Resumo não disponível

Butirato sódico (NaB), um potente inibidor da desacetilação de histonas, inibe o crescimento celular e induz apoptose em células neoplásicas. Investigou-se, in vitro, os efeitos na proliferação celular do tratamento combinado de NaB e fármacos comumente empregados no tratamento de leucemias. A linhagem de células T linfoblásticas, Jurkat, foi cultivada em meio RPMI suplementado com 10% de FBS. As células foram tratadas com bleomicina, citarabina, doxorubicina, etoposideo, metotrexato, vincristina e NaB. A proliferação e viabilidade celular foram avaliadas 48h após os tratamentos. Nossos resultados mostraram que NaB aumenta os efeitos citotóxicos de citarabina e etoposideo, mas não de bleomicina, doxorubicina, metotrexato ou vincristina. Estes dados sugerem que NaB é um promissor agente terapêutico adjuvante para o tratamento de leucemias linfoblásticas, e proporcionam uma base para futuras investigações neste campo.

O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade de vida de pacientes oncológicos, diagnosticados com câncer de mama e câncer de intestino, no início do tratamento quimioterápico adjuvante e três meses após, de instituições ou clínicas da cidade de Ribeirão Preto/SP. Trata-se de estudo descritivo exploratório, longitudinal do tipo, estudo de acompanhamento, de abordagem quantitativa, tendo sido utilizado um instrumento contendo duas partes: dados sócio-demográficos e clínicos e, itens referentes ao instrumento que avalia QV em pacientes oncológicos, o EORTC QLQ-C- 30. A amostra constou de 21 pacientes atendidos em três diferentes clínicas: Clínica de Tratamento Oncológico (CTO), Centro Especializado de Oncologia (CEON) e Fundação para Pesquisa, Prevenção e Tratamento do Câncer (Fundação Sobeccan), localizadas na cidade de Ribeirão Preto/ São Paulo, no período de outubro de 2005 a junho de 2006. O instrumento mostrou propriedades psicométricas satisfatórias quanto à consistência interna e validade do construto. Quanto às características sóciodemográficas e clínicas, verificou-se que 61,9% eram do sexo feminino e 38,1% do sexo masculino. A média de idade foi de 55,5 anos, com desvio padrão de 12 anos. Pacientes diagnosticados com câncer de mama correspondeu a 47,6% e com câncer de intestino, os restantes 52,4%. Foi ainda verificado que apenas 9,5% do total de 21 pacientes, apresentavam metástases. Nos pacientes com câncer de mama, os tratamentos utilizados foram: 70% tratados com Fluorouracil, Adriamicina, Ciclofosfamida (FAC), 20% com Ciclofosfamida, Metotrexate, Fluorouracil (CMF) e 10% 7 com Adriamicina, Ciclofosfamida (AC). Para os pacientes com câncer de intestino, o protocolo utilizado para tratamento adjuvante foi o Fluorouracil (5-FU)+leucovorin em 100% dos pacientes. Radioterapia concomitante à quimioterapia foi realizada em apenas 9,5% dos pacientes. A análise de QV da amostra estudada para o EORTC QLQ-C30 revelou que a média foi de 60,8 com desvio padrão (DP) igual a 28,9 no início e, 73,4 (DP=29,6) após três meses, referente ao estado geral de saúde para pacientes com câncer de mama. Foram estatisticamente significantes as escalas: função física, desempenho de papel, função emocional, função cognitiva, função social, fadiga, náuseas e vômitos, dor, insônia, perda de apetite, constipação e estado geral de saúde. Em relação aos pacientes com câncer de intestino, a média referente ao estado geral de saúde no início foi de 78,0 (DP=16,0) e três meses após foi de 78,2 (DP=19,5). Foram estatisticamente significativos os resultados obtidos nas escalas: função física, desempenho de papel, função emocional, função cognitiva, função social, fadiga, dificuldade financeira e estado geral de saúde. Concluindo, o conjunto de resultados apresentados permitiu visualizar o impacto positivo da QV em pacientes com câncer de mama e câncer de intestino tratados com quimioterapia adjuvante, ao final dos três meses. / The objective of this study was to evaluate the quality of life of patients who had been breast and bowels cancer diagnosed, during initial disease adjuvant chemotherapy treatment and also after three months treatment in the city of Ribeirão Preto. This study is a longitudinal exploratory descriptive one , classified as following study, based on approaching quantity in which an instrument containing two parts was utilized : social and clinic demographic data and items referring to the instrument for evaluation of QV in oncologic patients ? the EORTC QLQ-C 30. A sample of 21 patients medicated in three different clinics which were :Clinica de Tratamento Oncológico (CTO) Centro Especializado de Oncologia (CEON) and Fundação para Pesquisa , Prevenção e Tratamento do Câncer ( Fundação Soberccan) all of them located in the city of Ribeirão Preto, from October 2005 to June 2006. Concerning internal consistency and also constructo´s validity, the instrument showed satisfactory psychometric properties. Concerning social demography and clinic characteristics, 61,9% were female and 38,1% male. Medium age was 55,5 years old, considering standard deviation of 12 years. Breast cancer diagnosed patients amounted 47,6% and bowels cancer patients the remaining 52,4%. The study also revealed that only 9,5% from the whole 21 patients presented metastasis. Treatments for breath cancer patients were : 70% - FAC treatment - 20% CMF treatment ? 10% - AC treatment. or patients with bowels cancer the protocol utilized for adjuvant treatment was 5-FU+leucovorin in all 10% patients. 9 Radiotherapy concomitant to chemotherapy was applied in only 9,5% from the whole patients. QV analysis of the studied sample for EORTC QLQ-C30 has revealed that medium average was 60.8 with standard deviation (DP) equal to 28.9 at the begining and 73.4 (DP=29.6) after three months treatment referring to general health for breast cancer patients. The following scales were statistically significant : physical function, role performance, emotional function, cognitive function, social function, fatigue, nausea and vomit, pain, sleepleness, lack of hunger , constipation and general health. Concerning bowels cancer patients the medium average of general health at the beginning was 78.2 (DP=19.8). The results statistically obtained were significant in the following scales : physical function, role performance, emotional function, cognitive function, social function, fatigue, financial problems and general health. Conclusion the whole above presented results lead us to visualize the positive QV impact on breast and bowels cancer patients submitted to an adjuvant chemotherapy at the beginning and three months later.

O câncer é uma das principais causas de morte em todo o mundo e o fator limitante na terapia antitumoral é a resistência a processos terapêuticos. Diversos são os mecanismos de resistência à drogas antitumorais e é fundamental desvendar os mecanismos envolvidos na quimiorresistência para eliminá-lo e ter-se uma melhor eficácia terapêutica. Nesse trabalho investigamos os mecanismos que determinam resistência a cisplatina em células de glioma. Primeiramente, mostramos que a resistência celular a cisplatina era independente de p53, capacidade de reparo de DNA. Utilizando modelo in vitro e in vivo foi demonstrado que os níveis de glutationa (GSH) tinha papel fundamental na resistência a cisplatina e temozolamida (TMZ). A linhagem de glioma resistente a TMZ tinha maior proteção antioxidante, maior expressão do fator de transcrição NRF2, GCLM e GST (envolvidos na geração e utilização de GSH). Utilizando modelo in vitro e in vivo mostramos que BSO (inibidor da síntese de GSH) potencializava o efeito tóxico do TMZ. Assim, a combinação de BSO com cisplatina e TMZ é uma abordagem poderosa para otimizar a citotoxicidade em tumores, sendo uma alternativa excitante para o tratamento de pacientes com glioma ou melanoma. / Cancer is one of main cause of death worldwide and the limiting factor is antitumoral therapy resistance. Several mechanisms command drug resistance and fundamental question is how is to unveil the mechanisms involved in it to get a better therapeutic efficacy. We investigated the mechanisms of cisplatin resistance in glioma cells. We demonstrated that cisplatin resistance was p53 independent and DNA repair capacity. It was demonstrated in a in vitro a in vivo model that gluthatione (GSH) is the major resistant factor for cisplatin and temozolomide (TMZ). We observed that the TMZ resistant glioma cell line counted with a high expression of the antioxidant transcription factor NFR2, GCLM and GST. We observed that NFR2 silencing greatly enhanced cell death, high levels of DNA damage upon TMZ treatment. In addition, BSO potentiated TMZ killing in human and murine melanoma using in vitro and in vivo models. Thus, combination of BSO, cisplatin and TMZ is a powerful strategy to optimize tumor killing, thus providing an exciting alternative therapeutic protocol to glioma and melanoma patients.

O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade de vida de pacientes oncológicos, diagnosticados com câncer de mama e câncer de intestino, no início do tratamento quimioterápico adjuvante e três meses após, de instituições ou clínicas da cidade de Ribeirão Preto/SP. Trata-se de estudo descritivo exploratório, longitudinal do tipo, estudo de acompanhamento, de abordagem quantitativa, tendo sido utilizado um instrumento contendo duas partes: dados sócio-demográficos e clínicos e, itens referentes ao instrumento que avalia QV em pacientes oncológicos, o EORTC QLQ-C- 30. A amostra constou de 21 pacientes atendidos em três diferentes clínicas: Clínica de Tratamento Oncológico (CTO), Centro Especializado de Oncologia (CEON) e Fundação para Pesquisa, Prevenção e Tratamento do Câncer (Fundação Sobeccan), localizadas na cidade de Ribeirão Preto/ São Paulo, no período de outubro de 2005 a junho de 2006. O instrumento mostrou propriedades psicométricas satisfatórias quanto à consistência interna e validade do construto. Quanto às características sóciodemográficas e clínicas, verificou-se que 61,9% eram do sexo feminino e 38,1% do sexo masculino. A média de idade foi de 55,5 anos, com desvio padrão de 12 anos. Pacientes diagnosticados com câncer de mama correspondeu a 47,6% e com câncer de intestino, os restantes 52,4%. Foi ainda verificado que apenas 9,5% do total de 21 pacientes, apresentavam metástases. Nos pacientes com câncer de mama, os tratamentos utilizados foram: 70% tratados com Fluorouracil, Adriamicina, Ciclofosfamida (FAC), 20% com Ciclofosfamida, Metotrexate, Fluorouracil (CMF) e 10% 7 com Adriamicina, Ciclofosfamida (AC). Para os pacientes com câncer de intestino, o protocolo utilizado para tratamento adjuvante foi o Fluorouracil (5-FU)+leucovorin em 100% dos pacientes. Radioterapia concomitante à quimioterapia foi realizada em apenas 9,5% dos pacientes. A análise de QV da amostra estudada para o EORTC QLQ-C30 revelou que a média foi de 60,8 com desvio padrão (DP) igual a 28,9 no início e, 73,4 (DP=29,6) após três meses, referente ao estado geral de saúde para pacientes com câncer de mama. Foram estatisticamente significantes as escalas: função física, desempenho de papel, função emocional, função cognitiva, função social, fadiga, náuseas e vômitos, dor, insônia, perda de apetite, constipação e estado geral de saúde. Em relação aos pacientes com câncer de intestino, a média referente ao estado geral de saúde no início foi de 78,0 (DP=16,0) e três meses após foi de 78,2 (DP=19,5). Foram estatisticamente significativos os resultados obtidos nas escalas: função física, desempenho de papel, função emocional, função cognitiva, função social, fadiga, dificuldade financeira e estado geral de saúde. Concluindo, o conjunto de resultados apresentados permitiu visualizar o impacto positivo da QV em pacientes com câncer de mama e câncer de intestino tratados com quimioterapia adjuvante, ao final dos três meses. / The objective of this study was to evaluate the quality of life of patients who had been breast and bowels cancer diagnosed, during initial disease adjuvant chemotherapy treatment and also after three months treatment in the city of Ribeirão Preto. This study is a longitudinal exploratory descriptive one , classified as following study, based on approaching quantity in which an instrument containing two parts was utilized : social and clinic demographic data and items referring to the instrument for evaluation of QV in oncologic patients ? the EORTC QLQ-C 30. A sample of 21 patients medicated in three different clinics which were :Clinica de Tratamento Oncológico (CTO) Centro Especializado de Oncologia (CEON) and Fundação para Pesquisa , Prevenção e Tratamento do Câncer ( Fundação Soberccan) all of them located in the city of Ribeirão Preto, from October 2005 to June 2006. Concerning internal consistency and also constructo´s validity, the instrument showed satisfactory psychometric properties. Concerning social demography and clinic characteristics, 61,9% were female and 38,1% male. Medium age was 55,5 years old, considering standard deviation of 12 years. Breast cancer diagnosed patients amounted 47,6% and bowels cancer patients the remaining 52,4%. The study also revealed that only 9,5% from the whole 21 patients presented metastasis. Treatments for breath cancer patients were : 70% - FAC treatment - 20% CMF treatment ? 10% - AC treatment. or patients with bowels cancer the protocol utilized for adjuvant treatment was 5-FU+leucovorin in all 10% patients. 9 Radiotherapy concomitant to chemotherapy was applied in only 9,5% from the whole patients. QV analysis of the studied sample for EORTC QLQ-C30 has revealed that medium average was 60.8 with standard deviation (DP) equal to 28.9 at the begining and 73.4 (DP=29.6) after three months treatment referring to general health for breast cancer patients. The following scales were statistically significant : physical function, role performance, emotional function, cognitive function, social function, fatigue, nausea and vomit, pain, sleepleness, lack of hunger , constipation and general health. Concerning bowels cancer patients the medium average of general health at the beginning was 78.2 (DP=19.8). The results statistically obtained were significant in the following scales : physical function, role performance, emotional function, cognitive function, social function, fatigue, financial problems and general health. Conclusion the whole above presented results lead us to visualize the positive QV impact on breast and bowels cancer patients submitted to an adjuvant chemotherapy at the beginning and three months later.

Introdução: após os tumores de pele não - melanoma o câncer de próstata é o tumor maligno mais comumente diagnosticado e a segunda causa de morte relacionada ao câncer na população masculina. A maioria dos pacientes que morrem por câncer de próstata possuem metástases ósseas e esta doença é pouco responsiva ao tratamento quimioterápico. O microambiente ósseo, através de uma interação bidirecional com as células cancerígenas prostáticas provoca, nessas células, alterações fenotípicas. Uma dessas alterações é a expressão das células cancerígenas metastáticas anteriormente c-KIT negativas de receptores c- KIT. Hipotetizamos, aqui, que essas alterações poderiam contribuir para a quimiorresistência desses tumores. Objetivo: avaliar a hipótese de que a expressão de c-KIT pelas células de câncer de próstata contribui para a reduzida sensibilidade dessa neoplasia ao agente quimioterápico Docetaxel. Métodos: estudo experimental, utilizando células PC3, derivadas de metástases de câncer de próstata humano andrógeno-independente e C42b derivadas de metástases ósseas de câncer de próstata de coluna lombar de ratos atímicos . Ambas linhagens celulares c-KIT negativas foram tratadas em meio celular adequado e, sempre que atingiram a confluência de 90 %, foram isoladas para experimento ou expansão celular. Com o objetivo de mimetizar a expressão de c-KIT in vitro, parte das células foram submetidas a transfecção celular estável de c-KIT. Para isso foi utilizada uma formulação para transfecção de ácidos nucleicos em células eucarióticas (LIPOFECTAMINE 2000, Invitrogen) e, após isso, foi realizada a seleção de clones transfectantes estáveis. Os grupos foram divididos em c-KIT positivo, com ou sem o tratamento de SCF e c- KIT negativo com ou sem o tratamento de SCF, submetidos a doses crescentes do quimioterápico Docetaxel. Resultados: utilizando-se o índice da metade da concentração de inibição máxima (IC50), foi observado que nos experimentos com tratamento com Docetaxel por 2 dias os IC50 dos grupos C42b c-KIT e PC3 c-KIT, na presença ou não do ligante SCF, foram bastante superiores aos IC50 dos grupos C42b e PC3 que não sofreram a transfecção estável do c-KIT, na presença ou não do ligante SCF (p<0,001 grupoxdose). Nos experimentos com tratamento de Docetaxel por 3 dias, não foi observada diferença com significância estatística dos IC50 entre os grupos das células C42b transfectadas ou não com c-KIT e PC3 transfectadas ou não com c-KIT, na presença ou não do ligante SCF, principalmente quando foram usadas doses de Docetaxel mais próximas aos IC50 encontrados nos experimentos precedentes (tratamento com Docetaxel por 2 dias, doses inferiores a 10 nM de Docetaxel). Na tentativa de entender o aumento da quimiorresistência ao tratamento do Docetaxel por 3 dias aos grupos sem a transfecção de c-KIT, realizou-se o tempo de duplicação celular (TD) nos grupos C42b e PC3, o qual também não demonstrou diferença entre os grupos (PC3 EV TD = 40 horas, PC3 c-KIT TD 32 horas, C42b EV TD = 12 horas, C42b c-KIT TD = 14 horas). Conclusões: o presente estudo não demonstrou aumento da quimiorresistência das células C42b e PC3 ao quimioterápico Docetaxel quando transfectadas com c-KIT. / Introduction: after non-melanoma skin tumors, prostate cancer is the most commonly diagnosed malignant tumor and the second greatest cancer-related cause of death among men. Most patients who die of prostate cancer have bone metastases. This disease does not respond well to chemotherapy. The bone microenvironment, through a bidirectional interaction with prostatic cancerous cells, causes phenotypic alterations in these cells. One of these alterations is the expression of previously c-KIT negative metastatic cancerous cells of c-KIT receptors. Here we hypothesize that these alterations might contribute to the chemoresistance of such tumors. Objective: evaluating the hypothesis that the c-KIT expression by prostate cancer cells contributes to the reduced sensibility of this neoplasia to chemotherapeutic agent Docetaxel. Methods: experimental study, using PC3 cells derived from metastases of androgen-independent human prostate cancer and C42b cells derived from prostate cancer bone metastases from the lumbar spine of athymic mice. Both c-KIT negative cell lines were treated in the proper cellular medium and isolated for experiment or cellular expansion whenever they reached 90% confluence. Aiming at mimicking the c-KIT expression in vitro, part of the cells was submitted to stable c-KIT cell transfection. In order to do so, we used a formulation for the transfection of nucleic acids into eukaryotic cells (LIPOFECTAMINE 2000, Invitrogen). Following, the selection of stable transfectant clones was made. The groups were divided into c-KIT positive, with or without SCF treatment, and c-KIT negative, with or without SCF treatment, receiving increasing doses of the chemotherapeutic agent Docetaxel. Results: using the half maximal inhibitory concentration index (IC50), we observed that in the experiments treated with Docetaxel for 2 days, the IC50 values of the groups C42b c-KIT and PC3 c-KIT, in the presence or absence of the ligand SCF, were very superior to the IC50 values of the groups C42b and PC3 that had not undergone the stable c-KIT transfection, in the presence or absence of the ligand SCF (p<0.001 groupxdose). In experiments treated with Docetaxel for 3 days, we did not observe any statistically significant difference of IC50 values between the groups of C42b cells transfected or not transfected with c-KIT and PC3 cells transfected or not transfected with c-KIT, in the presence or absence of the ligand SCF, especially when using doses of Docetaxel that were more similar to the IC50 values found in previous experiments (treatment with Docetaxel for 2 days, doses below 10 nM of Docetaxel). In an attempt to understand the increased chemoresistance to the treatment with Docetaxel for 3 days in the groups without c-KIT transfection, we performed the cell doubling time (DT) in the groups C42b and PC3, which also showed no difference between groups (PC3 EV DT = 40 hours, PC3 c-KIT DT = 32 hours, C42b EV DT = 12 hours, C42b c-KIT DT = 14 hours). Conclusions: the present study showed no increased chemoresistance of C42b and PC3 cells to the chemotherapeutic agent Docetaxel when they are transfected with c-KIT.

Introdução: após os tumores de pele não - melanoma o câncer de próstata é o tumor maligno mais comumente diagnosticado e a segunda causa de morte relacionada ao câncer na população masculina. A maioria dos pacientes que morrem por câncer de próstata possuem metástases ósseas e esta doença é pouco responsiva ao tratamento quimioterápico. O microambiente ósseo, através de uma interação bidirecional com as células cancerígenas prostáticas provoca, nessas células, alterações fenotípicas. Uma dessas alterações é a expressão das células cancerígenas metastáticas anteriormente c-KIT negativas de receptores c- KIT. Hipotetizamos, aqui, que essas alterações poderiam contribuir para a quimiorresistência desses tumores. Objetivo: avaliar a hipótese de que a expressão de c-KIT pelas células de câncer de próstata contribui para a reduzida sensibilidade dessa neoplasia ao agente quimioterápico Docetaxel. Métodos: estudo experimental, utilizando células PC3, derivadas de metástases de câncer de próstata humano andrógeno-independente e C42b derivadas de metástases ósseas de câncer de próstata de coluna lombar de ratos atímicos . Ambas linhagens celulares c-KIT negativas foram tratadas em meio celular adequado e, sempre que atingiram a confluência de 90 %, foram isoladas para experimento ou expansão celular. Com o objetivo de mimetizar a expressão de c-KIT in vitro, parte das células foram submetidas a transfecção celular estável de c-KIT. Para isso foi utilizada uma formulação para transfecção de ácidos nucleicos em células eucarióticas (LIPOFECTAMINE 2000, Invitrogen) e, após isso, foi realizada a seleção de clones transfectantes estáveis. Os grupos foram divididos em c-KIT positivo, com ou sem o tratamento de SCF e c- KIT negativo com ou sem o tratamento de SCF, submetidos a doses crescentes do quimioterápico Docetaxel. Resultados: utilizando-se o índice da metade da concentração de inibição máxima (IC50), foi observado que nos experimentos com tratamento com Docetaxel por 2 dias os IC50 dos grupos C42b c-KIT e PC3 c-KIT, na presença ou não do ligante SCF, foram bastante superiores aos IC50 dos grupos C42b e PC3 que não sofreram a transfecção estável do c-KIT, na presença ou não do ligante SCF (p<0,001 grupoxdose). Nos experimentos com tratamento de Docetaxel por 3 dias, não foi observada diferença com significância estatística dos IC50 entre os grupos das células C42b transfectadas ou não com c-KIT e PC3 transfectadas ou não com c-KIT, na presença ou não do ligante SCF, principalmente quando foram usadas doses de Docetaxel mais próximas aos IC50 encontrados nos experimentos precedentes (tratamento com Docetaxel por 2 dias, doses inferiores a 10 nM de Docetaxel). Na tentativa de entender o aumento da quimiorresistência ao tratamento do Docetaxel por 3 dias aos grupos sem a transfecção de c-KIT, realizou-se o tempo de duplicação celular (TD) nos grupos C42b e PC3, o qual também não demonstrou diferença entre os grupos (PC3 EV TD = 40 horas, PC3 c-KIT TD 32 horas, C42b EV TD = 12 horas, C42b c-KIT TD = 14 horas). Conclusões: o presente estudo não demonstrou aumento da quimiorresistência das células C42b e PC3 ao quimioterápico Docetaxel quando transfectadas com c-KIT. / Introduction: after non-melanoma skin tumors, prostate cancer is the most commonly diagnosed malignant tumor and the second greatest cancer-related cause of death among men. Most patients who die of prostate cancer have bone metastases. This disease does not respond well to chemotherapy. The bone microenvironment, through a bidirectional interaction with prostatic cancerous cells, causes phenotypic alterations in these cells. One of these alterations is the expression of previously c-KIT negative metastatic cancerous cells of c-KIT receptors. Here we hypothesize that these alterations might contribute to the chemoresistance of such tumors. Objective: evaluating the hypothesis that the c-KIT expression by prostate cancer cells contributes to the reduced sensibility of this neoplasia to chemotherapeutic agent Docetaxel. Methods: experimental study, using PC3 cells derived from metastases of androgen-independent human prostate cancer and C42b cells derived from prostate cancer bone metastases from the lumbar spine of athymic mice. Both c-KIT negative cell lines were treated in the proper cellular medium and isolated for experiment or cellular expansion whenever they reached 90% confluence. Aiming at mimicking the c-KIT expression in vitro, part of the cells was submitted to stable c-KIT cell transfection. In order to do so, we used a formulation for the transfection of nucleic acids into eukaryotic cells (LIPOFECTAMINE 2000, Invitrogen). Following, the selection of stable transfectant clones was made. The groups were divided into c-KIT positive, with or without SCF treatment, and c-KIT negative, with or without SCF treatment, receiving increasing doses of the chemotherapeutic agent Docetaxel. Results: using the half maximal inhibitory concentration index (IC50), we observed that in the experiments treated with Docetaxel for 2 days, the IC50 values of the groups C42b c-KIT and PC3 c-KIT, in the presence or absence of the ligand SCF, were very superior to the IC50 values of the groups C42b and PC3 that had not undergone the stable c-KIT transfection, in the presence or absence of the ligand SCF (p<0.001 groupxdose). In experiments treated with Docetaxel for 3 days, we did not observe any statistically significant difference of IC50 values between the groups of C42b cells transfected or not transfected with c-KIT and PC3 cells transfected or not transfected with c-KIT, in the presence or absence of the ligand SCF, especially when using doses of Docetaxel that were more similar to the IC50 values found in previous experiments (treatment with Docetaxel for 2 days, doses below 10 nM of Docetaxel). In an attempt to understand the increased chemoresistance to the treatment with Docetaxel for 3 days in the groups without c-KIT transfection, we performed the cell doubling time (DT) in the groups C42b and PC3, which also showed no difference between groups (PC3 EV DT = 40 hours, PC3 c-KIT DT = 32 hours, C42b EV DT = 12 hours, C42b c-KIT DT = 14 hours). Conclusions: the present study showed no increased chemoresistance of C42b and PC3 cells to the chemotherapeutic agent Docetaxel when they are transfected with c-KIT.

Introdução: após os tumores de pele não - melanoma o câncer de próstata é o tumor maligno mais comumente diagnosticado e a segunda causa de morte relacionada ao câncer na população masculina. A maioria dos pacientes que morrem por câncer de próstata possuem metástases ósseas e esta doença é pouco responsiva ao tratamento quimioterápico. O microambiente ósseo, através de uma interação bidirecional com as células cancerígenas prostáticas provoca, nessas células, alterações fenotípicas. Uma dessas alterações é a expressão das células cancerígenas metastáticas anteriormente c-KIT negativas de receptores c- KIT. Hipotetizamos, aqui, que essas alterações poderiam contribuir para a quimiorresistência desses tumores. Objetivo: avaliar a hipótese de que a expressão de c-KIT pelas células de câncer de próstata contribui para a reduzida sensibilidade dessa neoplasia ao agente quimioterápico Docetaxel. Métodos: estudo experimental, utilizando células PC3, derivadas de metástases de câncer de próstata humano andrógeno-independente e C42b derivadas de metástases ósseas de câncer de próstata de coluna lombar de ratos atímicos . Ambas linhagens celulares c-KIT negativas foram tratadas em meio celular adequado e, sempre que atingiram a confluência de 90 %, foram isoladas para experimento ou expansão celular. Com o objetivo de mimetizar a expressão de c-KIT in vitro, parte das células foram submetidas a transfecção celular estável de c-KIT. Para isso foi utilizada uma formulação para transfecção de ácidos nucleicos em células eucarióticas (LIPOFECTAMINE 2000, Invitrogen) e, após isso, foi realizada a seleção de clones transfectantes estáveis. Os grupos foram divididos em c-KIT positivo, com ou sem o tratamento de SCF e c- KIT negativo com ou sem o tratamento de SCF, submetidos a doses crescentes do quimioterápico Docetaxel. Resultados: utilizando-se o índice da metade da concentração de inibição máxima (IC50), foi observado que nos experimentos com tratamento com Docetaxel por 2 dias os IC50 dos grupos C42b c-KIT e PC3 c-KIT, na presença ou não do ligante SCF, foram bastante superiores aos IC50 dos grupos C42b e PC3 que não sofreram a transfecção estável do c-KIT, na presença ou não do ligante SCF (p<0,001 grupoxdose). Nos experimentos com tratamento de Docetaxel por 3 dias, não foi observada diferença com significância estatística dos IC50 entre os grupos das células C42b transfectadas ou não com c-KIT e PC3 transfectadas ou não com c-KIT, na presença ou não do ligante SCF, principalmente quando foram usadas doses de Docetaxel mais próximas aos IC50 encontrados nos experimentos precedentes (tratamento com Docetaxel por 2 dias, doses inferiores a 10 nM de Docetaxel). Na tentativa de entender o aumento da quimiorresistência ao tratamento do Docetaxel por 3 dias aos grupos sem a transfecção de c-KIT, realizou-se o tempo de duplicação celular (TD) nos grupos C42b e PC3, o qual também não demonstrou diferença entre os grupos (PC3 EV TD = 40 horas, PC3 c-KIT TD 32 horas, C42b EV TD = 12 horas, C42b c-KIT TD = 14 horas). Conclusões: o presente estudo não demonstrou aumento da quimiorresistência das células C42b e PC3 ao quimioterápico Docetaxel quando transfectadas com c-KIT. / Introduction: after non-melanoma skin tumors, prostate cancer is the most commonly diagnosed malignant tumor and the second greatest cancer-related cause of death among men. Most patients who die of prostate cancer have bone metastases. This disease does not respond well to chemotherapy. The bone microenvironment, through a bidirectional interaction with prostatic cancerous cells, causes phenotypic alterations in these cells. One of these alterations is the expression of previously c-KIT negative metastatic cancerous cells of c-KIT receptors. Here we hypothesize that these alterations might contribute to the chemoresistance of such tumors. Objective: evaluating the hypothesis that the c-KIT expression by prostate cancer cells contributes to the reduced sensibility of this neoplasia to chemotherapeutic agent Docetaxel. Methods: experimental study, using PC3 cells derived from metastases of androgen-independent human prostate cancer and C42b cells derived from prostate cancer bone metastases from the lumbar spine of athymic mice. Both c-KIT negative cell lines were treated in the proper cellular medium and isolated for experiment or cellular expansion whenever they reached 90% confluence. Aiming at mimicking the c-KIT expression in vitro, part of the cells was submitted to stable c-KIT cell transfection. In order to do so, we used a formulation for the transfection of nucleic acids into eukaryotic cells (LIPOFECTAMINE 2000, Invitrogen). Following, the selection of stable transfectant clones was made. The groups were divided into c-KIT positive, with or without SCF treatment, and c-KIT negative, with or without SCF treatment, receiving increasing doses of the chemotherapeutic agent Docetaxel. Results: using the half maximal inhibitory concentration index (IC50), we observed that in the experiments treated with Docetaxel for 2 days, the IC50 values of the groups C42b c-KIT and PC3 c-KIT, in the presence or absence of the ligand SCF, were very superior to the IC50 values of the groups C42b and PC3 that had not undergone the stable c-KIT transfection, in the presence or absence of the ligand SCF (p<0.001 groupxdose). In experiments treated with Docetaxel for 3 days, we did not observe any statistically significant difference of IC50 values between the groups of C42b cells transfected or not transfected with c-KIT and PC3 cells transfected or not transfected with c-KIT, in the presence or absence of the ligand SCF, especially when using doses of Docetaxel that were more similar to the IC50 values found in previous experiments (treatment with Docetaxel for 2 days, doses below 10 nM of Docetaxel). In an attempt to understand the increased chemoresistance to the treatment with Docetaxel for 3 days in the groups without c-KIT transfection, we performed the cell doubling time (DT) in the groups C42b and PC3, which also showed no difference between groups (PC3 EV DT = 40 hours, PC3 c-KIT DT = 32 hours, C42b EV DT = 12 hours, C42b c-KIT DT = 14 hours). Conclusions: the present study showed no increased chemoresistance of C42b and PC3 cells to the chemotherapeutic agent Docetaxel when they are transfected with c-KIT.

Orientadores: Enilson Antonio Sallum, Francisco Humberto Nociti Jr / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:17:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machion_Luciana_D.pdf: 384065 bytes, checksum: 6e6dbb89d4fe3af21bf49de9590d2e24 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a efetividade a longo prazo da associação de liberação local de doxiciclina (ATRIDOX*) à raspagem e alisamento radicular quanto à resposta clinica e microbiológica no tratamento periodontal de fumantes. Foram selecionados 43 pacientes fumantes, portadores da doença periodontal crônica, apresentando mínimo de 4 bolsas periodontais (³5mm) com sangramento à sondagem em dentes anteriores. Os pacientes foram divididos aleatoriamente em 2 grupos: RAR = Raspagem e alisamento radicular; e RAR-D = raspagem e alisamento radicular seguida de aplicação de doxiciclina. Esses tratamentos foram realizados nos períodos inicial e aos 12 meses. Avaliações do índice de placa (IPL), sangramento à sondagem (SS), recessão gengival (RG), nível de inserção clínica relativo (NICr) e profundidade de sondagem (PS) foram realizadas nos períodos inicial, 45 dias, 3, 6 e 12 meses, 45 dias após o retratamento e novamente aos 15, 18 e 24 meses. Além disso, coleta de placa subgengival foi realizada nos mesmos períodos, até os 15 meses e análise de PCR e ¿Checkerboard DNA-DNA hybridization¿ foram realizadas. O teste t de Student demonstrou valores iniciais similares para ambos os grupos em todos os parâmetros (p>0,05). Não houve diferença significante entre os grupos nos parâmetros IPL, SS e RG em nenhum dos períodos (p>0,05). As maiores diferenças entre os grupos se deu nas bolsas inicialmente profundas (³7mm). Para essas bolsas, o grupo RAR-D mostrou maiores ganhos em PS aos 6 e aos 18 meses (diferenças entre os grupos de 1,18 e 1,73mm, respectivamente, p<0,05). O ganho em NICr também foi maior para RAR-D aos 6, 18 e 24 meses (diferença de 1,16, 1,99 e 1,78mm, respectivamente, p<0,05). Além disso, a proporção de sítios que apresentaram redução em PS ³ 2mm foi maior para RAR-D aos 6 meses (81,2 x 50,8%, p<0,001) e aos 24 meses (65,5 x 46,5% para RAR-D e RAR respectivamente, p=0,01). Quanto ao ganho em NIC, esta proporção foi de 34,4% para RAR-D e 18,1% para RAR (p=0,008). A análise microbiológica detectou reduções significantes nas proporções de Tannerela forsythensis e Porphyromonas gingivalis em ambos os grupos, porém esta ocorreu a partir dos 3 meses para o grupo RAR-D e a partir dos 6 meses para RAR e a diferença entre os grupos somente se deu aos 3 meses pós-tratamentos inicial e de manutenção para proporções de sítios com Pg (58 x 25% e 47 x 8%, respectivamente). Em vista dos resultados obtidos, pode-se concluir que a utilização da liberação local de doxiciclina associada à raspagem e alisamento radicular pode trazer benefícios adicionais para o tratamento periodontal de pacientes fumantes / Abstract: The aim of this study was to evaluate the long term clinical and microbiological responses to the association of locally delivered doxycycline with scaling and root planing in the periodontal treatment of smokers. Forty-three chronic periodontitis patients, presenting a minimum of 4 pockets (³ 5mm) that bled on probing on anterior teeth were selected. Patients were randomly assigned to receive one of the following treatments: scaling and root planing (SRP) and scaling and root planing followed by local application of doxycycline (SRP-D). Assigned treatments were performed at baseline and 12 months. Plaque, bleeding on probing, gingival recession, relative attachment level (RAL) and probing depth (PD) were recorded at baseline, 45 days, 3, 6 and 12 months, 45 days following retreatment and at 15, 18 and 24 months. Subgingival plaque samples were also obtained at the same time intervals up to 15 months, for the analysis by PCR and Checkerboard. Student t test showed similar baseline values for both groups in all parameters (p>0,05). At all time points, plaque, bleeding reduction and gingival recession were similar between groups (p>0,05). Most significant differences between groups were found at initially deep pockets (³ 7mm), where SRP-D showed greater values in PD reduction than SRP at 6 and 18 months (mean difference of 1.18 and 1.73mm, respectively, p<0,05) and in RAL gain at 6, 18 and 24 months (mean difference of 1.16, 1.99 and 1.78mm, respectively, p<0,05). Also, proportion of sites showing ³ 2mm PD reduction was greater for SRP-D at 6 months (81,2 x 50,8%, p<0,001) and at 24 months (65,5 x 46,5%, respectively, p=0,01). As for RAL gain, this proportion was 34.4 and 18.1% for SRP-D and SRP, respectively (p=0,008). The bacterial analysis detected significant reductions in the proportions of T.forsythensis and P.gingivalis in both groups, however, this occurred earlier at 3 months for the SRP-D group and later at 6 months for the SRP group (p<0.05) and the difference between groups was statistically significant at 3 months for the proportion of sites with Pg after first and second application of the drug (58 x 25% and 47 x 8%, respectively). According to the results obtained in the present investigation, it can be concluded that the use of locally delivered doxycycline associated with scaling and root planing provides additional benefits for the periodontal treatment of smokers / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica

O câncer é uma das principais causas de morte em todo o mundo e o fator limitante na terapia antitumoral é a resistência a processos terapêuticos. Diversos são os mecanismos de resistência à drogas antitumorais e é fundamental desvendar os mecanismos envolvidos na quimiorresistência para eliminá-lo e ter-se uma melhor eficácia terapêutica. Nesse trabalho investigamos os mecanismos que determinam resistência a cisplatina em células de glioma. Primeiramente, mostramos que a resistência celular a cisplatina era independente de p53, capacidade de reparo de DNA. Utilizando modelo in vitro e in vivo foi demonstrado que os níveis de glutationa (GSH) tinha papel fundamental na resistência a cisplatina e temozolamida (TMZ). A linhagem de glioma resistente a TMZ tinha maior proteção antioxidante, maior expressão do fator de transcrição NRF2, GCLM e GST (envolvidos na geração e utilização de GSH). Utilizando modelo in vitro e in vivo mostramos que BSO (inibidor da síntese de GSH) potencializava o efeito tóxico do TMZ. Assim, a combinação de BSO com cisplatina e TMZ é uma abordagem poderosa para otimizar a citotoxicidade em tumores, sendo uma alternativa excitante para o tratamento de pacientes com glioma ou melanoma. / Cancer is one of main cause of death worldwide and the limiting factor is antitumoral therapy resistance. Several mechanisms command drug resistance and fundamental question is how is to unveil the mechanisms involved in it to get a better therapeutic efficacy. We investigated the mechanisms of cisplatin resistance in glioma cells. We demonstrated that cisplatin resistance was p53 independent and DNA repair capacity. It was demonstrated in a in vitro a in vivo model that gluthatione (GSH) is the major resistant factor for cisplatin and temozolomide (TMZ). We observed that the TMZ resistant glioma cell line counted with a high expression of the antioxidant transcription factor NFR2, GCLM and GST. We observed that NFR2 silencing greatly enhanced cell death, high levels of DNA damage upon TMZ treatment. In addition, BSO potentiated TMZ killing in human and murine melanoma using in vitro and in vivo models. Thus, combination of BSO, cisplatin and TMZ is a powerful strategy to optimize tumor killing, thus providing an exciting alternative therapeutic protocol to glioma and melanoma patients.