Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mirelle Bb.pdf: 2549462 bytes, checksum: 7f8ae645314de6fb536a8445eb69e03e (MD5) Previous issue date: 2010-01-29 / Paracoccidioides brasiliensis is a thermodimorphic fungus that causes paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis prevalent in South America. In humans, infection starts by inhalation of fungal propagules that reach the pulmonary epithelium. The cell wall presents an essential role in the pathobiology of P. brasiliensis, since it is involved in the morphogenetic changes associated with the life cycle of this pathogen. The biosynthesis and remodeling of the cell wall polysaccharide network is required for fungal growth and glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored proteins are involved in these processes. The enzymes of the glucan-elongating (GEL) family are GPI-anchored proteins which have beta-1,3-glucanosyltransferase activity and play important role in the cross-linking of cell wall components in fungi. The P. brasiliensis genome possess 3 genes that encode for beta-1,3-glucanosyltransferases (Gel1p, Gel2p e Gel3p). With the aim of searching for other possible functions for beta-1,3-glucanosyltransferase 3 (PbGel3p) in P. brasiliensis, the interactions between this protein and others proteins of the fungus were investigated through the Saccharomyces cerevisiae two-hybrid system and pull-down assay. The two-hybrid system enables the study of interactions in vivo and, through this approach, 8 proteins which interact with PbGel3p were identified. The interaction with phosphatidylinositol- 4-phosphate 5-kinase its3 and protein kinase Dsk1p suggest the participation of PbGel3p in the cell division cycle. The RNA helicase Dbp5p, whose interaction with PbGel3p was in vitro confirmed by coimunoprecipitation, and the 5'-3' exoribonuclease are involved in the mRNA metabolism suggesting a function for PbGel3p in this process. The interaction between PbGel3p and the lipase/serine esterase, which participates on the biosynthesis of the GPI-anchor, was also confirmed by coimunoprecipitation. PbGel3p also interacts with the transcription factor Ctf1Bp and the 3-oxoacyl reductase enzyme, which suggests its involvement in the lipid metabolism. The interaction with the leptomycin B resistance protein Pmd1p suggests a role for PbGel3p in the response to antifungal drugs. The in vitro pull-down assay resulted in the identification of P. brasiliensis 70 kDa heat shock protein. The interaction with this protein suggests that PbGel3p may act in the response to stress conditions, as in the temperature increase. On basis of these data, functional studies may be carried out in order to confirm the Gel3p multifunctionality in P. brasiliensis. / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo termodimórfico, causador da paracoccidioidomicose, uma micose sistêmica prevalente na América do Sul. A infecção em humanos inicia-se com a inalação de propágulos fúngicos que atingem o epitélio pulmonar. A parede celular desempenha um papel importante na patobiologia do P. brasiliensis, pois está envolvida nas mudanças morfogenéticas associadas com o ciclo de vida deste patógeno. A biossíntese e o remodelamento dos polissacarídeos da parede celular são essenciais para o crescimento do fungo e proteínas glicosilfosfatidilinositol (GPI)-ancoradas estão envolvidas nesses processos. As enzimas da família glicanosiltransferase alongando glicana (GEL) são proteínas GPI-ancoradas que possuem atividade de beta-1,3-glicanosiltransferase e desempenham um importante papel nas ligações cruzadas dos componentes da parede celular em fungos. O genoma de P. brasiliensis possui 3 genes codificantes para beta-1,3-glicanosiltransferases (Gel1p, Gel2p e Gel3p). Com o objetivo de se buscar outras possíveis funções da beta- 1,3-glicanosiltransferase 3 (PbGel3p) em P. brasiliensis, as interações entre essa proteína e outras proteínas do fungo foram investigadas através do sistema de duplohíbrido em Saccharomyces cerevisiae e do ensaio de pull-down. O sistema duplohíbrido permite o estudo das interações in vivo e, através dele, foram identificadas 8 proteínas que interagem com PbGel3p. A interação com a fosfatidilinositol-4-fosfato 5- quinase its3 e com a Dsk1 proteína quinase sugere a participação de PbGel3p no ciclo de divisão celular. A RNA helicase Dbp5p, cuja interação com PbGel3p foi confirmada in vitro através do ensaio de coimunoprecipitação, e a 5'-3' exoribonuclease estão envolvidas no metabolismo de RNAm, sugerindo uma função para PbGel3p nesse processo. A interação entre PbGel3p e a enzima serina esterase/lipase, que participa da via de biossíntese da âncora GPI, também foi confirmada por coimunoprecipitação. PbGel3p interage com o fator de transcrição Ctf1Bp e enzima 3-oxoacil redutase, fato que sugere seu envolvimento no metabolismo de lipídeos de P. brasiliensis. A interação com a proteína de resistência à leptomicina B Pmd1p sugere um papel para PbGel3p na resposta à agentes antifúngicos. O ensaio de pull-down in vitro resultou na identificação da proteína de choque térmico de 70 kDa de P. brasiliensis. A interação com essa proteína sugere que PbGel3p pode atuar na resposta à condições de estresse, como o aumento de temperatura. Com base nesses dados, estudos funcionais devem ser realizados para confirmar a multifuncionalidade de Gel3p em P. brasiliensis.

Submitted by Helena Bejio (helena.bejio@unioeste.br) on 2017-11-16T23:15:40Z No. of bitstreams: 2 Caroline H Werle 2017.pdf: 634463 bytes, checksum: 09e0fb6431be9fa9efd28079cc3d19a3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-16T23:15:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Caroline H Werle 2017.pdf: 634463 bytes, checksum: 09e0fb6431be9fa9efd28079cc3d19a3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate the best level of DDGSinclusion in the diet of lactating cows. For this purpose, five lactating Dutch cows distributed in a 5x5 Latin square were used, fed diets containing 0%, 8%, 16%, 24% and 32% inclusion levels of DDGS in DM. The parameters evaluated were dry matter and nutrient intake and digestibility, microbial synthesis, milk production and composition, blood parameters and economic viability. The data were submitted to analysis of variance and polynomial regression considering the inclusion levels of DDGS at the 5% probability level. Thus, a reduction in the dry matter intake, organic matter, crude protein and non­fibrous carbohydrates and an increase in the intake of ethereal extract, neutral detergent fiber and total digestible nutrients were observed. The animals' body condition score was not altered despite the reduction of body weight to inclusion levels. The digestibilities of crude protein, neutral detergent fiber, total carbohydrates and total digestible nutrients increased linearly with inclusion of the co­product in the diet. Dry matter digestibility was reduced according to the inclusion levels. Milk production was not influenced by DDGS inclusion levels. There was no change in allantoin excretions and in the production of microbial protein per kilogram of total digestible nutrients. Fasting plasma cholesterol levels at four hours after feeding presented a linear increasingeffect due to the fat content in the co­product composition. The fasting creatinine content was reduced with increasing inclusion levels. The economic return was higher for the levels with inclusion of the co­product in the diet. Thus, the use of DDGS in the feeding of lactating cows can be performed up to the 32%. / Objetivou­se avaliar o nível de inclusão do DDGS na dieta de vacas em lactação. Foram utilizadas cinco vacas holandês em lactação, distribuídas em um quadrado latino 5x5, alimentadas com dietas contendo níveis de 0%, 8%, 16%, 24% e 32% de inclusão de DDGS na MS. Os parâmetros avaliados foram ingestão e digestibilidade da matéria seca e dos nutrientes, síntese microbiana, produção e composição do leite, parâmetros sanguíneos e viabilidade econômica. Os dados foram submetidos à análise de variância e regressão polinomial considerando os níveis de inclusão de DDGS ao nível de 5% de probabilidade. Desta forma, observou­se redução na ingestão de matéria seca, matéria orgânica, proteína bruta e carboidratos não fibrosos e aumento na ingestão de extrato etéreo, fibra em detergente neutro e nutrientes digestíveis totais. O escore de condição corporal dos animais não foi alterado apesar de ocorrer a redução do peso corporal para os níveis de inclusão.Asdigestibilidades da proteína bruta, fibra em detergente neutro, carboidratos totais e dos nutrientes digestíveis totais aumentaram linearmente com a inclusão do coproduto na dieta. Já a digestibilidade da matéria seca reduziu conforme os níveis de inclusão. A produção de leite não foi influenciada pelos níveis de inclusão de DDGS. Não houve alteração para as excreções de alantoínae para a produção de proteína microbiana por quilograma de nutrientes digestíveis totais. Os teores de colesterol plasmático em jejum e quatro horas após a alimentação apresentaram efeito linear crescente devido ao teor de gordura na composição do coproduto. O teor de creatinina em jejum apresentou redução com o aumento dos níveis de inclusão. O retorno econômico foi maior para os níveis com inclusão do coproduto na dieta. Desse modo, a utilização de DDGS na alimentação de vacas em lactação pode ser realizada até o nível de 32% de inclusão.

Oito linhagens de soja [Glycine max (L.) Merril], sendo três introduzidas dos Estados Unidos da América (grupo exótico) e cinco selecionadas da coleção de soja do Departamento de Genética da ESALQ/USP (grupo adaptado) foram intercruzadas em esquema dialélico, com a finalidade de avaliar o potencial para utilização em programa de melhoramento genético visando o teor de proteína e a produção de grãos. Para a avaliação experimental dos parentais e progênies F2 utilizou-se um delineamento em blocos ao acaso com sete repetições e parcelas de uma fileira de 3 m de comprimento, com um espaçamento de 1 m entre fileiras e 10 cm entre plantas dentro de fileiras. Avaliaram-se os caracteres teor de proteína (TP), produção de grãos (PG), número de dias para início de florescimento (DF), altura da planta no florescimento (AF), número de dias para a maturidade (DM), altura da planta na maturidade (AM), altura de inserção da primeira vagem (AI), valor agronômico (VA) e acamamento (AC). A análise dialélica baseou-se no método 2 de GRIFFING (1956b), modelo misto B. Os resultados gerais obtidos indicaram: a) existência de diferenças estatísticas entre médias dentro de parentais e progênies F2para todos os caracteres, exceto para VA nos parentais ; b) os cruzamentos foram relativamente diferentes quanto a variância fenotípica para os diferentes caracteres, indicando que os parentais apresentam características complementares; c) a heterose apresentou ampla variação; entretanto, os maiores valores nem sempre estiveram associados as maiores médias e variâncias; d) os quadrados médios para capacidade geral de combinação (CGC) foram significativos para todos os caracteres e, para a maioria deles, quanto à capacidade especifica de combinação (CEC), com exceção de VA; e) a magnitude relativa da capacidade geral de combinação com base em BAKER (1978) foi superior a 85,4% para sete dos nove caracteres. Devido a isso, verificou-se que as médias da geração F2 podem ser preditas com base apenas na capacidade geral de combinação para a maioria dos caracteres, com exceção de TP; f) os efeitos da capacidade geral de combinação (g) apresentaram menor variação para DF, AF, DM, VA, AC, TP, e maior variação para AM, AI e PG; g) a avaliação da capacidade específica combinação inerente de aos parentais (s ) revelou, para a maioria dos caracteres, valores extremos ocorrendo no grupo de parentais exóticos, indicando a maior divergência genética dos mesmos comparada aos parentais adaptados; h) a variabilidade genética e o grau de complementação exibido pelos parentais, para a maioria dos caracteres demonstra que os mesmos são adequados para a formação de uma população de base genética ampla, visando a seleção de genótipos superiores quanto ao teor de proteína e produção de grãos simultaneamente / not available

Foi produzida a proteína recombinante do domínio extracelular da subunidade 2 do receptor do IFN-alfa em forma de proteína de fusão com a glutatione-S-transferase (GST-IFNAR2cEC) em E. coli, com o objetivo de avaliar seu efeito bloqueador sobre a ação do IFN-alfa. A GST-IFNAR2cEC de forma solúvel, com peso molecular 54 kDa, foi obtida quando a proteína recombinante foi expressa a 25 graus C por indução de IPTG e foi lisada por French Press. A avaliação do efeito bloqueador da GST-IFNAR2cEC foi feita utilizando-se 3 métodos: 1) Ensaio antiproliferativo com células Daudi, 2) ensaio antiviral com células Hep 2/c e vírus encefalomiocarditis, e 3) expressão gênica semi-quantitativa do STAT 1 (transdutor de sinal e ativador de transcrição) e da 2',5'-oligoadenilato sintetase (OAS) pela RT-PCR duplex nas células Daudi e Hep 2/c. A GST-IFNAR2cEC, mesmo a 420 nM, não inibiu as atividades antiproliferativa e antiviral de 24,5 pM e 49 pM de rIFN-alfa2 provavelmente devido à sua ineficiência na competição com o IFNAR da superfície celular durante o longo período de incubação nos ensaios realizados. A expressão gênica do STAT 1 não foi inibida pela GST-IFNAR2cEC nas células Daudi e Hep 2/c, porém inibiu-se a da 2’, 5’-OAS. Estes resultados sugerem que a expressão gênica do STAT 1 é independente da ligação do IFN-alfa com a IFNAR 2c, e que a da 2’, 5’-OAS é dependente dessa ligação nessas células

Ingeniera Civil en Biotecnología / En distintos estudios se ha determinado que mutaciones en la proteína transportadora DMT1, encargada de transportar hierro desde el lumen intestinal hacia los enterocitos, son causantes de distintos tipos de anemia, no obstante, poco se conoce sobre su estructura tridimensional y su mecanismo de transporte. Por esta razón, el objetivo del presente trabajo es obtener un modelo estructural de la isoforma 1A/IRE(+) de la proteína DMT1 humana y a partir de éste estudiar el posible comportamiento de la proteína inserta en membrana. La predicción de dominios transmembrana para la proteína de interés estableció la presencia de 12 dominios transmembrana, 6 loops extracelulares, 5 loops intracelulares y los extremos amino y carboxilo terminales al interior del citoplasma de los enterocitos, lo cual concuerda totalmente con lo expuesto en bibliografía. Se obtuvieron 100 modelos de la proteína mediante modelamiento comparativo, utilizando el cristal de la familia de la proteína, ScaDMT, como plantilla principal. El mejor modelo se obtuvo a través de un análisis energético y estructural. Este modelo obtuvo un z-score de -4.3, dentro de la densidad de puntajes obtenidos por estructuras cristalinas, un perfil energético por residuo similar al del cristal de ScaDMT, y un gráfico de Ramachandran con tan solo 2 residuos dentro de zonas no permitidas. Se realizaron cuatro dinámicas moleculares para estudiar el comportamiento del modelo en membrana, las cuales fueron analizadas para estudiar las características de la proteína. A partir del análisis de los modos normales, se observó un movimiento de apertura y cierre, el cual podría representar el movimiento principal de captura y liberación del ion de hierro. Por otro lado, se presentó una variación en el potencial electrostático en las regiones superior e inferior de la proteína, lo que podría estar relacionado al mecanismo de interacción de la proteína con hierro. A partir del análisis del comportamiento de las moléculas de agua en el sistema, se determinó que éstas ingresan a la proteína por la zona orientada hacia el citoplasma, posicionándose entre las hélices TM1 y TM6, donde se ubica el ion de hierro. Finalmente, en cuanto a la interacción de la proteína con hierro, se proponen los residuos Asp115, Asn118, Ala291 y Met294 como principales candidatos a interaccionar con él, y se observa un posible rol del agua en la estabilización de éste. De esta manera, los resultados y discusiones aquí expuestos representan los primeros avances para un mejor conocimiento de la estructura y características de la proteína DMT1 humana. Se requiere profundizar y extender estos análisis para poder establecer bases más sólidas respecto a la relación estructura-función y dilucidar el mecanismo de transporte asociado a la proteína. Esto resultaría de gran utilidad para comprender la causa de las enfermedades asociadas a mutaciones en DMT1 y posteriormente proponer tratamientos más efectivos para estas enfermedades.

Resumo não disponível

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-11T17:08:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 127415 bytes, checksum: b2501326a13c59c4a829ea3d57ee2cac (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-11T17:08:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 127415 bytes, checksum: b2501326a13c59c4a829ea3d57ee2cac (MD5) Previous issue date: 2003-04-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foram conduzidos dois experimentos em que se utilizou um total de 108 suínos para avaliar dietas com diferentes níveis de lisina e proteína bruta para suínos fêmeas e machos castrados, na fase de crescimento (30 a 60 kg) e terminação (60 a 105 kg). No experimento I, foram utilizados 108 leitões, sendo 54 fêmeas e 54 machos castrados, distribuídos em delineamento experimental de blocos ao acaso, com três tratamentos (0,85 e 15,5; 0,95 e 16,5 e 1,05 e 17,5% de lisina total e proteína bruta, respectivamente), seis repetições e três animais por unidade experimental. Não houve interação entre tratamento e sexo para nenhum dos parâmetros avaliados. Não se observou efeito dos tratamentos e do sexo sobre o ganho de peso e o consumo de ração, constatando-se efeito dos tratamentos sobre a conversão alimentar, taxa de deposição de proteína e taxa de deposição de gordura em que os animais que receberam dieta contendo 1,05 e 17,5% de lisina total e proteína bruta apresentaram os melhores resultados. Houve efeito do sexo para conversão alimentar, taxa de deposição de proteína e sobre a taxa de deposição de gordura, em que fêmeas apresentaram melhores resultados para tais variáveis quando comparados aos machos castrados. No experimento II, 72 leitões, sendo 36 fêmeas e 36 machos castrados, foram distribuídos em delineamento experimental de blocos ao acaso com três tratamentos (0,76 e 14,5; 0,84 e 15,5 e 0,92 e 16,5% de lisina total e proteína bruta, respectivamente), seis repetições e dois animais por unidade experimental. Não houve interação entre tratamento e sexo para nenhum dos parâmetros avaliados. Não se observou efeito dos tratamentos sobre o consumo de ração, comprimento de carcaça e da espessura de toucinho entre a última e a penúltima vértebra lombar (ETUL). Constatou-se efeito dos tratamentos em função dos níveis de lisina e proteína bruta sobre o ganho de peso, consumo de lisina, taxa de crescimento em músculo, rendimento de carcaça, rendimento de carne magra e rendimento de pernil, que aumentaram, entretanto, para conversão alimentar, conversão alimentar em músculo, espessura de toucinho medida a 6,5 cm da linha dorso-lombar (P 2 ) e rendimento de gordura, que reduziram. Efeito do sexo foi verificado para ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar, consumo de lisina, conversão alimentar em músculo, ETUL, P 2 e rendimento de gordura em que fêmeas apresentaram valores inferiores para tais variáveis quando comparadas aos machos castrados, entretanto, para a taxa de crescimento em músculo, área de olho de lombo, rendimento de carcaça e rendimento de carne magra, os resultados das fêmeas foram superiores aos machos castrados. Com base nos dados de desempenho e qualidade de carcaça pode-se concluir dentro do conceito de proteína ideal que para a fase de crescimento a dieta contendo 1,05% de lisina total e 17,5% de proteína bruta, para fêmeas e machos castrados, apresentou melhor conversão alimentar, maior taxa de deposição de proteína e menor deposição de gordura na carcaça de suínos dos 30 aos 60 kg. Enquanto, para a fase de terminação a dieta contendo 0,92% de lisina total e 16,5% de proteína bruta, para fêmeas e machos castrados, apresentou melhor conversão alimentar, rendimento de carcaça, rendimento de carne magra, rendimento de gordura, rendimento de pernil e espessura de toucinho (P 2 ) na carcaça de suínos dos 60 aos 105 kg. / Two experiments were conducted wit 108 swine to evaluate diets with differents levels of lysine and crude protein for female and male barrow swine in the growth phase (30 to 60 kg) and termination (60 to 105 kg). In the experiment I, 108 swine (Landrace x Large White) were used being 54 females and 54 barrow swine distributed in a randomized blocks experimental design with three treatments (0.85 and 15.5; 0.95 and 16.5; 1.05 and 17.5% of total lysine and crude protein, respectively ), six replicates and three animals per experimental unity. It was not observed effect of the treatment and sex for none of the evaluated parameters. It was not observed effect of the treatments and sex under weight gain and the feed intake verifying effect of the treatments under the feed:gain ratio, deposition rate of protein and fat in the animals that received diet containing 1.05 e 17.5% of total lysine and crude protein showed the best results. There was effect of sex for feed:gain ratio, deposition rate of protein and fat in that females showed best results for these variables when compared to barrow swine. In the experiment II, 72 swine (Landrace x Large White) were used being 36 females and 36 barrow swine were distributed in a randomized blocks experimental design with three treatments (0.76 and 14.5; 0.84 and 15.5; 0.92 and 16.5% of total lysine and crude protein, respectively) six replicates and two animals per experimental unity. There was no interaction between treatment and sex for none of the evaluated parameters. It was not observed effect of the treatments under feed intake, carcass length and the fat ixthickness between the last and penultimate lumbar vertebra (ETUL). It was verified effect of treatments in function of the levels of lysine and crude protein under the weight gain, lysine intake, growth rate in muscle, carcass yield, lean meat yield and ham yield that increased however, for feed:gain ratio, feed:gain ratio in muscle, thickness of fat measured in 6,5 cm of the dorsal lombar line (P 2 ) and fat yield that reduced. Effect of sex was verified for weight gain, feed intake, feed:gain ratio, lysine intake, feed:gain ratio in muscle, ETUL, P 2 and fat yield in that females showed inferior values for these variables when compared of barrow swine, however, for the growth rate of muscle, back eye area, carcass and lean meat yield, the results of females were greater than barrow swine. Basing on these data of performance and carcass quality can be conclude that in the concept of ideal protein that for the growing phase, for females and barrow swine, the diet containing 1.05% of total lysine and 17.5% of crude protein, showed better feed:gain ratio, greater deposition rate of protein and smaller deposition rate of at in carcass of swine from 30 to 60 kg. However, for the termination phase, the diet containing 0.92% of total lysine and 16.5% of crude protein, for females and barrow swine, showed better feed:gain ratio, carcass yield, lean meat yield, fat yield, ham yield and fat thickness (P 2 ) in the carcass of swine from 60 to 105 kg of weight.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-11T17:31:55Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 210314 bytes, checksum: afeb1e39d403809e37ee0f3578adfc1a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-11T17:31:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 210314 bytes, checksum: afeb1e39d403809e37ee0f3578adfc1a (MD5) Previous issue date: 2003-08-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Com objetivo de determinar os níveis de proteína bruta (PB) da dieta para alevinos de lambari tambiú (Astyanax bimaculatus), nome vulgar tambiú. Foram utilizados 1.000 alevinos com peso inicial de 0,70 ± 0,0046 g e 100 dias de idade, mantidos em 20 aquários de 600 litros, dotados de abastecimento de água individual e em ambiente de estufa plástica transparente. O experimento foi realizado segundo delineamento inteiramente ao acaso com cinco tratamentos (25; 29; 33; 37 e 41 % de PB), quatro repetições e cinqüenta peixes por unidade experimental. Os peixes foram alimentados ad libitum em quatro refeições diárias, durante 60 dias. Avaliaram-se o ganho de peso, o consumo de ração aparente, a conversão alimentar aparente, a taxa de eficiência protéica, a eficiência de retenção de nitrogênio, a umidade, proteína e gordura corporais e porcentagens de nitrogênio e de gordura no ganho de peso. Para a conversão alimentar aparente e para a porcentagem de nitrogênio no ganho de peso não houve efeito dos níveis de PB. Os demais parâmetros avaliados foram influenciados de forma linear ou quadrática em função dos níveis protéicos utilizados na dieta. Concluiu-se que a exigência de PB para o lambari tambiú é 37,8 % de PB, por proporcionar as melhores respostas em ganho de peso e gordura no ganho de peso. / One thousand fingerlings of lambari tambiú (Astyanax bimaculatus) with average initial weight of 0.70 ± 0.0046 g, placed in 20 aquaria (600 L) with water renewal and controlled temperature into plastic greenhouse, were used to determine crude protein (CP) requirements. The experiment was carried out according to a completely randomized design, with five treatments (25, 29, 33, 37 and 41 % CP), four replicates and fifty fishes per experimental unit. The fishes were fed ad libitum four times a day, during 60 days. Total weight gain, apparent diet consumption, apparent feed : gain ratio, protein efficiency rate, nitrogen retention rate, carcass humidity, protein and fat contents, nitrogen and fat percentage on weight gain were evaluated. For apparent feed conversion and for nitrogen percentage on weight gain, no effects of CP were observed. The all other evaluated parameters were influenced in a linear or quadratic way by protein levels. It was concluded that crude protein requirement for lambari tambiú xicorresponds to 37.8 %, since this level provides the best responses in weight gain, specific growth rate, and carcass fat composition.

Orientador: Elizabeth Romagosa / Resumo: O objetivo do estudo foi avaliar o desempenho reprodutivo de fêmeas e machos de tilápia-do-Nilo alimentados com dietas contendo Proteína Hidrolisada de Frango (PHF). O experimento foi dividido em duas fases, totalizando 192 dias. Na Fase I (Preparatória) utilizou-se 360 fêmeas (587,60 ± 38,05 g) distribuídas aleatoriamente em 24 hapas de 6 m3 e 120 machos (745,92 ± 124,54 g) em seis hapas de 15 m3 dispostos em um viveiro escavado de 4.000 m2. Fêmeas e machos foram alimentados com taxa de 1% do peso vivo por dia com uma dieta controle (sem PHF) e dietas contendo níveis crescentes de PHF (1%, 2%, 3%, 4% e 5%) divididos em duas refeições diárias durante 90 dias. Na Fase II (Reprodução) realizou-se o acasalamento dos animais e coletas de ovos durante o período de 102 dias. Para a avaliação das fêmeas foram utilizados os parâmetros reprodutivos (produção de ovos, fecundidade, % de desova, frequência de desova, fertilização, eclosão, diâmetro e composição química dos ovos e tamanho das larvas) assim como a influência da inclusão da PHF sobre os parâmetros de crescimento, somáticos e metabólitos plasmáticos (proteínas totais - PT, albumina - ALB, uréia - UR, glicose - GLI, colesterol total - COL, colesterol HDL - HDL, triacilglicerol - TAG e fosfatase alcalina). A avaliação reprodutiva dos machos compreendeu a mensuração dos parâmetros espermáticos (concentração, normalidade e sobrevivência, motilidade, velocidade curvilínea, velocidade média do caminho e velocidade em linha reta), ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of the present study was to evaluate the reproductive performance of Nile tilapia females and males fed with diets containing Poultry Hydrolyzed Protein (PHF). The experiment was divided into two phases, totaling 192 days. In Phase I (Preparatory) 360 females (587.60 ± 38.05 g) were randomly distributed in 24 hapas with 6 m3 and 120 males (745.92 ± 124.54 g) in six hapas with 15 m3 arranged in a 4,000 m2 earth pond. Males and females were fed 1% of body weight per day with diets containing increasing levels of PHF (1%, 2%, 3%, 4% and 5%) and a control diet (without PHF) divided into two feeds daily for 90 days. In Phase II (Reproduction), the animals were mated and collected eggs during the 102 days. In the females reproductive parameters (somatic indices, egg production, fecundity, spawning %, spawning frequency, fertilization, hatching, egg diameter and chemical composition and larval size) were used to evaluate the influence of PHF supplementation on plasma metabolite (total proteins - PT, albumin - ALB, urea - UR, glucose - GLI, total cholesterol - COL, HDL cholesterol - HDL, triacylglycerol - TAG and alkaline phosphatase). A reproductive evaluation of males included the measurement of sperm parameters (concentration, normality, survival, motility rate, curvilinear velocity, mean path velocity and straight line velocity), growth, somatic and plasma metabolite concentrations (as in the female) and plasma testosterone. No significant statistical effects (P> 0.... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

En esta Tesis doctoral se profundizó en el estudio de la interacción lípidoreceptor de acetilcolina nicotínico (AChR) en dos aspectos: por un lado, el mecanismo de inhibición de ácidos grasos libres (AGLs), antagonistas no competitivos del AChR, y por el otro, la ubicación del AChR en dominios líquidoordenados (Lo) condicionada por dos características particulares de la membrana. Con la finalidad de dilucidar el mecanismo de antagonismo de los AGLs sobre el AChR, se utilizaron AGLs con un doble enlace único en diferentes posiciones de una cadena acílica de 18 átomos de carbono. Estudios funcionales realizados con la técnica de patch-clamp han mostrado que solo el cis-6-18:1 y el cis-9-18:1 reducen la duración del estado de canal abierto del receptor, sugiriendo, por lo tanto, un mecanismo de bloqueo alostérico del canal. Mediante espectroscopía de fluorescencia se comprobó que todos los AGLs se ubican en la interfase lípido-AChR, quedando el cis-6-18:1 restringido a los sitios denominados sitios anulares, mientras que el resto de los AGLs ocupa también sitios no-anulares. Por otro lado, estudios de polarización de fluorescencia mostraron que el AGLs cis-9-18:1 es el que ocasiona el mayor desorden en la membrana. Se comprobó i) que todos los cis-AGLs generan cambios conformacionales del AChR a nivel transmembrana, ii) que los cis-9-18:1, cis-11- 18:1 y cis-13-18:1 perturban al AChR en su estado de reposo e iii) que los cis-6-18:1 y cis-9-18:1 son los que causan una mayor perturbación del estado desensibilizado. De esta manera, la posición e isomería del ángulo de torsión de los AGLs insaturados serían un factor clave en el bloqueo del AChR, sugiriendo entonces que los AGLs con un único doble enlace y ubicados superficialmente en la membrana inhiben en forma directa la función del AChR, posiblemente al perturbar una secuencia aminoacídica transmembrana involucrada en los cambios alostéricos necesarios para la apertura del canal iónico. Se postula que en la membrana plasmática el AChR se encuentra en dominios lipídicos denominados “balsas” (“rafts”). Sin embargo, el AChR no muestra preferencia por dominios Lo en sistemas modelo compuestos por esfingomielina (SM), colesterol (Col) y POPC (1:1:1), pero sí lo hace un segmento transmembrana (γM4) que exhibe mayor contacto con los lípidos. Es decir, su distribución no dependería exclusivamente de sus propiedades intrínsecas sino también de señales extrínsecas a la proteína. En este trabajo de Tesis se estudió la posible partición diferencial del AChR en los dominios Lo en dos sistemas modelo diferentes en función de: a) la presencia de diferentes especies puras de SM en la membrana, y b) la existencia de asimetría transbicapa en el sistema modelo, mediante el agregado de SM de cerebro (bSM) en la hemicapa externa. Tanto la existencia de asimetría como la presencia de 16:0-SM o 18:0-SM, en comparación con las bSM y 24:1-SM, producen una partición preferencial del AChR en los dominios Lo. De este modo, la localización del AChR en estos dominios depende no solo de sus propiedades sino también de las características propias de la membrana en la que se encuentra. Entender la interacción lípido-AChR es de gran importancia para determinar tratamientos que puedan mejorar o inhibir la función del AChR y tratar enfermedades que lo involucren. / In this Ph. D. thesis the understanding of the lipid-niconitic acetylcholine receptor (AChR) interaction was furthered in two aspects, namely the inhibition mechanism of free fatty acids (FFA), non-competitive AChR antagonists, and AChR location in liquid-ordered (Lo) domains conditioned by two membrane characteristics. To elucidate FFA’s antagonism mechanism, FFA with only one double bond in different positions of an 18-carbon acyl chain were tested on AChR. Patch-clamp functional studies showed that only cis-6-18:1 and cis-9-18:1 reduce the duration of the AChR open state, thus suggesting an allosteric blocking mechanism. Fluorescence spectroscopy measurements demonstrated that all FFA locate in the AChR-lipid interfase, with cis-6-18:1 restricted to anular sites, while the rest of the FFA tested also ocupy non-anular sites. Fluorescence polarization studies showed that cis-9-18:1 causes the highest membrane disorder of all FFA tested. It was determined that i) all cis-FFA generate AChR conformational changes at a transmembrane level, ii) only cis-9-18:1, cis-11-18:1 and cis-13-18:1 disturb AChR resting state and iii) cis-6-18:1 and cis-9-18:1 are the ones that cause the highest disturbance of the desensitized state. Thus, the position and isomerism of the torsion angle of unsaturated FFAs are probably a key factor in terms of AChR blockage, possibly by perturbing a transmembrane aminoacidic sequence involved in the allosteric changes necessary for ion channel gating. In the plasma membrane, AChR is postulated to be located in lipid domains known as rafts. However, AChR shows no preference for Lo domains in model systems – composed of sphingomyelin (SM), cholesterol (Chol) and POPC (1:1:1) –, but a transmembrane segment (γM4) that in closest contact with lipids does have preference for them. This means that AChR distribution seems not to exclusively depend on its intrinsic properties but on signals external to the protein. In this Ph. D. thesis a posible differential AChR partitioning in Lo domains was studied in two model systems as a function of a) the presence of different pure SM species in the membrane and b) the existence of transbilayer asymmetry in the model system, by the addition of brain SM (bSM) in the external hemilayer. Both asymmetry and the presence of either 16:0-SM or 18:0-SM, in comparison with bSM or 24:1-SM, lead to an AChR preferential partitioning in Lo domains. AChR location in these domains depends not only on its properties but also on the characteristics of the membrane in which the ion channel is immersed. Understanding lipid-AChR interaction is of great importance to determine treatments that can either improve or inhibit AChR function and, this, in turn, will help determining the treatment of diseases in which AChR is involved.