível concluir que: 1) a associação CTM e PRP em suas frações terapêuticas (CTM+PRPGEL e CTM+PRPLIQ) não acelerou o processo de cicatrização de feridas cutâneas agudas, na avaliação morfométrica aos 14 dias de pós-operatório; 2) a aplicação local da CTM e das frações de PRP quando utilizadas de maneira isolada não conseguiram acelerar o tempo necessário ao processo cicatricial na avaliação morfométrica aos 14 dias de pósoperatório; 3) a utilização do PRP na sua forma líquida obteve índices de epitelização menores em relação ao controle em avaliações histopatológicas aos 14 dias de pósoperatório; 4) à exceção do ocorrido com o grupo PRP líquido, os demais tratamentos não alteraram significativamente as fases inflamatória, proliferativa e inicial do remodelamento, segundo dados histopatológicos; 5) a terapia com as células-tronco mesenquimais promoveu cicatrizes esteticamente melhores na avaliação clínica, especialmente aos 14 dias de observação. Sugere-se a necessidade de novos estudos e a utilização de outras ferramentas diagnósticas para melhores subsídios de interpretação sobre os resultados encontrados. / Much has been invested on research regarding comprehension of the processes and phenomena that are involved in several stages of tissue repairing and mainly on resources and technologies development in order to support advances on wound healing. This study has been performed in order to evaluate the biological effects of mesenchymal stem cells (CTM) and platelet rich plasma (PRP) association as adjuvants on skin healing of standardized wounds in rabbits. Thirty-seven New Zealand rabbits have been used and, among these animals, 36 were allocated into six groups: control group (GC), mesenchymal stem cells group (GCTM), liquid platelet rich plasma group (GPRPLIQ), gel platelet rich plasma group (GPRPGEL), mesenchymal stem cells associated with liquid platelet rich plasma group (GCTM+PRPLIQ) and mesenchymal stem cells associated with gel platelet rich plasma group (GCTM+PRPGEL). After the induction of acute and standardized skin wounds, animals received the treatment according to the group they belonged to. Macroscopically, every two days, wounds measures were taken to calculate their area and healing rate. Samples for microscopically analysis were collected on day 7 and on day 14 and were evaluated for the presence of inflammatory cells, angiogenesis, collagen fibrosis formation, epithelial and fibroblastical proliferation. Basing on the results it was concluded that: 1) CTM and PRP in its two therapeutic fractions association (GCTM+PRPLIQ and GCTM+PRPGEL) did not accelerate the healing process of acute skin wounds, on morphometric assessment at 14 days after surgery; 2) local injection of CTM and PRP fractions when isolated did not accelerate the time required for wound healing on morphometric assessment at 14 days after surgery; 3) PRP application on its liquid fraction showed lower levels of epithelization related to control on histopathological evaluation at 14 days after surgery; 4) except GPRPLIQ, other treatments did not alter significantly inflammatory, proliferative nor initial remodeling phases, based on histopathological data; 5) CTM therapy promoted aesthetically better scars on clinical evaluation, especially at 14 days of observation. It is suggested the requirement of further studies and use of different diagnostic tools to obtain better interpretation of the achieved results.

Danos mitocondriais e diminuição nos níveis de ATP têm sido recentemente atribuídos à sertralina. Nós investigamos o efeito da sertralina em plaquetas humanas, já que estas células demonstram várias similaridades funcionais com neurônios e astrócitos. Os efeitos da sertralina em diferentes parâmetros foram investigados em plaquetas lavadas de 18 voluntários saudáveis do sexo masculino, depois de 24h de exposição ao fármaco. A toxicidade da sertralina foi observada apenas nas concentrações mais altas, 30 e 100μM, nas quais a viabilidade das plaquetas foi significantemente reduzida a 76 ± 3% e 20 ± 2 %, respectivamente. As mesmas concentrações reduziram o ATP a 73 ± 3% e 13 ± 2 %, respectivamente. Os valores basais de glicogênio não foram afetados significativamente pelo tratamento com sertralina. A captação de glutamato foi reduzida de forma significativa após o tratamento com 3, 30 e 100 μM, em 28 ± 6 %, 32 ± 5% e 54 ± 4 %, respectivamente. Nosso estudo demonstra que a sertralina em concentrações terapêuticas não compromete a viabilidade plaquetária, porém seu uso não pode ser considerado isento de risco, pois em um cenário no qual os níveis de glutamato extracelular estão potencialmente aumentados, a sertralina poderia agravar uma condição excitotóxica / Mitochondrial damage and fall in ATP levels have been recently attributed to sertraline. We investigated the effect of sertraline on human platelets, since these cells display several functional similarities with neurons and astrocytes. The effects of sertraline on different parameters were investigated in washed platelets from 18 healthy male volunteers, after 24 h of drug exposure. Sertraline toxicity was observed only at the highest concentrations, 30 and 100 μM, which significantly reduced platelet viability to 76 ± 3% and 20 ± 2%, respectively. The same concentrations significantly decreased total ATP to 73 ± 3% and 13 ± 2%, respectively. Basal values of glycogen were not significantly affected by sertraline treatment. The glutamate uptake was significantly reduced after treatment with 3, 30 and 100 μM, by 28 ± 6%, 32 ± 5% and 54 ± 4%, respectively. Our study showed that sertraline at therapeutic concentrations does not compromise platelet viability, but its use may not be without risk, since in a scenario where extracellular glutamate levels are potentially increased, sertraline might aggravate an excitotoxic condition.

A hemoterapia veterinária tem evoluído muito nos últimos anos, sempre seguindo os padrões de hemoterapia humana. Ao mesmo tempo em que a transfusão de concentrado de plaquetas tem sido cada vez mais requisitada em medicina veterinária ainda são escassas as pesquisas com alvo no concentrado de plaquetas canino. Este trabalho apresenta uma revisão da literatura sobre os aspectos estruturais e funcionais das plaquetas, indicações do uso de concentrado de plaquetas em cães, métodos de preparo e características desejadas em um concentrado de plaquetas; além de uma revisão sobre metabolismo, lesões plaquetárias de armazenamento e o uso da citometria de fluxo para avaliação de plaquetas. O presente estudo teve como objetivo padronizar técnicas de avaliação do concentrado de plaquetas canino relatando as mudanças observadas durante 5 dias de armazenamento. Para tal, foram avaliados aspectos de morfologia, ativação, função, metabolismo e indicadores de lesão mitocondrial e morte celular em CP canino através de técnicas de agregação plaquetária, bioquímica celular e citometria de fluxo durante o armazenamento. Foram utilizadas 22 bolsas de CP canino, avaliadas nos dias 1, 3 e 5 após a coleta. Todas as bolsas apresentaram-se negativas quanto ao isolamento de micro-organismos. Houve diminuição significativa da concentração de glicose, pCO2, bicarbonato, ATP, pH e swirling; aumento da concentração de lactato e da pO2; poucos sinais de ativação plaquetária; e diminuição do potencial de membrana mitocondrial no final do período estudado. Não foram observadas mudanças nos testes de exposição de fosfatidilserina e caspase durante o período avaliado. As sondas MitoTracker Green e MitoTracker Red podem ser utilizadas na avalição de lesão mitocondrial de plaquetas com resultados fidedignos. Foram padronizadas técnicas que não foram descritas na avaliação de plaquetas caninas, e que poderão ser utilizadas em outros estudos sobre o tema. Com este trabalho, é possível ter dados concretos a respeito das alterações metabólicas ocorridas ao longo do período de armazenamento. Estes dados servem como base para outros estudos in vitro e in vivo relacionados ao uso de concentrado de plaquetas. Espera-se gerar conhecimento e motivar mais pesquisas nas áreas de hematologia e hemoterapia veterinária. / Veterinary hemotherapy has evolved in the last years, following standards of human blood therapy. While the transfusion of platelet concentrate has been increasingly requested in veterinary medicine are insufficient studies on concentrate of canine platelets. This paper presents a review about structural and functional aspects of platelets, indications for the use of platelet concentrates in dogs, preparation methods and characteristics desired in a platelet concentrate; metabolism, platelet storage lesion and the use of flow cytometry to evaluate platelets. This study aimed to standardize canine platelet concentrate techniques reporting observed changes in 5 days of storage. For this purpose, were evaluated morphology, activation, function, metabolism, indicators of mitochondrial damage and cell death through the use of platelet aggregation techniques, biochemistry and cell flow cytometry. We evaluate standard techniques no earlier used in the evaluation of canine platelets, which can be used in other studies on the subject. For this, 22 canine platelet concentrates were evaluated on days 1, 3 and 5 after collection. All samples were negative for contamination. There was observed a significant decrease in glucose concentration, pCO2, bicarbonate, ATP, pH and swirling; enchance lactate and pO2 concentrations; few platelet activation signals; and decreased mitochondrial membrane potential in the end of the study period. There were no changes in phosphatidylserine and caspase exposure tests during the study period. The results reveal the the MitoTracker Green and MitoTracker Red dyes can be used in evaluation of platelets mitochondrial injury with reliable results. With this work, it was possible to have concrete information about the metabolic changes in canine platelet concentrate during the storage period. These data serve as a basis for other in vitro and in vivo studies regarding the use of canine platelet concentrate. The expectation of this research was to generate knowledge and encourage more research in hematology and veterinary hemotherapy.

Um estudo prévio demonstrou em pacientes com choque séptico a presença de exossomos plasmáticos. Nossa hipótese é que exossomos circulantes poderiam contribuir para a disfunção contrátil da sepse. Foi colhido sangue de 55 pacientes com choque séptico. A incubação de corações isolados com exossomos de pacientes sépticos reduziu significantemente as derivadas da pressão ventricular e aumentou as concentrações de nitrato no miocárdio. A exposição de músculos papilares a exossomos reduziu a tensão desenvolvida. Concluímos que exossomos de pacientes sépticos induzem disfunção inotrópica em corações isolados e músculos papilares, possivelmente contribuindo para a disfunção miocárdica da sepse. / A previous report identified in plasma of septic shock patients the presence of exosomes. We hypothesized that circulating exosomes in sepsis could contribute to inotropic dysfunction. We collected blood samples from 55 patients with septic shock. Incubation of isolated heart preparations with exosomes induced a significant decrease in the derivatives of ventricular pressure and increased myocardial nitrate content. Exposure of isolated rat papillary muscles to exosomes reduced developed tension. We conclude that exosomes from septic patients induce myocardial dysfunction in isolated heart and papillary muscle preparations. Thus, they may contribute to myocardial dysfunction of sepsis.

Enfermidade muito observada nas articulações dos equinos, o processo degenerativo articular crônico na articulação tibio-társica pode ser de origem primária, ou secundária à osteocondrose dissecante. A confirmação diagnóstica é feita por avaliação radiográfica. Importantes aliados diagnósticos são a avaliação do líquido sinovial, a avaliação ultrassonografia e a cirurgia de video-artroscopia, sendo esta última o tratamento para a enfermidade. Por sua evolução crônica e às vezes assintomática, a osteocondrose dissecante causa alterações no ambiente articular, como a perda de matriz cartilagínea, o que limita o potencial atlético do animal, acarretando em queda na performace e perdas econômicas. É comum o uso terapêutico intra-articular no periodo pós operatório recente de substâncias autólogas como o plasma rico em plaquetas (PRP), bem como o uso ácido hialurônico (HA), como adjuvante para o tratamento cirúrgico. O presente trabalho objetiva comparar e avaliar estes tratamentos. Foram utilizados 18 equinos, com idade variando entre 2 a 6 anos de idade, da raça Brasileiro de Hipismo, com peso corpóreo entre 400 e 650 kg, oriundos do mesmo criatório, com osteocondrose dissecante, na crista intermédia do osso tíbia. Estes animais no décimo dia pós operatório são dividos em três grupos experimentais: grupo AH, grupo PRP e grupo RCL como controle. Dados clínicos, ultrassonográficos e laboratoriais foram coletados em tempos definidos. Os resultados demonstraram que os animais do grupo controle - grupo RCL, que receberam solução de ringer com lactato intraarticular, apresentaram respostas clínicas e laboratoriais que indicaram menor indução do processo inflamatório ao ambiente articular quando comparado aos grupos PRP e AH. Os animais que receberam PRP apresentaram maior efusão sinovial e resposta positiva ao teste de flexão quando comparados aos animais que receberam AH; ao passo que a administração intra-articular de AH induziu maiores alteração citológica do líquido sinovial quando comparadas aos animais que receberam PRP. / One of the most commom diseases in the equine joint, the degenerative joint disease in the tibio tarsal joint could be a primary disease, or secondary to osteochondrosis dissecans. The diagnosis is made by radiographic study. Allies in diagnosing this disease includes sinovial fluid evaluation, ultrasonographic evaluation and video arthroscopy surgery, which is the way to treat this disease. The osteochondrosis dissecans has a chronic evolution, and several times asymptomatic, which causes an alteration on articular environment that contributes to a loss in the cartilage matrix. Resulting in the limited development of the athletic potential of the animal, poor performance and economic losses. Is common to use therapeutical autholog substances intra articular as the platelet rich plasma, and hialuronic acid, in the early post surgical treatment as an adjuvant therapy to the surgical treatment. This study reaches to compare and evaluate those treatments. Were used 18 horses, with ages between 2 to 6 years old, Brasileiro de Hipismo breed, weighting between 400 and 650 kg, from the same breeding center, with osteochondrosis dissecans fragments from the intermediate tibial crest. Those patients, 10 days after the video arthroscopy surgery, were divided in three experimental groups: AH group, PRP group, and RCL group as control group. Laboratorial data, clinical signs and ultrassonographic exam were performed. The results proved that RCL group had show less induction of inflamatory process on articular enviroment, when we compare with PRP group and AH group. The PRP group had shown more synovial effusion, and more sensibility to the flexion test when we compare to AH group; but the AH group had shown more laboratorial alterations when we compare to the PRP group.