Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T17:19:01Z No. of bitstreams: 1 2010_AlliceRodriguesFerreira.pdf: 493312 bytes, checksum: 38d77029716a151f89050eea62646bad (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T17:19:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_AlliceRodriguesFerreira.pdf: 493312 bytes, checksum: 38d77029716a151f89050eea62646bad (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-17T17:19:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_AlliceRodriguesFerreira.pdf: 493312 bytes, checksum: 38d77029716a151f89050eea62646bad (MD5) / O cultivo in vitro de embriões afeta mecanismos epigenéticos envolvidos no controle da expressão de genes relacionados ao desenvolvimento embrionário e inativação do cromossomo X. Fêmeas de mamíferos têm dois cromossomos X, e machos somente um. Isto levou à criação de um mecanismo evolutivo de compensação de dose, chamado inativação do cromossomo X. Durante a embriogênese, um dos dois cromossomos X é aleatoriamente inativado em cada célula da massa celular interna, e preferencialmente o paterno no trofoblasto. O objetivo deste estudo foi estabelecer o padrão de inativação do cromossomo X, avaliando a expressão alelo específica do gene MAO-A (monoamina oxidase tipo A) em embriões bovinos produzidos in vitro nos estádios de quatro células, oito a dezesseis células, mórula, blastocisto e blastocisto expandido. Um total de 100 embriões foi produzido in vitro (PIV), utilizando ovócitos aspirados de nove novilhas da raça Nelore homozigotas para o alelo A, inseminados com sêmen de um touro Holandês homozigoto para o alelo G sexado para fêmea, previamente genotipados para o gene MAO-A. Dois pools com 10 embriões cada, dos estágios de 4 células, 8-16 células, mórula, blastocisto e blastocisto expandido foram coletados. Esses pools de embriões foram congelados a -80°C para posterior extração de RNA total. Um pool de 15 ovócitos maturados e 5 palhetas de espermatozóides foi utilizado para extração de RNA. Para a fenotipagem do gene MAO-A nos pools de embriões foi utilizada a técnica de RT-PCR-RFLP. Para isso foram desenhados dois pares de primers flanqueando uma região específica do gene (GenBank accession number NM_181014.2) com um polimorfismo, permitindo assim a detecção da expressão alelo específica (Bos taurus taurus X Bos taurus indicus), ou seja, permitindo detectar qual alelo, se paternal ou maternal estava sendo expresso. Um produto de amplificação foi gerado por RT-PCR com os primers externos de cada pool de embriões de cada estágio de desenvolvimento e purificado. xv Posteriormente, os fragmentos foram sequenciados pela metodologia de dideoxy em um sequenciador ABI 3130xl (Applied Biosystem) usando os primers internos foward. O RNA total extraído das células espermáticas e ovócitos maturados foram utilizados para a detecção da presença do RNA mensageiro do gene MAO-A por RT-PCR. Os resultados mostraram que ambos os alelos estão expressos em embriões de 4-células, 8-16-células, blastocisto e blastocisto expandido, com a expressão do X paterno desaparecendo em mórula. Pode-se especular que ambos os cromossomos X estão ativos nos dois estádios iniciais, sendo inativados posteriormente e reativados em blastocisto. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Embryo culture system may affect epigenetic mechanisms involved in controlling gene expression related to embryo development and X chromosome inactivation. Female mammal has two X chromosomes, and male only one. This led to the creation of an evolutionary mechanism of dosage compensation, called X chromosome inactivation. During embryogenesis, one of two X chromosomes is randomly inactivated in each cell of the inner cell mass, and preferably the paternal chromosome in trophoblast cells. The objective of this study was to characterize the allele-specific expression of the Monoamine Oxidase type A (MAO-A) X-linked gene, during preimplantational development of bovine embryos produced in vitro. One hundred in vitro embryos were produced using oocytes aspirated from nine heifers, homozygous for the MAO-A A allele, which were inseminated using X-semen sexed from a Holstein bull homozygous for the G allele. Two pools of 10 embryos each of 4 cell, 8- 16 cell, morula, blastocyst and expanded blastocyst stages were collected. Embryos were frozen at -80 °C until total RNA extraction. Total RNA from sperm and oocytos were also isolated. For phenotyping of the MAO-A gene in the pools of embryos the RT-PCR-RFLP technique was used. Two pairs of primers, flanking a specific region of the gene (GenBank accession number NM_181014.2) carrying a single nucleotide polymorphism, were designed. Thus, the allele-specific expression was detected, identifying paternal and maternal MAO-A mRNA. Amplicons of each pool of embryos were produced by using RT-PCR, and they were sequenced by the dideoxy method using an ABI 3130 xl sequencer (Applied Biosystem). Total RNA isolated from sperm cells was used to detect MAO-A mRNA by using RT-PCR. Results showed the presence of mRNA from both alleles in 4-cell, 8-16-cell, blastocyst and expanded blastocyst embryos, and only from the maternal allele in morula. We can speculate xvii that both X chromosomes are active in the two earliest stages, being inactivated and subsequently reactivated in blastocyst.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Ecologia, 2011. / Submitted by Rafael Barcelos Santos (rafabarcelosdf@hotmail.com) on 2011-07-05T20:32:51Z No. of bitstreams: 1 2011_RaphaelIgordaSilvaCorreaDias.pdf: 1796097 bytes, checksum: ffaf4c060d8ace1e176586bb40508a47 (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-05T22:02:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_RaphaelIgordaSilvaCorreaDias.pdf: 1796097 bytes, checksum: ffaf4c060d8ace1e176586bb40508a47 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-05T22:02:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_RaphaelIgordaSilvaCorreaDias.pdf: 1796097 bytes, checksum: ffaf4c060d8ace1e176586bb40508a47 (MD5) / Reprodução cooperativa é observada em aproximadamente 9% das aves e é definida como sendo um sistema em que mais de dois indivíduos auxiliam na criação dos filhotes em uma única tentativa reprodutiva. Esses sistemas são geralmente compostos por pares socialmente monogâmicos que são auxiliados por filhotes produzidos em estações anteriores. Nesse estudo, o sistema social e de acasalamento do pica-pau-do-campo (Colaptes campestris campestris) foi avaliado, utilizando-se técnicas tradicionais de marcação e observação, assim como, análises genéticas e modelagem estatística. O estudo revelou que o pica-pau-do-campo é uma espécie cooperativa facultativa, que apresenta um sistema reprodutivo variável, incluindo casais monogâmicos e grupos com poliginia simultânea. Adicionalmente, foi detectada a ocorrência de estratégias reprodutivas alternativas como são os casos da reprodução comunitária (i.e. mais de uma fêmea pondo ovos no mesmo ninho) em alguns grupos poligínicos e do parasitismo de ninho intra-específico. Algumas evidências sugerem que restrições ecológicas, especialmente em termos de dispersão, juntamente com traços de história de vida, devem ter favorecido a evolução da reprodução cooperativa na espécie, embora a seleção de parentesco aparente ter um papel importante no sistema. O estudo revelou também que a produtividade na espécie é diretamente afetada pela presença de auxiliares no grupo, mas que fatores climáticos podem ser determinantes para a qualidade dos filhotes produzidos. Em relação à influência dos auxiliares no investimento parental, os resultados sugerem que a espécie apresenta tanto uma redução compensatória quanto um efeito aditivo. Entretanto, foi observado que os auxiliares apresentam um investimento superior em filhotes mais aparentados com os mesmos. Esse estudo revelou que o pica-pau-do-campo apresenta componentes comportamentais de alta complexidade que faz dele um modelo para futuros estudos testando diferentes hipóteses relacionadas com a evolução da reprodução cooperativa. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cooperative breeding is found in approximately 9% of bird species and is defined as a system wherein more than two individuals help to rear the offspring during a single breeding attempt. These systems are generally composed by socially monogamous pairs assisted by offspring produced in previous years. In this study, the social and mating systems of the campo flicker (Colaptes campestris campestris) were evaluated, using traditional techniques of banding and observation, as well as through genetic analysis and statistical modeling. The study revealed that the campo flicker is a facultative cooperative breeder with a variable mating system that includes monogamous pairs and groups with simultaneous polygyny. Additionally, the occurrence of alternative mating strategies was detected and included cases of joint-nesting (i.e. more than one female laying eggs in the same nest) in some polygynous groups and intra-specific nest parasitism. Some evidence suggests that ecological constraints, especially in terms of dispersal, in addition to life-history traits, must have favored the evolution of cooperative breeding in the species, although kin selected benefits must have an important role in the system. Results showed that the productivity in the species is directly affected by the presence of auxiliaries in the group, but that climatic factors may be crucial in determining the quality of fledglings. Relative to the influence of auxiliaries upon parental investment, results suggest that the species presents both a compensatory reduction as well as an additive effect. However, auxiliaries invested more in offspring to which they were genetically related. This study revealed that the campo flicker presents behavioral components of high complexity, which suggests that this species is a good model for future studies testing different hypotheses related to the evolution of cooperative breeding.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2014. / Submitted by Vinícius Cordeiro Galhardo (viniciuscg123@gmail.com) on 2014-05-15T15:16:00Z No. of bitstreams: 1 2014_RachelBrazArcanjo.pdf: 5428505 bytes, checksum: 24877300d593e0caed124f66e2dfbf71 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-05-20T16:28:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_RachelBrazArcanjo.pdf: 5428505 bytes, checksum: 24877300d593e0caed124f66e2dfbf71 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-20T16:28:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_RachelBrazArcanjo.pdf: 5428505 bytes, checksum: 24877300d593e0caed124f66e2dfbf71 (MD5) / O 4-nonilfenol (NP) é proveniente da degradação, em meio aquoso, do nonilfenol etoxilato, composto de massiva produção mundial, presente em formulações de tintas, detergente, pesticidas e estabilizantes de plásticos. O NP é considerado um desregulador endócrino, pois é capaz de atuar como mimetizador de estrógeno. O período da vida em que ocorre a exposição aos desreguladores endócrinos é crucial para determinar a extensão dos efeitos, pois organismos em desenvolvimento são mais sensíveis e os danos causados podem ser mais graves. O NP é um poluente mundial, encontrado frequentemente na população humana, em amostras de sangue, gordura corporal, leite materno e fluido folicular. O objetivo deste trabalho foi verificar alterações em diversos parâmetros reprodutivos em fêmeas de camundongos Balb/C tratadas com NP à dosagem de 50 mg/kg de peso corpóreo, durante 21 dias, período em que atingiram a maturidade sexual. Após o tratamento, um grupo de fêmeas passou por duas tentativas de acasalamento, a fim de se analisar o efeito sobre os filhotes. O NP não causou alterações no peso dos animais durante o tratamento, nem no dia da abertura vaginal e na taxa de fecundidade das fêmeas. Os parâmetros de número de filhotes vivos nascidos, peso destes no primeiro dia de vida e proporção de fêmeas da ninhada também não foram alterados pelo NP. O peso relativo dos ovários, útero, fígado, rins e baço, independentemente da idade da fêmea, foram semelhantes para todos os grupos experimentais. A proporção de folículos ovarianos antrais, pré-antrais e degenerados não foi alterada pelo tratamento com NP, assim como não foram observadas alterações morfológicas ou patológicas, inclusive na ultraestrutura. Acredita-se que o NP disponível ou acumulado durante o período de maturação sexual das fêmeas não alcançou níveis que produzissem uma alteração significativa nos parâmetros analisados, alguns dias depois de cessada a exposição. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / 4-Nonylphenol (NP) is the product of the aqueous degradation of nonylphenol ethoxylate, a widely used substance present in paints, detergents, pesticides and plastic stabilizers. NP is considered an endocrine disruptor due to its capacity to interact with the endocrine system, mimicking estrogen activity. The period of life in which exposure occurs is crucial for determining the extension of effects of NP on living organisms, since developing organisms are usually more sensitive to endocrine disruptors. NP is a global pollutant, frequently found in human populations in samples of blood, body fat, breast milk and follicular fluid. The objective of this study was to evaluate changes in several reproductive parameters in female Balb/C mice treated with NP at 50 mg/kg body weight during 21 days, period in which they reach sexual maturity. After treatment, a group of animals passed by two chances of mating, for analysis of some effect in littermate. NP had no effect on body mass during treatment, nor did it alter the day of vaginal opening and the fertility index of females. Also the number of liveborn offspring, the weight of pups on the first day of life and the sexratio on littermates were not affected by NP. The relative weights of ovaries, uterus, liver, kidneys and spleen, independently of the animal age, were similar between the experimental groups. The proportion of preantral, antral and degenerated ovarian follicles was not modified by treatment with NP, and no morphological or pathological alterations were observed, even in the ultrastructure of follicles. It is suggested that NP available or accumulated during the period of sexual maturation did not reach levels capable of producing significant alterations on the analyzed reproductive parameters.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar, por meio de uma abordagem metaanalítica, quais os principais fatores relacionados ao peso corporal e ao ganho de peso na recria da novilha que influenciam a taxa de prenhez aos 18 meses. Para tanto, foram utilizados, de forma agregada, dados de 1.398 novilhas de corte, provenientes de seis experimentos. As informações relacionadas à metodologia e aos resultados de cada trabalho foram tabuladas em planilha do Microsoft Excel, constituindo a sistematização dos dados. As variáveis independentes analisadas foram: peso aos sete meses (P7M), ganho de peso diário dos sete aos doze meses (GPD7-12), peso aos doze meses (P12M), o ganho de peso diário dos doze aos quinze meses (GPD12-15), peso aos quinze meses (P15M), ganho de peso diário dos quinze aos dezoito meses (GPD15-18), ganho de peso diário dos sete aos dezoito meses (GPD7-18), peso aos dezoito meses (P18M). A variável resposta foi a taxa de prenhez (TP). O P18M e o GPD7-18 apresentaram alta correlação (r= 0,681 e r= 0,857) com a TP (p<0,05), além de uma alta correlação entre si (r= 0,981, p<0,05). As demais variáveis apresentaram baixa correlação com a TP. O peso ao início do acasalamento e o ganho de peso dos sete aos dezoito meses são as variáveis mais importantes na determinação da taxa de prenhez em novilhas acasaladas ao sobreano no outono. De acordo com os resultados obtidos, o peso ao desmame e as variáveis relacionadas aos pesos e ao ganho de peso nas etapas intermediárias da recria não são bons indicadores na determinação da taxa de prenhez. Altas taxas de prenhez podem ser obtidas desde que o ganho de peso na recria seja suficiente para que novilha atinja o peso mínimo aos 18 meses, independente do momento em que ocorre esse ganho. / The purpose of this research was to evaluate, through a meta-analysis approach, the main factors related to body weight and weight gain of rearing heifers which affect pregnancy rate at 18 months. Therefore, it had been used, in an aggregate form, data from 1,398 beef heifers deriving from six experiments. Information regarding the methodology and results of each of the experiments were tabulated in Microsoft Excel spreadsheet, making the systematic data. Independent variables analyzed were: weight at seven months-old (W7M), daily weight gain from seven to twelve months old (DWG7- 12), weight at twelve months-old (W12M), daily weight gain from twelve to fifteen months old (DWG12-15), weight at fifteen months-old (W15M), daily weight gain from fifteen to eighteen months old (DWG15-18), daily weight gain from seven to eighteen months old (DWG7-18), weight at eighteen months (W18M). The response-variable was pregnancy rate (PR). W18M and DWG7- 18 showed high correlation (r= 0.681 e r= 0.857) with PR (p<0.05) and between themselves (r= 0.981, p<0.05). The other variables showed low correlation with PR. Weight at first mating and daily weight gain from seven to eighteen months old are the most important variables affecting pregnancy rate of heifers mated at 18 months old in the autumn. According with the obtained results, weaning weight and variables related to weight gain in the post-weaning period are not the appropriate indicators to predict pregnancy rate. Higher pregnancy rates can be obtained whereas enough post-weaning weight gain and minimum weight at first mating are reached, irrespective of when this gain are obtained.

Sendo o tamanho corporal uma importante variável nos sistemas de produção pecuária no Brasil, analisaram-se os desempenhos de machos e fêmeas da raça Hereford, de diferentes tamanhos corporais, desde a desmama ao abate dos machos e ao primeiro parto nas fêmeas. Os animais foram classificados em escalas de FRAME, sendo 1, 2 e 3 chamados posteriormente de Pequenos, Médios e Grandes, respectivamente. As avaliações mensais foram capazes de mostrar diferenças de desenvolvimento e desempenho tanto em machos quanto em fêmeas em determinadas épocas do ano. As variáveis analisadas nas fêmeas foram peso e condição corporal durante todo o trabalho, variação de peso, altura da garupa, taxa de prenhez e idade ao primeiro parto. Nos machos, por sua vez, as variáveis analisadas, da desmama ao abate, foram peso, altura da garupa, variação de peso, peso de abate e características de carcaça, além do peso dos cortes comerciais e seus rendimentos. As diferenças encontradas entre as fêmeas Pequenas, Médias e Grandes, existentes em alguns parâmetros avaliados não foram capazes de afetar a taxa de prenhez aos 14 meses de idade. As diferenças de tamanhos corporais afetaram a idade à concepção, sendo as Pequenas e Médias mais jovens, porém as relações entre tamanho corporal e desempenho reprodutivo de fêmeas não ficaram totalmente evidenciadas, provavelmente pela pequena diferença entre tamanhos corporais dos animais do rebanho avaliado. Nos machos, foram determinadas diferenças de desempenho e desenvolvimento com magnitudes variadas conforme a época do ano. As diferenças de peso oscilaram em 30kg entre grupos. O tamanho corporal afetou o peso de abate, peso de carcaça quente e de alguns cortes comerciais. As diferenças encontradas, embora por vezes significativas, podem estar atribuídas à proximidade de tamanho dos grupos. Esta proximidade de tamanhos, apenas um a dois pontos na escala BIF, não permitiu observar maiores diferenças. / As the body size an important variable in livestock production systems in Brazil, analyzed the performance of males and females of Hereford, of different body sizes, from weaning to slaughter the males and in females at first calving. The animals were classified into FRAME scales, with 1, 2 and 3 later called the Small, Medium and Large, respectively. The monthly evaluations were able to show differences in development and performance in both males and females in at certain times of the year. The variables analyzed were in females weight and body condition during the whole experiment, changes in weight, hip height, pregnancy rate and age at first birth. In males, in turn, the variables analyzed, from weaning to slaughter, weight, hip height, weight variation, slaughter weight and carcass traits, along with the weight of retail cuts and their income. The differences between females Small, Medium and Large, in certain parameters were not able to affect the pregnancy rate at 14 months of age. Differences in body size affected the age at conception, and the Small and Medium younger, but the relationships between body size and reproductive performance of females were not fully observed, probably due to the small difference between body sizes of animals in the herd assessed. In males, were certain differences in performance and development with magnitudes varied depending on the season. The weight differences between groups ranged in 30kg. The body size affect the slaughter weight, hot carcass weight and some commercial cuts. The differences found, although sometimes significant, can be attributed to the proximity of group size. This proximity of sizes, just two points on a scale BIF, not allowed to observe major differences.

Apesar dos avanços nos procedimentos de maturação, fecundação e cultivo in vitro a porcentagem de embriões produzidos capazes de se desenvolver até o estágio de blastocisto ainda é reduzida. Segundo Gilchrist et al. (2010) um dos principais fatores que afeta esta taxa de desenvolvimento embrionário é a incompetência do oócito em realizar a maturação. Com o objetivo de aumentar esta eficiência, têm-se estudado a interação entre fatores secretados pelos oócitos e a maturação oocitária. O objetivo deste experimento foi determinar as taxas de clivagem e de desenvolvimento embrionário até blastocisto, a partir de dois procedimentos de adição às gotas de MIV de oócitos desnudos (ODs). Os complexos Cummuli oócitos (CCOs) foram obtidos mediante punção de folículos com diâmetro entre 2 e 8 mm. Os CCOs que apresentaram cummulus compacto e citoplasma homogêneo foram selecionados para maturação e desnudamento. Os CCOs foram maturados em gotas de 50μL de meio de maturação (Meio TCM 199 modificado) sob óleo mineral e incubados a 38,5 oC em estufa com atmosfera de 5% de CO2 em ar e umidade relativa saturada. Aqueles selecionados para serem desnudos, permaneceram em TCM Holding [Meio 199 modificado]. Os oócitos foram desnudos com o auxilio de uma pipeta de vidro estirada em fogo. Os CCOs permaneceram 9 horas em meio de maturação quando foram colocados em cocultivo, respeitando-se a densidade de 0,5 ODs/μL. Parte dos CCOs foram postos nas gotas de maturação onde se encontravam os ODs (Grupo 1) e outra parte recebeu os ODs em suas gotas de maturação (Grupo 2). Os grupos Controle 50μL e Controle 100μL permaneceram em meio de maturação. Todos os grupos, experimentais e controles, permaneceram em maturação por 24 horas. A fecundação com sêmen reaquecido foi realizada durante 20 horas nas mesmas condições atmosféricas da maturação. As estruturas foram cultivadas em SOFm em gotas de 80μL, sob óleo mineral e foram mantidas a 38,3ºC em estufa de cultivo com atmosfera de 5% O2, 5% CO2 , 90% N2 e umidade relativa saturada. As taxas de clivagem foram avaliadas em D2 enquanto as taxas de blastocisto foram avaliadas em D7. Foram realizadas seis repetições. Os resultados foram analisados aplicando-se o teste do Qui-quadrado, para P<0,05. As taxas de clivagem não diferiram entre os grupos (C 100μL: 68,53%; C 50μL: 69,56%; G 1: 66,19%; G 2: 68,05%). Porém comparação das taxas de blastocisto obtidas entre os grupos houve diferença significativa. O grupo 2 mostrou-se superior quando comparado ao grupo controle de 50μL (23,38% e 13,04%, respectivamente).Os demais grupos não diferiram entre si (C 100μL: 14,60%; G1: 18,30%). Os resultados nos permitem concluir que a adição de ODs que secretaram FSOs ao meio de maturação não alterou as taxas de clivagem, mas promoveu maiores taxas de desenvolvimento embrionário ao estágio de blastocisto quando os ODs foram adicionados às gotas que já continham os CCOs. / In vitro maturation of oocytes, fertilization and development of blastocysts has been achieved in several species, however the rate of blastocyst development is still limited. According Gilchrist et al. (2010) this efficiency is limited by the oocyte competence. To improve these results, some research groups have studied the interaction among factors secreted by oocytes and oocyte maturation. The aim of our experiments was to determine the cleavage and blastocyst rates, from two procedures of addition of denuded oocytes (DOs) to IVM droplets medium. The Cumulli-oocyte complexes (COC) were recovered by aspiration of 2 to 8mm follicles using a 18 G needle. Oocytes with a compact Cumulus cells (CC) and homogeneous cytoplasm were selected for maturation and denudation. The COC were matured in 50 μL drops in TCM199 medium modified under mineral oil at 38.5oC in an humidified atmosphere of 5% CO2 in air. Denuded oocytes were generated by removing CCs from COCs by repeated passage of the oocytes through a fire-pulled glass pipette. The COCs remained 9 hours in IVM when they were placed in co-culture, respecting the density of 0.5 DOs/μL. COCs were randomly allocated into 2 treatment groups during IVM: group 1, COCs were placed into maturation medium droplets in which there were the DOs; group 2, DOs received the COCs into their maturation medium droplet. All groups, experimental and control, remained into IVM medium for 24 hours. Fertilization was performed with frozen-thawed semen and the oocytes were incubated with sperm for 20 hours into the same atmospheric conditions of IVM. The presumptive zigots were in vitro cultured (IVC) in SOFm in an humidified atmosphere 5% O2, 5% CO2 e 90% N2. Cleavage rates were evaluated in D2 while the blastocyst rates were evaluated in D7 after insemination. Six replicates were realized.The results were analyzed applying the chi-square, for P ≤ 0.05. The cleavage rates did not differed among the groups C 100μL: 68.53%; C 50μL: 69.56%; G 1: 66.19%; G 2: 68.05%). However, there was a significant difference on blastocyst rate. Group 2 was better than control group 50μL (23.38% e 13.04%, respectively). The other groups did not differ from each other (C 100μL: 14.60%; G1: 18.30%). In conclusion, the addition of FSOs to maturation medium did not modified the cleavage rates, but promotes more efficiently embryo development rates to the blastocyst stage when DOs are added to the drops that already contained the COCs.

O presente trabalho constou de três estudos. No primeiro estudo, cinco ejaculados de 30 machos foram analisados conforme a manutenção da MOT a 17ºC, sendo classificados em três tipos: MOT <60% nas 72h (EI); MOT ≥60% nas 72h e <60% nas 144h (EII) e MOT ≥60% nas 144h (EIII). Doze machos foram selecionados e distribuídos em três grupos: MAIOR, MÉDIA e MENOR sensibilidade espermática ao resfriamento. Em seguida, foram coletados cinco ejaculados de cada macho, sendo a MOT avaliada a cada 24h, e a integridade da membrana espermática (IM) e de acrossomas normais (NAR) nas 24, 72, 120 e 168h. Machos menos sensíveis ao resfriamento apresentaram menor variação na MOT do período pré- para o pós-seleção. Diferenças entre os machos foram observadas desde as 24 até 168h para MOT, nas 120 e 168h para MI e nas 72 e 168h para NAR. A MOT foi mais afetada que MI e NAR durante o armazenamento do sêmen in vitro. No estudo 2 foi avaliada a possibilidade de reverter a sensibilidade espermática ao resfriamento pela troca de plasma seminal (PS) entre machos com diferente manutenção da MOT a 17ºC. Foram utilizados ejaculados de cinco cachaços selecionados e classificados como: menor (MES) e maior sensibilidade ao resfriamento (MAS). Foram utilizados seis tratamentos, com cinco repetições cada. Nos tratamentos T1 e T3, o sêmen dos machos MES e MAS, respectivamente, foram processados de acordo com o protocolo convencional. Foi efetuada centrifugação (800g por 10 min) e adição do PS (10mL) homólogo para os espermatozóides MES e MAS, respectivamente, nos T2 e T4. Após a centrifugação, foi realizada a troca do PS, sendo que espermatozóides dos machos MES foram expostos ao PS dos machos MAS (T5) e o PS dos machos MES foi adicionado aos espermatozóides dos machos MAS (T6). A MOT foi avaliada a cada 24h, durante sete dias de conservação. NAR e de IM foram avaliados nas 24, 72, 120 e 168h. Diferenças na MOT, entre os machos MES (T1) e MAS (T3), foram observadas após armazenamento de 48h. Não foram observadas alterações em MOT e IM, quando foi efetuada a troca de PS entre os machos MES e MAS. Não foi possível reverter a maior sensibilidade ao resfriamento de espermatozóides suínos, após a ejaculação, com a adição de 10% do PS de machos com sêmen de menor sensibilidade. No terceiro estudo, foi avaliada a fertilidade de sêmen suíno pelo teste de ligação de espermatozóides a um substrato sintético. A MOT e o percentual de espermatozóides ligados (PEL) foram avaliados nas 5, 24, 48 e 72 horas de armazenamento a 17ºC. O PEL foi determinado em soluções contendo 6,25 ou 12,5 milhões de espermatozóides/mL, com ou sem albumina sérica bovina (BSA), preparadas a partir de dois a cinco ejaculados de cada um dos quatro machos. Houve correlação positiva (r=0,33) entre a MOT e o PEL. Os machos diferem quanto à capacidade de ligação de seus espermatozóides ao substrato sintético, a partir de 24 horas de armazenamento do sêmen. Maior percentual de espermatozóides ligados ao substrato sintético é verificado com a inclusão de BSA e com o aumento da concentração espermática.

O trabalho foi realizado, no período de outubro a dezembro de 1996. Foram utilizadas 80 fêmeas híbridas F1, oriundas de cruzamentos de Landrace e Large White distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos: T1 – fornecimento de ração sem glicose e de forma restrita, 2 kg ao dia (duas vezes ao dia); T2 – fornecimento de ração sem glicose e à vontade; T3 – fornecimento de ração com 20% de glicose e de forma restrita, 2 kg ao dia (duas vezes ao dia), e, T4 – fornecimento de ração com 20% de sacarose, à vontade. Como fonte de glicose foi utilizado o açúcar cristal. A ração continha 3.150 kcal/Kg de E.D., 14%, de proteína bruta, 0,65 de lisina, 0,9% de cálcio e 0,45% de fósforo disponível. Todas as fêmeas foram pesadas individualmente ao alojamento e na apresentação do 10 e do 20 estro. Os tratamentos foram aplicados no momento em que as fêmeas manifestaram o 10 estro e terminaram quando estas apresentaram o 20 estro. As fêmeas foram inseminadas artificialmente (IA) no 20 estro e abatidas 28-34 dias após para a contagem do número de ovulações e número de embriões viáveis. Foram analisados, os dados referentes à taxa de prenhez, a taxa de sobrevivência embrionária e a taxa de retorno ao estro. A taxa de ovulação das fêmeas do T4 foi superior aquelas das fêmeas dos T1 e T3 (respectivamente 17,80; 15,26; 15,60) (p0,01). T4 foram diferentes quanto ao número de embriões viáveis daquelas do T1 (1,94 a mais; p0,03), do T2 (1,27 a mais; p0,05) e do T3 (3,6 a mais; p0,01). Na análise do contraste ração restrita (T1 e T3) vs. ração à vontade (T2 e T4), foi observada um aumento do número de ovulações (15,38 vs 17, 34, respectivamente; p<0,01) e também no número de embriões viáveis (11,52 vs 13,64, respectivamente; p<0,04). As fêmeas que receberam ração com açúcar (T3 e T4) não diferiram (p>0,05) dos que receberam ração sem açúcar (T1 e T2), nas variáveis estudadas. O arraçoamento à vontade, independente da adição de sacarose, foi efetivo no aumento do número médio de ovulações e número médio de embriões viáveis. Apesar do maior número de ovulações, a taxa de sobrevivência embrionária não foi diferente entre os tratamentos. As taxas de prenhez e retorno ao estro também não apresentaram diferenças as fêmeas dos diferentes tratamentos.

Este trabalho teve três objetivos principais: a) Estabelecer valores de referência para os parâmetros bioquímicos e hematológicos do jundiá cultivado em açude; b) Determinar a CL50 da cipermetrina ao jundiá, bem como verificar o efeito nos parâmetros sangüíneos; c) Determinar as características físicas e químicas do sêmen do jundiá. Os animais foram obtidos de açudes de um Produtor de Peixes em Rolante, RS e conduzidos ao Laboratório do ICBS, UFRGS, onde permaneceram em tanques de 500l. O sangue era obtido por punção do vaso caudal através de seringa descartável, transferidos a tubos com e sem EDTA 10%, e os testes bioquímicos e hematológicos realizados no HCPA. Para a avaliação da CL50 da cipermetrina no jundiá grupos (n ≥10) de animais foram tratados com a exposição a 8 diferentes concentrações de cipermetrina (ppm) (0:controle; 0,08; 0.1; 0,12; 0,16; 0,2; 0,24; 0,36). Os peixes foram observados após 24, 48, 72 e 96h do início do tratamento para avaliar o percentual de mortalidade. No estudo do estresse metabólico, grupos (n ≥6) receberam os tratamentos: ausência de exposição ao pesticida (controle) e duas doses (0.08 e 0.12 ppm) de cipermetrina. Foram feitas coletas de sangue antes, após 2, 4 e 8 dias da aplicação do pesticida para análise no HCPA. Para o estudo do sêmen, este foi obtido em diferentes períodos durante as 4 estações. A densidade espermática foi medida pela técnica do espermatócrito e pela contagem microscópica. A duração da motilidade espermática foi observada num microscópio, usando para interpretação uma escala arbitrária variando de 0 a 5. Parte do sêmen foi centrifugado para a obtenção do fluido seminal, o qual foi imediatamente congelado a –200C até análise no HCPA Com a concentração 0,12 ppm as variações bioquímicas foram incrementadas e já se observaram alterações nos movimentos e no equilíbrio. Em estações de aqüicultura, produtores podem realizar avaliação periódica em uma pequena população de seus peixes, quantificando o grau de estresse metabólico. Esses indicadores de estresse podem ser precocemente detectados apesar da aparência exterior e comportamentos normais dos peixes. A técnica para a medida da densidade espermática através do espermatócrito apresentou correlação com a contagem celular por microscópio, com a vantagem de ser mais simples, rápida e econômica. As características que foram encontradas no sêmen parecem ser bons indicadores da qualidade espermática e podem auxiliar na seleção de machos doadores de gametas de alta qualidade em sistemas de cultivo deste peixe.

A técnica de transferência nuclear é uma ferramenta que possibilita a produção de embriões clones que podem ser utilizados tanto na clonagem reprodutiva, proporcionando o nascimento de produtos, como modelo para o estudo de diversos mecanismos fisiológicos durante o desenvolvimento embrionário. Este trabalho teve como objetivos a otimização da técnica de clonagem no Laboratório de Embriologia e Biotécnicas de Reprodução (FAVET, UFRGS), avaliar a taxa de sucesso da clonagem interespécie, e testar e eficiência da utilização de oócitos vitrificados como citoplasmas receptores para a reconstrução dos embriões clones, sendo realizado em três etapas. A primeira teve por objetivo o estabelecimento da técnica de clonagem, bem como sua otimização nas nossas condições, dando condições para que os experimentos subseqüentes pudessem ser realizados. Para isto foram realizados experimentos in vitro comparando diferentes meios de manipulação, sistemas de ativação química, meios de cultivo e fontes protéicas no cultivo dos embriões, e células oriundas de diferentes origens e animais como doadores de núcleo. Os resultados obtidos in vitro alcançaram taxas de 64,7% de clivagem e de 19,5% de blastocistos. Um grupo de embriões foi transferido para receptoras (n=24), e foram observadas 54,2% de prenhezes aos 35 dias, 8,3% de prenhezes aos 260 dias e 4,2% de nascimentos. Os resultados obtidos in vitro alcançaram taxas de 64,7% de clivagem e de 19,5% de blastocistos. Um grupo de embriões foi transferido para receptoras (n=24), e foram observadas 54,2% de prenhezes aos 35 dias, 8,3% de prenhezes aos 260 dias e 4,2% de nascimentos.A segunda parte dos experimentos teve por objetivo a produção de clones interespécies utilizando o citoplasma bovino como receptor para células ovinas, caprinas e suínas. As taxas de clivagem nos grupos NTSCi ovino (60,3%), caprino (68,4%) e suína (57,1%) não diferiram dos grupos controles NTSC bovino. A taxa de blastocisto observada nos embriões NTSCi ovinos (10,3%) foram semelhantes às taxas observadas no grupo NTSC bovino (12,7%). No grupo NTSCi caprino, 5,3% dos embriões chegaram ao estádio de blastocisto, enquanto que no grupo NTSCi suíno não houve desenvolvimento até o estádio de blastocisto. Na terceira parte do trabalho, experimentos visando a utilização de oócitos vitrificados imaturos com citoplasma receptor foram realizados. Foram submetidos a maturação 764 complexos cumuli-oócitos vitrificados, e 73,0% destes foram recuperados após o desnudamento e 46,8% apresentavam corpúsculo polar, taxas significativamente inferiores às observadas nos oócitos não vitrificados (91,4% e 65,8%, respectivamente). As taxas de sobrevivência após a micromanipulação (77,8%), taxa de fusão (82,1%) e de sobrevivência após a ativação (79,9%) do grupo vitrificado não apresentaram diferença significativa com o grupo controle não vitrificado. As taxas de blastocistos também não apresentaram diferença entre os grupos vitrificado e não vitrificado (16,7% e 23,4%) respectivamente. Em resumo, os resultados deste trabalho demonstraram que oócitos bovinos frescos ou vitrificados, nas nossas condições estabelecidas, foram capazes de suportar o desenvolvimento de embriões clones bovinos até o estádio de blastocisto ou a termo, e proporcionam citoplasmas compatíveis para o desenvolvimento de embriões clones interespécie até o estádio de blastócito. / Somatic cell nuclear transfer (NTCS) procedures is a valuable tool for the production of clone embryos for use in reproductive cloning, by providing the birth of live animals, and for use as a research model, allowing the study of physiologic mechanisms during the embryonic development. This work aimed to optimize cloning procedures at the Embryology and Reproductive Technology Laboratory (FAVET, UFRGS), to evaluate the success rate of interspecies cloning, and to test the effectiveness of vitrified oocytes as recipient cytoplasm for embryo reconstruction, being carried out in three stages. The first stage was focused on the establishment of the cloning technique and the optimization of procedures and conditions in the lab so that the subsequent experiments could be accomplished. Thus, in vitro experiments were performed to compare different manipulation media, chemical activation systems, manipulating media, source of protein supplementation to the embryo culture media, and distinct cell types and genotypes. The mean cleavage and blastocyst rates obtained after conditions were optimized were 64.7% and 9.5%, respectively. Pregnancy rates on Days 35 and 260 of gestation and calving rate at term following the transfer of a group of embryos to synchronous recipient cows (n=24) were 54.2%, 8.3% and 4.2%, respectively. The second stage of the study evaluated the success rate of the production of interspecies clones (NTSCi) using the bovine oocyte as recipient cytoplasm for transferred nuclei from ovine, caprine or porcine cells. Cleavage rates using ovine (60.3%), caprine (68.4%) and porcine (57.1%) nuclei did not differ from controls (bovine nuclei). Blastocyst rates observed for NTSCi embryos using ovine nuclei (10.3%) were similar to those observed in the bovine NTSC group (12.7%). The NTSCi-caprine group reached a 5.3% blastocyst rate, whereas no development to the blastocyst stage was observed when using porcine cells as nucleus donor. In the third stage of this work, experiments evaluated the efficiency of vitrified bovine oocytes as recipient cytoplasms for cloning by TNCS. Following vitrification and warming, 764 cumulus-oocyte complexes were in vitro-matured. A total of 73.0% was recovered after cumulus removal, with 46.8% presenting visible polar bodies, which were significantly lower than rates observed in non-vitrified oocytes (91.4% and 65.8%, respectively). However, survival rates following micromanipulation (77.8%), fusion rates (82.1%) and survival after activation (79.9%) of oocytes were not different from the control group (non-vitrified oocytes). In addition, blastocyst rates did not differ between vitrified and non-vitrified groups (16.7% and 23.4%, respectively). In summary, results from this study demonstrated that fresh or vitrified bovine oocytes, under our optimized conditions, were able to support development of bovine clone embryos to the blastocyst stage or to term, and provided a compatible cytoplasm for the development of interspecies clone embryos to the blastocyst stage.