Orientador: Alba Regina Monteiro Souza Brito / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T06:29:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_AndersonLuiz_M.pdf: 825572 bytes, checksum: 468996185c179fde452041e13b4dcbab (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Anacardium humile St. Hil. conhecida popularmente como cajuzinho-do-cerrado é uma planta com hábito arbustivo que pertence à família Anacardiaceae e ao gênero Anacardium; é tipicamente tropical, sendo encontrada nos cerrados e em algumas regiões da Mata Atlântica. Essa planta é utilizada na medicina popular contra inflamações em gerais e distúrbios gastrointestinais. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar a atividade antiulcerogênica de extrato e frações da A. humile St. Hil. A partir do extrato metanólico (EMeOH) da A. humile St. Hil. duas frações foram obtidas, uma acetato (FAc) e outra aquosa (FAq). O EMeOH dessa espécie, nas doses de 250, 500 e 1000 mg.kg-1, via oral, foi estudado apenas em modelos de úlceras induzidas agudamente (etanol, piroxicam). Já as frações FAc e FAq nas doses de 50 e 200 mg.kg-1, respectivamente, além dos modelos de úlceras induzidas agudamente (etanol e piroxicam); também foram avaliados no modelo crônico (ácido acético 30 %) em camundongos e ratos. A via intraduodenal foi empregada somente para as frações no modelo de ligadura do piloro. Tanto extrato, quanto frações, inibiram significativamente as lesões ulcerativas desencadeadas pelos diferentes agentes. Também foram observadas alterações significativas nos parâmetros bioquímicos da secreção gástrica, como elevação do pH na FAq. Estes resultados sugeriram atividade anti-secretória e citoprotetora para essa fração. No pré-tratamento com as frações, apenas FAq produziu, no modelo de úlcera por acido acético, redução da área da lesão. Adicionalmente, verificou-se que a atividade antiulcerogênica da FAc está relacionada ao aumento da PGE2, justificando o aumento do muco aderido. Grupamento sulfidrilas protéicos perecem estar envolvidos com a atividade de ambas frações, enquanto que 39 óxido nítrico participa apenas da ação da fração FAc. Análises cromatográficas e RMN preliminares demonstraram que a FAc contém ácido gálico, galato de metila, catequina, amentoflavona. Na FAq as mesmas análise demonstraram uma grande quantidade de taninos. O conjunto de dados permite concluir que a atividade antiulcerogênica do extrato e das frações da A. humile St. Hil. está relacionada à ação anti-secretória dos taninos e dos flavonóides existentes nessa espécie / Abstract: Anacardium humile St. Hil. known as popularly ¿cajuzinho-do-cerrado¿ is a plant with arbustivo habit that belongs to the Anacardiaceae family and the Anacardium genus, is typically tropical, being found in the Cerrado, a savannah like vegetation and some regions of Mata Atlântica. This plant is used in the popular medicine against inflammations gastrointestinal. Thus, the objective of this work was to evaluate the antiulcerogenic activity of extract and fractions of the A. humile St. Hil. From the metanólico extract (EMeOH) of the A. humile St. Hil. two fractions had been gotten, an acetate (FAc) and another aqueous (FAq). The EMeOH of this species, in the doses of 250, 500 and 1000 mg.kg-1, v.o. was studied only in models of induced ulcers acutely (ethanol, piroxicam). Already the fractions FAc and FAq in the doses of 50 and 200 mg.kg-1 respectively, beyond the models of induced ulcers acutely (ethanol and piroxicam) the chronic model (acid acetic 30 %) was evaluated, in mice and rats. The intraduodenal way was only used for the fractions in the model of pylorus-ligated. As much extract how much fractions had inhibited significantly the ulcerative injuries unchained by the different agents. Significant alterations in the parameter biochemists had been observed in the gastric secretion, as rise of pH in the FAq. These results had suggested anti-secretory and citoprotetora activity for this fraction. In the pretreatment with the fractions, only FAq produced, in the acetic acid-induced ulcers, reduction of the area of the injury. Additionally, the increase of mucus was verified that the antiulcerogenic activity of the FAc is related to the increase of the PGE2, justifying the increase of adhered mucus. Endogenous sulfhydryl perish to be involved with the activity of both fractions, while that nitric oxide is involved only with the FAc. Fraction preliminary chromatographic analyses and RMN they had demonstrated that the FAc contains acid gallic, methyl gallate, catequin, amentoflavone. In the FAq this analysis had demonstrated a great amount of tanning barks. The data set allows to conclude that the antiulcerogenic activity of the extract and the fractions of the A. humile St. Hil. is related to the anti-secretory activity of tannin and the existing flavonóides in this species / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Alba Regina Monteiro Brito, Miguel Arcanjo Areas / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Magri_LucianaDiPietro_D.pdf: 4729160 bytes, checksum: b3c34c4c64bacd32f55e1d6e0b6548e5 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Estudos têm relacionado o consumo de fibra alimentar, principalmente na forma solúvel, com o aumento da capacidade protetora das mucosas gástrica e duodenal. A polpa de laranja (PL), goma guar (GG) e a mistura (100:40) polpa de laranja/goma guar (PLG) foram utilizadas como fonte de fibras, e caracterizadas física e físicoquimicamente, apresentando as seguintes características: fibra total (82,6%, 71,1 % e 76,1%, respectivamente); GG apresentou predominância da fração solúvel (75%), enquanto PL e PLG apresentaram 32,2% e 32,6% de fração insolúvel, respectivamente. Os efeitos antiulcerogênicos da PL, da GG e da mistura PLG foram verificados em experimentos agudos de úlcera gástrica por etanol, indometacina, ligadura do piloro, e na úlcera crônica por ácido acético, além do modelo de úlcera duodenal por cisteamina. Também investigou-se o efeito da PL, GG e PLG na determinação de muco aderido à mucosa gástrica, na síntese de prostaglandina e sobre as concentrações plasmáticas de gastrina e somatostatina. As fontes de fibras foram fornecidas: 1) por gavagem, em dose simples de 160 mg/Kg (tratamento agudo) diluída em salina, anteriormente ao agente indutor de úlcera; 2) incluídas na dieta (20%) em detrimento ao amido, durante 30 dias (tratamento crônico). PL, administrada cronicamente, protegeu a mucosa gástrica apenas no modelo de ligadura do piloro (64%) e reduziu a taxa de mortalidade dos animais no modelo de cisteamina, enquanto que GG e PLG mostraram significante reparação no modelo de úlcera por ácido acético (37,3% e 39,4%, respectivamente), reduziram a incidência da úlcera duodenal (20% e 30%, respectivamente) e impediram a morte dos animais no modelo de cisteamina (0% para ambas). PL, administrada agudamente apenas inibiu lesão gástrica no modelo de indometacina (30%) e reduziu área da lesão intestinal no modelo de cisteamina (87,5%), enquanto que GG e PLG, apresentaram significativa proteção gástrica nos modelos de etanol (67,8% e 50,7%, respectivamente), indometacina (81,3% e 83,4%, respectivamente) e ligadura do piloro (67% e 58%, respectivamente). GG e PLG também produziram alteração significativa na secreção gástrica (aumento de 358% e 260%, respectivamente), no pH (aumento de 212% e 157%, respectivamente) e na concentração total de ácido (redução de 30% e 54%, respectivamente); entretanto, frente ao agente cisteamina, a PLG não ofereceu proteção significativa, e a GG reduziu em 68.8% a área da lesão ulcerativa. GG e PLG aumentaram significativamente a síntese de prostaglandina na mucosa gástrica (38% e 37%, respectivamente), assim como a concentração do muco cito protetor (84% e 40%, respectivamente). GG e PLG promoveram ainda significante redução (80%) nos níveis plasmáticos de gastrina e aumento nos níveis de somatostatina (210% e 300%, respectivamente). A análise morfológica dos estômagos dos ratos submetidos à tratamento crônico de dietas com GG e PLG não mostrou alterações significativas, enquanto que a PL reduziu em 42% a espessura da camada muscular gástrica em relação à dos animais controle. O número de células secretoras de muco da região gástrica foi significativamente maior nos animais que consumiram dietas ricas em GG e PLG (32,5% e 37,3%, respectivamente). A análise do duodeno mostrou que a fibra GG provocou aumento significativo de duas vezes na camada mucosa e submucosa do duodeno, enquanto que PL e PLG não produziram alterações significativas em nenhuma das camadas. O intestino grosso apresentou a camada muscular significativamente reduzida nos animais que ingeriram PL, GG e PLG (27,5%, 38,8% e 62,3%, respectivamente), enquanto que as vilosidades só apresentaram aumento significativo nos animais que receberam GG e PLG (145,7% e 197,7%, respectivamente). As demais camadas (mucosa e submucosa) não sofreram alterações significativas na presença das fibras em estudo. Em conclusão, os efeitos antiulcerogênicos das fibras GG e PLG devem-se, a um sinergismo entre ação mecânica local, aumento nos fatores de proteção da mucosa (muco, prostaglandina e somatostatina) e redução do fator agressivo da mucosa (ácido clorídrico) / Abstract: Works have related the consumption of dietary fibers, mainly in the soluble form, with the increase of the protective capacity of the gastric and duodenal mucous membranes. The orange pulp (OP), the guar gum (GG) and the (100:40) mixture orange pulp/guar gum (OPG) were used as fiber sources and the physical and physicochemical characteristics were characterized, presenting the following results: total fibers (82.6%, 71.1 % and 76.1 %, respectively); GG presented predominance of soluble fraction (75%), while OP and OPG presented 32.2% and 32.6% of insoluble fraction, respectively. The antiulcerogenic effects of OP, GG and OPG were verified in acute models of gastric ulcer by ethanol, indomethacin, pylorus ligature and chronic ulcer by acetic acid, besides the model of duodenal ulcer by cysteamine. The effect of OP, GG and OPG were also investigated in the determination of mucus adhered to gastric mucous, in the prostaglandin synthesis and under the plasmatic concentrations of gastrin and somatostatin. The fibers sources were provided by: 1) gavage in a single dose of 160 mg/Kg (acute treatment) diluted in saline, previously to the inductor agent of ulcer; 2) included in the diet (20%) replacing amidogen during 30 days (chronic ingestion). OP, chronically provided, protected the gastric mucous only in the model of pylorus ligature (64%) and reduced the mortality rate of the animals in the cysteamine model, while GG and OPG presented significant reparation in the acetic-acid ulcer model (37.3% and 39.4%, respectively), reduced the incidence of duodenal ulcer (20% and 30%, respectively) and avoided the death of animals in the cysteamine model (0% for both). OP, acutely provided, only inhibited gastric lesion in the indomethacin model (30%) and reduced the area of intestinal lesion in the cysteamine model (87.5%), while GG and OPG presented significant gastric protection in the ethanol (67.8% and 50.7%, respectively), indomethacin (81.3% and 83.4%, respectively) and pylorus ligature (67% and 58%, respectively) models. GG and OPG also produced significant change in the gastric secretion (increase of 358% and 260%, respectively), in pH (increase of 212% and 157%, respectively) and in the total acid concentration (decrease of 30% and 54%, respectively). However, considering the cysteamine agent, OPG did not offer significant protection and GG reduced in 68.8% the area of ulcerous lesion. GG and OPG increased significantly the synthesis of prostaglandin in the gastric mucous (38% and 37%, respectively), as well as the concentration of cytoprotector mucus (84% and 40%, respectively). GG and OPG also promoted significant reduction (80%) in the plasmatic gastrin levels and increase in the somatostatin levels (210% and 300%, respectively). Morphologic analysis of the stomach of rats submitted to chronic ingestion of diets with GG and OPG did not show significant changes, while OP reduced in 42% the thickness of the gastric muscular layer compared to control animals. The number of secretor cells of the gastric-region mucus was significantly greater in the animals that were submitted to enriched GG and OPG diets (32.5% and 37.3%, respectively). The duodenum analysis showed that the GG fiber provoked a significant increase (double) in the mucous and submucous layer of the duodenum, while OP and OPG did not produce significant changes in any layer. The large intestine presented the muscular layer significantly reduced in the animals that ingested OP, GG and OPG (27.5%, 38.8% and 62,3%, respectively), while the vilosities only presented significant increase in the animals that received GG and OPG (145.7% and 197.7%, respectively). The other layers (mucous and submucous) did not suffer significant changes in the presence of the worked fibers. In conclusion, the antiallergenic effects of GG and OPG fibers are due to synergistic effects among local mechanic action, increase of mucous protection factors (mucus, prostaglandin and somatostatin) and reduction of the mucous aggressive factor (hydrochloric acid) / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Alba Regina Monteiro Souza Brito / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T13:51:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_AnaBeatrizAlbinode_D.pdf: 2292912 bytes, checksum: 3f63493f2fe0b0bec47f5062e6279418 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Onodorpicrina, uma sesquiterpeno lactona, presente nas folhas de Arctium Lapa L. demonstrou através dos estudos de Barbosa et at (1993) erficaz atividade farmacológica. Com base nesses resultados e, devido ao fato, de nosso laboratório possuir estudos em relação à atividade antiulcerogênica de outras sesquiterpeno lactonas (desidrocrotonina e crotonina) obtidas das cascas de Croton cajucara Benth, decidimos estudar a atividade antiulcerogênica e antiinflamtória intestinal da fração semi-purificada (ONP), cujo composto majoritário é a onopordopicrina. Primeiramente estudamos o efeito da citotoxicidade da ONP avaliado através da viabilidade celular em fibroblastos (V79) de pulmão de Hamster chinês. A ONP apresentou IC50 aproximadamente de 15µM nos ensaios de MTT, vermelho neutro e conteúdo de ácido nucléico. Por ser uma substância com uma toxicidade relativa resolvemos estudar o efeito antitumoral dessa substância em linhagem celular de leucemia promielocítica (HL60) usada como modelo para estudos antitumorais. Da mesma forma que nos ensaios de citotoxidade, a ONP apresentou IC50 aproximadamente de 15 µM em ensaios de MTT e PTP. Para avaliar a atividade antiulcerogênica da ONP, foram utilizadas diferentes doses em modelos clássicos de indução de úlcera: etanol/HCl, estresse por imobilização e frio, indometacina e ligadura de piloro. Em todos os modelos a ONP apresentou atividade antiulcerogênica significativa. Nos procedimentos seguintes, avaliamos a atividade antisecretora da ONP através de ensaios de somatostatina e gastrina, nos quais a substância apresentou aumento da liberação e/ou produção de somatostatina e diminuição da produção e/ou liberação de gastrina. Em relação ao estudo da ONP em experimentos de muco e óxido nítrico, essa não apresentou diferença significativa. No entanto, promoveu diferença significativa no modelo de avaliação do envolvimento de radicais sulfidrila, indicando uma possível atividade antioxidante. Quando avaliada em modelo de colite ulcerativa induzida por TNBS, a ONP apresentou significativa proteção provavelmente pelo envolvimento da mieloperoxidase (MPO) e fator de necrose tumoral (TNF-alfa). Visto a atividade obtida com a ONP, resolvemos analisar a atividade do chá de Arctium lappa, o qual apresentou significativa envolvimento com óxido nítrico e grupamento sulfidrila para a obtenção da atividade antiulcerogência promovida pelo chá. Os resultados obtidos com a Arctium lappa são promissores, por causa de sua significativa proteção contra úlceras induzidas por diferentes agentes, sugerindo um efeito antisecretor mediado por sua ação na secreção de Somatostatina e Gastrina e um efeito protetor proporcionado pela propriedade antioxidante presente na ONP. Os dados também revelaram que o pré-tratamento com ONP é capaz de reduzir a inflamação intestinal produzida através do modelo de indução de colite ulcerativa por TNBS em ratos. O efeito agudo antiinflamatório provavelmente está relacionado com a diminuição de neutrófilos e diminuição da produção de TNF-a na mucosa intestinal. Nossos resultados sugerem um significativo potencial terapêutico da ONP na area gastrointestinal / Abstract: Onodorpicrin, a sesquiterpene lactone, present in the leaves of Arctium lappa L., showed through the studies of Barbosa et al (1993) effective pharmacological activity. Based on those results and due to the fact that our laboratory has studies in relation to the antiulcerogenic activity of other sesquiterpene lactone (dehydrocrotonin and crotonin) obtained by barks of Croton cajucara Benth, we decided to study the antiulcerogenic activity and bowel antiinflamatory of the semi-purified fraction (ONP), which majority compound is the onopordopicrin. Firstly we studied the effect of the citotoxicity of appraised ONP through the cellular viability in fibroblast (V79) of lung of Chinese Hamster. ONP presented IC50 approximately of 15µM in the MTT, red neutral and content of nucleic acid experiments. For being a substance with a relative toxicity we decided to study the effect antitumoral of that substance in cellular lineage of promyelocytic leukemia (HL60) used as model for antitumoral studies. In the same way that in the citotoxicity experiments, ONP presented IC50 approximately of 15 µM in experiments of MTT and PTP. To evaluate the antiulcerogenic activity of ONP, different doses were used in classic models of ulcer induction: ethanol/HCl, stress for immobilization and cold, indometacin and pylorus ligature. In all of the models ONP presented significant antiulcerogenic activity. In the following procedures, we evaluated the activity antisecretory of ONP through somatostatin and gastrin experiments, in which the substance presented increase of the liberation and/or somatostatin production and decrease of the liberation and/or gastrin production. In relation to the study of ONP in mucus experiments and nitric oxide, that one didn't present significant difference. However, it showed significant difference in the model of evaluation of the involvement of radicals sulphydryl, indicating a possible antioxidant activity. When evaluated in model of colitis ulcerative induced by TNBS, ONP presented significant protection probably for the involvement of the mieloperoxidase (MPO) and factor of necrosis tumoral (TNF-alpha). Checked the activity obtained with ONP, we decided to analyze the activity of the tea of Arctium lappa, which presented significant involvement with nitric oxide and sulphydryl group for the obtaining of the antiulcerogenic activity promoted by the tea. The results obtained with Arctium lappa are promising, because the significant protection against ulcers induced by different agents suggesting a effect antisecretory mediated through somatostatin and gastrin secretion and protective effect by the antioxidant properties present in ONP. The data also reveals that pre-treatment with ONP is able to reduce intestinal inflammation in theTNBS model of colitis in rats.The acute antiinflamatory effects seem to be related to impairment of neutrophil function and absence of up-regulation of TNF-a production in intestinal mucosa. Our findings suggest that ONP shows an excellent potential for therapy in the gastrointestinal area / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Alba R. M. Souza Brito / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T11:08:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gracioso_JulianodeSouza_D.pdf: 10003815 bytes, checksum: 311ad859c34cdd071ac98036e486ef88 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: T. ulmifolia e T. diffusa são plantas que pertencem à família Turnerácea encontrada em países de clima tropical e subtropical, inclusive no Brasil. Estas plantas são utilizadas na medicina popular do México, Estados Unidos, Ilhas do Caribe e Brasil para o tratamento de diversas patologias incluindo disfunções sexuais, inflamação e distúrbios gástricos e intestinais. No Brasil e na maioria destes países T. ulmifolia e T. diffusa são conhecidas popularmente como Chanana e Damiana, respectivamente. Os efeitos toxicológicos agudos dos extratos de diferentes polaridades e dos infusos obtidos a partir das partes aéreas de cada espécie foram analisados e testados em diferentes doses, e nenhuma morte ou sinal de toxicidade foi observada até a dose de 5000 mg/kg, administrada por via oral, em camundongos. Estas amostras foram também testadas em diferentes experimentos de indução de úlcera gástrica em camundongos tais como o modelo de estresse, indometacina e betanecol, HCl/etanol e ligadura do piloro além de modelos de indução de úlcera duodenal e úlcera crônica em ratos, para avaliação de seu potencial antiulcerogênico. Os extratos administrados em dose de 100 mg/kg e os infusos administrados em doses de 100, 250, 500 e 1000 mg/kg, por via oral ou intraduodenal, inibiram as lesões induzidas pelo HCI/etanol; pelo estresse e aquelas induzidas por indometacina e betanecol, em camundongos. Estas amostras também alteraram os parâmetros bioquímicos da secreção gástrica, aumentando o pH do conteúdo gástrico e diminuindo a quantidade de íons H+ no suco gástrico. Em relação aos infusos, ambos não foram eficazes em inibir o aparecimento de úlceras duodenais em ratos, mas foram eficazes em inibir o desenvolvimento da colite aguda nesta mesma espécie. A análise bioquímica das amostras de cólon destes animais revelou que o tratamento com o infuso de T. ulmifolia foi eficaz em aumentar os níveis de glutationa total no tecido lesado enquanto que o tratamento com o infuso de T. diffusa foi eficiente em diminuir os níveis de mieloperoxidase no tecido colônico. Ambos infusos, em doses de 500 e 1000 mg!kg, foram eficientes em reduzir a área da lesão ulcerativa crônica em estômago de ratos após 14 dias consecutivos de tratamento, por via oral. A análise da produção de muco na mucosa gástrica dos animais revelou que a administração dos infusos foi eficaz em aumentar a quantidade de muco livre nesta mucosa. O tratamento com os infusos também foi eficaz em impedir a degradação de prostaglandinas citoprotetoras na mucosa gástrica quando um potente inibidor da cic1ooxigenase foi previamente administrado aos animais. Em relação aos ensaios da atividade antioxidante in vitro foi demonstrado que os infusos de T. diffusa e T. ulmifolia inibem a peroxidação lipídica das membranas isoladas de figado de ratos. A IC50 obtida para cada infuso foi de 7,18 e 16,4 ug/ml, respectivamente, confirmando, o potencial antioxidante dos compostos químicos presentes em cada espécie. A análise dos resultados sugere que os mecanismos de ação relacionados a atividade antiulcerogênica e antiinflamatória intestinal apresentadas estão relacionados com o aumento e manutenção dos mecanismos de defesa da mucosa gástrica, tais como a produção de muco, manutenção da síntese de prostaglandina e atividade antioxidante dos compostos presentes em cada amostra vegetal. Ensaios fitoquímicos revelaram que os compostos majoritários encontrados em ambos infusos são flavonas derivadas da luteolina e apigenina. A análise dos resultados e, as informações fitoquímicas obtidas, em comparação às informações contidas em literatura específica permitem concluir que, os resultados farmacológicos obtidos com a administração dos infusos de T. ulmifolia e T. diffusa estão diretamente relacionados à presença dos flavonóides identificados em cada infuso. A baixa toxicidade observada em experimentos in vivo e os resultados farmacológicos obtidos confirmam as indicações populares das espécies para o tratamento de inflamações intestinais e úlceras gástricas, indicando que o gênero Turnera constitue-se em uma nova fonte de flavonóides farmacologicamente ativos para o tratamento distúrbios digestivos em geral / Abstract: T. diffusa and T. ulmifolia are plants that belong to the Tumeraceae family, They are found in tropical and subtropical climate countries, including Brazil. These plants are used in the popular medicine of Mexico, United States, Caribbean Islands and Brazil for the treatment of several pathologies including sexual dysfunction, inflammation and gastric and intestinal disturbances. In Brazil and in most of these countries T. ulmifolia and T. diffusa are popularly known as Chanana and Damiana, respectively. The acute toxicological effects of the different polarity extracts and of the infusions obtained from the aerials parts of each species have been tested and analyzed in different doses; no deaths or toxicity symptons were noted until the dose of 5000 mg/kg, orally administered, in mice. These samples have been also tested in different gastric ulcer induction experiments on mice such as the stress, indomethacin and bethanechol, HCl/ethanol and pylorus ligated model and also on the duodenal ulcer and chronic ulcer model in rats. The extracts administered in doses of 100 mgJkg and the infusions administered in doses of 100, 250, 500 and 1000 mg/kg, by oral or intraduodenal route, inhibited the lesions induced by HCl/ethanol, stress, indomethacin and bethanechol in mice. These samples also altered the biochemical parameters of gastric secretion, increasing the gastric content' s pH and decreasíng the amount of H+ íons in the gastric juices. The infusions, althought not effective in inhibiting the onset of the duodenal ulcer in rats, were effective in inhibiting the development of the acute colitis in the same species. The biochemical analysis of these animal's colon revealed that the treatment with T. ulmifolia infusion was effective in increasing the levels of the total gluthationa in the injured tissue while the treatment with T. diffusa infusion was effective in decreasing the levels of myeloperoxidase in the colonic tissue. Both infusions, at doses of 500 and 1000 mg/kg, were efficient in reducing the chronic ulcerous injured area in the rat' s stomachs after fourteen consecutive days of treatment, by oral route. The analysis of the mucus production in the mice gastric mucous revealed that the infusions' administration was effective in increasing the amount of free mucus. The treatment with the infusions was effective in avoiding the citoprotective prostaglandin degradation in the gastric mucous when a cicloxigenase potent inhibition was previously administered to the animals. Related to the in vitro antioxidant activity tests, it has been demonstrated that T. diffusa and T. ulmifolia infusions inhibited lipidi peroxidation of the rat's liver isolated membrane. The IC50 % obtained was 16,4 and 7,18 ug/ml, respectively, confirming the antioxidant potential of the chemical compounds present in each species. These results suggest that the mechanisms of action related to the gastric antiulcerogenic activity and anti inflammatory effect presented in these plants are related to the increase and maintenance of the integrity of gastric mucous and prostaglandin synthesis and also to the potent antioxidant activity presented by the infusions. Phytochemical analysis revealed that the major compounds found in both infusions are flavones derivated from luteolin and apigenin. The analyses of these results and the phytochemical information obtained, compared to the existing information in the specific literature, allow the conclusion that the pharmacological results obtained with the administration of T. ulmifolia and T. diffusa infusions are directly related to the presence of identified flavonoids in each infusion. The low toxicity noted in vitro experiments and the pharmacological results confirm the popular indication of the species for the treatment of intestinal inflammation and gastric ulcers, suggesting the Turnera genus constitutes a new source of pharmacological active flavonoids for the treatment of digestive distinctions in general / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Valdemiro Carlos Sgarbieri / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-01T18:51:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosaneli_CarolineFilla_M.pdf: 15461582 bytes, checksum: 29f90ad28325126351e63f38a873f0bd (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As proteínas do soro de leite têm sido utilizadas na prevenção e/ou tratamento de patologias por apresentar atividade imunomodulatória,ação antibacteriana e antiviral, ação anticancerígena, efeito positivo no combate às infecções e processos inflamatórios, promoção da síntese de glutationa, além de efeito citoprotetor da mucosa. Os objetivos deste trabalho foram investigar o possível efeito do concentrado de soro de leite bovino (CSL) na proteção da mucosa gástrica nos modelos de úlcera gástrica induzida por indometacina, etanol, estresse por imobilização e frio e por reserpina. No modelo de úlcera induzida por indometacina e etanol os animais receberam tratamento agudo, repetitivo e subcrônico, e nos modelos por estresse por imobilização e frio e por reserpina, tratamento agudo e repetitivo. Para determinar o mecanismo específico de ação do CSL na citoproteção gástrica utilizou-se N-etilmaleimida (NEM), um alquilante dos grupamentos sulfidríla e sulfoximina de butionina (BSO), um bloqueador da enzima y-glutamilcisteína-sintetase que participa da síntese. da glutationa, ambos no modelo de úlcera induzida por etanoL A participação do CSL na citoproteção gástrica foi demonstrada nos modelos de úlcera induzida por indometacina e etanoL A utilização do NEM revelou que o CSL tem importante participação nos efeitos protetores da mucosa gástrica através de grupamentos sulfidríla. Os experimentos realizados com BSO demonstraram que o CSL participa da síntese da glutationa que está envolvida neste processo antiulcerogênico. Nos modelos de úlcera induzida por estresse por imobilização e frio e por reserpina o CSL parece não ter participação na proteção gástrica. Nestes casos, os modelos de indução estão envolvidos no estímulo à secreção ácida gástrica. O CSL revelou-se um importante coadjuvante dietético no tratamento e/ou prevenção de úlceras gástricas, através do mecanismo de citoproteção. / Abstract: Milk whey proteins have been suggested for the prevention and/or treatment of several pathology due to the following actions: immunomodulation, antiviral and antibacterial activity, anticarcinogenic and antiinflamatory activity, stimulation of glutathione synthesis and mucosal citoprotection. The objective of this investigation was to search for the protective effects of a bovine milk whey protein concentrate (WPC) on gastric mucosa by induced models of gastric ulcer using indomethacin, ethanol, immobilization and cold and reserpine as ulcerogenic agents. For indomethacin and ethanol induced ulcer the rats were submited to acute, repetitive and subchronic treatments. For the ulcers induced by stress, immobilization in the cold and resepine, acute and repetitive treatments were applied. Specific mechanism of action was explored by the use of N-ethylmaleimide (NEM) a sulphydryl alkylating agent and buthionine sulfoximine (BSO) an inibitor of gammaglutamylcysteine synthetase, an enzyme indispensable for glutathione synthesis. Both blocking agents were tested for the ethanol induced type of ulcer only. The effectiveness of protection for the WPC was demonstrated for indomethacin and ethanol induced models of gastric ulcers. The utilization of NEM revealed that WPC act as inhibitor of gastric ulcerative lesions (ULI) through active sulphydryl (SH) compounds. On the other hand, the BSO experiment revealed the participation of glutathione in the gastric mucosa ulcerative lesion protection. No significant action of the WPC in the protection of gastric mucosa against immobilization and cold stress and reserpine as was observed these models are involved in the gastric acid secretion. Therefore WPC constitutes important dietetic adjuvant for the prevention or treatment of certain types of stomach ulcers, mainly through a cytoprotection mechanism. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Alba Regina Monteiro Souza Brito / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias / Made available in DSpace on 2018-08-13T20:43:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Faria_FelipeMeirade_M.pdf: 4207314 bytes, checksum: 70c7146121839f75d360ebf1de64eb88 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A pesquisa farmacológica têm se voltado ao conhecimento da medicina popular, a fim de estabelecer as bases científicas dos seus efeitos farmacológicos. Atualmente taninos têm papel de destaque em função de sua capacidade antioxidante e em função dos avanços obtidos na análise e identificação desses compostos além de suas possibilidades terapêuticas. Entre as diversas fontes naturais desses compostos destacou-se, neste trabalho, uma planta bastante conhecida nos ambientes costeiros, a Rhizophora mangle L. (manguevermelho), pertencente à família RHIZOPHORACEAE. O gênero Rhizophora compreende cinco espécies das regiões equatorial, tropical e subtropical de ambos os hemisférios. É uma das mais importantes fontes de taninos (15 a 36% da massa da casca seca) para uso industrial. R. mangle é conhecida na medicina popular caribenha por suas propriedades antinflamatória, antifúngica, bactericida, anti-úlcera, antihipertensiva e antioxidante. Este trabalho avaliou as atividades antiulcerogênica e antioxidante de R. mangle, assim como traçou o perfil químico das substâncias presentes em suas cascas. Para tanto foram realizados ensaios químicos e farmacológicos com o extrato bruto (acetona:água 7:3) e frações orgânicas (aquosa - fr aq, acetato de etila - fr-EtOAc e butanólica - fr-BuOH) dele obtidas. A análise da atividade antiulcerogênica do extrato e frações, mostrou que fr-BuOH foi mais eficaz na dose de 0,5mg.Kg-1. Essa fração também apresentou atividade antioxidante significativa. Nos ensaios químicos realizados, tanto para o extrato bruto quanto para as frações, verificou-se a existência de alta concentração de compostos polifenólicos. Os testes farmacológicos com a fr-BuOH buscaram determinar os mecanismos pelos quais são exercidas as atividades antiulcerogênica e antioxidante das substâncias nela presentes. Concluiu-se que fr-BuOH possui catequinas heterosídeos, galotaninos, elagitaninos e taninos complexos em sua composição, de acordo com métodos de análise empregados. Estas substâncias mostraram-se capazes de sequestrar radicais livres, atuar sobre compostos (GSH) e enzimas antioxidantes (GR, GPx e SOD) e próoxidantes (MPO e LPO) definindo sua atividade antioxidante. A atividade antiulcerogênica além de ser mediada pela própria ação antioxidante é dependente de GSH e NO, envolve a participação de PGE2, COX-2, EGF, PCNA, HSP-70, além do aumento da produção de muco aderido e propriedades anti-secretoras / Abstract: The pharmacological research has been focusing on the folk medicine knowledge in order to establish the scientific basis of their pharmacological effects. Nowadays, tannins play a prominent role because of its high antioxidant capacity and, due to the progress made in the analysis and identification of these compounds and their therapeutic possibilities. Among the many natural sources of these compounds, highlighted in this work a well known plant in coastal environments, the Rhizophora mangle L., belonging to the family RHIZOPHORACEAE. The genus includes five species of Rhizophora in equatorial, tropical and subtropical regions in both hemispheres. It is one of the most important sources of tannin (15 to 36% of the dry bark weight) in industrial use. Rhizophora mangle is well known in the Caribbean folk medicine for its anti-inflammatory, antifungal, antibacterial, anti-ulcer, anti-hypertensive and antioxidant properties. This study aimed to evaluate the antioxidant and anti-ulcer activities of R. mangle, and to elucidate the chemical compounds present in its barks. For both evaluations chemical and pharmacological assays with the crude extract (acetone: water 7:3) and their organic fractions (aqueous - fr-aq, ethyl acetate - fr-EtOAc and butanolic - fr-BuOH) were performed. The analysis of anti-ulcer activity of the extract and fractions showed that fr-BuOH was more effective at a dose of 0,5 mg.Kg-1. This fraction also showed significant antioxidant activity. It was found the presence of high concentrations of polyphenolic compounds in the chemical assay performed for both the crude extract and its fractions. The pharmacological experiments were carried out to determine the mechanisms by which the compounds present in fr-BuOH exert their antiulcer and antioxidant activities. It was concluded that the fr-BuOH has antioxidant activity linked to the concentration of polyphenolic compounds, which were able to scavenge free radicals, maintain the levels of GSH, reduce the MPO activity and LPO levels and maintain or increase the antioxidant enzymatic activities of GR, GPx and SOD. Moreover, the antiulcer activity of fr-BuOH is mediated by several mechanisms including: antioxidant action; involvement of GSH and NO; anti-secretory properties; increase of mucus and PGE2 synthesis, and expression of COX-2, EGF, HSP-70 and PCNA on gastric mucosa. Chemical study revealed that the major compounds are heteroside catechins, gallotannins and "tannin complexes" / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Alba R. M. Souza Brito / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T06:30:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Batista_RangelWillians_M.pdf: 2463513 bytes, checksum: 90bd2dae3ec5cefb9c37861d828c29dd (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Em processos de ulcerogênese por isquemia-reperfusão há grande liberação de radicais livres causando peroxidaçâo lípidica e desestruíuração proteica pela oxidação de grupos -SH, o que altera funções da membrana e de enzimas e leva à disfunção celular e necrose tecidual. Ensaios fitoquímícos revelaram que infusos de Turnera diffusa e T. ulmifolia tem como compostos majoritários flavonas C- glicosiladas derivadas de luteonina e apigenina. A atividade antiulcerogênica destes infusos está comprovada, porém faltam estudos sobre o potencial antioxidante. Relacionando o potencial antioxidante de flavonóides e a atividade antíúlcera do extrato, mostramos in vitro que 50 pg/ml salina do extrato de T. ulmifolia e T diffusa protegem em 58 e 47% a oxidação de GSH proteico na mitocôndria oxidada por 10 uM Fe+2 e 200 uM ascorbato, respectivamente. E proteção de 12 e 50% em mitocôndria oxidada por 1,5 mM Pi e 10pM CaCb, demonstrando poder de manter grupos -SH intactos durante diferentes sistemas de danos à mitocôndria. O potencial de estabilizar a membrana foi corroborado com a diminuição na peroxidaçâo lípidica de 62 e 67% para 7. ulmifolia e T diffusa, respectivamente. Quando testados em úlcera por isquemia-reperfusão como modelo in vivo houve uma diminuição no índice de úlceras de 59 e 69%; com diminuição da peroxidaçâo lípidica de 50 e 51% e manutenção na [-SH] total de até 100% na mucosa gástrica para T. ulmifolia e T diffusa, quando comparadas à salina. / Abstract: Turnera ulmifolia L. and Turnera diffusa Wild are known in folk medicine for treatment of several gastric diseases. Other studies have previously reported anti-ulcer activity and this relationship with your majority composition to be flavonoids. Natural flavonoids are known for scavenging properties on oxygen radicals in vivo and in vitro. The oxyradicals generated during the proposed episodes of ischemia-reperfusion provoke severe changes in mitochondria-generated ROS, induce peroxidation of the membrane lipids and oxidation -SH compounds. Therefore, agents that inhibit the oxidation thiol groups, as well as lipid peroxidation, may be of high pharmacological potential. This work showed activity antioxidant when used mitochondria systems in vitro, both species tea plants exhibited effect to inhibit lipid peroxidation and oxidation thiois proteins compounds induced by FeC^/ascorbic acid, succuiate/rotenone or CaCyinorganic phosphate (Pi). Our experiments in vivo demonstrated effect anti-ulcer and antioxidant to both species in models ischaemia-reperfUsion-ulcer-induced after administration orally tea T. diffusa e T. ulmifolia inhibit lesion ulcer index when compared with control group. And in gastric mucosa exhibited effect to inhibit lipid peroxidation or oxidation -SH total compounds. In model ethanol/HCl-ulcer-induced Turnera ulmifolia show effect anti-ulcer partial dependent to compounds SH and Turnera diffusa demonstrated to be independent effect anti-ulcer to SH compounds. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Valdemiro Carlos Sgarbieri, Durvanei Augusto Maria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-09T10:14:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_GeorgiaAlvaresde_D.pdf: 11428319 bytes, checksum: 35439f6a0fe2edb2363b7aa078ebd0fa (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O principal objetivo deste projeto foi avaliar as propriedades fisiológicas potenciais de hidrolisados de colágeno (HC) e de um isolado protéico de soro de leite bovino (WPI) em relação aos efeitos anti-ulcerativo e anti-tumoral em roedores. O projeto apresenta uma parte tecnológica que envolve a produção do WPI e hidrolisados de colágeno (Gelita) com diferentes distribuições de massa molecular. Para obter as frações protéicas utilizadas neste estudo, responsáveis por estes atributos, uma caracterização foi conduzida por fracionamento através de microfiltração utilizando tecnologia de membranas e sistema FPLC por cromatografia de permeação em gel e de fase reversa. Estas tecnologias foram utilizadas para obtenção dos hidrolisados de colágeno com diferentes massas moleculares e do isolado protéico de soro de leite (WPI), para possibilitar a caracterização química e avaliações bioquímica/ fisiológica em suas atividades anti-úlcera e anti-tumoral. Os produtos elaborados a partir desta tecnologia de fracionamento foram caracterizados de acordo com o grau de hidrólise, composição de aminoácidos, massa molecular e número de peptídios, utilizando metodologias estabelecidas. Hidrolisados de colágeno bovino e suíno apresentaram características diferentes quanto ao grau de amidação e teor de amônio total, assim como na eletrofocalização. Os perfis cromatográficos de permeação em gel foram semelhantes, mas a atividade biológica em meio com células de melanoma B16F10 também diferiu. A combinação destas duas proteínas para avaliação dos efeitos anti-ulcerativo e anti-tumoral, também foi utilizada. Atenção especial foi dedicada a uma melhor compreensão da rota metabólica e mecanismos de ação destas duas proteínas e seus peptídios nos ensaios biológicos (modelo com ratos e camundongos, respectivamente). Para investigar o efeito anti-ulcerativo, ratos Wistar com 250-300g de peso corpóreo foram utilizados. Experimentos com dose única e repetitivas foram feitos para avaliar os efeitos destas proteínas na redução ou inibição da úlcera gástrica. A participação das substâncias sulfidrila ativas provenientes da glutationa (GSH), aminoácidos e ligações inter e intra- cadeias polipeptídicas, no mecanismo de proteção, foi estudada através da alquilação total do grupo reativo SH pela Netilmaleimida (NEM). Algumas respostas fisiológicas foram avaliadas como a produção de muco gástrico e gastrina durante o modelo experimental de úlcera induzida por etanol. A atividade inibitória em modelo de úlcera gástrica induzida por etanol foi também distinta nos hidrolisados bovino (BCH) e suínos (PCH), apresentando o hidrolisado suíno em torno de 60% de inibição das lesões ulcerativas quando administrado em dose única 750mg/Kg de peso corpóreo. No experimento de dose dupla a porcentagem de inibição das lesões ulcerativas gástricas dos hidrolisados bovinos foi maior que 70% quando administrado 1500 mg/Kg pc. Quando foram realizadas combinações de hidrolisados de colágeno bovino ou suíno com WPI, obteve-se uma combinação otimizada para BCH:WPI (50:50) na concentração de 375mg/Kg, com mais de 70% de inibição das lesões ulcerativas gástricas. Os hidrolisados de colágeno levaram ao aumento da produção de muco na mucosa gástrica e o WPI à inibição com a participação das substâncias sulfidrila não protéica na atividade inibitória das lesões gástricas. Na avaliação in vitro com as células B16F10 e os hidrolisados de colágeno bovino e suíno e suas frações obtidas por micro e ultrafiltração, assim como aquelas provenientes da cromatografia por HPLC de fase reversa, mostraram que estas últimas apresentaram a menor concentração inibitória para 50% das células (IC50), também apresentando aumento na fase de apoptose com significativo aumento na porcentagem de expressão da caspase-3 nos meios contendo as frações F1, F2 e F3. O estudo de propriedade anti-tumoral foi conduzido utilizando camundongos C57BL/6J. Animais saudáveis foram injetados (transplantados) com células tumorais de melanoma murino B16F10 na área dorsal para avaliar a implantação tumoral, progressão, caquexia observando a perda de peso e outros sintomas, metástase, capacidade proliferativa do tumor assim como sua classificação de acordo com o volume, tamanho e número. Os mecanismos nos quais a dieta protéica pode estar envolvida, avaliando a fase do ciclo celular, apoptose e efeitos anti-proliferativos no tecido tumoral foram também objetivos deste estudo. Protocolos utilizando quimioterápico foram seguidos com aquelas dietas protéicas que apresentaram melhor resposta contra a tumorigênese considerando outros mecanismos que poderiam estar envolvidos. No modelo de tumorigênese in vivo com células de melanoma B16F10 observouse uma menor porcentagem de mortalidade, maior porcentagem de sobre-vida e aspectos macroscópicos vantajosos para o grupo de animais C57BL/6J que ingeriram American Institute of Nutrition (AIN-93) tendo como fonte protéica BCH: WPI (50:50) e tratamento quimioterápico. O ciclo celular também sofreu alteração com as diferentes dietas. A fase G0/G1 tanto no grupo com tratamento quimioterápico como no grupo sem quimioterápico foi significativamente aumentada para os grupos dietéticos com BCH e BCH-P1 + WPI. A porcentagem de apoptose aumentou para BCH+WPI com tratamento quimioterápico. A capacidade proliferativa das células B16F10 diminuiu para os grupos de camundongos C57BL/6J que se alimentaram de hidrolisados de colágeno sem tratamento quimioterápico e quando houve quimioterapia associada somente aqueles grupos que receberam a combinação das duas proteínas BCH ou BCHP1 com WPI tiveram uma diminuição significativa da capacidade proliferativa das células B16F10 / Abstract: The main objective of this project was to evaluate the potential physiological properties of collagen hydrolysate (CH from Gelita) and a whey protein isolate (WPI) in relation to anti-ulcerative and anti-tumoral effects in rodents. The project presents a technological part, which involves the WPI production with different molecular masses. To obtain the proteic fractions used in this study responsible for these attributes, a characterization was conducted using fractionation through microfiltration using membranes technology and FPLC system through gel permeation and reverse phase chromatography. These technologies were used to obtain the collagen hydrolysate with different molecular masses and the whey protein isolate (WPI) to allow the chemical characterization and biochemical and physiological evaluations of their anti-ulcerative and anti-tumoral activities. The elaborated products obtained from these fractionation technologies and also the products from GELITA (derivatives of collagen) were characterized according to degree of hydrolysis, amino acids composition, molecular mass and peptide number, using established methodologies. Bovine and porcine collagen hydrolysates presented different characteristics concerning degree of amidation and total ammonium content, as well as in isoelectric focusing. The chromatographic profiles in gel were similar, but the biological activity in cellular medium of melanoma B16F10 also differed. Combination of these two types of proteins to evaluate anti-ulcerative and antitumoral effects were also done. Special attention was dedicated to better understanding of metabolic routes and mechanisms of action of these two proteins and their peptides in biological assays (models with rats and mice, respectively). To investigate the anti-ulcerative effect Wistar rats (250-300g bw) were used. Experiments with single and double doses were conducted to evaluate the effect of these proteins in reduction or inhibition of gastric ulcer. The participation of active sulfhydryl compounds, from gluthatione, aminoacids and inter-, intra- polypeptides chains, in protection mechanism, was studied through alkylation of SH reactive groups using N-ethylmaleimide (NEM). Some physiological responses were evaluated, as mucus and gastrin production, during experimental model of ulcer induced by ethanol. The inhibitory activity in gastric ulcer model induced by ethanol was also distinct for these two hydrolysates, bovine (BCH) and porcine (PCH). The porcine hydrolysate presented around 60% of ulcerative lesion inhibition when 750mg/Kg body weight was administrated at single dose. For double dose experiment the percentage of inhibition for bovine hydrolysate was higher than 70% when 1,500mg/Kg bw was administrated. When was tested combinations of either bovine or porcine collagen hydrolysate with WPI a optimized combination was obtained BCH:WPI (50:50) at 375mg/Kg bw of concentration presenting more than 70% gastric ulcerative lesion inhibition. The collagen hydrolysate led to increased mucus production in gastric mucosa while WPI caused in addition an inhibition by non-proteic sulfhydryl compounds participation in the inhibitory activity of gastric lesions. In vitro evaluation using B16F10 cells, the bovine and porcine collagens hydrolysates and their fractions obtained through micro and ultrafiltration, as well as those obtained by reverse phase chromatography (F1, F2, F3), showed the lowest inhibitory concentration for 50% of cells (IC50), presenting increased apoptosis percentage and a significant increase of caspase-3 expression. The study of anti-tumoral property was conducted using mice C57BL/6J. Healthy animals were injected (transplanted) with tumoral cells of murine melanoma B16F10 in dorsal area to evaluate the tumoral implantation, progression, caquexia observing the body weight loss and other symptoms, metastasis, proliferative capacity of the tumor, as its classification according to volume, size and number. The mechanisms involving the protein in the diet for evaluating cell cycle phases, apoptosis and anti-proliferative effects in tumoral tissue development were also objectives of this study. Protocols using chemotherapic were followed with protein which presented better response against tumorigenesis considering other mechanisms that could be involved. In tumorigenesis, in vivo model using B16F10 melanoma cells, a lower percentage of mortality, longer survival percentage and better macroscopic aspects were observed for C57BL/6J animal groups, fed American Institute of Nutrition (AIN-93) with BCH:WPI (50:50) as protein source plus chemotherapic treatment. The cellular cycle also suffered alteration with different diets. The G0/G1 phase for both groups treated and non-treated with chemotherapic increased significantly for the dietetic groups BCH or BCH-P1 + WPI. The apoptosis percentage increased for BCH+WPI+ChTP (with chemotherapic treatment). The proliferative capacity of B16F10 cells was reduced in the groups fed collagen hydrolysate without chemotherapic treatment and when the chemotherapic was associated only the groups that received both proteins BCH or BCH-P1 with WPI showed a significant reduction of proliferative capacity of these cells / Doutorado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Doutor em Alimentos e Nutrição

Orientador: Valdemiro Carlos Sgarbieri / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-04T13:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mezzaroba_LeoniceFatimaHoger_M.pdf: 1147865 bytes, checksum: 8e30210b748cf78769bb1bcfbba59462 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A a-lactalbumina tem sido recentemente associada com redução de estresse, imunomodulação, atividade antimicrobiana após proteólise, propriedade anticancer e atividade antiulcerogênica. Os objetivos deste trabalho foram definir uma metodologia para a obtenção da a-lactalbumina e da b-lactoglobulina a partir de um concentrado de proteínas de soro de leite bovino e investigar a atividade antiulcerogênica da a-lactalbumina (produzida em laboratório e uma preparação comercial), da a-lactalbumina comercial hidrolisada e duas frações de seu hidrolisado (F1 < 1kDa e F2 > 1kDa) na proteção da mucosa gástrica em modelos de úlcera induzida por indomentacina e etanol absoluto em ratos, bem como, avançar na investigação das vias metabólicas de ação protetora. Para o isolamento da a-lactalbumina e da b-lactoglobulina a partir do concentrado de soro de leite bovino utilizou-se o sistema FPLC da Pharmacia e coluna de troca aniônica (resina Q Sepharose fast flow), e a fração correspondente a a- lactalbumina foi em seguida purificada por exclusão molecular utilizando-se a resina Sephacryl S-200. A b-lactoglobulina foi facilmente isolada por cromatografia de troca iônica apresentando-se quase homogênea e com um rendimento de 82%; para a a-lactalbumina, foi necessária uma etapa de purificação, e a proteína semi purificada apresentou contaminantes e baixo rendimento (32%). Para avaliar a ação antiulcerogênica da a-lactalbumina e de seus hidrolisados em modelo de úlcera induzido por indomentacina ou por etanol absoluto os animais receberam duas doses das amostras teste em dias consecutivos. Para avaliar possíveis vias de ação protetora foram estudadas suas participações na secreção ácida gástrica através da ligadura do piloro, a participação de substâncias sulfidrila e prostaglandinas na citoproteção gástrica em modelos de úlcera induzida por etanol absoluto. A a-lactalbumina comercial (Davisco Foods International, INC.) foi à amostra que apresentou maior porcentagem de inibição do índice de lesões ulcerativas no modelo de úlcera induzida por indometacina. No modelo de úlcera induzida por etanol absoluto, a a-lactalbumina (produzida em laboratório e a comercial) e frações de seu hidrolisado (F1 e F2) inibiram as lesões gástricas em níveis significativos na mesma ordem. A investigação das vias metabólicas de ação protetora, mostrarram que as amostras não alteraram a concentração ácida total após 4 horas de piloro ligado, sugerindo que a atividade antiulcerogênica desta proteína parece não ser mediada pela via da secreção ácida gástrica. A alquilação de grupamentos sulfidrila, envolvidos no mecanismo de citoproteção gástrica com N-etilmaleimida (NEM), eliminou o efeito protetor da a-lactalbumina e de frações de seu hidrolisado à mucosa gástrica, sugerindo que a ação antiulcerogênica parece depender da participação destas substâncias. A inibição da síntese de prostaglandina pela indometacina, bloqueador da síntese de prostaglandinas pela inibição da ciclooxigenase, não impediu que a a-lactalbumina (produzida em laboratório e a comercial) e a fração do hidrolisado de peso molecular >1kDa protejesse a mucosa gástrica a níveis significativos, sugerindo uma menor dependência de prostaglandina para a ação protetora dessas amostras. Já a fração do hidrolisado de peso molecular <1kDa perdeu sua atividade, evidenciando a participação de prostaglandinas na citoproteção gástrica por esta fração peptídica. A confirmação do envolvimento de prostaglandinas no mecanismo de ação antiulcerogênica por peptídios derivados da a-lactalbumina foi realizada através da quantificação do muco gástrico e da determinação da concentração de PGE2 na mucosa gástrica. Os resultados obtidos sugerem que há um conjunto de mecanismos envolvidos na proteção exercida pela a- lactalbumina e frações de seu hidrolisado enzimático sobre a mucosa gástrica, sendo estes, a participação de substâncias sulfidrila e aumento dos níveis de prostaglandina E2 na mucosa gástrica / Abstract: The a-lactalbumin has been recently associated with reduction of stress, immunomodulation, antimicrobial activity after proteolysis, anticancer and antiulcerogenic activity. The purpose of this work was to define a methodology for obtaing a-lactalbumin and b-lactoglobulin from a bovine whey protein concentrate and to investigate the antiulcerogenic activity of the a-lactalbumin (produced in laboratory and a commercial preparation ¿ Davisco Foods International, INC.), of the hidrolyzed commercial a-lactalbumin and two fractions of this hidrolysate (F1<1kDa and F2 >1kDa), in the protection of gastric mucosa induced by indomethacin or absolute ethanol induced ulcer in rats, as well as, to advance in the inquiry of the metabolic pathways of protective actions. For the isolation of the a-lactalbumin and of b-lactoglobulin from the bovine whey protein concentrate a Pharmacia FPLC system with anion exchange column (Q-Sepharose fast flow resin) was used. Alpha-lactalbumin was further purified by molecular exclusion chromatography using Sephacryl S-200 column. The b-lactoglobulin was easily isolated from ionic exchange chromatography presenting good purity and 82% yield; for the a-lactalbumin, a second stage of purification was necessary, and the partially purified protein still presented some contaminants and a low yield (35%). To evaluate the antiulcerogenic action of the a-lactalbumin and its hidrolysates for indomethacin and absolute ethanol induced ulcer in rats, the animals received two doses of the samples in consecutive days. To determine possible mechanisms of protection to the gastric mucosa, the effect in the gastric acid secretion through the tied piloro technique, the participation of sulfhydryl substances and prostaglandins were studied. For the indomethacin induced ulcer only the commercial a- lactalbumin inhibited the gastric injuries, while in the absolute ethanol induced ulcer all the samples were able to reduce the gastric injuries at significant levels. The inquiry of the metabolic pathways of protective action showed that the samples did not modify the concentration of the total acid after 4 hours tied piloro, suggesting that the antiulcerogenic activity of these proteins and peptides seem not to be mediated by the mechanism of gastric acid secretion. The alkylation of sulfhydryl groups with N-ethylmaleimide (NEM), partially eliminate the protective effect of the a-lactalbumin and its hidrolysates on the gastric mucosa, suggesting the participation of these groups in the antiulcerogenic action. The inhibition of the prostaglandin synthesis with indomethacin did not eliminate the protection offered by a-lactalbumin and the hydrolysate fraction of molecular weight > 1kDa. However the protection offered by the hydrolysate fraction of molecular weight < 1kDa was completely neutralysed by the indomethacin cycloxygenase inhibition, suggesting that a-lactalbumin low peptides seem to protect the gastric mucosa via the prostaglandin cycle. The confirmation of the envolvement of prostaglandins in the mechanism of antiulcerogenic action by a-lactalbumin peptides was substanciated through the quantification of gastric mucus and the determination of the PGE2 concentration in the gastric mucosa. These results suggest that there are more than one mechanism for the stomach cytoprotection against ulcerogenic factors a-lactalbumin and its hydrolysates. While intact a-lactalbumin and high molecular weight peptides seem to depend on the sulfhydryl groups for protection, low molecular weight peptides (MW < 1kDa) seem to act by stimulation of prostaglandin synthesis / Mestrado / Mestre em Alimentos e Nutrição

O objetivo deste estudo foi analisar a participação do PCV2 no desenvolvimento de ulcerações gástricas em suínos. Descrevem-se as lesões macroscópicas e histopatológicas nas diferentes zonas do estômago de suínos naturalmente infectados pelo PCV2 e H. pylori. As lesões foram descritas nas diferentes zonas do estômago. Os estômagos coletados eram provenientes de granjas com diagnóstico prévio de infecção pelo PCV2 durante os anos de 2006 à 2008. A presença dos agentes foi verificada por técnicas de imunoistoquímica (IHQ). Dentre os 63 estômagos processados, 30 não apresentavam ulcerações no quadrilátero, sendo que 16 deles apresentavam marcação anti-PCV2 positiva em alguma das regiões analisadas. Apenas 06 casos não apresentavam marcação anti-PCV2 nos dos tecidos testados (estômago e linfonodo). Marcação positiva anti-PCV2 foi verificada em 56 linfonodos, dos quais 28 estômagos foram positivos para PCV2 em alguma zona da mucosa glandular. Grandes quantidades de antígeno do PCV2 foram observadas pela IHQ no citoplasma, núcleo e restos necróticos de células intralesionais das glândulas gástricas nas regiões do antro e cárdia; entretanto, na região do fundo, a marcação de IHQ anti-PCV2 foi restrita às células da superfície mucosa e fossetas gástricas. Marcação de IHQ anti-H. pylori foi identificada em 27 casos, principalmente, na superfície mucosa e fossetas gástricas no antro. A associação de antígenos PCV2 com células produtoras de muco lesadas na zona glandular gástrica sugere o envolvimento de PCV2 como um fator adicional para o desenvolvimento de úlceras gástricas em suínos. / The aim of this study was to describe macroscopical and histopathological found in different zones of stomachs collected from pigs naturally infected with PCV2 and H. pylori. lesions were described in the different zones of the stomach. Stomachs were collected during the years of 2006 to 2008 from herds previously diagnosed as positive for PCV2 infection. The presence of the agents was determined by immunohistochemical techniques. Among 63 stomachs examined, ulceration of the Pars oesophagica was not observed in 30 stomachs, although, 16 of them showed positive PCV2 immunostaining in some of the areas tested. PCV2 immunostaining was not observed in only six cases in any of the tested tissues (stomach and lymph node). PCV2 positive immunostaining was observed in 56 lymph nodes and in some zones of the glandular mucosa, in 28 stomachs. Large amounts of PCV2 antigen were observed in the cytoplasm and nucleus of intralesional cells and in debris of gastric glands of antrum and cardia. However, anti-PCV2 immunostaining was restricted to superficial mucosal cells and gastric pits, in the fundus. H. pylori immunostaining was observed in 27 cases, mainly pn the mucosal surface and gastric pits of the antrum. The association of PCV2 antigen with damaged glandular mucus-producing cells in the gastric glandular zone suggests a role of PCV2 as an additional factor for the development of swine gastric ulcers.