Thèses (Ph.D.)--Université de Sherbrooke (Canada), 1997. / Titre de l'écran-titre (visionné le 24 août 2006). Publié aussi en version papier.

Thèses (M.Sc.)--Université de Sherbrooke (Canada), 2002. / Titre de l'écran-titre (visionné le 23 août 2006). Publié aussi en version papier.

Les plaquettes sanguines jouent un rôle essentiel dans le maintien de l'intégrité des vaisseaux sanguins. En cas de brèche vasculaire, elles conduisent à la formation d'un clou hémostatique via des étapes successives d'adhésion, sécrétion et agrégation finement régulées et préviennent alors un saignement excessif. Les plaquettes jouent également un rôle critique dans les pathologies thrombotiques comme l'athérothrombose, ce qui en fait des cibles pharmacologiques majeures dans ces situations. Au cours de ma thèse, deux axes de recherche ont été abordés : (i) l'étude du rôle de la PI3-kinase de classe III (Vps34) dans la formation et l'activation des plaquettes et (ii) l'étude de l'impact de nouvelles drogues ciblant les kinases en thérapie anti-cancéreuse sur les fonctions plaquettaires et l'hémostase. Dans un premier temps, je me suis concentrée sur la caractérisation du rôle de Vps34 et de son produit lipidique, le phosphatidylinositol 3 monophosphate (PtdIns3P), dans la physiologie plaquettaire à l'aide d'un modèle de souris présentant une délétion de Vps34 spécifiquement dans la lignée mégacaryocyte/plaquette (PF4-Cre/Vps34lox/lox). Nous avons observé une microthrombopénie modérée associée à un défaut de migration des mégacaryocytes ainsi que des anomalies morphologiques des granules de sécrétion. Ce phénotype apparaît lié à une diminution de taux de PtdIns3P associé à un trafic vésiculaire perturbé. De plus, nous avons mis en évidence une altération des fonctions prothrombotiques des plaquettes, ex vivo en conditions de flux mais aussi in vivo en conférant aux souris une protection contre la thrombose induite à la carotide par lésion au chlorure ferrique. La contribution de Vps34 dans les mécanismes d'activation plaquettaire, indépendamment de son rôle dans le mégacaryocyte, a été montrée ex vivo via l'utilisation de nouveaux inhibiteurs spécifiques de Vps34 (SAR405 et INH1) récemment développés pour une application en oncologie, notamment pour réduire la résistance de certains cancers aux chimiothérapies. Dans un second temps, je me suis intéressée à l'impact des nouvelles thérapies ciblées anticancéreuses sur les plaquettes afin de comprendre la majoration du risque hémorragique associée à ces molécules. Nous avons étudié l'effet de l'ibrutinib, un inhibiteur des tyrosine-kinases de la famille BTK activées en aval des PI3-kinases de classe I, utilisé en clinique dans le traitement des hémopathies lymphoïdes B (lymphomes et leucémie lymphoïde chronique). L'exploration des fonctions plaquettaires au sein d'une cohorte de patients du service d'hématologie du CHU-Toulouse a permis de corréler les signes hémorragiques de certains patients traités par ibrutinib avec un défaut de signalisation plaquettaire en aval des récepteurs GPVI et GPIb, se traduisant par une diminution de l'agrégation au collagène et au CRP et par un défaut d'adhésion sur matrice de facteur von Willebrand en conditions de flux. En conclusion, mes travaux de thèse (i) apportent de nouvelles données fondamentales sur la participation de Vps34 dans les mécanismes de production et d'activation plaquettaires et (ii) ont permis de proposer des recommandations quant à l'utilisation clinique des nouvelles thérapies ciblées anti-cancéreuses. / Blood platelets play an essential role in the maintenance of vascular integrity. They prevent excessive blood loss after vessel injury by orchestrating haemostatic clot formation through successive steps of adhesion, secretion and aggregation. Platelets are also major pharmacologic targets as they participate in thrombotic pathologies such as atherosclerosis. My thesis work was focused on two axis: (i) the role of class III PI3-kinase (Vps34) in platelet formation and activation and (ii) the impact of new anticancer drugs targeting kinases on platelet functions and haemostasis. First, I studied the role of Vps34 and its lipid product, phosphatidylinositol 3 monophosphate (PtdIns3P), in platelet physiology using a unique mouse model of Vps34 deletion specifically in megakaryocyte lineage (PF4-Cre/Vps34lox/lox). We observed a moderate microthrombocytopenia associated to a defect in megakaryocyte migration and morphologic abnormalities in secretion granules. This phenotype is linked to a decrease in PtdIns3P level associated with defective vesicular trafficking. Moreover, PF4-Cre/Vps34lox/lox mice exhibit altered prothrombotic functions, ex vivo in shear conditions and in vivo by conferring a protection against ferric chloride-induced carotid thrombosis. A role for Vps34 in platelet activation, independently from its role in megakaryocyte, was shown ex vivo using two specific Vps34 inhibitors (SAR405 and INH1) recently developed to reduce autophagy-mediated resistance to chemotherapy. Secondly, I assessed the impact of new targeted drugs used in cancer therapy on platelets in order to understand the increased bleeding risk associated to these molecules. We studied the effect of ibrutinib, a specific inhibitor of BTK family tyrosine kinases recently approved for the treatment of B malignancies (mantle cell lymphoma, chronic lymphocytic leukemia). By exploring platelet functions of ibrutinib-treated patients treated from Hematology department of Toulouse, we correlated bleeding symptoms to a defective platelet signaling downstream GPVI and GPIb receptors as shown by a strongly reduced platelet aggregation in response to collagen and CRP and by a defect in platelet adhesion on von Willebrand matrix under flow conditions. In conclusion, my thesis work (i) brings fundamental insights about Vps34 contribution in mechanisms of platelet production and functions and (ii) allows recommendations about clinical use of new targeted molecules in cancer therapy.

Les plaquettes jouent un rôle majeur dans l'hémostase mais également dans les maladies cardiovasculaires qui représentent une des principales causes de mortalité dans les pays industrialisés. Au cours de l'activation plaquettaire, les phosphoinositides 3-kinases (PI3Ks) de classe I génèrent des seconds messagers lipidiques (D3-phosphoinositides) participant activement à la transmission des signaux en aval des principaux récepteurs plaquettaires. Comme l'inhibition de la PI3Kbeta protège des thromboses occlusives sans augmenter le risque de saignement, cette kinase a été proposée comme nouvelle cible antithrombotique. Toutefois, le rôle de la PI3Kbeta dans des modèles de thrombose in vivo et ex vivo, dans des conditions de forces de cisaillement élevées, restait mal documenté au début de ma thèse. Le rôle de la PI3Kalpha?était également mal connu bien que l'utilisation d'inhibiteurs peu spécifiques suggérait son implication en aval du récepteur GPVI. L'objectif de ma thèse a été d'étudier le rôle de la PI3Kbeta dans la formation du thrombus in vivo et ex vivo, et de caractériser la fonction de la PI3Kalpha plaquettaire. Grâce à des souris présentant une invalidation de la PI3Kbeta ou alpha spécifiquement dans la lignée mégacaryocytaire, j'ai montré que la PI3Kbeta plaquettaire jouait un rôle essentiel dans la stabilité du thrombus dans des conditions de forces de cisaillement élevées. Son inhibition affecte l'activation d'Akt et empêche l'inhibition de son effecteur GSK3 au sein même du thrombus. De façon intéressante, l'inhibition de GSK3 restaure la stabilité du thrombus. Ainsi, la PI3Kbeta joue un rôle critique dans le maintien de l'intégrité du thrombus exposé à des forces de cisaillement élevées et cet effet ne peut être compensé par la PI3Kalpha. D'autre part, l'absence de la PI3Kalpha plaquettaire se traduit par un défaut d'agrégation et d'activation d'Akt lors d'une stimulation de faible intensité de GPVI. In vivo, le thrombus formé par les plaquettes invalidées pour la PI3Kalpha consécutivement à une lésion superficielle des artères, est de plus petite taille que chez les souris sauvages. En condition de flux ex vivo, il est noté un retard de formation du thrombus sur les fibres de collagène suggérant l'implication de la PI3Kalpha dans la phase d'adhésion des plaquettes à la matrice. En effet, des études d'adhésion en flux sur une matrice de facteur de von Willebrand (vWF) montrent que la PI3Kalpha est essentielle pour l'adhésion stable des plaquettes à cette matrice via la signalisation outside-in de l'intégrine alphaIIbbeta3. En conclusion, mes travaux de thèse mettent à jour un rôle spécifique des PI3Ks alpha et beta de classe I dans les plaquettes. La PI3Kbeta? est cruciale dans la régulation de la croissance et de la stabilité du thrombus dans des conditions de forces de cisaillement élevées, tandis que la PI3Kalpha?est requise dans la phase initiale d'adhésion des plaquettes sur une matrice de vWF. Ce travail apporte des nouvelles données qui seront utiles notamment dans le contexte du développement d'inhibiteurs sélectifs de PI3Ks en thérapie anticancéreuse et antithrombotique. / Platelets play a major role in cardiovascular diseases which is one principal cause of worldwide death. Class I phosphoinositide 3-kinases (PI3Ks) are important signaling enzymes in the process of blood platelet activation, producing lipid second messengers (D3-phosphoinositides) that are actively involved downstream of major platelet receptors. PI3Kbeta has been proposed as a potential drug target to treat arterial thrombosis. Indeed, inhibition of this lipid kinase leads to protection against occlusive thrombosis without bleeding risk. Nevertheless, nothing is known regarding the role of this kinase in vivo and ex vivo during growth, stabilization, and resistance upon elevation of shear rate. One study, using pharmacological inhibitors, has suggested that both PI3Kalpha and beta are required, in a non redundant way, for full platelet activation through collagen receptor GPVI, but the role of PI3Kalpha still remains elusive in platelets. The aim of my thesis was to study the role of PI3Kbeta during thrombus formation in vivo and ex vivo, and to characterize the role of PI3Kalpha in platelets. For that, I used pharmacological approach and mice with selective deletion of PI3Kbeta?or?PI3Kalpha in the megakaryocyte lineage (PF4-Cre/p110betaflox/flox and PF4-Cre/p110alphaflox/flox). I showed that PI3Kbeta is essential for thrombus growth and stability at high shear rates. Within the growing platelet thrombus, PI3Kbeta inactivation impairs the activating phosphorylations of Akt and the inhibitory phosphorylation of GSK3. In line with these data, pharmacological inhibition of GSK3 restores thrombus stability. Thus, platelet PI3Kbeta has a critical role in maintaining the integrity of the formed thrombus upon elevation of shear rate. In this condition, I showed that PI3Kbeta absence cannot be compensated by PI3Kalpha. In vitro, PI3Kalpha depletion in platelets leads to a light defect of aggregation and Akt activation in response to CRP showing implication of PI3Kalpha downstream GPVI. I observed that, in vivo, thrombi formed by PI3Kalpha depleted platelets after superficial lesion of mesenteric arterial are smaller, and ex vivo, thrombus formation under flow conditions on collagen matrix is delayed. Furthermore, perfusion of these platelets on von Willebrand factor matrix (vWF) shows that PI3Kalpha is required for stable adhesion of platelets through "outside in" signaling. Altogether, these results show an involvement of PI3Kalpha in the course of early step of platelet adhesion. In conclusion, my thesis work highlights an isoform specific role of PI3Ks in platelets. PI3Kbeta is crucial in the regulation of thrombus growth and stability at a high shear rate and PI3Kalpha is required in initial stages of platelet adhesion. Since class I PI3Ks selective inhibitors are under development as cancer treatment, these results may help to anticipate the potential side effects of such treatment on haemostasis.

De nombreuses pathologies sont à l’origine de perte de substance des parties molles à la fois cutanée représentant un enjeu de santé publique.Egalement de nombreux mécanismes lésionnels sont à l’origine du stress oxydatif pouvant altérer ces parties molles. L’avenir de la chirurgie reconstructrice sera de promouvoir des thérapies cellulaires autologues permettant la régénération tissulaire cutanée, musculaire et nerveuse tout en luttant contre le stress oxydatif.Les cellules souches mésenchymateuses d’origine adipeuse (ASC) représentent une source de cellules multipotentes plus faciles à isoler que celles de la moelle osseuse. En effet, les cellules souches localisées dans le tissu en cours de cicatrisation ont un rôle immunomodulateur, et améliore la trophicité par un effet pro-angiogénique, chimio-attractant, anti-fibrotique et anti-inflammatoire.Nos travaux précédents tendaient à montrer que l’association du plasma riche en plaquettes aux ASC en injection sous cutanée semblait améliorer la cicatrisation cutanée dans le modèle murin par un effet potentialisateur du PRP sur les ASC en stimulant leurs sécrétions de facteurs pro-angiogéniques (VEGF) et pro-inflammatoires (IL6) tout en augmentant leur survie.Notre hypothèse est que le plasma riche en plaquettes potentialise les CSM en milieu lésé ou en cas de stress en améliorant leur survie, le pourvoir angiogénique et chémoattractant.Nous objectif est d’évaluer l’association des ASC et du plasma riche en plaquette dans la régénération cutanée.Dans un premier temps, nous étudierons cette interaction en in vitro. Puis, nous développerons des modèles murins de perte de subtance cutanée pour étudier cette nouvelle association en injection locale pour la régénération tissulaire. / Many diseases are the cause of soft tissue loss involving the skin.Also many injuries are the cause of oxidative stress that can lead to lesions of soft tissues. The future of the reconstructive surgery will promote autologous cell therapy for skin, muscular and nervous regeneration.The adipose derived stem cells (ASC) are a source of multipotent cells, which are easier to isolate than the bone marrow. Indeed, ASCs have an immunomodulatory role, and improve the trophism by a pro-angiogenic, chemoattractant, anti-fibrotic and anti-inflammatory effect.Our previous studies tended to show that the sub cutaneous injection of a combination of platelet-rich plasma with the ASCs seemed to improve wound healing in a mouse model, thank to a potentiating effect of PRP on ASC which stimulates the secretion of pro-angiogenic factors (VEGF ) and pro-inflammatory (IL-6) while increasing the survival of ASCs.Our hypothesis is that PRP potentialize the CSM in stressed condition or in skin wound and allows the improvement of the CSM survival, the angiogenic and chemoattraction power.Our aim is to assess the association of ASCs with PRP for skin regeneration.First, we will study this in vitro interaction. Then we will develop an animal model of oxidative stress skin to study this new local injection of association of ASCs with PRP for tissue regeneration.

Tableau d’honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2015-2016 / Les plaquettes sanguines contiennent une quantité abondante et diversifiée de microARN, qui sont de petits ARN non-codants d’une vingtaine de nucléotides de long capables de réguler l’expression des gènes de manière post-transcriptionnelle et séquence spécifique. Suite à leur activation, les plaquettes libèrent des microparticules (MPs), qui contiennent du matériel génétique issu de leur cellule d’origine et susceptible d’être transmis à une autre cellule afin d’y exécuter une fonction biologique. Durant mes travaux de thèse, j’ai étudié le rôle extra-plaquettaire des microARN et la capacité des MPs de plaquettes à participer aux communications intercellulaires. Les résultats que j’ai obtenus démontrent que les plaquettes activées à la thrombine libèrent la majorité de leur contenu en microARN dans les MPs, notamment miR-223. Les MPs sont internalisées par les cellules endothéliales HUVEC, et y délivrent leur contenu en miR-223. De plus, les MPs contiennent des complexes effecteurs Argonaute 2 (Ago2)•miR-223 fonctionnels et capables de réguler l’expression d’un gène rapporteur dans les cellules cibles endothéliales. Enfin, miR-223 provenant des MPs est capable de réguler l’expression de deux gènes endogènes prédits pour être ciblés par miR-223 et présents dans les HUVEC, à la fois au niveau de l’ARN messager (ARNm) et de la protéine. Dans une deuxième étude, j’ai démontré que ce phénomène n’est pas exclusif aux cellules endothéliales et qu’il peut également se produire avec les macrophages primaires humains. Les MPs sont effectivement internalisées par les macrophages et y délivrent leur contenu en miR-126-3p, qui y est fonctionnel et y régule l’expression d’un gène rapporteur et de gènes endogènes. De plus, l’internalisation des MPs induit une modification du transcriptome des macrophages receveurs, avec 66 microARN et 653 ARN codants ou non codants dont les profils d’expression sont modifiés. Ces changements sont accompagnés d’une diminution de la sécrétion de cytokines et de chimiokines, et d’une augmentation de la capacité de phagocytose par les macrophages. Mes travaux de doctorat démontrent que les microARN véhiculés par les MPs plaquettaires sont impliqués dans la reprogrammation de l’expression des gènes et des fonctions des cellules les internalisant, reflétant ainsi la complexité des communications intercellulaires. / Blood platelets contain an abundant and diverse array of microRNAs, which are small non-coding RNAs of ~20 nucleotides involved in post-transcriptional regulation of gene expression in a sequence-specific manner. Upon activation, platelets release microparticles (MPs) containing genetic materials from their parental cells that may be transferred to, and exert potent biological effects in, recipient cells. During my PhD thesis, I studied the extra-platelet role of microRNAs, and the ability of platelet-derived MPs to mediate cell-to-cell communications. The results that I obtained demonstrate that thrombin-activated platelets preferentially release their microRNA content in MPs, including miR-223. MPs can be internalized by human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), to which they transfer their miR-223 content. Moreover, platelet MPs contain functional effector Argonaute 2 (Ago2)•miR-223 complexes that are capable of regulating expression of a reporter gene in recipient HUVEC. Finally, platelet MP-derived miR-223 could regulate expression of two endogenous genes in recipient HUVEC, both at the mRNA and protein levels. In a second study, I demonstrated that this process is not exclusive to endothelial cells, and could take place also in primary human macrophages. Following their internalization by macrophages, MPs deliver functional miR-126-3p, which regulated expression of both a reporter gene and endogenous genes. Furthermore, MP internalization modified the transcriptome of recipient macrophages, with 66 microRNAs and 464 coding and non-coding RNAs that are differentially expressed. These changes are associated with a reduced secretion of cytokines and chemokines, and a marked increase in the phagocytic capacity of macrophages. My doctoral work demonstrate that platelet-derived microRNAs transfered by MPs are involved in reprograming recipient cells’ gene expression and functions, which illustrate the growing complexity of cell-to-cell communications.

Cette revue systématique évalue l’effet d’une utilisation libérale de plaquettes (ratio élevé plaquettes:culots globulaires) en comparaison à une utilisation traditionnelle (faible ratio plaquettes:culots globulaires) dans la réanimation initiale des polytraumatisés. Parmi 6123 références identifiées, nous avons sélectionné 7 études observationnelles comparatives incluant au total 4230 patients. Quatre études ont rapporté une diminution de la mortalité avec des ratios plaquettes:culots globulaires élevés chez des patients transfusés massivement. Une étude sur des patients sans hémorragie massive et une étude sur un nouveau protocole de transfusion massive n’ont rapporté aucune différence. L’hétérogénéité clinique et les failles méthodologiques des études n’ont pas permis d’effectuer une méta-analyse. Les données probantes actuelles sont insuffisantes pour appuyer l’utilisation d’un ratio plaquettes:culots globulaires spécifique dans la réanimation des polytraumatisés, surtout en considérant le biais de survie et les hémorragies non massives. Des essais cliniques randomisés évaluant la sécurité et l’efficacité d’un ratio élevé plaquettes:culots globulaires sont nécessaires avant de recommander leur utilisation. / This systematic review examines the impact of a liberal use of platelet transfusions (higher platelets:red blood cells ratio) compared to a traditional use (low platelets: red blood cells ratio) for the acute resuscitation of trauma patients. Seven observational comparative studies including 4230 patients were selected among 6123 titles identified. Four studies reported decreased mortality with higher PLT:RBC ratios among massively transfused patients. One study on non-massively transfused patients and one evaluating a new massive transfusion protocol did not report a survival benefit. Clinical heterogeneity and methodological flaws of the included studies precluded performing a meta-analysis. There is insufficient evidence to strongly support the liberal use of high PLT:RBC ratio for acute trauma resuscitation. Randomized controlled trials examining both the safety and efficacy of the liberal use of platelet transfusions with adjustment for other co-interventions are warranted before high PLT:RBC ratios can be broadly recommended.

L'implantologie dentaire est en constante évolution et l'objectif de ces innovations est d'assurer le succès de la thérapie implantaire. Des protocoles utilisant la fibrine riche en plaquettes (PRF) ont d'ailleurs trouvé des indications dans ce domaine. Le but de cette revue systématique est d'évaluer les effets du PRF sur la guérison osseuse et gingivale péri-implantaire. La question de recherche, basée sur la méthode PICOS, a été définie comme suit : "Chez les sujets nécessitant le remplacement d'une dent manquante par un implant dentaire, est-ce que l'utilisation du PRF démontre un bénéfice significatif comparativement à la pose d'un implant dentaire sans utilisation conjointe de PRF sur les résultats cliniques, basé sur des études humaines cliniques contrôlées? ". Les paramètres évalués incluaient la stabilité implantaire, les changements gingivaux dimensionnels, le remodelage osseux crestal et le taux de survie implantaire. Une recherche sur les bases de données MEDLINE (PubMed), Embase et Cochrane Library a été effectuée suivant une stratégie de recherche déterminée. Cinq études ont été retenues. Les résultats démontrent que l'ajout de PRF n'a généralement pas d'impact sur la stabilité implantaire. En ce qui concerne la profondeur au sondage, aucune différence significative n'a été obtenue entre les groupes. Parmi les trois études ayant mesuré la variation du niveau osseux crestal péri-implantaire, deux études rapportent que l'utilisation du PRF a réduit le remodelage osseux crestal alors qu'une étude n'a observé aucun effet positif. Le taux de survie implantaire était de 100% à l'exception d'une étude dans laquelle deux implants ont été perdus dans le groupe expérimental. La présente revue met en lumière l'effet modeste du PRF sur la guérison péri-implantaire. Il faudrait cependant prendre en considération le risque de biais élevé, la grande hétérogénéité des études et le nombre limité d'études fiables sur le sujet. Davantage d'études de bonne qualité sont nécessaires. / Dental implantology is in continuous evolution, and the objectives of these innovations are to ensure treatment success. Protocols using platelet-rich fibrin (PRF) have found indications in this field. The main goal of this systematic review is to assess the effects of PRF on peri-implant osseous and gingival healing. Based on the PICOS method, the research question has been defined as follows: " On subjects who need to replace a tooth with a dental implant, does PRF have a significant clinical benefit compared to dental implant placement without using PRF, based on human-controlled trials? " Assessed parameters included implant stability, dimensional gingival changes, crestal bone remodeling, and implant survival rate. A systematic literature search comprised three databases: MEDLINE (Pubmed), Embase, and Cochrane Library. Following a determined search strategy, five studies have been included. The results demonstrated that adding PRF generally has no positive effects on implant stability. No significant difference has been measured between groups when it comes to probing depth. Among the three studies that have evaluated peri-implant crestal bone height, PRF reduced crestal bone remodeling in two studies, whereas one study reported no positive effect. The implant survival rate was 100%, except for one study in which two implants were lost in the experimental group. This review highlights the modest positive effect of PRF on peri-implant healing. However, it is important to consider the high risk of bias, the high heterogeneity of the included studies, and the limited number of reliable studies. More research is necessary.

Les phospholipides jouent un rôle essentiel dans la signalisation cellulaire. Dans les plaquettes sanguines, ils sont nécessaires à la mise en oeuvre des mécanismes d'activation au cours desquels ils sont hydrolysés. La pérennité de la fonction plaquettaire implique donc un apport permanent de phospholipides. Dans le présent travail, nous avons étudié la possibilité que cet apport pouvait résulter d'un transfert de phospholipides des lipoprotéines de très basse densité (VLDL) aux plaquettes. <br />Dans un premier temps, nous avons montré que ce transfert est stimulé in vitro par l'activation plaquettaire ainsi que par la lipolyse des VLDL induite par la lipoprotéine lipase. Ensuite, nous avons rapporté, grâce à une série expérimentale impliquant divers inhibiteurs métaboliques, que le transfert des PL aux plaquettes dépendait de l'activité de la phospholipase A2 cytosolique. <br />Enfin, nous avons analysé les anomalies de ce transfert dans le diabète de type 2, et montré l'incidence qu'elles pouvaient avoir sur l'hyperactivation plaquettaire caractéristique de cette pathologie.

Le monoxyde d'azote (NO) produit par les différentes synthases (NOS), ainsi que ses espèces dérivées, affectent la production de prostanoïdes.Le but de la présente étude est de déterminer l'influence de la NOS inductible (iNOS) sur la production de prostanoïdes endogènes impliqués dans le contrôle de la réactivité plaquettaire en conditions physiologiques ainsi que chez la souris athérosclérosée (ApoE-/-). Dans un premier temps, des souris iNOS-/- et eNOS-/- ont été utilisées pour effectuer une analyse comparative des taux plasmatiques de prostanoïdes et des effets anti-plaquettaires ex vivo de l'endothéline-1 (ET-1) et de la bradykinine (BK). L'injection systémique d'ET-1 augmente les taux plasmatiques de prostacycline (PGI[indice inférieur 2]) et provoque une inhibition de l'agrégation plaquettaire chez les souris de type sauvage (TS) et eNOS-/- mais pas chez les souris iNOS-/-. Nous montrons aussi que l'ET-1 stimule la production de radicaux libres chez les souris de TS mais pas chez les souris iNOS-/-. De plus, l'administration d'un traitement anti-oxydant chez les souris de TS, induit une perte de la capacité de l'ET1 à augmenter significativement les taux plasmatiques de PGI[indice inférieur 2]. Dans un deuxième temps, nous avons tenté de déterminer si les mécanismes endogènes d'inhibition de la fonction plaquettaire étaient intacts chez la souris Apolipoprotéine E-/- (ApoE-/-). Lorsque ces souris sont âgées de 8-10 semaines, on observe que l'ET-1 et la BK induisent une inhibition de l'agrégation plaquettaire ex vivo, alors qu'à l'âge de 18-20 semaines, on assiste à une perte considérable de l'effet anti-plaquettaire des deux peptides. Or, chez ces souris de 18-20 semaines, on observe que l'ET-1 et la BK sont efficaces pour augmenter les taux plasmatiques de PGI[indice inférieur 2]. De plus, un analogue de la PGI[indice inférieur 2] et un donneur de NO réduisent tous deux l'agrégation plaquettaire in vitro chez les souris ApoE-/- à un degré comparable à ce qui est observé chez les souris de TS. D'autre part, les souris ApoE-/-iNOS-/- âgées de 18-20 semaines montrent, tout comme leurs congénères ApoE-/-, une perte importante de la fonction anti-plaquettaire de l'ET-1, bien que l'ET-1 préserve sa capacité à augmenter les taux plasmatiques de PGI[indice inférieur 2]. Ainsi, nous montrons pour la première fois que la iNOS, en conditions physiologiques, est impliquée de façon importante dans la production de PGI[indice inférieur 2] et dans l'inhibition de l'agrégation plaquettaire induites par l'ET-1. De plus, nos résultats montrent une altération des capacités endogènes d'inhibition de la réactivité plaquettaire qui progresse en fonction de l'âge chez les souris ApoE-/- et ApoE-/-iNOS-/-. Enfin, chez les souris souffrant d'athérosclérose, la iNOS ne semble pas avoir une implication aussi importante que celle observée en conditions physiologiques dans l'effet anti-plaquettaire de l'ET-1. Nous suggérons que notre étude permettra de mieux comprendre les mécanismes endogènes régissant l'activité des plaquettes sanguines dans le modèle murin en situations physiologique et pathologique.