Submitted by LAUDECIR LEMOS RAIOL JÚNIOR null (laudecir_junior@yahoo.com.br) on 2017-03-31T03:59:38Z No. of bitstreams: 1 Tese_Laudecir_Lemos_Raiol_Júnior.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) / Rejected by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 6 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 6 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-06T14:47:38Z (GMT) / Submitted by LAUDECIR LEMOS RAIOL JÚNIOR null (laudecir_junior@yahoo.com.br) on 2017-04-07T14:14:25Z No. of bitstreams: 1 Tese_Laudecir_Lemos_Raiol_Júnior.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-04-10T18:46:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 raioljunior_ll_dr_jabo.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T18:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 raioljunior_ll_dr_jabo.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) Previous issue date: 2017-01-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Huanglongbing (HLB), causada pela bactéria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) que coloniza o floema das plantas cítricas, é considerada a doença mais grave e destrutiva dos citros. Aspectos da patogenicidade de Las ainda não estão compreendidos, dificultado pela condição não cultivável do patógeno. Entender como Las se movimenta internamente na planta para colonizar os diferentes tecidos é fundamental para o controle do HLB e a busca de materiais com potencial de resistência. O objetivo desse trabalho foi caracterizar a movimentação de Las em plantas de citros. Nos experimentos plantas de laranjeiras foram inoculadas por enxertia de segmentos de ramos de plantas infectadas de 2 - 3 cm de comprimento. Para estudo da velocidade de movimentação de Las nos vasos do floema, foi utilizado duas metodologias. A primeira envolveu poda sequencial do caule a diferentes distâncias do ponto de inoculação e avaliação de amostras de folhas seis meses após a inoculação. Já na segunda metodologia foi realizado a coleta de amostras de anéis de casca do caule a diferentes distâncias do ponto de inoculação e de raízes fibrosas. Foi avaliado também a influência de novos fluxos de crescimentos na movimentação de Las. Lotes de plantas foram podadas na parte aérea ou no sistema radicular para indução do crescimento. Plantas não podadas foram usadas como controle. Foram amostradas folhas que surgiram na planta após a inoculação, folhas velhas, anel de casca e raízes fibrosas a partir de 15 dias após a inoculação. E para o estudo do padrão de movimentação de Las nas plantas, foram utilizadas plantas aneladas totalmente, parcialmente e não aneladas no caule e inoculadas no topo ou na base do caule para avaliar se Las precisa passar pela raiz para colonizar outros pontos da copa. Os resultados permitiram concluir que a velocidade média necessária para Las atingir a raiz de 95% das plantas, localizada 85 cm abaixo do local de inoculação, foi estimado variando entre 2,9 a 6,9 cm dia-1. Foi observado também que fatores ambientais influenciam a velocidade de movimentação da bactéria na planta. No experimento para avaliar a influência das regiões de crescimento, parte aérea ou sistema radicular, na movimentação de Las, a maior probabilidade de detecção da bactéria foi observada em tecidos das regiões que foram estimulados a crescer através da poda, quando comparados com as plantas não podadas. Com relação aos tecidos amostrados, anéis de casca do caule foram as que apresentaram maiores porcentagens de detecção de Las. Além disso, as plantas em que foram estimulados o crescimento do sistema radicular apresentaram 90% a mais de probabilidade de se encontrar Las nas raízes em relação a amostras de casca do caule ou folhas. Os resultados sugerem que a bactéria precisa passar pela raiz para atingir outros pontos da copa. No entanto, esse fator não foi totalmente esclarecido porque o anelamento das plantas provocou acúmulo de amido e alteração no fluxo da seiva, que pode ter influenciado na movimentação da bactéria. / Huanglongbing (HLB), caused by the bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) which colonizes the phloem of citrus plants, is considered the most serious and destructive disease of citrus. Las pathogenicity aspects are not yet understood, hampered by non-cultured condition of the pathogen. Understanding how Las moves within the plant to colonize the different tissues is fundamental for HLB management and searching for materials with resistance potential. The objective of this research was to characterize the movement of Las in citrus plants. In the experiments orange plants were inoculated using grafting segments from infected plant branches 2-3 cm long. To study the speed of Las movement in phloem, two methodologies were used. The first involved sequential pruning of the stem at different distances from the inoculation site and evaluation of leaf samples six months after inoculation. In the second methodology was collected the ring samples of stem bark at different distances from the point of inoculation until the ground level and fibrous roots. It was also evaluated the influence of the growth flows in the Las movement. Lots of plants were pruned in the aerial part or in the root system to induction of growth. Unpruned plants were used as controls. The plants were evaluated by sampling young leaves, mature leaves, stem bark and roots every 15 days from inoculation. For the study of the movement pattern of Las in the plants, we used totally, partially and non-girdling plants and inoculated at the top or base of the stem to evaluate if Las must pass through the root to colonize other points of the canopy. The results allowed to conclude that the average speed required for Las to reach the 95% root of the plants, located 85 cm below the inoculation site, was estimated varying from 2.9 to 6.9 cm day-1. It was also observed that environmental factors influence the speed of the bacterium movement in the plant. In the experiment to evaluate the influence of the growth regions, aerial part or root system, in the movement of Las, the highest probability of detection of the bacteria were observed in tissues from the regions that were stimulated to grow through pruning, when compared with unpruned plants. Regarding the sampled tissues, stem bark rings were the ones with the highest percentages of Las detection. Furthermore, the growth of the root system increased the possibility of finding Las in roots samples by 90% than in other sampled tissues. The results suggest that the bacteria must pass through the root to reach other parts of the canopy. However, this factor was not fully understood because the plants girdling caused starch accumulation and change in the sap flow, which may have influenced the movement of the bacteria.

Submitted by Amanda Nonato null (amandanonato@zootecnista.com.br) on 2017-05-04T18:17:51Z No. of bitstreams: 1 Tese Amanda Nonato.pdf: 1885961 bytes, checksum: 3b20e5e85bd1ef0f045b36418344a412 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-05T13:29:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nonato_a_dr_jabo.pdf: 1885961 bytes, checksum: 3b20e5e85bd1ef0f045b36418344a412 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T13:29:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nonato_a_dr_jabo.pdf: 1885961 bytes, checksum: 3b20e5e85bd1ef0f045b36418344a412 (MD5) Previous issue date: 2017-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A arginina é um aminoácido nutricionalmente essencial, importante na gestação de mamíferos, pois aumenta a sobrevivência, crescimento e desenvolvimento de embriões, fetos e neonatos. A arginina pode ser utilizada na síntese de poliaminas por uma via metabólica clássica, porém estudos recentes revelaram uma importante via alternativa. Todavia, ambas foram pouco investigadas. Nesse contexto, estudos são necessários a fim de identificar a ocorrência das vias metabólicas da arginina nos tecidos reprodutivos durante a gestação de ovelhas. Assim o presente estudo teve como objetivos: a) avaliar a expressão de genes das vias metabólicas da arginina em conceptos durante o período de peri-implantação em ovelhas; b) identificar a localização das proteínas das vias metabólicas da arginina em conceptos e no endométrio durante o período de peri-implantação em ovelhas; e c) identificar a localização das proteínas das vias metabólicas da arginina em placentomas em ovelhas. Para tanto, ovelhas da raça Rambouillet (n=72) foram sincronizadas e após detecção do estro por machos vasectomizados, foram cobertas por machos da raça Suffolk com fertilidade comprovada. No experimento 1, as ovelhas (n=20) foram histerectomizadas aos 13, 14, 15 ou 16 dias de gestação, e os fragmentos de conceptos coletados foram congelados em nitrogênio líquido a fim de se estudar a expressão gênica. No experimento 2, ovelhas (n=28) também foram histerectomizadas aos 13, 14, 15 ou 16 dias de gestação e, secções de conceptos e de endométrio, foram fixados a fim de avaliar a localização de proteínas por imunohistoquímica. No experimento 3, ovelhas (n=24) foram histerectomizadas aos 40, 60, 80, 100, 120 ou 140 dias de gestação e placentomas foram coletados e fixados para posterior análise imunohistoquímica. Os dados de expressão gênica foram analisados utilizando o procedimento GLM do SAS e as diferenças na intensidade da imunomarcação foram avaliadas com o software R, foi realizada a análise de variância (ANOVA). O nível de significância considerado foi <0,05. A expressão dos genes ADC e AGMAT (via alternativa), não foi alterada ao longos dos dias de gestação, e o mesmo ocorreu para o gene ARG1 (via clássica). O gene ODC1 (via clássica) apresentou maior expressão aos 13 dias de gestação (P=0,06). A análise imunohistoquímica identificou as proteínas ARG1, ODC1, ADC e AGMAT nos diferentes tecidos e dias de gestação, evidenciando a importância da ambas vias durante a gestação. A presença das proteínas no epitélio luminal do endométrio aumentou (p=0,038) após os 13 dias de gestação e foi significativamente maior aos 16 dias, sugerindo que essas proteínas são requeridas em maiores concentrações para o processo de alongamento do concepto e implantação. No epitélio glandular, a presença das proteínas não foi alterada (p=0,64) ao longo dos dias estudados. Não foi observada diferença (p=0,472) entre a identificação das proteínas no trofectoderma dos conceptos ao longo dos dias. Nos placentomas, a presença das proteínas foi menor (p<0,01) aos 40 dias de gestação, quando comparadas com os dias 60, 120 e 140. Os resultados do presente estudo evidenciam a importância de ambas vias metabólicas da arginina, para produção de poliaminas, durante o período gestacional de ovelhas. / Arginine is a nutritionally essential amino acid, important for pregnancy in mammalian, to increase the survival, growth and development of embryos, fetuses and neonates. Arginine can be used in the synthesis of polyamines by a classical metabolic pathway, though recent studies revealed an important alternative pathway, however, both have been poorly investigated. In this context, studies are necessary in order to identify an occurrence of arginine metabolic pathways in the reproductive tissues during a pregnancy in ewes. The present study had as objectives: a) evaluate the gene expression in the metabolic pathways of arginine, in concepts during the pre-implantation period of pregnancy in ewes; b) to identify the localization of proteins, from the metabolic pathways of arginine, in concepts and uterine endometrium during the pre-implantation period of pregnancy in ewes; and c) to identify the localization of proteins, from the metabolic pathway of arginine, in placentomes during the pre-implantation period of pregnancy in ewes. Rambouillet ewes (n=72) were synchronized and after estrus detection by vasectomized males, ewes were mated by Suffolk males with proven fertility. In experiment 1, ewes (n=20) were hysterectomized at days 13, 14, 15 or 16 of pregnancy, and the sections of concepts collected were frozen in liquid nitrogen in order to study gene expression. In the experiment 2, ewes (n=28) were also hysterectomized at days 13, 14, 15 or 16 of pregnancy, sections of conceptuses and uterine endometrium were fixed in order to identify the protein localization by immunohistochemical analysis. In experiment 3, ewes (n=24) were hysterectomized on days 40, 60, 80, 100, 120 or 140 days of pregnancy, placentomes were collected and fixed for immunohistochemical analysis. Data analysis of gene expression was analyzed using GLM procedure of SAS and differences in the intensity of the immunostaining were evaluated using software R, analysis of variance (ANOVA) was performed. Significance level was declared < 0.05. The expression of ADC and AGMAT genes (alternative pathway) did not alter across days of pregnancy, and the same happened with ARG1 gene (classic pathway). The ODC1 gene (classic pathway) showed greater expression at 13 days of pregnancy (P=0.06). The immunohistochemical analysis identified ARG1, ODC1, ADC and AGMAT proteins in all tissues and days of pregnancy studied, evidencing the relevance of both pathways during pregnancy. The identification of proteins on lumen epithelia from endometrium improved (p=0.038) after Day 13 of pregnancy and it was significantly greater on Day 16, suggesting that these proteins are required in higher concentrations for conceptuses elongation and implantation. On glandular epithelia, the proteins identification did not change (p=0.64) across days of pregnancy. No difference was observed (p=0.472) between the proteins identification on trofectoderm across days. On placentomes, the proteins identification was lower (p<0.01) on Day 40 of pregnancy compared with Days 60, 120 and 140. The results of the experiment indicate that relevance of both metabolic pathways of arginine to polyamines production during the pregnancy period in ewes.

Orientador: Germano Francisco Biondi / Resumo: A franciselose em peixes podem causar sérias perdas econômicas aos produtores. Os objetivos dessa pesquisa foram estimar e identificar a prevalência de Francisella noatunensis orientalis em Oreochromis niloticus cultivadas em tanques-rede na bacia hidrográfica do rio Araguari – Minas Gerais – Brasil. Foram coletadas aleatoriamente 150 amostras de baço de Oreochromis niloticus oriundas de cultivos em tanques-rede localizados em reservatórios de hidrelétricas localizadas na bacia hidrográfica do rio Araguari - Minas Gerais, Brasil e abatidas em três frigoríficos distintos. Foram mensurados o comprimento padrão (cm) e a massa corpórea (g) dos peixes. Antes da coleta do baço, foi identificado o sexo dos peixes. O baço foi utilizado para identificar a Francisella spp. pelo método de qPCR. As fêmeas apresentaram uma massa corpórea e um comprimento padrão menores significativamente (p<0,0001) quando comparados com os machos. Não foi observada relação significativa entre essas variáveis com a presença da bactéria (p>0,05). Os resultados da qPCR identificaram a Francisella spp. em seis amostras, correspondendo a prevalência de 4 %. Dessas, duas foram encaminhadas para a realização do sequenciamento do gene iglC pertencente à região 16S do RNA ribossômico, o qual identificou a presença de Francisella noatunensis orientalis em ambas. Esse achado de prevalência pode levar à instauração, por parte dos órgãos governamentais, de condutas de vigilância dos casos de franciselose no país, devi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Francisellosis in fishes can cause serious economic losses to producers. The aims of this research were to estimate and verify the prevalence of Francisella noatunensis orientalis in Oreochromis niloticus grown in cages system in Araguari river hydrographic basin – Minas Gerais state – Brazil. It was collected, randomly, 150 spleen samples of Oreochromis niloticus derived crops in cages located in hydroelectric reservoirs placed in Araguari river hydrographic basin – Minas Gerais state – Brazil, from three different slaughterhouses. It was measured the fishes standard lenght (cm) and the body mass (g). Before the collection of the spleen, the gender of the fishes was identified. The spleen was used to identify the Francisella spp. by qPCR method. The female showed a body mass and significantly smaller standard lenght (p<0,0001) when compared with males. It was not observed a significant relationship between these variables with the presence of bacterium (p>0,05). The qPCR results identified Francisella spp. in six samples, representing a prevalence of 4 %. From these, two were directed to the achievement of the sequencing of the gene iglC belonging to the 16S ribosomal RNA identified the presence of Francisella noatunensis orientalis on both. This prevalence finding may lead to the establishment, from government departments, monitoring behavior of francisellosis cases in Brazil, due to major economic losses generated by its etiological agent. / Doutor

Dentre as oito espécies do gênero Listeria, a única transmitida por alimentos, patogênica para humanos, é a Listeria monocytogenes. De grande preocupação para a indústria alimentícia, este microrganismo pode ser encontrado em diversas superfícies de plantas processadoras de alimentos, sendo capaz de se aderir e formar persistentes biofilmes. No presente trabalho, foi estudada a influência da concentração de glicose e do tempo de incubação na formação de biofilme por uma cepa de L. monocytogenes, sorotipo 1/2a, cultivada em três diferentes temperaturas, 7°C, 25°C e 37°C, através de planejamento experimental utilizando a Metodologia de Superfície de Resposta. As duas variáveis testadas, para os intervalos estudados, foram significativas (p<0,05) na formação de biofilme somente na temperatura de 37°C e, tanto concentrações de glicose tendendo a zero combinadas com tempos de incubação próximos a 26 h, como maiores concentrações de glicose combinadas com menores tempos de incubação, dentro da faixa de estudo aplicada, representaram boas condições para a formação de biofilme. Foi também realizada a análise transcricional de genes relacionados à formação de biofilme e virulência em duas cepas de L. monocytogenes, sorotipos 1/2a e 4b, cultivadas a 7°C e 37°C (condição controle), pela técnica de PCR quantitativo em tempo real (RT-qPCR). Para ambas as cepas, os genes sigB, prfA, luxS, sufS, sufU, ltrC e flaA apresentaram transcrição significativamente aumentada (p<0,05) a 7°C, em comparação aos resultados para a condição de cultivo a 37°C, enquanto que o gene hly não variou significativamente a sua transcrição entre as duas temperaturas. O gene actA foi mais transcrito a 7°C para a cepa denominada 55, do sorotipo 1/2a, enquanto que não variou significativamente a sua transcrição entre as duas condições de crescimento para a cepa denominada 47, do sorotipo 4b. No entanto, para a cepa 55, o gene degU não demonstrou diferença estatisticamente significativa entre seus níveis de transcrição nas duas temperaturas estudadas, mas para a cepa 47, apresentou transcrição significativamente aumentada a 7°C. Interessantemente, a presença do gene agrA não foi detectada na cepa 47, e os seus níveis de transcrição foram menores a 7°C para a cepa 55. Estes resultados demonstram que os dois sorotipos estudados, responsáveis por muitos dos casos humanos de listeriose, apresentam mecanismos moleculares diferentes, nas temperaturas de 7°C e 37°C. / Among the eight species of genus Listeria, the only transmitted by food, pathogenic for humans, is Listeria monocytogenes. Of great concern to the food industry, this microorganism can be found in various areas of food processing plants, being able to adhere and form persistent biofilms. In the present work, the influence of glucose concentration and incubation time on biofilm formation by a strain of L. monocytogenes, serotype 1/2a, grown in three different temperatures, 7°C, 25°C and 37°C, have been studied, through an experimental design using the Response Surface Methodology. The two variables tested, for the studied intervals, were significant (p<0,05) in the biofilm formation only at a temperature of 37°C and, both glucose concentrations tending to zero combined with incubation times near to 26 h, and higher glucose concentrations combined with lower incubation times, within the applied range study, represented good conditions for biofilm formation. Transcriptional analysis of genes related to biofilm formation and virulence in two strains of L. monocytogenes, serotypes 1/2a and 4b, grown at 7°C and 37°C (control condition), was also performed, by real-time quantitative PCR (RT-qPCR). For both strains, sigB, prfA, luxS, sufS, sufU, ltrC and flaA genes showed significantly increased transcription (p<0,05) at 7°C, in comparison with results for the growth condition at 37°C, whereas hly gene did not varied significantly its transcription between the two temperatures. The actA gene was more transcribed at 7°C for the 55 strain, serotype 1/2a, while did not varied significantly its transcription between the two growth conditions for the 47 strain, serotype 4b. However, for 55 strain, the degU gene did not showed statistically significant difference for its transcription levels between the two studied temperatures, but for 47 strain, presented significantly increased transcription at 7°C. Interestingly, the presence of agrA gene was not detected in 47 strain, and its transcription levels were lower at 7°C for 55 strain. These results demonstrate that the two studied serotypes, responsible for many of the human listeriosis cases, have different molecular mechanisms, at temperatures of 7 and 37°C.

Dentre as oito espécies do gênero Listeria, a única transmitida por alimentos, patogênica para humanos, é a Listeria monocytogenes. De grande preocupação para a indústria alimentícia, este microrganismo pode ser encontrado em diversas superfícies de plantas processadoras de alimentos, sendo capaz de se aderir e formar persistentes biofilmes. No presente trabalho, foi estudada a influência da concentração de glicose e do tempo de incubação na formação de biofilme por uma cepa de L. monocytogenes, sorotipo 1/2a, cultivada em três diferentes temperaturas, 7°C, 25°C e 37°C, através de planejamento experimental utilizando a Metodologia de Superfície de Resposta. As duas variáveis testadas, para os intervalos estudados, foram significativas (p<0,05) na formação de biofilme somente na temperatura de 37°C e, tanto concentrações de glicose tendendo a zero combinadas com tempos de incubação próximos a 26 h, como maiores concentrações de glicose combinadas com menores tempos de incubação, dentro da faixa de estudo aplicada, representaram boas condições para a formação de biofilme. Foi também realizada a análise transcricional de genes relacionados à formação de biofilme e virulência em duas cepas de L. monocytogenes, sorotipos 1/2a e 4b, cultivadas a 7°C e 37°C (condição controle), pela técnica de PCR quantitativo em tempo real (RT-qPCR). Para ambas as cepas, os genes sigB, prfA, luxS, sufS, sufU, ltrC e flaA apresentaram transcrição significativamente aumentada (p<0,05) a 7°C, em comparação aos resultados para a condição de cultivo a 37°C, enquanto que o gene hly não variou significativamente a sua transcrição entre as duas temperaturas. O gene actA foi mais transcrito a 7°C para a cepa denominada 55, do sorotipo 1/2a, enquanto que não variou significativamente a sua transcrição entre as duas condições de crescimento para a cepa denominada 47, do sorotipo 4b. No entanto, para a cepa 55, o gene degU não demonstrou diferença estatisticamente significativa entre seus níveis de transcrição nas duas temperaturas estudadas, mas para a cepa 47, apresentou transcrição significativamente aumentada a 7°C. Interessantemente, a presença do gene agrA não foi detectada na cepa 47, e os seus níveis de transcrição foram menores a 7°C para a cepa 55. Estes resultados demonstram que os dois sorotipos estudados, responsáveis por muitos dos casos humanos de listeriose, apresentam mecanismos moleculares diferentes, nas temperaturas de 7°C e 37°C. / Among the eight species of genus Listeria, the only transmitted by food, pathogenic for humans, is Listeria monocytogenes. Of great concern to the food industry, this microorganism can be found in various areas of food processing plants, being able to adhere and form persistent biofilms. In the present work, the influence of glucose concentration and incubation time on biofilm formation by a strain of L. monocytogenes, serotype 1/2a, grown in three different temperatures, 7°C, 25°C and 37°C, have been studied, through an experimental design using the Response Surface Methodology. The two variables tested, for the studied intervals, were significant (p<0,05) in the biofilm formation only at a temperature of 37°C and, both glucose concentrations tending to zero combined with incubation times near to 26 h, and higher glucose concentrations combined with lower incubation times, within the applied range study, represented good conditions for biofilm formation. Transcriptional analysis of genes related to biofilm formation and virulence in two strains of L. monocytogenes, serotypes 1/2a and 4b, grown at 7°C and 37°C (control condition), was also performed, by real-time quantitative PCR (RT-qPCR). For both strains, sigB, prfA, luxS, sufS, sufU, ltrC and flaA genes showed significantly increased transcription (p<0,05) at 7°C, in comparison with results for the growth condition at 37°C, whereas hly gene did not varied significantly its transcription between the two temperatures. The actA gene was more transcribed at 7°C for the 55 strain, serotype 1/2a, while did not varied significantly its transcription between the two growth conditions for the 47 strain, serotype 4b. However, for 55 strain, the degU gene did not showed statistically significant difference for its transcription levels between the two studied temperatures, but for 47 strain, presented significantly increased transcription at 7°C. Interestingly, the presence of agrA gene was not detected in 47 strain, and its transcription levels were lower at 7°C for 55 strain. These results demonstrate that the two studied serotypes, responsible for many of the human listeriosis cases, have different molecular mechanisms, at temperatures of 7 and 37°C.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-12T15:02:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilzane Dantas Nóbrega.pdf: 1294447 bytes, checksum: 21608dde0c9fde9504e79e6652893aa4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T15:02:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilzane Dantas Nóbrega.pdf: 1294447 bytes, checksum: 21608dde0c9fde9504e79e6652893aa4 (MD5) Previous issue date: 2014 / A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma doença de caráter zoonótico que reflete em graves problemas à saúde pública. Os cães são os principais reservatórios domésticos do protozoário. No Brasil, uma das formas de controle é a eutanásia dos cães portadores da infecção e nesse contexto, o diagnóstico preciso da LVC é muito importante. Porém, ainda não há um teste altamente sensível e específico, de fácil execução, simples, menos invasivo e de rápido resultado. As avaliações das novas metodologias empregadas para diagnóstico são necessárias ao aprimoramento do programa de controle. Esse estudo teve como objetivo avaliar e comparar dois testes sorológicos que utilizam proteínas recombinantes, sendo um teste imunocromatográfico (TR DPP®) com antígeno rk26/rk39/rk9 e um Ensaio Imunoenzimático (ELISA/S7®) com HSP70 e um teste molecular, a Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real para diagnóstico da LVC no Semiárido Paraibano. Foram utilizadas 258 amostras de soro e sangue total divididas em dois grupos: 212 de animais assintomáticos e 46 de animais sintomáticos obtidos durante um levantamento epidemiológico no Semiárido Paraibano. Os resultados mostraram que do total das amostras, 32,9% (85/258) foram positivas em pelo menos um teste, sendo 29,2 % (62/212) dos animais assintomáticos e 50,0% (23/46) dos animais sintomáticos. Os melhores resultados de concordância entre os testes foram obtidos quando realizada a comparação entre a qPCR e o ELISA/S7® mostrando que para animais assintomáticos a sensibilidade e especificidade foi de 74% e 93%, respectivamente e coeficiente Kappa de 0,58, os animais sintomáticos apresentaram sensibilidade de 80% e 81% de especificidade com coeficiente Kappa de 0,51 revelando moderada concordância em ambos os grupos. Com base nos resultados, o ELISA/S7® apresentou um melhor desempenho entre os testes, embora o TR DPP® seja um teste de fácil execução e rápido diagnóstico.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-18T14:24:33Z No. of bitstreams: 2 TESE Marina de Assis Souza.pdf: 5668024 bytes, checksum: 0e33397511d45e0f461e61a5893b8f99 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-18T14:24:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Marina de Assis Souza.pdf: 5668024 bytes, checksum: 0e33397511d45e0f461e61a5893b8f99 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / FACEPE e CNPq / O modelo clássico de susceptibilidade e resistência à leishmaniose sugere que a expansão de células Th1 ou Th2 direcione o resultado da infecção. Recentemente, o perfil Th17 foi relacionado à doença e parece ser antagônico às células T regulatórias (Treg). Assim, este estudo teve como objetivo quantificar, por ELISA de captura ou qPCR, alguns mediadores dos perfis Th1, Th2, Th17 e Treg (IFN-γ, TNF-α, IL-10, IL-4, TGF-β, IL-6, IL-17, IL-22, RORC, Foxp3 e iNOS) em pacientes com leishmaniose tegumentar americana (LTA) ativa (AD) e após a cura clínica, tratados (AT) ou não (cura espontânea; SH). Os pacientes foram capazes de apresentar resposta imunológica específica frente aos antígenos solúvel (AgSol) e insolúvel (AgIns) de L. (V.) braziliensis em relação ao grupo controle. O primeiro artigo demonstrou que, em resposta ao AgSol, houve a predominância de IFN-γ (P = 0,0061) e TNF-α (P = 0,008) durante a doença ativa, indicando a presença de uma resposta inflamatória; IL-17 também é evidenciada nesse estado clínico (P = 0,04). Um aumento na secreção de NO foi observado em SH (P = 0,023), enquanto que IL-17 foi observada em baixos níveis nesses pacientes, sugerindo que esta parece ser regulada pelo NO. A presença de IL-10 e IL-22 foi observada em todos os grupos (P > 0,05). No segundo artigo, o AgIns estimulou produção significativa de IFN- γ em todos os grupos (P < 0,05). AD (P = 0,007) e AT (P = 0,003) produziram TNF-α. Em contrapartida, o grupo SH apresentou baixos níveis da citocina. De forma interessante, a secreção de NO foi significativa nesses indivíduos (P = 0,04), enquanto que IL-17 foi observada em baixos níveis. Produção significativa de IL-17 foi observada no grupo AT (P = 0,04). Embora IL-22 tenha sido detectada em AD (P = 0,02), seu papel é questionável. A presença de IL-10 em todos os grupos de pacientes sugere que a citocina desempenhe diferentes papéis na doença (P > 0,05). No terceiro artigo, PBMC de pacientes com lesões ativas expressaram mRNA para IFN-γ (AgSol: P = 0,017; AgIns: P = 0,0004) e TNF-α (AgSol: 0,0306; AgIns: P = 0,027), reforçando a possível presença de uma resposta inflamatória. A ausência de mRNA para a iNOS nesses pacientes pode ser devido à presença de NO secretado, representando um mecanismo de compensação. Este evento pode ajudar a evitar a exacerbação da resposta imune. Além disso, a presença significativa de mRNA para IL-10 (AgSol: P = 0,0119; AgIns: P = 0,0114) sugere que mecanismos imunomodulatórios favoreçam uma resposta imune efetiva contra a Leishmania. A expressão de Foxp3 frente ao AgIns (P = 0,0208) indica que células T regulatórias estejam presentes na resposta de pacientes com lesões ativas. Embora IL-17 e IL-22 pareçam ser importantes na resposta imune efetiva na LTA, Os níveis de mRNA para estas citocinas não foram significativos (P > 0,05).Entretanto, os níveis de IL-6 expressos pelos pacientes (AgSol: P = 0,0189) com doença ativa parecem ter sido insuficientes para induzir um perfil Th17 juntamente com TGF-β (P > 0,05), dada a expressão não significativa de RORC (P > 0,05). A expressão de TGF- β pode ter contribuído para a regulação da resposta imune pelas células Treg, o que reforça o suposto antagonismo entre este e o perfil Th17. Assim, a secreção/expressão desses mediadores reforça a complexidade da resposta imune celular no combate à Leishmania, e traz informações para o desenvolvimento de vacinas e esquemas imunoterapêuticos.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-06T18:47:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertacao-BrenoAlbuquerque.pdf: 1989114 bytes, checksum: 513b1650c4c44605e3bda0afef185321 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T18:47:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertacao-BrenoAlbuquerque.pdf: 1989114 bytes, checksum: 513b1650c4c44605e3bda0afef185321 (MD5) Previous issue date: 2012 / O Papilomavírus bovino(BPV) é o agente etiológico da papilomatosebovina. Esta apresenta lesões que normalmente são benignas e tendem a regredir, porém podem progredir a uma neoplasia. Muitas metodologias utilizadas para detecção de BPV se mostram inespecíficas e apresentam reações cruzadas com outros organismos relacionados. No entanto, a reação quantitativa em tempo real emcadeia da polimerase (qPCR) é uma ferramenta de destaque na detecção, tipificação e quantificação de nucleotídeos e vem sendo utilizada na clínica para avaliar carga viral. O objetivo do trabalho foi desenvolver um novo protocolo de detecção, tipificação e quantificação de BPV através daqPCR. Foram desenhados cinco pares de primers, que possuem como alvo uma região conservada do genoma viral (gene L1) de diferentes BPVs. A seletividade dos primers foi testada in vitroe DNA extraído de células MDBK não infectadas foram utilizados como controle negativo. A técnica de qPCR permitiu detectar, tipificar e quantificar material viral dos BPVs 1, 2, 4, 5 e 6. O limiar relativo da detecção foi de 4fg de DNA,emtorno de 30-40 cópias de DNA/μL. Dos cinco pares de primers produzidos, quatro apresentaram mesmo perfil térmico durante a qPCR (qPCRBPV2, 4, 5 e 6), permitindo em um único procedimento detectar e tipificar os quatro tipos virais. A distinção das amostrasfoi realizada através da análise de meltingque permitiu tipificá-las. Através da metodologia desenvolvida foi observado que em lesões cutâneas de bovinos infectados com BPV a carga viral não se mostrou inferior a 1000 cópias/μL, enquanto que a técnica permite quantificar até um limiar de 40 copias de DNA/μl. Este trabalho possui relevância para validação de qPCR como diagnóstico da papilomatose bovina e particular importância quando aplicado em estudos da infecção pelo BPV e no monitoramento por veterinários da eficácia das futuras vacinas. / Bovine papillomavirus (BPVs) is the etiologic agent of bovine papilomatose which is characterized by hyper proliferative lesions. Papillomas in cattle are typically benignandoften regress, but occasionally lesions can persist and progress to malignant neoplasia.The majority of current techniques for identification of BPV is unspecific andpossessescross-reactivity with closely related organisms.The Real-time quantitative polymerase chain reaction assay (qPCR) has become an exceptional tool for detection and quantification of oligonucleotides and has been utilized increasingly on viral load evaluation.Aiming to develop a new protocol for fast detection, typification and quantification of BPV in qPCR, we designed five pairs of Oligonucleotides for BPV1, 2, 4, 5 and 6 focusing on L1 gene. The qPCR primers sets were testedin vitroandMadin-Darby Bovine Kidney Cells (MDBK)DNA was also used as negative control.The Real-time qPCR assay provided an accurate detection and quantification for the BPVs 1, 2, 4, 5 and 6. The relative detection limit for the assays was 4fg or 30 to 40genome equivalents. Four primers pairs (qPCRBPV2, 4, 5 and 6) had the same annealing temperature and their products showed differences on meltingpoints analyses. Through the meltingpoint analysis, samples can be identified and discriminated as a screening and then samples can be run for viral load. In our study we tested the viral load in bovine cutaneous skin warts and observed infections with 1000 copies/μl at least. However, this assay could reach levels of 40copies/μL. In conclusion, this methodology has an important impact on the validation of qPCR as a BPV diagnosis. Its relevance is proved when applied to BPV infection studies and the monitoring of the efficacy of future BPV vaccinesby veterinarians.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6499_1.pdf: 2052434 bytes, checksum: 0d0ed4c819168b93a4f1be887b9da045 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Metarhizium anisopliae é um patógeno de insetos economicamente importante usado em todo o mundo no controle biológico de insetos-praga. Porém, sua utlização é limitada devido ao tempo de mortalidade ser relativamente alto quando comparado aos inseticidas químicos. A análise das expressões de genes envolvidos na virulência é um passo importante na identificação de métodos para aumentar a sua eficácia. Neste trabalho foi investigado pela técnica de RT-qPCR o nível de expressão relativa do gene cag8 (regulador da sinalização da proteína G) e do nrr1 (regulador da resposta ao nitrogênio) durante a germinação, conidiogenese e em diferentes fases de patogênese de M. anisopliae var. anisopliae e de M. anisopliae var. acridum. A expressão relativa do gene pr1A (codificador da protease subtilisina) foi analisado em M. anisopliae var. anisopliae e em M. anisopliae var. acrdum durante o crescimento em diferentes meios de cultura e durante a patogênese. Em ambas as variedades, o gene cag8 foi reprimido durante a germinação e induzido durante a conidiogenese e patogênese, o gene nrr1 apresentou-se constitutivamente expresso durante a germinação, conidiogenese e patogênese e o gene pr1A foi induzido nos diferentes meios de cultura e induzido e reprimido durante as fases de patogênese. Considerando as diferenças entre as duas variedades, M. anisopliae var. anisopliae apresentou maior expressão em todos os genes analisados durante a patogênese, isso pode justificar o fato dessa linhagem ter apresentado maior potencial para o controle de Diatraea saccharalis no teste de patogenicidade demonstrando que M. anisopliae pode apresentar variações na ativação de genes ligados à virulência para determinados ambientes e hospedeiros

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:02:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9512_1.pdf: 2655908 bytes, checksum: b137ac1305ca5bc02534e3f38e5c8db1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A avicultura brasileira gera grandes divisas para o país e fornece alimento a baixo custo para a população. Entretanto, os problemas sanitários que acometem a indústria avícola afetam todo o sistema produtivo, podendo acarretar perdas no mercado mundial ou elevação dos preços do produto final. Dentre as enfermidades mais frequentes na avicultura mundial e brasileira está a coccidiose, causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Eimeria spp., sendo E. maxima, E. acervulina e E. tenella os agentes causadores mais comuns. Este estudo avaliou a expressão gênica em resposta à infecção por E. tenella no baço de três linhagens de galinhas: uma selecionada para altas taxas de crescimento e desenvolvimento muscular (TT), outra selecionada para altas taxas de fertilidade e postura de ovos (CC), e uma terceira linhagem não selecionada geneticamente (CCc), um controle genético de CC. As duas linhagens selecionadas (TT e CC) apresentaram, em estudo anterior, diferenças na resistência/susceptibilidade à coccidiose. As aves foram inoculadas com E. tenella e seus tecidos foram colhidos aos dias 0 (pré-infecção), 2, 6 e 9 pós-infecção. O perfil de expressão gênica no baço das aves foi avaliado por meio de microarranjos de DNA contendo 13.000 pontos de genes impressos, oriundos de tecido linfóide de aves. RT-PCR quantitativo em tempo real foi realizado para avaliar o perfil de expressão de NK-lisina uma citocina produzida por linfócitos T e células natural killer, e responsável pelo recrutamento e ativação de outras citocinas e células de defesa. O estudo de microarranjos revelou importantes conjuntos de genes diferencialmente expressos entre as linhagens. Aves da linhagem mais resistente CC apresentaram um padrão de expressão de genes que codificam imunoglobulinas e citocinas maior do que os animais TT. Dentre esses genes, encontram-se galinacina, uma &#946;-defensina de aves, e IRF-10. Ambas atuam no combate a patógenos intracelulares. Já a linhagem TT apresentou maior expressão de IL1-F5, uma citocina antagônica de IL-1, que atua inibindo NF-&#954;B, um fator importante na diferenciação de linfócitos e estímulo de IRF10 e IFN-&#947;. Entre as linhagens que compartilham uma maior proximidade genética, CC e CCc, as diferenças foram quantitativa e qualitativamente mais sutis. Consistente com esse padrão, os níveis de expressão de NK-lisina foram maiores na linhagem CC durante o período pré-infecção. Já no segundo dia após a infecção, TT mostrou uma expressão muito superior a CC e CCc, possivelmente devido à sua inabilidade em prontamente combater a doença. Ao avançar da infecção, a expressão gênica foi homogênea entre as linhagens. É possível que a seleção genética para características de postura possa ter favorecido a expressão basal de genes envolvidos com defesa celular, promovendo maior condição de resistência a doenças aos animais