Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente estudio se evaluó el efecto de inclusión en la dieta de Preinicio (1-15 días de edad) de pollos broiler con distintos hidrolizados proteicos de pescado (Activium®), sobre características de la canal y crecimiento de músculos seleccionados de pechuga y muslos. Este estudio fue llevado a cabo durante 35 días con 630 pollos broiler machos divididos aleatoriamente en 30 corrales de piso con 21 pollos cada uno. Se formuló y usó una dieta control en base a Maíz-Soya (M-S).Todas las dietas experimentales fueron formuladas isoproteicas e isoenergéticas, sólo se diferenció en la incorporación de distintos hidrolizados proteicos de pescado (BioCP®, EP-119, EP-120, EP-125 y EP-129). Los pollos fueron alimentados con las dietas experimentales desde la eclosión hasta los 15 días de edad. Luego, todos fueron alimentados con las mismas dietas según período (Inicio, Intermedio y Final) y requerimientos nutricionales de la línea genética utilizada (Ross 308). Los pollos fueron mantenidos con un régimen de alimentación ad-libitum y consumo de agua a discreción. Tanto a los 15 como a los 35 días se muestrearon y sacrificaron 15 aves por tratamiento, procediéndose luego a remover el trutro largo derecho y la pechuga de cada ave y registrándose su peso. Posteriormente, se removieron los músculos pectoralis, gastrocnemius y fibularis longus, de los cuales también se registró el peso. Estos datos fueron utilizados para calcular los distintos rendimientos. Para el análisis estadístico se llevó a cabo una ANDEVA y, ante diferencias significativas (p ≤ 0,05), una prueba de Tukey. Como resultado, todos los grupos con hidrolizados incluidos, se diferenciaron del control Maíz-Soya, con valores superiores. Cuando se comparan los tratamientos con los distintos hidrolizados para la variable peso de sacrificio, se aprecia la superioridad del EP-120 y EP-129, que a pesar de no diferenciarse del EP-119 y del control BioCP, muestran valores de peso vivo algo mayores estadísticamente (p<0,05) del tratamiento control. Sin embargo, cuando se expresan los pesos de pechuga y trutro como porcentaje del peso vivo, desaparecen todas las diferencias estadísticas entre los diferentes tratamientos, haciendo difícil señalar alguna ventaja de los hidrolizados probados sobre rendimientos porcentuales de las piezas anatómicas de mayor valor comercial, en relación al peso de su correspondiente canal. El impacto positivo del empleo de los hidrolizados proteicos fue entonces sobre el crecimiento total del ave en peso vivo. A los 35 días no se alcanzaron diferencias estadísticas entre tratamientos para ninguno de los músculos en estudio. Así, nuevamente se aprecia que el efecto favorable de los hidrolizados proteicos apreciados a los 15 días del ensayo, desaparece con la edad. Por lo tanto, se concluye que más estudios son necesarios con respecto al uso de hidrolizados proteicos de pescado, como ingrediente en las dietas para pollos broiler / Financiamiento: Proyecto Innova Bio Bio No. 06-IE-SI-86 (2007)

Memoria de título para optar al Título Profesional de Bioquímica / La pérdida de homeostasis proteica (proteostasis) es una de las características principales de la enfermedad de Alzheimer (EA), asociada con la generación de estrés del retículo endoplásmico (RE) y la agregación anormal de proteínas. El estrés de RE activa una vía de señalización conocida como la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), la cual disminuye el estrés de RE mediante programas adaptativos, que restauran la proteostasis, o pro-apoptóticos, que eliminan las células dañadas permanentemente. IRE1α es un sensor de estrés de RE que media estos programas bajo condiciones de estrés de RE activando a XBP1, un factor de transcripción descrito como relevante en la patología de la EA. Para definir su importancia en la EA, investigamos el impacto de la expresión de XBP1s en un modelo murino transgénico de la EA conocido como 5xFAD, evaluando las principales características de la enfermedad: el deterioro cognitivo y la agregación proteica de depósitos de péptido β-amiloide (βA). Observamos que la sobreexpresión de XBP1 en el cerebro reduce el deterioro cognitivo y la agregación proteica de βA. Por otro lado, al entregar localmente XBP1s en el cerebro a través de virus adeno-asociados (AAVs), observamos también una mejora cognitiva pero no una reducción en la carga de βA, sugiriendo que la expresión ectópica de este factor tiene efectos neuroprotectores a través de mecanismos independientes de la UPR. Nuestros resultados sugieren un rol importante de XBP1s en la patogénesis de la EA, ofreciendo un posible nuevo blanco terapéutico para la intervención de la enfermedad / The loss of protein homeostasis (proteostasis) is a salient feature of Alzheimer´s disease (AD), associated with the generation of endoplasmic reticulum (ER) stress and the abnormal protein aggregation. ER stress activates a signaling pathway known as the unfolded protein response (UPR), which alleviates ER stress through adaptive programs, that restore proteostasis, or pro-apoptotic programs, which eliminate terminally damaged cells. IRE1α is an ER stress sensor mediating both programs under ER stress conditions activating XBP1, a transcription factor described as relevant in the AD’s pathology. To define its importance in AD, we investigated the impact of XBP1 expression in a transgenic mouse model of AD known as 5xFAD, evaluating the salient features of the disease: the cognitive impairment and the protein aggregation of amyloid-β (Aβ) peptide deposits. We observed that the overexpression of XBP1s in the brain reduces the cognitive impairment and the Aβ protein aggregation. The local delivery of XBP1s in the brain through adeno-associated viruses (AAVs) also shows a cognitive improvement, but not a reduction in Aβ protein load, suggesting that the ectopic expression of this factor has neuroprotective effects through UPR independent mechanisms. Our results suggest an important role of XBP1 in the pathogenesis of AD, offering a possible novel therapeutic target for disease intervention

A leptospirose é uma zoonose de distribuição global causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. A doença possui um quadro de manifestações clínicas muito variadas em humanos, que pode apresentar febre, dores de cabeça e muscular, até um quadro clínico mais severo, conhecido como síndrome de Weil, caracterizado por hemorragias, icterícia, falência renal e hepática. Até o presente momento, os mecanismos de patogenicidade da leptospira não são totalmente claros e não existe uma vacina eficaz contra a doença. O sequenciamento de genomas de leptospiras patogênicas possibilitou a identificação de proteínas da membrana externa conservadas entre cepas patogênicas, que são os principais alvos de pesquisa para elucidar os mecanismos de patogenicidade e possivelmente o desenvolvimento de uma vacina. Nesse sentido, foram selecionados por bioinformática os genes LIC11711 e LIC12587 a partir do genoma sequenciado de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni, os quais codificam para duas preditas lipoproteínas hipotéticas de funções desconhecidas. Os genes foram amplificados por PCR a partir do DNA genômico da bactéria e clonados no vetor de expressão pAE. As proteínas recombinantes foram expressas em E. coli BL21 DE3 Star pLysS e purificadas por cromatografia de afinidade a metal. As proteínas recombinantes foram inoculadas em camundongos para avaliação da sua atividade imunogênica e obtenção de soros imunes. Ambas as proteínas recombinantes se mostraram reativas com anticorpos em soros de pacientes diagnosticados com a doença, apresentando uma sensibilidade maior em relação ao teste de aglutinação microscópica (MAT), e alta especificidade, diferenciando anticorpos presentes em soros de pacientes diagnosticados com outras doenças não relacionadas. Os resultados de ELISA de bactéria intacta, proteólise por proteinase K e imunofluorescência sugerem que ambas as proteínas estão localizadas na membrana externa bactéria. Com base no ensaio de conservação por western blotting, as proteínas nativas estão presentes em diferentes cepas patogênicas de Leptospira, e ausentes na espécie saprófita L. biflexa. Em ensaios de adesão in vitro, as proteínas recombinantes interagiram com os componentes humanos laminina, e-caderina, plasminogênio, fibrinogênio, fibronectina plasmática, vitronectina, C7, C8 e C9 de forma dose-dependentes, porém com valores de afinidade baixos. Estes resultados sugerem que as proteínas codificadas pelos genes LIC11711 e LIC12587 são expressas durante a patogênese e podem desempenhar múltiplas funções a partir da interação com diferentes componentes, e deste modo auxiliam nas etapas de invasão, disseminação e evasão do sistema imune, auxiliando as leptospiras no processo de infecção. / Leptospirosis is a zoonosis of global distribution caused by pathogenic bacteria of the genus Leptospira. The disease has a wide range of clinical manifestations in humans, which can present with fever, headaches and muscular pain, to a more severe clinical condition, known as Weil\'s syndrome, characterized by hemorrhages, jaundice, renal and hepatic failure. So far, the pathogenicity mechanisms of leptospira are not entirely clear and there is no effective vaccine against a disease. Sequencing of pathogenic leptospires genomes has enabled the identification of conserved outer membrane proteins among pathogenic strains, which are the main research focus to understand the mechanism of pathogenicity and possibly identify a vaccine candidate. In this sense, the genes LIC11711 and LIC12587 were selected from the genome sequence of Leptospira interrogans serovar Copenhageni by bioinformatics, which encode two hypothetical predicted lipoproteins of unknown functions. The genes were amplified by PCR from the genomic DNA of the bacteria and cloned into pAE expression vector. The recombinant proteins were expressed in E. coli BL21 DE3 Star pLysS and purified by metal affinity chromatography. Recombinant proteins were inoculated in mice to evaluate their immunogenic activity and to obtain immune sera. Both recombinant proteins are reactive with antibodies in sera from patients diagnosed with a disease, presenting higher sensitivity than the microscopic agglutination test (MAT), high specificity, differentiating antibodies present in sera from patients diagnosed with other non-specific diseases related. The results of intact bacterial ELISA, proteinase K proteolysis and Immunofluorescence suggest that both proteins are located in the surface of the bacteria. Based on western blotting conservation assay, the coding sequences are present in different pathogenic strains of Leptospira, and absent in the nom-pathogenic L. biflexa. In in vitro adhesion assays, recombinant proteins showed interaction with the human components laminina, e-cadherin, plasminogen, fibrinogen, plasma fibronectina, vitronectin, C7, C8 and C9, in dose-dependent manner, but with low affinity values. These results suggest that the proteins encoded by the genes LIC11711 and LIC12587 are expressed during the infection and may perform multiple tasks and thus assist in the steps of invasion, dissemination and evasion of the immune system, helping leptospires during the establishment of the disease.

A leptospirose é uma zoonose amplamente disseminada, causada pelo gênero patogênico de Leptospira. Essa doença apresenta grande interesse humano e veterinário, devido aos danos econômicos gerados. Em áreas urbanas, os roedores desempenham o papel de principais reservatórios da doença, pois albergam as leptospiras nos túbulos renais proximais e as excretam vivas na urina. Os humanos podem ser infectados de forma direta ou indireta, através de solo ou água contaminados. Após infecção pode-se apresentar sintomas leves ou mais severos como icterícia e hemorragia. O diagnóstico clínico da leptospirose é dificultoso devido aos sintomas iniciais serem comuns à de outras doenças. As vacinas existentes são baseadas em bactérias inativadas, não conferem proteção duradoura, além de serem específicas para os sorovares presentes na preparação. Atualmente, já foram identificados mais de 250 sorovares diferentes da bactéria, sendo assim, a identificação de proteínas da membrana externa conservadas entre diferentes espécies e sorovares de Leptospira e que podem interagir com o hospedeiro são os principais alvos de pesquisa para o desenvolvimento de vacinas. Estas proteínas podem induzir uma resposta imune no hospedeiro e são importantes para elucidar os mecanismos de patogenicidade. Deste modo, diversos estudos têm buscado caracterizar e identificar as proteínas de superfície que sejam antigênicas e presentes nos diversos sorovares de Leptospira interrogans. O primeiro passo deste trabalho foi avaliar por programas de bioinformática a localização celular, a presença de sinal de exportação e/ou lipidação, presença de domínios conservados e similaridade com outras sequências. Inicialmente, os genes LIC10562 e LIC13259 foram amplificados por PCR utilizando o DNA da L. interrogans. sorovar Copenhageni e os fragmentos de DNA gerados foram clonados no vetor pGEM T-Easy e subclonados no vetor de expressão pAE e expressas em cepas de Escherichia coli . As proteínas recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade ao metal. A proteína recombinante codificada pelo gene LIC10562 apresentou dificuldades durante a purificação. Por esse motivo, os estudos com esse gene foram interrompidos. Por outro lado, a purificação da LIC13259 foi obtida com sucesso. Desse modo, a presença de estrutura secundária da rLIC13259 foi avaliada por dicroísmo circular e sua atividade imunogênica foi analisada após imunização em Camundongos Balb/c. Ensaios de localização celular demonstraram a exposição da proteína na superfície das bactérias, o que corrobora com as análises de bioinformática. Além disso, rLIC13259 foi reconhecida por soro de indivíduos infectados, sugerindo sua expressão durante a infecção. Ensaios de interação com componentes do hospedeiro mostraram que a proteína rLIC13259 foi capaz de se ligar a laminina, plasminogênio, vitronectina, C7, C8 e C9 de maneira dosedependente. Além disso, rLIC13259 foi capaz de recrutar estes componentes direto do soro humano, revelando a importância desta interação. A ligação de rLIC13259 com PLG foi capaz de gerar plasmina, sugerindo que esta proteína pode contribuir nos processos de invasão da bactéria no hospedeiro. A interação da rLIC13259 com os componentes do sistema complemento parece ocorrer via os domínios de heparina. Além disso, o envolvimento da proteína recombinante com C9 foi capaz de inibir a polimerização de C9, consequentemente, inibindo a formação do complexo de ataque à membrana (MAC). Em conjunto, nossos dados sugerem a participação da proteína LIC13259 nos mecanismos de invasão e evasão do sistema imune do hospedeiro. / Leptospirosis is a widely disseminated zoonosis, caused by the pathogenic genus Leptospira. This disease presents great human and veterinary interest due to economic. In urban areas, rodents are the major reservoir of the disease. The leptospires colonize the proximal renal tubules and shedding them live in urine. Humans can be infected directly or indirectly through contaminated soil or water. After the infection, mild or more severe symptoms such as jaundice and bleeding may occur. The clinical diagnosis of leptospirosis is difficult because the initial symptoms are common in other diseases. Existing vaccines are based on inactivated bacteria, do not confer lasting protection, and are serovar specific. Currently, more than 250 different serovars of the bacterium have been identified, therefore, the identification of outer membrane proteins conserved between different species and serovars of Leptospiraand that may interact with the host are the main research targets for the vaccine development. These proteins can serve as targets for the immune system of the host. Thus, several studies have sought to characterize and identify as surface proteins that are antigenic and present in the various serovars of Leptospira interrogans. The first step of this work was to evaluate the cellular localization, presence of export signal and / or lipidation, presence of conserved domains and similarity with other sequences through the bioinformatics programs. Initially, LIC10562 and LIC13259 genes were amplified by PCR using the L. interrogans serovar Copenhageni DNA. The generated DNA fragments were cloned into the pGEM T-Easy vector and subcloned into the pAE expression vector and expressed in strains of Escherichia coli. Recombinant proteins were purified by metal affinity chromatography. The recombinant protein encoded by the LIC10562 gene presented difficulties during purification. For this reason, study with this gene has been discontinued. On the other hand, the purification of LIC13259 was successfully achieved. The presence of secondary structure of rLIC13259 was assessed by circular dichroism and its immunogenic activity was analyzed after immunization in Balb / c mice. Cell localization assays have demonstrated the exposure of the protein to the surface of the bacteria, which corroborates with bioinformatics analyzes. In addition, rLIC13259 was recognized by sera from infected individuals, suggesting its expression during infection. Interaction with host components showed that the rLIC13259 protein was able to bind laminin, plasminogen, vitronectin, C7, C8 and C9 in a dose-dependent manner. In addition, rLIC13259 was able to recruit these components directly from human serum, revealing the importance of this interaction. The binding of rLIC13259 to PLG was able to generate plasmin, suggesting that this protein may contribute to the invasion processes of the bacterium in the host. The interaction of rLIC13259 with components of the complement system appears to occur via the heparin domains. In addition, the involvement of the recombinant protein with C9 was able to inhibit the polymerization of C9, consequently,inhibiting a formation of the membrane attack complex. Taken together, our data suggest the participation of the LIC13259 protein in the mechanisms of invasion and evasion of the host immune system.

Esta pesquisa teve como principais objetivos o desenvolvimento de um protocolo de regeneração de plantas de soja in vitro e a obtenção de tecidos transformados, utilizando-se o Agrobacterium tumefasciens como vetor de transformação. Inicialmente, os objetivos foram direcionados para obter um protocolo de regeneração in vitro para três genótipoes de soja. Utilizando-se nós-cotiledonares como explantes, inoculados em meio de cultura MS/2 suplementado com 2,5 &#956;M de BA + 30 g/l de sacarose + 0,7% (p/v) de ágar, obteve-se altas taxas de regeneração e múltipla brotação. Vencida a etapa da cultura in vitro, dois métodos de infecção foram avaliados, usando-se a linhagem GV2260 de Agrobacterium. Após ferir os explantes com bisturi, foram feitos dois cocultivos: em meio líquido por 16 h e em meio sólido por 48 h. Este procedimento interferiu drasticamente no processo de regeneração, sendo que apenas 8% dos explantes apresentaram brotos, a maioria, com vitrificação. No segundo método, os explantes foram infectados, na região onde ocorre a regeneração, com uma seringa contendo uma cultura líquida do Agrobacterium. Em seguida, procedeu-se o cocultivo em meio sólido por 48 h. Este ensaio mostrou 96% de regeneração com brotação abundante. Nos dois processos, foi observada a expressão transitória do gene da &#946;-glucuronidase (GUS), usado como reporter na construção do plasmídio. Fica demonstrado neste trabalho que a utilização do Agrobacterium como vetor de transformação de soja independe do método de infecção. Porém, a regeneração de brotos está condicionada à não exposição dos explantes ao cocultivo em meio líquido. / not available

O presente trabalho realizou uma investigação da composição total dos nutrientes e alguns contaminantes presentes em amostras de soja, transgênicas e convencionais, provenientes de diferentes regiões do Brasil. Observou-se com esse estudo que, levando em conta somente o teor total dos elementos, nada pode ser afirmado em relação à modificação genética. Porém, com estes resultados, pôde ser feita uma separação das amostras por região, indicando a utilidade do método no rastreamento e certificação de origem das amostras. Na segunda etapa, extrações da fase protéica foram realizadas, utilizando-se tampão TRIS-HNO3 (pH 7,5), para estabilização dos complexos organo-metálicos. As espécies presentes nos extratos foram separadas e seu conteúdo mineral analisado, utilizando um sistema de acoplamento HPLC - ICP OES, valendo-se de dois tipos de fase estacionária (Fractogel® EMD BioSEC, Merck, e Superdex 200, Amershan Bisosciences), a fim de se verificar como tais elementos e espécies se comportam nos dois tipos de coluna e nos dois tipos de soja, convencional e transgênica. Pode-se observar diferença na distribuição dos elementos em relação à faixa de tamanho das proteínas, permitindo um reconhecimento entre a soja convencional e a geneticamente modificada. Contudo, testes de biodisponibilidade realizados in vitro mostraram que a modificação não altera a disponibilidade dos elementos, e nem o teor de ácido fítico, que é um dos principais antinutrientes presentes na soja. / The total composition of the nutrients and some contaminants present in transgenic and conventional soybean samples from different regions of Brazil was evaluated. Considering the total content of the elements, this study showed that nothing can be affirmed in relation to the genetic modification. However, these results indicate that the tracking and geographical origin of the samples can be verified. The extractions of the protein phase have been carried through, using TRIS-HNO3 buffer (pH 7,5), for stabilization of the organo-metallic complexes. The species present in extracts have been separated and its mineral content has been analyzed, using HPLC - ICP OES coupled system. Two kinds of stationary phases (Fractogel® EMD BioSEC, Merck, and Superdex 200, Amershan Biosciences) were used, in order to verify the elements and species behavior in the conventional and genetically modified soybean samples. Difference in the distribution of the elements in relation to the molecular size of proteins could be observed, allowing a recognition pattern between conventional and genetically modified soy. However, in vitro bioavailability experiments have shown that the modification does not affect the availability of the elements neither the phytic acid content, which is one of the main antinutrients presents in soybean.

A purificação da proteína VP3 do vírus da anemia das galinhas (CAV), expressada em um sistema de expressão procariótico como uma proteína de fusão com cauda de histidina, está demonstrada neste estudo. Extraiu-se o DNA da partícula do CAV, obtida de fígado de galinha infectado. Amplificou-se o gene da proteína VP3 a partir do DNA extraído pela reação da polimerase em cadeia (PCR), para subseqüentes clonagem e expressão protéica. O produto recombinante da expressão (pTrc-VP3) foi identificado por PCR e sequenciamento. A técnica de Western blotting determinou a expressão da proteína de fusão VP3 com cauda de histidina de peso molecular de aproximadamente 21 KDa. Através da eluição do gel, obteve-se a purificação da proteína VP3 expressada com homogeneidade julgada pelo gel de poliacrilamida e dodecil sulfato de sódio. A proteína VP3 purificada foi reconhecida por anticorpos do CAV no método Western blotting. Este resultado indica que a proteína VP3 recombinante expressada no sistema do vetor pTrcHis2 pode ser utilizada como antígeno para detectar anticorpos contra o CAV. / Purification of chicken anemia virus (CAV) VP3 protein, expressed in a prokaryotic expression system as histidine-tagged fusion protein is demonstrated in the present study. CAV particle was obtained from infected liver of chicken and DNA was extracted. The VP3 protein gene was amplified from the extracted DNA by polymerase chain reaction (PCR) and cloned. The recombinant expression construct (pTrc-VP3) was identified by PCR and sequencing analysis. Expression of VP3 protein with a molecular mass of approximately 21 KDa was confirmed by Western blotting analysis with CAV-specific antibodies. The in vitro expressed VP3 protein was purified to near homogeneity by elution from the gel, as judged by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis analysis. The purified VP3 protein was recognized by CAV antibodies in a Western blotting assay. This finding indicates that recombinant VP3 expressed in the pTrcHis2 vector system can be used as antigen to detect anti-CAV antibodies.

O objetivo desse estudo foi verificar o efeito da modulação do dano muscular e da resposta inflamatória, com o uso de fototerapia, no efeito da carga repetida e na ativação da via PI3K/Akt/mTOR/p70S6K após a realização de cada uma das duas sessões de treinamento de força para membros inferiores. Vinte participantes foram divididos em dois grupos experimentais. Um dos grupos recebeu a fototerapia antes da realização da primeira sessão experimental e o outro grupo recebeu um tratamento placebo. A fototerapia consistiu na irradiação sobre o vasto lateral, o vasto medial e o reto femoral durante 90s, oferecendo uma dose de energia total de 180 J. As sessões de treinamento foram compostas de duas séries a 85% de 1-RM e duas séries a 120% de 1-RM com intervalo de dois minutos entre elas, nos exercícios leg-press e extensão de joelhos. Os marcadores indiretos de dano muscular (dor, amplitude de movimento, torque isométrico máximo, circunferência da coxa e creatina quinase) foram avaliados antes, 2h, 24h, 48h e 96h após o término de cada sessão de treinamento. Uma semana antes e duas horas após o término de cada sessão de treinamento, foram coletadas amostras de tecido muscular através da biópsia percutânea para análise da infiltração de células inflamatórias e das proteínas de interesse. Os resultados dessas variáveis demonstraram que a primeira sessão de treinamento induziu a ocorrência do dano muscular e da inflamação, mas a fototerapia não promoveu nenhum dos efeitos esperados sobre o dano e a inflamação. A expressão total das proteínas de interesse não foi afetada pela realização da sessão de treinamento e nem pela fototerapia. Antes do início da segunda sessão de treinamento, a quantidade de mTOR total estava mais elevada do que antes da primeira sessão. A repetição da sessão de treinamento resultou em alterações dos marcadores de dano muscular, mas a recuperação foi mais rápida do comparada com a primeira sessão, o que vai ao encontro do efeito da carga repetida (ECR). A inflamação foi semelhante entre as duas sessões. Da mesma forma que na primeira sessão, o treinamento não afetou a expressão total das proteínas de interesse. A maior quantidade de mTOR total pode significar uma adaptação protetora (ECR), aumentando a atividade mitocondrial e reduzindo o estresse oxidativo diminuindo assim a ocorrência do dano secundário / The aim of this study was to investigate the effect of muscle damage and inflammatory response modulation through phototherapy, on the repeated bout effect and PI3K/Akt/mTOR/p70S6K1 pathway activation after each of two lower-limbs resistance exercise bouts. Twenty participants were divided into two experimental groups. One of the groups was treated with phototherapy and the other one received a placebo. Phototherapy consisted of irradiating vastus lateralis, vastus medialis and the recto femoris muscles for 90s, applying a total energy dose of 180 J. Two sets at 85% of 1-RM and two sets at 120% of 1-RM were performed in the leg-press and leg extension exercises with a two-minute interval. Indirect markers of muscle damage (muscle soreness, range of motion, maximal isometric torque, thigh girth and creatine kinase, CK) were assessed before, 2h, 24h, 48, and 96h post exercise. One weekbefore and 2h after each exercise bout, percutaneous muscle biopsies were performed to obtain muscle samples to measure inflammatory cells infiltration and some proteins of interest. The results demonstrated that the first exercise bout induced muscle damage and inflammation, but phototherapy did not have any of the expected effects on muscle damage and inflammation responses. Total protein content was not affected by the resistance exercise bout neither by the phototherapy. Before the second bout, total mTOR was elevated compared to the first bout. Repeating a resistance exercise bout affected indirect markers of muscle damage,but recovery was faster compared to the first bout, which is in accordance to the repeated bout effect theory. Also, inflammation was similar after the two bouts. Similar to the first bout, the second exercise bout did not affect total protein content. The higher total mTOR content might represent a protective response which is part of the RBE, by increasing mitochondrial activity, reducing oxidative stress and consequently secondary damage

Estudos prévios indicaram que a reidratação e ensilagem de milho moído aumentam a digestibilidade do amido de acordo com o avanço do tempo de ensilagem. Deste modo, a substituição do milho seco moído por silagem de milho reidratado (SMR) na dieta de vacas leiteiras pode aumentar a digestibilidade do amido e da proteína dos grãos, e consequentemente o desempenho de vacas leiteiras. Entretanto, ainda não foram realizados estudos que avaliaram a influência da granulometria, uso de inoculante bacteriano e vitreosidade de grãos de milho e sorgo sobre a composição, qualidade e digestibilidade da SMR ao longo do tempo de ensilagem. Além disso, são escassos os estudos sobre a inclusão de silagem de milho reidratado em dietas de vacas leiteiras com variação do teor de PB e de proteína degradável no rúmen (PDR). Para investigar a influência do uso de inoculante, da granulometria, do teor de vitreosidade e do tempo de ensilagem sobre as características de composição da silagem de milho e sorgo reidratado e da variação do teor e degradabilidade da proteína em dietas de vacas leiteiras que utilizam SMR foram desenvolvidos um conjunto de 5 experimentos. As variáveis resposta avaliadas foram o desempenho produtivo e balanço de nitrogênio de vacas leiteiras alimentadas com SMR (Exp 1 e 2) e a composição química, o perfil fermentativo e a digestibilidade do amido e da proteína da silagem ao longo do período de ensilagem (Exp 3, 4 e 5). Desta forma, este estudo foi organizado em 5 experimentos sequenciais, sendo dois (Exp. 1 e 2) com uso de vacas em lactação e os demais (Exp. 3, 4 e 5) com o uso de mini-silos experimentais. Os objetivos específicos dos Exp. 1 e 2 foram avaliar o efeito de: 1) teor de proteína bruta (130, 160 e 180 g PB/kg MS) em dietas de vacas leiteiras com substituição total do milho seco moído por SMR, 2) teor de proteína degradável no rúmen (PDR) por meio da variação do teor de ureia da dieta de vacas leiteiras (80, 100 e 120 g PDR/kg PB) com substituição total do milho seco moído por SMR. Para os Exp. 1 e 2, foram utilizadas 15 vacas Holandesas em estágio intermediário de lactação (&gt; 100 &lt; 200 dias), com peso vivo de aproximadamente 550 kg, distribuídas em delineamento quadrado latino com 5 quadrados contemporâneos 3 × 3 com 3 períodos de 21 dias e 3 tratamentos. As vacas foram alojadas em estábulo tipo free-stall, alimentadas duas vezes ao dia com controle individual de consumo de alimentos e regime de duas ordenhas/dia. Nos Exp. 1 e 2, as variáveis resposta avaliadas foram: consumo de nutrientes, digestibilidade aparente total, produção e composição do leite, parâmetros fermentativos do rúmen e balanço de nitrogênio. Os Exp. 3, 4 e 5 foram realizados em mini silos experimentais (500g) com silagem de milho e sorgo reidratados, cujos objetivos foram avaliar sobre as variáveis resposta, respectivamente, o efeito de: 3) do teor de vitreosidade (baixo, médio e alta) de 3 cultivares de milho, da inclusão de inoculante (Lactobacilus buchneri) ou não e do tempo de ensilagem (0, 15, 30, 60, 120, 240 e 400 dias); 4) granulometria (inteiro, 8, 2 e 1mm) de milho alta vitreosidade, do uso de inoculante (controle ou Lactobacilus buchneri) e do tempo de ensilagem (0, 15, 30, 60, 120, 240 e 400 dias); 5) granulometria (8, 2 e 1mm) de 1 cultivar de sorgo, do uso de inoculante (Controle; Lactobacilus buchneri; Lactobacilus plantarum e Pediococus acidilactici e Lactobacilus buchneri (50%) + Lactobacilus plantarum e Pediococus acidilactici (50%)) e do efeito do tempo de ensilagem (0, 15, 30, 120 e 360 dias). As variáveis resposta analisadas nos experimentos 3, 4 e 5 foram a composição química da silagem (MS, PB, proteína solúvel, amido, N-NH3, pH) e digestibilidade in situ em 7 horas do amido e da proteína da silagem. Para o experimento 5 foram ainda avaliados a produção e composição dos gases de fermentação. A silagem de grãos de milho e sorgo reidratados apresentaram características peculiares de fermentação e aumento de digestibilidade de acordo com o tamanho de partícula, vitreosidade, uso de inoculante ao longo do tempo de ensilagem. Os resultados observados no presente conjunto de experimentos sugerem que particularidades inerentes ao processamento prévio a ensilagem, inoculação ou aos híbridos utilizados para confecção da silagem podem influenciar na melhoria da conservação e digestibilidade da silagem. Além disso, o uso de silagem de milho reidratado, mesmo apresentando alta digestibilidade aparente total do amido, não possibilitou o uso de menor teor de PB ou maior teor de PDR que aqueles preditos pelo NRC 2001. / Previous studies have indicated that the inclusion of ground rehydrated corn silage (RCS) in dairy cows diet can increase the starch digestibility and the grain protein, increasing the dairy cows performance. However, no studies were carried out to evaluate the influence of grain particle size, bacterial inoculant use and grain vitreousness of corn and sorghum on the composition, quality and digestibility of RCS throughout the ensiling time. In addition, there are few studies about inclusion of RCS in dairy cows diet with some variation of CP content and rumen degradable protein (RDP). To investigate the influence of inoculant use, granulometry, vitreousness content and ensilage time on the chemical composition of ground rehydrated corn and sorghum silage, and the protein content variation and degradability in dairy cow diets, there were developed a set of 5 experiments. The variables evaluated were the productive performance and nitrogen balance of dairy cows fed RCS (Exp 1 and 2) and the chemical composition, fermentative profile and digestibility of the silage and starch during the ensiling time (Exp 3, 4 and 5). Thus, this study was organized in 5 sequential experiments, in which two of them (Exp. 1 and 2) used lactating cows and the others (Exp 3, 4 and 5) used experimental mini silos. The specific objectives of Exp. 1 and 2 were to evaluate the effect in dairy cows diet of: 1) CP content (130, 160 and 180 g CP/kg DM) with total substitution by RCS, 2) RDP content by urea content variation (80, 100 and 120 g RDP / kg PB) with total substitution of ground dry corn by RCS. For Exp. 1 and 2, there were used 15 Holstein cows in third lactation (&gt; 100 &lt;200 days), approximately 550 kg BW, distributed in a 3 × 3 latin square design with 5 contemporary squares, with 3 periods of 21 days and 3 treatments. The cows were alocated in a free-stall, fed twice a day with a feed intake individual control and twice milking per day. In Exp. 1 and 2, the variables evaluated were: nutrient intake, total apparent digestibility, milk yield and composition, rumen fermentative parameters and nitrogen balance. The experiments 3, 4 and 5 were carried out in experimental mini silos (500g) with rehydrated corn and sorghum silages, that aimed to evaluate the effect of: 3) the vitreousness content (low, medium and high) of corn cultivars, the inclusion of inoculant (Lactobacilus buchneri) or not and the ensilage time (0, 15, 30, 60, 120, 240 and 400 days); 4) granulometry (whole, 8, 2 and 1mm) of high vitreousness corn, the inclusion or not of inoculant (Lactobacilus buchneri) and the ensilage time (0, 15, 30, 60, 120, 240 and 400 days); 5) granulometry (8, 2 and 1 mm), bacterial inoculant (Lactobacillus buchneri, Lactobacillus plantarum and Pediococus acidilactici and Lactobacillus buchneri (50%) + Lactobacilus plantarum and Pediococus acidilactici (50%)) and the ensiling time (0, 15, 30, 120 and 360 days) of rehydrated sorghum grain. The variables analyzed in experiments 3, 4 and 5 were the chemical composition of silage (DM, CP, soluble protein, starch, N-NH3 and pH) and 7-hour in situ digestibility of the starch and silage protein. For the experiment 5, the production and composition of the rumen fermentation gases were also evaluated. The rehydrated corn and sorghum silages has particular characteristics of fermentation and increase the digestibility according to the particle size, vitreousness and use of inoculant throughout the ensiling time. The results observed in the present set of experiments suggest that the particularities associated with the previous ensiling process, inoculation or the hybrids used to make the silage may influence the conservation and the digestibility. In addition, the use of rehydrated corn silage, even with high starch apparent total digestibility, did not allow the use of lower CP content or higher RDP content than those predicted by NRC 2001.

Photorhabdus luminescens MN7 é uma enterobactéria associada a seus simbionte, nematoides da espécie Heterorhabditis baujardi LPP7, coletada em Monte Negro (RO), Brasil. As bactérias do gênero Algumas linhagens de P. luminescens possuem no seu citoplasma dois cristais proteicos compostos das CIPs (Crystal Inclusion Proteins A e B). Na fase estacionária de crescimento esses cristais são até 40% do total de proteínas na célula. Fizemos uma estratégia para clonar e expressar a ORF completa dos genes que codificam CipA, CipB e CipB2 de MN7. Os três genes foram amplificados e subclonados, mas apenas CipA foi expressa em Escherichia coli. A proteína recombinante foi purificada em coluna de Níquel N2+ e utilizada para inóculo em camundongos Balb/c. CipB foi clonada no plasmídeo de expressão, mas não foi expressa quando induzida. CipB2 foi amplificada, mas não foi clonada no plasmídeo de expressão. Também foi amplificado e subclonado o fragmento de miniSOG (mini Singlet Oxygen Generator), para ser ligado aos genes das CIPs que foram clonados para ensaios de fluorescência. / Photorhabdus luminescens MN7 is an enterobacterium associated with its symbiont, nematodes of the Heterorhabditis baujardi LPP7 species, collected in Monte Negro (RO), Brazil. Bacteria of the genus of P. luminescens lineages do not have their cytoplasm two protein crystals composed of CIPs (Crystal Inclusion Proteins A and B). In the stationary phase of growth of the crystals are up to 40% of the total proteins in the cell. We have devised a strategy to clone and express a complete ORF of the genes encoding MN7 CipA, CipB and CipB2. All three genes were amplified and subcloned, but only CipA was expressed in Escherichia coli. The recombinant protein was purified on a Nickel N2+ column and used for inoculum in Balb / c mice. CipB was cloned without expression plasmid, but was not expressed when induced. CipB2 was amplified, but was not cloned without expression plasmid. The miniSOG (mini Singel Oxygen Generator) fragment was also amplified and subcloned to be linked to the genes of the CIPs that were so cloned for fluorescence assays.