Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-26T13:55:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_AlexandraPatriciaZilli_M.pdf: 4771481 bytes, checksum: c93f606d7341691886c4410b37598910 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O complexo da globina beta humana compreende uma região de 70 kb e contém numerosos polimorfismos. O conjunto desses polimorfismos está em desequilíbrio de ligação com o gene da globina 'beta POT. S' e são denominados de haplótipos. O estudo desses haplótipos mostrou que a mutação da globina 'beta POT. S' teve origens independentes em diferentes regiões. Essas regiões dão a denominação aos haplótipos, desta forma os haplótipos clássicos são Bantu, Benin, Senegal, Camarões e Indiano. Nesse estudo foram caracterizados, do ponto de vista molecular, 13 pacientes que apresentaram haplótipos atípicos. Este estudo possibilitou a caracterização desses haplótipos e, nos casos de recombinação, permitiu identificar a região do provável ponto de quebra. Os haplótipos foram determinados pela análise dos seguintes sítios para RFLP: XMn I - 5' gene 'gama G', Hind III- 'psi G' e 'psi A', Hinc II - 'psi beta', Hinf I - 5' 'beta' e Ava II - 'beta'. Adicionalmente, foram selecionadas 3 regiões de repetições de dinucleotídeos, ao longo do "cluster" da globina beta - no interior do LCR-HS2 (repetição de TA), entre o LCR e o gene 'epsilon' (repetição CA) e no interior, do segundo intron do gene 'gama G' (repetição TG). Essas regiões foram analisadas por PCR radioativo e observadas em gel de poliacrilamida desnaturante. Regiões microsatélites são comumente usadas como marcadores polimórficos, porém seu papel funcional é fracamente documentado. Além disso, foram estudadas outras seqüências: 3 localizadas em uma região de 8 kb entre LCR-HS2 e o gene 'epsilon'; uma localizada 5' do gene 'beta' e outra localizada 3' do gene 'beta', no sítio hipersensível 3' (HS3'), por SSCP não radioativo. Foram também caracterizadas por sequenciamento a região de repetição localizada entre LCR e o gene 'epsilon' (repetição CA) e também uma região de repetição localizada na posição ¿530 5' do gene 'beta'- (AT)xTy. Em 8 dos 13 alelos analisados, o ponto de quebra da recombinação ocorreu dentro de uma região de 2 kb entre LCR e gene 'epsilon' - 7 alelos revelaram. um haplótipo híbrido Bantu/Benin e 1 revelou o híbrido Bantu/Senegal. Em 3 outros casos nós observamos dois pontos de quebra no mesmo alelo - um localizado dentro de uma região de 2 kb entre LCR e o gene 'epsilon' e o segundo localizado entre os genes 'delta' e 'beta'. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Human beta globin gene complex spans a region of 70 kb and contains numerous sequence variants. Alleles within the cluster of polymorphic sites stretching from 5' of the 'epsilon'-globin gene to 3' of 'psi' 'beta'-globin gene show strong linkage disequilibrium; similar linkage disequilibrium exists for the alleles in the cluster of sites from 5'of the 'beta' globin gene to 17 kb downstream. No linkage disequilibrium exists between these two subclusters. The 9 kb region between the 5' and 3' clusters has therefore been proposed as a recombination "hot-spot". This study intends to investigate if the length of the repeats is haplotype specific and to narrow the 'beta' globin cluster in order to characterize the most approximate breakpoint. We described 13 sickle cell patients with at least one recombinant allele. 'Beta' haplotypes were derived from the following RFLPs in the 'beta¿ globin gene cluster: XMn I - 5' 'gama SOB. G', Hind III - 'gama SOB. G' and 'gama SOB. A', Hinc II -'psi' 'beta', Rinc II - 3' 'psi' 'beta', Rinf I - 5' 'beta' and Ava II 'beta'. RFLPs were analyzed using restriction enzyme analysis of DNA thât was specifically amplified by the PCR. Furthermore, we selected 3 short tandem repeats (STR) throughout the 'beta' globin cluster - within the LCR - HS2 (TA repeat), between LCR and 'epsilon' gene (CA repeat), and within the second intron (lVS2) of the 'gama SOB. G' (TG repeat). These sequences were analyzed by radiolabeled PCR and observed in denaturing polyacrilamide gel. These microsatellites are commonly used as polymorphic markers but their potential functional role is poorly documented. ln addition, we analyzed other sequences - three sequences located within a region of 8 kb between 'beta'LCR-HS2 (second DNase I hypersensitive site within the, beta locus control region) and 'epsilon' gene, one located 5'of the 'beta' globin gene and one located. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador : Reginaldo Palazzo Jr / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Eletrica e de Computação / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:33:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rocha_AndreaSantosLeiteda_M.pdf: 3658632 bytes, checksum: 1d4fe7c8c888bc70780adf35f2c02241 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Esta dissertação trata da aplicação de métodos polinomiais e topológicos que além de permitir uma classificação rigorosa das moléculas de DNA que formam Nós e Catenanes indicando a estrutura das moléculas relacionadas, são capazes de distingüir entre um número muito grande de Nós e Catenanes qual deverá surgir como produto da recombinação. A motivação principal para esta pesquisa foi o fato de que através da aplicação desses métodos polinomiais e topológicos foram construídos alguns modelos matemáticos capazes de prever os produtos da recombinação. Neste trabalho, tais modelos são construídos da seguinte maneira: No caso de recombinação que possui sítios com repetições diretas, emprega-se a técnica polinomial baseada nas experiências com a enzima resolvase Tn3 para determinar os produtos deste tipo de recombinação; No caso de recombinação que possui sítios com repetições inversas, aplica-se a té<;nica polinomial baseada nas experiências com a enzima integras e para determinar os produtos deste tipo de recombinação / Abstract: This work deals with the application of polynomial and topological methods that in addition to allowing a rigorous classification of DNA molecules forming knots and catenanes, indicate the structure of the related molecules. The power of topological methods lies in the ability to distinguish alternative models by predicting which ones, among an often astronomic number of knots and catenanes, should arise as products of the recombination. The main motivation for this research was the fact that through the application of this polynomial and topological methods some mathematical models are built; these models are capable to predict the products of the recombination. 1n the case of recombination that has sites with direct repetitions, we use the polYl1omial method, which is based on laboratory experiments using resolvase Tn3 enzyme to determine the products of this type of recombination. 1n the case of recombination that has sites with inverted repetitions, we use the polynomial method, which is based on laboratory experiments using integrase enzyme to determine the products of this type of recombination / Mestrado / Mestre em Engenharia Elétrica

No presente trabalho foram realizados estudos genéticos em Trichoderma pseudokoningii e verificada a atividade celulolítica da linhagem selvagem, mutante e recombinantes obtidos de heterocários. Com o objetivo de se obter mutantes auxotrófico, testou-se dois agentes mutagênicos, a luz ultravioleta e o ácido nitroso. Através de irradiação com luz ultravioleta foram obtidos dezenove mutantes autotróficos simples e dezoito com dupla deficiência, e dois mutantes morfológicos com ácido nitroso. Sete mutantes com dupla marcas autotróficas e morfológicas foram utilizados para a obtenção de heterocários. Colônias recombinantes foram obtidas diretamente dos heterocários em diferentes meios seletivo, sugerindo a ocorrência de parameiose nesta espécie. Colônias protróficas crescidas em MM eram binucleadas e de coloração verde, indicando um sistema não autônomo para a pigmentação de conídios. Estas colônias dicarióticas formaram setores em MC acrescido de benomyl, sugerindo a ocorrência de uma fase diplóide altamente instável e parassexualidade. Foi descrito um método para a obtenção e fusão de protoplastos. Colônias recombinantes foram recuperadas diretamente de produtos de fusão, numa freqüência aproximadamente 1000 vezes superior em relação às obtidas à partir de heterocário. Quanto a atividade celulolítica da linhagem selvagem e mutantes, observou-se que os valores de índices enzimáticos foram diretamente proporcionais ao maior ou menor grau de compactação das colônias. Colônias de linhagem selvagem originadas de protoplastos regenerados apresentaram índices de atividade celulolítica inferiores em relação às colônias originadas de conídios, indicando um efeito negativo da protoplastização sobre a atividade enzimática / In this work genetic studies were carried out in Trichoderma pseudokoningii in order to test the cellulolitic activity in wild and mutant strains and recombinants obtained from heterokaryons. Two mutagenic agents were tested aiming to obtain auxotrophic mutants-Utraviolet light and nitrous acid. Through UV light were obtained 19 simple auxotrophic mutants and 18 double mutants and through nitrous acid two morphological mutants. Seven color mutants carrying two auxotrophic markers were used to get heterokaryons. Recombinant colonies were directly recovered from heterokaryons onto different seletive media, indicating the occurrence of parameiosis. Prototrophic colonies grown in minimal medium were binucleated and green coloured, revealing a non autonomous system for conidia pigmentation. These dikaryotic colonies gave rise to sectors in complete medium plus benomyl suggesting the occurrence of a highly unstable diploid phase and parassexuality. It was described as well a method for protoplasts obtention and fusion. Recombinant colonies were directly recovered from fusion products in a frequency almost 1000 times higher than the recombinants from heterokaryons. For cellulolitic activity in wild and mutant strains it was shown that the enzymatic indexes were directly proportional to the higher or smaller degree of colony compactation. Colonies regenerated from protoplasts of the wild strain showed worst cellulolitic activity than colonies rosen from conidia. This is a negative effect of protoplastization on the cellulolitic activity. Electrophoretic patterns for esterase of the wild and mutant strains showed different profiles according to number and band position. It might be suggested a relation between band patterns and conidia coloration.

O diagnóstico da tuberculose por métodos tradicionais é lento e laborioso. Por outro lado, os testes moleculares são rápidos, mas com custo elevado para países em desenvolvimento. Este projeto teve o objetivo de inserir no micobacteriófago D29 o gene que codifica a proteína verde fluorescente (eGFP) e estudar o fago recombinante na detecção rápida de bacilos da tuberculose. Para tanto, foi inserido o cassete Hsp60- eGFP no genoma do fago D29 por recombinação. Micobacteriófagos recombinantes purificados foram utilizados para infectar M. smegmatis mc2 155 e M. tuberculosis H37Rv durante um período de 1- 6h nas temperaturas de 30&#176;C, 37&#176;C e 42&#176;C. Bactérias fluorescentes foram observadas em um período de 2h, mas em número reduzido, indicando que o micobacteriófago lisou às células rapidamente, dificultando a expressão da eGFP e visualização em microscópio de fluorescência. A deleção do gene LysA, foi efetuada a fim de aumentar o período de latência do fago. Não foi possível a purificação de fagos recombinantes, devido à baixa quantidade de recombinantes nos halos de inibição. Será necessário a redução da atividade o gene LysA e, provavelmente, de outros genes associados a lise celular a fim de aumentar a concentração de eGFP no interior da célula. / Classical biochemical methods for Mycobacterium tuberculosis identification are lengthy and time-consuming. On the other hand, molecular assays are rapid but expensive for developing countries. This project aimed to insert into the mycobacteriophage D29, the gene coding for the green fluorescent protein (eGFP) and use the recombineered phage to detect Mycobacterium tuberculosis rapidly and less costly. For that, the Hsp-eGFP cassette was inserted into D29 genome. Recombineered mycobacteriophages was purified and used to infect M. smegmatis mc2 155 and M. tuberculosis H37Rv from 1-6 hs at 30&#176;C, 37&#176;C and 42&#176;C. Observation of fluorescent bacteria was difficult and only a small number of them were seen at 2 hs of infection. This indicated that recombineered bacteriophages were lysing cells rapidly. Deletion of LysA gene, was carried out to increase the time needed for bacterial lysing. it was not possible to purify mutant mycobacteriophages due to the low concentration of recombinant phages. We conclude that might be necessary the deletion of other genes such as LysB, a gene also involved in cell lysis and reduction LysA activity to increase the concentration of eGFP inside cells.

No presente trabalho foram realizados estudos genéticos em Trichoderma pseudokoningii e verificada a atividade celulolítica da linhagem selvagem, mutante e recombinantes obtidos de heterocários. Com o objetivo de se obter mutantes auxotrófico, testou-se dois agentes mutagênicos, a luz ultravioleta e o ácido nitroso. Através de irradiação com luz ultravioleta foram obtidos dezenove mutantes autotróficos simples e dezoito com dupla deficiência, e dois mutantes morfológicos com ácido nitroso. Sete mutantes com dupla marcas autotróficas e morfológicas foram utilizados para a obtenção de heterocários. Colônias recombinantes foram obtidas diretamente dos heterocários em diferentes meios seletivo, sugerindo a ocorrência de parameiose nesta espécie. Colônias protróficas crescidas em MM eram binucleadas e de coloração verde, indicando um sistema não autônomo para a pigmentação de conídios. Estas colônias dicarióticas formaram setores em MC acrescido de benomyl, sugerindo a ocorrência de uma fase diplóide altamente instável e parassexualidade. Foi descrito um método para a obtenção e fusão de protoplastos. Colônias recombinantes foram recuperadas diretamente de produtos de fusão, numa freqüência aproximadamente 1000 vezes superior em relação às obtidas à partir de heterocário. Quanto a atividade celulolítica da linhagem selvagem e mutantes, observou-se que os valores de índices enzimáticos foram diretamente proporcionais ao maior ou menor grau de compactação das colônias. Colônias de linhagem selvagem originadas de protoplastos regenerados apresentaram índices de atividade celulolítica inferiores em relação às colônias originadas de conídios, indicando um efeito negativo da protoplastização sobre a atividade enzimática / In this work genetic studies were carried out in Trichoderma pseudokoningii in order to test the cellulolitic activity in wild and mutant strains and recombinants obtained from heterokaryons. Two mutagenic agents were tested aiming to obtain auxotrophic mutants-Utraviolet light and nitrous acid. Through UV light were obtained 19 simple auxotrophic mutants and 18 double mutants and through nitrous acid two morphological mutants. Seven color mutants carrying two auxotrophic markers were used to get heterokaryons. Recombinant colonies were directly recovered from heterokaryons onto different seletive media, indicating the occurrence of parameiosis. Prototrophic colonies grown in minimal medium were binucleated and green coloured, revealing a non autonomous system for conidia pigmentation. These dikaryotic colonies gave rise to sectors in complete medium plus benomyl suggesting the occurrence of a highly unstable diploid phase and parassexuality. It was described as well a method for protoplasts obtention and fusion. Recombinant colonies were directly recovered from fusion products in a frequency almost 1000 times higher than the recombinants from heterokaryons. For cellulolitic activity in wild and mutant strains it was shown that the enzymatic indexes were directly proportional to the higher or smaller degree of colony compactation. Colonies regenerated from protoplasts of the wild strain showed worst cellulolitic activity than colonies rosen from conidia. This is a negative effect of protoplastization on the cellulolitic activity. Electrophoretic patterns for esterase of the wild and mutant strains showed different profiles according to number and band position. It might be suggested a relation between band patterns and conidia coloration.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:13:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9517_1.pdf: 1475575 bytes, checksum: 406ed6c670c74f251013d1791839dbae (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / O uso constante de inseticidas em programas de saúde pública tem sido a principal medida para o controle de insetos vetores de doenças epidêmicas em países tropicais e subtropicais. Anualmente toneladas de inseticidas sintéticos, sobretudo os organofosforados, são lançadas ao meio ambiente na tentativa de controlar o crescimento populacional dos vetores. Os larvicidas são compostos capazes de matar larvas que se desenvolvem em reservatórios grandes ou pequenos, naturais ou artificiais de água, muitas vezes própria ao consumo humano. Os compostos dilapiol e espinosade são classificados como larvicidas, sendo o dilapiol um óleo essencial extraído da espécie vegetal Piper aduncum e o espinosade uma combinação de dois metabólitos produzidos pela bactéria Saccharopolyspora spinosa. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos genotóxicos do dilapiol e do espinosade, por meio do teste de mutação e recombinação somática (SMART) de asa de Drosophila melanogaster. Na metodologia foi utilizado o cruzamento padrão, sendo as larvas com 72h de vida submetidas durante 48h à exposição crônica a três diferentes concentrações não letais do dilapiol (3,2, 16 e 80 μm/mL) e do espinosade (0,32, 0,96 e 1,6 μg/mL). Para avaliação do efeito genotóxico, as frequências das manchas de pelos mutantes nas asas dos indivíduos tratados foram comparadas com os respectivos controles negativos. Os resultados indicam que ambos compostos tiveram atividade toxico-genética positiva, em todas as concentrações testadas, exceto o espinosade a 0,96 μg/mL. A atividade genotóxica se deu, principalmente, à indução de recombinação e, em menor escala, à mutação somática, verificada apenas para o espinosade. Os resultados aqui apresentados contribuem para o conhecimento dos riscos genotóxicos do uso destes dois inseticidas, que merecem ainda mais estudos, feitos em outros modelos experimentais e outras condições e metodologias para que sejam considerados seguros para a saúde humana e o meio ambiente

GONDIM, R. N. D. G. Diversidade genética de norovírus, co-infecções e estado nutricional de crianças em estudo caso-controle no semiárido brasileiro. 2017. 105 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Ivone Sousa (ppgcm.ufc@gmail.com) on 2017-08-18T15:44:28Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_rndgg.pdf: 3249367 bytes, checksum: 2b719da4016b1f1633735600acd82f2f (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-21T11:27:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_rndgg.pdf: 3249367 bytes, checksum: 2b719da4016b1f1633735600acd82f2f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-21T11:27:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_rndgg.pdf: 3249367 bytes, checksum: 2b719da4016b1f1633735600acd82f2f (MD5) Previous issue date: 2017-07-26 / Norovirus (NoV) infection is a major global health problem with high incidence morbid-mortality rates. However, the impact of NoV on child development remains poorly described. We wanted to investigate the genetic diversity of circulating NoV strains in children from the semiarid region of Brazil, and its associations with other co-infections and clinical/nutritional status. This case-control study was conducted in six different cities with children aged 2-36 months during the period from April 2010 to March 2011. Cases considered were children who had at least one episode of diarrhea in the last 14 days. Detection and quantification of NoV were performed by RT-qPCR, followed by molecular and phylogenetic analysis. The presence of NoV was 45.2% (75/166), and ranged from 8–77.7% among the cities examined. A lower z-score index was associated with the presence of NoV with weight for age – WAZ (P = 0.034), weight for height – WHZ (P= 0.033), and body mass index for age – BAZ (P = 0.033). In addition, NoV infection was associated with more frequent respiratory symptoms (P= 0.0096). GII.P7 (polymerase genotype) and GII.3 (capsid genotype) were the most frequent NoV genotypes, and analysis of the ORF 1-2 junction identified recombinant NoV strains in 80% (12/15) of the sequenced samples. With regards to co-infections, infections with enteroaggregative Escherichia coli (P = 0.0046) were more frequent in the absence of NoV, whereas in the presence of Shigella a positive correlation was observed with NoV (P = 0.0199). Among the positive cases of NoV, diarrheal episodes were associated with the presence of entero-aggregative E. coli, and simultaneous absence of Cryptosporidium and shiga toxin-producing E. coli (P = 0.0167). The present study highlighted the high genetic variability of NoV in the semiarid region of Brazil, and underlines its role in co-infections and infant nutritional status, thus contributing to better understandings of its impact on infant development and its / A infecção por Norovirus (NoV) é um importante problema de saúde pública mundial devido a altas taxas de morbi-mortalidade. No entanto, o impacto ocasionado pelo NoV no desenvolvimento infantil permanecem pouco descritos. O presente estudo investigou a diversidade genética de cepas de NoV circulantes em crianças no semiárido brasileiro e suas associações como o estado clínico/nutricional e coinfecções. O estudo caso-controle foi realizado em seis diferentes cidades com crianças de 2-36 meses de idade durante o período de abril de 2010 a março de 2011. Foram considerados casos, as crianças que tiveram pelo menos um episódio de diarréia nos últimos 14 dias. A detecção e quantificação de NoV foram realizadas por RT-qPCR, seguidas de análises moleculares e filogenéticas. A taxa de detecção de NoV foi de 45,2% (75/166) e variou de 8% a 77,7% entre as cidades avaliadas. Um menor índice de escores z foi associado a presença de NoV, em peso por idade – WAZ (P = 0,034), peso por altura – WHZ (P= 0,033) e índice de massa corporal por idade – BAZ (P = 0,033). Além disso, a infecção por NoV foi associada à sintomas respiratórios mais freqüentes (P = 0,0096). GII.P7 (genótipo da polimerase) e GII.3 (genótipo do capsídeo) foram os genótipos de NoV mais freqüentes, e a análise da junção de ORF 1-2 identificou cepas recombinantes de NoV em 80% (12/15) das amostras sequenciadas. No que diz respeito às co-infecções, observou-se que as infecções por Escherichia coli enteroagregativa (P = 0,0046) foram mais frequentes na ausência de NoV, enquanto que na presença de Shigella observou-se uma correlação positiva com NoV (P = 0,0199). Entre os casos positivos para NoV, os episódios diarréicos foram associados à presença de E. coli enteroagregativa e ausência simultânea de Cryptosporidium e E. coli produtora de shiga toxina (P = 0,0167). O presente estudo demonstrou alta variabilidade genética de NoV circulantes no semiárido brasileiro e ressalta seu papel em relação a avaliação do estado nutricional infantil e coinfecções, contribuindo assim para uma melhor compreensão do seu impacto no desenvolvimento infantil e da sua epidemiologia.

O diagnóstico da tuberculose por métodos tradicionais é lento e laborioso. Por outro lado, os testes moleculares são rápidos, mas com custo elevado para países em desenvolvimento. Este projeto teve o objetivo de inserir no micobacteriófago D29 o gene que codifica a proteína verde fluorescente (eGFP) e estudar o fago recombinante na detecção rápida de bacilos da tuberculose. Para tanto, foi inserido o cassete Hsp60- eGFP no genoma do fago D29 por recombinação. Micobacteriófagos recombinantes purificados foram utilizados para infectar M. smegmatis mc2 155 e M. tuberculosis H37Rv durante um período de 1- 6h nas temperaturas de 30&#176;C, 37&#176;C e 42&#176;C. Bactérias fluorescentes foram observadas em um período de 2h, mas em número reduzido, indicando que o micobacteriófago lisou às células rapidamente, dificultando a expressão da eGFP e visualização em microscópio de fluorescência. A deleção do gene LysA, foi efetuada a fim de aumentar o período de latência do fago. Não foi possível a purificação de fagos recombinantes, devido à baixa quantidade de recombinantes nos halos de inibição. Será necessário a redução da atividade o gene LysA e, provavelmente, de outros genes associados a lise celular a fim de aumentar a concentração de eGFP no interior da célula. / Classical biochemical methods for Mycobacterium tuberculosis identification are lengthy and time-consuming. On the other hand, molecular assays are rapid but expensive for developing countries. This project aimed to insert into the mycobacteriophage D29, the gene coding for the green fluorescent protein (eGFP) and use the recombineered phage to detect Mycobacterium tuberculosis rapidly and less costly. For that, the Hsp-eGFP cassette was inserted into D29 genome. Recombineered mycobacteriophages was purified and used to infect M. smegmatis mc2 155 and M. tuberculosis H37Rv from 1-6 hs at 30&#176;C, 37&#176;C and 42&#176;C. Observation of fluorescent bacteria was difficult and only a small number of them were seen at 2 hs of infection. This indicated that recombineered bacteriophages were lysing cells rapidly. Deletion of LysA gene, was carried out to increase the time needed for bacterial lysing. it was not possible to purify mutant mycobacteriophages due to the low concentration of recombinant phages. We conclude that might be necessary the deletion of other genes such as LysB, a gene also involved in cell lysis and reduction LysA activity to increase the concentration of eGFP inside cells.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:02:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2080_1.pdf: 693319 bytes, checksum: 06ba5e0a91cf68ac0aaa48e656e42501 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / De acordo com a extensão do cinetócoro, os cromossomos podem ser divididos em monocêntricos, com cinetócoro localizado, e holocinéticos, com cinetócoro difuso. Diversos organismos com cromossomos holocinéticos, incluindo todas as plantas com este tipo cromossômico, apresentam uma meiose bastante peculiar, na qual são observadas 2n cromátides individualizadas na prófase II. Este tipo de meiose é denominado meiose invertida ou pós-reducional, baseado na hipótese de que a segregação das cromátides irmãs na anáfase I seria a causa das cromátides individualizadas na prófase II. Neste trabalho, foi analisado o curso meiótico de duas espécies de Cyperaceae, Rhynchospora pubera (2n = 10) e R. tenuis (2n = 4), que apresentam meiose quiasmática e aquiasmática, respectivamente. Foram encontrados fortes indícios de meiose invertida nas duas espécies, uma vez que os cinetócoros das cromátides irmãs apresentaram ligação anfitélica com o fuso na metáfase I tanto nos univalentes de R. tenuis como nos bivalentes de R. pubera. A ligação anfitélica dos cinetócoros irmãos é um pré-requisito para a segregação das cromátides irmãs na anáfase I. Adicionalmente, foram investigados neste trabalho dois aspectos da prófase I que poderiam interferir na formação de quiasmas na meiose de R. tenuis. Neste caso, foi avaliada a presença de Rad51, uma enzima que atua no reparo de quebras na dupla fita de DNA, necessária para a formação do quiasma, e de ASY1, uma das proteínas que compõe o elemento axial dos cromossomos meióticos e é necessária para a sinapse. A formação de quebras na dupla fita de DNA na prófase I parece ocorrer normalmente, com base na distribuição dos sinais da recombinase Rad51. No entanto, a imunolocalização da ASY1 revelou a formação de filamentos anormais, com aspecto borrado, em R. tenuis, contrastando com os filamentos nítidos observados em R. pubera. A análise da distribuição dos sítios de DNAr 5S e das bandas CMA+ confirmou que a meiose de R. tenuis é assináptica. Baseado nos defeitos sinápticos observados em R. tenuis, é possível que a ausência de quiasmas deva-se a uma falha na formação do complexo sinaptonêmico, uma vez que as etapadas inicias de recombinação estão presentes na espécie

Orientador: Reginaldo Palazzo Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Eletrica e de Computação / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:09:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Faria_LuzineteCristinaBonanide_M.pdf: 3925570 bytes, checksum: 2aed52215bf626bef90df6f45edf1f51 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Nesta dissertação ao apresentamos um procedimento para a determinação rigorosa das estruturas topologica, geometrica e algebrica das moleculas de DNA formando Nos e Catenanes, que surgem como produtos de recombinação, e com isso indicando a estrutura das moleculas relacionadas. Este procedimento faz uso dos conceitos da classificação de tangles e Nos racionais. A partir destas aplicações, apresentamos uma proposta de modelos matematicos, o modelo tangle e a descrição algebrica via frações continuas, capazes de prever os produtos da recombinação com sitios repetidos inversamente, baseando-se nas experiencias realizadas por Cozzarelli et. ali. com as enzimas resolvase Tn3 e integrase / Abstract: In this work we present a technique to determine rigorously the topologic, geometric and algebraic structure of the DNA molecules forming knots e catenanes that arise as products of the recombination, and so indicating the structure of related molecules. This procedure is based on the concepts of rational knots and rational tangles classification. From these applications, we propose two mathematical models, the tangle model and the algebraic description via continued fractions, which are capable to predict the products of the recombination with inversely repeated sites based on laboratory experiments realized by Cozzarelli et. ali., using resolvase tn3 and integrase enzymes / Mestrado / Telecomunicações e Telemática / Mestre em Engenharia Elétrica