O biofilme bacteriano é o agente etiológico primário no desenvolvimento da resposta inflamatória observada na doença periodontal. Os receptores do tipo NOD (NLRs) são proteínas citosólicas que reconhecem componentes microbianos presentes no citoplasma liberados por bactérias invasoras. Sabendo que bactérias periodontopatogênicas têm a capacidade de invadir e colonizar diversas células do tecido periodontal, o presente projeto tem o objetivo de estudar a participação dos receptores do tipo NOD (NOD1 e NOD2) no reconhecimento das bactérias Porphyromonas gingivalis, na modulação da resposta imune e no processo de reabsorção óssea. Camundongos isogênicos machos da linhagem C57BL/6 (WT) e camundongos deficientes para o receptor NOD1 (NOD1-/-) e receptor NOD2 (NOD2-/-) foram infectados com Phorphyromonas gingivalis utilizando um modelo experimental de doença periodontal. O grau de reabsorção óssea foi avaliado por análise morfométrica macroscópica e histológica da maxila, além da quantificação do número de osteoclastos na crista óssea alveolar. O grau de inflamação local foi realizado por contagem do número total de bactérias orais, quantificação de neutrófilos no tecido gengival (MPO) e avaliação dos mediadores inflamatórios por ELISA. Foi também avaliada a expressão de marcadores osteogênicos e osteoclastogênicos no tecido gengival pela técnica de qPCR. Animais NOD1-/- e NOD2-/- apresentaram menor delta de reabsorção óssea quando comparados aos animais WT. Animais NOD2-/- infectados apresentaram debilitado controle bacteriano quando comparados aos animais WT infectados. Animais NOD1-/- e NOD2-/- infectados apresentaram baixa expressão de Cxcl1 e MPO quando comparados aos animais WT infectados. Além disso, foi observado que animais NOD2-/- infectados apresentaram reduzida produção de TNF-α e elevada produção de IL-10 quando comparados aos animais WT infectados. Não foi detectado diferença estatística na expressão de fatores osteogênicos, Runx2 e osteocalcina, entre animais WT, NOD1-/- e NOD2-/- infectados. Embora não houve diferença no número de células TRAP positivas presentes na crista óssea alveolar entre os grupos no tempo avaliado, animais WT infectados apresentaram elevada expressão gênica de RANKL/OPG quando comparados aos animais NOD2-/- infectados. Além disso, a expressão de marcadores de atividades dos osteoclastos, catepsina k e matrix metaloproteinase-9, foi significantemente baixa nos animais NOD1-/- e NOD2-/- infectados quando comparados aos animais WT infectados. Esses resultados permitem sugerir que independente das variáveis observadas, verificamos que a ausência dos dois receptores impede a rápida progressão da reabsorção óssea alveolar observada na periodontite, portanto os receptores NOD1 e NOD2 contribuem para progressão da reabsorção óssea no modelo experimental de periodontite. / The bacterial biofilm has been identified as an etiological agent in the pathogenesis of periodontal disease. The NOD-like receptors (NLRs) are cytoplasmic proteins that sense microbial by products released by invasive bacteria. Since periodontopathogenic bacteria are able to invade and colonize some periodontal tissue cells, the purpose of this study is to determine the role of NOD1 and NOD2 receptors in the recognition of invasive periodontopathogenic bacteria such as Porphyromonas gingivalis, modulating the immune response and bone resorption. Isogenic strain C57BL/6 males (WT), NOD1 (NOD1-/-) and NOD2 (NOD2-/-) knockout mice were infected with Porphyromonas gingivalis in an experimental model of periodontal disease. Alveolar bone resorption was evaluated by macroscopic and histological morphometric analysis, quantification of osteoclasts numbers in bone crest alveolar. Imune inflammatory response was evaluated by, bacterial load, neutrophils quantification and inflammatory mediators levels by ELISA. We also evaluated the osteogenic and osteoclastogenic markers expression in gingival tissue by Real time PCR techniques. NOD1-/- and NOD2-/- animals showed lower bone resorption when compared to WT animals. NOD2-/- infected animals expressed higher bacterial load compared to WT infected ones. NOD1-/- and NOD2-/- infected animals presented lower Cxcl1 and MPO levels compared to WT infected animals. In addition, NOD2-/- infected animals presented lower level of TNF-α and higher level of IL-10 when compared to WT infected animals. There was no significant difference in the osteogenic factors expression, Runx2 and osteocalcin, when compared NOD1-/- and NOD2-/- infected animals to WT infected ones. Although there was no difference in TRAP-positive cells number evaluated in the alveolar bone crest among the studied groups, WT infected animals showed elevated ratio RANKL/OPG when compared to NOD2-/- infected animals. Moreover, the expression of osteoclasts activity markers, cathepsin k and matrix metalloproteinase-9, was significantly lower in NOD1-/- and NOD2-/- infected animals compared to WT infected ones. These results suggest that NOD1 and NOD2 receptors contribute to progression of bone resorption in experimental model of periodontitis, since the lack of NOD like receptors impair the bone resorption.

A osteoporose é uma epidemia mundial, exprime altas taxas de morbidade e mortalidade, resultando também em altos custos sociais. O exame de densitometria óssea por emissão dupla de raios-X (DXA) é o exame padrão ouro para o diagnóstico da doença. Porém, o alto custo e a disponibilidade de equipamentos, dificultam o acesso ao exame, principalmente nos países pobres e nos emergentes. Triar melhor, e mais precocemente os pacientes para realizar o DXA, é uma estratégia fundamental no combate a essa enfermidade. A radiografia panorâmica vem sendo utilizada na rotina do atendimento odontológico no mundo todo, e tem sido empregada como um método de triagem eficiente de pacientes com baixa densidade mineral óssea. O objetivo deste estudo foi analisar as paredes corticais do canal da mandíbula para a avaliação de possíveis alterações causadas pela osteopenia /osteoporose, na expectativa de indicar ou não a correlação entre a qualidade óssea mandibular e a qualidade óssea sistêmica. A amostra constituiu-se por 52 mulheres, com idade superior a 45 anos (56.4 ± 8.4 anos) divididas em três grupos de acordo com o exame de DXA: Grupo N (n= 26) normal nos três sítios (antebraço, quadril e coluna); Grupo E (n= 18) com osteopenia nos três sítios e Grupo O (n= 8) com osteoporose nos três sítios. Os resultados demonstraram que houve diferenças significativas na quantidade relativa de pixels pretos na região de ramo (R) do canal da mandíbula (p < 0.05) entre as médias verdadeiras quando comparada entre os grupos da amostra. Nas regiões do canal da mandíbula próximo ao forame mentual (FM) e no ângulo (A) e na análise da quantidade de fragmentos os testes estatísticos não evidenciaram a existência de diferenças significativas, apesar dos valores relativos apontarem uma tendência à maior reabsorção das paredes no grupo O e E em relação ao Grupo N. Concluiu-se que a análise das corticais do canal da mandíbula por meio da quantidade de pixels pretos pode ser um instrumento útil ao cirurgião-dentista na avaliação de baixa densidade mineral óssea. / Osteoporosis is a worldwide epidemic, expresses high morbidity and mortality, resulting also in high social costs. The bone densitometry by dual-energy X-ray absorptiometry (DXA) is the gold standard test for diagnosing the disease. However, its high cost and viability are restricted, especially in poor countries and emerging. Screening better and earlier patients to perform DXA, is a key strategy in combating this disease. Panoramic radiography has been used in routine dental care around the world, and has been employed as an efficient method of screening patients with low bone mineral density. The aim of this study was to analyze the cortical walls of the mandibular canal to evaluate possible changes caused by osteopenia / osteoporosis, hoping to indicate or not the correlation between mandibular bone quality and systemic. 52 women were included aged over 45 years (56.4 ± 8.4 years) were divided into three groups according to the DXA exam: Group N (n = 26) normal in three sites (forearm, hip and spine), Group E (n = 18) with osteopenia at the three sites and Group O (n = 8) with osteoporosis in the three sites. Significant differences were found between relative amount of black pixels in the region of the branch (R) of the mandibular canal (p <0.05) and the mean true when compared among groups of samples. In regions of the mandibular canal near the mental foramen (MF), angle (A) and analysis of the amount of fragments statistical tests did not show the significant differences, despite the figures suggest a trend to higher absorption in the walls the E group and to the detriment of group N. It was concluded that the analysis of the cortical the mandibular canal by the number of black pixels may be a useful to the dentist in the evaluation of low bone mineral density.

O objetivo do atual trabalho, foi correlacionar os eventos celulares e teciduais com a expressão das proteínas VEGF, BMP-7, RANKL e OPG durante a osteogênese ectópica e ortotópica, induzida pela matriz óssea (MO) e dentinária (MD) alogênica. Matrizes alogênicas desmineralizada em HCl a 0,6N, obtidas de fêmur e incisivo de ratos, fori implantada entre as fáscias musculares da coxa e em defeito trans-ósseo de 8mm de diâmetro nos ossos parietais. As análises radiográfica e histomorfométrica da neoformação óssea e, a imunohistoquímica e o western blotting para as proteínas VEGF, BMP, RANKL e OPG, mostraram que: a) o volume da região do enxerto nos sítios ortotópicos reduziu 19% em 42 dias; b) em ambos tipos de enxerto e locais de implantação, ocorreu formação de tecido cartilaginoso e ósseo; c) nos sítios intramusculares, a reabsorção da matriz alogênica e a remodelação do tecido cartilaginoso, ósseo e medular foi mais acelerado, em relação a implantação ortotópico; d) o aumento na densidade de volume dos vasos sanguíneos e no número de osteoblastos/osteócitos e osteoclastos ocorreu simultaneamente e estava associado à maior reabsorção da matriz alogênica e à formação do tecido medular (hematopoiético); e) as proteínas VEGF, BMP-7, RANKL, OPG foram expressas em condrócitos, osteoblastos ativos, osteócitos recém aprisionados na matriz e em células estromais próximas aos osteoblastos ou às áreas da matriz alogênica reabsorvida; e f) a expressão das proteínas VEGF, BMP-7, RANKL e OPG foi maior no grupo MO. O pico de expressão dessas proteínas ocorreu nos períodos de 14 aos 21 dias no grupo da MO e 21 e 28 dias no grupo da MD. Concluímos que, a capacidade osteoindutora da matriz alogênica desmineralizada está relacionado a origem da matriz e ao sítio de implantação e que, as proteínas VEGF, BMP-7, RANKL e OPG estão associadas a maior reabsorção da matriz implantada, promovendo uma rápida e contínua liberação dos morfógenos contidos em seu interior que, induzem temporal e espacialmente a formação óssea/medular. / The aim of the present work was to correlate the cellular and tissue events with the expression of VEGF, BMP-7, RANKL and OPG during ectopic and orthotopic osteogenesis, induced by bone and dentin allogeneic matrix. Allogenic matrices obtained from femur and incisor of rats and demineralized in 0.6 N HCl were implanted into a intramuscular pocket and a 8mm-diameter bone defect in the skull. The radiographic and histomorphometric analysis of new bone formation, and immunohistochemistry and western blotting for VEGF, BMP, RANKL and OPG proteins, showed that: a) the total volume of the graft region in orthotopic site decreased 19% at 42 days b) in both graft types and implantation sites occurred formation of cartilaginous and bone tissues, c) in intramuscular sites, the resorption of allogenic matrix and remodeling of the new formed cartilage and bone were faster, in relation to orthotopic implantation sites; d) the increase in the volume density of blood vessels and in the number of osteoblasts/osteocytes and osteoclasts occurred simultaneously and was associated with greater reabsorption of the allogenic matrix and hematopoietic bone marrow formation; e) VEGF, BMP-7, RANKL, OPG proteins were expressed in chondrocytes, active osteoblasts, newly osteocytes confined and stromal cells located near the osteoblasts or in the surface of the reabsorbed matrix; and f) the VEGF, BMP-7, RANKL and OPG expression was higher in MO grafts than in the MD. The peak of expression of these proteins each occurred at 14 and 21 days in MO and 21 and 28 days in MD. We concluded that, the osteoinductive capacity of allogeneic demineralized matrix is related to matrix origin and implantation site and that the VEGF, BMP-7, RANKL and OPG proteins are associated with greater reabsorption of the implanted matrix, promoting rapid and continuous matrix-release morphogens that induces spatially and temporally the bone and bone marrow formation.

Orientador: Rosemary Adriana Chierici Marcantonio / Resumo: Trabalhos in vivo têm utilizado a microtomografia computadorizada para avaliar a qualidade e quantidade de tecido ósseo presente durante o desenvolvimento de doença periodontal induzida. No entanto, ainda não foram estudados quais os melhores e mais confiáveis padrões estabelecidos para o adequado uso da técnica de Micro CT. O objetivo deste estudo foi avaliar a geração de artefatos e ruídos durante o escaneamento de biópsias ósseas bem como, analisar a influência de diferentes parâmetros estabelecidos durante a mensuração de área e volume ósseo, em modelo experimental de doença periodontal induzida em ratos. Para análise dos diferentes parâmetros de escaneamento com o Micro CT foram utilizados 05 animais aleatoriamente selecionados e submetidos a inserção de ligaduras na região subgengival dos segundos molares superiores. Após o período de 7 dias os animais foram eutanasiados e as biópsias ósseas escaneadas utilizando resoluções de 9 µm e 18 µm, com diferentes filtros: alumínio (0,2 mm, 0,5 mm e 1 mm) e cobre+alumínio (Cu 0,04 mm + Al 0,5 mm). Posteriormente foram definidas duas regiões de interesse (ROI's) ao redor dos segundos molares, de modo que foi somente analisado o tecido ósseo. Após determinação da área de interesse, a quantidade de tecido ósseo foi avaliada e quantificada por meio do software CTAn, a partir de 5 valores de thresholds: 255-75, 255-80, 255-85, 255-70, 255-65. Quando diferentes tresholds foram analisados dentro de um mesmo filtro, somente o filtro de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In vivo studies have used a computerized microtomography (Micro CT) to assess a quality and amount of tissue present in the development of induced periodontal disease. However, have not yet studied which are the most reliable standards established for the proper use of the Micro CT technique. The objective of this study was to evaluate the generation of artifacts during biopsy scanning, as well as the analysis of different parameters defined in an area and bone volume measurement in an experimental model of periodontal disease induced in rats. To analyze the different detection parameters of microcomputers with selected animals and submitted to insertion of ligatures in the subgingival region of the upper second molars. After the 7-day period the animals were used as bone biopsies scanned using resolutions of 9 μm and 18 μm, with different filters: aluminum (0.2 mm, 0.5 mm and 1 mm) and copper + aluminum (Cu 0 04 mm + 0.5 mm). Subsequently, two regions of interest (ROI's) were defined around the second molars, in the way the bone tissue was analyzed. After determining the area of interest, the amount of bone tissue was evaluated and quantified using the CTAn software, from 5 threshold values: 255-75, 255-80, 255-85, 255-70, 255-65. When different thresholds were analyzed within the same filter, only the 0.2 mm Al filter presented statistical difference for all comparisons (9 μm and 18 μm). Already when the different filters with the same threshold were compared, it is only one comparison Al 0.2 mm x Cu + Al presented statistical difference for all ...(Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: Paulo Sérgio Perri de Carvalho / Resumo: As vantagens do tratamento do edentulismo total mandibular com implantes osseointegráveis e função oclusal precoce são bem conhecidas. Recentemente, um interesse crescente pelos benefícios dessa modalidade terapêutica envolveu o edentulismo parcial em várias regiões da boca. No entanto, protocolos bem definidos para a mandíbula posterior com função oclusal precoce não foram devidamente testados e aprovados. O objetivo desta investigação foi avaliar a eficácia clínica de um protocolo cirúrgico, protético e radiográfico para o tratamento da mandíbula posterior, com implantes osseointegráveis e função oclusal precoce. Treze pacientes com edentulismo parcial posterior, uni ou bilateral, foram tratados em clínica particular. Cinqüenta e dois implantes foram inseridos em 17 áreas mandibulares, com classes I, II e III de Kennedy. Os implantes utilizados foram MKIII e MKIV, com superfície lisa e foi empregada técnica cirúrgica padronizada para inserção dos implantes. A função oclusal precoce foi obtida com próteses parciais fixas instaladas com uma média de 7 dias da inserção dos implantes.O tempo de observação clínica variou entre 12 e 26 meses, com média de 19 meses. O nível do osso marginal foi determinado com medidas nas imagens digitalizadas de radiografias convencionais padronizadas. A taxa cumulativa de sobrevivência foi de 98,1% e a perda óssea marginal média, nos primeiros seis meses, foi de 1,02mm e 1,07mm para um ano de observação. A taxa da sobrevivência das próteses foi de 100%. Considerando os limites deste estudo, o protocolo testado para tratamento da mandíbula posterior com função oclusal precoce e implantes osseointegráveis parece viável para aplicação clínica em bases rotineiras, No entanto, estudos multicêntricos e a longo prazo devem ser conduzidos para confirmar ou refutar os resultados obtidos. / Abstract: The early occlusal loading of Osseointegrated implants in mandibular totally edentulous patients have been shown to be a successful and an advantageous approach. Recently, this treatment modality evolved to the treatment of partially edentulous patients. However protocols for treating those cases were neither tested nor approved. The objective of this investigation was to evaluate the clinical efficacy of a surgical, a prosthetic and a radiographic protocol idealized for the treatment of the posterior mandible with early occlusaly loaded osseointegrated implants. Thirteen partially edentulous patients in the posterior mandibleunilaterally or bilaterally, were treated in a private practice setting. Fifty two fixtures were placed in seventeen mandibular areas class I, II and III accordingly to Kennedy's classification. Machined MKIII and MKIV implants were placed utilizing standardized surgical technique. Early loading conditions were obtained with the placement of fixed partial dentures installed in average seven days after fixtures installation. The clinical observation time varied between 12 and 26 months with an average of 19 months. The marginal bone levels were determined from digital images derived from standardized conventional radiographs. A mean marginal bone loss of 1.02mm was noted in the first six months of observation and a mean marginal bone loss of 1.07 mm after 12 months under the evaluated conditions. The cumulative survival rate of 98.1% and 100 % were found for implants and prostheses respectively. Within the limits of this study, it can be concluded that the tested protocol for the treatment of the posterior mandible with osseointegrated implants under early occlusal loading condition seemed to be a viable clinical alternative for routine application. Nevertheless, additional studies including a multicenter design and longer evaluation periods are necessary to substantiate these findings. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T18:43:56Z : No. of bitstreams: 1 pinto_avs_dr_araca.pdf: 1496770 bytes, checksum: c9fd8c4da9c28379a95d5da49951a5df (MD5) / 3i Implant / As vantagens do tratamento do edentulismo total mandibular com implantes osseointegráveis e função oclusal precoce são bem conhecidas. Recentemente, um interesse crescente pelos benefícios dessa modalidade terapêutica envolveu o edentulismo parcial em várias regiões da boca. No entanto, protocolos bem definidos para a mandíbula posterior com função oclusal precoce não foram devidamente testados e aprovados. O objetivo desta investigação foi avaliar a eficácia clínica de um protocolo cirúrgico, protético e radiográfico para o tratamento da mandíbula posterior, com implantes osseointegráveis e função oclusal precoce. Treze pacientes com edentulismo parcial posterior, uni ou bilateral, foram tratados em clínica particular. Cinqüenta e dois implantes foram inseridos em 17 áreas mandibulares, com classes I, II e III de Kennedy. Os implantes utilizados foram MKIII e MKIV, com superfície lisa e foi empregada técnica cirúrgica padronizada para inserção dos implantes. A função oclusal precoce foi obtida com próteses parciais fixas instaladas com uma média de 7 dias da inserção dos implantes.O tempo de observação clínica variou entre 12 e 26 meses, com média de 19 meses. O nível do osso marginal foi determinado com medidas nas imagens digitalizadas de radiografias convencionais padronizadas. A taxa cumulativa de sobrevivência foi de 98,1% e a perda óssea marginal média, nos primeiros seis meses, foi de 1,02mm e 1,07mm para um ano de observação. A taxa da sobrevivência das próteses foi de 100%. Considerando os limites deste estudo, o protocolo testado para tratamento da mandíbula posterior com função oclusal precoce e implantes osseointegráveis parece viável para aplicação clínica em bases rotineiras, No entanto, estudos multicêntricos e a longo prazo devem ser conduzidos para confirmar ou refutar os resultados obtidos. / The early occlusal loading of Osseointegrated implants in mandibular totally edentulous patients have been shown to be a successful and an advantageous approach. Recently, this treatment modality evolved to the treatment of partially edentulous patients. However protocols for treating those cases were neither tested nor approved. The objective of this investigation was to evaluate the clinical efficacy of a surgical, a prosthetic and a radiographic protocol idealized for the treatment of the posterior mandible with early occlusaly loaded osseointegrated implants. Thirteen partially edentulous patients in the posterior mandibleunilaterally or bilaterally, were treated in a private practice setting. Fifty two fixtures were placed in seventeen mandibular areas class I, II and III accordingly to Kennedy’s classification. Machined MKIII and MKIV implants were placed utilizing standardized surgical technique. Early loading conditions were obtained with the placement of fixed partial dentures installed in average seven days after fixtures installation. The clinical observation time varied between 12 and 26 months with an average of 19 months. The marginal bone levels were determined from digital images derived from standardized conventional radiographs. A mean marginal bone loss of 1.02mm was noted in the first six months of observation and a mean marginal bone loss of 1.07 mm after 12 months under the evaluated conditions. The cumulative survival rate of 98.1% and 100 % were found for implants and prostheses respectively. Within the limits of this study, it can be concluded that the tested protocol for the treatment of the posterior mandible with osseointegrated implants under early occlusal loading condition seemed to be a viable clinical alternative for routine application. Nevertheless, additional studies including a multicenter design and longer evaluation periods are necessary to substantiate these findings.

Submitted by LUANA ELIS SABINO null (luana_sabino2@yahoo.com.br) on 2017-10-19T17:05:43Z No. of bitstreams: 1 Dissertação mestrado Luana ÚLTIMA CORREÇÃO PÓS TESE _06.09.2017.pdf: 856633 bytes, checksum: c980bbb3ae877cf8b0a44f1d5dea5855 (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-10-23T18:07:48Z (GMT) / Submitted by LUANA ELIS SABINO null (luana_sabino2@yahoo.com.br) on 2017-10-26T14:16:53Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Final Mestrado.pdf: 856633 bytes, checksum: c980bbb3ae877cf8b0a44f1d5dea5855 (MD5) Ficha catalográfica.pdf: 111383 bytes, checksum: a8b7568798072418c7b893211ab02930 (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: A ficha catalográfica deve ser inserida na página subsequente à folha de rosto. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-10-26T14:19:53Z (GMT) / Submitted by LUANA ELIS SABINO null (luana_sabino2@yahoo.com.br) on 2017-10-26T17:47:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final f.c1.pdf: 968068 bytes, checksum: 7307917532b3a6d10b3fa2716603443c (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-10-26T17:50:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sabino_le_me_arafo.pdf: 968068 bytes, checksum: 7307917532b3a6d10b3fa2716603443c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-26T17:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sabino_le_me_arafo.pdf: 968068 bytes, checksum: 7307917532b3a6d10b3fa2716603443c (MD5) Previous issue date: 2017-08-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Trabalhos in vivo têm utilizado a microtomografia computadorizada para avaliar a qualidade e quantidade de tecido ósseo presente durante o desenvolvimento de doença periodontal induzida. No entanto, ainda não foram estudados quais os melhores e mais confiáveis padrões estabelecidos para o adequado uso da técnica de Micro CT. O objetivo deste estudo foi avaliar a geração de artefatos e ruídos durante o escaneamento de biópsias ósseas bem como, analisar a influência de diferentes parâmetros estabelecidos durante a mensuração de área e volume ósseo, em modelo experimental de doença periodontal induzida em ratos. Para análise dos diferentes parâmetros de escaneamento com o Micro CT foram utilizados 05 animais aleatoriamente selecionados e submetidos a inserção de ligaduras na região subgengival dos segundos molares superiores. Após o período de 7 dias os animais foram eutanasiados e as biópsias ósseas escaneadas utilizando resoluções de 9 µm e 18 µm, com diferentes filtros: alumínio (0,2 mm, 0,5 mm e 1 mm) e cobre+alumínio (Cu 0,04 mm + Al 0,5 mm). Posteriormente foram definidas duas regiões de interesse (ROI’s) ao redor dos segundos molares, de modo que foi somente analisado o tecido ósseo. Após determinação da área de interesse, a quantidade de tecido ósseo foi avaliada e quantificada por meio do software CTAn, a partir de 5 valores de thresholds: 255-75, 255-80, 255-85, 255-70, 255-65. Quando diferentes tresholds foram analisados dentro de um mesmo filtro, somente o filtro de Al 0,2 mm apresentou diferença estatística para todas comparações (9 µm e 18 µm). Já quando diferentes filtros foram comparados com o mesmo treshold, apenas a comparação Al 0,2 mm x Cu + Al apresentou diferenças estatísticas para todas as comparações, com exceção para comparações entre Al 0,1 mm x Al 0,2 mm (treshold 255-65 com resolução de 18 µm). Diante dos resultados apresentados, conclui-se que, avanços e padronizações utilizadas em análises microtomográficas para a avaliação de perda óssea em doença periodontal induzida devem ser realizadas com objetivo de maior fidelização dos dados, podendo serem assim, compatíveis com outras análises com avaliações histomorfométricas. / In vivo studies have used a computerized microtomography (Micro CT) to assess a quality and amount of tissue present in the development of induced periodontal disease. However, have not yet studied which are the most reliable standards established for the proper use of the Micro CT technique. The objective of this study was to evaluate the generation of artifacts during biopsy scanning, as well as the analysis of different parameters defined in an area and bone volume measurement in an experimental model of periodontal disease induced in rats. To analyze the different detection parameters of microcomputers with selected animals and submitted to insertion of ligatures in the subgingival region of the upper second molars. After the 7-day period the animals were used as bone biopsies scanned using resolutions of 9 μm and 18 μm, with different filters: aluminum (0.2 mm, 0.5 mm and 1 mm) and copper + aluminum (Cu 0 04 mm + 0.5 mm). Subsequently, two regions of interest (ROI's) were defined around the second molars, in the way the bone tissue was analyzed. After determining the area of interest, the amount of bone tissue was evaluated and quantified using the CTAn software, from 5 threshold values: 255-75, 255-80, 255-85, 255-70, 255-65. When different thresholds were analyzed within the same filter, only the 0.2 mm Al filter presented statistical difference for all comparisons (9 μm and 18 μm). Already when the different filters with the same threshold were compared, it is only one comparison Al 0.2 mm x Cu + Al presented statistical difference for all comparisons, except for comparisons between Al 0.1 mm x 0.2 mm (threshold 255 - 65 with resolution of 18 μm). It was concluded that advances and standardization in microtomographic analysis to evaluate bone loss in induced periodontal disease should be performed with the objective of greater fidelity of the data, thus being compatible with other analyzes with histomorphometric evaluation.

Trata-se de estudo comparativo para avaliar a atividade dos medicamentos nimesulida, Arnica TM, Arnica 6CH comparados com H2O no tratamento da Doença Periodontal experimental induzida por ligadura em ratos. Esta doença se caracteriza por processo inflamatório que pode evoluir até ao ligamento periodontal e tecido ósseo provocando perda óssea. Mediadores produzidos pelo hospedeiro e substâncias do biofilme são responsáveis pelos danos que podem levar até a perda do elemento dentário. O objetivo deste trabalho foi desenvolver estudo exploratório descritivo para analisar, aprofundar e comparar os efeitos das medicações citadas, investigando possíveis inovações no tratamento da doença periodontal. A metodologia consistiu em: 1) colocação, sob anestesia, da ligadura no primeiro molar inferior esquerdo. 2) administração diária por gavagem de H2O (controle) (1&#x3BC;l/g), nimesulida (1&#x3BC;l/g, de uma suspensão com 5mg/ml), Arnica TM (8&#x3BC;l/300g) ou Arnica 6CH (3,21&#x3BC;l/300g) durante 14, 21 e 28 dias a quatro grupos de ratos Wistar (n=30/ grupo); 3) eutanásia e coleta de material para análises histológica, da perda óssea e RT-PCR (alvos: TNF-&#x3B1;, COX-2, IL-6, OPG e RANKL); 4) análise estatística paramétrica realizada por ANOVA a um ou dois critérios, seguida do teste de Tukey, ou por análise não paramétrica por Kruskal-Wallis, seguido do método de Dunns, nível de significância de 5%. Quanto à perda óssea, não houve diferença estatística entre os grupos e nenhum dos tratamentos foi capaz de contê-la. Os escores para o infiltrado inflamatório não mostraram diferença significativa entre os grupos nos períodos estudados. Quanto ao escore geral, que envolve intensidade do infiltrado inflamatório, migração do epitélio juncional, integridade do cemento e da crista óssea alveolar, não houve diferença significativa entre os grupos nos períodos. Na expressão do RNAm para as citocinas vimos para o TNF-&#x3B1; não haver diferença significativa entre os grupos, quando se analisou isoladamente os períodos de 14 e 28 dias. No entanto, no período de 21 dias, houve redução significativa no grupo nimesulida comparado ao grupo Arnica 6CH (&#x2217;p<0,05). Para a COX-2, não houve diferença significativa quanto à expressão do RNAm entre os grupos, analisando isoladamente cada período de estudo, sendo nítida a redução desta expressão no grupo Arnica 6CH em todos os períodos; para a IL-6, OPG e RANKL não houve diferença significativa quanto à expressão do RNAm entre os grupos nos períodos estudados. No entanto, no grupo Arnica 6CH nota-se tendência nítida para o aumento da expressão do RNAm para OPG, ao longo do tempo. Comparando com o grupo H2O a ação de cada medicamento quanto à expressão do RNAm para todas as citocinas, considerando o conjunto dos 3 períodos, vê-se redução significativa para a expressão de RNAm para COX-2 e RANKL após o tratamento com Arnica 6CH (&#x2217;p<0,05). O mesmo pode ser visto para a nimesulida quando se estuda a expressão do RNAm para RANKL (&#x2217;p<0,05). No estudo ficaram destacados os efeitos biológicos da Arnica 6CH sobre a leitura e transcrição do DNA, notadamente sobre genes relacionados à perda óssea, o que vislumbra a possibilidade de sua utilização terapêutica. / This is a comparative study to evaluate the activity of nimesulide medicines, Arnica TM, Arnica 6CH compared with H2O in the treatment of experimental periodontal disease induced by ligation in rats. This disease is characterized by an inflammatory process that may progress to the periodontal ligament and bone tissue leading to bone loss. Mediators produced by the host and biofilm substances are responsible for the damage that can lead to tooth loss. The aim of this exploratory and descriptive study was to analyze, deepen and compare the effects of the mentioned medications, investigating possible innovations in the treatment of periodontal disease. The methodology consisted of: 1) placing under anesthesia ligature in the first lower left molar. 2) daily administration by gavage H2O (control) (1&#x3BC;l/g), nimesulide (1&#x3BC;l/g, a suspension of 5 mg / ml), Arnica TM (8&#x3BC;l/300g) or Arnica 6CH (3,21&#x3BC;l/300g) for 14, 21 and 28 days to four groups of Wistar rats (n = 30 / group); 3) euthanasia and collection of material for histological, bone loss and RTPCRanalysis (targets: TNF-&#x3B1;, COX-2, IL-6, OPG and RANKL); 4) parametric statistical analysis performed by ANOVA to one or two criteria, followed by Tukey test, or nonparametric analysis by Kruskal-Wallis, followed by Dunns method, 5% significance level. Regarding the bone loss, there was no statistical difference between the groups and none of the treatments was able to contain it. The scores for the inflammatory infiltrate showed no significant difference between the groups in the study periods. Regarding the general score, which involves intensity of the inflammatory infiltrate, migration of the junctional epithelium integrity of the cement and the alveolar bone crest, there was no significant difference between groups in the periods. At the mRNA expression for the cytokines we saw for TNF-&#x3B1; no significant difference between groups when analyzed separately periods of 14 and 28 days. However, in the 21day period, there was significant reduction in nimesulide group compared to the Arnica 6CH group (&#x2217; p <0.05). For COX-2, there was no significant difference in mRNA expression between the groups, separately analyzing each study period, being sharper reduction of this expression in Arnica 6CH group in all periods; for IL-6, OPG and RANKL no significant difference in mRNA expression between the groups in the study periods. However, it is noted in the Arnica 6CH group a clear tendency to increase of the mRNA expression for OPG over time. Comparing with H2O group action of each medicine on the mRNA expression for all cytokines, considering the set of three periods, we see a significant reduction in mRNA expression for COX-2 and RANKL after treatment with Arnica 6CH (&#x2217; p <0.05). The same can be seen for nimesulide when studying the mRNA expression for RANKL (&#x2217; p <0.05). In the study were highlighted the biological effects of Arnica 6CH about reading and transcription of the DNA, notedly about genes related to bone loss, which envisions the possibility of its therapeutic use.

O objetivo do atual trabalho, foi correlacionar os eventos celulares e teciduais com a expressão das proteínas VEGF, BMP-7, RANKL e OPG durante a osteogênese ectópica e ortotópica, induzida pela matriz óssea (MO) e dentinária (MD) alogênica. Matrizes alogênicas desmineralizada em HCl a 0,6N, obtidas de fêmur e incisivo de ratos, fori implantada entre as fáscias musculares da coxa e em defeito trans-ósseo de 8mm de diâmetro nos ossos parietais. As análises radiográfica e histomorfométrica da neoformação óssea e, a imunohistoquímica e o western blotting para as proteínas VEGF, BMP, RANKL e OPG, mostraram que: a) o volume da região do enxerto nos sítios ortotópicos reduziu 19% em 42 dias; b) em ambos tipos de enxerto e locais de implantação, ocorreu formação de tecido cartilaginoso e ósseo; c) nos sítios intramusculares, a reabsorção da matriz alogênica e a remodelação do tecido cartilaginoso, ósseo e medular foi mais acelerado, em relação a implantação ortotópico; d) o aumento na densidade de volume dos vasos sanguíneos e no número de osteoblastos/osteócitos e osteoclastos ocorreu simultaneamente e estava associado à maior reabsorção da matriz alogênica e à formação do tecido medular (hematopoiético); e) as proteínas VEGF, BMP-7, RANKL, OPG foram expressas em condrócitos, osteoblastos ativos, osteócitos recém aprisionados na matriz e em células estromais próximas aos osteoblastos ou às áreas da matriz alogênica reabsorvida; e f) a expressão das proteínas VEGF, BMP-7, RANKL e OPG foi maior no grupo MO. O pico de expressão dessas proteínas ocorreu nos períodos de 14 aos 21 dias no grupo da MO e 21 e 28 dias no grupo da MD. Concluímos que, a capacidade osteoindutora da matriz alogênica desmineralizada está relacionado a origem da matriz e ao sítio de implantação e que, as proteínas VEGF, BMP-7, RANKL e OPG estão associadas a maior reabsorção da matriz implantada, promovendo uma rápida e contínua liberação dos morfógenos contidos em seu interior que, induzem temporal e espacialmente a formação óssea/medular. / The aim of the present work was to correlate the cellular and tissue events with the expression of VEGF, BMP-7, RANKL and OPG during ectopic and orthotopic osteogenesis, induced by bone and dentin allogeneic matrix. Allogenic matrices obtained from femur and incisor of rats and demineralized in 0.6 N HCl were implanted into a intramuscular pocket and a 8mm-diameter bone defect in the skull. The radiographic and histomorphometric analysis of new bone formation, and immunohistochemistry and western blotting for VEGF, BMP, RANKL and OPG proteins, showed that: a) the total volume of the graft region in orthotopic site decreased 19% at 42 days b) in both graft types and implantation sites occurred formation of cartilaginous and bone tissues, c) in intramuscular sites, the resorption of allogenic matrix and remodeling of the new formed cartilage and bone were faster, in relation to orthotopic implantation sites; d) the increase in the volume density of blood vessels and in the number of osteoblasts/osteocytes and osteoclasts occurred simultaneously and was associated with greater reabsorption of the allogenic matrix and hematopoietic bone marrow formation; e) VEGF, BMP-7, RANKL, OPG proteins were expressed in chondrocytes, active osteoblasts, newly osteocytes confined and stromal cells located near the osteoblasts or in the surface of the reabsorbed matrix; and f) the VEGF, BMP-7, RANKL and OPG expression was higher in MO grafts than in the MD. The peak of expression of these proteins each occurred at 14 and 21 days in MO and 21 and 28 days in MD. We concluded that, the osteoinductive capacity of allogeneic demineralized matrix is related to matrix origin and implantation site and that the VEGF, BMP-7, RANKL and OPG proteins are associated with greater reabsorption of the implanted matrix, promoting rapid and continuous matrix-release morphogens that induces spatially and temporally the bone and bone marrow formation.

Orientadores: Francisco Humberto Nociti Junior, João Batista Cesar Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T22:34:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bossolan_AnaPaulaOliveiraGiorgetti_M.pdf: 2279288 bytes, checksum: 5a228c75e99aaefdca7d50013fbc0c84 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da inalação da fumaça de cigarros sobre o processo de reparo ósseo alveolar em ratos. Foram utilizados 40 ratos Wistar adultos aleatoriamente divididos em: Grupo CONTROLE - 20 animais que não foram expostos à fumaça de cigarros (FC) e Grupo TESTE - 20 animais que foram expostos à FC. Todos os animais tiveram seus 1°s e 2°s molares (M) inferiores extraídos, sendo que as exposições à FC iniciaram-se 3 dias antes das extrações mantendo-se até o sacrifício (3, 7, 10 e 14 dias). Após cada sacrifício, os alvéolos dentais dos 1°sM foram curetados e o tecido obtido armazenado. Os alvéolos dos 2°s M foram processados para avaliação histométrica. A reação de PCR (Polymerase Chain Reaction) em tempo real quantificou a expressão dos genes: fosfatase alcalina (ALP), proteína óssea morfogenética (BMP)-2, BMP-3 e BMP-7, ligante ativador do receptor do fator ?B (RANKL), osteoprotegerina (OPG) e v-ATPase V0 subunidade d2 (Atp6v0d2). Histometricamente, a inalação da fumaça de cigarros influenciou negativamente o preenchimento ósseo apenas no 7º dia mostrando diferença estatisticamente significante para os parâmetros tecido medular e defeito remanescente (p<0,05). Em relação à expressão gênica, a análise dos dados demonstrou que no grupo controle houve diminuição nos níveis de RNAm ao longo do tempo de Atp6v0d2, BMP-3 e na razão entre RANKL/OPG . Os níveis de RNAm para ALP, BMP-2 e BMP-7 mostraram-se aumentados. Já no grupo teste, esses padrões de expressão gênica se invertem, pois houve aumento nos níveis de RNAm de Atp6v0d2 e na razão entre RANKL/OPG. Desta forma, conclui-se que a inalação da fumaça de cigarros pode modular o padrão de reparo ósseo alveolar observado histometricamente, provavelmente devido ao efeito observado sobre a expressão de genes envolvidos nesse processo. / Abstract: The aim of the present study was to evaluate the effect of cigarette smoke inhalation on wound healing of molar extraction socket. A total of 40 male Wistar rats were randomly assigned to one of the following groups: Control Group - 20 animals not exposed to cigarette smoke inhalation (CSI) and Test Group - 20 animals exposed to CSI for 3 days before the surgery until sacrifice (3, 7, 10, 14 days). After sacrifice, the mandible was removed and the specimens processed either for histometric analysis (2nd molar sockets) or for gene expression analysis (1st molar sockets) by Real Time polymerase chain reaction (PCR). The expression of alkaline phosphatase (ALP), bone morphogenetic protein (BMP) -2, BMP-3 and BMP-7, receptor activator of nuclear factor ?B ligand (RANKL), osteoprotegerin (OPG) and v-ATPase V0 subunit d2 (Atp6v0d2) was assessed. Histometrically, data analysis showed that CSI negatively affected bone formation on the 7th day showing a lower amount of non-mineralized tissue and higher wound area (p<0.05). As for gene expression, data analysis demonstrated a trend of lower mRNA levels over time for Atp6v0d2, BMP-3 and RANKL/OPG ratio in the control group. Whereas, ALP, BMP-2 and BMP-7 mRNA levels were increased. Data analysis additionally demonstrated that this pattern was modified by CSI. Cigarette smoke exposure resulted in an increase in Atp6v0d2 mRNA levels and in RANKL/OPG ratio. Within the limits of the present study, it can be concluded that cigarette smoke inhalation may affect the post-extraction socket healing pattern, probably due to the observed effect on the expression of bone remodeling-associated genes in the sites of tooth extraction. / Mestrado / Periodontia / Mestre em Clínica Odontológica