Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-06T17:52:33Z No. of bitstreams: 1 DiannyElizabethJimenezJojoaTese2017.pdf: 3946754 bytes, checksum: 81cb9190de587ca935463b13f7a89e30 (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-06T17:52:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DiannyElizabethJimenezJojoaTese2017.pdf: 3946754 bytes, checksum: 81cb9190de587ca935463b13f7a89e30 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T17:52:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DiannyElizabethJimenezJojoaTese2017.pdf: 3946754 bytes, checksum: 81cb9190de587ca935463b13f7a89e30 (MD5) Previous issue date: 2017-03-23 / The physiological and pathological processes are leaded by infinity of mechanisms and metabolic pathways. In the last decades, researches have focused on to small vesicles, the exosomes, from endosomal origin that could be involved in these processes. These vesicles can be released by different cell types carrying important components that could become biomarkers for the diagnosis of diseases or as moldable tools for controlled release of bioactive substances for clinical and therapeutic application. However, one of the challenges in the study of these interesting and versatile microvesicles is the purification process. Currently, significant difficulties are found as the lack of purity, yield and reproducibility revealed in the unreliable data at both the protein and transcriptional levels. Therefore, our aim in the present study was to compare in human serum samples the currently used purification techniques: ExoQuick??? (Systems Biosciences), Total Exosome Isolation (Life Technologies), Ultrafiltration and Ultracentrifugation and Size Exclusion Chromatography as regards to yield, size and purity evaluating, in addition, the reproducibility. The results obtained revealed the existence of differences between the techniques in the amount of particle recovery with sizes corresponding to the exosomes. Ultrafiltration was the most efficient technique followed by polymer precipitation methods and Ultracentrifugation. Protein content diversified considerably, with the Ultrafiltration almost ten times more than Ultracentrifugation. Different profiles of proteins in acrylamide gel were found, with 50 kDa to 70 kDa bands suggesting the co-precipitation of abundant contaminating proteins as albumin. When the chromatography was used to evaluate the recovery efficiency of the other techniques, the result showed no interference in the separation of populations by size, but could represent an additional tool for techniques as Ultrafiltration in the isolation of albumin as the main interfering in the serum samples. Important data were found when particle number normalization was performed in the analysis by the TRPS method, where a reduction of the aggregation and a change in the particle distribution were visible. In our results it was possible to confirm the need for the new reproducible and reliable protocols that can allow the isolation of exosomes for clinical application. On the other hand, our data provide guidance on the use of current methods for obtaining exosomes from serum and other biological fluids. / Os processos fisiol??gicos e patol??gicos s??o regidos por uma infinidade de mecanismos e vias metab??licas. Nas ??ltimas d??cadas, as pesquisas dirigiram-se a pequenas ves??culas, os exossomas, de origem endossomal que poderiam estar involucradas nestes processos. Estas ves??culas podem ser liberadas por diferentes tipos de c??lulas carregando no seu interior componentes importantes que poderiam transformar-se em biomarcadores para o diagn??stico de doen??as ou podem servir como ferramentas mold??veis para libera????o controlada de subst??ncias bioativas de aplica????o cl??nica e terap??utica. No entanto, um dos grandes desafios no estudo destas interessantes e vers??teis microves??culas constitui o processo de purifica????o. Atualmente, dificuldades significantes s??o encontradas no que se refere ?? falta de pureza, rendimento e reprodutibilidade refletidos nos dados pouco confi??veis tanto a n??vel proteico como transcricional. Por conseguinte, o nosso objetivo no presente estudo foi comparar em amostras de soro humano as t??cnicas de purifica????o atualmente utilizadas: ExoQuick??? (Systems Biosciences), Total Exosome Isolation (Life Technologies), Ultrafiltra????o e Ultracentrifuga????o e Cromatografia de exclus??o pelo tamanho em termos de rendimento, tamanho e pureza avaliando, al??m disso, a sua reprodutibilidade. Os resultados obtidos demonstraram a exist??ncia de diferen??as marcantes entre as t??cnicas na quantidade de recupera????o de part??culas com tamanhos correspondentes aos exossomas. A Ultrafiltra????o foi a t??cnica mais eficiente seguida pelos m??todos de precipita????o com pol??mero e a Ultracentrifuga????o. O conte??do proteico tamb??m variou consideravelmente sendo na Ultrafiltra????o quase dez vezes maior que a Ultracentrifuga????o. Perfis diferentes de prote??nas em gel de acrilamida foram encontrados, ressaltando a presen??a de bandas de 50 kDa a 70 kDa sugerindo a coprecipita????o de prote??nas contaminantes abundantes como a albumina. Quando a cromatografia foi usada para avaliar a efici??ncia de recupera????o das outras t??cnicas, o resultado obtido revelou que a mesma n??o auxilia na separa????o de popula????es pelo tamanho, mas que poderia representar uma ferramenta adicional para t??cnicas como a Ultrafiltra????o no isolamento de albumina como principal interferente nas amostras de soro. Dados relevantes foram encontrados quando foi realizada a normaliza????o do n??mero de part??culas na an??lise pelo m??todo de TRPS onde foi vis??vel uma redu????o da agrega????o e uma mudan??a da distribui????o das part??culas. Nos nossos resultados foi poss??vel evidenciar a necessidade da cria????o de novos protocolos reprodut??veis e confi??veis que podem permitir o isolamento de exossomas para a sua aplica????o cl??nica. Por outro lado, nossos dados fornecem uma orienta????o no uso dos m??todos atuais para a obten????o de exossomas derivados de soro e outros fluidos biol??gicos.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-03-20T22:52:54Z No. of bitstreams: 1 AntonioMoreiraMarquesNeto_DISSERT.pdf: 1777931 bytes, checksum: f46a9d1741f7574f2fd804826fb17637 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-03-24T19:13:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AntonioMoreiraMarquesNeto_DISSERT.pdf: 1777931 bytes, checksum: f46a9d1741f7574f2fd804826fb17637 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T19:13:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntonioMoreiraMarquesNeto_DISSERT.pdf: 1777931 bytes, checksum: f46a9d1741f7574f2fd804826fb17637 (MD5) Previous issue date: 2015-02-02 / Uma lectina com elevada atividade aglutinante sobre hem?cias humanas dos v?rios tipos do sistema ABO foi purificada da esponja marinha Aplysina sp. por extra??o hidroalco?lica e uma sequ?ncia de etapas de purifica??o envolvendo cromatografias de gel filtra??o em Superdex 75 10/300 GL e de troca-i?nica Resource Q (FPLC-AKTA Purifier). Ap?s purificada, a lectina denominada AplyL-1, apresentou uma ?nica cadeia pept?dica com uma massa molecular de 40 kDa e com especificidade de liga??o para D-galactose, D-galactosamina e lactose. A atividade hemaglutinante de AplyL-1 foi independente da presen?a de ?ons bivalentes e n?o foi alterada em condi??es b?sicas (acima de pH 7,0), mas bastante reduzida quando submetida a condi??es ?cidas (abaixo de pH 6,0). Testes de termoestabilidade mostraram que AplyL-1 perde gradativamente sua atividade hemaglutinante a partir de 40?C e n?o mais exibe atividade em 100?C. Aply-L1 (10 ?g/mL) foi testada frente a diversas linhagens tumorais, onde apresentou atividade citot?xica significativa para a linhagem de adenocarcinoma cervical humano (HeLa). Para a linhagem de c?lula normal 3T3 n?o foi vista atividade citot?xica. Em testes realizados com Leishmania braziliensis e Leishmania amazonensis, Aply-L1 exibiu a capacidade de aglutinar a esp?cie L. amazonensis (concentra??o de 77,5 ?g/mL). Os resultados mostram que esta nova lectina ligante de derivados de galactose pode ser importante no desenvolvimento de produtos com import?ncia biotecnol?gica e filogen?tica. / A lectin with high binding activity under human erythrocytes of different types of ABO system was isolated from the marine sponge Aplysina sp. by hydroalcoholic extraction and a sequence of purification steps involving gel filtration chromatography on Superdex 75 10/300 GL and ion exchange chromatography on Resource Q (FPLC-AKTA Purifier). Once purified, the lectin, named AplyL-1, showed a single peptide chain with a molecular of weight 40 kDa and binding specificity for D-galactose, D-galactosamine and lactose. The AplyL1 hemagglutinating activity was independent of bivalent ions and was not changed in basic conditions (pH > 7.0), but significantly reduced when submitted into acid conditions (pH <7.0). Thermal stability tests showed that AplyL-1 gradually loses its hemagglutinating activity at 40 ?C and no longer displays any activity at 100 ?C. AplyL-1 has been tested against several tumour cell lines, and howed significantly cytotoxic activity (up to 10 ?g/mL) only for human cervical adenocarcinoma cell line (HeLa). For the 3T3 normal cell line no cytotoxic activity was seen. In tests performed with Leishmania braziliensis and Leishmania amazonensis, AplyL-1 exhibited the ability to agglutinate only the species L. amazonensis (at a concentration 77.5 ?g/mL). The results show that this new binding galactose derivatives lectin, could be important to development of new products with biotechnological and phylogenetic significance.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Gisele Santos de Meireles.pdf: 1867896 bytes, checksum: 50898c1a65b34d41d9d4352322ce8d1e (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / This work aimed, to determine the phenotypic analysis from sporulated oocysts of Cystoisospora felis by using a sequential method of cleaning techniques. By using SDS-PAGE at 10 and 12 % were separated 22 protein groups as: 26.65; 29.71; 31.79; 36.41; 44.03; 50.09; 56.08; 62.64; 73.65; 77.55; 85.34; 97.62; 98.66; 101.24; 104.21; 109.23; 110.56; 113.21; 138.48; 180.50; 206.81 and 244.51KDa belonged to estrutucture from C. felis sporulated oocysts. Western Blotting technique was performed after SDS-PAGE and were identified these antigenic proteins: p39.39; p42.18; p44.40; p47.82; p55.46; p58.75; p66.08; p77.41; p92.85; p99.58; p104.10; p112.84; p203.15 and p37.25; p38.80; p67; p69; p77; p93; p99; p103; p111.19; p202.66 KDa from hyperimmune and natural infected rabbits by C. Felis respectively. / Este trabalho teve por objetivo, tra?ar um perfil prot?ico de oocistos esporulados de Cystoisospora felis, recuperados a partir do uso seq?encial de v?rias t?cnicas de purifica??o adaptadas para o uso em oocistos esporulados de C. felis. Com o aux?lio do SDS-PAGE a 10 e 12 % resultou na identifica??o de 22 grupos prot?icos de 26; 29; 31; 36; 44; 50; 56; 62; 73; 77,55; 85,34; 97,62; 98,66; 101,24; 104,21; 109,23; 110,56; 113,21; 138,48; 180,50; 206,81 e 244,51 KDa, pertencentes a estrutura dos oocistos esporulados e esporozoitas de C. felis. Com base nesse resultado e em soro de coelho heter?logo anti-C. felis foi poss?vel desenvolver uma t?cnica de diagn?stico imunoenzimatico com western Blotting para identifica??o de animais infectados de maneira natural ou experimental com C. felis, identificando os seguintes prote?nas antig?nicas: p39.39; p42.18; p44.40; p47.82; p55.46; p58.75; p66.08; p77.41; p92.85; p99.58; p104.10; p112.84; p203.15 e p37.25; p38.80; p67; p69; p77; p93; p99; p103; p111.19; p202.66 KDa, respectivamente.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RobertaLNG_DISSERT.pdf: 1656027 bytes, checksum: 85f9c5516e7c9dd85306e47eb8231174 (MD5) Previous issue date: 2011-06-17 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Chitinases are enzymes involved in degradation of chitin and are present in a range of organisms, including those that do not contain chitin, such as bacteria, viruses, plants and animals, and play important physiological and ecological roles. Chitin is hydrolyzed by a chitinolytic system classified as: endo-chitinases, exo-chitinases and N-acetyl-b-D-glucosaminidases. In this study a Litochitinase1 extracted from the cephalotorax of the shrimp Litopenaeus Schmitt was purified 987.32 times using ionexchange chromatography DEAE-Biogel and molecular exclusion Sephacryl S-200. These enzyme presented a molecular mass of about 28.5 kDa. The results, after kinetic assay with the Litochitinase1 using as substrate p-nitrophenyl-N-acetyl-b-Dglucosaminideo, showed apparent Km of 0.51 mM, optimal activity at pH ranging from 5.0 to 6.0, optimum temperature at 55?C and stability when pre-incubated at temperatures of 25, 37, 45, 50 and 55?C. The enzyme showed a range of stability at pH 4.0 to 5.5. HgCl2 inhibited Litochitinase1 while MgCl2 enhances its activity. Antimicrobial tests showed that Litochitinase1 present activity against gram-negative bacterium Escherichia coli in the 800 &#956;g/mL concentration. The larvicidal activity against Aedes aegypti was investigated using crude extracts, F-III (50-80%) and Litochitinase1 at 24 and 48 hours. The results showed larvicidal activity in all these samples with EC50 values of 6.59 mg/mL for crude extract, 5.36 mg/mL for F-III and 0.71 mg/mL for Litochitinase1 at 24 hours and 3.22 and 0.49 mg/mL for the F-III and Litochitinase1 at 48 hours, respectively. Other experiments confirmed the presence of chitin in the midgut of Aedes aegypti larvae, which may be suffering the action of Litochitinase1 killing the larvae, but also the absence of contaminating proteins as serine proteinase inhibitors and lectins in the crude extract, F-III and Litochitinase1, indicating that the death of the larvae is by action of the Litochitinase1. We also observed that the enzymes extracted from intestinal homogenate of the larvae no have activity on Litochitinase1. These results indicate that the enzyme can be used as an alternative to control of infections caused by Escherichia coli and reducing the infestation of the mosquito vector of dengue. / As quitinases s?o enzimas envolvidas na degrada??o da quitina e est?o presentes em uma gama de organismos, inclusive os que n?o cont?m quitina, tais como bact?rias, v?rus, plantas e animais desempenhando importantes papeis fisiol?gicos e ecol?gicos. A quitina ? hidrolisada por um sistema quitinol?tico classificado como: Endo-quitinases, Exo-quitinases e N-acetil-b-D-glucosaminidases. Neste trabalho, a Litochitinase1 foi extra?da do cefalot?rax do camar?o marinho Litopenaeus schmitti e purificada 987,32 vezes utilizando-se cromatografia de troca i?nica DEAE-Biogel e de exclus?o molecular Sephacryl S-200. Esta apresentou massa molecular em torno de 28,5 kDa. Os resultados obtidos, ap?s os testes cin?ticos com a Litochitinase1 utilizando-se como substrato o p-nitrofenil-N-acetil-b-D-glucosaminideo, mostraram Km aparente de 0,51 mM, atividade ?tima em pH variando de 5,0 a 6,0, temperatura ?tima a 55?C e estabilidade de atividade quando pr?-incubada nas temperaturas de 25, 37, 45, 50 e 55?C. A enzima apresentou uma faixa de estabilidade nos pHs de 4,0 a 5,5. O HgCl2, inibiu significativamente a Litochitinase1 enquanto que o MgCl2 potencializa levemente sua atividade. Os testes antimicrobianos realizados mostraram que a Litochitinase1 apresenta atividade contra a bact?ria gram-negativa Escherichia coli numa concentra??o que varia 800 a 500 &#956;g/mL. A atividade larvicida contra Aedes aegypti foi investigada com os extratos brutos, F-III (50-80%) e na Litochitinase1 com tempo de 24 e 48 horas. Os resultados obtidos mostraram atividade larvicida em todas estas amostras com valores de EC50 de 6,59 mg/mL para o extrato bruto, 5,36 mg/mL para F-III e 0,71 mg/mL para Litochitinase1 com 24 horas de ensaio e 3,22 e 0,49 mg/mL, para F-III e Litochitinase1 no tempo de 48 horas. Outros experimentos realizados confirmaram a presen?a de quitina no intestino m?dio das larvas de Aedes aegypti, as quais podem estar sofrendo a a??o da Litochitinase1 provocando suas mortes, como ainda a aus?ncia de prote?nas bioativas como inibidores de proteases ser?nicas e lectinas no extrato bruto, F-III e Litochitinase1, indicando que a morte das larvas ? mesmo por a??o da Litochitinase1. Observou-se ainda que, as enzimas extra?das do homogenato intestinal das larvas n?o interferiram na atividade da Litochitinase1. Estes resultados indicam que esta enzima pode ser usada como alternativa para controlar infec??es causadas por Escherichia coli, como tamb?m na redu??o da infesta??o do mosquito vetor da dengue.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:01:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarcionilaOF.pdf: 1821227 bytes, checksum: 7929f8f8aee297af940f4df074b1c3bb (MD5) Previous issue date: 2009-03-05 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The crude glycerine is a raw material that can be used in a wide variety of products. Even with all the impurities inherent in the process of being obtained, the crude glycerin is already in a marketable product. However, the market is much more favorable to the commercialization of purified glycerine. The glycerin is a byproduct gotten from the process of transesterification of waste oils and fats in the production of biodiesel. More recently, the deployment of the new Federal Law of Brazil, related to the implementation of energy resources, forces, from 2008, the increase of 2% biodiesel in diesel common with prospects for 5% (B5). Therefore, it is indispensable that new routes of purification as well as new markets are developed. The objective of this work was to purify, through ion exchange, the crude glycerin, obtained from the reaction of transesterification of cottonseed oil. The cottonseed oil was characterized as the fatty acid composition and physical-chemical properties. The process of ion exchange was conducted in batch. In this process were used strong cation, low anion resins and a mixed resin used to de-ionize water. The purified glycerin was characterized as the content of metals. Tests were performed with activated charcoal adsorption, and for this, it was made tests of time contact with coal as well as quantity of coal used. The time of activation, the amount of the activation solution, the contact time of the glycerol solution in resins, the amount and type of resin applied were evaluated. Considering the analysis made with activated charcoal, when the glycerin solution was treated using the resins individually it was observed that in the conditions for treatment with 10 g of resin, 5 hours of contact with each resin and 50 mL of glycerin solution, its conductivity decreased to a cationic resin, increased to the anionic resin and had a variable value with respect to resin mixed. In the treatment in series, there was a constant decrease in the conductivity of the solution of glycerin. Considering two types of treatment, in series and individually, the content of glycerol in glycerin pre-purified solution with the different resins varied from 12,46 to 29.51% (diluted solution). In analysis performed without the use of activated charcoal, the behavior of the conductivity of the solution of glycerin were similar to results for treatment with activated charcoal, both in series as individually. The solution of glycerin pre-purified had a glycerol content varying from 8.3 to 25.7% (diluted solution). In relation to pH, it had a behavior in accordance with the expected: acid for the glycerin solution treated with cationic resin, basic when the glycerin solution was treated with the anionic resin and neutral when treated with the mixed resin, independent of the kind of procedure used (with or without coal, resins individually or in series). In relation to the color of the glycerin pre-purified solution, the resin that showed the best result was the anionic (colorless), however this does not mean that the solution is more in pure glycerol. The chromatographic analysis of the solutions obtained after the passage through the resins indicated that the treatment was effective by the presence of only one component (glycerol), not considering the solvent of the analysis / A glicerina bruta ? uma mat?ria-prima que pode ser usada em uma ampla variedade de produtos. Mesmo com todas as impurezas inerentes ao processo de sua obten??o, a glicerina bruta j? se constitui em um subproduto vend?vel. Entretanto, o mercado ? muito mais favor?vel ? comercializa??o da glicerina purificada. A glicerina ? um subproduto resultante do processo de transesterifica??o de ?leos e gorduras residuais na produ??o do biodiesel. Mais recentemente, a implanta??o da nova Lei Federal do Brasil, relacionada ? aplica??o dos recursos energ?ticos, obriga, a partir de 2008, o acr?scimo de 2% de biodiesel no diesel comum com perspectivas para 5% (B5). Dessa forma, ? indispens?vel que novas rotas de purifica??o assim como novos mercados sejam desenvolvidos. O objetivo desse trabalho foi purificar, atrav?s da troca i?nica, a glicerina bruta obtida da rea??o de transesterifica??o do ?leo de algod?o. O ?leo de algod?o foi caracterizado quanto ? composi??o em ?cidos graxos e quanto ?s propriedades f?sico-qu?micas. O processo da troca i?nica foi conduzido em batelada. Foram utilizadas nesse processo as resinas cati?nica forte, ani?nica fraca e uma resina mista utilizada para deionizar ?gua. A glicerina purificada foi caracterizada quanto ao teor de metais. Foram realizados ensaios de adsor??o com carv?o ativado, e para isto, foram feitos ensaios de tempo de contato com carv?o ativado bem como quantidade de carv?o ativado utilizada. Foram avaliados: o tempo de ativa??o, a quantidade de solu??o de ativa??o, o tempo de contato da solu??o de glicerina nas resinas, a quantidade e tipo de resina aplicada. Considerando as an?lises feitas com carv?o ativado, quando a solu??o de glicerina foi tratada utilizando as resinas individualmente foi observado que, nas condi??es definidas para o tratamento com 10g de resina, 5 horas de contato com cada resina e 50 mL de solu??o de glicerina, sua condutividade diminuiu para a resina cati?nica, aumentou para a resina ani?nica e teve um valor vari?vel com rela??o a resina mista. No tratamento em s?rie, houve uma diminui??o constante da condutividade da solu??o de glicerina. Considerando os dois tipos de tratamento, em s?rie e individualmente, o teor de glicerol na solu??o de glicerina pr?-purificada com as diferentes resinas variou de 12,46 a 29,51% (solu??o dilu?da). Nas an?lises realizadas sem o uso do carv?o ativado, o comportamento da condutividade da solu??o de glicerina foi similar ao resultado para o tratamento com carv?o ativado, tanto em s?rie quanto individualmente. A solu??o de glicerina pr?-purificada teve um teor de glicerol variando de 8,3 a 25,7% (solu??o dilu?da). Com rela??o ao pH, este teve um comportamento de acordo com o esperado: ?cido para a solu??o de glicerina tratada com resina cati?nica, b?sico quando a solu??o de glicerina foi tratada com a resina ani?nica e neutro quando tratada com a resina mista, independente do tipo de procedimento utilizado (com ou sem carv?o ativado, resinas individualmente ou em s?rie). Com rela??o ? cor da solu??o de glicerina pr?-purificada, a resina que apresentou melhor resultado foi a ani?nica (incolor), no entanto isto n?o quer dizer que a solu??o estivesse mais pura em glicerol. A an?lise cromatogr?fica das solu??es obtidas ap?s a passagem pelas resinas indicou que o tratamento foi eficaz pela presen?a de somente um componente (glicerol), n?o considerando o solvente da an?lise

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-06-02T19:56:10Z No. of bitstreams: 1 AnaLauraOliveiraDeSaLeitao_DISSERT.pdf: 2567835 bytes, checksum: 8d09f5d4c4935ef58bb6215cd5a73b5f (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-06-06T00:09:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AnaLauraOliveiraDeSaLeitao_DISSERT.pdf: 2567835 bytes, checksum: 8d09f5d4c4935ef58bb6215cd5a73b5f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-06T00:09:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaLauraOliveiraDeSaLeitao_DISSERT.pdf: 2567835 bytes, checksum: 8d09f5d4c4935ef58bb6215cd5a73b5f (MD5) Previous issue date: 2017-02-08 / Com o desenvolvimento da ind?stria biotecnol?gica, ? crescente o interesse por ant?genos recombinantes purificados para obten??o de vacinas. Por?m, para essa aplica??o esses ant?genos precisam apresentar um elevado grau de pureza, e por isso ? de grande relev?ncia o desenvolvimento de t?cnicas que permitam a redu??o do n?mero de opera??es unit?rias necess?rias ao processo de purifica??o, permitindo ainda uma elevada recupera??o e proporcionando uma maior economia na obten??o dos bioprodutos. A Adsor??o em Leito Expandido (ALE) vem se destacando como uma alternativa prop?cia para o downstream processing, pois ? uma t?cnica cromatogr?fica de modo simples e de baixo custo, que integra as etapas de clarifica??o, concentra??o, purifica??o em uma ?nica opera??o. Neste contexto, o presente trabalho tem como objetivo avaliar os m?todos de rompimento celular e os diferentes metais imobilizados em resina Streamline chelating para purifica??o do ant?geno 503 de Leishmania i. chagasi por ALE bem como remover os lipopolissacar?deos (LPS) liberados durante a etapa de rompimento celular. Primeiramente, foi avaliado qual o melhor m?todo de rompimento celular para obten??o da prote?na intracelular. As estrat?gias estudadas utilizando lisozima, p?rolas de vidro, ureia e EDTA foram avaliadas atrav?s de quatro planejamentos experimentais. Em seguida, foram realizados testes de adsor??o em batelada, utilizando-se cinco ?ons met?licos (Cu2+, Ni2+, Zn2+, Co2+ e Fe3+) nas concentra??es de 0,1, 0,5 e 0,8 mol/L acoplados na resina Streamline chelating, escolhendo-se o metal que apresentou melhor adsor??o do ant?geno para os ensaios usando ALE. Posteriormente, foi estimada a quantidade m?nima de tensoativo Triton X-114 necess?ria na etapa de lavagem da ALE para remo??o do LPS, a fim de obter-se o ant?geno 503 livre desse contaminante. E por fim, foram realizados ensaios de ALE visando recuperar e purificar a prote?na de interesse. Para os ensaios usando ALE utilizou-se uma coluna de 2,6 cm de di?metro por 30 cm de altura, acoplada a uma bomba perist?ltica. Com os planejamentos experimentais realizados para avalia??o do rompimento celular, observou-se que maiores quantidades de prote?nas totais e do ant?geno 503 liberadas foram obtidas para o m?todo da ureia e que o ?nico fator significativo para esse planejamento foi a concentra??o, correspondente a 8,0 M. Como resultado para a triagem do ?on met?lico, o cobre (Cu2+) foi o metal que apresentou maior capacidade de adsor??o do ant?geno 503, apresentando valores de capacidade de adsor??o de 0,102, 0,128 e 0,111 mg/mL de adsorvente para as concentra??es de 0,1, 0,5 e 0,8 mol/L, respectivamente. Tem-se ainda que para as tr?s condi??es analisadas (0,01, 0,05 e 0,1 % de Triton X-114) na etapa de lavagem da ALE o percentual de remo??o de LPS foi elevado e que a concentra??o m?nima utilizada (0,01 %) j? foi suficiente para a remo??o de 99,70 % deste contaminante. Para o teste de ALE utilizando elui??o isocr?tica (0,6 M de imidazol) os resultados obtidos mostraram baixa recupera??o (3,0 %) do ant?geno 503. Avaliou-se ent?o a elui??o em degrau, inicialmente em dois passos, aplicando-se 0,6 mol/L e, em seguida, 1,0 mol/L de imidazol. Por?m, esta estrat?gia ainda n?o foi eficiente para recuperar a prote?na de interesse. Um novo ensaio foi realizado, com um total de tr?s passos de elui??o, utilizando 0,3 e 0,6 mol/L. Esse ?ltimo teste mostrou uma recupera??o de 15,0 % da prote?na de interesse e um fator de purifica??o de, aproximadamente, 3,0. Portanto, a t?cnica cromatogr?fica de afinidade por ?ons met?licos imobilizados (IMAC) mostrou ser uma alternativa eficiente na recupera??o e purifica??o do ant?geno 503 a partir do homogeneizado de E. coli n?o clarificado. / Due to the development of biotechnology industry, there is a growing interest in purified recombinant antigens to obtain vaccines. However, for this application these antigens require a high degree of purity, thus, it is of great relevance the development of techniques that allow the reduction in the number of unitary operations required for the purification process, this would also allow a high recovery and a greater saving in obtaining bioproducts. The Expanded Bed Adsorption (EBA) has shown as a suitable alternative for downstream processing, once it is a simple and low cost chromatographic technique that integrates clarification, concentration and purification in a single operation. This study aims at evaluating the methods of cell disruption and the different metals immobilized in Streamline Chelating resin for purification of Leishmania i. chagasi 503 antigen by EBA as well as removing the lipopolysaccharides (endotoxin) released during the stage of cell disruption. Firstly, the best method of cell disruption to obtain intracellular protein was evaluated. The strategies studied using lysozyme, glass beads, urea and EDTA were evaluated through four experimental designs. Then, batch adsorption tests were carried out using five metal ions (Cu2+, Ni2+, Zn2+, Co2+ and Fe3+) at concentrations of 0.1, 0.5 and 0.8 M coupled in the Streamline chelating resin, selecting the metal that showed the best adsorption of the antigen for the assays using EBA. Then, the minimum amount of Triton X-114 tensioactive required in the EBA wash stage for LPS removal was estimated in order to obtain the 503 antigen free of this contaminant. Finally, EBA assays were performed in order to recover and purify the protein of interest. EBA experiments were carried out using a column of 2.6 cm in diameter (30 cm height), coupled to a peristaltic pump. The experimental plannings carried out to evaluate cell disruption, showed that higher amounts of total proteins and 503 antigen released were obtained for the urea method and that the only significant factor for this planning was the concentration corresponding to 8.0 M. As a result of the metal ion screening, copper (Cu2+) was the metal with the highest adsorption capacity of 503 antigen, presenting adsorption capacity values of 0.102, 0.128 and 0.111 mg / mL of adsorbent at concentrations of 0.1, 0.5 and 0.8 M, respectively. For the three analyzed conditions (0.01, 0.05 and 0.1% Triton X-114) in the EBA washing stage, the percentage of LPS removal was high and the minimum concentration used (0.01%) was enough to remove 99.70% of this contaminant. For the EBA test using isocratic elution (0.6 M imidazole) the results obtained showed a low recovery (3.0 %) of the 503 antigen. The step elution was then evaluated, initially in two steps, applying 0.6 M and then 1.0 M imidazole. However, this strategy has not yet been effective in recovering the protein of interest. A new assay was performed, with a total of three elution steps, using 0.3 and 0.6 M. This test showed that a recovery of 15.0% of the protein of interest and a purification factor of 3.0. Therefore, the immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC) technique has been shown to be an efficient alternative in the recovery and purification of the 503 antigen from the homogenized E. coli unclarified.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:42:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DiegoOC_DISSERT.pdf: 2507125 bytes, checksum: a9d27b2c33e87a3e7fac54693ff566a3 (MD5) Previous issue date: 2013-07-18 / The objective of this study was to analyze the oxidative stability of biodiesel from jatropha obtained from different purification processes, three wet processes with different drying (in a vacuum oven, conventional oven and in anhydrous sodium sulfate) and dry (purification with magnesium silicate adsorbent). Raw materials of different qualities (jatropha crop ancient and recent crop) were used. The Jatropha oil was extracted by mechanical extraction and refined. The Jatropha biodiesel was obtained by the transesterification reaction in ethyl route using alkaline catalysis. The biodiesel samples were characterized by analysis of water content, carbon residue, Absorption Spectroscopy in the Infrared Region and Thermogravimetry. Thermogravimetric curves of purified PUsv* PUsq* and had higher initial decomposition temperatures, indicating that the most stable, followed by samples PU* and PUSC*. Besides the sample SP* is a smaller initial temperature, confirming the sample without purification to be less thermally stable. The percentage mass loss of the purified samples showed conversion of about 98.5%. The results of analyzes carbon residue and infrared suggested that contamination by impurities is the main factor for decreased oxidative stability of biodiesel. The oxidative stability was assessed from periodic monitoring, using the techniques of Rancimat, peroxide index, acid value and Pressurized Differential Scanning Calorimetry. Samples of biodiesel from jatropha which showed better oxidative stability were of the best quality raw material and wet scrubbing: PUsq* with dry chemical, using anhydrous sodium sulfate and PUsv* with vacuum drying, which had oxidative stability 6 hours in Rancimat time 0 days, within the limits established by the Technical Regulation No. 4/2012 of the ANP, without the addition of antioxidant, suggesting that these procedures the least influence on the oxidative stability of biodiesel / O objetivo deste trabalho foi analisar a estabilidade oxidativa do biodiesel de pinh?o manso obtido a partir de diferentes processos de purifica??o, sendo tr?s via ?mida com processos de secagens diferentes (em estufa a v?cuo, em estufa convencional e com sulfato de s?dio anidro) e um via seca (purifica??o com adsorvente silicato de magn?sio). Mat?rias primas de diferentes qualidades (pinh?o manso de safra antiga e safra recente) foram utilizadas. O ?leo de pinh?o manso foi extra?do por extra??o mec?nica e refinado. O biodiesel de pinh?o manso foi obtido pela rea??o de transesterifica??o na rota et?lica, utilizando cat?lise alcalina. As amostras de biodiesel foram caracterizadas por an?lises de Teor de ?gua, Res?duo de carbono, Espectroscopia de Absor??o na Regi?o do Infravermelho e Termogravimetria. As curvas termogravim?tricas das amostras purificadas PUsv* e PUsq* apresentaram as maiores temperaturas iniciais de decomposi??o, indicando serem mais est?veis, seguidas das amostras PU* e PUsc*. Al?m da amostra SP* apresentar a menor temperatura inicial, confirmando a amostra sem purifica??o ser a menos est?vel termicamente. Os percentuais de perda de massa das amostras purificadas indicaram convers?o em torno de 98,5%. Os resultados das an?lises de res?duo de carbono e infravermelho sugeriram que a contamina??o por impurezas ? o principal fator para diminui??o da estabilidade oxidativa do biodiesel. A estabilidade oxidativa foi avaliada a partir de monitoramento peri?dico, utilizando as t?cnicas de Rancimat, ?ndice de Per?xido, ?ndice de acidez e Calorimetria Explorat?ria Diferencial Pressurizada. As amostras de biodiesel de pinh?o manso que apresentaram melhor estabilidade oxidativa foram as da mat?ria prima de melhor qualidade e purifica??o por via ?mida: PUsq* com secagem qu?mica, utilizando sulfato de s?dio anidro e PUsv* com secagem a v?cuo, as quais obtiveram estabilidade oxidativa de 6 horas no Rancimat no tempo 0 dias, no limite estabelecido pelo Regulamento T?cnico N? 4/2012 da ANP, sem a adi??o de antioxidante, sugerindo ser estes procedimentos os que menos influenciam na estabilidade oxidativa do biodiesel

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-02-19T13:34:46Z No. of bitstreams: 5 edu.pdf: 1793374 bytes, checksum: 659bf4622f25b099b1d7c3bd613d8f8a (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2110 bytes, checksum: b4c884761e4c6c296ab2179d378436d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-02-20T11:06:41Z (GMT) No. of bitstreams: 5 edu.pdf: 1793374 bytes, checksum: 659bf4622f25b099b1d7c3bd613d8f8a (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2110 bytes, checksum: b4c884761e4c6c296ab2179d378436d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-20T11:06:41Z (GMT). No. of bitstreams: 5 edu.pdf: 1793374 bytes, checksum: 659bf4622f25b099b1d7c3bd613d8f8a (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2110 bytes, checksum: b4c884761e4c6c296ab2179d378436d4 (MD5) Previous issue date: 2013-02-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (Capes) / Neste trabalho est? descrito uma nova metodologia para a produ??o de biodiesel (?steres met?licos ou et?licos de ?cidos graxos) a partir do emprego de diversos ?leos vegetais na sua forma ?bruta?, assim como ?leos residuais oriundos de processo de fritura e tamb?m gordura animal (sebo) como material de partida. Al?m deste desafio, procurou-se realizar as rea??es de transesterifica??es em um processo acelerado por irradia??o das micro-ondas obtidas a partir de um forno de micro-ondas dom?stico, o qual n?o sofreu adapta??es, tais como: inser??o de um sistema de agita??o e tamb?m de refluxo, para ser utilizado em rea??es qu?micas. O primeiro passo do trabalho incluiu a utiliza??o dos diferentes ?leos vegetais brutos, isto ?, desprovidos de processo de refino e de degomagem, para a produ??o de biodiesel. Para tanto foi necess?rio o desenvolvimento de uma metodologia que permitisse a purifica??o desses ?leos vegetais brutos, pois estes podem conter subst?ncias, como a ?gua, os ?cidos graxos livres (AGL) e os ?steres de f?sforos (fosfat?dicos) que s?o inibidoras do processo de transesterifica??o. Na busca por uma t?cnica que permitisse a pr?via purifica??o desses ?leos vegetais, foram testados e obtidos excelentes resultados, quando foi realizada a sua filtra??o em s?lica gel 60 Mesh. A polaridade dessa s?lica oriunda dos grupos silan?is permitiu com grande ?xito a reten??o de AGL e dos ?steres de f?sforo, al?m do seu alto poder de adsor??o, reduzindo de maneira significativa o teor de ?gua presente nesses ?leos vegetais. O fator limitante para o emprego da s?lica gel comercial nos processos de purifica??o das diversas oleaginosas foi o seu alto custo, o que tornava invi?vel o processo de purifica??o. Ap?s diversos estudos e tentativas de encontrar um processo que substitu?sse a s?lica gel comercial anteriormente empregada, foi realizado a s?ntese de uma nova s?lica gel a partir do emprego de areia de constru??o e de carbonatos, sendo um processo simples e de baixo custo. Os resultados obtidos no processo de purifica??o dos ?leos vegetais brutos empregando s?lica gel ?sint?tica? foram similares aos da s?lica gel ?comercial?, o que levou o emprego desse processo de purifica??o de maneira sistem?tica no preparo de mat?ria-prima (reagentes) para posterior transesterifica??o. Os bons resultados permitiram testes dessa nova metodologia de purifica??o em ?leos e gorduras residuais (OGR) oriundos de processos de fritura. Nesses ?leos foram encontrados um n?mero bem maior de subprodutos (impurezas) que podem inibiriooooooo65t\azs NM de maneira parcial ou total o processo de transesterifica??o. Dessa forma, a purifica??o dos OGR tornou-se um grande desafio para a s?lica gel ?sint?tica?. Entre as impurezas contidas nesses ?leos residuais, podemos destacar os AGL, ?gua e os produtos oriundos da degrada??o oxidativa e t?rmica (per?xidos, alde?dos, cetonas, furanos, mon?meros c?clicos e n?o c?clicos) dos ?leos vegetais. Os OGR foram purificados com excelentes resultados por filtra??o sob s?lica gel ?sint?tica? em um processo realizado a temperatura ambiente. Al?m dos ?leos residuais puros, nesse processo foi obtida a gordura animal, a qual ficou retida sobre a s?lica sint?tica dentro do funil de filtra??o. Essa gordura animal foi posteriormente purificada por filtra??o a 60 ?C tamb?m em s?lica gel sint?tica e assim como o ?leo residual utilizada como material de partida na s?ntese de biodiesel. Vale ressaltar que os bons resultados alcan?ados no processo de purifica??o sob s?lica gel sint?tica e a necessidade crescente de mat?ria-prima (?leos vegetais), incentivou a amplia??o do programa de coleta de ?leo e gorduras residuais (OGR) na cidade de Diamantina/MG, intitulado como ?Doe Energia? e implantado em 2006. Tanto os ?leos vegetais brutos, como os ?leos residuais e a gordura animal purificados em s?lica gel sint?tica foram transesterificados a biodiesel (met?lico ou et?lico) em alcoolatos (metanolatos e etanolatos) previamente preparados ?in situ? a partir da solubiliza??o de NaOH ou KOH em metanol ou etanol. Neste processo ocorreu a adi??o do alcoolato sobre o material de partida, sendo a rea??o conduzida sob irradia??o de micro-ondas dom?stica a 240 W durante dez minutos e acompanhada por cromatografia em camada delgada (CCD). Os produtos da rea??o (biodiesel e glicerina) foram separados por decanta??o em funil de separa??o, sendo o biodiesel (et?lico ou met?lico) posteriormente lavado at? pH neutro, seco em Na2SO4 e purificados por destila??o a press?o reduzida. A caracteriza??o do biodiesel produzido foi realizada por m?todos espectrom?tricos como a RMN1H e 13C, al?m disso, o controle de qualidade do biodiesel produzido foi realizado empregando t?cnicas anal?ticas seguindo as normas preconizadas pela Ag?ncia Nacional de Petr?leo, G?s Natural e Biocombust?veis (ANP). A glicerina foi purificada, atrav?s de um pr?vio tratamento com adi??o de ?cido sulf?rico ou clor?drico, gerando o AGL, biodiesel e sulfatos ou cloretos de metais alcalinos como co-produtos. Alguns desses sais como o sulfato de s?dio foi posteriormente purificados por recristaliza??o e utilizados como dessecantes para o pr?prio biodiesel. A efici?ncia da metodologia empregando irradia??o de micro-ondas dom?stica, levou ao estudo do seu uso em rea??es in situ, ou seja, transesterifica??o direta das sementes e dos frutos de oleaginosas, tais como a soja e a mamona. Esse processo consiste em uma desidrata??o pr?via dos frutos ou sementes a uma temperatura de 80 ?C durante 8 horas. O alcoolato preparado foi adicionado sobre os frutos ou sementes triturados e secos e a mistura foi agitada com o aux?lio de um agitador mec?nico a 7500 rpm durante 10 minutos a temperatura ambiente, a fim de homogeneizar a mistura reacional. Essa mistura foi levada a um forno de micro-ondas dom?stico e irradiada a 240 W durante 10 minutos em um processo acompanhado por CCD. Ap?s esse per?odo a massa reacional foi filtrada sob v?cuo, a fim de eliminar o res?duo vegetal s?lido (torta). A solu??o resultante foi transferida para um funil de separa??o, onde ocorreu ap?s poucos minutos, a separa??o do biodiesel (fase superior) da glicerina (fase inferior) por simples decanta??o. Os produtos foram separados por decanta??o e tanto a glicerina como o biodiesel (et?lico ou met?lico) foram purificados e caracterizados. O rendimento em biodiesel foi de aproximadamente 96% no emprego de sementes de soja e de 97% empregando sementes de mamona. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2011. / ABSTRACT This work described a new methodology for the production of biodiesel (methyl or ethyl esters of fatty acids) from the use of various vegetable oils in its "raw" as well as waste oil from the frying process and also animal fat (tallow) as starting material. In addition to this challenge, we tried to carry out the reactions transesterification in a process accelerated by microwave irradiation obtained from a domestic microwave oven, which has not undergone changes, such as insertion of an agitation system and also reflux for used in chemical reactions. The first step of the work included the use of different crude oils, this is, devoid of the process of refining and degumming, for the production of biodiesel. For this purpose it was necessary to develop a methodology that allows the purification of crude vegetable oils, as they may contain different substances such as water, free fatty acids (FFA) and esters of phosphorus (Phosphatidic) which are inhibitors of the transesterification process. In the search for a technique that allowed the prior purification of vegetable oils have been tested and achieved excellent results when your filtration was performed on silica gel 60 Mesh. The polarity of this coming from the silica silanol groups with great success allowed the retention of FFA and phosphorus esters, in addition to its high adsorption, significantly reducing the water content present in these oils. The limiting factor for the commercial use of silica gel in the purification processes of other crops was the high cost, which made impossible the purification process. After several studies and attempts to find a process to replace the previously used commercial silica gel was carried out the synthesis of a new silica gel from the use of construction sand and carbonates, with a simple and low cost. The results obtained in the purification process of crude vegetable oils using silica gel "synthetic" were similar to those of silica gel "commercial", which led to the use of this purification process in a systematic manner in the preparation of raw materials (reagents) for subsequent transesterification. The good results allowed testing of this new method of purification of waste oils and fats (WOF) from the frying process. These oils have been found a much larger number of products (impurities) in a manner that can inhibit the partial or total transesterification process. Thus, the purification of WOF has become a major challenge for the silica gel "synthetic". Among the residual impurities contained in these oils, we can highlight the FFA, water and products from thermal and oxidative degradation (peroxides, aldehydes, ketones, furans, cyclic and non cyclic monomers) of vegetable oils. The WOF with excellent results were purified by filtration on silica gel "synthetic" in a process performed at room temperature. Besides the pure residual oils, this process was obtained animal fat, which was held on the synthetic silica into the filter funnel. This fat was then purified by filtration at 60 ?C also on silica gel and synthetic as well as the residual oil is also used as starting material in the synthesis of biodiesel. It is noteworthy that the good results achieved in the purification process in synthetic silica gel and the increasing need of raw material (vegetable oils) has encouraged the expansion of the program to collect waste oil and fats (WOF) in the Diamantina / MG city, titled as "Energy Donate" and implemented in 2006. Both crude vegetable oils, such as waste oils and animal fat purified on silica gel synthesis was transesterified biodiesel (methyl or ethyl) in alcoholates (metanolatos and ethanolate) previously prepared "in situ" from the solubilization of NaOH or KOH in methanol or ethanol. This process was the addition of alcoholates on the starting material, and the reaction was conducted under microwave irradiation of a 240 W home for ten minutes and accompanied by thin layer chromatography (TLC). The reaction products (biodiesel and glycerol) were separated by decanting funnel separation, and biodiesel (methyl or ethyl) subsequently washed until neutral, dried on Na2SO4 and purified by distillation at reduced pressure. The characterization of the biodiesel produced was performed by spectrometric methods such as RMN 1H and 13C, in addition, the quality control of biodiesel was carried out using analytical techniques following the standards recommended by the National Petroleum, Natural Gas and Biofuels Agency (ANP). The glycerin was purified through a previous treatment with sulfuric acid or hydrochloric acid, generating the FFA, biodiesel or chlorides and sulfates of alkali metals as co-product. Some of these salts such as sodium sulfate was further purified by recrystallization and used as desiccants for their own biodiesel. The efficiency of the methodology using a household microwave irradiation, led to the study of their use in reactions in situ, that is, direct transesterification of seeds and fruits of oilseeds such as soybeans and castor beans. This process consists of a prior dehydration of fruits or seeds at a temperature of 80 ?C for 8 hours. The alcoholates prepared was added on the fruits or seeds crushed and dried mixture was stirred with the aid of a mechanical stirrer at 7500 rpm for 10 minutes at room temperature in order to homogenize the reaction mixture. This mixture was brought to a domestic microwave oven and irradiated at 240 W for 10 minutes in a process monitored by TLC. After this time the reaction mass was filtered under vacuum to remove the solid waste plant (cake). The resulting solution was transferred to a separatory funnel, which occurred a few minutes, after the separation of biodiesel (upper phase) of glycerin (lower phase) by simple decantation. The products were separated by decantation and glycerin as much biodiesel (methyl or ethyl) have been purified and characterized. The yield of biodiesel was approximately 96% in the use of soybean and 97% employing castor beans.

Na Capa, Folha de Rosto e Ficha Catalogr?fica da obra constam o t?tulo: "Filtro de areia para o manejo da ?gua de chuva". / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2018-06-15T18:51:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) marco_antonio_oliveira.pdf: 5190699 bytes, checksum: edae8a04f3a512075df7923ed8c2c65b (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2018-07-18T11:28:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) marco_antonio_oliveira.pdf: 5190699 bytes, checksum: edae8a04f3a512075df7923ed8c2c65b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-18T11:28:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) marco_antonio_oliveira.pdf: 5190699 bytes, checksum: edae8a04f3a512075df7923ed8c2c65b (MD5) Previous issue date: 2017 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / Funda??o Diamantinense de Apoio ao Ensino, Pesquisa e Extens?o (FUNDAEPE) / No cen?rio atual de acentua??o da car?ncia de recursos naturais em grandes e pequenos centros urbanos, a problem?tica do abastecimento de ?gua pot?vel ? uma quest?o central para a sa?de das popula??es, dada a variedade de doen?as veiculadas pela ?gua, especialmente para consumo humano. Cerca de 30% do consumo humano pode ser efetuado com ?gua de chuva, dado muito importante tendo em vista a escassez do recurso. Em tempos de mudan?as clim?ticas (estiagens prolongadas, cargas de chuvas concentradas, etc.) a retomada de conhecimentos ligados ao aproveitamento da ?gua de chuva ? de interesse para a popula??o urbana e rural. A procura por caminhos de aperfei?oamento das t?cnicas de uso sustent?vel de recursos naturais ? a meta deste trabalho, enfocando a recolha da ?gua de chuva como estrat?gia poss?vel e re-emergente para os tempos atuais. S?o objetivos espec?ficos da pesquisa: avaliar a qualidade da ?gua de chuva em Diamantina (MG) e desenhar filtros naturais que viabilizem o uso n?o pot?vel de forma segura. Como a falta de tratamento da ?gua est? relacionada diretamente com a transmiss?o de doen?as, ? evidente a import?ncia do trabalho quanto aos aspectos de sa?de ambiental e ao atendimento da linha de pesquisa ?Tecnologia e vigil?ncia em sa?de? do Mestrado Interdisciplinar SaSA e do Laborat?rio de Constru??es Sustent?veis no LIPEMVALE (UFVJM). Foram desenvolvidos prot?tipos de filtros compostos de areia, carv?o e pedra, caracterizados pelo uso de mateiriais de f?cil obten??o, para a purifica??o da ?gua de chuva recolhida em telhados de cer?mica. As amostras foram coletadas de Janeiro a Maio de 2017, sendo avaliados par?metros f?sico qu?micos (condutividade, cor aparente, pH, turbidez e salinidade) e microbiol?gicos (coliformes totais e Escherichia coli) antes e depois de passarem pelo processo de filtra??o. A ?gua de chuva apresentou valores compat?veis com usos n?o pot?veis. O filtro alterou positivamente a qualidade da ?gua de chuva da classe 4 para a classe 3, conforme a resolu??o CONAMA 357/2005. O aproveitamento da ?gua de chuva foi considerado tecnologia social devido ao baixo custo e replicabilidade, sendo indicado para usos n?o pot?veis. / Disserta??o (Mestrado Profissional) ? Programa de P?s-Gradua??o em Sa?de, Sociedade e Ambiente, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2017. / In the current scenario of accentuation of the lack of natural resources in large and small urban centers, the problem of the supply of drinking water is a central issue for the health of populations, given the variety of diseases transmitted through water, especially for human consumption. About of 30% of human consumption can be made with rainwater, a very important factor given the scarcity of the resource. In times of climate changes (prolonged drougths, loads of concentred rain, etc), the resumption of knowledge related to the use of rainwater is of interest to the urban and rural population. The search for ways to improve the techniques of sustainable use of natural resources is the goal of this paper, focusing the collecting rainwater as a re-emergent strategy for current times. The specific objectives of the research are: to evaluate the quality of rainwater in Diamantina (Minas Gerais, Brazil) and to design natural filters that enable non-potable use in a safe way. As the lack of water treatment is directly related to the transmission of diseases, it is evident the importance of the work on the aspects of environmental health and the attendance of the research line 'Technology and health surveyllance' of the Interdisciplinary Master SaSA and the Laboratory of Sustainable Buildings in LIPEMVALE (UFVJM). Prototypes of sand, charcoal and stone composite filters were developed characterized by the use of readly available matrices for the purification of rain water collected on ceramic roofs. The samples were collected from January to May of 2017, and evaluated physical chemical parameters (conductivity, apparent color, pH, turbidity and salinity) and microbiological parameters (total coliforms, and Escherichia coli) were evaluated before and after of filtration process. Rainwater presented values compatible with non-potable uses. The filter positively changed the rainwater quality from class 4 to class 3, according CONAMA resolution 357/2005. The use of rainwater was considered social technology due to the low cost and replicability.

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A adsor??o em leito expandido (ALE) tem se destacado como uma t?cnica promissora para essa finalidade, pois combina em uma ?nica opera??o as etapas de clarifica??o, concentra??o e purifica??o da prote?na alvo, reduzindo assim tempo e custos de opera??o. Neste contexto, o objetivo desta tese foi avaliar a recupera??o e purifica??o do ant?geno 503 de Leishmania i. chagasi expresso em E. coli M15 e a remo??o de endotoxina por ALE. Na primeira etapa do trabalho foram realizados ensaios em taques agitados sob a forma de dois planejamentos experimentais, para definir as condi??es ?timas de adsor??o e elui??o do ant?geno na resina Streamline chelating. Nos ensaios de adsor??o usando o leito na forma expandida empregou-se uma coluna de 2,6 cm de di?metro por 30,0 cm de altura, acoplada a uma bomba perist?ltica. Na segunda etapa do trabalho, avaliou-se a remo??o de endotoxina durante o processo de recupera??o do ant?geno, empregando o tensoativo n?oi?nico triton X-114 na etapa de lavagem da ALE. Na terceira etapa, buscou-se elaborar um modelo matem?tico capaz de prever as curvas de ruptura do ant?geno 503 em coluna na forma expandida. Os resultados do planejamento experimental para adsor??o do ant?geno 503 mostraram o pH 8,0 e a concentra??o de NaCl de 2,4 M como melhores condi??es de adsor??o. No segundo planejamento, o ?nico fator significativo para elui??o foi a concentra??o de imidazol, definida em 600 mM. A isoterma de adsor??o do ant?geno 503 mostrou bom ajuste ao modelo de Langmuir (R=0,98) e os valores de qmax (capacidade m?xima de adsor??o) e Kd (constante de equil?brio) estimados foram de 1,95 mg/g e 0,34 mg/mL, respectivamente. Atrav?s dos testes de purifica??o diretamente do homogeneizado n?o clarificado obteve-se uma recupera??o de 59,2% da prote?na de interesse e um fator de purifica??o de 6,0. A adi??o do tensoativo n?o-i?nico Triton X-114 ? etapa de lavagem da ALE proporcionou altos valores (>99%) de remo??o do LPS inicialmente presente nas amostras para todas as condi??es estudadas. O modelo matem?tico obtido para descrever a curva de ruptura do ant?geno 503 na resina Streamline Chelanting em leito expandido apresentou bom ajuste aos dados experimentais, tanto para etapa de estimativa de par?metros quanto para de valida??o. O modelo validado foi utilizado na otimiza??o das efici?ncias, obtendo-se os valores m?ximos de efici?ncia do processo e efici?ncia da coluna de 89,2% e 75,9%, respectivamente. Portanto, ALE mostrou ser uma alternativa eficiente na recupera??o da prote?na-alvo e remo??o de endotoxina a partir de um extrato de E. coli n?o clarificado em apenas uma etapa. / The growing interest and applications of biotechnology products have increased the development of new processes for recovery and purification of proteins. The expanded bed adsorption (EBA) has emerged as a promising technique for this purpose. It combines into one operation the steps of clarification, concentration and purification of the target molecule. Hence, the method reduces the time and the cost of operation. In this context, this thesis aim was to evaluate the recovery and purification of 503 antigen of Leishmania i. chagasi expressed in E. coli M15 and endotoxin removal by EBA. In the first step of this study, batch experiments were carried out using two experimental designs to define the optimal adsorption and elution conditions of 503 antigen onto Streamline chelating resin. For adsorption assays, using expanded bed, it was used a column of 2.6 cm in diameter by 30.0 cm in height coupled to a peristaltic pump. In the second step of study, the removal of endotoxin during antigen recovery process was evaluated employing the non-ionic surfactant Triton X-114 in the washing step ALE. In the third step, we sought developing a mathematical model able to predict the 503 antigen breakthrough curves in expanded mode. The experimental design results to adsorption showed the pH 8.0 and the NaCl concentration of 2.4 M as the optimum adsorption condition. In the second design, the only significant factor for elution was the concentration of imidazole, which was taken at 600 mM. The adsorption isotherm of the 503 antigen showed a good fit to the Langmuir model (R = 0.98) and values for qmax (maximum adsorption capacity) and Kd (equilibrium constant) estimated were 1.95 mg/g and 0.34 mg/mL, respectively. Purification tests directly from unclarified feedstock showed a recovery of 59.2% of the target protein and a purification factor of 6.0. The addition of the non-ionic surfactant Triton X-114 to the washing step of EBA led to high levels (> 99%) of LPS removal initially present in the samples for all conditions tested. The mathematical model obtained to describe the 503 antigen breakthrough curves in Streamline Chelanting resin in expanded mode showed a good fit for both parameter estimation and validation steps. The validated model was used to optimize the efficiencies, achieving maximum values of the process and of the column efficiencies of 89.2% and 75.9%, respectively. Therefore, EBA is an efficient alternative for the recovery of the target protein and removal of endotoxin from an E. coli unclarified feedstock in just one step.