O consumo na dose correta e principalmente na frequência adequada são as principais dificuldades do fornecimento de ionóforos para animais em dietas com elevado teor de volumoso. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da frequência do fornecimento de narasina no desempenho (Exp. I), parâmetros de fermentação ruminal, digestibilidade aparente dos nutrientes e balanço de nitrogênio (Exp. II) em ovinos alimentados com dietas contendo elevado teor de volumoso. As dietas experimentais foram compostas por 95% de feno de coastcros e 5% de milho moído. Os tratamentos utilizados foram: Controle (C): fornecimento do concentrado uma vez ao dia sem ionóforo, Narasina 24 horas (N24): fornecimento diário de narasina na dosagem de 13 mg de narasina /kg de MS, Narasina 48 horas (N48): fornecimento de narasina a cada 48 horas (dias alternados), sendo no primeiro dia ofertado 26 mg de narasina/kg de MS e no segundo dia foi fornecido apenas o milho moído (média receberam 13 mg de narasina/kg de MS), Narasina 72 horas (N72): fornecimento de narasina a cada 72 horas, sendo no primeiro dia ofertado 39 mg de narasina/kg de MS, já no segundo e terceiro dia fornecido apenas o milho moído sem ionóforo. As análises estatísticas foram realizadas utilizando o procedimento MIXED do SAS (2002) e considerado efeito significativo quando P 0,05. Experimento I: Foram utilizados 44 cordeiros (33,31 ± 0,59 kg), sendo o delineamento experimental de blocos completos casualizados, com a duração de 105 dias. Não houve efeito para o CMS (P = 0,28), no entanto, a inclusão de narasina diariamente (N24) e a cada 48 horas (N48) aumentou o GMD dos animais (P = 0,03) e a EA (P = 0,02). Experimento II: Foram utilizados quatro borregos (Dorper x Santa Inês, castrados e providos de cânulas ruminais). O delineamento experimental utilizado foi o quadrado latino 4 x 4. O experimento teve duração total de 144 dias, divididos em quatro períodos de trinta e seis dias. Em cada período os doze primeiros dias foram utilizados como wash-out, do 13° ao 36° dia os animais receberam as dietas experimentais, a colheitas de dados (total de fezes, urina e de fluido ruminal) foram realizadas nos seis últimos dias de cada período. Não houve efeito na digestibilidade da MS e do FDN, os tratamentos N24 e N48 aumentaram a concentração molar de 11 propionato (P < 0,01), a concentração total de AGCC (P < 0,01) e diminuiu a relação acetato:propionato (P < 0,01). Com base nos dados obtidos é possível concluir que os tratamentos N24 e N48 aumentaram o peso final dos cordeiros, e alterou positivamente fermentação ruminal dos ovinos, por outro lado, a narasina mostrou diminuição na sua capacidade como moduladora da fermentação ruminal no intervalo de fornecimento maior que dois dias (72 horas/N72). / The intake on the correct dosage and frequency are the main difficulties of supplying ionophores for animals on high forage diets. Therefore, the aim of this study was to evaluate the frequency of supplementation of narasin over performance (Exp. I), ruminal fermentation parameters, nutrient apparent digestibility and nitrogen balance (Exp. II) on sheep fed high forage diets. The experimental diets consisted on 95% coastcross hay and 5% ground corn used as a delivery vehicle of the additive. The treatments were: Control (C): daily supply of concentrate without the ionophore; narasin 24 hours (N24): daily supply of 13 mg of narasin/kg of DM; narasin 48 hours (N48): supply of narasin every 48 hours (every other day), being provided 26 mg of Narasin/kg of DM on the first day and only the ground corn on the second day (an average of 13 mg of narasin/kg of DM); narasin 72 hours (N72): supply of narasin every 72 hours (one day receiving the additive followed by two days without receiving it), being provided 39 mg of narasin/kg of DM on the first day and only the ground corn on the second and third days. The statistical analysis was done using the MIXED procedure on SAS (2002) and the effects were considered significant when P 0.05. Experiment I: Were used 44 lambs (33.31 ± 0.59 kg) in a randomized block experimental design, the trial lasted 105 days. There was no effect for DMI (P = 0.28), the daily inclusion of narasin (N24) and every 48 hours (N48) increased the ADG (P = 0.03) and the FE (P < 0.01). Experiment II: Were used 4 male lambs (Dorper x Santa Inês, castrated and cannulated in the rumen) in a 4 x 4 Latin square experimental design. The trial lasted 144 days, divided in 4 periods of 36 days each. The first twelve days of each period were used as wash-out, from the 13th to the 36th day the animals received the experimental diets, and the data collection (feces, urine and ruminal fluid) were done on the last six days of each period. . It was not the effect on the digestibility of DM (P = 0.30) and NDF (P = 0.14). The daily inclusion of narasin (N24) and every 48 hours (N48) increased the molar concentration of propionate (P < 0.01), the total concentration of SCFA (P <0.01) and reduced the acetate to propionate (acetate:propionate ratio) ratio (P < 0.01). Based on this data it was possible to 13 conclude that the daily supply of narasin (N24) and every 48 hours (N48) affected the performance and ruminal fermentation parameters on sheep, but this effects decreased when intervals bigger than 48 hours (N72) were used.

O consumo na dose correta e principalmente na frequência adequada são as principais dificuldades do fornecimento de ionóforos para animais em dietas com elevado teor de volumoso. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da frequência do fornecimento de narasina no desempenho (Exp. I), parâmetros de fermentação ruminal, digestibilidade aparente dos nutrientes e balanço de nitrogênio (Exp. II) em ovinos alimentados com dietas contendo elevado teor de volumoso. As dietas experimentais foram compostas por 95% de feno de coastcros e 5% de milho moído. Os tratamentos utilizados foram: Controle (C): fornecimento do concentrado uma vez ao dia sem ionóforo, Narasina 24 horas (N24): fornecimento diário de narasina na dosagem de 13 mg de narasina /kg de MS, Narasina 48 horas (N48): fornecimento de narasina a cada 48 horas (dias alternados), sendo no primeiro dia ofertado 26 mg de narasina/kg de MS e no segundo dia foi fornecido apenas o milho moído (média receberam 13 mg de narasina/kg de MS), Narasina 72 horas (N72): fornecimento de narasina a cada 72 horas, sendo no primeiro dia ofertado 39 mg de narasina/kg de MS, já no segundo e terceiro dia fornecido apenas o milho moído sem ionóforo. As análises estatísticas foram realizadas utilizando o procedimento MIXED do SAS (2002) e considerado efeito significativo quando P 0,05. Experimento I: Foram utilizados 44 cordeiros (33,31 ± 0,59 kg), sendo o delineamento experimental de blocos completos casualizados, com a duração de 105 dias. Não houve efeito para o CMS (P = 0,28), no entanto, a inclusão de narasina diariamente (N24) e a cada 48 horas (N48) aumentou o GMD dos animais (P = 0,03) e a EA (P = 0,02). Experimento II: Foram utilizados quatro borregos (Dorper x Santa Inês, castrados e providos de cânulas ruminais). O delineamento experimental utilizado foi o quadrado latino 4 x 4. O experimento teve duração total de 144 dias, divididos em quatro períodos de trinta e seis dias. Em cada período os doze primeiros dias foram utilizados como wash-out, do 13° ao 36° dia os animais receberam as dietas experimentais, a colheitas de dados (total de fezes, urina e de fluido ruminal) foram realizadas nos seis últimos dias de cada período. Não houve efeito na digestibilidade da MS e do FDN, os tratamentos N24 e N48 aumentaram a concentração molar de 11 propionato (P < 0,01), a concentração total de AGCC (P < 0,01) e diminuiu a relação acetato:propionato (P < 0,01). Com base nos dados obtidos é possível concluir que os tratamentos N24 e N48 aumentaram o peso final dos cordeiros, e alterou positivamente fermentação ruminal dos ovinos, por outro lado, a narasina mostrou diminuição na sua capacidade como moduladora da fermentação ruminal no intervalo de fornecimento maior que dois dias (72 horas/N72). / The intake on the correct dosage and frequency are the main difficulties of supplying ionophores for animals on high forage diets. Therefore, the aim of this study was to evaluate the frequency of supplementation of narasin over performance (Exp. I), ruminal fermentation parameters, nutrient apparent digestibility and nitrogen balance (Exp. II) on sheep fed high forage diets. The experimental diets consisted on 95% coastcross hay and 5% ground corn used as a delivery vehicle of the additive. The treatments were: Control (C): daily supply of concentrate without the ionophore; narasin 24 hours (N24): daily supply of 13 mg of narasin/kg of DM; narasin 48 hours (N48): supply of narasin every 48 hours (every other day), being provided 26 mg of Narasin/kg of DM on the first day and only the ground corn on the second day (an average of 13 mg of narasin/kg of DM); narasin 72 hours (N72): supply of narasin every 72 hours (one day receiving the additive followed by two days without receiving it), being provided 39 mg of narasin/kg of DM on the first day and only the ground corn on the second and third days. The statistical analysis was done using the MIXED procedure on SAS (2002) and the effects were considered significant when P 0.05. Experiment I: Were used 44 lambs (33.31 ± 0.59 kg) in a randomized block experimental design, the trial lasted 105 days. There was no effect for DMI (P = 0.28), the daily inclusion of narasin (N24) and every 48 hours (N48) increased the ADG (P = 0.03) and the FE (P < 0.01). Experiment II: Were used 4 male lambs (Dorper x Santa Inês, castrated and cannulated in the rumen) in a 4 x 4 Latin square experimental design. The trial lasted 144 days, divided in 4 periods of 36 days each. The first twelve days of each period were used as wash-out, from the 13th to the 36th day the animals received the experimental diets, and the data collection (feces, urine and ruminal fluid) were done on the last six days of each period. . It was not the effect on the digestibility of DM (P = 0.30) and NDF (P = 0.14). The daily inclusion of narasin (N24) and every 48 hours (N48) increased the molar concentration of propionate (P < 0.01), the total concentration of SCFA (P <0.01) and reduced the acetate to propionate (acetate:propionate ratio) ratio (P < 0.01). Based on this data it was possible to 13 conclude that the daily supply of narasin (N24) and every 48 hours (N48) affected the performance and ruminal fermentation parameters on sheep, but this effects decreased when intervals bigger than 48 hours (N72) were used.

Os ionóforos possuem papel importante como manipuladores da fermentação ruminal, principalmente por melhorar a eficiência energética e proteica nos animais ruminantes. A narasina é um ionóforo capaz de fazer controle microbiológio no ambiente ruminal. Entretanto, a literatura possui poucas informações sobre a utilização de narasina na nutrição de ovinos. O presente trabalho teve como objetivos avaliar a utilização de doses de narasina em dietas de ovinos alimentados contendo elevado teor de concentrado ou volumoso. A hipotese é que a narasina tenha a capacidade de alterar os produtos finais da fermentação ruminal, melhorando a utilização dos nutrientes e o metabolismo de nitrogênio de ovinos. No Exp I os tratamentos experimentais foram definidos de acordo com a inclusão ou não de aditivos na dieta contendo elevado teor de concentrado, sendo utilizado uma dieta Controle (C), em que não houve a inclusão de ionóforo; a adição de 25 ppm de monensina sódica (M); 5 ppm (N5); 10 ppm (N10); e 15 ppm de narasina (N15). A inclusão de 5, 10 e 15 mg de narasina/kg de MS aumentou o ganho de peso e a eficiência alimentar de cordeiros alimentados durante 56 dias com dieta contendo 90% de concentrado. No Exp II foram avaliadas as mesmas dietas do exp I. A inclusão de 5, 10 e 15 mg de narasina/kg de MS reduziu o CMS e aumentou o coeficiente de digestibilidade aparente dos nutrientes da MS, MO, PB, gordura e CNF. Além disso, após o período de adaptação houve efeito quadrático para a proporção molar de acetato e a relação acetato:propionato com o aumento das doses de narasina, entretanto, não alterou o pH ruminal. As doses de narasina reduziram linearmente a concentração de amônia no fluido ruminal. A inclusão de narasina nas dietas de borregos tendeu a diminuir o consumo de nitrogênio e reduziu a eliminação de nitrogênio pelas fezes e pela urina. No Exp III os tratamentos foram definidos pela inclusão de doses de narasina em dietas contendo elevado teor de volumoso, sendo o tratamento controle (N0: sem a adição de ionóforo) e a inclusão de 8, 16, 24 e 32 mg de narasina/kg de MS. A inclusão de 0, 8, 16, 24 ou 32 mg de narasina/kg de MS em dietas de borregos alimentados com elevado teor de volumoso não afetou o consumo de matéria seca e tendeu a aumentar linearmente o coeficiente de digestibilidade da FDN. As doses de narasina não alteraram a proporção molar de AGCC, entretanto aumentou a concentração total de AGCC e diminuiu linearmente a concentração de amonia no fluido ruminal. Com base nesses dados foi possivel concluir que a narasina pode ser utilizada em dietas de ovinos aumentando o desempenho dos animais. / Ionophores play an important role as ruminant fermentation manipulators mainly for improving energy and protein efficiency in ruminant. Narasin is an ionophore capable of making microbiological control in the ruminal environment. However, the literature has little information on the use of narasin in sheep nutrition. The objectives of this study were to evaluate the use of doses of narasin in diets of sheep fed diets containing high concentrate or forage contents. The hypothesis is that narasin has the ability to alter the final products of ruminal fermentation, improving nutrient utilization and nitrogen metabolism of sheep. In the Exp I the experimental diets were defined according of the inclusion or not of additives in the diet containing high concentrate, using a control diet (C: no ionophore); the addition of 25 mg of monensin/kg of DM (M); 5 (N5), 10 (N10) or 15 mg of narasin/kg of DM. The inclusion of 5, 10 and 15 mg of narasin / kg of DM increased the average daily gain and feed efficiency of lambs fed for 56 days on a diet containing 90% concentrate. In the Exp II were evaluated the same diets used in the Exp I. The inclusion of 5, 10 and 15 mg narasin / kg DM reduced CMS and increased the apparent digestibility coefficient of DM, OM, CP, fat and NFC. In addition, after the adaptation period there was a quadratic effect for the molar proportion of acetate and the acetate: propionate ratio with increasing doses of narasin, however, did not alter the ruminal pH. The doses of narasin linearly reduced the concentration of ammonia in the ruminal fluid. The inclusion of narasin in diets of wethers tended to reduce nitrogen consumption, and reduced the elimination of nitrogen through feces and urine. In the Exp III the experimental diets were defined by the inclusion of doses of narasin in diets containing high forage contend, being the control diets (N0: no ionophore), and inclusion of 8, 16, 24 or 32 mg of narasin/kg od DM. the inclusion of 0, 8, 16, 24 or 32 mg of narasin / kg of DM in diets of lambs fed with high volume did not affect dry matter intake and tended to linearly increase the NDF digestibility coefficient. Doses of narasin did not alter the molar ratio of AGCC, however increased the total concentration of AGCC in and decreased linearly the concentration of ammonia in the ruminal fluid. Based on these data it was possible to conclude that narasin can be use in sheep diets to improve animal performance

Os ionóforos possuem papel importante como manipuladores da fermentação ruminal, principalmente por melhorar a eficiência energética e proteica nos animais ruminantes. A narasina é um ionóforo capaz de fazer controle microbiológio no ambiente ruminal. Entretanto, a literatura possui poucas informações sobre a utilização de narasina na nutrição de ovinos. O presente trabalho teve como objetivos avaliar a utilização de doses de narasina em dietas de ovinos alimentados contendo elevado teor de concentrado ou volumoso. A hipotese é que a narasina tenha a capacidade de alterar os produtos finais da fermentação ruminal, melhorando a utilização dos nutrientes e o metabolismo de nitrogênio de ovinos. No Exp I os tratamentos experimentais foram definidos de acordo com a inclusão ou não de aditivos na dieta contendo elevado teor de concentrado, sendo utilizado uma dieta Controle (C), em que não houve a inclusão de ionóforo; a adição de 25 ppm de monensina sódica (M); 5 ppm (N5); 10 ppm (N10); e 15 ppm de narasina (N15). A inclusão de 5, 10 e 15 mg de narasina/kg de MS aumentou o ganho de peso e a eficiência alimentar de cordeiros alimentados durante 56 dias com dieta contendo 90% de concentrado. No Exp II foram avaliadas as mesmas dietas do exp I. A inclusão de 5, 10 e 15 mg de narasina/kg de MS reduziu o CMS e aumentou o coeficiente de digestibilidade aparente dos nutrientes da MS, MO, PB, gordura e CNF. Além disso, após o período de adaptação houve efeito quadrático para a proporção molar de acetato e a relação acetato:propionato com o aumento das doses de narasina, entretanto, não alterou o pH ruminal. As doses de narasina reduziram linearmente a concentração de amônia no fluido ruminal. A inclusão de narasina nas dietas de borregos tendeu a diminuir o consumo de nitrogênio e reduziu a eliminação de nitrogênio pelas fezes e pela urina. No Exp III os tratamentos foram definidos pela inclusão de doses de narasina em dietas contendo elevado teor de volumoso, sendo o tratamento controle (N0: sem a adição de ionóforo) e a inclusão de 8, 16, 24 e 32 mg de narasina/kg de MS. A inclusão de 0, 8, 16, 24 ou 32 mg de narasina/kg de MS em dietas de borregos alimentados com elevado teor de volumoso não afetou o consumo de matéria seca e tendeu a aumentar linearmente o coeficiente de digestibilidade da FDN. As doses de narasina não alteraram a proporção molar de AGCC, entretanto aumentou a concentração total de AGCC e diminuiu linearmente a concentração de amonia no fluido ruminal. Com base nesses dados foi possivel concluir que a narasina pode ser utilizada em dietas de ovinos aumentando o desempenho dos animais. / Ionophores play an important role as ruminant fermentation manipulators mainly for improving energy and protein efficiency in ruminant. Narasin is an ionophore capable of making microbiological control in the ruminal environment. However, the literature has little information on the use of narasin in sheep nutrition. The objectives of this study were to evaluate the use of doses of narasin in diets of sheep fed diets containing high concentrate or forage contents. The hypothesis is that narasin has the ability to alter the final products of ruminal fermentation, improving nutrient utilization and nitrogen metabolism of sheep. In the Exp I the experimental diets were defined according of the inclusion or not of additives in the diet containing high concentrate, using a control diet (C: no ionophore); the addition of 25 mg of monensin/kg of DM (M); 5 (N5), 10 (N10) or 15 mg of narasin/kg of DM. The inclusion of 5, 10 and 15 mg of narasin / kg of DM increased the average daily gain and feed efficiency of lambs fed for 56 days on a diet containing 90% concentrate. In the Exp II were evaluated the same diets used in the Exp I. The inclusion of 5, 10 and 15 mg narasin / kg DM reduced CMS and increased the apparent digestibility coefficient of DM, OM, CP, fat and NFC. In addition, after the adaptation period there was a quadratic effect for the molar proportion of acetate and the acetate: propionate ratio with increasing doses of narasin, however, did not alter the ruminal pH. The doses of narasin linearly reduced the concentration of ammonia in the ruminal fluid. The inclusion of narasin in diets of wethers tended to reduce nitrogen consumption, and reduced the elimination of nitrogen through feces and urine. In the Exp III the experimental diets were defined by the inclusion of doses of narasin in diets containing high forage contend, being the control diets (N0: no ionophore), and inclusion of 8, 16, 24 or 32 mg of narasin/kg od DM. the inclusion of 0, 8, 16, 24 or 32 mg of narasin / kg of DM in diets of lambs fed with high volume did not affect dry matter intake and tended to linearly increase the NDF digestibility coefficient. Doses of narasin did not alter the molar ratio of AGCC, however increased the total concentration of AGCC in and decreased linearly the concentration of ammonia in the ruminal fluid. Based on these data it was possible to conclude that narasin can be use in sheep diets to improve animal performance

Burkholderia sacchari é uma espécie de bactéria capaz de acumular polihidroxialcanoatos em condições de limitação de um nutriente essencial e excesso de fonte de carbono. A partir do substrato sacarose, acumula o polímero poli-3-hidroxibutirato (P3HB), poliéster biodegradável de propriedades semelhantes às dos plásticos de origem petroquímica. A partir de sacarose e propionato como fontes de carbono, ela é capaz de acumular o copolímero poli-3-hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato (P3HB-co-3HV), que é mais maleável que o polímero P3HB. No entanto, apenas uma pequena porcentagem do propionato fornecido é convertida em 3HV. Isto se deve à presença de outras vias de catabolismo muito eficientes que transformam o propionato em biomassa, reduzindo a eficiência na produção do copolímero. Estudos em mutantes UV prp-, indicaram que duas vias de catabolismo de propionato podem atuar em B. sacchari: &#945;-oxidação e o ciclo de 2-metilcitrato (2MCC). Esta última teve sua comprovação molecular comprovada, já a outra ainda está sendo estudada, mutantes afetados no consumo de intermediários da &#945;-oxidação foram complementados fragmentos de DNA, obtidos de uma biblioteca genômica de B. sacchari os quais, após sequenciamento e comparação do banco de dados, verificou-se codificarem um regulador transcricional LysR. A análise dos genes adjacentes ao regulador sugeriu que poderiam compor um operon de uma via de &#945;-oxidação. Diante disso, este trabalho busca a comprovação molecular da via da &#945;-oxidação para o catabolismo de propionato em B. sacchari. / Burkholderia sacchari is a species of bacteria capable of accumulating polyhydroxyalkanoates under limiting conditions of an essential nutrient and excess carbon source. From the sucrose substrate, it accumulates polymer poly-3-hydroxybutyrate (P3HB), biodegradable polyester with properties similar to those of petrochemical plastics. From sucrose and propionate as carbon sources, it is able to accumulate the poly-3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate (P3HB-co-3HV) copolymer, which is more malleable than the polymer P3HB. However, only a small percentage of the supplied propionate is converted into 3HV. This is due to the presence of other very efficient catabolic pathways that transform the propionate into biomass, reducing the production efficiency of the copolymer. Studies on prp- UV mutants have indicated that two pathways of propionate catabolism may act on B. sacchari: the &#945;-oxidation and the 2-methylcitrate cycle (2MCC). The latter had its molecular proof proven, while the other is still being studied, mutants affected in the consumption of &#945;-oxidation intermediates were complemented DNA fragments obtained from a genomic library of B. sacchari which, after sequencing and comparison of the bank Coding for a LysR transcriptional regulator. Analysis of the genes adjacent to the regulator suggested that they could compose an operon of an &#945;-oxidation pathway. In view of this, this work seeks the molecular proof of the &#945;-oxidation pathway for the propionate catabolism in B. sacchari.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this work was the development of nanostructured formulations containing clobetasol propionate. Initially, it was validated a chromatographic method to assay clobetasol propionate in nanocapsule suspensions. Clobetasol propionate-loaded nanocapsules and nanospheres of poly(ε-caprolactone) (PCL) and nanoemulsion (0.5 mg mL-1) were prepared by the interfacial deposition of preformed polymer method, nanoprecipitation and spontaneous emulsification, respectively. Formulations were characterized by means of drug content, encapsulation efficiency, pH, mean size, polydispersity index, zeta potential, morphology analysis, and stability under storage. The PCL nanocapsules showed the highest physicochemical stability, followed by the nanoemulsions and nanospheres. In the evaluation of in vitro release of clobetasol propionate, the nanocapsules showed a better control of drug release, according to the biexponential model. The photodegradation study of clobetasol propionate against UVA light showed the importance of the polymer and the oil in the nanoparticles to protect the drug from light. From these results, the nanocapsules were chosen for the study of the influence of the polymerid material on the physicochemical stability umder storage, photostability, release profile of the drug and its release mechanism. The nanocapsules prepared with poly(lactide) (PLA) showed a higher stability in comparison to the nanocapsules prepared with poly(lactide-co-glycolide) 50:50 and 85:15, although its stability was lower than nanocapsules prepared with PCL. Photodegradation studies demonstrated the pretection of the nanoencapsulated drug, regardless of the polymeric material of the nanocapsule s wall. The in vitro release study demonstrated the controlled release of the drug according to an anomalous transport. Due to these results, the nanocapsules prepared with PCL were selected for the development and preparation of hydrogels. Similar formulations containing nanospheres and nanoemulsion were used to evaluate the influence of polymer and oil on different properties of the hydrogels. These dosage forms were evaluated for drug content, pH, spreadability, rheology and in vitro drug release. All hydrogels presented properties compatible to the topical application. The presence of the drug-loaded nanoparticles in hydrogels led a slower drug release, especially for the formulation containing nanocapsules. The drug release profile was according to the Higuchi model. / Este trabalho teve como principal objetivo o desenvolvimento de formulações nanoestruturadas contendo propionato de clobetasol. Inicialmente, foi validado um método cromatográfico para análise do propionato de clobetasol em suspensões de nanocápsulas poliméricas. As nanocápsulas e nanoesferas de poli(ε-caprolactona) (PCL) e nanoemulsões contendo propionato de clobetasol (0,5 mg/mL) foram preparadas pelo método da deposição interfacial do polímero pré-formado, nanoprecipitação e emulsificação espontânea, respectivamente. Foram avaliados teores de fármaco, eficiências de incorporação, pHs, diâmetros de partícula, índices de polidispersão, potenciais zeta, características morfológicas e estabilidade frente ao armazenamento das diferentes formulações. As nanocápsulas apresentaram maior estabilidade físico-química, seguida pelas nanoemulsões e nanoesferas. Na avaliação da liberação in vitro do propionato de clobetasol, as nanocápsulas apresentaram o maior controle na liberação do fármaco, seguindo um modelo biexponencial. O estudo da fotodegradação do propionato de clobetasol frente à luz UVA demonstrou a importância da presença do polímero e do óleo para o aumento da fotoestabilidade. Diante destes resultados, as nanocápsulas foram selecionadas para o estudo da influência do material polimérico sobre as características físico-químicas, estabilidade frente ao armazenamento, fotoestabilidade, perfil de liberação do fármaco e seu mecanismo de liberação. As nanocápsulas preparadas com poli(ácido lactídeo) (PLA) apresentaram uma maior estabilidade frente ao armazenamento em comparação com as nanocápsulas preparadas com poli(ácido lactídeo-coglicolídeo) 50:50 e 85:15, embora sua estabilidade tenha sido inferior às nanocápsulas preparadas com PCL. O estudo da fotodegradação demonstrou a proteção do fármaco quando nanoencapsulado, independente do tipo de polímero empregado na sua preparação. A liberação in vitro demonstrou a liberação controlada do fármaco com transporte anômalo. Diante de todos esses resultados, as nanocápsulas preparadas com PCL foram selecionadas para o desenvolvimento de formas farmacêuticas semissólidas (hidrogéis). Formulações similares contendo nanoesferas e a nanoemulsão foram utilizadas para se avaliar a influência do polímero e do óleo sobre diferentes propriedades dos hidrogéis. Estas formas farmacêuticas foram avaliadas quanto ao teor de fármaco, pH, espalhabilidade, reologia e liberação in vitro do fármaco. Os hidrogéis apresentaram propriedades compatíveis com a aplicação tópica. A presença do fármaco nanoencapsulado nos hidrogéis proporcionou sua liberação controlada, principalmente para as formulações contendo as nanocápsulas. O perfil de liberação do fármaco a partir dos hidrogéis seguiu o modelo de Higuchi.

Burkholderia sacchari é uma nova espécie bacteriana do solo brasileiro que tem a capacidade de crescer em sacarose e acumular grânulos intracelulares de poliésteres pertencentes à família dos polihidroxiaIcanoatos (PHA). Quando cultivado em sacarose, o homopolímero poli-3¬hidroxibutirato é acumulado por esta bactéria, que é usado como um plástico biodegradável e biocompatível. Quando sacarose e ácido propiônico são fornecidos como fontes de carbono, as células de B. sacchari acumulam o copolímero poli-3-hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato (P3HB-co-3HV). Entretanto, uma pequena porcentagem do ácido propiônico fornecido é convertido a unidades 3HV devido à eficientes vias catabólicas que convertem este substrato preferencialmente a biomassa, CO2 e água, reduzindo portanto a eficiência da produção do polímero. Ao menos duas vias do catabolismo de propionato foram previamente propostas em B. sacchari: a-oxidação e ciclo do 2-metilcitrato (2MCC), sendo somente a última confilmada no nível molecular. Mutantes UV, obtidos anteriormente, foram incapazes de crescer em propionato (prp) e também apresentaram fenótipo afetado no crescimento em intermediários da a-oxidação. No presente trabalho, após uma busca em bibliotecas genômicas de B. sacchari, uma delas construída também no presente trabalho, três diferentes fragmentos de DNA presentes nos clones AI, PI e P2 foram capazes de restaurar o fenótipo prp+ aos mutantes. Experimentos quantitativos revelaram que AI somente restaurou parcialmente a conversão de propionato a unidades 3HV aos mutantes. PI foi capaz de restaurar a capacidade de crescimento em propionato, e em outros intermediários da a-oxidação, a um dos mutantes. Um DNA de 1.2 Kb, subfragmento de PI, ainda capaz de complementar mutantes prp, foi subclonado e seqüenciado, demonstrando similaridade a seqüências de DNA codificadoras de reguladores transcricionais do tipo LysR de várias bactérias, incluindo espécies de Bllrkholderia. Regiões adjacentes a LysR em diferentes genomas de Burkholderia são anotados como codificadores de acil-CoA desidrogenases, ao lado de proposta acil-CoA transferases/carnitina desidrogenases e de uma permease do facilitador maior da superfamília MFS-l. Após confirmação das mesmas regiões adjacentes em B. sacchari e também a sua específica deleção, será possível provar a presença da via do catabolismo de propionato indicada neste trabalho. / Burkholderia sacchari is a new bacterial species from brazilian soil, able to grow in sucrose, accumulating intracellular granules of polyester belonging to the polyhydroxyalkanoate family (PHA). When cultivated on sucrose, the homopolymer poly-3-hydroxybutyrate is accumulated by this bacterium, which is used as biodegradable and biocompatible plastic. When sucrose and propionic acid are supplied as carbon sources, B. sacchari cells accumulate the copolymer poly-3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate (P3HB-co-3HV). However, a small percentage ofthe propionic acid supplied is converted to 3HV units, because efficient catabolic pathways convert this substrate preferentially to biomass, CO2 and water, thus reducing the efficiency of polymer production. At least two propionate catabolic pathways have been previously indicated in B. sacchari: a-oxidation and the 2-methylcitric acid (2MCC), the latter confirmed at molecular leveI. UV mutants previously obtained were unable to grow in propionate (prp) and also showed the phenotype affected concerning grow on intermediates of propionate a-oxidation. In the present work, after a screening in B. sacchari genomic libraries, one ofthem constructed also in the present work, the prp + phenotype was restored to the mutants by three different DNA fragments harbored by dones A), PI and P2. Quantitative experiments revealed that AI restored only partially the quantitative conversion of propionate to 3HV units to the mutants. PI restored the ability to grow in propionate and in other intermediates of a-oxidation to one prp mutant. A DNA 1.2 Kb subfragment of PI, still able to complement prp mutants, was subcloned and sequenced, showing similarity to DNA sequences encoding to LysR-type transcriptional regulators of various bacteria, including BlIrkholderia species. Adjacent regions to LysR in different genomes of BlIrkholderia are annotated as encoding to acyl-CoA dehydrogenases, neighboring a predicted acyl-CoA transferases/carnitine dehydratase and a permease ofthe major facilitator superfamily MFS-1. After confirmation ofthe same adjacent regions in B. sacchari and also their especific deletion, it will be possible to prove the presence of the pathway indicated here in the catabolism of propionate.

Burkholderia sacchari é uma nova espécie bacteriana do solo brasileiro que tem a capacidade de crescer em sacarose e acumular grânulos intracelulares de poliésteres pertencentes à família dos polihidroxiaIcanoatos (PHA). Quando cultivado em sacarose, o homopolímero poli-3¬hidroxibutirato é acumulado por esta bactéria, que é usado como um plástico biodegradável e biocompatível. Quando sacarose e ácido propiônico são fornecidos como fontes de carbono, as células de B. sacchari acumulam o copolímero poli-3-hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato (P3HB-co-3HV). Entretanto, uma pequena porcentagem do ácido propiônico fornecido é convertido a unidades 3HV devido à eficientes vias catabólicas que convertem este substrato preferencialmente a biomassa, CO2 e água, reduzindo portanto a eficiência da produção do polímero. Ao menos duas vias do catabolismo de propionato foram previamente propostas em B. sacchari: a-oxidação e ciclo do 2-metilcitrato (2MCC), sendo somente a última confilmada no nível molecular. Mutantes UV, obtidos anteriormente, foram incapazes de crescer em propionato (prp) e também apresentaram fenótipo afetado no crescimento em intermediários da a-oxidação. No presente trabalho, após uma busca em bibliotecas genômicas de B. sacchari, uma delas construída também no presente trabalho, três diferentes fragmentos de DNA presentes nos clones AI, PI e P2 foram capazes de restaurar o fenótipo prp+ aos mutantes. Experimentos quantitativos revelaram que AI somente restaurou parcialmente a conversão de propionato a unidades 3HV aos mutantes. PI foi capaz de restaurar a capacidade de crescimento em propionato, e em outros intermediários da a-oxidação, a um dos mutantes. Um DNA de 1.2 Kb, subfragmento de PI, ainda capaz de complementar mutantes prp, foi subclonado e seqüenciado, demonstrando similaridade a seqüências de DNA codificadoras de reguladores transcricionais do tipo LysR de várias bactérias, incluindo espécies de Bllrkholderia. Regiões adjacentes a LysR em diferentes genomas de Burkholderia são anotados como codificadores de acil-CoA desidrogenases, ao lado de proposta acil-CoA transferases/carnitina desidrogenases e de uma permease do facilitador maior da superfamília MFS-l. Após confirmação das mesmas regiões adjacentes em B. sacchari e também a sua específica deleção, será possível provar a presença da via do catabolismo de propionato indicada neste trabalho. / Burkholderia sacchari is a new bacterial species from brazilian soil, able to grow in sucrose, accumulating intracellular granules of polyester belonging to the polyhydroxyalkanoate family (PHA). When cultivated on sucrose, the homopolymer poly-3-hydroxybutyrate is accumulated by this bacterium, which is used as biodegradable and biocompatible plastic. When sucrose and propionic acid are supplied as carbon sources, B. sacchari cells accumulate the copolymer poly-3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate (P3HB-co-3HV). However, a small percentage ofthe propionic acid supplied is converted to 3HV units, because efficient catabolic pathways convert this substrate preferentially to biomass, CO2 and water, thus reducing the efficiency of polymer production. At least two propionate catabolic pathways have been previously indicated in B. sacchari: a-oxidation and the 2-methylcitric acid (2MCC), the latter confirmed at molecular leveI. UV mutants previously obtained were unable to grow in propionate (prp) and also showed the phenotype affected concerning grow on intermediates of propionate a-oxidation. In the present work, after a screening in B. sacchari genomic libraries, one ofthem constructed also in the present work, the prp + phenotype was restored to the mutants by three different DNA fragments harbored by dones A), PI and P2. Quantitative experiments revealed that AI restored only partially the quantitative conversion of propionate to 3HV units to the mutants. PI restored the ability to grow in propionate and in other intermediates of a-oxidation to one prp mutant. A DNA 1.2 Kb subfragment of PI, still able to complement prp mutants, was subcloned and sequenced, showing similarity to DNA sequences encoding to LysR-type transcriptional regulators of various bacteria, including BlIrkholderia species. Adjacent regions to LysR in different genomes of BlIrkholderia are annotated as encoding to acyl-CoA dehydrogenases, neighboring a predicted acyl-CoA transferases/carnitine dehydratase and a permease ofthe major facilitator superfamily MFS-1. After confirmation ofthe same adjacent regions in B. sacchari and also their especific deletion, it will be possible to prove the presence of the pathway indicated here in the catabolism of propionate.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:19:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DANTAS_Patricia_2011.pdf: 2256820 bytes, checksum: e36b1fbb6b7a53c4ba196910208d1dd3 (MD5) Previous issue date: 2011-12-16 / Financiadora de Estudos e Projetos / Hydrogels derived from cellulose acetate propionate (CAP) and cellulose acetate (CA) were synthesized with the cross-linking agents PMDA (Pyromellitic Dianhydride) and BTDA (Dianhydride 3, 3 ', 4, 4' Benzophenone Tetracarboxylated) with 3:1 stoichiometry in relation to the mass of the crosslinker agent x mass of available hydroxyls in the polymer chain. The gels were obtained in the form of films and particles, the raw materials were characterized with Thermogravimetric Analysis (TGA), Differential Scanning Calorimetry (DSC), Spectroscopy in Region of Fourier Transform Infrared (FTIR) and in relation to the degree of substitution (GS). The gels synthesized were characterized using FTIR techniques in order to show the esterification, TGA and DSC to perform comparative analysis and study of thermal properties between the CAP and CA reagents and gels, and Scanning Electron Microscopy (SEM) were used for observation of the gels synthesized and the geometry of the particles obtained, the porosity of observation and observation of surface changes, was performed to determine the crosslinking density of the second theory of Flory Rehner, study the density of the gels, and degree of swelling of the study best solvent for swelling of the gels. Gels derived from CAP were tested in the adsorption studies and controlled release of the herbicide paraquat. For the phenomenon of controlled release, we studied the phenomena of transport and release curves. The release profiles were studied by using the mathematical model published by Korsmeyer-Peppas and the mainly results has showed that model was appropriated for process data analysis of controlled release in long periods. / Hidrogéis derivados de Propionato Acetato de Celulose (CAP) e Acetato de Celulose (CA) foram sintetizados com os agentes reticuladores PMDA (Dianidrido Piromelítico) e BTDA (Dianidrido 3, 3´, 4, 4´ Benzofenona Tetracarboxílico), com estequiometrias 3:1 em relação à massa do agente reticulador x massa de hidroxilas disponíveis na cadeia polimérica, com obtenção de géis em formato de filmes e particulados; as matérias-primas foram caracterizadas com Análise Termogravimétrica (TGA), Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC), Espectroscopia na Região do Infravermelho com Transformada de Fourier (FTIR) e em relação ao Grau de Substituição (GS). Os géis sintetizados foram caracterizados utilizando as técnicas de FTIR, para evidenciação da esterificação; TGA e DSC para realização de análise comparativa e estudo das propriedades térmicas entre os reagentes CAP e CA e os géis obtidos; e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), utilizada para observação dos géis sintetizados em relação à geometria das partículas obtidas, observação da porosidade e observação de alterações superficiais; foi realizada a determinação da densidade de ligações cruzadas segundo a Teoria de Flory Rehner; estudo da densidade dos géis, que variaram de 0,4 a 1,51 g/cm3; grau de inchamento que obteve variações entre os diferentes géis de 6,53 à 11,8; e o estudo do melhor solvente para intumescimento dos géis. Nos géis derivados de CAP, foram realizados ensaios de adsorção e liberação controlada do herbicida Paraquat. Para o fenômeno de liberação controlada, foram estudados os fenômenos de transporte e as curvas de liberação; os perfis de liberação foram estudados pelo modelo matemático de Korsmeyer-Peppas; e apresentaram como o gel com maior porcentagem de adsorção e melhor potencial para liberação controlada por longos períodos o gel CAP 3B1.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-09-04T17:22:48Z No. of bitstreams: 2 Luis Antonio - Dissertação mestrado - versão biblioteca.pdf: 706561 bytes, checksum: ba004353ceb320d9ea4f9c0ef0b105bd (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-04T17:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Luis Antonio - Dissertação mestrado - versão biblioteca.pdf: 706561 bytes, checksum: ba004353ceb320d9ea4f9c0ef0b105bd (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-03-18 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Clobetasol propionate is one of the most potent topical corticosteroids usually available and has been established the use in treatment of various skin pathology. However its systemic absorption may cause serious side effects. The use of lipids nanocarriers and application of iontophoretic current shown potential to further controlled release of clobetasol propionate and increase their retention in the stratum corneum, thus making its management more effective and safe. In this study an analytical method was developed and validated for quantification of clobetasol propionate in nanocarriers and pig skin, used as model membranes in vitro permeation studies. Nanostructured lipid carriers (NLC) were obtained by dilution of microemulsion and chitosan-coated NLC (NLC-Ch) by the dripping of NLC in chitosan solution. The developed nanocarriers were characterized to mean diameter, polydispersity index, zeta potential, drug loading, recovery and encapsulation efficiency. The in vitro release and permeation profile of clobetasol free and nanoencapsulated was evaluated using Franz cells. The nanocariers obtained of 125 nm and uniform size distribution, whit PdI 0,25. The increase in size of NLC-Ch and the inverting the value of zeta potential, suggest that there was a coating of the CLN by chitosan, though interaction of charges. The NLC and NLC-Ch showed recovery values greater than 80% and encapsulation efficiency than 90%. The release profile of clobetasol from the developed formulations showed a controlled release with 35% in 24 hours of study. The nanoenapsulation of clobetasol in the NLC-Ch and NLC resulted in retention increased in the stratum corneum of 9.2 an 7.8 fold, respectively, compared to free drug. The retention of the clobetasol in the stratum corneum was 4 and 2 times higher when electric current was applied to the formulation CLNQ, compared to the free drug and encapsulated in NLC, respectively. The accumulation of the drug in the stratum corneum, promoted by lipid carriers, shows that these systems are effective for potential topical delivery to minimize the permeation of the drug into the bloodstream and reduces the side effects. / O propionato de clobetasol é um dos mais potentes corticosteroides tópicos disponíveis atualmente e tem uso consagrado no tratamento de diferentes patologias cutâneas. Contudo, a sua absorção sistêmica pode causar graves efeitos adversos. O uso de nanocarreadores lipídicos e a aplicação de corrente iontoforética apresentam potencial para promover liberação controlada do propionato de clobetasol e aumentar a sua retenção no estrato córneo, tornando assim sua administração mais segura e efetiva. No presente trabalho, um método cromatográfico foi desenvolvido e validado para quantificação do propionato de clobetasol nos nanocarreadores e na pele de porco, utilizada como modelo de membrana nos estudos de permeação in vitro. Carreadores lipídicos nanoestruturados (CLN) foram obtidos pelo método da diluição de microemulsão e CLN revestidos com quitosana (CLN-Q) foram obtidos pelo gotejamento dos CLN em solução de quitosana. Os nanocarreadores desenvolvidos foram caracterizados quanto ao diâmetro médio, índice de polidispersividade, potencial zeta, carga de fármaco, recuperação e eficiência de encapsulação. O perfil de liberação e de permeação in vitro do clobetasol livre e nanoencapsulado foi avaliado utilizando células de Franz. Os CLN obtidos apresentaram tamanho de 125 nm e distribuição de tamanho uniforme, com PdI de 0,25. O aumento no tamanho médio dos CLN-Q, para 257 nm, e a inversão no valor de potencial zeta sugerem que houve revestimento dos CLN pela quitosana, por meio de interação de cargas. Os CLN e CLN-Q apresentaram valores de recuperação maiores que 80% e de eficiência de encapsulação superiores a 90%. O perfil de liberação do clobetasol a partir das formulações desenvolvidas mostrou uma liberação controlada, com cerca de 35% em 24 horas de estudo. A nanoencapsulação do clobetasol nos CLN-Q e CLN resultou em retenção aumentada do fármaco no estrato córneo de 9,2 e 7,8 vezes, respectivamente, comparado ao fármaco livre. A retenção do clobetasol no estrato córneo foi de 4 e 2 vezes maior quando corrente elétrica foi aplicada na formulação CLNQ, comparado ao fármaco livre e encapsulado nos CLN, respectivamente. O acúmulo do fármaco no estrato córneo, promovido pelos carreadores lipídicos, mostrou que esses sistemas são efetivos para entrega tópica deste fármaco com potencial para minimizar sua absorção percutânea, e dessa forma, diminuir os seus efeitos adversos.