Orientador: Maria Célia Bertolini / Banca: Ana Paula Ulian de Araujo / Banca: Julio Cesar Borges / Resumo: Trabalhos anteriores realizados pelo nosso grupo levaram à identificação da proteína RVB-1 de Neurospora crassa como capaz de se ligar a um fragmento de DNA contendo o motif STRE (Stress Responsive Element). Este elemento de DNA, em Saccharomyces cerevisiae, é descrito estar presente na região promotora de genes responsivos a estresse, incluindo o estresse térmico. Uma busca nos bancos de dados de proteínas mostrou que a RVB-1 apresenta homologia estrutural à proteína RuvBL1 de humanos. Além disso, esta proteína é descrita possuir uma proteína paráloga, RuvBL2 ou Rvb2 de humano e S. cerevisiae, respectivamente, cuja proteína ortóloga em N. crassa foi denominada RVB-2. As proteínas RuvBLs foram encontradas estarem associadas a vários processos celulares, muito provavelmente devido as suas capacidades de formar grandes complexos proteicos e possuírem atividade ATPásica. Neste trabalho, estas proteínas foram parcialmente caracterizadas do ponto de vista funcional, bioquímico e biofísico. Os resultados obtidos por microscopia de fluorescência mostraram que ambas apresentam localização nuclear quando o fungo foi exposto a estresse térmico. A análise da expressão da proteína RVB-V5 mostrou estar aumentada, nessa mesma condição ambiental, quando analisada por Western blot. As duas proteínas foram produzidas na forma recombinante em Escherichia coli, tanto isoladamente quanto juntas, e a análise da expressão mostrou alta estabilidade em solução quando ambas foram produzidas em uma me... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Previous work by our group identified the Neurospora crassa RVB - 1 protein as able of binding to a DNA fragment containing the Stress Responsive Element (STRE). In Saccharomyces cerevisiae, this element is present in the promoter region of genes responsive to stress, including heat stress. RVB - 1 shows structural homology to human RuvBL1 protein, and is described to have a paralog, the RuvBL2 or Rvb2 protein in human and S. cerevisiae, respect ively. The N. crassa orthologous protein was identified and named RVB - 2. The RuvBLs proteins have been found to be associated with diverse cellular processes, most likely due to their ability to form large protein complexes and to have ATPase activity. In this work, these proteins were functional, biochemical and biophysically characterized. The fluorescence microscopy results showed that both proteins present nuclear localization in the fungus exposed to heat stress. Analyses of protein expression by Weste rn blot showed an increased expression of the RVB - 1 - v5 protei n in this same condition . The two proteins were produced in Escherichia coli, and expression analyses showed higher stability in solution when both were produced together. Both proteins showed in vitro interaction by pulldown analysis. The RVB - 1/2 complex has the secondary structure mostly formed by α - helices as analysis by CD. The size - exclusion chromatography suggested that the complex present different oligomeric structures when analyzed in the absence a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Em diversos casos, o câncer bucal é precedido por lesões pré-malignas, como por exemplo, a leucoplasia, sendo que o tabaco é um fator de risco. No entanto, apesar deste potencial negativo, há estudos limitados em fumantes e não fumantes sobre o desenvolvimento de displasia para carcinoma. Sabe-se que o principal componente do factor de transcrição AP-1, a proteína c-Jun e a sua forma fosforilada (p-c-Jun), participam do ciclo celular e que sua inibição compromete a proliferação celular. A proteína p27 tem sido demonstrada como inibidora de quinase, e sabe-se que tem sua expressão diminuída durante a carcinogênese. A expressão diminuída de p27 tem sido relacionada a um pior prognóstico em carcinoma epidermóide. O objetivo deste estudo foi verificar a expressão das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27, em lesões potencialmente malignas diagnosticadas clinicamente como leucoplasia de pacientes fumantes e não fumantes. Foram selecionados 73 casos diagnosticados clinicamente como leucoplasias, os quais foram divididos nos seguintes grupos: leucoplasia com e sem displasia epitelial, e entre fumantes e não fumantes (perfazendo 4 grupos). Cortes histológicos das lesões foram classificados segundo o sistema de graduação binário, e subsequentemente submetidos à técnica imunohistoquímica da estreptoavidina-biotina. Avaliou-se também a associação da proliferação celular pela c-Jun, p-c-Jun e p27 com o tabagismo, presença e ausência de displasia, localização e gênero. O presente estudo verificou que ocorrência de displasia epitelial em baixo e alto risco não teve associação com o hábito de fumar do paciente (p= 0,5430). Avaliando apenas a imunorreatividade das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27 individualmente observouse que a expressão destas não teve associação com a condição fumante do paciente (p> 0,05). Porém, ao compararmos a imunomarcação de c-Jun e p-c-Jun entre si, no total da amostra (p=0,0448) e somente para displasia em fumantes (p=0,0165), nota-se significativamente menor expressão de p-c-Jun. Comparando c-Jun e p27 nas displasias em não fumantes, houve significativamente maior expressão de c-Jun e menor expressão de p27 (p=0,0079). A análise do Teste binomial de duas proporções revelou que as regiões de língua e assoalho bucal estavam associadas à ocorrência de lesões displásicas quando comparadas a lesões não displásicas (p<0,0001). Concluiu-se que não houve correlação entre fumo e grau de displasia. A expressão das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27 foi independente da condição fumante do paciente. / In Several cases, the oral cancer is preceded by-malignant lesions potentially, such as leukoplakia, and that tobacco is a risk factor. However, despite this negative potential, there are limited studies in smokers and nonsmokers on the development of dysplasia to carcinoma. It is known that the main component of the transcription factor AP-1, c-Jun protein and its phosphorylated form (pc-Jun), participate in cell cycle inhibition and their committed cell proliferation. The p27 protein has been shown to inhibit kinase, and it is known that their expression is decreased during carcinogenesis. The decreased expression of p27 has been linked to poor prognosis in squamous cell carcinoma. The aim of this study was to evaluate the expression of proteins c-Jun, pc-Jun and p27 in potentially malignant lesions from smokers and non-smokers, diagnosed clinically as leukoplakiaa in smokers and nonsmokers. We selected 73 cases diagnosed clinically as leukoplakia, which were divided into the following groups: leukoplakia with and without dysplasia, and between smokers and nonsmokers (totaling 4 groups). Histological lesions were classified according to the binary grading system, and subsequently subjected to immunohistochemistry technique streptavidin-biotin. We also evaluated the association of cell proliferation of c-Jun, pc-Jun and p27 with smoking, presence and absence of dysplasia, location and gender. This study found that the occurrence of epithelial dysplasia in low-and high-risk had no association with the patient\'s smoking habit (p = 0,5430). When evaluating the immunoreactivity of the proteins c-Jun, p27 and pc-Jun alone it was observed that the expression of them was also independent of the condition of the patient smoking (p> 0,05). However, when comparing the immunostaining of c-Jun and pc-Jun together, for the total sample (p = 0,0448) and only for dysplasia in smokers (p = 0,0165), there was significantly lower expression of pc-Jun. Comparing p27 and c-Jun in dysplasias in nonsmokers, there was significantly higher expression of c-Jun and reduced expression of p27 (p = 0,0079). The analysis of two binomial proportions test revealed that the lesions in the tongue and floor of the mouth were more prone to be dysplastic (p <0.0001). It was concluded that there was no correlation between smoking and degree of dysplasia. The expression of c-Jun, p27 and pc-Jun proteins was independent of smoking habit of the patient. The anatomoclinical aspects combined with the expressions of c-Jun and p27 may assist the pathologist in directing the histopathological diagnosis.

Em diversos casos, o câncer bucal é precedido por lesões pré-malignas, como por exemplo, a leucoplasia, sendo que o tabaco é um fator de risco. No entanto, apesar deste potencial negativo, há estudos limitados em fumantes e não fumantes sobre o desenvolvimento de displasia para carcinoma. Sabe-se que o principal componente do factor de transcrição AP-1, a proteína c-Jun e a sua forma fosforilada (p-c-Jun), participam do ciclo celular e que sua inibição compromete a proliferação celular. A proteína p27 tem sido demonstrada como inibidora de quinase, e sabe-se que tem sua expressão diminuída durante a carcinogênese. A expressão diminuída de p27 tem sido relacionada a um pior prognóstico em carcinoma epidermóide. O objetivo deste estudo foi verificar a expressão das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27, em lesões potencialmente malignas diagnosticadas clinicamente como leucoplasia de pacientes fumantes e não fumantes. Foram selecionados 73 casos diagnosticados clinicamente como leucoplasias, os quais foram divididos nos seguintes grupos: leucoplasia com e sem displasia epitelial, e entre fumantes e não fumantes (perfazendo 4 grupos). Cortes histológicos das lesões foram classificados segundo o sistema de graduação binário, e subsequentemente submetidos à técnica imunohistoquímica da estreptoavidina-biotina. Avaliou-se também a associação da proliferação celular pela c-Jun, p-c-Jun e p27 com o tabagismo, presença e ausência de displasia, localização e gênero. O presente estudo verificou que ocorrência de displasia epitelial em baixo e alto risco não teve associação com o hábito de fumar do paciente (p= 0,5430). Avaliando apenas a imunorreatividade das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27 individualmente observouse que a expressão destas não teve associação com a condição fumante do paciente (p> 0,05). Porém, ao compararmos a imunomarcação de c-Jun e p-c-Jun entre si, no total da amostra (p=0,0448) e somente para displasia em fumantes (p=0,0165), nota-se significativamente menor expressão de p-c-Jun. Comparando c-Jun e p27 nas displasias em não fumantes, houve significativamente maior expressão de c-Jun e menor expressão de p27 (p=0,0079). A análise do Teste binomial de duas proporções revelou que as regiões de língua e assoalho bucal estavam associadas à ocorrência de lesões displásicas quando comparadas a lesões não displásicas (p<0,0001). Concluiu-se que não houve correlação entre fumo e grau de displasia. A expressão das proteínas c-Jun, p-c-Jun e p27 foi independente da condição fumante do paciente. / In Several cases, the oral cancer is preceded by-malignant lesions potentially, such as leukoplakia, and that tobacco is a risk factor. However, despite this negative potential, there are limited studies in smokers and nonsmokers on the development of dysplasia to carcinoma. It is known that the main component of the transcription factor AP-1, c-Jun protein and its phosphorylated form (pc-Jun), participate in cell cycle inhibition and their committed cell proliferation. The p27 protein has been shown to inhibit kinase, and it is known that their expression is decreased during carcinogenesis. The decreased expression of p27 has been linked to poor prognosis in squamous cell carcinoma. The aim of this study was to evaluate the expression of proteins c-Jun, pc-Jun and p27 in potentially malignant lesions from smokers and non-smokers, diagnosed clinically as leukoplakiaa in smokers and nonsmokers. We selected 73 cases diagnosed clinically as leukoplakia, which were divided into the following groups: leukoplakia with and without dysplasia, and between smokers and nonsmokers (totaling 4 groups). Histological lesions were classified according to the binary grading system, and subsequently subjected to immunohistochemistry technique streptavidin-biotin. We also evaluated the association of cell proliferation of c-Jun, pc-Jun and p27 with smoking, presence and absence of dysplasia, location and gender. This study found that the occurrence of epithelial dysplasia in low-and high-risk had no association with the patient\'s smoking habit (p = 0,5430). When evaluating the immunoreactivity of the proteins c-Jun, p27 and pc-Jun alone it was observed that the expression of them was also independent of the condition of the patient smoking (p> 0,05). However, when comparing the immunostaining of c-Jun and pc-Jun together, for the total sample (p = 0,0448) and only for dysplasia in smokers (p = 0,0165), there was significantly lower expression of pc-Jun. Comparing p27 and c-Jun in dysplasias in nonsmokers, there was significantly higher expression of c-Jun and reduced expression of p27 (p = 0,0079). The analysis of two binomial proportions test revealed that the lesions in the tongue and floor of the mouth were more prone to be dysplastic (p <0.0001). It was concluded that there was no correlation between smoking and degree of dysplasia. The expression of c-Jun, p27 and pc-Jun proteins was independent of smoking habit of the patient. The anatomoclinical aspects combined with the expressions of c-Jun and p27 may assist the pathologist in directing the histopathological diagnosis.

A proteína fosfatase do tipo-1 (PP1) é uma das principais proteínas serina/treonina fosfatases (PSTPs) e desempenha papeis fisiológicos tão diversos quanto importantes, tais como a regulação do metabolismo de carboidratos e do ciclo celular. A holoenzima PP1 é constituída por uma subunidade catalítica conservada (PP1c) que está associada a subunidades não-catalíticas que modulam sua localização subcelular, especificidade de substrato e atividade enzimática. Mais de 100 proteínas que interagem com a PP1c já foram identificadas em distintos organismos eucarióticos. Proteínas que interagem com a PP1c são, portanto, a chave para compreender os diferentes papéis biológicos da PP1. A subunidade catalítica da PP1 da ameba social Dictyostelium discoideum (DdPP1c) é codificada por um gene em cópia única o qual é expresso ao longo de todo o ciclo de vida desse organismo. Algumas proteínas que interagem e possivelmente modulam a atividade da PP1 de D. discoideum já foram identificadas, utilizando-se tanto buscas por similaridades na sequência genômica deste microorganismo como ensaios utilizando o sistema de duplo-híbrido em leveduras, utilizando-se a PP1c como isca. Com esta última abordagem, foram selecionados mais de 25 clones distintos de cDNA que codificam proteínas que potencialmente interagem com a DdPP1c, após varreduras de bibliotecas de cDNA de diferentes estágios de desenvolvimento de D. discoideum. Neste trabalho, nós confirmamos que o produto protéico de 11 destes clones interagem com a isca DdPP1c com base em novos ensaios de duplo-híbrido. Os demais clones codificam proteínas que não interagem com DdPP1c ou promovem auto-ativação do gene repórter. Selecionamos para estudos adicionais um clone do gene DDB_G0269300 cujo produto protéico predito de 423 de aminoácidos não tem função ainda conhecida. A sequência codificadora completa de DDB_G0269300 foi clonada para realização de novos ensaios de duplo-híbrido em leveduras, os quais confirmaram a especificidade de sua interação com DdPP1c. A proteína recombinante rDDB_G0269300 foi obtida com sucesso em bactérias, possibilitando a obtenção de anticorpos policlonais em camundongos. O anti-soro anti-rDDB_G0269300 é aparentemente específico no reconhecimento da proteína correspondente em extratos celulares de D. discoideum coletados em 12h e 16 da fase de desenvolvimento. Estes resultados coincidem com dados obtidos através de RT-qPCR que mostram aumento nos níveis dos transcritos de DDB_G0269300 entre 8h e 12h da fase de desenvolvimento, o que é indicativo da sua importância desta proteína durante esta fase do ciclo de vida de Dictyostelium como uma potencial parceira molecular da DdPP1c / Protein phosphatase type-1 (PP1) is a major protein serine/threonine phosphatase (PSTP) which plays as diverse as important physiological roles, such as regulation of carbohydrate metabolism and of cell cycle. The PP1 holoenzyme comprises a conserved catalytic subunit (PP1c) associated with non-catalytic subunits that modulate its subcellular localization, substrate specificity and enzymatic activity. More than 100 proteins that interact with PP1c have been identified in different eukaryotic organisms. Therefore proteins that interact with PP1c are key to the understanding of PP1 different biological roles. The catalytic subunit of PP1 the social amoeba Dictyostelium discoideum (DdPP1c) is encoded by a single copy gene which is expressed throughout the life cycle of this organism. Some proteins that interact with and possibly modulate the activity of D. discoideum PP1 have been identified, using both similarity searches in the genome sequence of this microorganism as yeast two-hybrid screenings using PP1c as bait. With the latter approach, we have selected more than 25 distinct cDNA clones encoding proteins that potentially interact with DdPP1c after screening D. discoideum cDNA libraries from different developmental stages. In this study, we confirmed that the protein product from 11 of these clones interact with the bait DdPP1c based on two-hybrid assays. The other clones encode proteins that either does not interact or promote self-activation of the reporter gene. The clone related to DDB_G0269300 gene that encodes a predicted protein of 423 amino acids with unknown function was selected for further studies. DDB_G0269300 full-length coding sequence was cloned and new yeast two-hybrid assays were performed confirming the specificity of the interaction with DdPP1c. The recombinant protein rDDB_G0269300 was successfully obtained in bacteria and further used for polyclonal antibodies production in mice. The antiserum anti-rDDB_G0269300 is apparently specific for recognition of the corresponding protein in D. discoideum cell extracts collected after 12h and 16h of development. These results agree with RT-qPCR data showing that the levels of DDB_G0269300 transcripts are increased between 8 h and 12 h during the development, which is indicative of its importance during this phase in Dictyostelium life cycle as a DdPP1c potential molecular partner.

A proteína fosfatase do tipo-1 (PP1) é uma das principais proteínas serina/treonina fosfatases (PSTPs) e desempenha papeis fisiológicos tão diversos quanto importantes, tais como a regulação do metabolismo de carboidratos e do ciclo celular. A holoenzima PP1 é constituída por uma subunidade catalítica conservada (PP1c) que está associada a subunidades não-catalíticas que modulam sua localização subcelular, especificidade de substrato e atividade enzimática. Mais de 100 proteínas que interagem com a PP1c já foram identificadas em distintos organismos eucarióticos. Proteínas que interagem com a PP1c são, portanto, a chave para compreender os diferentes papéis biológicos da PP1. A subunidade catalítica da PP1 da ameba social Dictyostelium discoideum (DdPP1c) é codificada por um gene em cópia única o qual é expresso ao longo de todo o ciclo de vida desse organismo. Algumas proteínas que interagem e possivelmente modulam a atividade da PP1 de D. discoideum já foram identificadas, utilizando-se tanto buscas por similaridades na sequência genômica deste microorganismo como ensaios utilizando o sistema de duplo-híbrido em leveduras, utilizando-se a PP1c como isca. Com esta última abordagem, foram selecionados mais de 25 clones distintos de cDNA que codificam proteínas que potencialmente interagem com a DdPP1c, após varreduras de bibliotecas de cDNA de diferentes estágios de desenvolvimento de D. discoideum. Neste trabalho, nós confirmamos que o produto protéico de 11 destes clones interagem com a isca DdPP1c com base em novos ensaios de duplo-híbrido. Os demais clones codificam proteínas que não interagem com DdPP1c ou promovem auto-ativação do gene repórter. Selecionamos para estudos adicionais um clone do gene DDB_G0269300 cujo produto protéico predito de 423 de aminoácidos não tem função ainda conhecida. A sequência codificadora completa de DDB_G0269300 foi clonada para realização de novos ensaios de duplo-híbrido em leveduras, os quais confirmaram a especificidade de sua interação com DdPP1c. A proteína recombinante rDDB_G0269300 foi obtida com sucesso em bactérias, possibilitando a obtenção de anticorpos policlonais em camundongos. O anti-soro anti-rDDB_G0269300 é aparentemente específico no reconhecimento da proteína correspondente em extratos celulares de D. discoideum coletados em 12h e 16 da fase de desenvolvimento. Estes resultados coincidem com dados obtidos através de RT-qPCR que mostram aumento nos níveis dos transcritos de DDB_G0269300 entre 8h e 12h da fase de desenvolvimento, o que é indicativo da sua importância desta proteína durante esta fase do ciclo de vida de Dictyostelium como uma potencial parceira molecular da DdPP1c / Protein phosphatase type-1 (PP1) is a major protein serine/threonine phosphatase (PSTP) which plays as diverse as important physiological roles, such as regulation of carbohydrate metabolism and of cell cycle. The PP1 holoenzyme comprises a conserved catalytic subunit (PP1c) associated with non-catalytic subunits that modulate its subcellular localization, substrate specificity and enzymatic activity. More than 100 proteins that interact with PP1c have been identified in different eukaryotic organisms. Therefore proteins that interact with PP1c are key to the understanding of PP1 different biological roles. The catalytic subunit of PP1 the social amoeba Dictyostelium discoideum (DdPP1c) is encoded by a single copy gene which is expressed throughout the life cycle of this organism. Some proteins that interact with and possibly modulate the activity of D. discoideum PP1 have been identified, using both similarity searches in the genome sequence of this microorganism as yeast two-hybrid screenings using PP1c as bait. With the latter approach, we have selected more than 25 distinct cDNA clones encoding proteins that potentially interact with DdPP1c after screening D. discoideum cDNA libraries from different developmental stages. In this study, we confirmed that the protein product from 11 of these clones interact with the bait DdPP1c based on two-hybrid assays. The other clones encode proteins that either does not interact or promote self-activation of the reporter gene. The clone related to DDB_G0269300 gene that encodes a predicted protein of 423 amino acids with unknown function was selected for further studies. DDB_G0269300 full-length coding sequence was cloned and new yeast two-hybrid assays were performed confirming the specificity of the interaction with DdPP1c. The recombinant protein rDDB_G0269300 was successfully obtained in bacteria and further used for polyclonal antibodies production in mice. The antiserum anti-rDDB_G0269300 is apparently specific for recognition of the corresponding protein in D. discoideum cell extracts collected after 12h and 16h of development. These results agree with RT-qPCR data showing that the levels of DDB_G0269300 transcripts are increased between 8 h and 12 h during the development, which is indicative of its importance during this phase in Dictyostelium life cycle as a DdPP1c potential molecular partner.

Objetivos: Determinar la asociación entre los niveles de PCR y el recuento celular del líquido peritoneal y el pronóstico de la respuesta al tratamiento de la peritonitis asociada a diálisis peritoneal ambulatoria crónica (DIPAC). Método: Se analizaron retrospectivamente todos los pacientes que presentaron un episodio de peritonitis asociado a DIPAC, en el Hospital Nacional Edgardo Rebagliati Martins, Lima, Perú, durante el periodo Junio 2008 - Mayo 2009. Los episodios de peritonitis fúngica o por Mycobacterium sp. fueron excluidos del análisis. Se examinaron diversos parámetros demográficos, clínicos y de laboratorio que podrían predecir el pronóstico de un episodio de peritonitis. La proteína C reactiva (PCR) fue medida en el momento de diagnóstico de la peritonitis mientras que el recuento celular del líquido peritoneal (RCLP) fue obtenido en el día 1 y 3 de ocurrida la peritonitis. La respuesta al tratamiento de peritonitis asociada a DIPAC fue determinada como éxito o falla. La falla al tratamiento incluyó infección persistente, retiro del catéter de diálisis peritoneal con transferencia a hemodiálisis o muerte del paciente. Resultados: La muestra estuvo constituida por un total de 39 episodios de peritonitis bacteriana, encontrándose una tasa de 0.49 episodios de peritonitis por paciente por año. Se logró aislar el germen en 19 (48.7%) de las muestras de líquido peritoneal tomadas, siendo negativo en el 20 (51.3%). En los casos en que se logró aislar el germen, 9 (47.4%) episodios fueron causados por gérmenes grampositivos mientras que 10 (52.6%) fueron debido a gérmenes gramnegativos. La correlación de PCR y el recuento celular del líquido peritoneal al 1er día fue de r = 0,18 (p es menor a 0,05) y la correlación de PCR y el recuento celular al 3er día fue de r es igual a 0,62 (p es menor que 0,05). Mediante las curvas de ROC, se determinó que el mejor rendimiento, área bajo la curva, es con un PCR mayor a 10 mg/dl que con PCR mayor a 5 [0.82 (95% IC 0.68 a 0.96) y 0.67 (95% IC 0.50 a 0.85), respectivamente (P es menor a 0,05)]. Con una PCR con un punto de corte mayor a 10 mg/dl, la sensibilidad fue 74% y la especificidad fue 90%, VPP 87,5% y VPN 78,2 % para predecir la falla del tratamiento. Mediante las curvas de ROC, se determinó que el recuento celular al 3er día mayor a 1000 tiene mejor rendimiento, área bajo la curva, que al 1er día [0.94 (95% IC 0.86 a 0.99) y 0.76 (95% IC 0.60 a 0.93), respectivamente (P es menor a 0,05)]. Para un recuento celular mayor o igual a 1000/mm3 en el 3er día, la sensibilidad fue 84% y la especificidad fue 100%, VPP 100 % y VPN 90 % para predecir la falla del tratamiento. En el análisis univariado se encontró que tanto sexo masculino (OR 0,08; 95% IC 0,017 a 0,383; P=0,002), PCR (OR 0,752; 95% IC 0,624 a 0,907; P=0,003) y recuento celular al 3er día (OR 0,997; 95% IC 0,995 a 0,999; P=0,004) tuvieron un efecto significativo en el pronóstico del fracaso del tratamiento de la peritonitis; sin embargo al interaccionar las variables en el análisis multivariado sólo el recuento celular del día 3 mayor 1000/mm3 resultó significativa (OR 0.997; 95% IC 0.994 a 0.999; P=0.041). Conclusiones: El recuento celular del líquido peritoneal al 3er día resultó ser un factor predictivo independiente para la respuesta al tratamiento de la peritonitis asociada a DIPAC. Altos niveles de PCR también podrían predecir el pronóstico de un episodio de peritonitis. La medición de estos marcadores durante el curso de la peritonitis puede facilitar la identificación temprana de individuos con mayor riesgo de complicaciones.

Introducción: Giardia intestinalis es el protozoario intestinal más común a nivel mundial y su diagnóstico parasitológico está basado en el examen microscópico, sin embargo, debido al carácter intermitente de la excreción del parásito en las heces el método puede revelar baja sensibilidad, esto ha motivado la búsqueda de nuevas alternativas de diagnóstico entre las que destacan aquellas que tiene como base la biología molecular. Objetivos: Evaluar 3 primeros para la detección molecular de G. intestinalis en muestras fecales. Diseño: Se realizó un estudio observacional, de corte transversal. Lugar: Instituto de Medicina Tropical “Daniel A. Carrión”, UNMSM. Procedimiento: Se evaluaron primers que amplifican las regiones de la beta-giardina y de la proteína de choque térmico 70 del ADN de G. intestinalis. Principales medidas de resultados: Se recolectó muestras fecales positivas y negativas a G. intestinales y a otros parásitos, las cuales fueron concentradas por centrifugación, luego almacenadas a -20°C y posteriormente analizadas mediante la técnica de PCR convencional. Resultados: Se estableció una temperatura de hibridación de 60°C para los primers de la beta-giardina y la proteína de choque térmico 70. La mezcla de reacción se estandarizó con las siguientes condiciones: Cl 2 Mg 1.5 mM, primers 0.6 µM, dNTPmix 0.3 mM y taq polimerasa 0.75 U. El límite de detección de los primeros fue de 87.3 ng/µL para beta-giardina, 359.5 ng/µL para GHSP70-1 y 24.1 ng/µL para GHSP70-2. Conclusiones: Se estableció una temperatura de hibridación y concentración de cloruro de magnesio común para los primers. Se observó un mejor límite de detección para el primer GHSP70-1 identificándose bandas en 7 diluciones con una sensibilidad y especificidad mayor que para el primer de la beta-giardina. / Introducción: Giardia intestinalis is the most common intestinal protozoan worldwide and its parasitologic diagnosis is based in microscopic examination; nonetheless, due to the intermittent parasites excretion in the feces, this method could reveal low sensitivity, this has motivated the search of new diagnostic alternatives such as those based on molecular biology. Goals: To assess 3 primers for the molecular detection of G. intestinalis in stool samples. Design: an observational, cross-sectional study was implemented. Settings: Tropical Medicine Institute “Daniel A. Carrión”, UNMSM. Procedures: We assessed primer that amplifies beta-giardin and heat-shock protein 70 of the G. intestinalis. Main measures of: Positives and negatives stool samples for G. intestinalis and for other parasites were collected and then concentrated by centrifugation and stored at -20°C for further analysis using conventional PCR. Results: A 60°C hybridization temperature was established for the primers of beta-giardin and the heat-shock protein 70. The master mix was standardized with the following conditions: 1.5mM Cl2Mg, 0.6 uM primers, 0.3mM dNTPmix and 0.75U Taq polimerasa. Limit detections were 87.3 ng/µL for beta-giardin, 359.5 ng/µL for GHSP70-1 and 24.1 ng/µL for GHSP70-2. Conclusions: We established a common hibridization temperature and a magnesium chloride common for the primers. A better detection limit was established for the primer GHSP70-1, identifying bands in seven dilutions with sensitivity and specificity higher for the beta-giardine primer. keywords: Giardia intestinalis, PCR, beta-giardina, heat-shock protein 70.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / En este ensayo se evaluaron los efectos de la suplementación de las dietas de pre-inicio de pollos broiler con hidrolizados proteicos de pescado sobre indicadores productivos y de canal. Para ello se seleccionaron 690 pollitos broiler machos que fueron distribuídos aleatoriamente en 30 corrales de piso. El experimento tuvo una duración de 42 días en donde la etapa de pre-inicio comprendió los primeros 10 días, en ella se asignaron 5 tratamientos con 6 repeticiones cada uno, de los cuales dos recibieron dietas controles, una sin ningún suplemento proteico denominada maíz-soya y otra suplementada con harina de pescado incorporada en un 6%; otras dos suplementadas con un hidrolizado de pescado (BIOCP®) en un 3,5% y 7% respectivamente; y otra suplementada con un segundo hidrolizado de pescado (BIOCP PLUS®) incorporado en un 3,5%. Peso corporal, consumo de alimento, eficiencia de conversión de alimento y mortalidad fueron los indicadores productivos medidos y el peso de la canal, peso de la pechuga y el peso del depósito graso abdominal más sus respectivos rendimientos en relación al peso vivo o al peso de la canal, fueron los indicadores de calidad de canal considerados Se encontraron diferencias estadísticamente significativas (p<0,05) en el consumo de alimento en la etapa de pre-inicio, mostrando un mayor consumo los pollos tratados con BIOCP® al 7% respecto a los pollos suplementados con BIOCP® al 3,5%. La eficiencia de conversión de alimento también mostró diferencias significativas (p<0,05), siendo menor la de los pollitos suplementados con BIOCP® al 7% respecto al tratamiento control maíz-soya y a los suplementados con BIOCP® al 3,5% y con BIOCP PLUS® al 3,5%. A los 10 días de edad los pollos alimentados con BIOCP® al 3,5% y con BIOCP PLUS® al 3,5% lograron un porcentaje de pechuga superior estadísticamente (p<0,05) respecto al grupo tratado con BIOCP® al 7%. Al finalizar el ciclo productivo desaparecieron las diferencias estadísticas (p>0,05) obtenidas a los 10 días de estudio

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Peso vivo, consumo de alimento, ganancia de peso, conversión alimenticia y mortalidad fueron determinados en 630 pollos broiler alimentados durante etapa de preinicio con hidrolizados proteicos de pescado (“Activium®”) en distintos niveles de incorporación. El experimento consta de 6 tratamientos distintos, dos dietas controles (dieta maíz-soya y dieta con “BIOCP®”) y cuatro dietas con (“Activium®”): Activium A 1,5%, Activium A 3%, Activium A 5% y Activium B 1,4%. Las mediciones fueron realizadas a los 1, 14, 22, 36 y 42 días de edad. Además, al final del ciclo productivo se calculó Índice de Eficiencia Productiva (IEP), Costo Alimentario de la Ganancia de Peso (CAGP) y Margen Bruto (MB). Al día 1 no se encontraron diferencias significativas (p>0,05) ya que se realizó una estandarización de pesos de los pollos antes de iniciar el ensayo. Al día 14, se encontró que el tratamiento Activium A 3% y Activium B 1,4% no presentaron diferencias estadísticas entre sí (p>0,05) pero ambos obtuvieron un peso vivo estadísticamente mayor (p≤0,05) que el control maíz-soya. Al día 22, el tratamiento Activium A 3% permanece mostrando un mayor peso vivo que el control maíz-soya. Además, logra un peso significativamente mayor (p≤0,05) que el tratamiento Activium A 5%. Hacia el día 37, el ANDEVA indica diferencias significativas (p≤0,05) sin embargo la prueba de Tukey no fue capaz de detectarlas. En el día 42, el consumo acumulado del período 1-42 días indica que los tratamientos Activium A 3% y Activium B 1,4% presentaron un consumo significativamente mayor (p≤0,05) al control maíz-soya. El IEP resultó adecuado para todos los tratamientos, no encontrándose diferencias estadísticas entre ellos (p≤0,05). En cuanto a la magnitud de los valores, el tratamiento Activium A 5% presentó el IEP más alto. El IEP más bajo lo obtuvo el tratamiento Activium A 1,5%. En relación a los indicadores económicos, el análisis estadístico del MB y del CAGP no arrojó diferencias significativas entre los distintos tratamientos (p≤0,05). Si se comparan numéricamente los resultados, estos muestran que el control maíz-soya presentó el mejor MB de los tratamientos y el tratamiento Activium A 3% presentó el MB más bajo. El CAGP más bajo fue el del la dieta control maíz soya, mientras que el más alto fue el del tratamiento Activium A 5% / INNOVA BIO-BIO (CORFO empresa) Nº 06-IE-S1-8 2007

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / En el presente estudio se evaluó el efecto de la inclusión de dos hidrolizados proteicos de pescado, solos y con distintas fuentes de proteína vegetal en la dieta de preinicio de pollos broiler machos sobre los rendimientos productivos y económicos. Para ello, se utilizaron 630 pollos broiler machos (Ross 308) de 1 día de edad a los que se les ofreció sólo para el período de preinicio (1-14 días) dos dietas con hidrolizados proteicos de pescado (BioCp® y BioSH®) al 3,4% de inclusión, dos dietas con BioSH® al 1,6% de inclusión más dos fuentes de proteína vegetal (Gluten de Maíz A y B al 2% de inclusión). Además, se utilizó una dieta en base Maíz-Soya como dieta control. El resto de las dietas fue la misma para los distintos tratamientos según período productivo y se ajustaron a los requerimientos de la línea genética y del NRC (1994). Al final del ciclo productivo se encontraron diferencias significativas (p<0,05) para el peso vivo promedio al día 35 y 43. No hubo diferencias estadísticamente significativas (p>0,05) en el consumo promedio de alimento y conversión alimenticia para los distintos períodos parciales y acumulativos del estudio. La mortalidad tanto de los distintos períodos como para la totalidad del estudio se consideró dentro de los rangos esperables para los estándares de la línea genética utilizada y de un manejo productivo comercial. Tanto el Índice de Eficiencia Europeo, como los índices económicos: Costo Alimentario de la Ganancia de Peso y el Margen Bruto, calculados al final del estudio fueron numéricamente mejores para el tratamiento BioSH 1,6% + 2% Gluten Maíz B en comparación con los demás tratamientos y el tratamiento control Maíz-Soya. Palabras Clave: Pollos broiler, hidrolizados proteicos de pescado, proteína vegetal, dieta de preinicio, rendimientos productivos y económicos / Proyecto INNOVA (CORFO empresa) Nº 204-4285 (2006)