Orientador: Haroldo Wilson Moreira / Banca: Evandro José Cesarino / Banca: Luiz Carlos de Mattos / Resumo: A haptoglobina é uma glicoproteína plasmática sintetizada principalmente pelo fígado com atividade antioxidante e imunomodulatória. Sua principal função é a formação de um complexo estável com a hemoglobina livre, prevenindo a excreção de ferro pelos rins e danos causados pelo efeito oxidativo do mesmo. O polimorfismo desta proteína é caracterizado por três genótipos principais: Hp1 / Hp1, Hp2 / Hp1 e Hp2 / Hp2, sendo que estes apresentam subtipos na dependência das recombinações entre os alelos Hp1F, Hp1S, Hp2FS, Hp2SF, Hp2FF e Hp2SS. Apesar de contraditório, vários autores tentam correlacionar esses tipos e subtipos com doenças, na tentativa de responsabilizar algum deles como facilitador ou conferir resistência quanto às mesmas. Os objetivos deste estudo foram verificar as freqüências desse polimorfismo, suas freqüências alélicas e possíveis correlações em portadores e não portadores de doença arterial coronariana, bem como em doadores de sangue, pertencentes a uma parcela da população paulista. Dessa forma foram analisados 125 pacientes com DAC, 69 com ausência de DAC e 124 doadores de sangue. O material genético foi extraído, amplificado e após restrição enzimática com Dra I permitiu identificar os tipos e subtipos da haptoglobina. Os resultados permitiram concluir que essa caracterização pela técnica aplicada mostrou ser rápida e de fácil realização. Os portadores de DAC e os doadores de sangue evidenciaram maior freqüência do Hp2 / Hp2 e aqueles com ausência de DAC do genótipo heterozigoto, não sendo observada diferenças estatísticas significativas entre eles. Essa mesma observação era verificada quando estratificávamos os grupos quanto aos sexos. A freqüência alélica do Hp2 se mostrou maior que o Hp1 para os três grupos analisados. A distribuição dos subtipos da haptoglobina revelou que o prevalente...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Haptoglobin is a glycoprotein synthesized by liver with antioxidant and immunomodulatory properties. Its main function is the formation of a stable complex with free hemoglobin, preventing iron loss and damage caused by oxidative effects. The polymorphism of this protein is characterized by three main genotypes: Hp1 / Hp1, Hp2 / Hp1 e Hp2 / Hp2, and these have subtypes in dependence of the recombination among the alleles Hp1F, Hp1S, Hp2FS, Hp2SF, Hp2FF e Hp2SS. Despite contradictory, the authors try to associated types and subtypes with diseases, attempt to hold responsible for someone or to permit resistance to them. The purposes of our study were to find the frequencies of this polymorphism, their allelic frequencies and possible associations in patients with coronary artery disease and patients without coronary artery disease, as well as in blood donors, from one fraction of Brazilian population. We have analyzed 125 patients with CAD, 69 patients without CAD and 124 blood donors. Genomic DNA was extracted, amplified and after enzyme restriction with Dra I we could identify types and subtypes of haptoglobin. With the results we conclude that this applied technique is fast and it's easy to carry out. Patients with CAD and blood donors evidenced higher frequencies for Hp2 / Hp2 and patients without CAD from heterozygous genotypes, weren't observed significant statistical differences among them. The same observation was verified when we stratified the groups regarding genders. The allelic frequency of Hp2 was shown higher than Hp1 for the three groups analyzed. The distribution of haptoglobin subtypes revealed that the prevalent for all groups were represented by Hp2FS / Hp2FS, followed by Hp2FS / Hp1F in patients with CAD and without CAD and Hp2FF / Hp2FF in blood donors. The third in expression was represented by Hp1S / Hp1S in patients with CAD, Hp2FS / Hp1S in patients without...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O polimorfismo é um fenômeno relativamente comum entre os compostos farmacêuticos, e um dos principais problemas na produção e desenvolvimento de medicamentos. Sua presença pode acarretar prejuízos para a saúde da população e forte impacto econômico para as indústrias farmacêuticas ao influenciar diretamente nas propriedades mecânicas e biofarmacêuticas de insumos e produtos acabados. A investigação de polimorfismo associado aos oxicans, grupo pertencente à classe dos fármacos anti-inflamatórios não esteróides (AINEs), sofreu um incremento nos últimos anos, e para o fármaco tenoxicam relata-se a existência de quatro formas polimórficas na literatura. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a presença de diferentes formas polimórficas de tenoxicam em insumos farmacêuticos ativos e formulações farmacêuticas orais e avaliar a influência sobre a dissolução in vitro. Com base na literatura, a análise inicial com a substância química de trabalho (SQT) demonstrou padrão difratométrico forma III. Diferentes condições para formação de formas polimórficas de tenoxicam foram aplicadas conforme Cantera et al. (2002), contudo, os diferentes processos de preparação de polimorfos do tenoxicam não conduziram a modificações na estrutura cristalina original da SQT. Dados complementares foram obtidos através da espectrofotometria no IV e DSC, que indicaram a inexistência de modificações no espectro original e ausência de eventos térmicos atípicos. A caracterização dos insumos farmacêuticos do tenoxicam, provenientes de diferentes fornecedores, por IV, DRX e perfil de dissolução indicou presença da estrutura cristalina (forma III), sem apresentar diferenças significativas entre os perfis de dissolução in vitro. As especialidades farmacêuticas do tenoxicam disponíveis no mercado nacional, ao serem submetidas à análise por DRX, também apresentaram estruturas cristalinas forma III. Apesar de ocorrer perfis de dissolução diferentes entre as formulações, estas não apresentaram comprometimento em sua qualidade. Contudo, muitas vezes as transformações pós-processamento podem induzir a alterações na estrutura cristalina e por consequência, problemas biofarmacêuticos. Tal fato demonstra a importância do estudo do polimorfismo, ao avaliar e correlacionar a presença de estruturas cristalinas com alterações na qualidade e desempenho de insumos e produtos farmacêuticos. / Polymorphism is a relatively common phenomenon among pharmaceutical compounds, and one of the main problems in producing and developing drugs. Its presence may harm people’s health and have a strong economic impact on the pharmaceutical industries by directly influencing the mechanical and biopharmaceutical properties of inputs and finished products. The investigation of polymorphism associated with oxycans, a group belonging to the class of non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs), has grown in recent years, and it is reported that there are four polymorphic forms for tenoxycam the literature. The purpose of this study was to characterize the presence of different polymorphic forms in active pharmaceutical inputs and oral pharmaceutical formulations and evaluate their influence on in vitro dissolution. Based on the literature, the initial analysis with the reference standard showed a form III diphractometric pattern. Polymorphic forms of tenoxycam were prepared according to Cantera et al. (2002), but the different preparation processes of tenoxycam polymorphs did not lead to modifications of the original crystalline structure of the reference standard. Complementary data were obtained by spectrophotometry in IV and DSC, indicating that there were no modifications in the original spectrum and no atypical thermal events. The characterization of the pharmaceutical inputs of tenoxycam, from different suppliers, as IV, DRX and dissolution profile indicated the presence of a crystalline structure (Form III), without presenting significant differences between the in vitro dissolution profiles. The pharmaceutical specialties of tenoxycam available on the national market, on being analyzed by DRX also presented crystalline structures Form III. Although there was different dissolution profiles between the formulations, they showed no impairment in their quality. However, often the post-processing transformations can induce alterations in the crystalline structure and, consequently, biopharmaceutical problems. This shows the importance of the study of polymorphism with the evaluation and correlation of the presence of crystalline structures with alterations in the quality and performance of pharmaceutical inputs and products.

O câncer de mama é a neoplasia mais comum entre as mulheres. Sua etiologia é complexa, onde tanto fatores ambientais como genéticos podem contribuir para o desenvolvimento tumoral. Estima-se que 5 a 10% dos casos de carcinomas de mama sejam representados pelos carcinomas de mama familial e 90 a 95% sejam representados pelos carcinomas de mama esporádicos. Independente da etiologia, um dos principais agravantes é consequência da habilidade das células tumorais metastizar. Mutações podem levar a mudança ou perda de expressão de diferentes genes e isto possibilita que as células adquiram particularidades genéticas e fenotípicas que contribuem para a progressão do tumor através da aquisição de vantagens que medeiam a sua sobrevivência. Dentre estas vantagens adquiridas está a capacidade das células tumorais de escaparem da destruição pelas células imunológicas ou, até mesmo, utilizarem estas células a seu favor, na promoção de um microambiente tumoral inflamatório que pode auxiliar o desenvolvimento da angiogênese que posteriormente facilitará a metástase. As características dos carcinomas de mama são as principais ferramentas para avaliação do diagnóstico e prognóstico da doença. Portanto, o objetivo de nosso trabalho foi a análise de quatro variantes polimórficas de genes que codificam importantes moléculas do sistema imunológico, duas relacionadas aos genes que codificam os receptores de quimiocinas, CCR2 e CCR5, e duas relacionadas ao gene HLA-G em 188 mulheres com carcinoma de mama (105 com câncer de mama familial e 83 com câncer de mama esporádico) e em 151 mulheres sem carcinoma e sem história familiar de câncer (grupo controle), como possíveis marcadores de diagnóstico e prognóstico do carcinoma de mama. Para a análise da variante do CCR2, denominada CCR264I, e para a análise de uma das variantes que codifica a molécula de HLA-G, denominada +3142, utilizou-se a técnica PCR-RFLP. Para a análise da variante do gene CCR5, denominada CCR5delta32 e para a análise da outra variante do HLA-G, caracterizada pela inserção de 14pb na região 3’UTR do gene, utilizou-se a técnica PCR. As frequências alélicas, genotípicas e haplotípicas foram estimadas e comparadas entre os grupos de mulheres, usando o Teste Qui-Quadrado ou o Teste Exato de Fisher e, posteriormente, foram relacionadas a fatores de diagnóstico e prognóstico. Observou-se maiores frequências dos alelos selvagens do CCR2, Val (p=0,040, OR 0,61, IC 95% = 0,38 – 0,98) e do CCR5, Wt (p=0,032, OR 0,46, IC 95% = 0,23 – 0,94) e maior frequência do haplótipo duplo selvagem Wt/Val destas mesmas variantes gênicas dos genes CCR2 e CCR5, nas mulheres do grupo controle (p=0,030) em relação às mulheres com câncer de mama familial. Quando as variantes foram avaliadas em conjunto com os parâmetros clínicos, observou-se que as mulheres com carcinoma de mama esporádico apresentavam a doença em idade mais elevada (57,29 ± 8,457 anos e 44,23 ± 12,092 anos para mulheres com câncer de mama esporádico e familial, respectivamente, p < 0.001) e de forma mais agressiva, com maior frequência dos carcinomas invasores (p = 0,001) que as mulheres com carcinoma de mama familial. Além disso, as variantes de inserção/deleção de 14 pb do HLA-G e CCR264I, mostraram relação positiva com a agressividade tumoral nestas mulheres (p = 0,039 e p = 0,005). Nossos dados sugerem que os carcinomas invasores possam estar relacionados a uma maior infiltração de células imunológicas e com o aumento da inflamação no microambiente tumoral, mediados pelo receptor CCR2 e pela molécula HLA-G, respectivamente. / Breast cancer is the most common cancer among women. Its etiology is complex, where genetic, environmental and endocrine factors contribute to tumor development. It is estimated that 5 to 10% of the breast cancers are represented by familial breast cancers and 90 to 95% are represented by sporadic breast cancers. Independent of the etiology, the major aggravating consequence is the ability of tumor cells to metastasize. Mutations can lead to a change or loss of expression a different genes and this allows the appearance of genetic and phenotypic features which contribute to tumor progression. Among these features is the ability of tumor cells to evade from the immune cells or even use immune cells in the promotion of a inflammatory microenvironment promotion which may help angiogenesis and, later, metastasis. The aim of our study was to evaluate four important polymorphic variants of genes which encode important immune system molecules, two related genes encoding chemokine receptors, CCR2 and CCR5, and two related to HLA-G gene in 188 women with breast cancer (105 women with familial breast cancer and 83 with sporadic breast cancer) and 151 women without cancer and family history of cancer (control group), such as potential markers for diagnosis and prognosis of breast cancer. CCR2 polymorphism, CCR264I, and one HLA-G polymorphism, +3142, were genotyped by PCR-RFLP. CCR5delta32 and 14pb HLA-G polymorphism were genotyped by PCR. Allelic, genotypic and haplotypic frequencies were estimated and compared between the groups using the Chi-square test or Fisher's exact test and subsequently were associated to diagnostic and prognostic factors. We observed a higher allelic frequency of the CCR2 wild type allele, Val (p = 0.040, OR 0.61, 95% CI = 0.38 - 0.98) e CCR5 wild type allele, Wt (p = 0.032, OR 0.46, CI 95% = 0.23 - 0.94) and higher haplotype frequency of the double wild type variants (Wt/Val) of these same genes (CCR2 and CCR5) in women in the control group (p = 0.030) compared to women with familial breast cancer. All polymorphisms were evaluated together with the clinical parameters and it was observed that women with breast cancer showed sporadic cancer latter (57.29 ± 8.457 years and 44.23 ± 12.092 years for women with sporadic breast cancer and familial breast cancer, respectively, p < 0.001) and more invasiveness (p = 0.001) as compared to women with familial breast cancer. Moreover, the HLA-G 14pb and CCR264I polymorphism, showed a positive association with tumor aggressiveness in women with sporadic breast cancer (p = 0.039 and p = 0.005, respectively). Our data suggest that invasive cancers may be associated with increased immune cells infiltration and inflammation in the tumor microenvironment mediated by both CCR2 receptor and HLA-G molecule.

Ecology of Veliidae and Mesoveliidae (Hemiptera: Heteroptera: Gerromorpha) was studied in selected European species. The research of these non-gerrid semiaquatic bugs was especially focused on voltinism, overwintering with physiological consequences and wing polymorphism with dispersal pattern. Hypotheses based on data from field surveys were tested by laboratory, mesocosm and field experiments. New data on life history traits and their ecophysiological consequences are discussed in seven original research papers (four published journal papers, two submitted papers and one communication in conference proceedings), creating core of this thesis.

L’étude du polymorphisme de composés pharmaceutiques est un domaine en plein essor. Cela est dû d’une part aux pressions économiques exercées par l’industrie pharmaceutique et d’autre part pour une meilleure compréhension des conséquences du polymorphisme sur les propriétés des médicaments (stabilité physique et chimique, solubilité, vitesse de dissolution,biodisponibilité, propriétés mécaniques, etc.). Cette thèse étudie la cristallisation par la technique de nucléation non-photochimique induite par laser (NPLIN) des molécules pharmaceutiques organiques. Dans ce contexte, un nouveau montage expérimental semi-automatisé adapté aux exigences des études NPLIN a été conçu et réalisé, permettant le contrôle de nombreux paramètres et le traitement simultané d’un grand nombre d'échantillons et ainsi réalisé un gain de temps considérable. Une méthode de travail a été également établie afin de limiter l’aléa expérimental. L’étude de l’impact des paramètres du laser sur la cristallisation de la carbamazepine et du sulfathiazole dans différents solvants(méthanol, éthanol, acétonitrile) a été menée. Les résultats obtenus ont permis de démontrer pour la première fois dans la littérature que la NPLIN permet d’obtenir des cristaux de CBZ et de sulfathiazole dont les formes polymorphiques dépendent de la polarisation du laser et du type de solvant. Une approche permettant la prédiction de la forme polymorphique des molécules organiques de la base CSD, dans le cas de l’utilisation de la NPLIN, a été proposée et appliquée pour les molécules CBZ et la sulfathiazole étudiées expérimentalement. A partir de nos résultats expérimentaux, des calculs d’énergie d’interactions ab initio de dimères des molécules de carbamazépine et de sulfathiazole et sur les résultats observés dans la littérature nous avons pu émettre des hypothèses quant au mécanismes impliqués dans la nucléation NPLIN. / Polymorphism study of pharmaceutical compounds is a growing field. This is due, on one hand, to the economic pressure of the pharmaceutical industry and on the other hand, to the more awareness of the polymorphism consequences on the drug properties (chemical and physical stability, solubility, dissolution rate, bioavailibality, mechanical properties,manufacturing process, etc).This thesis studies the crystallisation of organic pharmaceutical molecules by using the Non Photochemical Light Induced technique. Within this context, a new semi-automatic experimental setup suitable to the requirements of NPLIN studies was devised and realised,allowing the control of many parameters and a simultaneous processing of a great number of samples and thus saving a considerable amount of time. A strict working methodology is also established to limit experimental errors. The study of the impact of laser parameters on the crystallisation of carbamazepine and sulfathiazole within different solvents (methanol,ethanol, acetonitrile) was carried-out. The obtained results allowed demonstrating, for the first time in literature, that NPLIN allows to obtain CBZ and sulfathiazole crystals for which the polymorphic forms depend upon the laser polarisation and solvent type. An approach for predicting the polymorphic form of organic molecules in the CSD database, for the case of NPLIN, was proposed and applied for the case of CBZ and sulfathiazole that were studied experimentally. We have also provided hypotheses to explain the mechanisms involved in NPLIN nucleation.

A leptina é um componente importante do complexo sistema fisiológico que regula o armazenamento, o equilíbrio e o uso de energia pelo organismo. É descrito na literatura que a concentração plasmática de leptina e/ou a quantidade de mRNA de leptina nos adipócitos, correlacionam-se positivamente com o gênero, a ingesta calórica, o IMC, e a massa de tecido adiposo. A leptina pode aumentar o gasto energético por meio da estimulação nervosa simpática. A ação tecidual da leptina se da através de sua ligação com seu receptor. O receptor de leptina apresenta heterogeneidade na população humana, com naturais ocorrências de polimorfismos que codificam para o aminoácido das posições 109, 223 e 656 entre outros. Acredita-se que mutações no gene do receptor podem modificar sua função e afetar os níveis séricos de leptina na população em geral, sugerindo que este polimorfismo possa contribuir para a correlação da obesidade com a doença cardiovascular associado à atividade nervosa simpática. Neste estudo, avaliamos a relação entre as variantes alélicas do gene do receptor de leptina e mudanças na composição corporal, nas variáveis metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas de mulheres obesas antes e após um programa de treinamento físico e dieta hipocalórica. Como achado principal do nosso estudo, observamos que as pacientes obesas com polimorfismo Gln223Arg/Arg223Arg apresentaram maior massa gorda em comparação ao grupo de mulheres obesas Gln223Gln no período inicial do estudo. Não foram encontradas diferenças nas demais variáveis antropométricas, metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas do códon 223. As variáveis antropométricas, metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas permaneceram semelhantes entre as formas genéticas dos códons 109, 656. Como esperado, a mudança no hábito de vida impactou em algumas das variáveis antropométricas, metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas, porém as variantes genéticas de cada códon não alteraram essas variáveis. A partir dos dados apresentados, podemos dizer que o polimorfismo Gln223Arg/Arg223Arg influencia no aumento de massa gorda em mulheres obesas. Entretanto, após quatro meses de intervenção nos hábitos de vida dessas pacientes, a associação entre o polimorfismo citado e o aumento da massa gorda não se manteve, o que pode ser atribuído à melhora da resistência a ação da leptina, que sabidamente é favorecida por perda de peso, como ocorreu na nossa população / Leptin is an important component of a complex physiological system that contributes to the regulation of the organic energy balance. Leptin plasmatic concentration or mRNA quantities are positive related to gender, caloric intake, BMI and fat mass. Energy expenditure can be altered by leptin action through the nervous sympathetic stimulus. Leptin acts via its specific receptor. These receptor presents heterogeneity in human population, with natural occurrences of polymorphisms that codify to different proteins. Mutations in gene receptor can modify the leptin level and consequently its action. This suggests that the polymorphism of leptin receptor could contribute to the relation of obesity and cardiovascular disease, and the sympathetic nervous system is involved in this process. In this study we evaluate the relation between allelic variants of leptin receptor gene with changes in corporal composition, metabolic, neurovascular and hemodynamic variables in obese women, before and after a life style change program. The main result of this investigation is that the women that carrier a polymorphism in codon 223, with mutation of glicina to arginina presented higher fat mass than the other polymorphisms. There are no differences in the other antropometric, metabolic, neurovascular and hemodynamic variables in this codon. All the studied variables were similar between the genetic forms 109 and 656. As expected, the life style changes positive impact in some of the anthropometric, metabolic, neurovascular and hemodynamic variables, but the allelic variants did not alter these variables. In conclusion, the data presented permit us to say that the Gln223Arg/Arg223Arg polymorphism influences the fat mass gain in obese women. However, after four months of exercise training and diet, this difference in fat mass gain did not keep, wich can be atributted to the improvement in the leptin resistence and the weigh loss, which occurred in our population

nÃo hà / IntroduÃÃo. A intolerÃncia à lactose à uma sÃndrome clÃnica composta por um ou mais cortejos sintomatolÃgicos associados à ingestÃo de lÃcteos (fenÃtipo clÃnico intolerante) e tolerÃncia à lactose na ausÃncia desses sintomas (fenÃtipo clÃnico tolerante). Assim, na prÃtica clÃnica, deve-se estar atento aos casos semelhantes a essa sintomatologia disabsortiva, pois as convergÃncias e diferenÃas entre esses distÃrbios sÃo tÃnues e os diagnÃsticos muitas vezes sÃo imprecisos, tornando o tratamento e a conduta insatisfatÃrios. Portanto, sÃo necessÃrios estudos que utilizem diferentes mÃtodos diagnÃsticos, assim como comparar os diferentes mÃtodos utilizados na prÃtica clÃnica e averiguar o mais apropriado para dar o diagnÃstico conclusivo, uma vez que nem sempre à fÃcil, haja vista que os sintomas sugerem outras doenÃas. Objetivo. Avaliar as caracterÃsticas fenotÃpicas, a resposta ao teste quÃmico de tolerÃncia à lactose e genÃtipo de pacientes com hipÃtese diagnÃstica de intolerÃncia à lactose e a correlaÃÃo entre eles. Material e mÃtodos. Foi realizado um estudo transversal no Hospital UniversitÃrio Walter CantÃdio (HUWC), com 173 pacientes que apresentavam fenÃtipo positivo e foram atendidos no serviÃo do ambulatÃrio dos servidores do HUWC, no perÃodo de janeiro a agosto de 2010. A amostra final foi composta por 119 pacientes que realizaram o teste de tolerÃncia à lactose e genotipagem do gene da florizina-lactase hidrolase (LPH). Resultados. Dentre os participantes, a maioria era: do sexo feminino, 54,6% (65 casos); da faixa etÃria de 46-55 anos, 26,5% (32 casos); casada, 65,6% (78 casos); de cor parda, 53,8% (65 casos); de nÃvel superior, 42,9% (51 casos). A prevalÃncia de intolerÃncia à lactose foi de 45,4% e a de intolerÃncia quÃmica foi de 73,9%. Os sintomas investigados que apresentaram maior prevalÃncia no intolerante à lactose foram: flatulÃncia, 81,4% (44 casos); empachamento, 68,5% (37casos); borborigmo, 59,3% (32 casos); e diarreia, 46,3% (25 casos). A presenÃa dospolimorfismos C>T-13910 e polimorfismos G>A-22018 no gene da LPH foi identificada nos indivÃduos autorreferidos como intolerantes à lactose, sendo, portanto, um excelente exame para o diagnÃstico. O diagnÃstico de intolerÃncia à lactose que mais se apresentou adequado foi a diferenÃa basal <15 com a curva de ROC maior que 80,3%, com boa sensibilidade e especificidade. ConclusÃes. Observa-se uma correlaÃÃo genotÃpica e quÃmica entre os indivÃduos intolerantes, sugerindo que o teste molecular poderia ser proposto para o diagnÃstico laboratorial de intolerÃncia à lactose, e, no teste quÃmico, a diferenÃa basal <15 foi a mais adequada. / Introduction. Intolerance to lactose is a clinical syndrome comprising one or more corteges symptomatology associated with the ingestion of milk (clinical phenotype intolerant) and lactose tolerance in the absence of symptoms (clinical phenotype tolerant). Thus, in practice, must be attentive to cases similar to these badly absorptive symptoms because the convergences and differences between these disorders are tenuous and diagnoses are often inaccurate, making treatment and unsatisfactory conduct. Therefore, studies are needed using different diagnostic methods, and compare the different methods used in clinical practice and determine the most appropriate to give a conclusive diagnosis, since it is not always easy, given that the symptoms suggest other diseases. Objective.To evaluate the phenotypic characteristics, the response to chemical test for lactose tolerance and the genotype of patients with diagnostic hypothesis of intolerance to lactose and the correlation between them.Material and methods. We conducted a cross-sectional study at the University Hospital Walter Cantidio (HUWC), with 173 patients who had positive phenotype and were seen at the outpatient service of servers HUWC, from January to August 2010. The final sample consisted of 119 patients who underwent the lactose tolerance test and genotyping of the gene for lactase-phlorizin hydrolase (LPH). Results. Among the participants, most were: female, 54.6% (65 cases), the age group of 46-55 years old, 26.5% (32 cases); married, 65.6% (78 cases); dun-colored, 53.8% (65 cases); higher level, 42.9% (51 cases). The prevalence of intolerance to lactose was 45.4% and chemical intolerance was 73.9%. Symptoms investigated more prevalent in lactose intolerant were flatulence 81.4% (44 cases); bloating, 68.5% (37casos); borborygmus, 59.3% (32 cases) and diarrhea, 46, 3% (25 cases). The presence of the polymorphisms C> T polymorphisms and 13 910-G> A-22018 in LPH gene was identified in individuals selfreferred as lactose intolerant, and is therefore an excellent test for the diagnosis. The diagnosis of lactose intolerance that most had adequate baseline the difference was <15 with ROC curve greater than 80.3%, with good sensitivity and specificity. Conclusions. There is a correlation between genotype and chemical intolerant individuals, suggesting that the molecular test could be proposed for the laboratory diagnosis of lactose intolerance, and the chemical test, the difference basal <15 was more appropriate.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O papel carcinogÃnico de Helicobacter pylori està relacionado à sua capacidade de promover a inflamaÃÃo e, como conseqÃÃncia, a metilaÃÃo do DNA, caracterÃstica epigenÃtica frequentemente associada à carcinogÃnese gÃstrica. Por sua vez, o processo inflamatÃrio pode ser modulado pela presenÃa de alguns dos polimorfismos presentes em genes de interleucinas, bem como pelo genÃtipo bacteriano. Assim, os objetivos desse estudo foram: a) associar o perfil genotÃpico de virulÃncia de H. pylori (quanto aos genes cagA, cagE, vacA e virB11) e o perfil genotÃpico dos polimorfismos de interleucinas prÃ-inflamatÃrias, IL1&#946; -511 C/T, IL1RN, IL6 -174 G/C e TNF -308 G/A com a metilaÃÃo de promotores gÃnicos de CDKN2A, MLH1 e COX-2; b) verificar a associaÃÃo dos polimorfismos da IL6 -174 G/C e TNF -308 G/A com genÃtipo bacteriano no desenvolvimento do cÃncer gÃstrico, considerando os aspectos clinico-patolÃgicos. Para isso, foi extraÃdo DNA a partir de 125 amostras tumorais, coletadas de pacientes submetidos à gastrectomia em hospitais de Fortaleza â Cearà â Brasil. A genotipagem dos polimorfismos foi feita por PCR-RFLP e a anÃlise de metilaÃÃo, por MS-PCR. Os genes de virulÃncia de H. pylori foram analisados por PCR. Em algumas anÃlises, os genÃtipos bacterianos foram agrupados de acordo com os alelos de vacA e a integridade de cag-PAI. Neste estudo, foi verificado que nos tumores da cÃrdia a metilaÃÃo na regiÃo promotora de COX-2 estava associada ao alelo IL1RN*2 (p= 0,015), e o genÃtipo IL-1B -511 T + IL1RN*2 se mostrou importante para a metilaÃÃo desse gene (p=0,013), principalmente na presenÃa de cepas de H. pylori cagA+ (p=0,026) e vacA s1 (p=0,025). A combinaÃÃo genotÃpica IL6 CC+TNFGG parece estar envolvida na nÃo-metilaÃÃo dos promotores dos genes CDKN2A (p=0,046) e MLH1 (p=0,031), mesmo na presenÃa da infecÃÃo por cepa H. pylori cagA+. Considerando os aspectos clinico-patÃlogicos, uma correlaÃÃo positiva foi encontrada entre o gÃnero masculino e pacientes da faixa etÃria >65 anos (r=0,198; p=0,037), na qual esse gÃnero foi predominante (77,5%; p= 0.022). AlÃm disso, tambÃm foi encontrada correlaÃÃo positiva entre o gÃnero feminino e a faixa etÃria de 55-64 (r=+0,217; p=0,021). Quanto ao subtipo histolÃgico, foi visto que tumores difusos estavam correlacionados a pacientes mais jovens (15-44 anos, r=+0,207; p=0,033), enquanto o subtipo intestinal, a pacientes de mais idade (> 65 anos, r=+0,296; p=0,017). Tumores do subtipo difuso foram correlacionados com o gÃnero feminino e aqueles do subtipo intestinal, com o gÃnero masculino (r=+0,226; p=0,019). Quanto aos polimorfismos de interleucinas, o alelo C do polimorfismo IL6 -174G/C foi correlacionado negativamente com pacientes de menor faixa etÃria (r=â0,193; p=0,041), sendo o que pacientes com genÃtipo CC de IL6 foi associado com a infecÃÃo por cepas virulentas (grupo 1c) (r=+0,225; p=0,017); enquanto que pacientes portadores do genÃtipo heterozigoto IL6 -174 GC, com cepas virulentas (grupo 1c) (r=â0,215; p=0,023) e de menor virulÃncia (grupo 2c) (r=+0,204; p=0,031). Os achados desse estudo contribuem com o estabelecimento de um perfil genotÃpico envolvido na metilaÃÃo de alguns genes, no qual pacientes com genÃtipo mais inflamatÃrio e infectados por cepas de H. pylori mais virulentas estÃo associadas a uma maior taxa de metilaÃÃo de alguns genes envolvidos na carcinogÃnese gÃstrica, podendo tambÃm variar de acordo com a localizaÃÃo e o subtipo do tumor. Esse estudo, portanto, oferece uma contribuiÃÃo relevante no que diz respeito à associaÃÃo da cepa de H. pylori com polimorfismos de interleucinas, no qual cepas de maior virulÃncia parecem estar relacionadas com a infecÃÃo de pacientes com genÃtipos menos inflamatÃrios, sendo o contrÃrio tambÃm verdadeiro. / The carcinogenic role of Helicobacter pylori is related to its ability to promote inflammation and, consequently, DNA methylation, epigenetic trait often associated with gastric carcinogenesis. In turn, the inflammation can be modulated by the presence of polymorphisms in some interleukin genes, as well as the bacterial genotype. The objectives of this study were: a) link the genotypic profile of H. pylori virulence (cagA, cagE, vacA and virB11 genes) and genotypic profile of pro-inflammatory interleukins polymorphisms, IL1&#946; -511 C/T, IL1RN, IL6 -174 G/C and TNF-308 G/A with gene promoter methylation of CDKN2A, MLH1, and COX-2 b) verify the association of polymorphisms of IL6 -174 G/C and TNF -308 G/A with bacterial genotype in the gastric cancer development, considering the clinical and pathological aspects. For this, DNA was extracted from 125 tumor samples, collected from patients who underwent gastrectomy at hospitals in Fortaleza â Cearà â Brazil. Polymorphisms genotyping were identified by PCR-RFLP and methylation analysis by MS-PCR. Virulence genes of H. pylori were analyzed by PCR. In some analyzes, the bacterial genotypes were grouped according to the alleles of vacA and integrity of cag-PAI. In this study, we observed that in cardia tumors the methylation of COX-2 promoter region was associated with IL1RN*2 allele (p=0.015), and genotype IL-1B -511T+IL1RN*2 was important to methylation of this gene (p=0.013), especially in the presence of H. pylori cagA+strains (p=0.020) and vacA s1 (p=0.032). The genotype combination IL6 CC+TNFGG seems to be involved in non-methylation of promoters of genes CDKN2A (p=0.046) and MLH1 (p=0.031), even in the presence of infection by strain H. pylori cagA+. Considering the clinical and pathological aspects, a positive correlation was found between males and patients aged >65 years (r=0.198, p=0.037), in which this gender was predominant (77.5%, p=0.022) . In addition, positive correlation was found between female and patients aged 55-64 years (r=+0.217, p=0.021). Regarding the histologic subtype, we found that diffuse tumors were correlated with younger patients (15-44 years, r=+0.207, p=0.033), while the intestinal subtype, with the older patients (>65 years, r=+ 0.296, p=0.017). Tumors of the diffuse subtype were correlated with female gender and those of the intestinal subtype, with males (r=+0.226, p=0.019). Regarding polymorphisms of interleukins, the C allele of IL6 polymorphism -174G/C was negatively correlated with the younger group (r=-0.193, p=0.041), and the patients with CC genotype of IL6 was associated with infection by virulent strains (group 1c) (r=+0.225, p=0.017), whereas patients with the genotype IL6 -174 GC, with virulent strains (group 1c) (r=-0.215, p=0.023) and less virulent (group 2c) (r=+0.204, p=0.031). Our findings contribute to the establishment of a genotypic profile involved in methylation of some genes in which patients with genotype more inflammatory and infected with strains of H. pylori more virulent are associated with a higher rate of methylation of some genes involved in gastric carcinogenesis and may also vary according to location and tumor subtype. This study thus provides an important contribution with regard to the association of the strain of H. pylori polymorphisms interleukins, in which most virulent strains appear to be related to infection of patients with inflammatory genotypes less, and the converse is also true.

As enzimas CYP450 são as principais enzimas metabolizadoras de fármacos. Elas são codificadas por genes que apresentam polimorfismos gênicos que lhes confere características fenotípicas diversas. Estes fenótipos são: Metabolizadores Lentos ou PM, Metabolizadores Normais ou EM, Metabolizadores Intermediários ou IM e Metabolizadores Ultra-rápidos ou UM. A Farmacogenética é a ciência que estuda estas variações gênicas e sua relação com a resposta terapêutica no organismo. Entre as enzimas CYP450 se encontram as enzimas CYP2D6, que são responsáveis pelo metabolismo de 25% dos fármacos clinicamente prescritos. O objetivo principal deste estudo foi a identificação dos polimorfismos mais importantes deste gene: CYP2D6*1, CYP2D6*2, CYP2D6*3, CYP2D6*4, CYP2D6*5, CYP2D6*6, CYP2D6*10, CYP2D6*17 e CYP2D6*41 pelos métodos de Genotipagem (PCR Tetra Primer e Seqüenciamento) e Fenotipagem (analisado pelo Índice Metabólico) em 75 voluntários sadios da região de Campinas. Para a caracterização da Fenotipagem foi usada a substância teste Dextrometorfano (DM). Esta foi monitorada por espectrometria de massa mediante a determinação da concentração do seu principal metabólito o Dextrorfano (DX), que foi extraída das amostras de urina. Os resultados foram comparados entre estas duas metodologias e apresentaram alta correlação. Os resultados obtidos são a identificação das freqüências dos alelos *1, *3 e *4 pelo método PCR Tetra Primer (30.66%, 1.3% e 14%, respectivamente). O método de seqüenciamento detectou também outros alelos que não foram detectados pela PCR Tetra Primer. A avaliação do número de cópias do gene CYP2D6 também foi avaliada, detectando em um voluntário 3 cópias do gene CYP2D6, característica de metabolizadores Ultra-rápidos. Podemos afirmar que os métodos usados forneceram perfis dos polimorfismos de maneira rápida e prática. / The CYP450 enzymes are the major drug metabolizing enzymes. They are encoded by genes that show genetic polymorphisms which gives them several phenotypic characteristics. These phenotypes are Poor Metabolizers or PM, or Extensive Metabolizers or EM, Intermediate Metabolizers or IM, and finally, Ultra-rapid Metabolizers or UM. Pharmacogenetics is the science that studies these genetic variations and its relationship to therapeutic response in the body. One of CYP450 enzymes is CYP2D6 enzyme, which are responsible for the metabolism of 25% of clinically prescribed drugs. The main objective of this study was to identify the most important polymorphisms of this gene: CYP2D6 * 1, CYP2D6 * 2, CYP2D6 * 3, CYP2D6 * 4, CYP2D6 * 5, CYP2D6 * 6, CYP2D6 * 10, CYP2D6 * 17 and CYP2D6 * 41 by genotyping methods (PCR Tetra Primer and Sequencing) and phenotyping (by metabolic rate monitoring) in 75 healthy volunteers in Campinas region.To characterize the phenotyping was used to test substance Dextromethorphan (DM). This was monitored by mass spectrometry by determining the concentration of its major metabolite the Dextrorphan (DX), which was extracted from urine samples. The results were compared between these two methods and showed high correlation. We can obtain the identification of allelic frequencies of alleles * 1, * 3 and * 4 by Tetra Primer PCR (30.66%, 1.3% and 14% respectively). The sequencing method has also detected other alleles that were not detected by PCR Tetra Primer. The assessment of the number of copies of the CYP2D6 gene was also assessed. This method detected a volunteer which carrying three copies of CYP2D6 gene, characteristic of Ultra-rapid metabolizers. We can say that the methods used in this study provide polymorphism profiles quickly and conveniently.

O câncer de mama é a neoplasia mais comum entre as mulheres. Sua etiologia é complexa, onde tanto fatores ambientais como genéticos podem contribuir para o desenvolvimento tumoral. Estima-se que 5 a 10% dos casos de carcinomas de mama sejam representados pelos carcinomas de mama familial e 90 a 95% sejam representados pelos carcinomas de mama esporádicos. Independente da etiologia, um dos principais agravantes é consequência da habilidade das células tumorais metastizar. Mutações podem levar a mudança ou perda de expressão de diferentes genes e isto possibilita que as células adquiram particularidades genéticas e fenotípicas que contribuem para a progressão do tumor através da aquisição de vantagens que medeiam a sua sobrevivência. Dentre estas vantagens adquiridas está a capacidade das células tumorais de escaparem da destruição pelas células imunológicas ou, até mesmo, utilizarem estas células a seu favor, na promoção de um microambiente tumoral inflamatório que pode auxiliar o desenvolvimento da angiogênese que posteriormente facilitará a metástase. As características dos carcinomas de mama são as principais ferramentas para avaliação do diagnóstico e prognóstico da doença. Portanto, o objetivo de nosso trabalho foi a análise de quatro variantes polimórficas de genes que codificam importantes moléculas do sistema imunológico, duas relacionadas aos genes que codificam os receptores de quimiocinas, CCR2 e CCR5, e duas relacionadas ao gene HLA-G em 188 mulheres com carcinoma de mama (105 com câncer de mama familial e 83 com câncer de mama esporádico) e em 151 mulheres sem carcinoma e sem história familiar de câncer (grupo controle), como possíveis marcadores de diagnóstico e prognóstico do carcinoma de mama. Para a análise da variante do CCR2, denominada CCR264I, e para a análise de uma das variantes que codifica a molécula de HLA-G, denominada +3142, utilizou-se a técnica PCR-RFLP. Para a análise da variante do gene CCR5, denominada CCR5delta32 e para a análise da outra variante do HLA-G, caracterizada pela inserção de 14pb na região 3’UTR do gene, utilizou-se a técnica PCR. As frequências alélicas, genotípicas e haplotípicas foram estimadas e comparadas entre os grupos de mulheres, usando o Teste Qui-Quadrado ou o Teste Exato de Fisher e, posteriormente, foram relacionadas a fatores de diagnóstico e prognóstico. Observou-se maiores frequências dos alelos selvagens do CCR2, Val (p=0,040, OR 0,61, IC 95% = 0,38 – 0,98) e do CCR5, Wt (p=0,032, OR 0,46, IC 95% = 0,23 – 0,94) e maior frequência do haplótipo duplo selvagem Wt/Val destas mesmas variantes gênicas dos genes CCR2 e CCR5, nas mulheres do grupo controle (p=0,030) em relação às mulheres com câncer de mama familial. Quando as variantes foram avaliadas em conjunto com os parâmetros clínicos, observou-se que as mulheres com carcinoma de mama esporádico apresentavam a doença em idade mais elevada (57,29 ± 8,457 anos e 44,23 ± 12,092 anos para mulheres com câncer de mama esporádico e familial, respectivamente, p < 0.001) e de forma mais agressiva, com maior frequência dos carcinomas invasores (p = 0,001) que as mulheres com carcinoma de mama familial. Além disso, as variantes de inserção/deleção de 14 pb do HLA-G e CCR264I, mostraram relação positiva com a agressividade tumoral nestas mulheres (p = 0,039 e p = 0,005). Nossos dados sugerem que os carcinomas invasores possam estar relacionados a uma maior infiltração de células imunológicas e com o aumento da inflamação no microambiente tumoral, mediados pelo receptor CCR2 e pela molécula HLA-G, respectivamente. / Breast cancer is the most common cancer among women. Its etiology is complex, where genetic, environmental and endocrine factors contribute to tumor development. It is estimated that 5 to 10% of the breast cancers are represented by familial breast cancers and 90 to 95% are represented by sporadic breast cancers. Independent of the etiology, the major aggravating consequence is the ability of tumor cells to metastasize. Mutations can lead to a change or loss of expression a different genes and this allows the appearance of genetic and phenotypic features which contribute to tumor progression. Among these features is the ability of tumor cells to evade from the immune cells or even use immune cells in the promotion of a inflammatory microenvironment promotion which may help angiogenesis and, later, metastasis. The aim of our study was to evaluate four important polymorphic variants of genes which encode important immune system molecules, two related genes encoding chemokine receptors, CCR2 and CCR5, and two related to HLA-G gene in 188 women with breast cancer (105 women with familial breast cancer and 83 with sporadic breast cancer) and 151 women without cancer and family history of cancer (control group), such as potential markers for diagnosis and prognosis of breast cancer. CCR2 polymorphism, CCR264I, and one HLA-G polymorphism, +3142, were genotyped by PCR-RFLP. CCR5delta32 and 14pb HLA-G polymorphism were genotyped by PCR. Allelic, genotypic and haplotypic frequencies were estimated and compared between the groups using the Chi-square test or Fisher's exact test and subsequently were associated to diagnostic and prognostic factors. We observed a higher allelic frequency of the CCR2 wild type allele, Val (p = 0.040, OR 0.61, 95% CI = 0.38 - 0.98) e CCR5 wild type allele, Wt (p = 0.032, OR 0.46, CI 95% = 0.23 - 0.94) and higher haplotype frequency of the double wild type variants (Wt/Val) of these same genes (CCR2 and CCR5) in women in the control group (p = 0.030) compared to women with familial breast cancer. All polymorphisms were evaluated together with the clinical parameters and it was observed that women with breast cancer showed sporadic cancer latter (57.29 ± 8.457 years and 44.23 ± 12.092 years for women with sporadic breast cancer and familial breast cancer, respectively, p < 0.001) and more invasiveness (p = 0.001) as compared to women with familial breast cancer. Moreover, the HLA-G 14pb and CCR264I polymorphism, showed a positive association with tumor aggressiveness in women with sporadic breast cancer (p = 0.039 and p = 0.005, respectively). Our data suggest that invasive cancers may be associated with increased immune cells infiltration and inflammation in the tumor microenvironment mediated by both CCR2 receptor and HLA-G molecule.