Submitted by FERNANDA DA SILVA VON PORSTER (fdsvporster@univates.br) on 2015-04-20T18:13:02Z No. of bitstreams: 3 license_text: 22762 bytes, checksum: fda13080e892f3f68def2b8b70227968 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) 2014DeboraMarin.pdf: 763873 bytes, checksum: 13a6755bc732a754dcf5071080fcf4f1 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2015-04-23T14:50:11Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_text: 22762 bytes, checksum: fda13080e892f3f68def2b8b70227968 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) 2014DeboraMarin.pdf: 763873 bytes, checksum: 13a6755bc732a754dcf5071080fcf4f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-23T14:50:11Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_text: 22762 bytes, checksum: fda13080e892f3f68def2b8b70227968 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) 2014DeboraMarin.pdf: 763873 bytes, checksum: 13a6755bc732a754dcf5071080fcf4f1 (MD5) / Introdução: Fatores genéticos e ambientais estão envolvidos na patogênese da obesidade. Vários estudos demonstraram associações de variantes nos genes da leptina (LEP) e do receptor de leptina (LEPR) com a obesidade. Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar a influência dos polimorfismos G2548A, no gene LEP, e Gln223Arg, no gene LEPR, em parâmetros antropométricos, perfil lipídico, glicemia e no consumo alimentar de carboidratos. Metodologia: As participantes foram avaliadas por uma anamnese no Ambulatório de Nutrição da Univates, onde os dados do consumo alimentar foram obtidos pelo recordatório de 24 horas e calculados pelo programa Dietwin Profissional (versão 2008). As medidas antropométricas avaliadas foram: peso, altura, circunferência da cintura, circunferência do quadril, e a composição corporal por bioimpedância. Foi calculado o IMC e RCQ. Amostras de sangue foram coletadas para extração de DNA e para análise de parâmetros laboratoriais para avaliação do perfil lipídico (CT, HDL, TG) e glicose jejum. Os polimorfismos dos genes LEP (rs7799039) e LEPR (rs1177101) foram genotipados pela técnica de discriminação alélica TaqMan (Applied Biosystems). Resultados: A amostra foi composta por 378 mulheres saudáveis, com idade média de 25,1 anos (±6,2). Não foram detectadas associações significativas dos polimorfismos investigados com o perfil lipídico, a glicose jejum e o consumo de carboidratos. O genótipo AA do polimorfismo G2548A foi associado com o aumento de peso, IMC, RCQ, CC, e % de gordura corporal. O genótipo GG do polimorfismo Gln223Arg foi associado com o aumento de IMC. Conclusão: Os alelos de risco dos dois polimorfismos foram associados com o aumento das medidas antropométricas, em indivíduos saudáveis, demonstrando uma possível associação com aumento de risco para obesidade. / Introduction: Genetic and environmental factors are involved in the pathogenesis of obesity. Several studies have demonstrated associations between variants in the leptin (LEP) and in the leptin receptor (LEPR) genes with obesity. Objective: The aim of this study was to investigate the influence of the polymorphisms G2548A, in the LEP gene, and Gln223Arg, in the LEPR gene, on anthropometric parameters, lipid profile, fasting glucose and carbohydrates intake. Methods: Participants were assessed by an interview at the outpatient Nutrition Program at Universidade do Vale do Taquari Univates. Food consumption profile was obtained by the 24-hour recall method and calculated by the Dietwin Professional Program (2008 version). The anthropometric measurements were: weight, height, waist circumference, hip circumference, and fat body composition by bioelectrical impedance. BMI and WHR were calculated. Blood samples were collected for DNA extraction and for the analysis of biochemical parameters (TC, HDL, TG and fasting glucose). The polymorphisms (LEP-rs7799039 and LEPR-rs1177101) were genotyped by allelic discrimination TaqMan (Applied Biosystems). Results: The sample was composed by 378 healthy women with an average age of 25.1 years (± 6.2). No significant associations between the polymorphisms investigated and lipid profile, fasting glucose and carbohydrate intake were detected. The AA genotype of the G2548A polymorphism was associated with increased weight, BMI, WHR, WC, and% body fat. The GG genotype of the Gln223Arg polymorphism was associated with increased BMI. Conclusion: The risk alleles of the two polymorphisms were associated with increased anthropometric measurements in healthy subjects, suggesting a possible association with increased risk for the development of obesity.

A leptina é um componente importante do complexo sistema fisiológico que regula o armazenamento, o equilíbrio e o uso de energia pelo organismo. É descrito na literatura que a concentração plasmática de leptina e/ou a quantidade de mRNA de leptina nos adipócitos, correlacionam-se positivamente com o gênero, a ingesta calórica, o IMC, e a massa de tecido adiposo. A leptina pode aumentar o gasto energético por meio da estimulação nervosa simpática. A ação tecidual da leptina se da através de sua ligação com seu receptor. O receptor de leptina apresenta heterogeneidade na população humana, com naturais ocorrências de polimorfismos que codificam para o aminoácido das posições 109, 223 e 656 entre outros. Acredita-se que mutações no gene do receptor podem modificar sua função e afetar os níveis séricos de leptina na população em geral, sugerindo que este polimorfismo possa contribuir para a correlação da obesidade com a doença cardiovascular associado à atividade nervosa simpática. Neste estudo, avaliamos a relação entre as variantes alélicas do gene do receptor de leptina e mudanças na composição corporal, nas variáveis metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas de mulheres obesas antes e após um programa de treinamento físico e dieta hipocalórica. Como achado principal do nosso estudo, observamos que as pacientes obesas com polimorfismo Gln223Arg/Arg223Arg apresentaram maior massa gorda em comparação ao grupo de mulheres obesas Gln223Gln no período inicial do estudo. Não foram encontradas diferenças nas demais variáveis antropométricas, metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas do códon 223. As variáveis antropométricas, metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas permaneceram semelhantes entre as formas genéticas dos códons 109, 656. Como esperado, a mudança no hábito de vida impactou em algumas das variáveis antropométricas, metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas, porém as variantes genéticas de cada códon não alteraram essas variáveis. A partir dos dados apresentados, podemos dizer que o polimorfismo Gln223Arg/Arg223Arg influencia no aumento de massa gorda em mulheres obesas. Entretanto, após quatro meses de intervenção nos hábitos de vida dessas pacientes, a associação entre o polimorfismo citado e o aumento da massa gorda não se manteve, o que pode ser atribuído à melhora da resistência a ação da leptina, que sabidamente é favorecida por perda de peso, como ocorreu na nossa população / Leptin is an important component of a complex physiological system that contributes to the regulation of the organic energy balance. Leptin plasmatic concentration or mRNA quantities are positive related to gender, caloric intake, BMI and fat mass. Energy expenditure can be altered by leptin action through the nervous sympathetic stimulus. Leptin acts via its specific receptor. These receptor presents heterogeneity in human population, with natural occurrences of polymorphisms that codify to different proteins. Mutations in gene receptor can modify the leptin level and consequently its action. This suggests that the polymorphism of leptin receptor could contribute to the relation of obesity and cardiovascular disease, and the sympathetic nervous system is involved in this process. In this study we evaluate the relation between allelic variants of leptin receptor gene with changes in corporal composition, metabolic, neurovascular and hemodynamic variables in obese women, before and after a life style change program. The main result of this investigation is that the women that carrier a polymorphism in codon 223, with mutation of glicina to arginina presented higher fat mass than the other polymorphisms. There are no differences in the other antropometric, metabolic, neurovascular and hemodynamic variables in this codon. All the studied variables were similar between the genetic forms 109 and 656. As expected, the life style changes positive impact in some of the anthropometric, metabolic, neurovascular and hemodynamic variables, but the allelic variants did not alter these variables. In conclusion, the data presented permit us to say that the Gln223Arg/Arg223Arg polymorphism influences the fat mass gain in obese women. However, after four months of exercise training and diet, this difference in fat mass gain did not keep, wich can be atributted to the improvement in the leptin resistence and the weigh loss, which occurred in our population

A leptina é um componente importante do complexo sistema fisiológico que regula o armazenamento, o equilíbrio e o uso de energia pelo organismo. É descrito na literatura que a concentração plasmática de leptina e/ou a quantidade de mRNA de leptina nos adipócitos, correlacionam-se positivamente com o gênero, a ingesta calórica, o IMC, e a massa de tecido adiposo. A leptina pode aumentar o gasto energético por meio da estimulação nervosa simpática. A ação tecidual da leptina se da através de sua ligação com seu receptor. O receptor de leptina apresenta heterogeneidade na população humana, com naturais ocorrências de polimorfismos que codificam para o aminoácido das posições 109, 223 e 656 entre outros. Acredita-se que mutações no gene do receptor podem modificar sua função e afetar os níveis séricos de leptina na população em geral, sugerindo que este polimorfismo possa contribuir para a correlação da obesidade com a doença cardiovascular associado à atividade nervosa simpática. Neste estudo, avaliamos a relação entre as variantes alélicas do gene do receptor de leptina e mudanças na composição corporal, nas variáveis metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas de mulheres obesas antes e após um programa de treinamento físico e dieta hipocalórica. Como achado principal do nosso estudo, observamos que as pacientes obesas com polimorfismo Gln223Arg/Arg223Arg apresentaram maior massa gorda em comparação ao grupo de mulheres obesas Gln223Gln no período inicial do estudo. Não foram encontradas diferenças nas demais variáveis antropométricas, metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas do códon 223. As variáveis antropométricas, metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas permaneceram semelhantes entre as formas genéticas dos códons 109, 656. Como esperado, a mudança no hábito de vida impactou em algumas das variáveis antropométricas, metabólicas, neurovasculares e hemodinâmicas, porém as variantes genéticas de cada códon não alteraram essas variáveis. A partir dos dados apresentados, podemos dizer que o polimorfismo Gln223Arg/Arg223Arg influencia no aumento de massa gorda em mulheres obesas. Entretanto, após quatro meses de intervenção nos hábitos de vida dessas pacientes, a associação entre o polimorfismo citado e o aumento da massa gorda não se manteve, o que pode ser atribuído à melhora da resistência a ação da leptina, que sabidamente é favorecida por perda de peso, como ocorreu na nossa população / Leptin is an important component of a complex physiological system that contributes to the regulation of the organic energy balance. Leptin plasmatic concentration or mRNA quantities are positive related to gender, caloric intake, BMI and fat mass. Energy expenditure can be altered by leptin action through the nervous sympathetic stimulus. Leptin acts via its specific receptor. These receptor presents heterogeneity in human population, with natural occurrences of polymorphisms that codify to different proteins. Mutations in gene receptor can modify the leptin level and consequently its action. This suggests that the polymorphism of leptin receptor could contribute to the relation of obesity and cardiovascular disease, and the sympathetic nervous system is involved in this process. In this study we evaluate the relation between allelic variants of leptin receptor gene with changes in corporal composition, metabolic, neurovascular and hemodynamic variables in obese women, before and after a life style change program. The main result of this investigation is that the women that carrier a polymorphism in codon 223, with mutation of glicina to arginina presented higher fat mass than the other polymorphisms. There are no differences in the other antropometric, metabolic, neurovascular and hemodynamic variables in this codon. All the studied variables were similar between the genetic forms 109 and 656. As expected, the life style changes positive impact in some of the anthropometric, metabolic, neurovascular and hemodynamic variables, but the allelic variants did not alter these variables. In conclusion, the data presented permit us to say that the Gln223Arg/Arg223Arg polymorphism influences the fat mass gain in obese women. However, after four months of exercise training and diet, this difference in fat mass gain did not keep, wich can be atributted to the improvement in the leptin resistence and the weigh loss, which occurred in our population

Humanos e camundongos deficientes tanto na produção da leptina quanto na expressão do seu receptor (LepR) são obesos, hiperfágicos e inférteis; o tratamento com reposição de leptina em indivíduos deficientes na produção desse hormônio garante que haja redução no peso corporal, seja retomada ciclicidade estral e a fertilidade. Ainda, o tratamento com leptina em fêmeas prépúberes normais acelera o início da puberdade, sugerindo que esse hormônio tem papel crucial no tempo de início da puberdade. Ao relacionarmos leptina e puberdade, uma informação interessante é que, neurônios que secretam hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH), localizados na área pré-óptica medial (MPO) não coexpressam o LepR. Além disso, embora poucos neurônios que expressam o RNAm que codifica o gene Kiss1 do núcleo arqueado sejam responsivos à leptina, a sinalização da leptina nesses neurônios só ocorre após a puberdade e, a inativação do LepR nesses neurônios não afeta a reprodução. Por esses motivos, acredita-se que a leptina atue de forma indireta no controle da reprodução. Além dos núcleos MPO e ARH, o núcleo pré-mamilar ventral (PMv), que apresenta uma parcela de neurônios que expressam o LepR, também está envolvido na regulação neuroendócrina da reprodução. Estudos anteriores demonstraram que alterações nos níveis circulantes de estrógeno alteram características biofísicas e morfológicas de neurônios que expressam o gene Kiss1. Embora a leptina seja fundamental na maturação sexual não sabemos se os neurônios que expressam o LepR são suscetíveis a essas alterações durante a maturação sexual. Portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar se neurônios LepR presentes nos núcleos MPO, ARH e PMv sofrem alterações morfológicas durante a maturação sexual e mediante ausência de hormônios gonadais. Foram utilizados camundongos (fêmeas) LepR-Cre tdTomato, divididas em 4 grupos experimentais: pré-púberes, púberes, adultas e ovarectomizadas (OVX). A maturação sexual foi avaliada, para determinação do dia da abertura vaginal e primeiro estro. Nas idades específicas os encéfalos foram processados e coletados para posterior quantificação e aferição da área de superfície de neurônios LepR. Realizamos, também, imunoistoquímica de fluorescência para pSTAT3 para quantificar o percentual de neurônios responsivos à leptina. Os resultados obtidos demostraram que ocorreu um aumento no número de neurônios LepR no núcleo ARH com o avanço da idade. Porém, não houveram diferenças significativas quanto ao número de neurônios nos núcleos MPO e PMv. Também não observamos alterações na área de superfície nos núcleos analisados. Em relação a ativação de neurônios LepR via marcação de pSTAT3, o núcleo MPO apresentou uma diminuição no percentual de neurônios ativos quando comparamos os grupos pré-púberes com os grupos adulta e OVX. O oposto aconteceu no núcleo ARH onde obtivemos um aumento desse percentual com o avanço da idade. Em ambos os núcleos (MPO e ARH) o percentual de neurônios LepR ativados no grupo OVX foi estatisticamente semelhante ao grupo adulta, diferindo somente do grupo pré-púbere. O núcleo PMv não apresentou diferenças estatísticas entre os grupos analisados. Nossos dados sugerem que estrógeno e leptina podem interagir de formas distintas em diferentes regiões hipotalâmicas. / Leptin or leptin receptor (LepR) deficient humans and mice are obese, hyperphagic and infertile; leptin replacement in leptin deficient subjects is capable of reducing body mass and restores estrous cyclicity and fertility. In addition, leptin accelerates the onset of puberty in normal female mice, suggesting that this hormone plays a critical role in the timing of puberty. Interestingly, the gonadotropin releasing hormone neurons, located at the medial pre-optic área (MPO) does not coexpress the LepR. Although few kisspeptin neurons in the arcuate nucleus (ARH; 15%) are responsive to leptin, leptin signaling in kisspeptin neurons arises only after pubertal development and leptin receptor inactivation in kisspeptin cells did not affect reproduction. Therefore, the effects of leptin on reproduction is believed to occur indirectly. In addition to ARH and MPO, the ventral premammillary nucleus (PMv) is also involved in the neuroendocrine regulation of reproduction and a fraction of PMv neurons coexpress LepR. Curiously, previous studies have shown that changing levels of estrogen alters the biophysical properties and morphology of hypothalamic neurons, such as expressing the ones expressing the Kiss1 gene. Although leptin has an important role on the puberty onset, it is not known whether LepR-expressing neurons are also susceptible to changes in their morphology during sexual maturation. Therefore, our goal was to investigate whether LepR-expressing neurons in the MPO, ARH and PMv nuclei are susceptible to cell morphology modifications throughout the sexual maturation and after manipulation of estrogen levels. LepR-Cre tdTomato mice (females) were divided into 4 experimental groups: prepubertal, pubertal, adult and ovarectomized (OVX). The sexual maturation was evaluated to determine the day of vaginal opening and first estrus. At specific ages the brains were processed and collected for further quantification and measurement of the surface area of LepR neurons. We also performed fluorescence immunohistochemistry for pSTAT3 to quantify the percentage of neurons responsive to leptin. The results showed that there is an increase in the number of LepR neurons in the ARH nucleus with advancing age. However, there were no significant differences in the number of neurons in the MPO and PMv nuclei. We also did not observe changes in the surface area in the nuclei analyzed. In relation to the activation of LepR neurons via pSTAT3 labeling, the MPO nucleus showed a decrease in the percentage of active neurons when comparing the prepubertal groups with the adult and OVX groups. The opposite happened in the ARH nucleus where we had an increase of this percentage with the advancement of the age. In both nuclei (MPO and ARH) the percentage of LepR neurons activated the OVX group was statistically similar to the adult group, differing only from the pre-pubertal group. The PMv nucleus did not present statistical differences between the analyzed groups. Our data suggest that estrogen and leptin may interact differently in different hypothalamic regions.

O câncer de próstata é o tumor não cutâneo mais comum entre homens e responsável pela segunda maior mortalidade entre os tumores neste sexo. Diferentes métodos são utilizados com o objetivo de determinar o prognóstico do paciente portador de câncer de próstata, contudo existe grande heterogeneidade quando estes são usados individualmente. A leptina é um hormônio peptídico envolvido na regulação da ingestão alimentar, do metabolismo, do gasto energético, além de função neuroendócrina. Este hormônio parece estar envolvido na patogênese de alguns tipos de tumores, inclusive os adenocarcinomas de próstata. Até o presente não se tem certeza se a leptina e seu receptor possam ser utilizados como fatores prognósticos no cancer de próstata. O objetivo do trabalho foi correlacionar os perfis de imunomarcação da leptina e seu receptor em adenocarcinomas de próstata com diferentes fatores prognósticos e comparar as análises de imunomarcação da leptina e seu receptor em adenocarcinomas de próstata por métodos semiquantitativos e quantitativos (morfometria). Foram analisadas 532 peças cirúrgicas de prostatectomias radicais por câncer prostático. A partir destas amostras, após estudo histopatológico, foi montado um arranjo de matriz tecidual, contendo fragmentos de áreas tumorais e não tumorais (peritumorais) destas amostras. Estas foram imunomarcadas com anticorpos antileptina e antirreceptor de leptina. Análises subjetivas (feitas por dois observadores) e objetivas (através da contagem de pontos) foram realizadas em cada uma das imunomarcações. Estes resultados foram comparados e correlacionados com os seguintes fatores prognósticos: invasão perineural, embolização neoplásica vascular, comprometimento bilateral da próstata, invasão das vesículas seminais, comprometimento de margem vesical, de margem uretral e de margem cirúrgica de ressecção. Houve diferença significativa entre as análises subjetivas dos dois observadores e, portanto, estas não foram utilizadas para as demais comparações. Em relação às análises objetivas, foi verificado que a expressão do receptor de leptina estava diminuída nos tumores com comprometimento de margem cirúrgica, de margem uretral e de vesículas seminais. Ainda foi observado correlação entre a expressão desse receptor e o somátório dos fatores prognósticos analisados. Para as demais análises não foi verificada diferença significativa. Métodos semiquantitativos podem ter grande variação e devem ser preteridos em relação a métodos quantitativos para as análises realizadas neste estudo. Nem a leptina nem o seu receptor apresentaram alterações de sua expressão em amostras neoplásicas de próstata quando comparado àquelas não neoplásicas. O receptor de leptina apresentou uma diminuição da sua expressão em tumores com margem cirúrgica comprometida, margem uretral comprometida e com vesículas seminais comprometidas. Houve correlação negativa entre o percentual de área imunomarcada com o anticorpo antirreceptor de leptina e o somatório dos fatores prognósticos analisados. / Prostate cancer is the most common non-cutaneous tumor among men and accounted for the second highest mortality rate among tumors in this sex. Different methods are used to determine the prognosis of patients with prostate cancer, yet there is great heterogeneity when they are used individually. Leptin is a peptide hormone, involved in the regulation of food intake, metabolism, energy expenditure, and neuroendocrine function. This hormone appears to be involved in the pathogenesis of some types of tumors, including prostate adenocarcinomas. Up to the present, it is uncertain if leptin and its receptor may be used as prognostic factors in prostate cancer. The objective of this study was correlate the profiles of immunostaining of leptin and its receptor in prostate adenocarcinomas with different prognostic factors and compare the analysis of immunostaining of leptin and its receptor in prostate adenocarcinomas by semi quantitative and quantitative methods (morphometry). A total of 532 surgical specimens from radical prostatectomies from prostate cancer had been studied. After pathological examination, these samples were included in a tissue microarray containing fragments of tumoral and non-tumoral areas (peritumoral areas). These were immunostained with antibodies antileptin and antileptin receptor. Subjective analysis (made by two observers) and objective (by counting points) were performed on each sample. These results were compared and correlated with the following prognostic factors: perineural invasion, neoplasic vascular embolization, bilateral involvement of the prostate, seminal vesicle invasion, involvement of vesical margin, involvement of urethral margin and involvement of resection surgical margin. There were significant differences between subjective analyses of the two observers, and, therefore, they were not used for other comparisons. Regarding the objective analysis, it was found that leptin receptor expression was reduced in tumors with involvement of the surgical margin, urethral margin and seminal vesicles invasion. Further, there were correlation between the expression of this receptor and the sum of prognostic factors. For the other analyses, it was not observed any significant difference. Semi quantitative methods can have great variation and should be passed over in relation to quantitative methods for the analysis performed in this study. Neither leptin nor its receptor exhibited changes in their expression in neoplastic prostatic samples compared to those that are not neoplastic. The leptin receptor showed a decreased expression in tumors with positive surgical margin, positive urethral margin and involvement of seminal vesicles. There were a negative correlation between the percentage of immunostaining area with antibody antileptin receptor and the sum of prognostic factors.

O câncer de próstata é o tumor não cutâneo mais comum entre homens e responsável pela segunda maior mortalidade entre os tumores neste sexo. Diferentes métodos são utilizados com o objetivo de determinar o prognóstico do paciente portador de câncer de próstata, contudo existe grande heterogeneidade quando estes são usados individualmente. A leptina é um hormônio peptídico envolvido na regulação da ingestão alimentar, do metabolismo, do gasto energético, além de função neuroendócrina. Este hormônio parece estar envolvido na patogênese de alguns tipos de tumores, inclusive os adenocarcinomas de próstata. Até o presente não se tem certeza se a leptina e seu receptor possam ser utilizados como fatores prognósticos no cancer de próstata. O objetivo do trabalho foi correlacionar os perfis de imunomarcação da leptina e seu receptor em adenocarcinomas de próstata com diferentes fatores prognósticos e comparar as análises de imunomarcação da leptina e seu receptor em adenocarcinomas de próstata por métodos semiquantitativos e quantitativos (morfometria). Foram analisadas 532 peças cirúrgicas de prostatectomias radicais por câncer prostático. A partir destas amostras, após estudo histopatológico, foi montado um arranjo de matriz tecidual, contendo fragmentos de áreas tumorais e não tumorais (peritumorais) destas amostras. Estas foram imunomarcadas com anticorpos antileptina e antirreceptor de leptina. Análises subjetivas (feitas por dois observadores) e objetivas (através da contagem de pontos) foram realizadas em cada uma das imunomarcações. Estes resultados foram comparados e correlacionados com os seguintes fatores prognósticos: invasão perineural, embolização neoplásica vascular, comprometimento bilateral da próstata, invasão das vesículas seminais, comprometimento de margem vesical, de margem uretral e de margem cirúrgica de ressecção. Houve diferença significativa entre as análises subjetivas dos dois observadores e, portanto, estas não foram utilizadas para as demais comparações. Em relação às análises objetivas, foi verificado que a expressão do receptor de leptina estava diminuída nos tumores com comprometimento de margem cirúrgica, de margem uretral e de vesículas seminais. Ainda foi observado correlação entre a expressão desse receptor e o somátório dos fatores prognósticos analisados. Para as demais análises não foi verificada diferença significativa. Métodos semiquantitativos podem ter grande variação e devem ser preteridos em relação a métodos quantitativos para as análises realizadas neste estudo. Nem a leptina nem o seu receptor apresentaram alterações de sua expressão em amostras neoplásicas de próstata quando comparado àquelas não neoplásicas. O receptor de leptina apresentou uma diminuição da sua expressão em tumores com margem cirúrgica comprometida, margem uretral comprometida e com vesículas seminais comprometidas. Houve correlação negativa entre o percentual de área imunomarcada com o anticorpo antirreceptor de leptina e o somatório dos fatores prognósticos analisados. / Prostate cancer is the most common non-cutaneous tumor among men and accounted for the second highest mortality rate among tumors in this sex. Different methods are used to determine the prognosis of patients with prostate cancer, yet there is great heterogeneity when they are used individually. Leptin is a peptide hormone, involved in the regulation of food intake, metabolism, energy expenditure, and neuroendocrine function. This hormone appears to be involved in the pathogenesis of some types of tumors, including prostate adenocarcinomas. Up to the present, it is uncertain if leptin and its receptor may be used as prognostic factors in prostate cancer. The objective of this study was correlate the profiles of immunostaining of leptin and its receptor in prostate adenocarcinomas with different prognostic factors and compare the analysis of immunostaining of leptin and its receptor in prostate adenocarcinomas by semi quantitative and quantitative methods (morphometry). A total of 532 surgical specimens from radical prostatectomies from prostate cancer had been studied. After pathological examination, these samples were included in a tissue microarray containing fragments of tumoral and non-tumoral areas (peritumoral areas). These were immunostained with antibodies antileptin and antileptin receptor. Subjective analysis (made by two observers) and objective (by counting points) were performed on each sample. These results were compared and correlated with the following prognostic factors: perineural invasion, neoplasic vascular embolization, bilateral involvement of the prostate, seminal vesicle invasion, involvement of vesical margin, involvement of urethral margin and involvement of resection surgical margin. There were significant differences between subjective analyses of the two observers, and, therefore, they were not used for other comparisons. Regarding the objective analysis, it was found that leptin receptor expression was reduced in tumors with involvement of the surgical margin, urethral margin and seminal vesicles invasion. Further, there were correlation between the expression of this receptor and the sum of prognostic factors. For the other analyses, it was not observed any significant difference. Semi quantitative methods can have great variation and should be passed over in relation to quantitative methods for the analysis performed in this study. Neither leptin nor its receptor exhibited changes in their expression in neoplastic prostatic samples compared to those that are not neoplastic. The leptin receptor showed a decreased expression in tumors with positive surgical margin, positive urethral margin and involvement of seminal vesicles. There were a negative correlation between the percentage of immunostaining area with antibody antileptin receptor and the sum of prognostic factors.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração de leptina no lobo ventral da próstata de ratos adultos. Vinte ratos Wistar machos e adultos foram divididos em 2 grupos: L - animais foram injetados com 50 μL diária de leptina (8 μg / 100 g PC, subcutânea) durante quatro dias e C - animais receberam o mesmo volume de solução salina. Perfil lipídico e níveis séricos de testosterona foram avaliados. O lobo ventral da próstata foi processado para análise histomorfométrica. Expressão dos genes da aromatase, receptor de andrógeno, receptores de estrógeno (α e β) e as isoformas dos receptores de leptina longa (Ob-Rb) e curta (Ob-Ra) foram avaliados por PCR em tempo real. Proliferação celular foi avaliada por imuno-histoquímica com PCNA. Os dados foram expressos como média  erro padrão e analisados pelo teste t de Student. Níveis séricos de colesterol aumentaram (C = 39,7 4,2; L = 55,2 4,2, mg / dL, P ≤ 0,02) e de testosterona (C = 1,6 0,43; L = 0,6 0,15, ng / dL, P ≤ 0,03) diminuíram no grupo L. A análise histomorfométrica mostrou uma redução na densidade de células (C = 8868 242; L = 8.211 210, mm2; P ≤ 0,04), na área total (C = 0,24 0,026; L = 0,10 0,009, mm2; P ≤ 0,001) e na área interna dos ácinos (C = 0,16 0,009; L = 0,08 0,006, mm2; P ≤ 0,0002). Por outro lado, houve um aumento na altura do epitélio (C = 17,3 0,3; L = 22,8 0,2 m, P ≤ 0,0001) e no número de ácinos (C = 7,0 0,2; L = 8,7 0,1, mm2; P ≤ 0,0002). As análises histomorfométrica juntamente com os resultados imuno-histoquímicos para PCNA sugerem que a leptina aumenta a proliferação celular. Em relação à expressão gênica, o tratamento de leptina aumentou a expressão de todos os genes, mas ER-α, em mais de 200 vezes em comparação com a expressão no grupo C. Em conclusão, neste trabalho mostramos que a leptina tem um efeito direto sobre a próstata de ratos adultos levando a um aumento na proliferação celular e na expressão gênica da aromatase, receptor de androgênio, nas isoformas dos receptores de leptina e receptores de estrogênios alfa e beta que são importantes para a fisiologia normal do tecido prostático / The aim of this study was to evaluate the effect of leptin administration on the ventral prostate lobe of adult rat. Twenty adult male rats were divided into 2 groups: L - animals were daily injected with 50 μL of leptin (8 g / 100 g BW, subcutaneous) for four days and C -animals received the same volume of saline solution. Lipid profile and testosterone serum levels were evaluated. The prostate ventral lobe was processed for histomorphometric analysis. Gene expression of aromatase, androgen receptor, leptin and estrogen receptors isoforms was evaluated by real-time PCR. Cell proliferation was evaluated by PCNA immunohistochemistry. Data were expressed as mean  standard error and analyzed by students t-test. Serum levels of cholesterol (C = 39.7 4.2; L = 55.2 4.2, mg / dL; P ≤ 0.02) increased and testosterone (C = 1.6 0.43; L = 0.6 0.15, ng / dL; P ≤ 0.03) decreased in L group. The histomorphometric analysis showed a reduction in cell density (C = 8868 242; L = 8211 210, mm2; P ≤ 0.04), in total (C = 0.24 0.026; L = 0.10 0.009, mm2; P ≤ 0.001) and in the internal acini areas (C = 0.16 0.009; L = 0.08 0.006, mm2; P ≤ 0.0002). On the other hand, there was an increase in the epithelial height (C = 17.3 0.3; L = 22.8 0.2, m; P ≤ 0.0001) and in the number of acini (C = 7.0 0.2; L = 8.7 0.1, mm2; P ≤ 0.0002). The histomorphometric analyses together with PCNA immunohistochemistry results suggest that leptin increases cell proliferation. In relation to the gene expression, leptin treatment increased the expression of all genes, but ER-α, in more than 200 times compared to the expression in C group. In conclusion, in this paper we showed that leptin has a direct effect on the prostate gland of adult rats leading to an increase in proliferation and in the gene expression of aromatase, androgen, leptin and estrogen receptors isoforms that are important for the physiology of the prostate gland.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração de leptina no lobo ventral da próstata de ratos adultos. Vinte ratos Wistar machos e adultos foram divididos em 2 grupos: L - animais foram injetados com 50 μL diária de leptina (8 μg / 100 g PC, subcutânea) durante quatro dias e C - animais receberam o mesmo volume de solução salina. Perfil lipídico e níveis séricos de testosterona foram avaliados. O lobo ventral da próstata foi processado para análise histomorfométrica. Expressão dos genes da aromatase, receptor de andrógeno, receptores de estrógeno (α e β) e as isoformas dos receptores de leptina longa (Ob-Rb) e curta (Ob-Ra) foram avaliados por PCR em tempo real. Proliferação celular foi avaliada por imuno-histoquímica com PCNA. Os dados foram expressos como média  erro padrão e analisados pelo teste t de Student. Níveis séricos de colesterol aumentaram (C = 39,7 4,2; L = 55,2 4,2, mg / dL, P ≤ 0,02) e de testosterona (C = 1,6 0,43; L = 0,6 0,15, ng / dL, P ≤ 0,03) diminuíram no grupo L. A análise histomorfométrica mostrou uma redução na densidade de células (C = 8868 242; L = 8.211 210, mm2; P ≤ 0,04), na área total (C = 0,24 0,026; L = 0,10 0,009, mm2; P ≤ 0,001) e na área interna dos ácinos (C = 0,16 0,009; L = 0,08 0,006, mm2; P ≤ 0,0002). Por outro lado, houve um aumento na altura do epitélio (C = 17,3 0,3; L = 22,8 0,2 m, P ≤ 0,0001) e no número de ácinos (C = 7,0 0,2; L = 8,7 0,1, mm2; P ≤ 0,0002). As análises histomorfométrica juntamente com os resultados imuno-histoquímicos para PCNA sugerem que a leptina aumenta a proliferação celular. Em relação à expressão gênica, o tratamento de leptina aumentou a expressão de todos os genes, mas ER-α, em mais de 200 vezes em comparação com a expressão no grupo C. Em conclusão, neste trabalho mostramos que a leptina tem um efeito direto sobre a próstata de ratos adultos levando a um aumento na proliferação celular e na expressão gênica da aromatase, receptor de androgênio, nas isoformas dos receptores de leptina e receptores de estrogênios alfa e beta que são importantes para a fisiologia normal do tecido prostático / The aim of this study was to evaluate the effect of leptin administration on the ventral prostate lobe of adult rat. Twenty adult male rats were divided into 2 groups: L - animals were daily injected with 50 μL of leptin (8 g / 100 g BW, subcutaneous) for four days and C -animals received the same volume of saline solution. Lipid profile and testosterone serum levels were evaluated. The prostate ventral lobe was processed for histomorphometric analysis. Gene expression of aromatase, androgen receptor, leptin and estrogen receptors isoforms was evaluated by real-time PCR. Cell proliferation was evaluated by PCNA immunohistochemistry. Data were expressed as mean  standard error and analyzed by students t-test. Serum levels of cholesterol (C = 39.7 4.2; L = 55.2 4.2, mg / dL; P ≤ 0.02) increased and testosterone (C = 1.6 0.43; L = 0.6 0.15, ng / dL; P ≤ 0.03) decreased in L group. The histomorphometric analysis showed a reduction in cell density (C = 8868 242; L = 8211 210, mm2; P ≤ 0.04), in total (C = 0.24 0.026; L = 0.10 0.009, mm2; P ≤ 0.001) and in the internal acini areas (C = 0.16 0.009; L = 0.08 0.006, mm2; P ≤ 0.0002). On the other hand, there was an increase in the epithelial height (C = 17.3 0.3; L = 22.8 0.2, m; P ≤ 0.0001) and in the number of acini (C = 7.0 0.2; L = 8.7 0.1, mm2; P ≤ 0.0002). The histomorphometric analyses together with PCNA immunohistochemistry results suggest that leptin increases cell proliferation. In relation to the gene expression, leptin treatment increased the expression of all genes, but ER-α, in more than 200 times compared to the expression in C group. In conclusion, in this paper we showed that leptin has a direct effect on the prostate gland of adult rats leading to an increase in proliferation and in the gene expression of aromatase, androgen, leptin and estrogen receptors isoforms that are important for the physiology of the prostate gland.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_fabiana_moreira.pdf: 1442913 bytes, checksum: 613ed46b361d675bfb046a7b74462171 (MD5) Previous issue date: 2011-11-22 / Leptin is a multifunctional peptidic hormone, primarily produced by the adipose tissue, which has receptors (Ob-Rs) in reproductive organs, hypothalamus and hypophysis, acting in the appetite regulation and energetic expenditure, potentially influencing the expression of the reproductive function, at puberty and lactation. Reproductive failure are the main causes for female culling, representing 30% to 40%,of the total female culling. Thus, post-mortem evaluation of the genital organs at slaughter may have an important diagnostic value, helping on the identification of the stage of female`s estrous cycle and aiding the interpretation of reproductive abnormalities. Its long form receptor (OBR-b) performs signal transduction in several cell types via mitogen- activated protein kinases (MAPK) cascade, such as ERK 1/2 and p38. The first stage of this thesis is aimed to evaluate the presence of leptin and MPAK in oocites of pubertal sows and prepubertal gilts. Ovaries from 10 pubertal sows and 10 prepubertal gilts were collected at a slaughterhouse. Slides were analyzed for the presence of oocites included in primordial/primary (OIPF), secondary (OISF) and tertiary follicles (OITF). Immunohistochemistry (IHC) was performed with polyclonal antibodies anti-leptin and anti-phospho-MAPK (ERK 1/2 and p38). The second stage involved 28 pubertal sows and the analyses were performed in hypothalamic neurons, endometrial glands and oocytes. For IHC, the antibodies were polyclonal anti-leptin and anti-leptin receptor. Responses were compared with reproductive data registered for each female. All images in both stages were analyzed by 16-Bit Histogram application from Image J® software. Immunolabeling for leptin and activated ERK 1/2 MAPK were more intense in sows oocytes (p ≤ 0.05), while the immunolabeling for activated p38 MAPK was more intense in gilts oocytes (p = 0.05). In sows, OIPF were more intensely marked for leptin and p38 MAPK (p <0.05), on the other hand, for gilts there was no difference in the marking of follicular oocytes from the analyzed categories. Hypothalamic neurons were more intensely marked in the sows culled by reproductive problems (p <0.05). The hypothalamus, uterus and oocytes of luteal or follicular phase sows showed more intense immunolabeling for leptin and OBR-b than the females with cystic ovaries. The immunolabeling for leptin was more pronounced in the hypothalamus and uterus of sows from parity order 2 group (PO 2-4) (p <0.05). These results demonstrate that leptin may be a marker for oocyte competence. Also, cyclic females having PO 2-4 presented more intense leptin immunolabeling in the hypothalamus and uterus and for OBR-b in the oocyte and uterus. The OBR-b immunolabeling was more pronounced in primiparous and multiparous females than for nulliparous. Therefore, immunolabeling for leptin and OBR-b can be a marker for reproductive performance in swine females. / A leptina é um hormônio peptídico multifuncional, produzido primariamente pelo tecido adiposo, com receptores (Ob-Rs) presentes em órgãos reprodutivos, hipotálamo e hipófise, que atua na regulação do apetite e no gasto energético, com potencial influência sobre a expressão da função reprodutiva, na puberdade e após a lactação. Desordens reprodutivas são as causas mais comuns, atribuídas ao total dos descartes, entre 30 e 40%. Considerando a alta proporção de descartes por estes problemas, a avaliação dos órgãos genitais no abate tem importante valor diagnóstico, auxiliando na identificação do estágio do ciclo estral da fêmea e na interpretação de possíveis anormalidades reprodutivas. O seu receptor de forma longa (OBR-b) realiza transdução de sinal em diversos tipos celulares via cascata das proteínas quinases ativadas por mitógenos (MAPK), tais como ERK 1/2 e p38. A primeira etapa do trabalho teve por objetivo avaliar a presença da leptina, e das MAPK nos oócitos de fêmeas suínas púberes e pré-púberes. Envolveu ovários de 10 fêmeas pré-púberes e 10 púberes coletados no abate e lâminas foram analisadas de oócitos inclusos em folículos primordiais/primários (OIFP), secundários (OIFS) e terciários (OIFT). Para a técnica de imuno-histoquímica (IHQ) os anticorpos policlonais instilados foram anti-leptina, anti-phospho- MAPK (ERK 1/2 e p38). A segunda etapa envolveu 28 porcas púberes descartadas, das quais foram analisados os neurônios do hipotálamo, glândulas endometriais e oócitos. Para a IHQ foram utilizados anticorpos policlonais anti-leptina e anti-receptor da leptina e objetivou comparar as respostas com os dados produtivos e reprodutivos a partir do registro de cada fêmea. Em ambas as etapas de trabalho foram utilizadas as modas obtidas pelo aplicativo 16 Bit-Histograma do software Image J®. A imunomarcação da leptina e a presença de ERK 1/2 ativada MAPK foram mais intensas em oócitos de porcas (p≤0,05), enquanto que a marcação para p38 MAPK ativada foi mais intensa em oócitos de leitoas (p=0,05). Em porcas, os OIFP estavam mais intensamente marcados para a leptina e p38 MAPK (p<0,05), mas para leitoas não foi observada diferença na marcação dos oócitos independente do estádio folicular. No hipotálamo a imunomarcação para a leptina foi mais intensa nas porcas descartadas por problemas reprodutivos (p<0,05). O hipotálamo, útero e oócitos das porcas que estavam na fase lútea ou fase folicular apresentaram imunomarcação para leptina e OBR-b mais acentuada que naquelas que possuíam cistos ovarianos. A imunomarcação para a leptina foi mais acentuada no hipotálamo e útero daquelas porcas do grupo ordem de parto 2 (OP 2-4) (p<0,05). Estes resultados demonstram que a leptina pode ser um dos marcadores para competência oocitária. Além disso, pode também ser observado que fêmeas cíclicas com OP 2-4 partos apresentam imunomarcação mais intensa para leptina no hipotálamo e útero, e OBR-b nos oócitos e útero. O OBR-b obteve marcação mais acentuada em fêmeas primíparas e multíparas, que nulíparas. Portanto, a imunomarcação para leptina e OBR-b podem ser um marcador de sinalização reprodutivo em fêmeas suínas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-27Bitstream added on 2014-06-13T21:01:32Z : No. of bitstreams: 1 coutinho_gf_dr_rcla.pdf: 799632 bytes, checksum: 0618f816237a48a51267af7fec68ad30 (MD5) / A menopausa é um advento na vida da mulher que se caracteriza por alterações antropométricas, metabólicas e hemodinâmicas e que culmina com a predisposição do aparecimento ou agravamento de diversas doenças. O exercício físico aeróbio é considerado uma importante estratégia por promover melhora na função cardiovascular, respiratória e metabólica. Nenhum estudo avaliou a influência do exercício físico intervalado sobre os níveis de NO, receptor de leptina e pressões respiratórias em mulheres na menopausa. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do treinamento físico aeróbio intervalado nos níveis plasmáticos do receptor solúvel de leptina (Rb-e) e nitrito/nitrato sua correlação com a pressão arterial em mulheres no climatério. Participaram deste estudo, 23 mulheres (55±5 anos) treinadas por 12 semanas, frequência de 3 vezes por semana, duração de 30minutos, com intensidade entre 60% a 80% da frequência cardíaca de reserva. Medidas antropométricas (IMC e CA), cardio-respiratórias (teste de capacidade aeróbia e aferições da pressão arterial e respiratória) e bioquímicas dos níveis plasmáticos do receptor de leptina e nitrato/nitrito foram realizadas. Nossos resultados mostram que as mulheres no climatério apresentaram: reduções significativas da circunferência abdominal (3,8%) e redução de 6,7% na pressão arterial diastólica. Observamos também aumento no VO2max.,(25,1+0,8 para 26,5+0,9ml/kg/min) e nas pressões expiratória e inspiratória (11 e 20%, respectivamente). De maneira similar, tanto os níveis plasmáticos do receptor de leptina (basal: 47,2+3,5 TR: 54,1+ 3,6ng/ml) quando de nitrito/nitrato (55%) foram aumentados pelo treinamento físico aeróbio intervalado por 3 meses. Em nosso estudo, podemos concluir que o exercício físico aeróbio intervalado por 3 meses promoveu aumento na concentração plasmática... / Menopause is characterized by a variety of alterations including weight gain and increase in the incidence of cardio-metabolic disorders in women life. Although its is well known that physical exercise plays an important role in preventing and/or reducing the deleterious effect of cardio-metabolic diseases, no studies have been investigated the effect of intermittent aerobic physical exercise on the plasma soluble leptin receptor, nitrite/nitrato levels, lung function in postmenopausal women. Therefore, the aim of this work was to evaluate the effect of intermittent aerobic physical training for three months on the plasma soluble leptin receptor and nitrite/nitrato levels and its relationship with pulmonary function and blood pressure in postmenopausal women. Twenty-three volunteers were enrolled in the training program, 3 days/week, 30 minutes, during 3 months. The range of the training intensity was from 60 to 80 % of reserve heart rate. Anthropometric, cardio-respiratory and biochemical parameters were evaluated at the basal and after 3 months of exercise training. Our findings show that intermittent exercise training promotes a significant decrease in the waist circumference (3.8%) as well as diastolic blood pressure (6.7%). An increase in both VO2 max (basal: 25.1+0.8 Trained: 26.5+0.9 ml/kg/min) and respiratory function (Insp: 11 and exp: 20%). Similarly, both plasma soluble leptin receptor (basal: 47.2+3.5 TR: 54.1+ 3.6 ng/ml) as well as nitrite/nitrato levels were increased after exercise training (55%) in postmenopausal women. Therefore, our findings show that intermittent aerobic training during 3 months promoted beneficial effects on the cardiovascular function that was positively associated with increase in soluble leptin receptor and nitrie/nitrato levels in postmenopausal women. Furthermore, our data suggest that plasma soluble leptin receptor might be a marker for the beneficial effect of interval exercise training