Submitted by LUNA MARES LOPES DE OLIVEIRA (DINTER) null (lunamares@saolucas.edu.br) on 2017-01-27T02:26:31Z No. of bitstreams: 1 CAPITULO TESE - LUNA MARES LOPES DE OLIVEIRA.pdf: 792305 bytes, checksum: 7e19ae8eb4ac1ad2447d7290d4746ef9 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-01-31T13:11:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveira_lml_dr_araca.pdf: 792305 bytes, checksum: 7e19ae8eb4ac1ad2447d7290d4746ef9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T13:11:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveira_lml_dr_araca.pdf: 792305 bytes, checksum: 7e19ae8eb4ac1ad2447d7290d4746ef9 (MD5) Previous issue date: 2016-01-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As propriedades antimicrobianas da romã são atribuídas aos compostos fenólicos, mais especificamente aos taninos hidrolisáveis (THs) galotaninos (ácido gálico) e elagitaninos (ácido elágico), substâncias naturais de defesa da planta. Os objetivos deste estudo foram avaliar os níveis de ácido elágico e fenóis totais, rendimento dos métodos de extração e o potencial inibitório sobre Candida albicans de extratos de partes da Punica granatum. Amostras em triplicata de cascas, sementes e folhas desidratadas, trituradas, pulverizadas, foram submetidas a dois métodos de extração: soxhlet tendo como solventes etanol e metanol e percolação tendo como solvente o etanol. Após a obtenção dos extratos, foram determinados os teores de ácido elágico por cromatografia liquida de alta eficiência e fenóis totais expressos em ácido gálico pelo método espectrofotométrico. A atividade antifúngica dos extratos foi avaliada pelo método de difusão em disco, seguindo-se as normas do National Committee for Clinical and Laboratory Standards (NCCLS document M2-A8, 2003a.). As maiores concentrações de fenóis totais e de ácido elágico foram encontradas nas folhas e na casca da romã. Verificou-se maior eficiência de rendimento por meio da percolação. Os resultados de difusão em disco revelaram maior sensibilidade da cepa de C. albicans aos extratos etanólicos da casca por ambos os métodos de extração. O método percolação alcoólica a 70% e 25ºC e a casca da romã apresentaram a maior eficiência de extração e de atividade anti-fúngica contra uma cepa clínica de C. albicans. / The antimicrobial properties of pomegranate are attributed to the phenolic compounds, more specifically the hydrolyzable tannins (THs) galotaninos (gallic acid) and elagitaninos (ellagic acid), natural plant defense substances. The objectives of this study were to evaluate the levels of ellagic acid and total phenols, yield of the extraction methods and the inhibitory potential against Candida albicans of extracts from parts of Punica granatum. Samples of dried, peels, seeds and leaves were used in triplicates and the extracts were obtained by Soxhlet system and percolation using respectively ethanol, methanol and ethanol solvents. After obtaining the extracts, the ellagic acid contents were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) and total phenols expressed in gallic acid by the spectrophotometric method. The antimicrobial activity was evaluated by the disc diffusion method, following the standards of the National Committee for Clinical and Laboratory Standards (NCCLS document M2-A8, 2003a.). The highest concentrations of THs were found in leaves and pomegranate peel. Greater yield efficiency was verified by percolation. The results of diffusion on disc revealed higher sensitivity of the C. albicans strain to the ethanolic extracts of peels by both methods of extraction, presenting inhibition halos of approximately 10 mm. The alcoholic percolation method at 70% and 25ºC and the pomegranate peel showed the highest extraction efficiency and antifungal activity against a clinical strain of C. albicans. / FAPESP: 2014/08643-2 / CAPES: 88881.030445/2013-1

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo / Durante la temporada 2010/2011 se realizó un ensayo con granados ´Wonderful´ en Huechún conducido como multieje a 5 x 3 m, región Metropolitana; Cerrillos de Tamaya como copa a 6 x 4 m y Vicuña como copa y eje a 3 x 1,5 m en la región de Coquimbo. El objetivo fue evaluar las relaciones entre el peso promedio de frutos, productividad, intercambio gaseoso, incidencia de golpe de sol, partidura, color y ramaleo en diferentes sistemas de conducción y localidades. Para ello, se seleccionaron diez plantas para cada combinación sistema de conducción-localidad, cada uno sometido a diferentes niveles de carga frutal, regularmente distribuidos entre muy baja y muy alta, ajustad luego del cuaje de la segunda cohorte de floración. La carga frutal se expresó como frutos por unidad de superficie de suelo, área de sección transversal de tronco (ASTT) y fracción de radiación interceptada (FI). La FI se midió con un Ceptómetro lineal un mes después del ajuste de carga frutal. El intercambio gaseoso se registró mediante un analizador de gases infrarrojo portátil durante la mañana (AM), el mediodía (MD) y el atardecer (PM) durante el período de activo crecimiento del fruto y pre-cosecha. La fruta cosechada, se clasificó de acuerdo a su calibre. Los daños comerciales como golpe de sol, partidura, color y ramaleo, se expresaron como porcentaje. Se encontró una relación lineal positiva entre la fracción de radiación interceptada y el rendimiento. El peso promedio disminuyó, y la productividad aumentó al aumentar la carga frutal. El intercambio gaseoso aumentó al incrementar la carga frutal. El golpe de sol disminuyó al aumentar la carga mientras la partidura aumentó. El color y el daño por ramaleo no fueron afectados por la carga frutal. El huerto de Huechún tuvo un alto rendimiento promedio pero con una mayor proporción de frutos pequeños, mientras que en Cerrillos de Tamaya la productividad fue baja. En Vicuña, tanto el sistema de copa como eje, presentaron una alta precocidad, buen tamaño de fruto, baja partidura de frutos, por lo que esta zona y sistema de conducción, si se controla el golpe de sol, se proyectan como adecuadas para la producción de granados. Palabras clave: intercambio gaseoso, fracción de radiación interceptada, carga frutal, peso promedio, eficiencia productiva / A trail was conducted during 2010/2011 season, in pomegranate (Punica granatum L.) located in Huechún, Metropolitana Region (training as “multileader at 5x3); Cerrillos de Tamaya (training as vase at 6x4) and Vicuña (training as vase and leader at 3x1.5) Coquimbo Region, Chile. The objective was to determine the relationship between fruit mean weight, productivity, gaseous exchange (P sat) y (gs), and sunburn, cracking, color and russeting effects in different training systems and localities. For this ten plants were selected for own training system and locality, each tree was subjected to different level of crop load, evenly distributed between very low and very high, adjusted after fruit set of second cohort flowering. The crop load was expressed as fruits for unit area, trunk cross-sectional area (TCSA) and intercepted radiation fraction (FI). The intercepted radiation fraction was measured with a lineal ceptometer, one month before crop load adjustment. The gaseous exchange was measured with a portable infrared gas analyzer during afternoon, mid-day and moorning during active fruit growth and pre-harvest. The crop was classified accord to fruit size. The commercial damage with sunburn, cracking, color and russeting were expressed as percentage. Was found a lineal positive relation between the intercepted radiation fraction and yield. The mean weight decreased and yield increase with increasing crop load. The gaseous exchange increases with crop load. Sunburn decreases with crop load,but cracking increases. No relation between color, russeting with the crop load were observed. The higher yield was obtained in Huechún, but a high proportion of little fruit was observed; yield in Cerrillos de Tamaya was low. The vase and central leader in Vicuña have a high precocity, big fruits, and low cracking incidence. If sunburn damage is controlled project vicuña as a good area for pomegranate production in Chile.

Orientador: Sigmar de Mello Rode / Banca: Adriana Aigotti Haberbeck Brandão / Banca: Ana Christina Claro Neves / Banca: José Benedito Oliveira Amorim / Banca: Ricardo Carneiro Borra / Resumo: Embora diversos estudos já tenham sido realizados sobre a Punica granatum L., seus possíveis efeitos citotóxicos não são bem conhecidos. No presente trabalho foi avaliada a toxicidade da Punica granatum L. (PG) por meio de cultura celular com duas linhagens: fibroblastos humanos de mucosa oral (FLM) e células de carcinoma epidermóide oral humano (KB). As células foram submetidas ao teste de viabilidade celular por 24 horas em placas de 96 poços nas concentrações da PG (1%, 0,5%, 0,25%, 0,125%, 0,062% e 0,031%) e aos testes de citotoxicidade celular em placas de 24 poços, em cinco períodos diferentes (4 horas, 1, 3, 5 e 7 dias) e com quatro diferentes concentrações (1%, 0,5%, 0,25%, 0,062%). Todos os testes foram realizados em triplicata e em três momentos diferentes. Foram adicionados dois grupos, um controle negativo (Tryton 10%) e um controle positivo constituído de meio de cultura acrescido de soro bovino fetal 10% e sem o extrato de PG. A quantificação celular foi realizada pelo método do Resazurin, com avaliação por espectrofotometria óptica (espectrofotômetro UVM340 - Asys Hitech GmbH) e leitura de absorbância dos comprimentos de onda de 570 nm a 600 nm. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA (5%). Os resultados de viabilidade mostraram que nas concentrações de 0.031%; 0,062%; 0,125%; 0,25% e 0,05% o extrato de PG inibiu a viabilidade celular (≥ 40%) principalmente das células KB. O teste de citotoxicidade mostrou que apenas as culturas tratadas com PG a 0,062% exibiram citotoxicidade para as linhagens celulares. A PG a 1% foi tóxica para as células FLM e KB. O extrato de PG inibiu a citotoxicidade celular nas demais concentrações testadas. Estes resultados podem ser relacionados a propriedade anticarcinogênica da Punica granatum L. / Abstract: Several studies have been conducted on Punica granatum L., but their cytotoxic effects are not well known. The purpose of this study was to evaluate the cytotoxicity of Punica granatum L. extract (PG) in two cell lines: human oral mucosa fibroblasts (FLM) and cells of human oral squamous cell carcinoma (KB). The cells were analized to viability on 24 h using different concentrations of PG (1%, 0.5%, 0.25%, 0.125%, 0.062% and 0.031%) and to cell proliferation in five different periods (4 h, 1, 3, 5 and 7 days) using four different concentrations of PG (1%, 0.5%, 0.25%, 0.062%). All tests were performed in triplicate and in three different times. There were a negative control (Tryton 10%) and a positive control (culture medium plus 10% SBF, without PG extract). Cell quantification was performed by the Resazurin method, with evaluation by optical spectrophotometry (spectrophotometer UVM340 - Asys Hitech GmbH) and measure of absorbance at a wavelength of 570 nm to 600 nm. Data were submitted to ANOVA (5%). The results showed inhibition of cell proliferation in 0,031%, 0.062%, 0.125%, 0.25% and 0.05% concentrations of PG extract (≥ 40%) specialty to KB cells in comparison to FLM cells. PG 1% was toxic to KB and FLM cells. The proliferation test showed cell proliferation only when using PG 0,062%, for both cell lines and inhibited proliferation whith all other PG concentrations. These effects might be related to the anticarcinogenic properties of PG. / Doutor

Memoria para optar al título profesional de Ingeniera Agrónoma Mención Agroindustria / Actualmente en Chile la producción de granado se encuentra en aumento, siendo la variedad Wonderful, la más cultivada. La mayor superficie se ubica en la zona norte del país. Este trabajo tuvo como objetivos caracterizar física, química y sensorialmente frutos de granado de la variedad Wonderful, provenientes de tres zonas de cultivo y evaluar el efecto de la zona de cultivo en las características del fruto. La fruta provino de tres regiones de Chile: III Región (localidad de Copiapó), IV Región (localidad de Cerrillos de Tamaya) y Región Metropolitana (localidad de Huechún). El peso de los frutos de las localidades estudiadas varió entre 280 y 520 g. Los frutos de las regiones IV y RM presentaron tamaño grande y los de la III región, tamaño muy grande. El color externo, correspondió a Rojo y Rojo intenso, para las regiones III y IV y Amarillo rojizo a Rojo intenso para la Región Metropolitana. El rendimiento promedio de arilos en las tres localidades correspondió a un 40% respecto a peso de fruto entero. El rendimiento de jugo fluctuó entre 58 y 64,7 mL de jugo/100 g arilos, encontrándose los mayores valores en los frutos de la III región. Sin embargo, el rendimiento calculado en base a 100 g de fruta presentó valores similares entre las regiones en torno al 25%. Los valores encontrados en sólidos solubles variaron entre 15 y 16 °Brix y la acidez entre 1 y 1,9 g/100mL. El contenido de fenoles totales varió entre 0,9 y 1,9 g EAG/L y antocianos totales entre 0,3 y 0,9 g por litro, siendo ambos más altos en la IV Región. En relación a la capacidad antioxidante de los jugos se encontró valores de TEAC entre 2,7 y 5,7; presentándose una mayor capacidad antioxidante en los jugos obtenidos de fruta de la III Región. Los resultados indican que la zona de cultivo tiene un marcado efecto en el contenido de compuestos fenólicos, principalmente en el de antocianos. / Nowadays, in Chile the production of pomegranate has increased, being the Wonderful variety, the most important. The main production area is located in the northern region of the country. The aim of this study was to determine the physical, chemical and sensory characteristics of the pomegranate fruit cv. Wonderful grown in three different production areas, in order to evaluate the effect of the growing area in the fruit characteristics. The fruit comes from three regions of Chile: Third Region (locality of Copiapó), Fourth Region (locality of Cerrillos de Tamaya) and Metropolitan Region (locality of Huechún). The fruits weight varied between 280 and 520 g. The fruits of the fourth and the Metropolitan region showed Large size and those of the third region, Very large size. The external color ranged between to Red to Dark-red, for the fruits from the third and fourth regions and Reddish-yellow to Dark-red for the fruits from the Metropolitan Region. The average yield of the arils in the three regions was 40% respect to the whole fruit. Juice yield ranged between 58 and 64.7 mL/100g arils, being the highest values in the fruits of the third region. However, the yield calculated on the based 100 g of fruit showed similar values between the three regions, close to 25%. The values of soluble solids ranged between 15 and 16 °Brix and the acidity between 1 and 1.9g/100mL. The total phenolic content varied between 0.9 and 1.9 g GAE/L, total anthocyanins between 0.3 and 0.9 g per liter, being both higher in the IV region. The antioxidant capacity of the juices was between 2.7 and 5.7 TEAC, being higher in the fruit juice obtained from the third Region. The results show that the grown areas have a marked effect in the content of phenolics compounds, mainly in the anthocyanins.

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo / Durante la temporada 2010/2011 se realizó un ensayo con granados ´Wonderful´ en Huechún conducido como multieje a 5 x 3 m, región Metropolitana; Cerrillos de Tamaya como copa a 6 x 4 m y Vicuña como copa y eje a 3 x 1,5 m en la región de Coquimbo. El objetivo fue evaluar las relaciones entre el peso promedio de frutos, productividad, intercambio gaseoso, incidencia de golpe de sol, partidura, color y ramaleo en diferentes sistemas de conducción y localidades. Para ello, se seleccionaron diez plantas para cada combinación sistema de conducción-localidad, cada uno sometido a diferentes niveles de carga frutal, regularmente distribuidos entre muy baja y muy alta, ajustad luego del cuaje de la segunda cohorte de floración. La carga frutal se expresó como frutos por unidad de superficie de suelo, área de sección transversal de tronco (ASTT) y fracción de radiación interceptada (FI). La FI se midió con un Ceptómetro lineal un mes después del ajuste de carga frutal. El intercambio gaseoso se registró mediante un analizador de gases infrarrojo portátil durante la mañana (AM), el mediodía (MD) y el atardecer (PM) durante el período de activo crecimiento del fruto y pre-cosecha. La fruta cosechada, se clasificó de acuerdo a su calibre. Los daños comerciales como golpe de sol, partidura, color y ramaleo, se expresaron como porcentaje. Se encontró una relación lineal positiva entre la fracción de radiación interceptada y el rendimiento. El peso promedio disminuyó, y la productividad aumentó al aumentar la carga frutal. El intercambio gaseoso aumentó al incrementar la carga frutal. El golpe de sol disminuyó al aumentar la carga mientras la partidura aumentó. El color y el daño por ramaleo no fueron afectados por la carga frutal. El huerto de Huechún tuvo un alto rendimiento promedio pero con una mayor proporción de frutos pequeños, mientras que en Cerrillos de Tamaya la productividad fue baja. En Vicuña, tanto el sistema de copa como eje, presentaron una alta precocidad, buen tamaño de fruto, baja partidura de frutos, por lo que esta zona y sistema de conducción, si se controla el golpe de sol, se proyectan como adecuadas para la producción de granados. Palabras clave: intercambio gaseoso, fracción de radiación interceptada, carga frutal, peso promedio, eficiencia productiva.

Tesis presentada para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo y al Grado de Magíster en Ciencias Agropecuarias, Mención en Producción Frutícola / Con el fin de conocer la acumulación y variación estacional de la biomasa de órganos y estructuras en plantas jóvenes y en producción de granado var. Wonderful, se utilizaron relaciones alómetricas que permitieron estimar los coeficientes de reparto (CR), el índice del área foliar (IAF) y la eficiencia del uso de la radiación (EUR) en ambos huertos. Para construir las relaciones alométricas se utilizó un método directo, en donde se extrajeron 4 árboles de tres años y 2 árboles de cinco años, en los periodos de brotación, cuaja, crecimiento intermedio del fruto, cosecha y receso. Los árboles fueron separados en raíz, estructura caulinar, hojas, frutos y caídas, obteniéndose el peso fresco y seco de cada compartimiento. Antes de la extracción de cada grupo de plantas, se midió su radiación interceptada (PARf) y su área de sección transversal del tronco (ASTT), variables independientes que se relacionaron con el peso seco de los órganos extraídos. Las alometrías (método indirecto) obtenidas, fueron aplicadas en otros 6 árboles de ambos huertos en base a la medición de dichas variables alométricas desde brotación a receso. Además, se marcaron 16 frutos recién cuajados por árbol para realizar el seguimiento de diámetro ecuatorial hasta cosecha. Los resultados indican que las alometrías obtenidas determinaron con un R2 =0,92 la biomasa de granados. El crecimiento anual de biomasa de árboles en producción fue de 14 kg en peso seco. Los frutos representaron el 55% de la biomasa total, alcanzando un CR máximo de 0,8, previo a la cosecha y su crecimiento siguió un patrón de doble sigmoidea. El IAF máximo fue de 2,2 con un PARf de 45% y la EUR se estimó en 1,22 g·MJ-1. Los árboles jóvenes acumularon 2,5 kg en peso seco y los coeficientes de reparto al desarrollo de raíces, caulinar y hojas fueron similares. Su IAF máximo fue 0,6 con un PARf de 22% y una EUR de 0,8 g·MJ-1 / The accumulation and seasonal variation of the biomass of organs and structures, in young and fully-producing pomegranate plants var. Wonderful, were estimated using allometric relationships which allowed to estimate the partition coefficients (CR), the leaf area index (LAI) and the radiation use efficiency (RUE) in both orchards. In order to build the allometric relationships a direct method was used, which included four three year old and two five year old trees which were uprooted during the periods of bud break, fruit set, intermediate fruit growth, harvest and winter dormancy. The fresh and dry weight of the organs of the tree, which were pooled into five compartments (roots, caulinar structures, leaves, fruits and litter) was then measured. Before uprooting the plants, their radiation interception (PARf) and trunk cross-sectional area (TCSA) were measured, which were related to the dry weight of the aboveground organs. The allometric (indirect method) hereby obtained were applied in 6 trees in both orchards using the same biometric measurements from sprouting to winter dormancy. In addition, the equatorial diameter of 16 fruits was tracked from fruit set to harvest. The results gave a determination coefficient of 0.92 for the estimation of the whole plant biomass of pomegranates from the allometric functions. The annual growth of the fruit-bearing trees was estimated at 14 kg dry weight. The fruits accounted for 55% of the total biomass, reaching a maximum CR of 0.8 before harvest and their growth curve followed a double sigmoid pattern. The maximum LAI was 2.2 with a PARf of 45% and the RUE was estimated at 1.22 g·MJ-1. Young trees accumulated 2.5 kg dry weight over the growing season and equally devoted the partition coefficients of root development, caulinar structures and leaves. The maximum LAI of these trees was of 0.6 with a PARf of 22% and a RUE 0.8 g·MJ-1.

Memoria para optar al título profesional de: Ingeniero Agrónomo Mención Manejo de suelos y aguas / Debido a que el granado (Punica granatum L.) var. Wonderful se cultiva principalmente en zonas de suelos marginales y con problemas de escasez de agua, y que la producción de fruta está relacionada con el agua que se suministre, se hace necesario conocer los efectos del déficit hídrico sobre variables fisiológicas, de crecimiento y productivas de la especie. Con dicho fin se aplicaron cuatro tratamientos con distintas tasas de riego en granados, en un predio ubicado en la comuna de Til-til, Región Metropolitana. En un suelo delgado con textura superficial franco arenosa y presencia de sustrato aluvial con matriz arenosa en profundidad.

Estudos relataram a atividade antimicrobina de Equisetum giganteum e Punica granatum, reduzindo o risco do desenvolvimento da estomatite protética, doença relacionada principalmente à colonização das próteses pelo fungo Candida albicans. Diante disso, é necessário que essas plantas sejam bem toleradas pelos tecidos bucais e, se possível, auxiliem no processo de reparo. Objetivo: Realizar um estudo fitoquímico de substâncias potencialmente ativas de Equisetum giganteum e Punica granatum e avaliar a viabilidade de fibroblastos gengivais humanos frente a diferentes concentrações destas plantas, após diferentes períodos in vitro. Material e Métodos: Após a identificação dos compostos das plantas por HPLC-PAD, foram selecionadas as frações com melhor atividade antifúngica perante Candida albicans. Os extratos brutos e frações selecionadas de P. granatum e E. giganteum foram testados em diferentes concentrações (0.23, 0.47, 0.94, 1.88, 3.75, 7.5, 15 e 30 mg) e períodos (12, 24, 36 e 60 h) sobre fibroblastos gengivais humanos (FGH), para a avaliação de suas citotoxicidades através da análise da viabilidade dos FGH, pelo ensaio LIVE/DEAD. Por meio desse ensaio, analisamos quantitativamente a viabilidade celular através das leituras das unidades relativas de fluorescência (URF) e qualitativamente por meio da analise da morfologia e da densidade observadas pela microscopia invertida de fluorescência, após três experimentos independentes para cada período de avaliação. Os resultados quantitativos paramétricos foram representados como média e desvio padrão (SD) com análise de Variância ANOVAOne- Way, seguida da análise comparativa pelo teste de Tukey HSD. Os resultados quantitativos não paramétricos foram apresentados como mediana e quartis e foram submetidos ao teste de Kruskal-Wallis, seguido de análise comparativa pelo teste de Dunn, de acordo com as análises de normalidade (Teste de Kolmogorov-Smirnov). Valores de p< 0.05 foram indicativos de significância estatística. Conclusões: Foram identificados compostos fenólicos, como flavonoides e taninos em E.giganteum e P. granantum, respectivamente. Identificamos uma citotoxicidade concentração-dependente para as duas plantas testadas, independente do tempo. Sob as menores concentrações das plantas a viabilidade e a morfologia dos FGH foram preservadas. Dentro deste contexto, acreditamos na possibilidade de se utilizar essas plantas como terapia alternativa em diversas áreas de saúde, porém em concentrações biocompatíveis. / Studies have reported the antimicrobial activity of Equisetum giganteum and Punica granatum, reducing the risk of development of denture stomatitis, a disease mainly related to the colonization of prostheses by the fungus Candida albicans. In view of this, it is necessary that these plants be well tolerated by the oral tissues and, if possible, assist in the repair process. Objective: To carry out a phytochemical study of potentially active substances of E. giganteum and P. granatum and to evaluate the viability of human gingival fibroblasts against different concentrations of these two plants, after different periods in vitro. Material and Methods: After the identification of the plant compounds by HPLC-PAD, the fractions with the best antifungal activity against Candida albicans were selected. The crude extracts and selected fractions of P. granatum and E. giganteum were tested at different concentrations (0.23, 0.47, 0.94, 1.88, 3.75, 7.5, 15 and 30 mg) and periods (12, 24, 36 and 60 h) against human gingival fibroblasts (FGH), for the evaluation of their possible cytotoxicity through the analysis of the viability of FGH by the LIVE/DEAD assay. By means of this assay we quantitatively analyzed the cell viability through the readings of the relative units of fluorescence (URF) and qualitatively by analysis of the cellular morphology and density using inverted fluorescence microscopy, after three independent experiments. The parametric quantitative results were represented as mean and standard deviation (SD) with ANOVA-One-Way Variance analysis, followed by comparative analysis by the Tukey HSD test. The non-parametric quantitative results were presented as medians and quartiles and were submitted to the Kruskal-Wallis test, followed by comparative analysis by the Dunn test, according to normality tests (Kolmogorov-Smirnov test). Values of p <0.05 were indicative of statistical significance. Conclusions: Phenolic compounds, such as flavonoids and tannins, were identified in E. giganteum and P. granantum, respectively. We identified a concentration-dependent cytotoxicity for the two plants tested, regardless of the time. Under the lowest concentrations of plants the viability and morphology of FGH were preserved when compared to the control. Within this context, we believe in the possibility to use these plants as alternative therapy in several health areas, but in biocompatible concentrations.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FABIANE SCHREINER.pdf: 1371612 bytes, checksum: 4c92bfc09a7b2ad93f1107f9b7633f68 (MD5) Previous issue date: 2016-08-12 / Due to endodontic treatment failure, virulence and increase of antibiotic resistant microorganisms bacterial infections had a greater incidence. Plant extracts are promising resources in the control of biofilms and can be considered a new way to prevent and / or treat infections. Among these natural products, there is the Punica granatum L. (pomegranate),which features bioactive compounds such as flavonoids and phenols. Objective: To analyze, in vitro and ex vivo, the antibacterial effect of auxiliary substances based on Punica granatum L. (pomegranate) against Enterococcus faecalis. Method: After developed the hydroglycolic peel extract of Punica granatum L. , agar diffusion tests, determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) and analysis of toxicity (lethality in microcrustacean - Artemia salina were performed. With this data gel with hydroglicolic extract of P. granatum pericarp (0.5 g/mL) were developed and tested in agar diffusion, as auxiliary substance of endodontic instrumentation and as intracanal medication in infected dentin with E. faecalis by counting colony forming units per milliliter (cfu/mL) in three experimental times. Results: The MIC was 0.5 g/ml and P. granatum gel at this concentration showed 8 mm inhibition zones against E. faecalis. The P. granatum gel reduced 96% in cfu/mL after instrumentation (p = 0.005), with evidence of effectiveness for use as an intracanal medication (p = 0.047), reducing contamination by 65%. The brine shrimp mortality rate was 42%, with an LC50 of 62.7 mg/ml, being a sligthy toxic extract. Conclusion: The pomegranate gel 0.5 g/ml was effective against E. faecalis and represents promising proposal in Endodontics. / Devido ao insucesso do tratamento endodôntico, da virulência e do aumento dos microorganismos resistentes a antibióticos houve uma maior incidência de infecções bacterianas. Os extratos de plantas são recursos promissores no controle de biofilmes, podendo ser considerados uma nova forma de prevenir e/ou tratar infecções. Dentre esses produtos de origem natural, destaca-se a Punica granatum L. (romã), que apresenta compostos fitoativos como os flavonóides e os fenóis. Objetivo: Analisar, in vitro e ex vivo, a ação antibacteriana de substância auxiliar e medicação intracanal à base do extrato hidroglicólico do pericarpo de Punica granatum L. (romã) veiculado em gel, contra Enterococcus faecalis. Método: Após desenvolvido o extrato hidroglicólico do pericarpo de P. granatum, foram realizados testes de difusão em ágar, determinação de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) e análise da toxicidade (letalidade em microcrustáceo - Artemia salina). Com estes dados foi desenvolvido gel com extrato hidroglicólico do pericarpo de P. granatum (0,5 g/mL), que foi testado por difusão em ágar e como substância auxiliar da instrumentação endodôntica e medicação intracanal, para a verificação da ação antimicrobiana em dentina infectada com E. faecalis, pela contagem de unidades formadoras de colônia por mililitro (ufc/mL) em três tempos experimentais. Resultados: A CIM foi de 0,5 g/mL e o gel de P. granatum nesta concentração apresentou halos de inibição de 8 mm, sobre E. faecalis.O gel de P. granatum reduziu em 96% a contagem de ufc/mL após instrumentação (p=0,005),com indício de efetividade para uso como medicação intracanal (p=0,047), reduzindo a contaminação em 65%. A taxa de mortalidade em microcrustáceos foi de 42%, com LC50 de 62,7 mg/mL, sendo o extrato levemente tóxico. Conclusão: O gel de P. granatum a 0,5 g/mL foi efetivo sobre E. faecalis, representando proposta promissora em Endodontia.

Estudos relataram a atividade antimicrobina de Equisetum giganteum e Punica granatum, reduzindo o risco do desenvolvimento da estomatite protética, doença relacionada principalmente à colonização das próteses pelo fungo Candida albicans. Diante disso, é necessário que essas plantas sejam bem toleradas pelos tecidos bucais e, se possível, auxiliem no processo de reparo. Objetivo: Realizar um estudo fitoquímico de substâncias potencialmente ativas de Equisetum giganteum e Punica granatum e avaliar a viabilidade de fibroblastos gengivais humanos frente a diferentes concentrações destas plantas, após diferentes períodos in vitro. Material e Métodos: Após a identificação dos compostos das plantas por HPLC-PAD, foram selecionadas as frações com melhor atividade antifúngica perante Candida albicans. Os extratos brutos e frações selecionadas de P. granatum e E. giganteum foram testados em diferentes concentrações (0.23, 0.47, 0.94, 1.88, 3.75, 7.5, 15 e 30 mg) e períodos (12, 24, 36 e 60 h) sobre fibroblastos gengivais humanos (FGH), para a avaliação de suas citotoxicidades através da análise da viabilidade dos FGH, pelo ensaio LIVE/DEAD. Por meio desse ensaio, analisamos quantitativamente a viabilidade celular através das leituras das unidades relativas de fluorescência (URF) e qualitativamente por meio da analise da morfologia e da densidade observadas pela microscopia invertida de fluorescência, após três experimentos independentes para cada período de avaliação. Os resultados quantitativos paramétricos foram representados como média e desvio padrão (SD) com análise de Variância ANOVAOne- Way, seguida da análise comparativa pelo teste de Tukey HSD. Os resultados quantitativos não paramétricos foram apresentados como mediana e quartis e foram submetidos ao teste de Kruskal-Wallis, seguido de análise comparativa pelo teste de Dunn, de acordo com as análises de normalidade (Teste de Kolmogorov-Smirnov). Valores de p< 0.05 foram indicativos de significância estatística. Conclusões: Foram identificados compostos fenólicos, como flavonoides e taninos em E.giganteum e P. granantum, respectivamente. Identificamos uma citotoxicidade concentração-dependente para as duas plantas testadas, independente do tempo. Sob as menores concentrações das plantas a viabilidade e a morfologia dos FGH foram preservadas. Dentro deste contexto, acreditamos na possibilidade de se utilizar essas plantas como terapia alternativa em diversas áreas de saúde, porém em concentrações biocompatíveis. / Studies have reported the antimicrobial activity of Equisetum giganteum and Punica granatum, reducing the risk of development of denture stomatitis, a disease mainly related to the colonization of prostheses by the fungus Candida albicans. In view of this, it is necessary that these plants be well tolerated by the oral tissues and, if possible, assist in the repair process. Objective: To carry out a phytochemical study of potentially active substances of E. giganteum and P. granatum and to evaluate the viability of human gingival fibroblasts against different concentrations of these two plants, after different periods in vitro. Material and Methods: After the identification of the plant compounds by HPLC-PAD, the fractions with the best antifungal activity against Candida albicans were selected. The crude extracts and selected fractions of P. granatum and E. giganteum were tested at different concentrations (0.23, 0.47, 0.94, 1.88, 3.75, 7.5, 15 and 30 mg) and periods (12, 24, 36 and 60 h) against human gingival fibroblasts (FGH), for the evaluation of their possible cytotoxicity through the analysis of the viability of FGH by the LIVE/DEAD assay. By means of this assay we quantitatively analyzed the cell viability through the readings of the relative units of fluorescence (URF) and qualitatively by analysis of the cellular morphology and density using inverted fluorescence microscopy, after three independent experiments. The parametric quantitative results were represented as mean and standard deviation (SD) with ANOVA-One-Way Variance analysis, followed by comparative analysis by the Tukey HSD test. The non-parametric quantitative results were presented as medians and quartiles and were submitted to the Kruskal-Wallis test, followed by comparative analysis by the Dunn test, according to normality tests (Kolmogorov-Smirnov test). Values of p <0.05 were indicative of statistical significance. Conclusions: Phenolic compounds, such as flavonoids and tannins, were identified in E. giganteum and P. granantum, respectively. We identified a concentration-dependent cytotoxicity for the two plants tested, regardless of the time. Under the lowest concentrations of plants the viability and morphology of FGH were preserved when compared to the control. Within this context, we believe in the possibility to use these plants as alternative therapy in several health areas, but in biocompatible concentrations.