Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-02-12T17:10:17Z No. of bitstreams: 1 TES_JULIANO_BUSETTI_COMPLETO.pdf: 4728791 bytes, checksum: 9cc2c815f6f8eda49ba630d9796f6ea8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-12T17:10:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_JULIANO_BUSETTI_COMPLETO.pdf: 4728791 bytes, checksum: 9cc2c815f6f8eda49ba630d9796f6ea8 (MD5) Previous issue date: 2015-10-27 / Regeneration of lost tissues can be obtained in a predictable way by using the Guided Bone Regeneration (GBR) concept. The development of such concept is based on the observation that to regenerate a certain type of tissue, specific cells with the ability to reconstruct such kind of tissue must repopulate the wound. GBR was applied to heal different type of bone defects and the isolation of it by using resorbable and nonresorbable membranes resulted in a predictable healing through the formation of new bone. Nowadays the GBR concept is used for the treatment of multiple clinical situations in dentistry, even with dental implants. Osteoporosis is the most common chronic bone disease and may interfere in the healing of regenerative procedures. The increase in life expectancy results in a larger number of elderly patients referred for bone regeneration and dental implants. Osteoporosis is associated with aging, menopause and chronic use of some types of drugs. Regenerative protocols must be postulated taking into account this category of patients. Limited scientific evidence suggests that osteoporosis can negatively influence bone healing as well as the osseointegration of dental implants. In addition to disease, the use of drugs for its prevention and treatment may affect healing of GBR procedures. Bisphosphonates (BP) are the most frequently used drugs for treatment and prevention of osteoporosis. The drug acts mainly in the inhibition of bone resorption by its action on osteoclasts. Among the commercially prescribed BP, zoledronic acid (ZA) is known to be the most potent of all. In the first paper of this thesis osteoporosis was induced in rats and these animals were submitted to regenerative procedures comparing samples with and without osteoporosis as well as with and without the use of ZA. To assess GBR, critical size defects (CSD) were made in the animals? calvarial bone. Microporous non-resorbable PTFE (polytetrafluorethylene) membranes were used to promote GBR in healthy, osteoporotic and osteoporotic animals treated with ZA. Forty-eight Wistar rats with 6 months of age were included in the study. Experimental osteoporosis was induced by ovariectomy (OVX) associated with hipocalcic diet in 32 animals. Sixteen OVX rats received a single dose of ZA (OZ) while the other 16 osteoporotic rats received no treatment (O). The remaining 16 animals were SHAM operated; the ovaries were exposed but not removed, being considered the control group (C). Six weeks after osteoporosis induction, each animal from the OZ group received a single dose of ZA. One week latter (7 weeks after baseline) two 5-mm CSD were performed bilaterally in the parietal bones and one of these defects was treated with two membranes, one located internally, in contact to the Dura, and the other was placed on top of the defect. GBR healing periods were 30 and 60 days for each group. Evaluation of new bone formation (NBF) was done by qualitative and quantitative histological analysis. Differences in means between groups (O, OZ and C), the use of membranes as well as the observation period (days 30 and 60) were analyzed by ANOVA for each variable. When a statistically significant difference was identified between the averages, the Bonferroni post hoc test was used. The results showed that treatment with ZA (p = 0.001) and the use of membranes (p = 0.000) significantly increased the amount of regenerated bone tissue and the presence of osteoporosis may have reduced NBF (p = 0.028). / Regenera??o de tecido ?sseo perdido pode ser alcan?ada de forma previs?vel utilizando-se o conceito de Regenera??o ?ssea Guiada (ROG). O desenvolvimento deste conceito ? baseado na observa??o de que para realizar a regenera??o de um tipo de tecido, c?lulas espec?ficas, com habilidade de regenerar este tecido especificamente, devem repopular a ferida. Quando ROG foi utilizada para regenera??o de v?rios tipos de defeitos ?sseos, o isolamento destes, com o uso de barreiras f?sicas reabsorv?veis e n?o reabsorv?veis, as membranas, resultou em uma cicatriza??o previs?vel atrav?s da forma??o de novo tecido ?sseo. Atualmente, o pr?nc?pio de ROG ? usado para o tratamento de v?rias situa??es cl?nicas na odontologia, com ou sem o uso associado de implantes dent?rios. Osteoporose ? a doen?a ?ssea cr?nica mais prevalente e pode interferir na cicatriza??o de procedimentos regenerativos. O aumento na expectativa de vida da popula??o resulta em um maior n?mero de pacientes idosos indicados para regenera??o ?ssea e implantes dent?rios. Considerando que a osteoporose est? relacionada com fatores como idade, menopausa e uso cr?nico de alguns tipos de f?rmacos, a preval?ncia desta doen?a ? alta. Protocolos regenerativos devem ser postulados levando-se em conta esta categoria de pacientes. Por?m, limitada evid?ncia cient?fica sugere que osteoporose pode influenciar negativamente a cicatriza??o ?ssea assim como a osseointegra??o de implantes dent?rios. Somado ? doen?a, o uso de drogas para preven??o e tratamento da osteoporose pode influenciar na cicatriza??o de procedimentos regenerativos. Bisfosfonatos (BF) s?o os f?rmacos mais utilizados para tratamento da osteoporose. A droga age na inibi??o da reabsor??o ?ssea atrav?s da sua a??o principalmente sobre os osteoclastos. Dentre os BF existentes comercialmente, o ?cido zoledr?nico (AZ) ? reconhecidamente o mais potente de todos. Sendo assim, o primeiro artigo desta tese buscou criar condi??es de osteoporose em ratas e, nestes animais, procedimentos regenerativos foram feitos comparando amostras com e sem osteoporose assim como com e sem o uso de AZ. Para avaliar ROG, defeitos cr?ticos (CSD) foram feitos na calv?ria dos animais. Membranas n?o reabsorv?veis microporosas de teflon foram utilizadas para ROG em animais saud?veis, osteopor?ticos e osteopor?ticos tratados com AZ. Quarenta e oito ratas Wistar, com 6 meses de idade, foram inclu?das no estudo. Osteoporose experimental foi induzida atrav?s de ovariectomia (OVX) associada ? dieta hipoc?lcica em 32 animais. Dezesseis ratos OVX receberam uma dose ?nica de AZ (OZ) enquanto as outras 16 ratas osteopor?ticas n?o receberam tratamento (O). Os demais 16 animais foram submetidos ? cirurgia controle, onde os ov?rios n?o foram removidos, sendo considerado o grupo controle (C). Seis semanas ap?s a indu??o da osteoporose, o grupo OZ recebeu uma dose ?nica de AZ. Ap?s mais uma semana (7 semanas ap?s OVX), dois CSD de 5 mm foram feitos, bilateralmente, nos ossos parietais, sendo que um destes defeitos foi tratado com duas membranas, uma instalada internamente ao defeito, sobre a dura mater, e outra na por??o externa. Os per?odos de cicatriza??o de ROG foram de 30 e 60 dias para cada grupo. Avalia??o da forma??o de tecido ?sseo (NBF) foi feita atrav?s de an?lise histol?gica qualitativa e quantitativa. Diferen?as entre as m?dias entre os grupos (O, OZ e C), o uso de membranas assim como o per?odo de observa??o (30 e 60 dias) foram analisados atrav?s de ANOVA para cada vari?vel. Quando uma diferen?a estat?stica era identificada entre as m?dias, o teste p?s hoc Bonferroni foi utilizado. Os resultados mostraram que o tratamento com AZ (p=0,001) e o uso de membranas (p=0,000) aumentaram significativamente a quantidade de tecido ?sseo regenerado e que a presen?a de osteoporose pode ter reduzido a forma??o de novo osso (p=0,028).

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438171.pdf: 6920524 bytes, checksum: f5e5c6d7e177dfd60f3b3303552cc797 (MD5) Previous issue date: 2012-03-28 / OBJECTIVE : To evaluate and compare the effect of using Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF) in the repair of the Achilles tendon (TA) of rats. MATERIAL and METHODS : Forty-eight adult male rats randomized into three experimental groups: PRP, PRF and Control (saline 0.9%). A 3 cm longitudinal incision was made in the right leg of each rat in order to expose the TA. Later, it was a break in the same horizontal, and the repair performed with suture Kessler-type, when the sequence was applied 50 &#956;L of the treatment in question. After 14 and 28 days postoperatively, the targeted part of the TA was removed, thus initializing the histological processing (Hematoxylin/Eosin; Sirius Red) to obtain results. The data obtained were expressed at 5% significance level (p <0.05) with mean ? SE. RESULTS : When comparing the three groups together, as to time and area of collagen type I and III, only statistical difference between the control group (16.22%) and the PRP group (37.16%) at 14 days after the treatment, no statistically significant difference was observed in the other groups. In the same way, when compared within groups of 14 and 28 days, the PRF group showed a significant difference for collagen I (27.76% and 47.74%) and III (66.94% and 46%) respectively. Control group showed significant difference in collagen type I (14.20% and 40.90%), not observed any significant difference in the PRP group. When evaluated on Hematoxylin/Eosin staining, PRP and control were similar in the times studied, differing only in the presence of hemorrhage, that was more expressed in the PRP group. Already the group PRF has shown to be more organized, especially in time of 28 days compared to the other two treatments. CONCLUSION : The data from this study suggest that the Platelet-Rich Fibrin tends to promote the accelerated regeneration of the Achilles tendon of rats, bringing promising prospects for future use in the clinic. / OBJETIVO : Avaliar e comparar o efeito do uso de plasma rico em plaquetas (PRP) e fibrina rica em plaquetas (PRF) no reparo do tend?o de Aquiles (TA) de ratos. MATERIAL e M?TODOS : Foram utilizados 48 ratos machos adultos distribu?dos randomicamente em tr?s grupos experimentais: PRP, PRF e Controle (solu??o salina 0,9%). Uma incis?o longitudinal de 3 cm foi realizada na perna direita de cada rato, a fim de expor o TA. Posteriormente, fez-se uma ruptura horizontal no mesmo, sendo a repara??o realizada com sutura do tipo Kessler, onde na seq??ncia foi aplicado 50 &#956;L do tratamento em quest?o. Passados 14 e 28 dias p?s- operat?rio, a parte segmentada do TA foi removida, inicializando assim o processo histol?gico (Hematoxilina/Eosina; Picros?rius Red) para obten??o de resultados. Os dados obtidos foram expressos ao n?vel de 5% de signific?ncia (p < 0.05) com m?dia ? EP. RESULTADOS : Ao comparar os tr?s grupos entre si, quanto ao tempo e ?rea de col?geno tipo I e III, houve diferen?a estat?stica somente entre o grupo Controle (16.22%) e o grupo PRP (37.16%) aos 14 dias ap?s o tratamento, n?o sendo observada diferen?a estatisticamente significativa nos outros grupos. Da mesma forma, quando comparados intra-grupos em 14 e 28 dias, o grupo PRF apresentou diferen?a significativa para col?geno I (27.76% e 47.74%) e III (66.94% e 46%) respectivamente. Grupo Controle demonstrou diferen?a significativa para col?geno tipo I (14.20% e 40.90%), n?o sendo observada qualquer diferen?a significativa no grupo PRP. Quando avaliados na colora??o Hematoxilina e Eosina, PRP e Controle apresentaram-se semelhantes nos tempos avaliados, diferindo apenas quanto a presen?a de hemorragia, que foi mais expressa no grupo PRP. J? o grupo PRF demonstrou-se mais organizado, principalmente no tempo de 28 dias quando comparado aos outros dois tratamentos. CONCLUS?O : Os dados obtidos neste trabalho sugerem que a Fibrina Rica em Plaquetas tem tend?ncia a promover a regenera??o acelerada do tend?o de Aquiles de ratos, trazendo perspectivas promissoras para futuras utiliza??es na cl?nica.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 452038.pdf: 5926182 bytes, checksum: 5375eb92e47f0a2a30ef9fa65dc549c5 (MD5) Previous issue date: 2013-08-08 / Objective: To evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) and platelet-rich fibrin (PRF) on cutaneous wound healing in rats by comparing treated and control wounds. Material and Methods: Forty-eight Wistar rats were used in the study. Two wounds with 1-cm diameter, of total skin thickness, were excised from the back of the animals and treated with either PRP or PRF and saline (paired model). The wounds were evaluated immediately after the procedure and after 7 and 14 days using macroscopic (photographs) and microscopic (histology) methods. The photographs were used to measure the area of wounds in order to analyse wound contraction (morphometric analysis). The histological images permitted a count-analysis of collagen concentration (histomorphometric analysis) while the histological slides providet the description of the wounds characteristics. Results: Morphometric analysis revealed statistically significant time effect (P<0.001) and treatment group effect (P=0.022) over the observation period. The rate of wound contraction was higher in PRF-treated wounds than in PRP-treated wounds (P=0.030). In the histomorphometric analysis, mean collagen concentration, on the images of the experimental groups, increased significantly (P<0.001) from day 7 to day 14. There was wide variation in the percentage of collagen concentration: 129% in the PRF group vs. 22% in the PRP group; however, this difference did not achieve statistical significance (P=0.380). Histology of the wounds suggested a more accelerated healing process in the PRF group vs. the PRP group, despite the lack of statistical significance in the characteristics analyzed. PRP-treated and PRF-treated groups were not statistically superior to their controls in any of the studied variables. Conclusion: The present results suggest that treatment with PRP and PRF were not more effective than saline for cutaneous wound healing in rats. However, PRF proved to be superior to PRP. / Objetivo: Avaliar o efeito do Plasma Rico em Plaquetas (PRP) e da Fibrina Rica em Plaquetas (PRF) na cicatriza??o de feridas cut?neas em ratos, comparando os tratamentos entre si e com seus respectivos grupos controle. Material e M?todos: Foram utilizados 48 ratos Wistar. Duas feridas de 1,0 cm de di?metro, de espessura total da pele, foram excisadas do dorso dos animais e tratadas com PRP ou PRF e soro fisiol?gico (modelo emparelhado). As feridas foram avaliadas no p?s-operat?rio imediato e depois de 7 e 14 dias, de forma macrosc?pica (fotografias) e microsc?pica (histologia). As fotografias forneceram medidas da ?rea das feridas, possibilitando analisar sua contra??o (an?lise morfom?trica). As imagens histol?gicas permitiram calcular a concentra??o de col?geno nas feridas (an?lise histomorfom?trica) e as l?minas histol?gicas a descrever suas caracter?sticas. Resultados: Quanto ? an?lise morfom?trica, o efeito do tempo (P<0,001) e dos grupos (P=0,022), ao longo do per?odo de observa??o, foi estatisticamente significativo. A taxa de contra??o das feridas tratadas com PRF foi maior do que as tratadas com PRP (P=0,030). Na an?lise histomorfom?trica, a m?dia da concentra??o de col?geno, nas imagens dos grupos experimentais, apresentou um aumento do 7? para o 14? dia, considerado significativo (P<0,001). Houve grande varia??o percentual na concentra??o de col?geno: 129% para a PRF contra 22% para o PRP, por?m, sem signific?ncia estat?stica (P=0,380). A descri??o histol?gica das feridas sugeriu que o grupo PRF apresentou maior acelera??o do reparo quando comparado ao grupo PRP, apesar da aus?ncia de signific?ncia estat?stica nas caracter?sticas avaliadas. Os grupos de tratamento PRP e PRF n?o foram estatisticamente superiores aos seus grupos controle nas vari?veis estudadas. Conclus?o: Os dados do presente estudo sugerem que o PRP e a PRF n?o apresentaram resultados mais eficazes do que o soro fisiol?gico na cicatriza??o de feridas cut?neas em ratos. No entanto, a PRF mostrou-se superior ao PRP.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 418546.pdf: 3263858 bytes, checksum: 98405799e09a5518c35fdb38c15ba169 (MD5) Previous issue date: 2009-10-14 / A regenera??o e engenharia de tecidos passam pela aplica??o de c?lulas precursoras multipotentes associadas a biomateriais, os quais devem oferecer a elas um ambiente tridimensional an?logo ? matriz extracelular existente nos organismos vivos. Aprimorar um hidrogel de hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), agregando a ele duas fun??es caracter?sticas de scaffolds, isto ?, ser mold?vel ou favor?vel ? ades?o celular tridimensional, para o uso em regenera??o e engenharia de tecidos foi a inten??o do presente estudo. O desenvolvimento de uma propriedade mold?vel foi obtido baseado em experi?ncias da literatura que citam a s?ntese de HPMC com silano (HPMC-Si). Esta s?ntese permitiu que o hidrogel assumisse o aspecto de gelatina, atrav?s de autorreticula??o em fun??o do pH, mold?vel de acordo com o defeito a ser corrigido. Paralelamente, seguindo outra tend?ncia no desenvolvimento de scaffolds compostos por hidrog?is, sintetizou-se HPMC com pept?deos R-G-D-S (arginina- glicina- ?cido asp?rtico- serina), atrav?s de rea??o por esterifica??o. Isto conferiu ao hidrogel s?tios de ades?o, visando a sua intera??o com c?lulas dentro de um contexto tridimensional. A partir das s?nteses, avaliou-se a viabilidade de c?lulas aderentes adiposoderivadas humanas (CAADh), cultivadas em 2D na presen?a dos hidrog?is HPMC pura, HPMC-Si e HPMC-RGDS, para se determinar a citotoxicidade dos mesmos (ensaio MTT de acordo com a ISO 10993-5), comparando-os entre si e com grupos-controle negativo (CN) e positivo (CP), em 24, 48 e 72h. Os tr?s hidrog?is presentes nas culturas n?o interferiram na viabilidade das c?lulas (% de atividade MTT), durante os 3 momentos observados, quando comparados com o grupo CP (P< 0,001). Ao mesmo tempo, as c?lulas cultivadas em contato com os g?is demonstraram viabilidade semelhante ao grupo CN. Entretanto, ainda que sejam at?xicos em contato com culturas de c?lulas em monocamada, testes de citotoxicidade em 3D devem confirmar a efetividade dos hidrog?is aprimorados HPMC-Si e HPMC-RGDS como scaffolds aplic?veis em regenera??o e engenharia de tecidos.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 422340.pdf: 14563536 bytes, checksum: b6883cbe3401270733359041afa6d671 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / INTRODU??O: As c?lulas mononucleares (CMs) da medula ?ssea t?m sido utilizadas em diversas patologias na tentativa de regenera??o tecidual. O objetivo deste estudo foi avaliar a ades?o de c?lulas mononucleares sobre um defeito cr?tico, com a adi??o do plasma rico em plaquetas (PRP) e/ou TGF-&#946;1 (Fator de crescimento transformador Beta 1) e, por fim, verificar o reparo ?sseo dos s?tios defeituosos dos f?mures dos ratos. M?TODOS: Foi criado um defeito cr?tico bilateral nos f?mures de 33 ratos Wistar-Kyoto. C?lulas mononucleares da medula ?ssea, TGF-&#946; e PRP foram adicionadas no lado tratado da les?o e soro fisiol?gico no lado contralateral. Avaliou-se a ades?o de c?lulas mononucleares sobre o defeito cr?tico e o reparo ?sseo. RESULTADOS: A presen?a e conseq?ente ades?o das c?lulas mononucleares administradas nos animais tratados n?o foram evidenciadas atrav?s de t?cnica de PCR. As an?lises radiogr?ficas evidenciam fechamento da les?o nos grupos CMs +TGF-&#946; e CMs + PRP, por?m, n?o podemos afirmar se foi pelos tratamentos administrados ou pela pr?pria regenera??o ?ssea, quando analisadas em 6 e 10 semanas, haja visto n?o apresentarem diferen?as significativas entre os grupos. CONCLUS?ES: a) as c?lulas mononucleares da medula ?ssea n?o aderiram ao defeito cr?tico criado no f?mur do rato; b) N?o foi poss?vel avaliar a efici?ncia relativa dos tratamentos propostos no reparo ?sseo, uma vez que n?o houve diferen?as significativas na avalia??o dos grupos.