O presente estudo visou verificar o efeito sobre alguns parâmetros da seleção por gradiente de Percoll® e da adição de plasma seminal do sêmen eqüino preservado a +4oC. O primeiro experimento avaliou a taxa de recuperação de espermatozóides após seleção por Percoll® em diferentes protocolos de centrifugação. Foram realizadas 5 coletas de sêmen de um garanhão. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração. Foram retiradas duas amostras de 4 mL, diluídas em leite desnatado UHT com concentrações de 50 e 100 x 106 espermatozóides por mL cada. Cada uma destas amostras foi dividida em 4 alíquotas de 1 mL, que foram então colocadas sobre Percoll® e submetidas a diferentes tempos e velocidades de centrifugação. V1 - 200 g (5 min) + 800 g (10 min); V2 - 800 g (10 min); V3 - 800 g (15 min); V4 - 800 g (20 min). Após esse processo, o sobrenadante foi desprezado e o pellet de cada alíquota ressuspendido com 0,5 mL de leite UHT. As 8 amostras foram novamente avaliadas para concentração, motilidade e vigor. O segundo experimento estudou o efeito da adição de plasma seminal de diferentes qualidades ao sêmen eqüino selecionado por gradiente de Percoll® e resfriado a +4°C por até 72 horas. Foram utilizados 40 ejaculados de 4 garanhões, sendo dois com boa qualidade de sêmen e dois com baixa qualidade de sêmen. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração e preparadas cinco frações de 100x106 espermatozóides, diluídas 1:1 (v/v) em EDTA-Glicose. Quatro delas, constituídas por 1mL a 2mL, foram depositadas sobre Percoll®. A fração restante foi centrifugada em tubo de vidro de 10 mL, sob as mesmas condições de tempo e velocidade das demais amostras. Foi realizada centrifugação por 5 minutos em 200 g, seguida de 10 minutos em 800 g. O sobrenadante foi descartado e o pellet ressuspendido com leite UHT desnatado compondo os seguintes tratamentos: Sp: 1,5 mL de leite UHT desnatado sem adição de plasma seminal; Hp: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal homólogo; Ap: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal do pool de alta qualidade; Bp: 1,425mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L plasma seminal do pool de baixa qualidade; Cc: foi centrifugada sem seleção por Percoll®, teve seu sobrenadante descartado e ressuspendida com 2 mL de leite UHT; C : uma amostra de sêmen diluído em leite UHT foi mantida como controle no processo de armazenamento. As amostras foram resfriadas a +4°C e examinadas a cada 24h até as 72 horas em relação à motilidade, funcionalidade de membrana (teste hiposmótico) e integridade de membrana (CFDA/PI). A seleção por gradiente descontínuo de Percoll® 90/45% mostrou-se efetiva na recuperação de espermatozóides com motilidades progressiva e total. A adição de 5% de plasma seminal ou a ausência de plasma não influenciaram os valores da motilidade das amostras selecionadas por gradiente de Percoll®. A seleção por Percoll não influenciou na percentagem de células com membrana plasmática funcional. Concentrações superiores a 2% de plasma seminal resultaram em decréscimo do número de células com membrana funcional, enquanto que as amostras sem plasma seminal apresentaram os melhores resultados e o grupo controle, que apresentava a maior percentagem de plasma, os piores. A utilização de Percoll® não separou células com alteração de membrana. A percentagem de células com membrana completamente íntegra foi significativamente maior nas amostras que sofreram processo de centrifugação, independentemente da seleção. O processo de seleção por Percoll® foi efetivo na recuperação de espermatozóides de eqüino com motilidade progressiva, mas não selecionou espermatozóides quanto à funcionalidade nem à integridade de membrana. Concentrações inferiores a 2% de plasma seminal melhoraram a funcionalidade de membrana. A ausência de plasma seminal melhorou os resultados de integridade das membranas plasmática e acrossomal; e a adição de plasma de alta qualidade não melhorou a motilidade de espermatozóides selecionados por Percoll®.

El presente trabajo tuvo por objetivo evaluar el efecto de la aplicación por vía intramuscular (IM) de plasma seminal sobre la supervivencia embrionaria en alpacas luego que fueron servidas por monta natural. El estudio fue realizado durante los meses de enero a marzo del 2013, en el departamento de Puno. El plasma seminal se obtuvo de muestras de semen de alpaca, colectadas y diluidas en proporción 1:1 en buffer fosfato salino (PBS), para luego ser centrifugadas y conservadas en congelación hasta su posterior uso. Alpacas hembras vacías (n = 117), fueron seleccionadas de acuerdo a la presencia de un folículo dominante ≥ de 7 mm detectado por ecografía tras rectal; las cuales fueron servidas por monta natural y distribuidas aleatoriamente en 3 grupos de comparación: T1(n=40) a las cuales se les administró 1 ml de plasma seminal diluido en PBS, vía IM; T2(n=39) a las que cuales se les administró 1 ml de un análogo de GnRH (0.0042 mg de acetato de buserelina), vía IM y T3(n=38) sin administración de producto alguno. Posteriormente se evaluaron mediante ecografía tras rectal el día 25 post monta para determinar la gestación y el día 62 para determinar la tasa de supervivencia embrionaria. Todos los animales en estudio fueron alimentados con pastos naturales y recibieron las mismas condiciones de manejo. Los resultados obtenidos muestran una tasa de concepción al día 25 post monta del 67.5%, 51.3% y 55.3% y una tasa de supervivencia embrionaria al día 62 del 92.6%, 80% y 85.7% para los grupos T1, T2 y T3 respectivamente. Los resultados obtenidos sugieren que la aplicación intramuscular de plasma seminal inmediatamente después de la monta determina un incremento porcentual de la supervivencia embrionaria en comparación a la aplicación de GnRH o la monta natural, sin embargo dicha diferencia no es estadísticamente significativa (P˂0.05).

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Em altas latitudes tem-se observado uma variaÃÃo na composiÃÃo bioquÃmica do plasma seminal (PS) de caprinos por influÃncia da estacionalidade. Em baixas latitudes essa variaÃÃo tem sido atribuÃda unicamente ao baixo valor nutricional das dietas na Ãpoca seca. Objetivou-se por meio deste estudo avaliar a ocorrÃncia de variaÃÃo na composiÃÃo bioquÃmica do PS de caprinos SPRD criados intensivamente no Estado do CearÃ, Brasil. O experimento foi conduzido nas instalaÃÃes do Dep. de Zootecnia da Universidade Federal do Cearà â UFC. Foram utilizados 20 bodes SPRD, alimentados segundo o NRC/caprinos (1981). Os ejaculados foram coletados semanalmente em vagina artificial e letroejaculador e em seguida avaliados, mensurados, centrifugados e separados o PS (sobrenadante) das cÃlulas espermÃticas (precipitado), sendo acondicionados em tubos eppendorffs a -18ÂC, durante um ano (Set/2005 a Ago/2006). Para realizaÃÃo das anÃlises as amostra semanais passaram a constituir um pool individual mensal, onde foram avaliadas as concentraÃÃes de Ca, P, Mg, PTt, AC e frutose. Foi observada variaÃÃo significativa (p<0,05) na composiÃÃo bioquÃmica do PS entre as Ãpocas do ano, registrando-se os nÃveis mais elevados dos parÃmetros bioquÃmicos na Ãpoca chuvosa. A variaÃÃo individual foi significativa (p<0,01), sà havendo interaÃÃo significativa, animal/Ãpoca para a frutose (p<0,05). O estudo das correlaÃÃes mostrou associaÃÃes significativas (p<0,0001) entre PTt, AC e frutose, entre os volumes de ejaculado e de PS, com os componentes, e de temperatura, umidade, precipitaÃÃo e ITU, com os parÃmetros bioquÃmicos do PS. Concluindo-se que a frutose à um bom parÃmetro bioquÃmico para o estudo da qualidade seminal, entretanto, mais estudos sÃo necessÃrios para identificar as causas desta variaÃÃo, e compreender melhor o papel da frutose, acido cÃtrico e proteÃnas totais no metabolismo espermÃtico. / Goat seminal plasma (SP) biochemical composition observed to very in high latitudes due to seasonality. In low latitudes this variation has been attributed only to the low nutritional value of diets in the dry period. The aims of this study were to evaluate the occurrence of variation in the SP biochemical composition of SPRD goats breed intensively in the State of CearÃ, Brazil. The experiment was carried out in the facilities of Dep. of Zootecnia of the Federal University of Cearà - UFC. Twenty male SPRD goats were used, they were fed according to NRC/goats (1981). Ejaculated were collected weekly in artificial vagina and eletroejaculador, and evaluated, measure, centrifuged and separated the SP (sobreswing) from the cells spermatic (precipitate), being stored in eppendorff tubes at -18ÂC, during one year (Sep/2005 the Aug/2006). For analyses purpose weekly sample were mixed to constitute a monthly individual pool, from which were evaluated the concentrations of Ca, P, Mg, PTt, CA and fructose. Significant variation was observed (p <0,05) in the biochemical composition of the SP among the periods of the year, registering the highest levels of biochemical parameters in the rainy period. The individual variation was significant (p <0,01), only having significant interaction animal/period to the fructose (p <0,05). The study of correlations showed significant associations (p <0,0001) among PTt, CA and fructose, among the ejaculate volume and of SP with the components, and of temperature, humidity, precipitation and ITU with the biochemical parameters of the SP. It is concluded that fructose is a good biochemical parameter for the study of seminal quality. However, more studies are necessary to identify the causes of this variation, and to better understand the role of the fructose, citric acid and total proteins in the metabolism spermatic.

Normalmente, após a cobertura ou a inseminação artificial de éguas, ocorre uma endometrite aguda transitória em resposta ao sêmen e bactérias no útero. O objetivo deste estudo foi verificar se o transporte espermático e a intensidade da reação inflamatória uterina, 2h, 4h ou 24h após a inseminação com sêmen resfriado, são influenciados pela concentração espermática na dose inseminante. Para tal, foram utilizadas 192 éguas em cio, com folículo dominante ≥35 mm, sem crescimento bacteriano e livres de PMNs aos exames uterinos complementares. As éguas foram distribuídas aleatoriamente em grupos e inseminadas com 20 ml contendo 100x106 (n=30), 500x106 (n=27) ou 1000x106 (n=31) espermatozóides diluídos em solução de 3 ml de plasma seminal e 17 ml de leite desnatado, refrigerado e armazenado por 18 a 22 horas, ou infundidas com 20 ml de plasma seminal (n=33), ou com 20 ml de leite desnatado (n=38). As éguas foram abatidas duas, quatro ou 24h após as inseminações ou infusões. O grupo controle (n=33) não recebeu nenhum tratamento. Os ovidutos foram separados do útero, sendo útero e ovidutos lavados separadamente com PBS. Uma amostra do lavado de cada oviduto foi examinada para contagem de espermatozóides e uma amostra de cada lavado uterino foi utilizada para contagem de leucócitos. Após as lavagens, foi retirada uma amostra de endométrio para exame histopatológico. As éguas inseminadas e infundidas apresentaram reação inflamatória significativamente maior que as éguas do grupo controle, no decorrer das 24 horas. A reação inflamatória foi significativamente maior nas éguas inseminadas que nas infundidas. A reação inflamatória apresentou correlação com a concentração espermática (r=0,389). O número de éguas apresentando espermatozóides nos ovidutos não foi diferente nos grupos inseminados. Concluiu-se que componentes da dose inseminante provocam uma resposta inflamatória, sendo esta tanto mais severa e de resolução mais rápida, quanto maior for a concentração espermática. Por outro lado, até as quatro horas pós-inseminação, o transporte espermático independe da concentração espermática utilizada.

CADAVID, Verônica Gonzalez. Parâmetros espermáticos e proteínas do plasma seminal de cachaços e parâmetros reprodutivos de marrãs e porcas suplementados com minerais e vitaminas. 2014. 241 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-26T17:20:42Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_vgcadavid.pdf: 3289695 bytes, checksum: 3d4ccd01b841180e33fa7aa94e66bbd2 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-27T19:14:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_vgcadavid.pdf: 3289695 bytes, checksum: 3d4ccd01b841180e33fa7aa94e66bbd2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T19:14:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_vgcadavid.pdf: 3289695 bytes, checksum: 3d4ccd01b841180e33fa7aa94e66bbd2 (MD5) Previous issue date: 2014 / The present study was conducted to identify the major seminal plasma protein profile of boars and its associations with semen criteria. Semen samples were collected from 12 adult boars and subjected to evaluation of sperm parameters (motility, morphology, vitality and percent of cells with intact acrosome). Seminal plasma was obtained by centrifugation, analyzed by 2-D SDS-PAGE and proteins identified by mass spectrometry (electrospray ionization quadrupole-time-of-flight). We tested regression models using spot intensities related to the same proteins as independent variables and semen parameters as dependent variables (p < 0,05). One hundred and twelve spots were indentified in the boar seminal plasma gels, equivalent to 39 different proteins. Spermadhesins PSP-I, PSP-II, AQN1, AQN3 and AWN1 represented 45,2 ± 8 % of the total intensity of all spots. Other proteins expressed in the boar seminal plasma include albumin, complement proteins (complement factor H precursor, complement C3 precursor and adipsin/complement factor D), immunoglobulins (IgG heavy chain precursor, immunoglobulin delta heavy chain membrane bound form, immunoglobulin gamma-chain, Ig lambda chain V-C region PLC3 and CH4 and secreted domain of swine IgM), IgG-binding proteins, epididymal specific lipocalin-5, epididymal secretory protein E1 precursor, epididymal secretory glutathione peroxidase precursor, transferrin, lactotransferrin and fibronectin type 1 (FN1). Based on regression analysis, the percentage of sperm with midpiece defects was related to the amount of CH4 and secreted domains of swine IgM and FN1 (R² = 0,58), IgG-binding protein (R² = 0,61), complement factor H precursor (R² = 0,61) and lactadherin (R² = 0.45). The percentage of sperm with tail defects was also related to CH4 and secreted domains of swine IgM and FN1 (R² = 0,40), IgG-binding protein (R² = 0,34) and lactadherin (R² = 0,74). Sperm motility, in turn, had association with the intensities of spots identified as lactadherin (R² = 0,48). In conclusion, we presently describe the major proteome of boar seminal plasma and significant associations between specific seminal plasma proteins and semen parameters. Such relationships will serve as the basis for determination of molecular markers of sperm function in the swine species. / O presente estudo foi realizado com o objetivo de identificar o perfil das principais proteínas do plasma seminal suíno e suas associações com parâmetros seminais. Amostras de sêmen foram coletadas de 12 cachaços adultos e submetidas à avaliação dos parâmetros seminais (motilidade total, morfologia, vitalidade e porcentagem de células com acrossoma intacto). O plasma seminal foi obtido por centrifugação e as proteínas seminais foram analisadas por eletroforese 2-D e espectrometria de massa. Foram testados modelos de regressão usando a soma das intensidades dos spots referentes às mesmas proteínas como variáveis independentes e parâmetros seminais como variáveis dependentes (p < 0,05). Cento e doze spots foram identificados nos géis do plasma seminal, equivalentes a 39 proteínas diferentes. As espermadesinas PSP-I, PSP-II, AQN1, AQN3 e AWN1 representaram 45,2 ± 8 % do total da intensidade de todos os spots detectados nos geis. Outras proteínas expressas no plasma seminal suíno incluem a albumina, proteínas do complemento (complement factor H precursor, complement C3 precursor e adipsin/complement factor D), imunoglobulinas (IgG heavy chain precursor, imunoglobulina delta heavy chain membrane bound form, imunoglobulina gamma-chain, Ig lambda chain V-C region PLC3 e CH4 and secreted domain of swine IgM), IgG-binding proteins, epididymal specific lipocalin-5, epididymal secretory protein E1 precursor, epididymal glutathione peroxidase precursor, transferrin, lactotransferrin e fibronectin tipo 1 (FN1). Em função das análises de regressão, o percentual de espermatozoides com defeito na peça intermediária foi relacionado com a quantidade de “CH4 and secreted domain of swine IgM” e FN1 (R2 = 0,58), a proteína IgG-binding (R2 = 0,61), o fator H do complemento (R2 = 0,61) e lactaderina (R2 = 0,45). Porcentagem percentual de defeitos de cauda também foi relacionado com “CH4 and secreted domain of swine IgM” e FN1 (R2 =0,40), a proteína IgG-binding (R2 = 0,34), e lactaderina (R2 = 0,74). A motilidade espermática, por sua vez, teve associação com a intensidade dos spots identificados como lactaderina (R2 = 0,48). Em conclusão, descreve-se, neste trabalho, o proteoma do plasma seminal suíno e associações significativas entre proteínas específicas do plasma seminal e parâmetros seminais. Tais relações servirão como base para a determinação de marcadores moleculares da função espermática na espécie suína.

Normalmente, após a cobertura ou a inseminação artificial de éguas, ocorre uma endometrite aguda transitória em resposta ao sêmen e bactérias no útero. O objetivo deste estudo foi verificar se o transporte espermático e a intensidade da reação inflamatória uterina, 2h, 4h ou 24h após a inseminação com sêmen resfriado, são influenciados pela concentração espermática na dose inseminante. Para tal, foram utilizadas 192 éguas em cio, com folículo dominante ≥35 mm, sem crescimento bacteriano e livres de PMNs aos exames uterinos complementares. As éguas foram distribuídas aleatoriamente em grupos e inseminadas com 20 ml contendo 100x106 (n=30), 500x106 (n=27) ou 1000x106 (n=31) espermatozóides diluídos em solução de 3 ml de plasma seminal e 17 ml de leite desnatado, refrigerado e armazenado por 18 a 22 horas, ou infundidas com 20 ml de plasma seminal (n=33), ou com 20 ml de leite desnatado (n=38). As éguas foram abatidas duas, quatro ou 24h após as inseminações ou infusões. O grupo controle (n=33) não recebeu nenhum tratamento. Os ovidutos foram separados do útero, sendo útero e ovidutos lavados separadamente com PBS. Uma amostra do lavado de cada oviduto foi examinada para contagem de espermatozóides e uma amostra de cada lavado uterino foi utilizada para contagem de leucócitos. Após as lavagens, foi retirada uma amostra de endométrio para exame histopatológico. As éguas inseminadas e infundidas apresentaram reação inflamatória significativamente maior que as éguas do grupo controle, no decorrer das 24 horas. A reação inflamatória foi significativamente maior nas éguas inseminadas que nas infundidas. A reação inflamatória apresentou correlação com a concentração espermática (r=0,389). O número de éguas apresentando espermatozóides nos ovidutos não foi diferente nos grupos inseminados. Concluiu-se que componentes da dose inseminante provocam uma resposta inflamatória, sendo esta tanto mais severa e de resolução mais rápida, quanto maior for a concentração espermática. Por outro lado, até as quatro horas pós-inseminação, o transporte espermático independe da concentração espermática utilizada.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-17Bitstream added on 2014-06-13T18:51:13Z : No. of bitstreams: 1 motheo_tf_me_jabo.pdf: 1290385 bytes, checksum: ce65f89bddd3c29c19638e90cb3193d2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Atualmente, estudos têm demonstrado a utilização da toxina botulínica do tipo A (TB-A) no tratamento de afecções prostáticas, como a hiperplasia prostática benigna. Ainda, sabe-se que alguns componentes bioquímicos do plasma seminal são relativamente específicos para a regulação da função espermática. O objetivo deste trabalho foi avaliar os possíveis efeitos deletérios ou benéficos da TB-A sobre a fertilidade de cães com HPB. Foram utilizados 18 cães machos, sem raça definida com sinais de HPB. Os animais foram divididos ao acaso em 3 grupos de 6 cães que receberam injeção intraprostática de solução salina de NaCl 0,9% (GC), solução contendo 250U (GI) e 500U de TB-A (GII). Quatro amostras foram colhidas antes da aplicação e 2, 4 e 8 semanas após o tratamento. Foi mensurado o pH e dosadas as concentrações de proteína total, cloretos totais, cálcio, potássio e sódio das amostras de plasma seminal. Ainda, foi realizada eletroforese SDS-Page utilizando géis de poliacrilamida nas concentrações de 12 e 18%. Os resultados foram avaliados por meio de análise de variância (ANOVA) e ao teste de Kruskall-Wallis (p<0,05). Não foram observadas diferenças significativas nos parâmetros bioquímicos avaliados. Outrossim, foram constatadas 31 bandas protéicas, com pesos moleculares variando de 106,2 a 3,9 kDa semelhantemente aos achados descritos na literatura. Destarte, pode-se concluir que os tratamentos com 250U e 500U de TB-A não alteraram os perfis bioquímico e protéico do plasma seminal de cães com HPB e, portanto podem ser considerados uma boa opção para cães destinados à reprodução ou envolvidos em programas de criopreservação de gametas. / Recently, botulinum neurotoxin type A (BoNT-A) application in the lower urinary tract has been extended to prostate disorders such as benign prostatic hyperplasia (BPH). Nevertheless, sperm function is highly dependent on ionic and protein environment. The goal of the present study was to evaluate the effects of BoNTA treatment on seminal plasma biochemical and eletrophoretic profile in dogs with BPH. Eighteen mature male mongrel dogs with BPH, were use in this study. They were randomly divided in three groups, which received intraprostatic injection of 0,9% NaCl normal saline solution (GI), 250U(GII) and 500U (GIII) of BoNT-A. All animals were previously conditioned to semen collection and four semen samples were collected before treatment and at 2, 4 and 8 weeks after injection. The semen was evaluated, and centrifuged to obtain seminal plasma for measurement of pH, total protein concentration (TP), total chlorides (TC), calcium (Ca), potassium (K), and sodium (Na). Additionally, one-dimensional sodium dodecyl sulfatepolyacrilamide gel eletrophoresis (SDS-PAGE) was carried out on 12 and 18% vertical minigel. One way ANOVA and Kruskall-Wallis with Bonferoni as a post hoc test were used to comparison of means (P<0.05). Average pH, TP, TC, Ca, K did not vary significantly at any time point and among each studied group and maintained normal values for the specie. Similarly as described in the literature, the eletrophoresis analysis of the pooled eluded fractions, identified 31 bands, with molecular weights varying from 106.2 to 3.9 kDA, In conclusion, the treatment with 250U and 500U of BoNT-A did not modify the biochemical or protein profiles of the seminal plasma of dogs with BPH.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Ciências Animais, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-05-04T13:47:00Z No. of bitstreams: 1 2014_ThiagoAntoniodeSouzaNascimentoSilva.pdf: 1265182 bytes, checksum: bc533b4f6609c21bd035b31047a5ae61 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-05-04T13:57:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ThiagoAntoniodeSouzaNascimentoSilva.pdf: 1265182 bytes, checksum: bc533b4f6609c21bd035b31047a5ae61 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-04T13:57:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ThiagoAntoniodeSouzaNascimentoSilva.pdf: 1265182 bytes, checksum: bc533b4f6609c21bd035b31047a5ae61 (MD5) / A qualidade do sêmen é influenciada por diversos fatores tais como os inerentes aos indivíduos, a frequência de coletas, o meio ambiente, a estação do ano, a temperatura, precipitação pluviométrica. Interferindo, diretamente, na qualidade das amostras criopreservadas com reflexos diretos nos índices de concepção das fêmeas inseminadas. Estudos têm demonstrado que o plasma seminal pode favorecer a viabilidade e heterogeneidade da membrana plasmática, motilidade e a fertilidade do sêmen ovino criopreservado. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar o perfil proteico do plasma seminal de carneiros com diferentes níveis de congelabilidade de sêmen e o efeito da adição de plasma seminal de carneiros de alta congelabilidade de sêmen no sêmen de carneiros de baixa congelabilidade de sêmen antes da criopreservação. No capitulo 2 observou-se uma superioridade (P<0,05) do carneiro 1 de alta congelabilidade de sêmen em relação ao carneiro 18 de baixa congelabilidade de sêmen após a descongelação e teste de termo resistência (TTR), baseado nos parâmetros de motilidade, integridade de membrana e integridade de acrossoma. Na avaliação do sêmen fresco não foi observada diferença (P>0,05) em nenhum dos parâmetros analisados entre os dois carneiros. Da mesma forma para a avaliação da fertilidade em monta natural não houve diferença (P>0,05) entre os dois carneiros. Selecionados os carneiros de alta e baixa congelabilidade de sêmen foram caracterizados os perfis proteicos do plasma seminal dos mesmos, determinado por eletroforese bidimensional e a identificação das proteínas foi realizada por espectrometria de massa. Com um total de 23 spots foram identificadas com sucesso. Proteínas como RSVP14, RSVP20, clusterina, glutationa peroxidase, albumina e lipocalina foram exclusivas ou mais expressas no carneiro de alta congelabilidade. Proteínas como as espermadesina Z13, bodesina 2 foram mais expressas no carneiro de baixa congelabilidade. Essas proteínas se apresentam como potenciais marcadores para qualidade do sêmen criopreservado. No capitulo 3 com o objetivo de avaliar a adição do plasma seminal de carneiro de alta congelabilidade no sêmen de carneiros de baixa congelabilidade antes da criopreservação, observou que a adição de plama seminal de carneiros de alta congelabilidade incrementou a qualidade do sêmen criopreservado nos carneiros de baixa congelabilidade (P<0,05), após a coleta do sêmen. Avaliou-se também a forma de adicionar o plasma seminal ao sêmen após a coleta, sua concentração e forma de sua obtenção. O melhor momento para adição do plasma seminal foi ao meio de pré-diluição. Independentemente da sua concentração adicionado ao sêmen, todas as concentrações utilizadas foram superiores (P<0,05) ao tratamento controle (sem adição de plasma seminal). Com relação à sua obtenção, quando adicionado o plasma seminal proveniente de carneiro vasectomizado no sêmen após a coleta, este se mostrou (P<0,05) melhor que o tratamento controle (sem adição de plasma seminal) e de plasma seminal de carneiro inteiro. Os dados apresentados nesse trabalho evidenciam a importância do plasma seminal na criopreservação do sêmen e servem referência para o avanço da criopreservação do sêmen ovino. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The seminal quality vary with many factors like individuality, collections frequency, environment, season of the year, temperature, rainfall. Interfering, directly, in the quality of cryopreserved samples with reflex at conception indices of inseminated females. Studies have demonstrated that seminal plasma can favor the viability and heterogeneity of plasmatic membrane, motility and fertility of cryopreserved ram semen. In this way, the aim of the present work was characterize the protein profile of seminal plasma of rams with different levels of semen congelability and the effect of the addition of seminal plasma of high freezability rams semen in the low freezability semen before cryopreservation. In chapter 2, was observed a superiority (P<0.05) of ram 1 of high freezability semen in relation with ram 18 of low freezbility semen after thawed and TRT, based at motility, membrane integrity and acrosomal integrity. In fresh semen evaluation wasn’t observed difference (P>0.05) in none of analyzed factors between two rams. In the same way to fertility with natural mating wasn’t difference (P>0.05) between the two rams. Selected rams of high and low freezability semen hade theirs characterized protein profile, determined by two-dimensional electrophoresis and the protein identified by mass spectrometry. A total of 23 spots were sucessfully identified. Proteins like RSVP14, RSVP20, clusterin, glutathione peroxidase, albumin e lipocalin were exclusively or more expressive in the high freezability rams semen. Proteins like espermadhesin Z13, bodhesin 2 were more expressive in the low freezability rams semen. Those proteins are like potencial markers to quality of frozen semen. In chapter 3 the aim was evaluate the addition of seminal plasma of high freezability ram semen in semen of low freezability rams semen before cryopreservation, observed that the addition of seminal plasma of high freezability semen increased the quality of cryopreserved semen of low freezability semen (P<0.05), after semen collection. Evaluated also how the seminal plasma was add to the semen after the collection, your concentration and how was obtained. The better moment to add the seminal plasma was at pre-dilution extender. Regardless of concentration, all concentration tested were higher (P<0.05) than control treatment (without seminal plasma). The seminal plasma when collected from vasectomized rams and added to semen after collection showed better (P<0.05) than control treatment (without seminal plasma) and seminal plasma from whole ram. The data presented in this work show the importance of seminal plasma in semen cryopreservation and serve as reference to advance at ram semen cryopreservation.

Normalmente, após a cobertura ou a inseminação artificial de éguas, ocorre uma endometrite aguda transitória em resposta ao sêmen e bactérias no útero. O objetivo deste estudo foi verificar se o transporte espermático e a intensidade da reação inflamatória uterina, 2h, 4h ou 24h após a inseminação com sêmen resfriado, são influenciados pela concentração espermática na dose inseminante. Para tal, foram utilizadas 192 éguas em cio, com folículo dominante ≥35 mm, sem crescimento bacteriano e livres de PMNs aos exames uterinos complementares. As éguas foram distribuídas aleatoriamente em grupos e inseminadas com 20 ml contendo 100x106 (n=30), 500x106 (n=27) ou 1000x106 (n=31) espermatozóides diluídos em solução de 3 ml de plasma seminal e 17 ml de leite desnatado, refrigerado e armazenado por 18 a 22 horas, ou infundidas com 20 ml de plasma seminal (n=33), ou com 20 ml de leite desnatado (n=38). As éguas foram abatidas duas, quatro ou 24h após as inseminações ou infusões. O grupo controle (n=33) não recebeu nenhum tratamento. Os ovidutos foram separados do útero, sendo útero e ovidutos lavados separadamente com PBS. Uma amostra do lavado de cada oviduto foi examinada para contagem de espermatozóides e uma amostra de cada lavado uterino foi utilizada para contagem de leucócitos. Após as lavagens, foi retirada uma amostra de endométrio para exame histopatológico. As éguas inseminadas e infundidas apresentaram reação inflamatória significativamente maior que as éguas do grupo controle, no decorrer das 24 horas. A reação inflamatória foi significativamente maior nas éguas inseminadas que nas infundidas. A reação inflamatória apresentou correlação com a concentração espermática (r=0,389). O número de éguas apresentando espermatozóides nos ovidutos não foi diferente nos grupos inseminados. Concluiu-se que componentes da dose inseminante provocam uma resposta inflamatória, sendo esta tanto mais severa e de resolução mais rápida, quanto maior for a concentração espermática. Por outro lado, até as quatro horas pós-inseminação, o transporte espermático independe da concentração espermática utilizada.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Um dos principais objetivos de um programa de inseminaÃÃo artificial em caprinos à produzir o maior nÃmero de descendentes de animais geneticamente superiores com a finalidade de melhorar a produÃÃo animal. Para tanto à necessÃrio que se dominem tÃcnicas de diluiÃÃo e de armazenamento de sÃmen nesta espÃcie. Neste trabalho foram testados trÃs diferentes diluidores, citrato-gema (CG), TRIS-gema (TG) e Ãgua de coco industrializada (ACI) e dois grupos de animais, com alto nÃvel inicial de frutose (grupo I) e com baixo nÃvel inicial de frutose (grupo II) no plasma seminal. O sÃmen foi armazenado por atà 48h a 5oC e avaliado nos tempos 0 (fresco), 2, 24 e 48h, onde uma amostra do sÃmen conservado foi submetida ao teste de termo-resistÃncia (TTR) a 38oC por 2h. Durante a incubaÃÃo foram verificados os parÃmetros de motilidade (MOT) e vigor (VIG), nos tempos 5, 60 e 120 minutos e ao final foi calculada a taxa de degradaÃÃo da motilidade (TDM). EsfregaÃos de sÃmen foram realizados para verificaÃÃo das possÃveis alteraÃÃes morfolÃgicas. Houve uma queda significativa nos parÃmetros analisados no decorrer do tempo de armazenamento, independente do diluidor utilizado (P<0,05). Contudo, o diluidor ACI apresentou resultados inferiores aos dos demais. O efeito do grupo foi observado apenas no ACI, mostrando que este diluidor nÃo conseguiu suprir as necessidades energÃticas dos espermatozÃides cuja concentraÃÃo inicial de frutose no plasma estava baixa. Os diluidores CG e TG comportaram-se de forma semelhante nos dois grupos. Foi encontrada diferenÃa significativa na atividade da fosfolipase A2 (PLA2) entre os grupos (P<0,05), sendo que uma atividade superior foi observada no grupo II. Concluiu-se que, independente do diluidor utilizado, os parÃmetros seminais tendem a cair conforme o tempo de conservaÃÃo à prolongado. AlÃm disso, a concentraÃÃo inicial de frutose nÃo interferiu na qualidade espermÃtica quando os diluidores CG e TG foram utilizados, todavia, quando os nÃveis deste componente no plasma seminal foram superiores a 740 mg/dL ocorreu um aumento na sobrevida dos espermatozÃides conservados a 5 oC, quando se utilizou ACI. Sugere-se que o baixo desempenho espermÃtico tambÃm possa ser devido a uma maior atividade de PLA2, contudo mais estudos, contendo um maior nÃmero de animais, sÃo necessÃrios para elucidar esta hipÃtese / One of the main objectives of the artificial insemination program in goats is to produce the highest number of descendants of genetically superior animals with the purpose to improve the animal production. Thus, it is necessary to dominate correct techniques of dilution and semen storage in this specie. In this work three different extenders had been tested: citrate-egg yolk (CE), TRIS-egg yolk (TE) and industrialized coconut water (ICW) and two groups of animals: with high initial level of fructose (group I) and with low initial level of fructose (group II) in the seminal plasma. The semen was stored until 48h at 5oC and evaluated in times 0 (fresh), 2, 24 and 48h, where a sample of the conserved semen was submitted to the term-resistance test (TTR) that consists of incubate the sample at 38oC for 2h. During the incubation it had been verified the parameters of Motility (MOT) and vigor (VIG), in times 5, 60 and 120 minutes and to the end was calculated the tax of degradation of the motility (TDM) and semen slides had been carried through for verification of the possible morphologic alterations. It had a significant fall in the parameters analyzed in elapsing of the time of storage, independent of the used extender (P<0,05). However, extender ICW presented inferior resulted than the others. The effect of the group was observed only in the ICW,showing that this extender did not supply the energy necessities of the spermatozoa whose initial concentration of fructose in the plasma was low. CE and TE worked similarly in the two groups. Significant difference in the activity of phospholipase A2 between the groups was found (P<05), in way that a bigger activity was observed in group II. In conclusion, independent of the used extender, the seminal parameters tend to fall as draw out the conservation time. Moreover, the initial concentration of fructose did not intervene with the sperm quality when extenders CE and TE had been used, however, when the levels of this component in the seminal plasma had been superior to 740mg/dL, occurred an increase in lifetime of the spermatozoa conserved at 5oC, when ICW was used. It suggests that sperm low action also can be due to a higher activity of PLA2, however more studies are necessary, with a large number of animals to elucidate this hypothesis