Orientador: Claudia Herrera Tambeli / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T16:43:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_MariaClaudiaGoncalvesde_D.pdf: 939911 bytes, checksum: b56bfd43b641acd5fc9d086b0faf0aa0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Recentes estudos demonstram que a ativado de receptores P2X3,2/3 pelo ATP endógeno contribui para a hiperalgesia inflamatória. Portanto, os objetivos desse trabalho foram: (1) Estudar o mecanismo pelo qual a ativa o dos receptores P2X3,2/3 pelo ATP endogeno contribui para a hiperalgesia mecânica induzida no modelo da inflamacça causada pela carragenina, (2) Verificar se o ATP end?eno e a ativado dos receptores P2X3,2/3 contribui para a hiperalgesia induzida pelos mediadores inflamatórios Bradicinina, TNF-a, IL-1ß, IL-6, CINC-1, PGE2 e dopamina e, verificar o mecanismo pelo qual essa contribuido ocorre, e (3) studar o mecanismo pelo qual a ativado dos receptores P2X1,3,2/3 induz hiperalgesia mecânica. De acordo com o objetivo (1): A co-administrado do antagonista seletivo de receptor P2X3,2/3, A-317491, ou do antagonista de receptor P2X1,3,2/3,1/5, TNP-ATP, com carragenina bloqueou a hiperalgesia mecânica...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Activation of P2X3,2/3 receptors by endogenous ATP contributes to the evelopment of inflammatory hyperalgesia. Therefore, the aims of this study were: (1) To study the mechanism underlying activation of P2X3,2/3 receptors by endogenous ATP contributes to mechanical hyperalgesia induced by the carrageenan model of inflammation, (2) To verify whether endogenous ATP and P2X3,2/3 receptors activation contributes to the hyperalgesia induced by inflammatory mediators bradykinin, TNF-a, IL-1ß, IL-6, CINC-1, PGE2 and dopamine and, to verify the mechanism underlying this contribution occurs, (3) To study the mechanism underlying activation of P2X1,3,2/3 receptors induces mechanical hyperalgesia...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Fisiologia Oral / Doutor em Odontologia

Orientador: Cláudia Herrera Tambeli / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T14:36:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teixeira_JulianaMaia_D.pdf: 23889164 bytes, checksum: c8f281ea2cb5d4c68fb62ac535731385 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A osteoartrite (OA) é uma doença degenerativa e progressiva, caracterizada pela degradação da cartilagem que reveste as extremidades ósseas e inflamação da membrana sinovial, causando incapacidade física, inchaço articular e dor. Embora o alívio da dor severa seja o principal objetivo no tratamento agudo, pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos no desenvolvimento da dor na OA. Estudos demonstram a participação do ATP (adenosina 5¿-trifosfato) em processos de hiperalgesia através da ativação dos receptores purinérgicos P2X3, P2X2/3 e P2X7. Portanto, os objetivos deste estudo foram: (1) investigar a participação dos receptores P2X3, P2X2/3 e P2X7 na hiperalgesia articular em modelo de artrite na articulação do joelho de ratos machos e fêmeas em estro e se há diferenças sexuais no efeito induzido pelos antagonistas de receptores P2X3, P2X2/3 e P2X7. (2) testar a hipótese de que a inflamação articular induzida pela carragenina aumenta a expressão do receptor P2X3 nos condrócitos da cartilagem articular da articulação do joelho de ratos. (3) verificar se o mecanismo pelo qual a ativação dos receptores P2X3, P2X2/3 e P2X7 contribui para a hiperalgesia articular depende da liberação prévia de citocinas pró-inflamatórias e da migração de neutrófilos. (4) investigar se a ativação dos receptores P2X3, P2X2/3 e P2X7 induz hiperalgesia na articulação do joelho de ratos dependente da liberação de mediadores inflamatórios. (5) testar a hipótese de que a ativação dos receptores P2X3, P2X2/3 e P2X7 contribui para a hiperalgesia articular induzida pelos mediadores inflamatórios: bradicinina, citocinas pró-inflamatórias, PGE2 e dopamina. Para os objetivos 1, 4 e 5, a hiperalgesia articular foi quantificada através do teste de Incapacitação Articular. Para o objetivo 2, foi utilizado o ensaio de imunofluorescência. Para os objetivos 3 e 4 foram utilizados os ensaios imuno-enzimáticos ELISA e MPO. Os resultados demonstram que a ativação dos receptores P2X3, P2X2/3 e P2X7 pelo ATP endógeno é essencial para o desenvolvimento da hiperalgesia articular induzida pela carragenina na articulação do joelho de ratos machos e fêmeas em estro, que são mais sensíveis do que os machos aos efeitos anti-hiperalgésicos e anti-inflamatórios induzidos pelo antagonista de receptor P2X7. Durante a inflamação articular induzida pela carragenina ocorre um aumento na expressão dos receptores P2X3 nos condrócitos da cartilagem articular. O papel dos receptores P2X3, P2X2/3 e P2X7 na hiperalgesia articular é mediado pela sensibilização indireta dos nociceptores aferentes primários, dependente da liberação prévia de citocinas pró-inflamatórias e da migração de neutrófilos. Além disso, a ativação dos receptores P2X3, P2X2/3 e P2X7 induz hiperalgesia articular dependente da liberação de bradicinina, aminas simpatomiméticas, prostaglandinas e citocinas pró-inflamatórias. Finalmente, a hiperalgesia articular induzida pelos mediadores inflamatórios bradicinina, PGE2 e dopamina depende da ativação de receptores P2X3 e P2X2/3, enquanto que a ativação de receptor P2X7 contribui para a hiperalgesia articular induzida pela bradicinina e dopamina. Concluindo, os resultados apresentados sugerem que os receptores P2X3, P2X2/3 e P2X7 são alvos farmacológicos interessantes para o tratamento das doenças inflamatórias articulares como a osteoartrite. Particularmente em relação ao receptor P2X7, antagonistas seletivos podem ser usados para reduzir a dor e inflamação no joelho, especialmente em mulheres / Abstract: Osteoarthritis (OA) is a degenerative and progressive disease, characterized by cartilage breakdown which covers the bone ends and by synovial membrane inflammation, causing disability, joint swelling and pain. The relief of severe pain is the main goal of the acute treatment, but little is known about the mechanisms involved in the development of pain in OA. It has been demonstrated the role of ATP (adenosine 5'-triphosphate) in processes of hyperalgesia through activation of purinergic receptors P2X3, P2X2/3 and P2X7. Therefore, the aims of this study were: (1) to investigate the role of P2X3, P2X2/3 and P2X7 receptors in articular hyperalgesia in the knee joint arthritis model in males and estrus females rats and, if so, whether there are sex differences in the effect induced by the selective P2X3, P2X2/3 and P2X7 receptors antagonists. (2) to test the hypothesis that the carrageenan-induced articular inflammation increases the expression of P2X3 receptor in chondrocytes of articular cartilage of the knee joint. (3) to verify whether the mechanism by which the P2X3, P2X2/3 and P2X7 receptors activation contributes to articular hyperalgesia depends on previous pro-inflammatory cytokines release and neutrophil migration. (4) to investigate whether the P2X3, P2X2/3 and P2X7 receptors activation induces articular hyperalgesia in the rat¿s knee joint which depends on release of inflammatory mediators. (5) to verify whether the activation of P2X3, P2X2/3 and P2X7 receptors contributes to the articular hyperalgesia induced by the inflammatory mediators bradykinin, pro-inflammatory cytokines, PGE2 and dopamine. For the aims 1, 4 and 5, the articular hyperalgesia was quantified by the rat knee joint Incapacitation Test. The immuno?uorescence method was used for the aim 2. For aims 3 and 4, the ELISA and MPO immunoenzymatic assays were used. The results demonstrate that P2X3, P2X2/3 and P2X7 receptors activation by endogenous ATP is essential for the development of carrageenan-induced articular hyperalgesia in the knee joint of male and estrus female rats, which are more sensitive than males to anti-hyperalgesic and anti-inflammatory effects induced by the P2X7 receptor antagonist. During carrageenan-induced joint inflammation occurs an increased of P2X3 receptors expression in chondrocytes of the articular cartilage. The essential role played by P2X3, P2X2/3 and P2X7 receptors in the development of articular hyperalgesia is mediated by an indirect sensitization of the primary afferent nociceptors dependent on the previous pro-inflammatory cytokines release and neutrophil migration. Moreover, the P2X3, P2X2/3 and P2X7 receptors activation induces articular hyperalgesia which depends on bradykinin, sympathomimetic amines, prostaglandins and pro-inflammatory cytokines release. Finally, the articular hyperalgesia induced by inflammatory mediators bradykinin, PGE2 and dopamine depends on the P2X3 and P2X2/3 receptors activation, while the P2X7 receptor activation contributes to the bradykinin- and dopamine-induced articular hyperalgesia. In conclusion, our results suggest that P2X3, P2X2/3 and P2X7 receptors are interesting pharmacological targets for the treatment of inflammatory joint diseases such as osteoarthritis. In particular, selective P2X7 receptor antagonists can be used to reduce inflammation and pain in the knee joint, especially in women / Doutorado / Fisiologia / Doutora em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Maria Julia Marques / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T17:20:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_DrielendeOliveira_D.pdf: 1797583 bytes, checksum: 467851661491c4671f42d059f14dbd53 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença muscular progressiva que causa falência respiratória e cardíaca resultando em morte por volta da terceira década de vida. A ausência da distrofina na DMD e no camundongo mdx, modelo experimental da doença, leva a instabilidade do sarcolema e aumento do influxo de cálcio seguido de mionecrose e fibrose. Receptores purinérgicos estão envolvidos na patogênese das distrofinopatias. A ativação destes receptores por ATP deflagra vias de sinalização secundárias que promovem a entrada de cálcio e ativam a formação de fibrose. No presente estudo, verificamos se a suramina, droga anti-fibrótica e antagonista de receptores purinérgicos, modifica o cálcio e proteínas a ele relacionadas, bem como afeta metaloproteinases e seus inibidores teciduais, no coração e no músculo diafragma de camundongos mdx, na fase mais tardia da doença (11 meses de idade). Análise de Western blotting revelou níveis elevados do receptor purinérgico P2Y2 em ambos os músculos estudados. A terapia com suramina diminui o nível deste receptor significativamente. Concomitantemente, observamos redução dos níveis do canal de cálcio ativado por estiramento (TRPC1) e do cálcio total, o que no músculo cardíaco pode explicar a redução da mionecrose (diminuição da creatina quinase cardíaca no plasma e da troponina I no miocárdio). A atividade e o nível da metaloproteinase-9 (MMP-9), principal envolvida na remodelação da matriz extracelular e formação de fibrose, estavam elevados no coração distrófico em relação ao coração normal. A suramina promoveu aumento adicional da atividade da MMP-9 e dos níveis do seu inibidor tecidual, a TIMP-1. A suramina preveniu a redução da beta-distroglicana, componente do complexo distrofina-proteínas que encontra-se reduzido no coração distrófico. De maneira geral, a suramina promoveu efeitos semelhantes no diafragma distrófico, no que se refere ao cálcio total, TRPC1, MMP-9 e TIMP-1. Estes dados sugerem que, tanto no coração quanto no diafragma distróficos, o receptor purinérgico P2Y2 desempenha papel importante em vias de sinalização relacionadas ao cálcio (através do TRPC1) e da modulação da matriz extracelular (através da MMP-9 e TIMP-1). A suramina, por ser utilizada em outras doenças humanas, com doses e efeitos colaterais já estabelecidos em humanos, tem potencial para a terapia da cardiomiopatia na DMD, merecendo atenção em estudos clínicos desta doença / Abstract: Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a progressive muscle-wasting disease that causes respiratory and cardiac failure and results in death at about 30 years of age. The lack of dystrophin in mdx mice, the experimental model of DMD, causes sarcolemmal breakdown and increased calcium influx followed by myonecrosis and fibrosis. Purinergic receptors are involved in the pathogenesis of dystrophinopathies. Activation of these receptors by ATP triggers secondary signaling pathways that promote calcium entry and activates the formation of fibrosis. In the present study, we investigated if suramin, an anti-fibrotic drug and an antagonist of purinergic receptors, modifies total calcium and calcium related-proteins and affects metalloproteinases and their tissue inhibitors in the heart and diaphragm muscle of dystrophic mice, in the later stage of the disease (11 months of age). Western blotting analysis indicated increased levels of P2Y2 purinergic receptor in the both muscles studied, which were significantly decreased by suramin. Concomitantly, suramin lead to a reduction in total calcium and in the levels of the stretch-activated calcium channel TRPC1, which may explain the reduction of cardiac necrosis (decreases heart creatine kinase in plasma and troponin I in the myocardium). The activity and level of metalloproteinase-9 (MMP-9), the main involved in remodeling of the extracellular matrix and formation of fibrosis, were elevated in the dystrophic heart compared to normal heart. Suramin promoted further increase in MMP-9 activity and in the levels of MMP-9 inhibitor TIMP-1. Suramin prevented the reduction of beta-dystroglycan, one of the main components of the dystrophin-protein complex usually reduced in dystrophic heart. In general, suramin promoted similar effects in the dystrophic diaphragm, with respect to total calcium, TRPC1, MMP-9 and TIMP-1. These data suggest that P2Y2 purinergic receptor plays an important role in signaling pathways involved in calcium regulation (via TRPC1) and modulation of extracellular matrix (via MMP-9 and TIMP-1), in cardiac and respiratory dystrophic muscles. Suramin may be a potential alternative to treat dystrophic cardiomyopathy deserving attention in clinical trials / Doutorado / Anatomia / Doutora em Biologia Celular e Estrutural