Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T20:15:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brenelli_SigisfredoLuis_D.pdf: 5955570 bytes, checksum: 87f8a69269517bdc296cc81132a307a0 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A insulina estimula a autofosforilação do receptor, ativando a capacidade tirosina quinase deste, resultando em fosforilação do substrato I do receptor de insulina. O IRS-l fosforilado liga-se à enzima fosfatidilinositol 3-quinase (PI 3-quinase), ativando-a. Nos últimos anos, demonstrou-se que essas etapas iniciais da ação insulínica apresentam regulação tecido-específica em diferentes situações fisiopatológicas. Tais estudos, realizados em tecido muscular, hepático e adiposo, não foram efetuados em tecido renal. Assim, o objetivo do presente trabalho foi investigar os níveis e grau de fosforilação do receptor de insulina e do IRS-l, bem como a associação deste com a PI 3-quinase em tecido renal. Estes experimentos foram realizados em situações de resistência à insulina com hiperinsulinemia (ratos senis com vinte meses) ou hipoinsulinemia (ratos com diabetes induzido pela estreptozotocina e em jejum prolongado por 72 horas) e, em situações de crescimento renal (diabetes e hipertrofia contralateral compensatória secundária após o 2°, 7° e 28° dia da uninefrectomia). A metodologia utilizada envolveu infusão de insulina ou solução salina 0,9 % na vela cava inferior, sendo retirados fragmentos do tecido renal, para posterior imunopreciptação e "immunoblotting" com anticorpo antifosfotirosina, antilR, antiIRS-1 e antiPI3-quinase. Após infusão de insulina, três bandas ficaI:am evidentes no "immunoblotting" com anticorpo antifosfotirosina: üma banda de peso molecular de 80 kDa, que parece ser um substrato do receptor de insulina, tecido específico; outra de 95 kDa, correspondente à subunidade 13 do receptor de insulina e uma terceira, entre 165-185 kDa, coletivamente chamada pp 185 (que contém o IRS-l e IRS-2 - substratos 1 e 2 do receptor de insulina). Em experimentos para avaliação temporal e dose-resposta, verificou-se o pico de fosforilação destas proteínas aos 90 segundos após infusão, via veia cava inferior, de 10 -5 M de insulina. Nos animais mantidos em jejum prolongado houve um aumento para 189 :t 9%, p<O,OOOI (n=04) e para 134 :t 9%, p<O,OOI (n=09) nos níveis teciduais de receptor de insulina e do IRS-l respectivamente, quando comp.arados com animais alimentados. O nível de fosforilação em tirosina sofreu um aumento para 163 :t 7%, p<O,OOOI (n=05); 211:t 18%, p<O,OOOI (n=08) e para 150 :t 9%, p<O,OOOI (n=06) nas, bandas de 95 kDa (subunidade B do receptor de insulina), da pp185 e da pp 80, respectivamente. Em amostras previamente submetidas a imunoprecipitação com anticorpos antiIRS-l e, a seguir submetidas a "immunoblotting" com anticorpos antifosfotirosina, demonstrou-se um aumento para 192 :t 9%, p<0,005 (n=04) no grau de fosforilação do IRS-l. A mesma membrana de nitrocelulose incubada com anticorpo antiPI 3-quinase apresentou um aumento para 232:t 9%, p<O,OOOI (n=04) na banda correspondente a esta enzima, sugerindo que a elevação no grau de fosforilação do IRS-l é acompanhado de aumento na associação IRS-l/PI 3-quinase. Para os animais que se tornaram diabéticos após uso de estreptozotocina, houve elevação nos níveis protéicos para 186 :t 9 %, p<O,OOOI (n=8) e para 146 :t 8%, p<O,OOOI (n=8) para IR e IRS-l, respectivamente. Observou-se, também, um aumento de 141 :t 7%, p<O,OOOI (n=5) na fosforilação da subunidade f3 e para 238 :t 42% p<O,OI (n=6) da pp 185, sempre em relação ao controle. Concordante com estes resultados, a imunoprecipitação com anticorpo antiIRS-l demonstrou aumento para 230 :t 13%, p<O,OOOI (n=5) na fosforilação do IRS-l e, após imunoprecipitação com anticorpo antiPI 3-quinase, aumento na quantidade -de PI 3-quinase associada ao IRS-l para 210 :t 15%, p<O,OOOI (n=5). Aumentou, ainda, o grau de fosforilação da bandá que migra em torno da pp 120 independentemente do estímulo com insulina. Esses resultados demonstraram elevação nos níveis e grau de fosforilação do receptor de insulina e do IRS-l em tecido renal, em situações de hipoinsulinemia (jejum e diabetes mellitus), sugerindo uma regulação similar à que ocorre no tecido hepáticQ. O efeito de envelhecimento sobre as proteínas envolvidas na transmissão do sinal insulínico foi caracterizado por uma diminuição para 58 :t 12% (p<0,05) na fosforilação do receptor de insulina, para 66 :t 6% (p<0,05) na da pp 185 e para 68 :t 12% (p<0,05) na fosforilação da pp 80. Em concordância, a associação IRS-l/PI 3-quinase apresentou uma diminuição para 40 :t 15 % (p<0,05). A redução no grau de fosforilação, tanto do receptor de insulina quanto do IRS-l, não foi acompanhada de redução no nível tecidual desta proteína. No envelhecimento,aregulação das proteínas envolvidas nas etapas iniciais da transmissão do sinal insulínico em tecido renal foi também similar à do tecido hepático. Animais submetidos à nefrectomia contralateral tiveram seu tecido renal remanescente estudado no 2°, 7° e 28° dia após a cirurgia, não havendo diferença na quantidade de receptor de insulina nestes diferentes tempos. O nível protéico do IRS-1 apresentou significativa diminuição para 57:t 12%, p<0,05 (n=04) nos operados há 28 dias. O grau de fosforilação da subunidade 13 do receptor de insulina reduziu-se para 76 :t 10%, p<0,05 (n=04); 79 :t 5%, p<0,05 (n=05) e 63 :t 11%, p<0,05 (n=06), e o da pp185 para 63 :t 6%,p<0,0001 (n=08); 58 :t 6%,p<0,0001 (n=06) e 46:t 5%,p<0,0001 (n=07) nos animais nefrectomizados há 2, 7 e 28 dias respectivamente. Com relação à associação IRS-l/PI3-quinase, demonstrou-se uma redução para 50 :t 5%, p<0,0001 (n04), nos operados há 7 dias. Em conclusão, os resultados deste estudo demonstram que, em situações de hipoinsulinemia há um aumento e, durante o envelhecimento, há uma redução nos níveis e graus de fosforilação do receptor de insulina e do IRS-l e na interação deste com a P I 3-quinase, em tecido renal. Em situações de crescimento renal, há um comportamento heterogêneo no. grau de fosforilação destas proteínas, reduzindo-se no crescimento renal compensatório à uninefrectomia e aumentando no diabetes melittus / Abstract: Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of its receptor, resulting in the phosphorylation of its cytosolic substrate IRS-l, which, in tum, associates with phosphatidylinositol 3-kinase (pI 3-Kinase). In the last few years its has been shown that the first steps of insulin action have a tissue-specific regulation in different physiophatologic situations. These studies have been done in muscle, liver and adipose tissue but not in kidney. In the present study we have examined the levels and phosphorylation status ofthe receptor, IRS-l, and P I 3-Kinase in kidney using four animal models: fasting, diabetes (STZ), aging and kidney hypertrophy. In the methodology used there was insulin infusion into cava vein and kidney Was removed and used for immunoprecipitation and immunob lotting with antiphosphotyrosine, anti-insulin receptor, anti IRS-l and anti PI 3-kinase antibodies. After stimulation with insulin three broad bands appeared m. antiphosphotyrosine immunoblotting: A band of - 80 kDa ( probably tissue-specific insulin receptor substrate), a band 95 kDa (J3-subunit of insulin receptor) and a band of 165-185 kDa (it contains IRS-l and IRS-2). A time course and dose-response experiments were performed and showed that the maximal phosphorylation of IRS-l occurs between 60-90 seconds afiei 10-5 M insulin infusion. In the fasting group there was an increase to 189 :t 9% (p<O.OOOI) and to 134 :!: I 9% (p<0.001) in IR and IRS-1 protein levels, respectively. There was a simultaneous Iincrease in insulin receptor, pp 185 and pp 80 after insúlin stimulation phosphorylation, to 163 :t 7% (p<O.OOOI), 211 :t 18% (p<O.OOOI) and 150 :t 9% (p<O,OOOI) respectively determined by immunoblotting with antiphosphotyrosine antibody. In samples previously immunoprecipitated with antiIRS-l antibody and blotted with antiphosphotyrosine antibody, there was a 92 :t 8% (p<0.005) increase in phosphorylation levels, accompained by an increase to 232 :t 9% (p<O.OOOI) in insulin stimulated IRS-1 association with P I 3-kinase. In the STZ diabetes rats there was an increase of 186 :t 9% (p<0.0001) and 146 :t 8% (p<O.OOOI) in IR and IRS-l protein levels, 'respectively. There was a simultaneous increase after insulin stimulation of insulin receptor and pp 185 phosphorylation to 141 :t 7%(p<0.0001) and 238 :t 42% (p<0.01) respectively determined by immunoblotting with antiphosphotyrosine antibody. In the basal state a closely spaced doublet band with molecular mass between 110 and 120 kDa has an increase in phosphorylation status in the kidney of STZ-diabetes rats. The increase in IRS-l protein leveI in STZ diabetes rats maybe important because this protein is a substrate of number of polypeptyde growth factors. Taken together the results these data suggest that in hypoinsulinemic animal (fasting and STZ-diabetes) the regulation of IR and IRS-l in kidney is similar to tiver. There were no changes in insulin receptor and IRS-l protein levels in kidney of 2-20 months-old rats, as determinated by immunoblotting using antibody to the COOH-terminus of the receptor and to IRS-l. However, insulin stimulation of the insulin receptor, IRS-l and pp80 phosphorylation, as determined by immunoblotting with antiphosphotyrosine antibody, was 'reduced by 58 :t 12% (p<0.05), 66 :t 6% (p<O.OOOI) and 69:t 8% (p<0.005) respectively in the kidney of rats at 20 months. These data suggest that changes in the early steps of insulin signal transduction in kidney tissue are also similar to what happened in the liver tissue in aging. In remaining kidney after 2, 7 and 28 days unilateral nephrectomy, there were no changes in insulin receptor concentration. IRS-l protein levels decreased to 57 :t 12% (p<0.05) after 28 days of nephrectomy. After insulin stimulation there was a reduction in insulin receptor phosphorylation to 76 :t 10% (p<0.05), 79 :t 5% (p<0.005), 63 :tIl % (p<0.05) and of pp 185 to 63 :t 6% (p<O.OOOI), 58 :t 6% (p<O.OOOI), 46 :t 5% (p<0.0001) to 2, 7 and 28 respectively. In samples previous immunoprecipitated with anti-IRS-l antibody and blotted with antiphosphotyrosine antibody, there were 50 % decrease in the insulin-stimulated IRS-l association with PI 3-kinase after 7 days later nephrectomy. In conclusion, our results showed that in hypoinsulinemic animal there were an lDcrease in the phosphorylation levels of insulin receptor, IRS-l and IRS-l/PI 3-K association, while in the aging model there were a reduction in the phosphorylation status of these proteins in kidney. In situations of kidney growth there is a heterogenous behaviour of the phosphorylation of these proteins, increasing in STZ-diabetes and decreasing in compensatory renal hypertrophy after uninefrectomy / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas

Orientadores: Regina Celia Spadari-Bratfisch, Maria Cecilia Ferraz de Arruda Veiga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-21T21:21:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vanderlei_LuizCarlosMarques_D.pdf: 4027500 bytes, checksum: a03c4378fdc093ef837a0eb1f83250ac (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O objetivo desse trabalho foi analisar as alterações de sensibilidade às catecolaminas em átrios direitos isolados (AD) de ratas submetidas a estresse por choques nas patas e sacrificadas no estro ou diestro. Foram utilizadas ratas Wistar adultas, com ciclo estral regular de 4 dias, submetidas a 3 sessões de choques nas patas no estro, metaestro e diestro ou no diestro, proestro e estro. Cada rata recebeu, durante 30 minutos, 120 choques nas patas (1,0 mA, 1,0 s), a intervalos variáveis de 5 a 25 segundos. Após a última sessão de choques, os animais foram sacrificados e o AD preparado para registro isométrico das contrações espontâneas. Curvas concentração/efeito para noradrenalina (NA), adrenalina (ADR) e soterenol (SO) foram obtidas sem tratamento farmacológico. Para analisar os mecanismos envolvidos com as alterações de sensibilidade observadas, foram utilizados um ou mais dos seguintes tratamentos farmacológicos: desnervação adrenérgica, inibição dos sistemas de captação extraneuronal e de recaptação neuronal, bem como, bloqueio dos adrenoceptores 'alfa' e muscarínicos. Os dados foram comparados através de análise de variância seguida da aplicação do teste de Scheffé, e pelo teste t de Student. Diferenças foram consideradas significantes ao nível de 5%. AD de ratas, submetidas a choques nas patas e sacrificadas no diestro, apresentaram subsensibilidade à ADR (pD2 = 7,38 '+ ou -' 0,09 vs. 6,63 '+ ou -' 0,08), NA (pD2 = 7,67 '+ ou -' 0,11 vs. 6,95 '+ ou -' 0,13) e SO (pD2 = 6,80 '+ ou -' 0,13 vs. 6,36 '+ ou -' 0,07), quando comparados com os respectivos controles. A inibição do processo de recaptação neuronal cancelou a subsensibilidade à NA (pD2 = 7,88 '+ ou -' 0,06 vs. 7,73 '+ ou -' 0,08). Após a realização de tratamento farmacológico completo, AD desses animais continuaram a apresentar subsensibilidade à NA (pD2 = 8,10 '+ ou -' 0,11 vs. 7,68 '+ ou -' 0,14), enquanto que a subsensibilidade para a ADR foi cancelada (pD2 = 7,67 '+ ou -' 0,13 vs. 7,49 '+ ou -' 0,08). Adição de butoxamina tomou novamente evidente a subsensibilidade à ADR (pD2 = 7,51 '+ ou -' 0,05 vs. 7,15 '+ ou -' 0,13). Em AD de ratas estressadas e sacrificadas no estro, somente foi observada subsensibilidade aos efeitos cronotrópicos da adrenalina, após a adição de butoxamina (pD2 = 7,59 '+ ou -' 0,05 vs. 7,17 '+ ou -' 0,07). Estes resultados sugerem que, após estresse por choques nas patas, AD de ratas sacrificadas no diestro apresentaram aumento da eficiência do processo de recaptação neuronal, essensibilização dos adrenoceptores 'beta 1' e participação dos adrenoceptores 'beta 2' na resposta cronotrópica às catecolaminas. Durante o estro, os mecanismos adaptativos do controle cronotrópico dos AD pelas catecolaminas não ocorrem, com exceção da participação dos adrenoceptores 'beta 2' na mediação da resposta cronotrópica / Abstract: This study was performed to analyse the alterations in sensitivity to catecholamines in right atria isolated (AD) from rats submitted to footshock stress and sacrificed at estrus or diestrus. Adult Wistar female rats exhibiting regular 4-day estrous cycles were submitted to three footshock sessions at estrus, metestrus and diestrus or at diestrus, proestrus and estrus. Each rat received during 30 min, 120 electric shocks (1. 0 mA, 1.0 s) at variable intervals of 5 to 25 s. After the last session, the animals were sacrificed and its right atria set up for isometric recording of spontaneous beating. Dose-response curves to noradrenaline (NA), adrenaline (ADR) and soterenol (SQ) were obtained before "in vitro" treatment. To analyse the mechanisms of the alterations in sensitivity one or more of the following "in vitro" treatment were used: sympathetic denervation, inhibition of the extraneuronal uptake and neuronal reuptake and blockade of alpha adrenoceptors and muscarine receptors. Data were compared by using analysis of variance followed by Scheffé test and student t-test. Differences were considered significant at p < 0,05. Right atria from rats submitted to footshock stress and sacrificed at diestrus compared to those from control rats showed subsensitivity to ADR (pD2 = 7.38 ' + or -' 0,09 vs. 6.63 ' + or -' 0,08), NA (pD2 = 7.67 ' + or -' 0.11 vs. 6.95 ' + or -' 0,13) and SQ (pD2 = 6.80 ' + or -' 0.13 vs. 6.36 ' + or -' 0.07). The inhibition of neuronal reuptake canceled the subsensitivity to NA (pD2 = 7.88 ' + or -' 0.06 vs. 7.73 ' + or -' 0.08). After complete "in vitro" treatment AD from stressed rats showed subsensitivity to NA (pD2 = 8.10 ' + or -' 0.11 vs 7.68 ' + or -' 0.14) however the subsensitivity to ADR was canceled (pD2 = 7.67 ' + or -' 0.13 vs. 7.49 ' + or -' 0.08) but returned afier addition of butoxamine (pD2 = 7.51' + or -' 0.05 vs. 7.15' + or -' 0.13). Right atria from stressed rats sacrificed at estrus were also subsensitive to ADR afier addition of butoxamine (pD2 = 7.59 ' + or -' 0.05 vs. 7.17 ' + or -' 0.07). These results demonstrat that footshock stress, induces an increase in the efficiency of the neuronal reuptake process, desensitization of 'beta 1'adrenoceptors and increase in 'beta 2'-adrenoceptor-mediated response in right atria from female rats sacrificed at diestrus. During estrus it seems that those adaptive responses of the chronotropic control of the heart by catecholamines do not occur with the exception of the increase in 'beta 2'-adrenoceptor-mediated response / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Odontologia

Orientador: Thales Rocha de Mattos Filho / Tese(doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-20T23:29:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KozlowskiJunior_VitoldoAntonio_D.pdf: 2805679 bytes, checksum: f41eb64ef505024519936acf4a453fab (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Ratos albinos machos foram utilizados para investigar os efeitos de antagonista específico de receptores Hl periféricos, Terfenadina e receptores H2, Cimetidina sobre as concentrações dos elementos Ca, P, Mg, Si, B e Sr, através de Espectroscopia de Emissão Atômica com Plasma Induzido (ICP-AES), no soro destes animais durante a regeneração hepática após hepatectomia parcial. Setenta e três ratos divididos em três grupos foram sacrificados respectivamente 6, 24 e 360 h após a técnica cirúrgica. Cada grupo contendo 4 subgrupos receberam doses de Terfenadina (2mg/kg/dia), Cimetidina (20mg/kg/dia), Terfenadina (2mg/kg/dia) + Cimetidina (20mg/kg/dia) e NaCl 0,9% (Controle), intraperitonealmente durante o tempo do experimento. Os resultados obtidos sugerem que os níveis de P, Mg e Sr não sofrem alterações no soro durante a regeneração hepática, com os níveis de Ca apresentando um significante turnover nos grupos tratados e Si e especialmente, B tendo importantes alterações / Abstract: Adult male albino rats (Wistar strain) were used to investigate the effects of selective antagonist of only peripheral histamine Hl-receptors, Terfenadine and histamine H2-receptors antagonist, Cimetidine on the serum concentrations of elements Ca, P, Mg, Si, B and Sr, by Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectrometry (ICP-AES) during liver regeneration after partial hepatectomy. Seventy-three animals were randomly divided into three groups and were sacrificed respectively 6, 24 and 360 h postoperatively. Each group was divided into four sub-groups that received doses of Terfenadine (2mg/kg/day), Cimetidine (20mg/kg/day), Terfenadine (2mg/kg/day) + Cimetidine (20mg/kg/day) and NaCl 0,9% (Control), intraperitoneal^ during the experimentation. The results obtained suggested that P, Mg and Sr levels not modified in rat serum during liver regeneration, with Ca levels' exhibiting a significant turnover in the treated groups and Si, specially, Boron showing important changes / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Ciências

Orientador: Regina Celia Spadari-Bratfisch / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T12:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcondes_FernandaKlein_M.pdf: 4667978 bytes, checksum: f9546f7c08e60c1479f7c335ad4626f3 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Estudamos a influência do sexo e das fases do ciclo estral sobre a reação de estresse em ratos submetidos à natação, a 30°C. Analisamos as alterações de sensibilidade às catecolaminas em átrios direitos isolados e as concentrações plasmáticas de corticosterona de ratos machos e de ratas em estro ou em diestro submetidos a uma sessão de 5, 15, 30 ou 50 min de natação (estresse único), ou a três sessões de 5, 15 e 30 min, aplicadas em dias consecutivos. Em fêmeas, as sessões repetidas ocorreram durante o diestro, proestro e estro (grupo estro) ou durante o estro, metaestro e diestro (grupo diestro ). Curvas dose-resposta à isoprenalina, noradrenalina e adrenalina foram obtidas em átrios direitos isolados de ratos após 30 ou 50min de natação, ou após a última sessão do estresse repetido. O sangue foi coletado da veia renal esquerda, sob anestesia com pentobarbital, para determinação das concentrações plasmáticas de corticosterona por fluorimetria. Átrios direitos isolados de ratos machos submetidos à natação não apresentaram alterações de sensibilidade às catecolaminas. O tecido isolado de ratas em estro apresentaram subsensibilidade à isoprenalina após uma sessão de 50 min de natação. Átrios direitos isolados de ratas em diestro, desenvolveram subsensibilidade à noradrenalina e à adrenalina após uma sessão de 50 min de natação ou após o estresse repetido. Em ratos machos, as concentrações plasmáticas de corticosterona aumentaram após 5, 15 ou 30 min de natação, mas não após 50 mino Em ratas, houve aumento nos níveis plasmáticos de corticosterona em todos os grupos experimentais, mas o perfil de variação foi diferente daquele observado em machos. Houve grande variação na resposta hormonal ao estresse por natação dentro de cada grupo analisado. Em resposta ao estresse repetido, machos e fêmeas apresentaram elevação nos níveis plasmáticos de corticosterona após cada uma das sessões de natação. Entretanto, enquanto em machos os níveis aumentaram ainda mais após a última sessão, em fêmeas o aumento foi menor do que nas duas sessões anteriores. Nossos resultados demonstraram que o sexo e o ciclo estral exercem importante influência sobre a reação de estresse em ratos submetidos à natação. Aumentos significativos nos níveis plasmáticos de corticosterona são necessários, porém não suficientes, para induzir alterações de sensibilidade às catecolaminas. Há também uma grande variação individual na resposta hormonal à natação / Abstract: We studied the influence of sex and estrous cyc1e on the response of rats to swimming stress, at 30°C. The sensitivity to cathecolamines of isolated right atria and corticosterone plasma levels on male rats and female rats at estrus or diestrus were analysed after one swimming session of 5, 15, 30 or 50 min (single stress) or after three sessions of 5, 15 and 30 mino In female rats, repeated swimming sessions were applied during diestrus, metestrus and estrus (estrus group), or during estrus, metestrus and diestrus (diestrus group). Dose-response curves to isoprenaline, noradrenaline and adrenaline were obtained in right atria isolated from rats after a 30 min or 50 min session, or after the last swimming session of repeated stress. Blood was withdrawn from the left renal vein under pentobarbital anestesy, and corticosterone plasma levels were determined fluorimetrically. Right atria isolated from male rats submitted to swimming stress at 30°C did not present any alteration on sensitivity to catecholamines. Tissue isolated from rats at estrus exhibited subsensitivity to isop_enaline after a 50 min swimming session. Right atria isolated from rats at diestrus showed subsensitivity to noradrenaline and to adrenaline after a single 50 min swimming session or after repeated stress. Corticosterone plasma levels of mal e rats showed an increase after 5, 15 and 30 min of swimming, but not after a 50 min session compared to the control group. In female rats at estrus, corticosterone plasma levels were increased in all experimental groups. However the variation profile was different comparing male with female rats. There was a large variation ofthe hormonal response to swimming stress within each group. After repeated stress, corticosterone plasma levels of male and female rats increased. However, in the third session, whereas mal e rats exhibited a higher plasma corticosterone leves, female rats showed lower increase than those observed after the two previous sessions. Our results demonstrated that sex and estrous cyc1e have an important influence on the stress response to swimmming in rats. Significant increase on corticosterone plasma levels are necessary, but not sufficient, to induce changes on sensitivity to catecholamines. There is also a large individual variation on the hormonal response to swimming stress / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Regina Celia Spadari-Bratfisch / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T06:47:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanesco_Angelina_D.pdf: 4587794 bytes, checksum: 5908a392979b9706522fc62bd3b5774a (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A desnervação sino-aórtica (DSA), ao interromper a aferência neuronal dos baroceptores aórticos e carotídeos, libera o sistema nervoso simpático de uma fonte primária de inibição e causa imediatamente, hipertensão e taquicardia. A hipertensão pode persistir por alguns meses e caracteriza-se por extrema labilidade da pressão arterial. Enquanto que a taquicardia é transitória e dura cerca de duas semanas. Este estudo foi realizado para determinar o efeito da DSA na sensibilidade da resposta cronotrópica a agonistas b-adrenérgicos em átrios direitos de ratos. Os átrios direitos foram isolados 1, 3, 7, 15 e 30 dias após a cirurgia simulada ou a DSA, e curvas concentração-efeito aos agonistas plenos isoproterenol (ISO) e noradrenalina (NA) foram obtidas. O agonista parcial, prenalterol (PREN) foi utilizado somente em tecidos obtidos sete dias após a cirurgia. Os resultados dos estudos para determinar se a DSA produzia alterações nos sistemas de recaptação neuronal e extraneuronal, mostraram que a DSA não afetava esses sistemas de metabolização. A DSA causou diminuição na sensibilidade da resposta cronotrópica ao ISO e à NA de cerca de 3 a 4 vezes, a nível da pEC50 sem mudanças na resposta máxima. Subsensibilidade foi observada para os dois agonistas ISO e NA no terceiro e sétimo dias após a DSA., enquanto que no décimo-quinto dia foi observada subsensibilidade somente para a NA. Os tecidos atriais não foram subsensíveis tanto no primeiro quanto no trigésimo dias após a DSA. Análise dos subtipos de adrenoceptores b, que estariam mediando a resposta cronotrópica, a afinidade e a eficácia a agonistas e a densidade dos sítios ligantes desses adrenoceptores foram determinadas. A DSA causou uma diminuição na sensibilidade e na resposta máxima ao agonista parcial, PREN. Essas alterações foram associadas à diminuição na eficácia, sem mudança na afinidade do agonista. Os resultados dos estudos com antagonistas seletivos b1 e b2 mostraram que a população que está mediando a resposta cronotrópica às catecolaminas é homogênea b1 em átrios direitos isolados de ratos controles e com DSA. DSA não induziu o aparecimento de adrenoceptores b2 funcionais. Os resultados dos experimentos com radioligante 125 l-cianopindolol (125ICYP) confirmaram e mostraram que a DSA produziu diminuição no número de sítios receptores badrenérgicos, sem mudanças na afinidade tanto ao 125lCYP quanto ao PREN. Concluindo a DSA induziu uma diminuição na sensibilidade a agonistas em átrios direitos isolados que parece ser devida à down-regulation dos adrenoceptores b1 / Abstract: Sino-aortic deafferentation (SAD) disrupts baroreceptor mediated regulation of blood pressure and heart rate. In rats, immediately following SAD, an increase in sympathetic tone occurs. The increased sympathetic tone is characterized by a long lasting labile hypertension and transient tachycardia. The elevated blood pressure may persist for up to one year after SAD. The tachycardia lasts only about two weeks. This study was performed to determine the effects of SAD on the chronotropic responses to agents acting at right atria b-adrenoceptors. At one, three, seven, fifteen, and thirty days after SAD or sham surgery, right atria were isolated and concentration response curves for the high efficacy agonists, isoproterenol (ISO) and norepinephrine (NE), were generated. The low efficacy agonist, prenalterol (PREN), was only studied on tissues obtained at seven days after surgery. The results of studies to determine if SAD produced an alteration in the uptake systems responsible for terminating the actions of catecholamines showed that SAD had no effect on the uptake systems. SAD did cause a three- to four-fold decrease in the potency of ISO and NE without changing their maximal chronotropic responses. The decreased potency was seen at three and seven days after SAD. Tissues obtained at one, fifteen, and thirty days after SAD were not subsensensitive to the chronotropic actions of ISO and NE. Tthe effects of SAD on the density, and sub-type of j3-adrenoceptor mediating the chronotropic response, agonist affinity and efficacy were determined in tissues obtained at seven days after SAD or sham surgery. SAD caused a decrease in the potency and maximal response for the low efficacy agonist, PREN. This change in agonist activity was associated with a decrease in agonist ejficacy that occurred in the absence of a change in affinity, and was evidenced throughout a lower sensitivity. The results of studies with selective b1- and b2 -antagonists showed that a homogenous b1-adrenoceptors population mediate the chronotropic response to catecholamines in right atria from naive controls, sham and SAD rats. SAD did not induce the appearance of functional b2-adrenoceptors. The results of radioligand binding assays using 125l-cyanopindolol (ICYP) confirmed that and showed that SAD produced a decrease in the maximum number of r3-adrenoceptor binding sites with no changes in the affinities of either 125lCYP or PREN. It is concluded that SAD induced a decrease in the sensitivity to agents acting at right atrial b -adrenoceptors is due to b1-adrenoceptor down-regulation / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências

Orientadores: Rosana Almada Bassani, Jose Wilson Magalhães Bassani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Elétrica e de Computação / Made available in DSpace on 2018-07-29T04:04:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ZafalonJunior_Nivaldo_M.pdf: 1477869 bytes, checksum: a8b49631cb4b27db43e7230bfbf806b2 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T20:41:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perlingeiro_RitadeCassiaRamos_D.pdf: 3884258 bytes, checksum: 794c1fdb9eeb5c0209a8f1bad4c6aaac (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Neste trabalho realizamos o estudo do crescimento e diferenciação de progenitores eritróides do sangue periférico em 42 pacientes com anemia falciforme (SS), 14 pacientes com hemoglobinopatia SC, 13 pacientes com S/ ß talassemia, assim como 30 controles frente ao MC5637 e Epo e, na ausência de estímulo (autoproliferação). Os nossos resultados demonstraram que pacientes eritrofalcêmicos apresentam um número de colônias significativamente superior aos indivíduos normais (p < 0,0001), tanto frente ao estímulo como na ausência do mesmo. Quando comparamos o padrão de resposta hematopoiética de acordo com o tipo de doença falciforme, não observamos diferenças significativas entre os pacientes SS, SC e S/ß talassêmicos, tanto na presença de estímulo como na sua ausência. Além disso, as análises estatísticas indicaram a presença de correlação negativa entre autoproliferação e níveis de hemoglobina e hematócrito (rs = - 0,3; p = 0,0065 e rs = - 0,27; p = 0,012, respectivamente). O estudo da expressão de receptores para fatores de crescimento hematopoiéticos demonstrou uma resposta aumentada para IL-3 (p < 0,05), G-CSF (p < 0,001) e Epo (p < 0,02) em pacientes com doença falciforme. Em relação aos receptores para GM-CSF, não houve alteração na sua expressão quando comparados aos controles. Além disso, observamos que a expressão de receptores para Epo correlacionou-se positivamente com BFU-E estimulado (rs = 0,47; p = 0,014) e autócrino (rs = 0,46; p = 0,015). Por outro lado, a expressão de receptores para G-CSF mostrou uma correlação negativa com tais respostas de BFU-E (rs = -0,42; p = 0,04 e rs = -0,57; p = 0,007, respectivamente). Não observamos a presença de qualquer correlação entre os níveis de HbF e os parâmetros estudados neste trabalho. Em relação a verificação dos níveis aproximados de fatores estimuladores no soro dos pacientes com a doença falciforme, não observamos qualquer efeito, inibidor ou estimulador, do soro destes pacientes no crescimento e diferenciação de precursores hematopoiéticos da medula óssea de indivíduos normais. Desta forma, os resultados obtidos neste trabalho contribuem para uma melhor compreensão dos mecanismos reguladores da eritropoiese na doença falciforme, uma vez que o aumento na expressão de receptores para IL-3 e Epo nos progenitores eritróides destes pacientes explica, pelo menos em parte, o fenômeno de autoproliferação observado em pacientes SS, SC e S/ß talassêmicos / Abstract: The ability of circulating progenitor cells from 69 patients with sickle cell disease (SCD) (42 SS, 14 SC and 13 S/ß thalassemia) to develop erythroid colonies was studied in vitro in the presence or absence of growth factors (5637-CM and Epo). In both conditions, SCD patients presented significantly higher numbers of circulating burstforming unit-erythroid (BFU-E/5 x 105 MNC), when compared to control subjects (p < 0.0001). We did not observe a significant difference in these responses among the genotypes SS, SC and S/ß thalassemia. Moreover, there was a negative correlation between autocrine BFU-E and both hemoglobin and hematocrit levels (rs = - 0.3; p = 0.0065 and rs = - 0.27; P = 0.012, respectively). The study of the expression of growth factors receptors revealed an increased response to IL-3 (p < 0.05), G-CSF (p < 0.001) and Epo (p < 0.02) in SCD patients. The expression of receptors for GM-CSF did not differ from that of the controls. We also observed a correlation between both stimulated (rs = 0.47; p = 0.014) and autocrine (rs = 0.46; p = 0.015) BFU-E and the expression of Epo receptors. On the other hand, the expression of G-CSF receptors showed a negative correlation with these BFU-E responses (rs = - 0.42; p = 0.04 and rs = - 0.57; p = 0.007, respectively). There was no correlation between HbF levels and any of the parameters evaluated. We observed no in vitro effects of the serum obtained from SCD patients on the growth and differentiation of hematopoietic precursors from normal human bone marrow. These results are of particular interest since they indicate that the phenomenon of spontaneous BFU-E derived colonies observed in SCD patients may be due to an increased expression of Epo and IL-3 receptors / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientadores: Jose Wilson Magalhães Bassani, Rosana Almada Bassani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Eletrica e de Computação / Made available in DSpace on 2018-08-08T13:08:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ZafalonJunior_Nivaldo_D.pdf: 3812093 bytes, checksum: edd5a8af0cab279b9c0a59a80083d639 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Taquiarritmias atriais (TA) são o tipo de arritmia crônica mais comum, e mostram associação com risco de acidentes tromboembólicos. Os mecanismos envolvidos neste tipo de arritmia têm sido alvo de numerosos estudos. Nossa equipe desenvolveu um modelo de geração de TA de origem colinérgica em átrios isolados por estimulação elétrica de alta freqüência, cuja caracterização foi o objeto do presente estudo. Neste trabalho, desenvolvemos, implementamos e validamos uma metodologia para o estudo dos padrões de propagação da atividade elétrica durante arritmias, que se baseia na determinação do vetoatriograma. Nossos principais resultados foram: a) O padrão de propagação da atividade elétrica durante TA de origem colinérgica em átrios direitos é consistente com o desenvolvimento de reentrância da propagação, enquanto que, durante arritmia de origem p-adrenérgica em átrio esquerdo (por sobrecarga celular de Ca2+), o padrão é semelhante ao observado em átrios direitos sob ritmo sinusal, portanto compatível com a formação de focos ectópicos. b) Como observado em estudos anteriores, há um antagonismo entre as vias de sinalização colinérgica muscarínica e P-adrenérgica na determinação da susceptibilidade do tecido a TA. Neste trabalho, constatamos que o efeito pró-arrítmico da ativação da primeira via em condições de estimulação P-adrenérgica é suprimido por inibição de fosfatases de proteínas. Isto nos permite concluir que a ativação de fosfatases pela via muscarínica parece ser um mecanismo adicional envolvido neste antagonismo. c) Dado que resultados prévios na literatura indicam que a redução na duração do potencial de ação atrial, por aumento da condutância de fundo da membrana ao K+, tem importante papel no favorecimento de reentrância por agonistas muscarínicos, levantamos a hipótese de que este mecanismo seja suficiente para facilitar a indução de TA. Para testá-la, investigamos o efeito do pinacidil, que promove a abertura de canais de K+ dependentes de ATP. A aplicação deste fármaco facilitou consideravelmente a indução de TA, de modo dependente de concentração e independente de estimulação de receptores muscarínicos. Além disso, o padrão de propagação da atividade elétrica atrial foi essencialmente semelhante àquele observado durante TA de origem colinérgica e compatível com o desenvolvimento de circuitos reentrantes. Estes resultados não só representam suporte para nossa hipótese, mas também são sugestivos de que condições como hipoxia e isquemia, que podem resultai em depleção do ATP citosólico e abertura dos canais de K+ dependentes de ATP, aumentem a vulnerabilidade atrial ao desenvolvimento de circuitos reentrantes e TA / Abstract: Atrial tachyarrhythmias (TA), the most common type of chronic arrhythmia, are associated with increased risk of thromboembolic accidents. Several investigators have attempted to gain insight into the mechanisms underlying TA. Our research team has developed an in vitro model of TA induction by high frequency electric stimulation of isolated atria, which is dependent on muscarinic cholinergic receptor stimulation (cholinergic TA). Aiming at further characterization of this model in the present study, we developed, implemented and validated a method to analyze the pattern of propagation of electric activity during arrhythmias, based on the determination of the vectoatriogram. Our main results were: a) The pattern of electric propagation during cholinergic TA is in agreement with that expected for reentrant propagation. On the other hand, the pattern observed during arrhythmia evoked by ß-adrenoceptor stimulation in left atria (cell Ca2+ overload) resembles that seen in right atria during spontaneous sinusal rhythm, and is thus compatible with the appearance of ectopic automatic foci. b) As previously observed, muscarinic cholinergic and p-adrenergic signaling pathways interact antagonistically to determine atrial susceptibility to arrhythmia induction. In this study, we found that protein phosphatase inhibition suppressed the cholinergic pro-arrhythmic effect in the presence of ß-adrenergic stimulation. We thus conclude that muscarinic-dependent protein phosphatase activation seems to be an additional mechanism involved in the functional antagonism of these signaling pathways. c) Based on previous results from other laboratories showing that atrial action potential abbreviation, due to increase in membrane background K+ conductance, is of paramount importance for reentry facilitation by muscarinic agonists, we hypothesized that this electrophysiological change would be sufficient for facilitation of TA induction. The hypothesis was investigated by testing the effects of pinacidil, an ATP-dependent K+ channel opener. Pinacidil caused a marked, concentration-dependent increase in TA induction, which was independent of muscarinic cholinergic receptor stimulation. In addition, the electric propagation pattern during TA was similar to that observed during cholinergic TA, which is suggestive of establishment of reentrant circuits. These results not only support our hypothesis, but also point out that conditions that may cause depletion of cytosolic ATP, such as hypoxia and ischemia, may increase atrial vulnerability to the occurrence of electric reentry and tachyarrhythmia / Doutorado / Engenharia Biomedica / Doutor em Engenharia Elétrica