Orientador: Adilma Regina Pippa Scamparini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-27T06:16:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soler_MarciaPaisano_D.pdf: 17199209 bytes, checksum: e4fd21f3b376b21f62a7e8ce59b09836 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Não informado. / Abstract: Not informed. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-13T12:05:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goes_LidianaCristinade_M.pdf: 4033239 bytes, checksum: 07d68044592d217e51b3096b35496c87 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Este trabalho visou investigar o efeito dos quelatos IDA-Ni(II), CM-Asp-Ni(II), TED-Ni(II) e TREN-Ni(II) na purificação de pró-insulina humana recombinante com cauda de poli(histidina) (PIS) a partir de solução clarificada, obtida após solubilização dos corpos de inclusão e sulfitólise, proveniente do processo de produção de insulina (BIOMM, MG). Dentre os adsorventes estudados, Sepharose-TREN-Ni (II) apresentou a maior capacidade de adsorção em termos de PIS, cerca de 50% da proteína alimentada. Os demais adsorventes apresentaram a seguinte ordem de capacidade de adsorção IDA > HisTrap > CM-Asp > TED. Em termos de seletividade, os adsorventes com CM-Asp-Ni (II) e TEDNi (II) imobilizados apresentaram maior seletividade. Os dados de adsorção de PIS no equilíbrio a 25°C foram bem representados pelo modelo de Langmuir-Freundlich., fornecendo valores de capacidade máxima de adsorção entre 43,14 mg e 154,56 mg de PIS/g de adsorvente e valores de constante aparente de dissociação entre 10-5 a 10-7 M. O estudo termodinâmico para adsorção de PIS nos adsorventes estudados na faixa de 4 a 25°C (exceto para TED-Ni(II), faixa de temperatura de 25 a 45°C) mostrou diminuição dos valores de Kd com o aumento da temperatura, fornecendo valores de ?H° positivos para todos os casos, indicando que a adsorção de PIS nos quelatos estudados é um processo endotérmico. Os valores de ?Gº foram negativos para todos os sistemas, indicando que a adsorção é espontânea. Os valores de ?Sº encontrados foram positivos e pouco alterados com o aumento de temperatura em todos os casos, favorecendo a complexação proteína-íon metálico. / Abstract: This work sought to investigate the effect of the chelating groups IDA-Ni(II), CMAsp- Ni(II), TED-Ni(II) and TREN-Ni(II) in the purification of a recombinant human proinsulin poly-histidine tagged (PIS) starting from clarified solution, obtained from the dissolution of inclusion bodies and oxidative sulfitolysis, originating from the process of insulin production (BIOMM, MG). Among of the studied adsorbents, Sepharose-TREN-Ni (II) it presented the largest adsorption capacity in terms of PIS, about 50 % of the fed protein. The other adsorbents presented the following order in adsorption capacity IDA > HisTrap > CM-Asp > TED. In selectivity terms, the adsorbents with the chelating groups CM-Asp-Ni (II) and TED-Ni (II) immobilized presented a larger selectivity. The data of adsorption of PIS in the equilibrium to 25°C were well represented by the model of Langmuir-Freundlich, supplying values of maximum adsorption capacity between 43, 14 mg and 154, 56 mg of PIS / g adsorbent and values of apparent constant of dissociation among 10-5 to 10-7 M. The thermodynamic study for adsorption of PIS in the adsorbents considering the range from 4 to 25°C (except for TED-Ni (II), temperature range from 25 to 45°C) showed decrease of the values of Kd with the increase of temperature, providing positive values of ?H° for all of the cases, indicating that the adsorption of PIS in the studied chelating groups is a endothermic process. The values of ?Gº were negative for all of the systems, indicating that the adsorption is spontaneous. The values of ?Sº founded were positive and had little alteration due to temperature increase in all of the cases, favoring the formation of complex protein-metallic ion. / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientadores: Valdemiro Carlos Sgarbieri, Durvanei Augusto Maria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-09T10:14:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_GeorgiaAlvaresde_D.pdf: 11428319 bytes, checksum: 35439f6a0fe2edb2363b7aa078ebd0fa (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O principal objetivo deste projeto foi avaliar as propriedades fisiológicas potenciais de hidrolisados de colágeno (HC) e de um isolado protéico de soro de leite bovino (WPI) em relação aos efeitos anti-ulcerativo e anti-tumoral em roedores. O projeto apresenta uma parte tecnológica que envolve a produção do WPI e hidrolisados de colágeno (Gelita) com diferentes distribuições de massa molecular. Para obter as frações protéicas utilizadas neste estudo, responsáveis por estes atributos, uma caracterização foi conduzida por fracionamento através de microfiltração utilizando tecnologia de membranas e sistema FPLC por cromatografia de permeação em gel e de fase reversa. Estas tecnologias foram utilizadas para obtenção dos hidrolisados de colágeno com diferentes massas moleculares e do isolado protéico de soro de leite (WPI), para possibilitar a caracterização química e avaliações bioquímica/ fisiológica em suas atividades anti-úlcera e anti-tumoral. Os produtos elaborados a partir desta tecnologia de fracionamento foram caracterizados de acordo com o grau de hidrólise, composição de aminoácidos, massa molecular e número de peptídios, utilizando metodologias estabelecidas. Hidrolisados de colágeno bovino e suíno apresentaram características diferentes quanto ao grau de amidação e teor de amônio total, assim como na eletrofocalização. Os perfis cromatográficos de permeação em gel foram semelhantes, mas a atividade biológica em meio com células de melanoma B16F10 também diferiu. A combinação destas duas proteínas para avaliação dos efeitos anti-ulcerativo e anti-tumoral, também foi utilizada. Atenção especial foi dedicada a uma melhor compreensão da rota metabólica e mecanismos de ação destas duas proteínas e seus peptídios nos ensaios biológicos (modelo com ratos e camundongos, respectivamente). Para investigar o efeito anti-ulcerativo, ratos Wistar com 250-300g de peso corpóreo foram utilizados. Experimentos com dose única e repetitivas foram feitos para avaliar os efeitos destas proteínas na redução ou inibição da úlcera gástrica. A participação das substâncias sulfidrila ativas provenientes da glutationa (GSH), aminoácidos e ligações inter e intra- cadeias polipeptídicas, no mecanismo de proteção, foi estudada através da alquilação total do grupo reativo SH pela Netilmaleimida (NEM). Algumas respostas fisiológicas foram avaliadas como a produção de muco gástrico e gastrina durante o modelo experimental de úlcera induzida por etanol. A atividade inibitória em modelo de úlcera gástrica induzida por etanol foi também distinta nos hidrolisados bovino (BCH) e suínos (PCH), apresentando o hidrolisado suíno em torno de 60% de inibição das lesões ulcerativas quando administrado em dose única 750mg/Kg de peso corpóreo. No experimento de dose dupla a porcentagem de inibição das lesões ulcerativas gástricas dos hidrolisados bovinos foi maior que 70% quando administrado 1500 mg/Kg pc. Quando foram realizadas combinações de hidrolisados de colágeno bovino ou suíno com WPI, obteve-se uma combinação otimizada para BCH:WPI (50:50) na concentração de 375mg/Kg, com mais de 70% de inibição das lesões ulcerativas gástricas. Os hidrolisados de colágeno levaram ao aumento da produção de muco na mucosa gástrica e o WPI à inibição com a participação das substâncias sulfidrila não protéica na atividade inibitória das lesões gástricas. Na avaliação in vitro com as células B16F10 e os hidrolisados de colágeno bovino e suíno e suas frações obtidas por micro e ultrafiltração, assim como aquelas provenientes da cromatografia por HPLC de fase reversa, mostraram que estas últimas apresentaram a menor concentração inibitória para 50% das células (IC50), também apresentando aumento na fase de apoptose com significativo aumento na porcentagem de expressão da caspase-3 nos meios contendo as frações F1, F2 e F3. O estudo de propriedade anti-tumoral foi conduzido utilizando camundongos C57BL/6J. Animais saudáveis foram injetados (transplantados) com células tumorais de melanoma murino B16F10 na área dorsal para avaliar a implantação tumoral, progressão, caquexia observando a perda de peso e outros sintomas, metástase, capacidade proliferativa do tumor assim como sua classificação de acordo com o volume, tamanho e número. Os mecanismos nos quais a dieta protéica pode estar envolvida, avaliando a fase do ciclo celular, apoptose e efeitos anti-proliferativos no tecido tumoral foram também objetivos deste estudo. Protocolos utilizando quimioterápico foram seguidos com aquelas dietas protéicas que apresentaram melhor resposta contra a tumorigênese considerando outros mecanismos que poderiam estar envolvidos. No modelo de tumorigênese in vivo com células de melanoma B16F10 observouse uma menor porcentagem de mortalidade, maior porcentagem de sobre-vida e aspectos macroscópicos vantajosos para o grupo de animais C57BL/6J que ingeriram American Institute of Nutrition (AIN-93) tendo como fonte protéica BCH: WPI (50:50) e tratamento quimioterápico. O ciclo celular também sofreu alteração com as diferentes dietas. A fase G0/G1 tanto no grupo com tratamento quimioterápico como no grupo sem quimioterápico foi significativamente aumentada para os grupos dietéticos com BCH e BCH-P1 + WPI. A porcentagem de apoptose aumentou para BCH+WPI com tratamento quimioterápico. A capacidade proliferativa das células B16F10 diminuiu para os grupos de camundongos C57BL/6J que se alimentaram de hidrolisados de colágeno sem tratamento quimioterápico e quando houve quimioterapia associada somente aqueles grupos que receberam a combinação das duas proteínas BCH ou BCHP1 com WPI tiveram uma diminuição significativa da capacidade proliferativa das células B16F10 / Abstract: The main objective of this project was to evaluate the potential physiological properties of collagen hydrolysate (CH from Gelita) and a whey protein isolate (WPI) in relation to anti-ulcerative and anti-tumoral effects in rodents. The project presents a technological part, which involves the WPI production with different molecular masses. To obtain the proteic fractions used in this study responsible for these attributes, a characterization was conducted using fractionation through microfiltration using membranes technology and FPLC system through gel permeation and reverse phase chromatography. These technologies were used to obtain the collagen hydrolysate with different molecular masses and the whey protein isolate (WPI) to allow the chemical characterization and biochemical and physiological evaluations of their anti-ulcerative and anti-tumoral activities. The elaborated products obtained from these fractionation technologies and also the products from GELITA (derivatives of collagen) were characterized according to degree of hydrolysis, amino acids composition, molecular mass and peptide number, using established methodologies. Bovine and porcine collagen hydrolysates presented different characteristics concerning degree of amidation and total ammonium content, as well as in isoelectric focusing. The chromatographic profiles in gel were similar, but the biological activity in cellular medium of melanoma B16F10 also differed. Combination of these two types of proteins to evaluate anti-ulcerative and antitumoral effects were also done. Special attention was dedicated to better understanding of metabolic routes and mechanisms of action of these two proteins and their peptides in biological assays (models with rats and mice, respectively). To investigate the anti-ulcerative effect Wistar rats (250-300g bw) were used. Experiments with single and double doses were conducted to evaluate the effect of these proteins in reduction or inhibition of gastric ulcer. The participation of active sulfhydryl compounds, from gluthatione, aminoacids and inter-, intra- polypeptides chains, in protection mechanism, was studied through alkylation of SH reactive groups using N-ethylmaleimide (NEM). Some physiological responses were evaluated, as mucus and gastrin production, during experimental model of ulcer induced by ethanol. The inhibitory activity in gastric ulcer model induced by ethanol was also distinct for these two hydrolysates, bovine (BCH) and porcine (PCH). The porcine hydrolysate presented around 60% of ulcerative lesion inhibition when 750mg/Kg body weight was administrated at single dose. For double dose experiment the percentage of inhibition for bovine hydrolysate was higher than 70% when 1,500mg/Kg bw was administrated. When was tested combinations of either bovine or porcine collagen hydrolysate with WPI a optimized combination was obtained BCH:WPI (50:50) at 375mg/Kg bw of concentration presenting more than 70% gastric ulcerative lesion inhibition. The collagen hydrolysate led to increased mucus production in gastric mucosa while WPI caused in addition an inhibition by non-proteic sulfhydryl compounds participation in the inhibitory activity of gastric lesions. In vitro evaluation using B16F10 cells, the bovine and porcine collagens hydrolysates and their fractions obtained through micro and ultrafiltration, as well as those obtained by reverse phase chromatography (F1, F2, F3), showed the lowest inhibitory concentration for 50% of cells (IC50), presenting increased apoptosis percentage and a significant increase of caspase-3 expression. The study of anti-tumoral property was conducted using mice C57BL/6J. Healthy animals were injected (transplanted) with tumoral cells of murine melanoma B16F10 in dorsal area to evaluate the tumoral implantation, progression, caquexia observing the body weight loss and other symptoms, metastasis, proliferative capacity of the tumor, as its classification according to volume, size and number. The mechanisms involving the protein in the diet for evaluating cell cycle phases, apoptosis and anti-proliferative effects in tumoral tissue development were also objectives of this study. Protocols using chemotherapic were followed with protein which presented better response against tumorigenesis considering other mechanisms that could be involved. In tumorigenesis, in vivo model using B16F10 melanoma cells, a lower percentage of mortality, longer survival percentage and better macroscopic aspects were observed for C57BL/6J animal groups, fed American Institute of Nutrition (AIN-93) with BCH:WPI (50:50) as protein source plus chemotherapic treatment. The cellular cycle also suffered alteration with different diets. The G0/G1 phase for both groups treated and non-treated with chemotherapic increased significantly for the dietetic groups BCH or BCH-P1 + WPI. The apoptosis percentage increased for BCH+WPI+ChTP (with chemotherapic treatment). The proliferative capacity of B16F10 cells was reduced in the groups fed collagen hydrolysate without chemotherapic treatment and when the chemotherapic was associated only the groups that received both proteins BCH or BCH-P1 with WPI showed a significant reduction of proliferative capacity of these cells / Doutorado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Doutor em Alimentos e Nutrição

Orientadores: Fernanda Klein Marcondes, Caroline Morini Calil / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T16:22:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_PatriciaOliveirade_M.pdf: 1921377 bytes, checksum: 762429b34364f430a3302fbab6ade68a (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A halitose é a emanação de odores desagradáveis pelas narinas e pela cavidade oral, devido à produção de compostos sulfurados voláteis (CSV) originados do metabolismo bacteriano, geralmente relacionados à higiene ou alterações bucais. Porém, fatores emocionais e o ciclo menstrual também influenciam a produção de CSV. Neste contexto, e considerando que o gênero do avaliador pode influenciar as respostas do voluntário, o objetivo deste estudo foi avaliar a influência da ansiedade e do gênero do avaliador sobre a produção de CSVe biomarcadores salivares. A situação de ansiedade foi induzida pelo Video-Recorded Stroop Color-Word Test (VRSCWT), validado como um modelo de ansiedade experimental. As concentrações bucais de CSV e salivares de cortisol, alfa-amilase, imunoglobulina A secretória (IgA) e proteínas totais, bem como as pressões arteriais sistólica e diastólica, freqüência cardíaca (FC) e o fluxo salivar foram determinados antes e após a aplicação do VRSCWT. Os resultados foram avaliados utilizando-se Análise de Variância com Medidas Repetidas (p<0,05). O VRSCWT induziu aumento significativo na concentração de CSV, em ambos os gêneros, sem influência do gênero do avaliador. Mulheres apresentaram maiores concentrações de CSV do que voluntários do gênero masculino, antes e após o VRSCWT. O VRSCWT também induziu aumento nos valores de pressão arterial em homens e mulheres em relação aos valores basais. O aumento na pressão arterial sistólica foi mais pronunciado quando os voluntários foram avaliados por um experimentador do gênero oposto. Mulheres, quando avaliadas pelo gênero oposto, apresentaram aumento significativo do cortisol e alfa amilase salivar em relação aos valores basais, sem alteração quando o VRSCWT foi aplicado por avaliador do mesmo gênero, ou em voluntários do gênero masculino. Não houve alteração sobre os valores de FC, fluxo salivar, IgAs e proteínas totais após a aplicação da situação ansiogênica. Os resultados demonstraram que o VRSCWT induziu ansiedade, a qual aumentou a produção de CSV, sendo que estes efeitos sofreram influência do gênero do voluntário e do avaliador. / Abstract: Halitosis is the emanation of offensive odors from nostrils and oral cavity due to volatile sulfur compounds (VSC) production originated from bacterial metabolism, usually related to hygiene or oral alterations. However emotional factors and menstrual cycle have also been associated with the VSC production. In this context, and considering that the gender of the experimenter may influence the responses of the volunteer, the aim this study was to evaluate the influence of the anxiety and experimenter gender on the VSC and salivary biomarkers production. The anxiety was induced by Video-Recorded Stroop Color-Word Test (VRSCWT), validated as a model of experimental anxiety. The VSC concentration and salivary of cortisol, alpha-amylase, secretory IgA (sIgA) and total proteins, as well as, systolic and diastolic blood pressure, heart rate (HR) and salivary flow were evaluated before and after the application of the VRSCWT. Data were compared by Analysis of Variance with Repeated Measures (p<0.05). The VRSCWT induced significant increase in the VSC concentration, in both genders, without influence of the experimenter gender. Women presented higher VSC concentration than men, before and after VRSCWT. The VRSCWT also induced increase in blood pressure in men and women in relation to basal values. The increase in systolic blood pressure was more pronounced when volunteers were evaluated by an experimenter of the opposite gender. Women, when evaluated by the opposite gender, presented a significant increase of cortisol and salivary alpha-amylase in relation baseline values, without changes when the VRSCWT was applied by the evaluator of the same gender, or male volunteers. There was no change on the values of HR, salivary flow, sIgA and total proteins after anxiogenic situation. The results showed that the VRSCWT induced anxiety and increased VSC production and that these effects were influenced by the volunteer and gender of the experimenter. / Mestrado / Fisiologia Oral / Mestre em Odontologia

Orientador: Marco Aurelio Zezzi Arruda / Tese ( doutorado) - Universidade EStadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-12T12:53:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Magalhaes_CristianaSchmidtde_D.pdf: 4986578 bytes, checksum: d903003de832394edae53527286bdab8 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Este trabalho de Tese apresenta os resultados da avaliação de onze procedimentos de extração de proteínas nas plantas medicinais ginkgo biloba (Ginkgo biloba L.) e castanha da Índia (Aesculus hippocastanum) e no fitoterápico Espirulina (Spirulina maxima). Os procedimentos variaram desde a simples agitação até àqueles onde se somavam várias etapas, tais como agitação, maceração, sonicação e centrifugação. A avaliação foi feita em termos da comparação da concentração de proteínas totais extraídas por meio de cada procedimento, utilizando-se o método de Bradford e de Kjeldhal. Os procedimentos contendo mais etapas se mostraram mais eficientes na extração de proteínas. Também foi feito o mapa protéico da castanha da Índia (Aesculus hippocastanum) e avaliada a influência dos procedimentos de extração de proteínas no perfil protéico da referida amostra. Para isso foi feita a separação das proteínas presentes nos extratos protéicos utilizando-se eletroforese SDS-PAGE. Esta separação (para as proteínas desnaturadas e sob condição não-redutora) permitiu identificar, em termos de massa molar, quais proteínas compunham os extratos protéicos, onde se verificou uma banda mais expressiva (MM = 33,2 ± 0,9 kDa), independentemente do procedimento de extração usado, fato que foi relacionado à mobilidade da proteína. Quando a separação ocorria sob condições redutoras, a banda mais expressiva apresentava MM = 23,5 ± 0,5 kDa. Com a finalidade de se fazer uma investigação mais detalhada, as proteínas da castanha da Índia que foram extraídas pelo procedimento de maceração e centrifugação, foram também separadas por eletroforese bidimensional, na qual houve o desdobramento da banda mais expressiva em pelo menos nove bandas protéicas. Estas bandas foram decompostas tripticamente e foram analisadas por espectrometria de massas, com a obtenção de várias seqüências peptídicas que se repetiam em várias bandas diferentes. Estes resultados sugerem que estas proteínas se tratam de isoformas. Finalmente, foi proposta a identificação de quais íons metálicos estariam ligados às proteínas, o que foi possível por meio do mapeamento das bandas protéicas utilizando-se a fluorescência de raios-X com radiação Síncrotron. Foram identificados 4 íons metálicos, os quais foram investigados quantitativamente. As bandas separadas por SDS-PAGE e por 2D-PAGE foram decompostas por radiação microonda e a determinação das concentrações dos íons metálicos foi obtida por ETAAS e FAAS. Para as bandas separadas por 2D-PAGE observou-se uma interessante distribuição não homogênea dos íons metálicos, sugerindo que algumas se trataram de metaloproteínas, enquanto outras não. Assim, estas proteínas podem ser de origem citosólica e de armazenamento, e que, embora sejam apenas coadjuvantes na ação medicinal da castanha, participariam ativamente nos processos germinativos e metabólicos da planta. / Abstract: This work presents the evaluation of eleven protein extraction procedures using ginkgo biloba (Ginkgo biloba L.), horse chestnut (Aesculus hippocastanum) medicinal plants, and also using the phytomedicine Spirulina (Spirulina maxima). The procedures varied since the agitation only until the addition of several steps, such as agitation, maceration, sonication, and centrifugation. This evaluation was made by comparing the total extracted proteins through Bradford and Kjeldhal methods. The more efficient protein extraction procedures were those whose steps were added. The influence of protein extraction procedures was also evaluated in the protein map of horse chestnut (Aesculus hippocastanum). The proteins present in extracts were separated by SDS-PAGE. This separation (for denatured and non-reduced proteins) allowed identifying the more expressive protein band (MM = 33.2 ± 0.9 kDa) independently of the used procedure. When the separation was carried out under reduced and denatured conditions, the more expressive protein band had MM = 23.5 ± 0.5 kDa. This difference in MM was attributed to protein mobility. The horse chestnut proteins extracted by maceration and centrifugation were also separated by twodimensional electrophoresis in order to obtain a more detailed protein profile. Through this separation, the more expressive band was folded in, at least, nine protein bands. These bands were triptically decomposed and analysed by mass spectrometry. Several peptide sequences that repeated in different protein bands were obtained. These results suggested to deal of isoforms. Finally, the identification of metallic ions bonded to proteins, using Sincrotron radiation- X-ray fluorescence was also proposed. Four metallic ions were identified, which were quantitaively investigated. The protein bands separated by SDS-PAGE and by 2D-PAGE were decomposed using microwave radiation, and metallic ion concentrations were determined by ETAAS and FAAS techniques. For 2D-PAGE bands an interesting non-homogeneous metallic ion distribution was observed, suggesting that some proteins can be metalloproteins or metal-binding proteins. Therefore, these studied proteins probably present a citosolic origin and storing function. However, they may be coadjuvants at medicinal action, and much probably participate in germinating and metabolic processes. / Doutorado / Quimica Analitica / Doutor em Ciências

Orientador: Paulo Mazzafera / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T20:50:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Schimpl_FlaviaCamila_M.pdf: 3074978 bytes, checksum: 589ce5b09a9c5f294c4bd4eaaff896b1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Alguns grupos de plantas caracterizam-se por acumularem cafeína. Chá, café e guaraná, que acumulam cafeína, são algumas dessas plantas. As sementes de guaraná possuem o maior teor de cafeína já descrito em plantas, entre 2,5 e 6%. A popularização dos produtos a base de guaraná e a alta demanda por cafeína natural (obtida por descafeinação de plantas) destacam o interesse comercial pela espécie. A biossíntese de cafeína em plantas foi extensivamente estudada em café e chá e ambas espécies têm as mesmas vias chave da biossíntese da cafeína. O terceiro passo da via ocorre na presença de teobromina sintase (TS), enzima com atividade específica na conversão de 7-metilxantina em teobromina, e/ou dependendo da espécie, na presença de cafeína sintase (CS), uma enzima bifuncional que atua nos dois últimos passo da síntese de cafeína, na conversão da 7-metilxantina para teobromina e posteriormente desta para cafeína. O objetivo desta tese foi caracterizar os níveis de metilxantinas, atividade e expressão de CS em frutos de guaraná, sendo que para isto foram realizadas análises bioquímicas e moleculares nos tecidos de cinco cultivares (BRS-Amazonas, BRS-CG372, BRS-CG611, BRS-Maués, BRS-Luzéia). Teobromina acumulou preferencialmente em folhas (estádios jovem, intermediária e madura), caule (porção apical e basal), inflorescência, pericarpo de frutos nos estádio verde, intermediário e maduro. Nas sementes, a cafeína foi o alcaloide que acumulou em maior quantidade e atingiu níveis entre 3,3 e 5,8%. Nos tecidos analisados, seja teobromina ou cafeína, a maior concentração do alcaloide foi em tecidos novos, reduzindo com o desenvolvimento. Enquanto que teofilina foi encontrada em quantidades baixas em todos os materiais. A maior concentração de cafeína em frutos imaturos foi confirmada pela maior atividade de CS e maior expressão de PcCS. A busca do gene da CS de guaraná no banco de sequências EST Realgene gerou uma sequencia de nucleotídeos (PcCS) com 1080 pb, que apresenta semelhança filogenética com proteínas de CS de cacau (BCS1) e chá (TCS1 e TCS2). A produção da proteína recombinante permitiu a caracterização funcional de PcCS como uma CS bifuncional, capaz de catalisar os dois últimos passos de metilação da biossíntese de cafeína. PcCS mostrou afinidade para 7-metilxantina e teobromina (maior afinidade), diferindo das CS descritas para outras espécies acumuladoras de cafeína, que possuem maior afinidade por paraxantina. Provavelmente isto se deve aos resíduos de aminoácidos presentes no sítio ativo da proteína predita, quando comparada com a de café / Abstract: Some plants are characterized by presenting high contents of caffeine. Tea, coffee and guarana, which accumulate the alkaloid caffeine, are some of these plants. Guarana seeds have the highest caffeine content (2.5 and 6%) among plants accumulating methylxanthine alkaloids. The increase in popularity of products made from guarana and the high demand for natural caffeine (obtained by decaffeination plant) justify the commercial interest for this species. The biosynthesis of caffeine in plants has been extensively studied in coffee and tea and both species present high similarity regarding the caffeine biosynthesis pathway. The third step of the pathway occurs in the presence of the enzyme theobromine synthase (TS), which converts 7-methylxanthine to theobromine but depending on the species, this step is also mediated by caffeine synthase (CS), an bifunctional enzyme that in addition to convert 7-methylxanthine to theobromine, also convert the later to caffeine. The aim of this study was to characterize the levels of methylxanthine alkaloids, activity and expression of caffeine synthase in the guarana fruit, and for this biochemical and molecular analyses were carried out in tissues of five cultivars of guarana (BRS-Amazonas, BRS-CG372, CG611-BRS, Maués-BRS, BRS-Luzéia). Theobromine was preferentially accumulated in the leaves (young, intermediate and mature stages), stems (apical and basal sections), inflorescence, and pericarp of fruits (green, intermediate and mature stages). However caffeine accumulated in the seeds as the main alkaloid and reached levels between 3.3 and 5.8%. In all tissues analyzed, whether theobromine or caffeine, the alkaloid concentration was higher in new tissues, reducing with the development/maturation. While theophylline was found in low amounts in all materials. The highest concentration of caffeine in immature fruits was confirmed by the highest activity of CS and highest expression of PcCS. The search for the CS gene of guarana in the EST guarana database Realgene generated a sequence of nucleotides (PcCS) with 1080 bp, which presented phylogenetic similarity with proteins of caffeine synthase from cocoa (BCS1) and tea (TCS1 and TCS2). The production of the PcCS recombinant protein allowed the functional characterization of the enzyme as a bifunctional CS, able to catalyze the two last methylation steps in the biosynthesis of caffeine. PcCS showed affinity for 7-methylxanthine and theobromine (highest), differing from the CS described for other species accumulating caffeine, which have highest affinity paraxanthine. This is probably due to the amino acid residues present in the active site of the predicted protein when compared to coffee / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestra em Biologia Vegetal

Orientador: Nelson Horacio Pezoa Garcia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:56:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_AnaVania_D.pdf: 743758 bytes, checksum: edee8dc8e8a7a4689bdb7d3a449715ee (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O cupuaçu (Theobroma grandiflorum Schum) é uma fruta típica da região Norte do Brasil, com grande potencial econômico. Atualmente é a polpa que sustenta a produção, industrialização e comercialização desta fruta. A semente, um subproduto da industrialização da polpa, começa a despertar interesse como um produto de alto valor nutricional e com grande potencial de mercado para produtos industrializados. O presente estudo teve como objetivo a produção e caracterização de farinha, concentrado e isolado protéico da semente do cupuaçu, quanto a sua composição protéica e de aminoácidos e características químicas e funcionais. A farinha, obtida das sementes trituradas e desengorduradas, serviu como matéria-prima para a extração da fração protéica em meio aquoso, obtendo-se o concentrado protéico (precipitação em pH 3,5) e o isolado protéico (solubilização em pH 9 e precipitação em pH 3,5). A farinha desengordurada, o concentrado e o isolado protéico de semente de cupuaçu foram submetidos à análise de composição centesimal, cor, aminoácidos, perfil eletroforético de suas proteínas e propriedades funcionais. O concentrado apresentou um teor protéico de 31,18% e o isolado de 64,33%. Quanto ao perfil eletroforético de suas proteínas, observou-se a presença de três principais bandas protéicas, com pesos moleculares variando de 20,03 a 39,79kDa além de três bandas fracas adicionais. As bandas mais fracas parecem ter sido seletivamente perdidas durante a extração alcalina para produção do isolado protéico, estando presentes apenas na farinha desengordurada e no concentrado protéico. Observou-se que a farinha desengordurada, o concentrado e o isolado protéico de semente de cupuaçu, apresentaram boa composição aminoacídica, com teores superiores aos recomendados para a grande maioria dos aminoácidos. Tanto a farinha como o concentrado apresentaram muito boa capacidade de retenção de água e de óleo. Observou-se também, boa capacidade emulsificante em pH 7,0, para a farinha, o concentrado e o isolado protéico, 987,50, 977,50 e 1380,00mL óleo/g produto, respectivamente. Assim, estes produtos apresentam potencial de utilização, não somente para enriquecer outros alimentos, mas também para melhorar certas propriedades funcionais / Abstract: Cupuacu (Theobroma grandiflorum Schum) is a native fruit from northern Brazil, with great economic potential. Its productive chain is currently sustained by the pulp market. The seed, treated as a by-product of the pulp industrialization, has recently come to public attention as a highly nutritive product with great market potential for industrialized products. The objective of the present study was the production and characterization of flour, protein concentrate and protein isolate obtained from the cupuacu seed, in terms of their chemical and functional properties and their protein and amino acid composition. The flour, obtained from ground and defatted seeds, was used to extract the protein fraction in an aqueous medium, obtaining the protein concentrate (precipited at pH 3.5) and the protein isolate (solubilized at pH 9.0 and precipited at pH 3.5). The defatted flour, the protein concentrate and the protein isolate were analyzed in terms of their chemical composition, color, amino acid contents, electrophoretic protein profile and functional properties. The concentrate presented a protein content of 31.18% and the isolate, 64.29%. The electrophoretic profile of their proteins indicated the presence of three main protein bands, with molecular weights ranging from 20.03 to 39.79 kDa, besides three additional weak bands. The weaker bands seem to have been selectively lost during alkaline extraction for production of the protein isolate, as they were detected only in the defatted flour and in the protein concentrate. The defatted flour, the protein concentrate and the protein isolate obtained from cupuacu presented a good amino acid composition, as the contents of most amino acids were higher than the daily recommended amounts. The flour and the concentrate presented both excellent water and oil retention capacity. Good emulsifying ability at pH 7.0 was also observed for all three products: 987.50 mL oil/g for the flour, 977.50 mL oil/g for the protein concentrate and 1380.00 mL oil/g for the protein isolate. So, these products presented good utilization potential, not only to enrich other foods, but also to enhance some functional properties / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador : Cesar Costapinto Santana / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_LibiadeSousaConrado_D.pdf: 9163144 bytes, checksum: 7949d3eb39c8f8f9c063bf92849c405f (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Neste trabalho são estudados os efeitos da temperatura, grau de expansão e altura do leito sedimentado sobre: a purificação e recuperação da alfa-lactalbumina, a eficiência da coluna em adsorver todas as proteínas do soro do leite bovino e, o comportamento fluidodinâmico da coluna de leito expandido na presença da solução tampão e do soro de leito bovino. A avaliação da fluidodinâmica foi realizada através da análise quantitativa dos parâmetros Pe, N e j obtidos através da aplicação de um modelo matemático, denominado de PDE. Foi utilizado um planejamento fatorial como ferramenta para verificar o efeito das variáveis estudadas. A alfa-Iactalbumina é uma proteína hidrofóbica e que se liga ao íon cálcio. Essa ligação provoca uma mudança conformacional na sua estrutura tomando-a mais hidrofílica. Essa propriedade é explorada estrategicamente no processo de purificação. Para entender o processo de adsorção foram obtidas isotermas de equilíbrio do soro a 34 °C, da alfa-lactalbumina e da beta-Iactalbumina, separada e conjuntamente, nas temperaturas de 25 e 30 ºC, em tanques agitados. Observou-se que a alta -Iactalbumina adsorve mais fortemente no adsorvente hidrofóbico do que a beta-Iactoglobulina. Através do processo de adsorção realizado na coluna de leito expandido obteve-se a altalactalbumina com grau de pureza de até 100%, detectado por análise realizada em HPLC, para uma altura de leito de 15 cm, temperatura de 32°C e grau de expansão de 2,75. A recuperação dessa proteína foi de aproximadamente 9,5%. Através do ajuste dos dados experimentais, obtidos das curvas de Distribuição dos Tempos de Residência (DTR), ao modelo PDE, encontrou-se valores de Pe, N e j , para a condição em que se obteve o grau de pureza de 100%, iguais a 50, zero e 97%, respectivamente, indicando que ocorreu uma baixa dispersão axial na coluna, que não houve formação de camada estagnada e, como conseqüência, a fluidização do leito não foi comprometida. A análise estatística dos dados do planejamento experimentaI aponta que a temperatura e o grau de expansão têm efeito significativo e positivo sobre a pureza da alfa-Iactalbumina e dos parâmetros Pe e j, que apenas a temperatura possui efeito significativo e negativo sobre a recuperação, e que o grau de expansão e a temperatura têm efeitos negativos sobre o parâmetro N / Abstract: In the present work, the effect of temperature, degree of expansion and sedimented bed high on purification and recovery of alpha-Iactalbumin, on column efficiency in adsorbing all the bovine whey proteins and the fluidodynamic behaviour of expanded column bed in presence of buffer solution and bovine whey, are studied. The fluidodynamic evaluation was performed by quantitative analysis of Pe, N and j parameters which were obtained by using the PDE mathematical model. An experimental factorial design was used as a tool to verify the multivariable affect. Alpha -Iactalbumin is a hydrophobic protein and gets bonded with calcium ion. This bonding results in a conformational change of its structure making it more hydrophilic. This property is strategically explored for the process of purification to understand the adsorption process, the equilibrium isotherm of bovine whey for alpha-Iactalbumin and for beta-Iactoglobulim at 34 ºC , and for apha-Iactalbumin and for beta-lactoglobulim, separately and together, at 25 and 34 ºC, were obtained using well stirred tanks. It was observed that alpha-Iactalbumin adsorbs more strongly on the hydrophobic adsorbent than the beta-lactoglobulim. Alpha-Iactabumin having 100% purity, detected by HPLC analysis, was obtained by the adsorption process, using an expanded bed column of 15 cm bed high, with 2,75 degree of expansion at 30 ºC. The protein recovery was approximately 9,5%. The values of parameters Pe, N and j formed were 50, zero and 97% respectively, which were obtained from the PDE model of the Residence Time Distribution (RTD) curves, thus indicating that in the column, low axial dispersion occurs and there is no formation of a stagnant layer and, consequently, the bed fluidization is not affected. Statistical analysis of the experimental design data points shows that the temperature and degree of expansion have significant and positive effect on the purity of the alpha-Iactalbumin and for the parameters Pe and j, only temperature affects significantly and negatively the protein recovery and that the degree of expansion and temperature have negative effects on the parameter N / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Cesar Costapinto Santana / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:14:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nobrega_ElcimardaSilva_D.pdf: 4909659 bytes, checksum: 64e320460f31099ab346eb27a752a0ab (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O uso da técnica de separação cromatográfica de componentes por recido apresenta alguns aspectos relevantes como melhorar o rendimento da separação, diminuir o uso de solvente e o aumento da produtividade. O uso do reciclo na forma de Reciclo Externo Estacionário (REE) é usualmente comparado à técnica cromatográfica de separação binária por Leito Móvel Simulado (LMS), diferente desta que opera em regime estacionário e é verdadeiramente contínuo, o REE é um sistema repetitivo, porém descontínuo. No presente trabalho foi utilizada a técnica de Redclo Externo. Estacionário para separação e purificação de uma mistura binária de proteínas em colunas cromatográficas com resinas de exclusão de tamanho G200. As proteínas utilizadas foram a a-Lactalbumina e p-Lactoglobulina. O processamento de uma mistura binária dessas proteínas no REE forma um perfil cromatográfico onde no início e no fmal deste perfil é verificado a presença das respectivas proteínas puras e no meio do perfil encontra-se a mistura das duas proteínas, esta região é recirculada ao mesmo tempo em que uma nova amostra é injetada no processo. As frações de proteínas retiradas foram analisadas por HPLC utilizando uma coluna de troca iônica. Os resultados mostram que as aplicações do REE na separação e purificação das proteínas em questão apresentaram purezas e rendimentos elevados, mas também foi observado um fator de concentração menor que 1,0 o que justifica o complemento por outra etapa de processo de purificação para a obtenção das proteínas individuais mais concentradas. Os modelos matemáticos aplicados à filtração em gel em coluna cromatográfica foram discretizados através do método da colocação ortogonal. Os sistemas de equações diferenciais e algébricas resultantes foram solucionados através da rotina RUNGE-KUTTA GIL, o modelo matemático serviu para descrever por simulação a técnica de separação por exclusão de tamanho destas proteínas utilizando o Recido Externo Estacionário. Este modelo matemático poderá ser usado para o desenvolvimento de métodos de aumento de escala e otimização do processo de separação do REE / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Spiros M. Constantinides / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos e Agricola / Made available in DSpace on 2018-07-14T13:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reyes_M.TeresaEspinosaDelRiode_M.pdf: 23547499 bytes, checksum: 75d6a481d69f9174f18a46bbfb6a4c4c (MD5) Previous issue date: 1976 / Resumo: O presente trabalho tem como objetivo o estudo de algumas das propriedades funcionais do plasma de frango, o valor biológico de sua proteínas e sua utilização em panificação. Para este estudo foi utilizado como anticoagulante solução de citrato de sócio, na concentração final de 0,5%. O sangue, coletado durante a sangria dos animais, foi misturado com o anticoagulante, obtendo-se o sangue líquido, que foi centrifugado, separando-se a! massa celular do plasma. O plasma líquido sobrenadante que representa cerca de 70% do sangue total, foi dializado e seco por liofilizaçao. Utilizou-se ainda para comparação, outra amostra de plasma não dializado. Na analise química encontrou-se uma maior concentração de proteína e menor concentração de cinzas no plasma dializado, quando comparado com o plasma não dializado. Foram estudadas as características de solubilidade em meio aquoso e em diferentes faixas de pH. Encontrou-se menor solubilidade das proteínas do plasma não dializado no pH 4,5 com 53% de N solúvel, enquanto que para o plasma dializado foi no pH 5, com 21% de Nitrogênio solúvel. Um aumento da solubilidade das proteínas no pH de mínima solubilidade foi observado na presença de 0,1 ou 0,2 5 M de NaCl. A determinação de albuminas e globulinas nas proteínas do plasma mostra que. 56% das proteínas estão constituídas por albuminas e 44% por globulinas. A análise de aminoácidos mostra que o único aminoácido limitante dais proteínas do plasma de frango, e a isoleucina,cujo conteúdo atinge 93% em relação ao padrão. Também foi estudada a digestibilidade enzimática, com pepsina e pancreatina, encontrando-se 83% de digestibilidade no plasma não dializado e 92% no plasma dializado, o que representa sob este ponto de vista um produto excelente para o consumo humano. No isolamento das proteínas do plasma verificou-se que a mais alta recuperação das proteínas(87%)é obtida quando o plasma e primeiramente alcalinizado ã concentração de 0,2 N de NaOH, e depois precipitadas as proteínas no pH de nínima solubilidade.A analise de aminoácidos desta proteína isole da mostra uma grande deficiência em cistina. Por eletroforese em gel de poliacrilamida foi possível a separação de 9 tipos diferentes de proteína. A eletroforese em gel de poliacrilamida contendo uréia. revelou que pelo menos 5 unidades estruturais constituem as proteínas. Toe eletroforese em gel de poliacrilamida contendo SDS(dodecil sulfato de sódio) , foram separadas 9 frações de proteínas, determinando-se os pesos moleculares dos polipeptideos e encontrando-se um máximo de 115,000 e um mínimo de 24,000. Por eletrofocalização em gel foram separadas 3 frações de proteínas com pontos isoeletricos de 5,7; 5,3 e 4,8. < A avaliação nutricional dos plasmas mostram valores de PERC quociente de eficiência proteica) ligeiramente superiores ao da caseína, ê as curvas de crescimento dos atos alimentados com as dietas dos plasmas foram semelhantes às da caseína, comprovando-se o alto valor biológico das proteínas do plasma de frango. Foram feitos testes de panificação adicionando plasma dializado ou não dializado em diferentes concentrações, observando-se um aumento de volume do pão quanto maior a concentração de plasma dializado, e uma diminuição do volume quando se aumentou a concentração de plasma não. dializado. Comparou-se os valores de PER obtidos com as dietas de pão comum (controle) e com as dietas de pão elaborado com a adição de plasma dializado. Encontrou-se para o pão controle um PER de 0,87, que se elevou para 1,67 com a adição de 2,5% de plasma, e ate 2,02, com a adição de 5% de plasma em relação â farinha. As curvas de crescimento mostram uma grande diferença entre os ratos alimentados com as dietas de pão com farinha não fortificada e aquelas eic que o plasma foi adicionado, levando ã conclusão que houve uma complementação dos aminoácidos de ambas as proteínas / Abstract: The objectives of the present work were to study some of the functional properties of chicken blood plasma, the biological value of its proteins and its utilization in baking. In this study a 0.5% solution of sodium citrate was used as an anticoagulant. The blood which was collected during the bleeding of the animals, was mixed with the anticoagulant, and the liquit, blood was centrifuged to separate the cellular portion from -"he plasma. The plasma, a supernatant fraction which represents about 70% of the total blood volume, was dialyzed and freeze-dried. Another sample of plasma was left undialyzed for comparison. , Proximate analysis showed that-the. dialyzled plasma contained a higher concentration of protein and a smaller concentration of ash in comparison to plasma which was not dialyzed. The solubility' characteristics in aqueous medium were studied in different pH ranges. It was found that the minimum protein solubility of the non-dialyzed plasma occurred at pH 4,5 with 53% of the N being soluble. On the other hand for the dialyzed plasma the lowest solubility occurred at pH 5.0 with 21% of the N being soluble. An increase in solubility of the proteins at the pH of minimum solubility was observed in the presence of 1.0 or 0.25 N of NaCl. The albumins were found to make up 56% and the globulins 44% of the total proteins of the plasma. Amino acid analysis showed that the only limiting aminoacid of the proteins of chicken blood plasma, was Isoleucine, being 93% of the FAO standard, Digestibility of the freeze-dried plasma was studied using pepsin and pancreatine. The digestibility of the non-dialyzed plasma was found to be 83% and for the dialyzed sample 92%. This showed that plasma was an excellent product for human consumption; Upon isolating the proteins of plasma it was shown that the highest recovery of proteins (87%) was obtained when the plasma was first alkali-treated with 0.2 N of Na3H. Subsequently the proteins were precipitated with HCl at the pH of minimum solubility. Amino acid analysis of this protein isolate showed a great deficiency in cystine. Polyacrylamide-gel electrophoresis gave a pattern with nine different types, of. proteins, Urea-gel electrophoresis showed five protein bands while SDS gel electro ,hypothesis (sodium dodecyl sulfate) gave nine protein banda with a maximum molecular weight of 115,000 and a minimum of 21,000. With gel electro focusing 3 fractions with isoelectric points of 5.7, 5.3 and 4.8 were separated. Nutritional evaluation of plasma using the PER ( protein efficiency ratio ) method showed slighthy higher PER values than casein. The growth curves of rats fed on plasma were similar to those of casein-fed rats indicating the high biological value of proteins from chicken blood plasma. Baking tests were conducted by introducing either the dialyzed or the non-dialyzed plasma in the bread at three different levels. Increase in loaf volume was observed with increasing concentration of dialyzed plasma, while a decrease of loaf volume was observed with increasing concentration of non-diatyzed plasma. The PER values obtained with the common bread (control bread) and the bread in which plasma had been added were compared. For the control bread a PER of 0.87 was observed. This was raised to 1.67 upon fortification with plasma at the 2.5% level, and to 2,02 with fortification at the 5% level. The growth curves showed a great difference between rats fed a diet consisting of bread not fortified and those fed a diet consisting of plasma added to the bread. The amino acids of both protein Sources, that of the wheat flour and of the blood plasma appeared to complement one another / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos