O experimento 1 verificou o efeito de um protocolo de indução e sincronização de estros em novilhas sobre a cronologia das parições e a repetição de crias como primíparas. 194 novilhas Hereford e Braford foram divididas em 2 grupos: Tratamento, submetido a um protocolo misto de observação e sincronização de estros e inseminação artificial a tempo fixo (IATF); e Controle, submetido ao manejo convencional de inseminação artificial (IA). Ambos grupos foram submetidos a repasse por touros. O Experimento 2 avaliou o efeito de um pré-tratamento com norgestomet (NOR), prévio a um protocolo de sincronização para IATF em novilhas, sobre as taxas de prenhez, assim como os efeitos de características relacionadas com a reprodução. 74 novilhas Angus e cruzas, 18 e 24 meses de idade, com peso médio de 276 kg, condição corporal (CC) mínima de 3 (1-5) e avaliadas por ultra-som para o status ovariano, onde utilizaram-se somente novilhas 2 e 3 (1-3). Pesagens a cada 30 dias, desde os 60 dias anteriores aos serviços. Coletado sangue para dosagem de progesterona. Os animais foram divididos em 2 grupos: Tratamento, que recebeu um implante com 6 mg de NOR, na orelha direita, permanecendo por 14 dias; e Controle, que não recebeu implante. Dez dias após a retirada dos implantes, todas as novilhas foram a um protocolo para IATF, com uma injeção de GnRH, 7 dias depois uma aplicação de prostaglandina (PGF) e 48 horas mais tarde, as IATF e outra aplicação de GnRH. Quatorze dias após iniciou-se repasse com 2 touros, por mais 45 dias. O Experimento 3 avaliou o efeito da suplementação com progestágeno (acetato de medroxi-progesterona; MAP) ou progesterona, anteriormente a um protocolo para IATF, e verificou o efeito de características associadas à reprodução de novilhas, e de distintos manejos alimentares sobre as taxas de prenhez. Utilizaram-se 102 novilhas Angus, cruzas Angus e Braford, 22-24 meses, peso médio 241 kg e CC mínima de 2,5. Pesagens a cada 30 dias, a partir dos 60 dias anteriores aos serviços e ultra-som para o status ovariano (1-3). Quarenta e cinco dias antes da estação foram divididas em 2 grupos, Sem Suplementação, com 27 novilhas exclusivamente sobre pastagem natural, e Com Suplementação, com 75 novilhas consumindo 1% do peso em concentrado. Coletas de sangue para dosagem de progesterona. Grupos novamente divididos em 3, para receber dispositivo com progesterona, ou uma esponja intravaginal com MAP, ambos por 10 dias. O grupo Controle não recebeu nenhum tratamento. Na retirada dos implantes, todas as novilhas receberam PGF, e 4 dias depois, foram a um protocolo para IATF, com 2 mg de benzoato de estradiol na colocação de uma esponja com MAP. Sete dias depois, a esponja foi retirada, sendo aplicada PGF, seguindo-se nova aplicação de BE 24 horas depois, e IATF 52-56 horas após a PGF. Observação de estros 2 vezes por dia, desde a PGF até a IATF. Passados 14 dias, iniciou repasse por 4 touros, durante 45 dias. O Experimento 4 avaliou o efeito da suplementação de novilhas de corte com gammaorizanol, sobre o desempenho reprodutivo, assim como o efeito de outras características sobre a reprodução. Utilizaram-se 84 novilhas Angus, Hereford, Braford e Angus x Hereford, com 24 meses, peso médio de 283 kg e CC ≥ 3. Pesagens a cada 30 dias, desde 60 dias antes até o início dos serviços, coletas de sangue para dosagem de progesterona. Duas avaliações da espessura de gordura subcutânea, sobre a região P8 por ultra-som, com intervalo de 30 dias. Animais foram divididos em 2 grupos: Tratamento, que recebeu desde 45 dias antes até o início da estação reprodutiva, 150 ml/dia de gamma-orizanol junto à 1 kg de concentrado; e Controle, com 150 ml/dia de melaço, junto à 1 kg do mesmo concentrado. Observações de estros 2 vezes/dia e IA. Dez dias após aplicou-se PGF a todas ainda não observadas em estro, prosseguindo-se a observação e IA por mais 25 dias. Após, repasse por 2 touros por 45 dias. Diagnósticos de gestação por ultra-som, 30 dias após as IATF ou IA, e novamente, 30 dias depois de retirados os touros. No experimento 1, a porcentagem de prenhez na primeira estação reprodutiva foi semelhante para os 2 grupos. Entretanto, a repetição de crias nas primíparas do grupo Tratamento foi significativamente maior. No Experimento 2, não foram observadas diferenças entre as taxas de prenhez à IATF e final, e conforme a idade e o status ovariano. No Experimento 3, taxas de estro superiores para o grupo Progesterona em relação ao Progestágeno e Controle. Entretanto, taxas de prenhez semelhantes entre os grupos. Foi encontrada diferença entre o peso 24 dias antes dos serviços, para as novilhas que emprenharam em relação às que permaneceram vazias e para os pesos das novilhas ao final da temporada. As novilhas com status ovariano 2 e 3 foram mais pesadas em relação ao 1, mas as taxas de prenhez não diferiram com o status ovariano. O concentrado proporcionou superior GMD para o grupo Com Suplementação, mas sem diferenças para as taxas de prenhez. No Experimento 4, taxas de prenhez semelhantes para Tratamento e Controle. Novilhas prenhas foram as que acumularam maior quantidade de gordura na região P8. Concluindo, o manejo com sincronização de estros e IATF na primeira estação reprodutiva em novilhas, apesar de apresentar índices idênticos de prenhez ao final da temporada, proporcionou diferença significativa nos índices de prenhez na segunda estação. O pré-tratamento com norgestomet não proporcionou superiores taxas de prenhez em novilhas. Da mesma forma, o priming com progesterona ou MAP, não proporcionou taxas de prenhez superiores, assim como a utilização de suplementação alimentar. O peso corporal antes ou dos serviços, foi superior para as novilhas que emprenharam. Novilhas com status ovariano 2 e 3, foram mais pesadas. O fornecimento de gamma-orizanol não proporcionou superiores taxas de prenhez ou peso corporal, entretanto, novilhas que resultaram prenhas, acumularam maior quantidade de gordura antes da estação reprodutiva. / Experiment 1 verified the effect of an estrus synchronization protocol in heifers on parturition chronology and primiparous reproductive performance. 194 Hereford and Braford heifers were divided into 2 groups: Treatment group, submitted to an estrus observation and synchronization to fixed-time artificial insemination (FTAI) protocol; and Control group, submitted to a conventional artificial insemination (AI) management. All groups were submitted to a bull’s clean-up period. Experiment 2 evaluated the norgestomet (NOR) priming effect, before a fixed-time artificial insemination protocol (FTAI) in heifers, on pregnancy rates, as well as the effects of reproductive related characteristics. 74 Angus and cross-bred heifers, 18 and 24 months old, with 276 kg of body weight, body condition score (BCS) minimum of 3 (1- 5), and ovarian status evaluated by US. Only the 2 or 3 class heifers were used (1-3). Heifers were weighted at 30 days intervals, starting 60 days before the reproductive period. Blood was collected for progesterone assay. Heifers were divided in 2 groups: Treatment group, that received an ear implant with 6 mg of NOR, in the right ear, removing it 14 days after; and Control group, did not receive the implant. Ten days after the implants removal, all heifers were submitted to FTAI protocol, which including a GnRH i.m. injection, 7 days after the prostaglandin (PGF) aplication, and 48 hours later, FTAI and a second GnRH injection. Fourteen days later, started a clean-up period with 2 bulls, for 45 days more. Experiment 3 evaluated the progestin (medroxiprogesterone acetate; MAP) or progesterone suplementation effect, before a FTAI protocol, and evaluated the effects of reproductive associated characteristics in heifers, and feeding managements over pregnancy rates. 102 Angus, cross-bred Angus and Braford heifers, 22-24 months old were used, with an average body weight of 241 kg, and a minimum BCS of 2,5. Heifers were weighted at 30 days intervals, starting 60 days before the breeding period and an ecography was performed to evaluate ovarian status. Fourty five days before the season, heifers were divided into 2 groups. Without Suplementation group, with 27 heifers, only over natural pastures, and With Suplementation group, with 75 heifers receiving suplementation (72% TDN and 15% GP) about 1% body weight. Blood was collected for progesterone assay. Groups were again divided into 3, to receive a progesterone device or an intravaginal MAP sponge, for 10 days. The Control group, not received the treatment. At the implants removal, all heifers received PGF, and 4 days later were submitted to a FTAI protocol, with 2 mg estradiol benzoate with an intravaginal MAP sponge aplication. Seven days later, the sponge was removed, and PGF was injected, with a new EB injection, 24 hours later, and FTAI 52-56 hours after PGF. Estrus was observed from PGF injection to FTAI. A clean-up period started 14 days after with 4 bulls, for more 45 days. Experiment 4 evaluated the gamma-orizanol suplementation effects and other reproductive associated characteristics on fertility of beef heifers. 84 Angus, Angus x Hereford, Hereford and Braford heifers, 24 months old were used, with an average body weight of 283 kg and BCS ≥ 3. Heifers were weighted at 30 days intervals, to register ADG, and blood samples were collected for progesterone assay. Two subcutaneous fat thickness ecographic evaluations were performed at P8 region, with a 30 days interval. Animals were divided into 2 groups: Treatment group, that received 150 ml/day of gammaorizanol with 1 kg of concentrate since 45 days before the reproductive season start ; and Control group, with 150 ml/day of molasses with 1 kg of concentrate during the same period. Estrus control was done twice for day with AI of estrous heifers. Ten days later PGF was applied to all heifers that did not show estrus. The AI management continued for 25 days. In sequence, a clean-up period with 2 bulls was performed for 45 days. Gestational diagnostics by ecography at 30 days after FTAI, and again at 30 days after bulls removal. In experiment 1, pregnancy rates were similar between groups after first reproductive season. However, the repetition of Treatment group was significantly higher. In Experiment 2, were not observed differences between groups in FTAI and final pregnancy rates, without differences for age or ovarian status In Experiment 3, Progesterone group presented the higher estrus rates than Progestin and Control groups. However, were not observed differences in pregnancy rates among the groups. At the same experiment, difference on weights before mating was found between the heifers that became pregnant compared to heifers that stayed non pregnant. Heifers with ovarian status 2 and 3 had higher average weight than heifers with status 1. The suplementation enhanced ADG in the With Suplementation group, but it did not produce differences on pregnancy rates. In Experiment 4, pregnancy rates were similar between groups. Heifers which became pregnant acumulated more fat amount in P8 region, during the treatment period. In conclusion, the first breeding season management with synchronization to FTAI in heifers, since being presented identical final pregnancy rates, produced signifficative differences on pregnancy rates in the second breeding season. The priming with norgestomet did not enhance pregnancy rates in beef heifers, as well the progesterone or progestin primings and the different feeding managements. Heifers with ovarian status 2 and 3, had higher body weights. Gamma-orizanol supplementation did not enhanced pregnancy rates, ADG neither body weight. Heifers that became pregnant, acumulated more fat amount on P8 region before the reproductive season.

Durante o processo de criopreservação de sêmen, os espermatozóides sofrem alguns danos que resultam na diminuição da fertilidade deste. O presente estudo foi realizado a fim de avaliar o efeito da utilização, combinada de duas curvas de congelamento com dois diluentes comerciais sobre a criopreservação de sêmen eqüino. Foram analisados 20 ejaculados. As amostras foram avaliadas, pela motilidade progressiva e total do sêmen pós-descongelamento e pela integridade e funcionalidade da membrana dos espermatozóides. A combinação entre curva automatizada e Botu- Crio® apresentou as maiores médias, nas análises de motilidade total (55,53%) e progressiva (17,25%), após o descongelamento. O diluente Botu-Crio® ,isoladamente, apresentou também os melhores resultados quando foram realizadas as análises de integridade (CFDA/PI) e funcionalidade de membrana pelo teste hiposmótico. / During semen cryopreservation, sperm cells were submitted to some deleterious events leading to membrane damage which result in fertility decrease. This study was designed to compare the effects of two freezing techniques (conventional and automated), their freezing rates and the use of two commercial extenders as cryoprotectants (FR-5® and Botu-Crio®) on the total and progressive motility, integrity and functionality of spermatic membranes during the cryopreservation of equine semen. Twenty ejaculates were analyzed. The total and progressive motility of fresh and postthawing semen samples were evaluated by the patterns assays. The function of plasmatic membrane was measured by the hipoosmotic swelling test. The integrity of plasmatic membrane was evaluated using CFDA/PI fluorescent probes. There were significant differences between the two freezing techniques and/or between cryoprotectants for all assessed parameters. The combined used between Botu-Crio® and automated curves showed better results in total and progressive post-thawing motility. The extender Botu-Crio®, alone, showed better results in order to preserve the membrane integrity and function.

Os objetivos dos experimentos foram primeiro testar a presença da dimetilformamida (DF) nas soluções crioprotetoras e segundo avaliar a viabilidade in vitro pós aquecimento de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em microcapilares manufaturados industrialmente. O primeiro experimento testou a capacidade de vitrificação das diferentes soluções de vitrificação, compostas pelas combinações de etileno glicol (EG) ou 1-2 propanediol (PROH) com as diferentes porcentagens de DF. No segundo experimento se testou a toxicidade de 3 soluções de equilíbrio: ES1 (PBSm + 10% PROH + 10% DF + 0.5% PVA), ES2 (PBSm+ 10% EG+ 10% DF + 0.5% PVA), ES3 (PBSm + 10% PROH + 10% EG + 0.5% PVA), através da exposição dos embriões durante 3 períodos de tempo (1, 3 e 10 min). O cultivo in vitro após a exposição às soluções de equilíbrio foi realizado em meio de KSOM durante 72 h. Os resultados de re-expansão foram semelhantes entre as três soluções, quando os embriões foram expostos por 1 ou 3 min. Por outro lado, a exposição à ES3 por 10 min, revelou uma maior taxa de sobrevivência dos embriões, em relação às outras soluções testadas. No terceiro experimento, após expor-se os embriões às soluções de equilíbrio, ES1, ES2 e ES3 por 1 min, a vitrificação foi realizada utilizando-se as seguintes soluções: VS1 (PBSm + 20% PROH + 20% DF + 0.5% PVA); VS2 (PBSm + 20% EG + 20% DF+ 0.5%PVA) and VS3 (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA). Imediatamente após a exposição por 30 s às soluções de vitrificação os embriões foram envasados em micropipetas de vidro (GMPs) e mergulhados em nitrogênio líquido superresfriado. As GMPs foram aquecidas no ar durante 10 s e após os embriões foram expostos durante 5 min ao PBSm + 0,25 M sacarose a 37 °C, finalmente transferidos para gotas de meio KSOM e cultivados in vitro durante 72 horas. As taxas de re-expansão dos embriões após o cultivo in vitro foram as seguintes: ES1/VS1 = 12% (13/108); ES2/VS2 = 38% (46/111) e ES3/VS3 = 84% (89/105). A eclosão dos embriões observada após o cultivo in vitro foi de: ES1/VS1 = 3% (3/108); ES2/VS2 = 17% (19/111) e ES3/VS3 = 70% (73/105). As taxas de sobrevivência revelaram que a presença da dimetilformamida na solução crioprotetora reduz a viabilidade embrionária e que a associação de EG + PROH é eficiente na manutenção da viabilidade embrionária após a vitrificação. O segundo artigo descreve os experimentos de vitrificação, utilizando-se para o envase dos embriões um microcapilar de vidro (GMC), produzido industrialmente (Brand®). Blastocistos murinos após a coleta foram divididos em três grupos: Controle, embriões cultivados in vitro em KSOM por 72 horas; Grupo 1, vitrificados envasados em micropipetas de vidro (GMPs) esticadas manualmente; Grupo 2, vitrificados envasados nas GMCs (Brand® - 5 µL). O procedimento de vitrificação foi o seguinte: primeiro os embriões foram expostos à solução de equilíbrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) por 1 min e após transferidos para a solução de vitrificação (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por 30 s, envasados nas GMPS ou GMCs e imediatamente mergulhados em nitrogênio superresfriado. As taxas de sobrevivência dos embriões após o aquecimento e cultivo in vitro, não apresentaram diferenças significativas entre os grupos. O envase dos embriões nas GMCs proporcionou sobreviênvia embrionária similar à observada nos embriões envasados nas GMPs. / The aims of these experiments were first, determine the effect of dimethylformamide (DF) into cryoprotectant solutions and sencondly, evaluated the in vitro viability of blastocyst Mus domesticus domesticus vitrified into glass microcapillaries (Brand®). The first article described the efficiency of DF in association with ethylene glycol (EG) and 1-2 propanediol (PROH) on in vitro viability of vitrified mouse blastocysts. Initially, the differents cryoprotectant solutions were tested on its capacities to induce virification. In the second experiment to determine the cryoprotectant toxicity the embryos were exposed during 1, 3 and 10 min to three different equilibrium solutions ES1 (PBSm + 10% PROH+ 10% DF + 0.5% PVA), ES2 (PBSm+10% EG+ 10% DF + 0.5% PVA), ES3 (PBSm + 10% PROH + 10% EG + 0.5% PVA). After 72 hours of in vitro culture in KSOM medium, re-expansion and hatching rates showed no differences among the tested cryoprotectant solutions for 1 or 3 min exposition interval time. However, for the 10 min exposition interval time, ES3 was more effective to promote embryo survival than the others tested cryoprotectant solutions. In the third experiment, blastocysts were vitrified after been exposed to one of the equilibrium solutions (ES1, ES2 or ES3) during 1 min. After that the embryos were transferred to one of the vitrification solutions (VS1 = PBSm + 20% PROH + 20% DF+ 0.5% PVA; VS2 = PBSm + 20% EG+ 20% DF+ 0.5% PVA and VS3 = PBSm + 20% EG+ 20% PROH+ 0.5% PVA) during 30 s, loaded into glass micro pipettes (GMPs) to be plungged into super-cooled liquid nitrogen. The GMPs were thawed in air during 10 s, transferred into drops of PBSm + 0,25 M sucrose at 37 °C for 5 min, and finally transferred to KSOM medium for in vitro culture. After 72 hours the expansion and hatched rates were evaluated. Results demonstrated a significantly difference between the vitrification solutions, showing better hatching rates the embryos vitrified into the ES3/EV3 solution. Therefore, these data shows that the cryoprotectants solutions containning dimethylformamide have deleterious effects on the developmental competence of vitrified mouse blastocysts, and the highest expansion and hatching rates were obtained when the cryoprotectant solution containning an EG and PROH association. The purpose of the second study was to determine the in vitro expansion and hatching rates of vitrified mouse blastocysts loaded into commercially available glass micro-capillaries (GMC - Brand® 5µL). In the early morning at day 4 of the pregnancy, collected blastocysts were divided in three groups: Control: embryos were in vitro culture during 72 hours into KSOM medium; Group 1, blastocyst vitrified into glass micropipettes (GMP); Group 2, blastocyst vitrified into GMC. The embryos were first exposed to the equilibrium solution (PBSm + 10% EG + 10% PROH + 0.5% PVA) for 1 min and then transferred into the vitrification solution (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) for 30 sec. Blastocysts were loaded into GMP or GMC and plunged into super-cooled liquid nitrogen. Embryo warming was carried out by plunging the narrowest end of the capillaries into droplets of 0.25 M sucrose mantained at 37°C. After 5 min, embryos in vitro culture into KSOM medium for 72 hours. Blastocyst survival rates did not show significant differences between the groups. The tested manufacturated GMC (Brand®) showed the same efficiency as the GMP to load mouse blastocysts for vitrification.

Este estudo teve como objetivo caracterizar as modificações que ocorrem no ovário e no útero de Mini-pôneis prenhes e descrever o desenvolvimento normal do embrião e do feto nos estágios iniciais da gestação. Durante duas estações de monta foram utilizadas 13 éguas mini-pôneis, clinicamente e reprodutivamente sadias, não lactantes com idade variando de 3 a 16 anos. A partir do sexto dia pós-ovulação os animais foram examinados diariamente até o 60º dia, por um operador, através de palpação e exame ultra-sonográfico trans retal para verificar o dia de aparecimento da vesícula embrionária. Após a detecção do embrião realizou-se um teste de acompanhamento da mobilidade com acompanhamento ultra-sonográfico por duas horas por dia até a ocorrência da fixação. O diâmetro da vesícula embrionária, surgimento do embrião, visualização do cordão umbilical, da alantóide, e batimentos cardíacos foram monitorados. Da mesma forma, verificou-se o tônus uterino, o desenvolvimento dos dois maiores folículos e da área e do diâmetro do corpo lúteo. Conclui-se que a égua Mini-pônei apresenta algumas diferenças importantes nos eventos relacionados à gestação que outros eqüídeos de maior porte. Entre eles a maior demora na detecção da vesícula embrionária, uma curva de crescimento da vesícula embrionária mais lenta após os 25 dias de gestação, um maior índice de fixação da vesícula embrionária no corpo uterino, uma detecção mais tardia dos batimentos cardíacos e da alantóide, uma segunda onda folicular após os 48 dias, provavelmente responsável pela formação dos futuros corpos lúteo acessórios. / This study had the objective of showing the changes that happen in the ovary and in the uterus of pregnant Mini-horses and describe the normal develoment of the embryo and fetus during the beginning of the pregnancy. During the period of two breeding seasons, 13 Mini-horses used, they were clinically and reproductivwly healthy, no lactants with ages varying between 3 and 16 years old. After the sith day post ovulation the mares were checked every day to verify the appearance of the embryo vesicule. After detection the pregnancy, a mobility test of the embryo with an ultrasound machine was done, during two hours per day until the day of the fixation. The embryo vesicule diameter, appearance of the embryo, observation of the umbilical cord, of the allantoic, and heart beat were checked. The tonus uterine, development of the two biggest folicules and area and corpus luteos diameter were checked, as well. The conclusion is that the Mini-horse mare has some important differences related to the pregnancy comparing to other horses. One of the differences would be a longer period of the time to detection the embryo vesicule, a slower embryo vesicule growing curve after the 25 day pregnancy, a higher index of embryo vesicule fixing in the uterus body, a late detection of the heart beats and allantoic, a second follicular wave after 48 days, that is probably responsible for the development of accessories corpus luteos in the future.

Apesar da obtenção de animais nascidos vivos a partir de oócitos imaturos bovinos congelados ou vitrificados, um dos grandes desafios continua sendo o desenvolvimento de um método que proporcione melhores resultados de viabilidade pós-criopreservação. Assim como a ação dos crioprotetores empregados, a eficiência no processo de maturação in vitro (MIV) influi diretamente na taxa de desenvolvimento embrionário. Durante a maturação oocitária in vitro observa-se expansão e mucificação das células da granulosa que formam o complexo cumulus oophorus-oócito (CCO), em função da intensa síntese de componentes da matriz extracelular. Essas modificações no aspecto do cumulus são utilizadas como indicativo da ocorrência de maturação oocitária e contribuem para que ocorra a fecundação. A expressão gênica de proteínas associadas à matriz extracelular das células do cumulus pode estar sob influência de fatores de origem oocitária e de composição do meio de MIV. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão gênica das proteínas ácido hialurônico sintase 2 (HAS2), link protein (HAPLN1), conexina 43 (GJA1) e HSP70-1 (proteína de choque térmico) em células do cumulus oophorus de oócitos imaturos bovinos submetidos a exposição e/ou vitrificação em duas soluções crioprotetoras e, posteriormente, maturados in vitro. Foram comparadas duas soluções de vitrificação (SV): SV1 = 20% de etileno glicol (EG) + 20% de 1,2 propanediol (PRO), e SV2 = 20% de EG + 20% DMSO + 0,5M de sacarose. Os CCOs foram obtidos a partir de ovários coletados de fêmeas bovinas logo após o abate, selecionados morfologicamente e distribuídos em 6 grupos experimentais: G1 (AOC), CCOs não maturados; G2 (AMC), CCOs submetidos à MIV; G3 (B1EC), CCOs expostos à SV1 e submetidos à MIV; G4 (B2EC), CCOs expostos à SV2 e submetidos à MIV; G5 (A1VC), CCOs vitrificados com a SV1 e submetidos à MIV; G6 (A2VC), CCOs vitrificados com a SV2 e submetidos à MIV. A MIV foi realizada em TCM 199 suplementado com soro de égua em estro, à 39oC, 5% de CO2 e máxima umidade relativa, por 22 a 24 horas. Após a MIV, 5 CCOs de cada grupo (G2 a G6), foram coletados, submetidos ao desnudamento mecânico e as células do cumulus foram concentradas por centrifugação e acondicionadas em tubos cônicos de 0,5 ml em nitrogênio líquido. O restante dos CCOs destes grupos foi submetido a fecundação e cultivo in vitro sob condições semelhantes a MIV. Para a extração do RNA total das amostras de células do cumulus foi utilizado o reagente TRIzol®. O RNA total foi re-suspenso e as amostras foram submetidas à captação específica do mRNA utilizando-se um “kit” comercial de separação magnética. Os mRNAs foram transcritos reversamente em cDNA utilizando-se a técnica de RT-PCR, para avaliar os padrões de expressão dos quatro transcritos de bovinos (link protein, HAS2, conexina 43 e HSP70-1). O grupo de oócitos imaturos exposto a SV1 apresentou uma taxa de blastocistos (30,1%) semelhante ao grupo controle (38,1%) e significativamente superior ao grupo exposto a SV2, (16,9%; p=0,0013). Houve diferença significativa (p<0,0001) entre o grupo controle e os grupos vitrificados nas soluções SV1 e SV2, tanto na taxa de clivagem (respectivamente, 79,2%; 22,1% e 43,3%) quanto no desenvolvimento até o estádio de blastocisto (respectivamente, 35,6%; 0% e 4,1%). A análise dos resultados de abundância relativa obtida a partir das células do cumulus oophorus de 5 CCOs bovinos em cada um dos seis grupos experimentais, após três repetições, não mostrou diferença significativa entre os diferentes grupos testados para os transcritos de link protein (p=0,738), HAS2 (p=0,772), conexina 43 (p=0,130) e HSP70-1 (p=0,333). / The major challenge in the cryopreservation of bovine immature oocytes is still developing a method that provides adequate results of survival and viability after vitrification. As the action of cryoprotectants employed, the efficiency of in vitro maturation (IVM) process directly influences the embryonic development. The mucification and expansion of the granulosa cells from the cumulus oophorus-oocyte complex (COC), caused by copious synthesis and deposition of extracellular matrix components, is observed during oocyte maturation in vitro. Such changes in the cumulus appearance are used as indicative of the oocyte maturation occurrence and contribute to fertilization. The gene expression of proteins associated with the extracellular matrix of the cumulus cells could be on the oocyte and/or IVM medium composition influences. The aim of this study was to evaluate, through the RT-PCR technique, the gene expression of hyaluronic acid synthase protein 2 (HAS2), link protein (HAPLN1), connexin 43 (GJA1) and heat shock protein 70 (HSP70-1) in the cumulus oophorus cells of bovine immature oocytes exposed and/or vitrified in cryoprotectant solutions and then matured in vitro. We compared two vitrification solutions (VS): VS1 = 20% ethylene glycol (EG) + 20% 1,2 propanediol (PRO), and VS2 = 20% EG + 20% DMSO + 0.5 M sucrose. The COCs were obtained from cow ovaries, collected right after slaughter. After the morphological selection, the COCs were allocated into six experimental groups: G1- imature COCs; G2- COCs subjected to IVM; G3- COCs exposed to VS1 and subjected to IVM; G4- imature COCs exposed to VS2 and submitted to IVM; G5- COCs vitrified with VS1 and subjected to IVM; and G6- COCs vitrified with VS2 and submitted to IVM. The IVM was performed in TCM 199 supplemented with oestrus mare serum, at 39°C, under 5% of CO2 and maximum relative humidity, for 22 to 24 hours. After IVM, five COCs in each group (G2 to G6) were collected, the oocytes were stripped of cumulus cells by vortexing and the cells were concentrated by centrifugation and placed in conical tubes of 0.5 ml in liquid nitrogen. In each group COCs were subjected to in vitro fertilization and culture under similar conditions from used in MIV. The RNA extraction from samples containing the cumulus cells was performed by using TRIzol® reagent protocol. Total RNA was re-suspended and the samples were subjected to the specific capture of mRNA using a commercial kit for magnetic separation. The mRNAs were reverse transcribed into cDNA using the RT-PCR technique to evaluate patterns of expression of the four bovine transcripts (link protein, HAS2, connexin 43 and HSP70-1). The immature oocytes group exposed to VS1 showed a blastocyst rate (30.1%) similar to the control group (38.1%) and significantly higher than the group exposed to VS2, (16.9%, p = 0.0013). Significant difference (p <0.0001) was observed between the control group and groups vitrified in the VS1 and VS2, both in the rate of cleavage (respectively, 79.2%, 22.1% and 43.3%) and the development to the blastocyst stage (respectively, 35.6%, 0% and 4.1%). The results of relative abundance obtained from the cumulus cells of the five bovine COCs in each experimental group, after three repetitions, showed no significant difference between the groups tested for the transcripts of link protein (p = 0.738 ), HAS2 (p = 0.772), connexin 43 (p = 0.130) and HSP70-1 (p = 0.333).

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-05T13:23:23Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 712080 bytes, checksum: 58fd45edcbe5c43bdc5bf7193a40f40e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T13:23:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 712080 bytes, checksum: 58fd45edcbe5c43bdc5bf7193a40f40e (MD5) Previous issue date: 2017-02-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A reprodução é o principal fator limitante na eficiência da produção de carne, e a baixa taxa de concepção observada no rebanho brasileiro reflete a baixa taxa de fertilidade das vacas e a idade tardia à puberdade das novilhas de substituição. A fim de fornecer mais informações sobre as estratégias nutricionais para o melhor desenvolvimento das novilhas Nelore e melhorar o desempenho das vacas, foram realizados três estudos e os resultados são apresentados em quatro artigos. No primeiro trabalho, foram utilizadas 80 vacas Nelore grávidas (6 meses de gestação) com idade inicial de seis anos e peso inicial médio e escore de condição corporal inicial de 515,5 ± 1,34 kg e 4,68 ± 0,15, respectivamente. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com quatro tratamentos e vinte repetições. As estratégias avaliadas foram suplementação com 1 kg/vaca/dia de suplementação somente no pré-parto, somente no pós-parto, no pré e pós-parto, e somente mistura mineral ad libitum durante o pré e pós-parto. Observou-se o efeito da suplementação sobre o peso corporal (PC) das vacas no parto e sobre o peso dos bezerros ao nascimento (P <0,05). Houve também efeito da suplementação no pré e pós-parto (P <0,05) no PC final, ganho médio diário e escore de condição corporal final dos animais. Houve uma tendência, com a suplementação no pós-parto, de maior produção de leite das vacas (P = 0,065) e, para os seus componentes, houve efeito de suplementação no pós-parto apenas para proteína do leite (PL) (P = 0,003). Houve um efeito da suplementação no pós-parto sobre nitrogênio ureico sérico, glicose, ácidos graxos não esterificados, β-hidroxibutirato e progesterona (P <0,05). Todos os metabólitos foram influenciados (P <0,05) no dia pós-parto. As vacas suplementadas no pós-parto apresentaram maior taxa de concepção do que a observada em animais não suplementados (P = 0,005). A suplementação com 1 kg/dia de suplementação com 28,6% de PC no pré-parto melhorou algumas das características produtivas, no entanto, a suplementação no pós-parto permite efeitos mais expressivos sobre a eficiência produtiva, metabólica e reprodutiva das vacas. Portanto, a suplementação no pós-parto é recomendada quando os animais têm escore de condição corporal vi (ECC) adequada ao parto. As bezerras das vacas do primeiro experimento foram utilizadas no segundo trabalho para avaliar estratégias de suplementação no sistema creep-feeding. Utilizaram-se quarenta e quatro bezerras Nelore, com idade e peso médio inicial, de quatro meses e 147,6 ± 1,34 kg, respectivamente. Um único suplemento com aproximadamente 20% de proteína foi fornecido em quantidades diferentes dependendo do peso corporal (PC). Os tratamentos consistiram no suprimento de 0,0%, 0,2%, 0,4% ou 0,6% do PC deste suplemento. Observou-se aumento do efeito linear (P <0,05) do peso corporal final e ganho médio diário de novilhas com aumento da suplementação. A suplementação múltipla aumentou o consumo, em kg/dia, de matéria seca (MS), matéria orgânica (MO), proteína bruta (PB), matéria seca digerida (MSD) e nutrientes digestíveis totais (NDT). Não houve efeito da suplementação (P> 0,05) nas concentrações de AGNE. Houve um efeito linear crescente (P <0,05) de suplementação sobre as concentrações de insulina. Conclui-se que a suplementação melhora o desempenho, as características nutricionais e metabólicas dos animais, sendo o suprimento de 0,6% do PC de suplemento com 20% de PB o tratamento mais efetivo. As mesmas novilhas foram utilizadas no terceiro experimento após o desmame para avaliar os efeitos da suplementação estratégica de novilhas Nelore após o desmame à concepção. As estratégias avaliadas foram: BAAL - suplementação com 0,2% de PC/animal/dia de suplementação nos primeiros 90 dias e suplementação com 0,6% de PC/animal/dia nos 90 dias subseqüentes; MEME - suplementação com 0,4% de PC/animal/dia durante 180 dias; ALBA - suplementação com 0,6% de PC/animal/dia de suplementação nos primeiros 90 dias e suplementação com 0,2% de PC/animal/dia nos 90 dias seguintes; e MM - apenas mistura mineral ad libitum durante os 180 dias. Observou-se que a suplementação melhorou o desempenho dos animais durante os primeiros 90 dias de experimento, o que pode ser verificado pelo ganho médio diário (GMD) das fêmeas (P = 0,001). O mesmo fato foi observado na fase de transição seca/água, onde a suplementação melhorou o peso corporal final (PCf) (P = 0,002) e GMD (P = 0,001). Verificou-se também que a suplementação múltipla aumentou o consumo de matéria seca (MS), matéria orgânica (MO), proteína bruta (PB), matéria seca digestível (MSD) e nutrientes digestíveis totais (NDT) durante todo o experimento e fibra em detergente neutro digestível(FDNd) e fibra em detergente neutro corrigida para cinzas e proteínas (FDNcp) apenas na transição seca/água. A suplementação aumentou o coeficiente de digestibilidade aparente de MS, MO, PB, vii FDNcp e NDT (P <0,05), ou seja, de todos os parâmetros analisados. Os níveis de nitrogênio ureico sérico (NUS), glicose (GLIC), insulina (INS) e progesterona (PROG) foram maiores em novilhas suplementadas do que em novilhas não suplementadas (P < 0,05). Por outro lado, a suplementação reduziu as concentrações de ácidos graxos não-esterificados (AGNE) (P = 0,001). Finalmente, foi obsevado que a taxa de concepção foi maior em novilhas suplementadas (P = 0,002). Concluiu- se que os melhores níveis de NUS, INS, GLIC, AGNE e PROG das novilhas suplementadas associadas ao maior PCf, digestibilidade e consumo dos componentes da dieta proporcionaram melhor desempenho reprodutivo para as novilhas suplementadas, independentemente da suplementação. / Reproduction is the main limiting factor in meat production efficiency and the low offtake rate observed in the Brazilian herd reflects the low fertility rate of cows and the late age at puberty of replacement heifers. In order to provide more information about nutritional strategies to better develop Nellore heifers and to improve dams’ performance, three studies were conducted and the results are here presented in four papers. In the first paper, were used 80 pregnant Nellore cows (6 months gestation) with initial age of six years and mean initial weight and initial body condition score of 515.5 ± 1.34 kg and 4.68 ± 0.15, respectively.The experimental design was completely randomized, with four treatments and twenty repetitions. The strategies evaluated were supplementation with 1 kg/cow/day of supplementation only in the pre-partum, only in the postpartum, in the pre and postpartum, and only ad libitum mineral mixture during the pre and postpartum.The effect of supplementation on the body weight (BW) of cows at calving and calf weight at birth (P <0.05) was observed. There was also effect of pre and postpartum supplementation (P <0.05) on the final BW, mean daily gain and final body condition score of the animals. There was a trend of postpartum supplementation on milk production from the matrices (P = 0.065) and, for its components, there was post-partum supplementation effect only on milk protein (MP) (P = 0.003). There was an effect of postpartum supplementation on serum urea nitrogen, glucose, non-esterified fatty acids, β- hydroxybutyrate and progesterone (P < 0.05). All metabolites were influenced (P < 0.05) by the postpartum day. Cows supplemented postpartum had a higher conception rate than that observed in non-supplemented animals (P = 0,005). Supplementation with 1 kg/day supplementation with 28.6% of CP in pre-partum improved some of the productive characteristics, however, postpartum supplementation allows more expressive effects on the productive, metabolic and reproductive efficiency of cows. Therefore, postpartum supplementation is recommended when the animals have adequate body condition score (BCS) at calving. The heifer calves of cows used in the first experiment were used in the iii second paper to evaluate supplementary strategies in the creep feeding system. Were used fourty-four Nellore heifer calves, with age and initial mean weight, of four months and 147.6 ± 1.34 kg, respectively.A single supplement with approximately 20% of protein was provided in different amounts depending on body weight (BW). Treatments consisted in the supply of 0.0%, 0.2%, 0.4% or 0.6% of BW from this supplement.Increasing linear effect (P < 0.05) of final body weight and average daily gain of heifer calves were observed with increased supplementation. Multiple supplementation increased consumption, in kg/day, of dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), digested dry matter (dDM) and total digestible nutrients (TDN).There was no effect of supplementation (P > 0.05) on NEFA concentrations. There was an increasing linear effect (P < 0.05) of supplementation on insulin concentrations. It is concluded that supplementation improves the performance, nutritional and metabolic characteristics of the animals, being the supply of 0.6% of BW of supplement with 20% of CP the most effective treatment.The same heifers were used in the third experiment after weaning to evaluate the effects of strategic supplementation for Nellore heifers after weaning to conception. The evaluated strategies were: BAAL- supplementation with 0.2% of BW/animal/day of supplement in the first 90 days and supplementation with 0.6% of BW/animal/day in the subsequent 90 days; MEME - supplementation with 0.4% of BW/animal/day for 180 days; ALBA - supplementation with 0.6% of BW/animal/day of supplement in the first 90 days and supplementation with 0.2% of BW/animal/day in the subsequent 90 days; and MM - only mineral mix ad libitum during the 180 days.It was observed that supplementation improved the performance of the animals during the first 90 days of experiment, and this fact can be verified by the heifers' average daily gain (ADG) (P = 0.001).The same fact was observed in the dry/water transition phase, where supplementation improved final body weight (fBW) (P = 0.002) and ADG (P = 0.001).It was also verified that multiple supplementation increased dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), digestible dry matter (dDM) and total digestible nutrients (TDN) during the whole experiment, and digested neutral detergent fiber (dNDF), and neutral detergent fiber corrected for ash and protein (apNDF) only in the dry/water transition.Supplementation increased the total apparent digestibility coefficient of DM, OM, CP, apNDF and TDN (P <0.05), that is, of all analyzed parameters. Serum urea nitrogen (SUN), glucose (GLUC), insulin (INS) and progesterone (PROG) iv levels were higher in supplemented heifers than in non-supplemented heifers (P <0.05). On the other hand, supplementation reduced the concentrations of non- esterified fatty acids (NEFA) (P = 0.001). Finally, it was found that the conception rate was higher for supplemented heifers (P = 0.020). It was concluded that the best levels of SUN, INS, GLUC, NEFA and PROG of the supplemented heifers associated to the higher fBW, digestibility and consumption of the diet components provided better reproductive performance independently of the supplementation.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-08T16:57:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 228366 bytes, checksum: 5f2b48170e9b0dcd8dea1c4e1dca462b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-08T16:57:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 228366 bytes, checksum: 5f2b48170e9b0dcd8dea1c4e1dca462b (MD5) Previous issue date: 2005-02-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O experimento foi conduzido em duas etapas. A primeira etapa consistiu na realização de colpocitologia para avaliação do ciclo estral de gatas domésticas. Nesta etapa foram monitoradas por um período de 12 meses, seis gatas adultas não gestantes, sem raça definida, mantidas em um gatil em ambiente coletivo, sendo fornecido água e ração ad libitum. Os animais foram monitorados diariamente quanto a manifestações comportamentais das diferentes fases do ciclo estral, sendo obtidos três esfregaços vaginais semanalmente. Foram considerados os seguintes tipos celulares: células parabasais e intermediárias, células superficiais e células anucleadas, sendo analisadas cerca de 100 células em cada lâmina. Todos os animais avaliados apresentaram sinais comportamentais característicos das diferentes fases do ciclo estral durante todo o ano. O número médio de ciclos foi de 11,2 ao ano, sendo 8,8 observados nos meses de maior insolação e 2,4 nos meses de menor insolação média. Neste período a duração média dos ciclos estrais foi de 22,5 dias, enquanto no outono e inverno a duração média dos ciclos foi de 53 dias. as células parabasais e intermediárias estavam em maiores proporções no pós-estro (57,4%), reduzindo drasticamente no proestro (22,1%) e atingindo os menores valores observados no período de estro (15,95%). As células superficiais apresentaram menores variações durante as fases do ciclo estral sendo 28,7% no pós-estro, 43,6% no proestro e 33,2 % no estro. Já as células anucleadas apresentaram aumento considerável do período de proestro para o período de estro (34,3 % para 51,0 %), sendo no período de pós-estro registrado os menores valores (13,9%). A segunda etapa consistiu na indução da atividade ovariana e da ovulação, objetivando coleta e transferência de embriões. Nesta etapa foram utilizadas, dezesseis gatas domésticas adultas e dois machos adultos reprodutores. Todas as fêmeas receberam uma única aplicação de 150 UI de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG) no pós-estro, como indutor da atividade ovariana, e 80 a 84 horas após, receberam uma única aplicação de 100 UI de gonadotrofina coriônica humana (hCG) como indutor da ovulação. Após a aplicação de hCG, oito gatas doadoras foram naturalmente acasaladas. As oito gatas receptoras receberam estímulo extra de indução da ovulação através da manipulação de um swab intravaginal. De cinco a seis dias após a aplicação de hCG, as gatas foram submetidas a uma laparotomia, para a coleta dos embriões, a qual foi efetuada através de lavagem uterina transcornual. Foram cirurgicamente inovulados em média seis embriões, classificados como mórula compacta e blastocisto dos tipos I a III, em quatro receptoras. Três animais apresentaram gestação confirmada por ultrassonografia aos 36 dias sendo que destes dois animais pariram ninhadas com dois e quatro filhotes, respectivamente 66 e 63 dias após a indução da ovulação. Excetuando-se um natimorto, todos os filhotes apresentaram desenvolvimento normal. / The experiment was led in two stages. The first stage consisted of the accomplishment of colpocitology for evaluation of the cycle estral of domestic cats. In this stage six queens non pregnant, without defined race, were monitored by a period of 12 months and maintained in a collective atmosphere, being supplied water and ration ad libitum. The animals were monitored daily as to estrous behavior of the different phases of the estrous cycle, being weekly obtained three vaginal smears. The following cellular types were considered: Parabasal Cells and Intermediate Cell; Superficial Cells and Anuclear Cells, being analyzed and quantified about 100 cells in each sheet. All the appraised animals presented estrous behavior of the different phases of the cycle estral. The medium number of cycles was from 11,3 a year and about 70% of the estrous cycles they showed in the period of November to April (spring and summer). In this period the medium duration of the estrous cycles in the researched animals, was of 22,5 days, while in the autumn and winter the medium duration of the cycles was of 53 days. The Parabasal Cells and Intermediate were in larger proportions in the post-estrus (57,4%), reducing drastically in the proestrus (22,1%) and reaching the smallest values observed in the estrus (15,95%). The superficial cells presented smaller variations during the phases of the estrous cycle being 28,7% in the post-estrus, 43,6% in the proestrus and 33,2% in the estrus. The Anuclear Cells already presented considerable increase of the period of proestrus for the estrus (34,3% for 51,0%), being in the period of post-estrus registered the smallest values (13,9%). The second stage consisted of the induction of the ovarian activity and of the ovulation, aiming at collection and transfer of embryos. In this stage were used, sixteen queens and two tom. All the females xreceived an only application of 150 UI of Gonadotrofina Equine Coriônica (eCG) in the post-estrus, as inductor of the ovarian activity, and 80-84h after they received an only application of 100 UI of Chorionic Gonadotropins Human Coriônica (hCG) as inductor of the ovulation. After the hCG application, the queens donors were just coupled naturally. The recipients received extra incentive of induction of the ovulation through the manipulation of a swab intravaginal. Targeting recovery from donors, the uterus were excised six days after hCG administration from donors under general anesthesia, and the uterine horns were flushed downward. The embryos were infused into the uterine horn on average six embryos, classified as compacted morulae and early blastocysts of the types I, II, III in four recipients. Three animals impregnated, these two animals had two and four newborns respectively, and duration of pregnancy was respectively 66 and 63 days after the induction of the ovulation. Being excepted one newborn, all the newborns presented normal development.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-07-06T18:04:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 909533 bytes, checksum: 6baed208f90f67624120c4e48d7b27aa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T18:04:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 909533 bytes, checksum: 6baed208f90f67624120c4e48d7b27aa (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Inúmeras biotécnicas visam obter melhores índices de viabilidade espermática pós-descongelamento. Diferenças de características bioquímicas e funcionais entre espécies, ejaculados, estações do ano, animais, e outros, não possibilitaram o desenvolvimento de um protocolo definitivo. O presente estudo objetivou avaliar os efeitos da inclusão de colesterol na criopreservação do sêmen asinino sobre a viabilidade espermática in vitro pós-descongelamento. Vinte e cinco ejaculados de cinco jumentos foram divididos em dois tratamentos experimentais: T1: controle sem adição de ciclodextrina carregada com colesterol – (CCC); e T2 com adição de CCC. As avaliações seminais pós- descongelamento foram divididas em duas fases (1 e 2). Na fase 1 avaliou-se os efeitos da incorporação ou não de 1,5 mg de CCC aos espermatozoides, avaliando a cinética espermática dos espermatozoides no pós- descongelamento. As amostras descongeladas dos dois tratamentos foram submetidas ao Computer Assisted Sperm Analyser (CASA) e obteve-se as variáveis motilidade total (MT, %), motilidade progressiva (MP, %), velocidade curvilinear (VCL, μm/s), velocidade progressiva (VSL, μm/s), velocidade de trajeto (VAP, μm/s), linearidade (LIN, %), retilinearidade (STR, %), amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH, μm) e frequência de batimentos (BCF, Hz). Na fase 2 as amostras dos dois tratamentos foram submetidas à incubação com diferentes sondas e posterior análise por citometria de fluxo para avaliação: da integridade da membrana plasmática e acrossomal (FITC-PSA), do estresse oxidativo citoplasmático (DHE), da peroxidação dos lipídios de membrana (BODIPY 581/591 ), da organização da bicamada lipídica (M540), do potencial de membrana mitocondrial (JC-1) e da apoptose celular (Yo-Pro). Os resultados relativos à avaliação da cinética espermática dos tratamentos experimentais mostraram que os parâmetros MT, MP, VCL, VSL, VAP, ALH, e BCF apresentaram maiores valores (p<0,05) no T1 (29,92 ± 13,82; 12,44 ± 6,03; 64,45 ± 9,65; 43,50 ± 7,30; 52,02 ± 8,17; 2,65 ± 0,48; 7,67 ± 0,76) em relação ao T2 xiv (17,33 ± 7,18; 5,33 ± 2,69; 46,16 ± 8,16; 31,83 ± 6,73,; 38,76 ± 7,63; 1,63 ± 0,43; 6,51 ± 1,76). Não foram observadas diferenças nos ejaculados (p>0,05) entre o T1 e T2 para as variáveis LIN (67,60 ± 1,28 e 68,74 ± 1,61) e STR (83,55 ± 0,81 e 81,91 ± 1,05). Na fase 2, a incorporação de colesterol resultou em maior (p<0,05) porcentagem de células com integridade de membrana acrossomal e plasmática dos espermatozoides (21,42 ± 12,94), bem como maior (p<0,05) potencial de sua membrana mitocondrial (15,49 ± 12,36). Não houve diferença (p>0,05) entre o T1 e T2 em relação à peroxidação dos lipídeos de membrana (669,81 ± 337,87 e 743,42 ± 417,26) e quanto à desorganização da membrana plasmática (8163,07 ± 1929,75 e 7068,01 ± 3680,08). A incorporação de colesterol resultou em maior (p<0,05) produção de espécies reativas de oxigênio citoplasmático (%) no T2 (3,73 ± 1,64) em relação ao T1 (2,10 ± 1,20). Além disso, a incorporação do colesterol se mostrou eficaz em aumentar (p<0,05) a porcentagem de células vivas pós descongelamento (23,67 ± 12,46) em relação ao grupo que não recebeu o tratamento (12,69 ± 8,84). Não houve diferença (p>0,05) entre T1 e T2 em relação à prevenção dos eventos semelhantes a apoptose nos espermatozoides (23,28 ± 9,81 e 22,08 ± 12,24). A incorporação de colesterol ao sêmen melhora os parâmetros seminais in vitro do sêmen descongelado de jumentos da raça Pêga. / Many biotechniques are directed to obtain better rates of sperm viability after thawing. Differences in biochemical and functional characteristics between species, ejaculates, seasons of the year, among animals, and others, preclude a definitive protocol. The objective of this study was to evaluate the effects of cholesterol inclusion on cryopreserved Pêga donkey spermatozoa and sperm viability in vitro post-thawing. Twenty five ejaculates of five donkeys were divided in two experimental treatments, T1: control, without addition of cyclodextrin loaded cholesterol – (CCC) and T2: treated with addition of CCC. Post-thawing seminal evaluations were divided into two phases (1 and 2). The effects of incorporation (T2) or not (T1) of 1.5 mg of CCC to the semen on sperm kinetics of post-thawing spermatozoa were evaluated. In phase 1, samples of the two treatments were submitted to the Computer Assisted Sperm Analyzer (CASA) and the kinetic characteristics: total motility (MT, %), progressive motility (MP, %), curvilinear velocity (VCL, μm/s), progressive velocity (VSL, μm/s), trajectory velocity (VAP, μm/s), linearity (LIN, %), rectilinearity (STR, %), amplitude of lateral head displacement (ALH, μm) and beating frequency (BCF, Hz) were obtained. In phase 2, samples of the two treatments were submitted to incubation with different probes and later analysed by flow cytometry to evaluate the plasma and acrosomal membrane integrity (FITC-PSA), cytoplasmic oxidative stress (DHE), plasma membrane lipid peroxidation (BODIPY 581/591 ), lipid bilayer organization (M540), mitochondrial membrane potential (JC-1) and cellular apoptosis (Yo-Pro). Results regarding the evaluation of spermatic kinetics of the experimental treatments showed the parameters MT, MP, VCL, VSL, VAP, ALH and BCF were higher (p<0,05) in T1 (29,92 ± 13,82; 12,44 ± 6,03; 64,45 ± 9,65; 43,50 ± 7,30; 52,02 ± 8,17; 2,65 ± 0,48; 7,67 ± 0,76) in relation to T2 (17,33 ± 7,18; 5,33 ± 2,69; 46,16 ± 8,16; 31,83 ± 6,73; 38,76 ± 7,63; 1,63 ± 0,43; 6,51 ± 1,76). No differences were shown (p> 0.05) between T1 e T2 for the LIN (67,60 ± 1,28 e 68,74 ± 1,61) and STR (83,55 ± 0,81 e 81,91 ± 1,05) variables. In phase xvi 2, the incorporation of cholesterol resulted in greater (p <0.05) percentage of integrity on the spermatozoa acrosomal and plasma membrane (21,42 ± 12,94), as well as higher (p<0.05) potential of its mitochondrial membrane (15,49 ± 12,36). No difference was detected (p>0.05) between T1 e T2 in relation to membrane lipid peroxidation (669,81 ± 337,87 e 743,42 ± 417,26) and plasma membrane disorganization (8163,07 ± 1929,75 e 7068,01 ± 3680,08). Cholesterol incorporation resulted in higher (p<0.05) production of reactive cytoplasmic oxygen species % in T2 (3,73 ± 1,64) in relation to the T1 (2,10 ± 1,20) spermatozoa. In addition, cholesterol incorporation was effective in increasing (p<0.05) the percentage of post-thaw live cells (23,67 ± 12,46) in relation to T1 (12,69 ± 8,84). No difference was detected (p>0.05) between T1 e T2 regarding the prevention of apoptosis-like events in spermatozoa (23,28 ± 9,81 e 22,08 ± 12,24). The incorporation of cholesterol to the semen improves seminal parameters of in vitro of post-thawing donkey semen.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-11-14T11:47:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1408671 bytes, checksum: 7703568ae2fd819b712c172d5c3330f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-14T11:47:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1408671 bytes, checksum: 7703568ae2fd819b712c172d5c3330f8 (MD5) Previous issue date: 2017-07-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Objetivou-se verificar se a endometrite é a principal causa da retirada de éguas receptoras do programa de transferência de embriões, além de comparar métodos e técnicas de diagnóstico. Quarenta éguas receptoras mestiças oriundas de sete propriedades e que não ficaram gestantes ao final da estação reprodutiva, adicionado ao histórico de subfertilidade, foram selecionadas para exame ginecológico. O exame foi realizado através de (i) coleta de dados do animal, idade, escore de condição corporal (ECC) e histórico reprodutivo; (ii) exame clínico reprodutivo, conformação do períneo, palpação e ultrassonografia transretal dos órgãos reprodutivos, vaginoscopia e exame digital da cérvix; e (iii) exames laboratoriais, cultura e citologia, a partir de um coletor comercial (CC) duplamente protegidos, lavado intrauterino de baixo volume (LBV) e do lavado do fragmento resultante da biópsia endometrial (LFBE), e a avaliação histológica. A presença de polimorfonucleados (PMNs) no estrato compacto durante a avaliação histológica serviu de referência para o diagnóstico da endometrite e base para comparação entre os métodos de diagnóstico. A endometrite foi diagnosticada em 65% dos animais avaliados, sendo caracterizada pela presença de PMNs, distribuição das glândulas endometriais em aglomerações e a presença de fibrose no tecido endometrial e periglandular durante a avaliação histológica. No exame clínico reprodutivo, foram positivos 32,5% dos animais para a avaliação da conformação do períneo; 52,5% para exame de palpação e ultrassonografia; 25% para o exame de vaginoscopia; e 37,5% para o exame da cérvix. Nos exames laboratoriais, foram positivos 17,5% para avaliação do efluxo do LBV; 52,5% para o exame citológico uterino; e 62,5% para exame de cultura uterina, sendo a bactéria mais isolada a Staphylococcus spp., seguida de Escherichia coli, Enterobacter spp. e Citrobacter spp., todas susceptíveis a sulfa/trimetoprim, enrofloxacina e florfenicol. Comparando os exames para o diagnóstico da endometrite, a palpação e ultrassonografia apresentaram os melhores resultados entre os exames clínicos, entretanto, foi inferior aos exames laboratoriais de citologia e cultura uterina, sendo este último com maior sensibilidade e especificidade para endometrite. A utilização de múltiplos resultados de diferentes exames também se mostrou uma alternativa eficaz para o diagnóstico da endometrite. Nas condições em que o estudo foi realizado, a técnica de coleta de amostras mais prática e ao mesmo tempo eficaz para os exames de cultura e citologia uterina foi a do CC. A técnica de LFBE não demonstrou ser tão eficiente quanto às demais. Concluiu-se que a endometrite é a principal causa de éguas receptoras com problemas reprodutivos, e que o exame ginecológico é essencial para o diagnóstico destes animais, utilizando-se o maior número de exames possíveis ou o exame de palpação e ultrassonografia como triagem para a realização de exames laboratoriais, além disto, que o coletor comercial foi o método mais prático e eficaz para a coleta de amostras para os exames de cultura e citologia endometriais. / The objective was to verify if endometritis is the main cause of the withdrawal of recipient mares from the embryo transfer program, in addition to comparing methods and diagnostic techniques. Forty crossbred recipient mares from seven farms that did not become pregnant at the end of the reproductive season, added to the history of subfertility, were selected for gynecological examination. The examination was performed through (i) collection of animal data, age, body condition score (ECC) and examination, conformation reproductive of the history; perineum, (ii) reproductive palpation and clinical transrectal ultrasonography of the reproductive organs, vaginoscopy and digital examination of the cervix; and (iii) laboratory tests, culture and cytology, from a double-shielded commercial collector (CC), low-volume intrauterine flush (LBV) and wash of the fragment resulting from endometrial biopsy (LFBE), and histological evaluation. The presence of polymorphonucleate (PMNs) in the compact stratum during the histological evaluation served as a reference for the diagnosis of endometritis and basis for comparison between diagnostic methods. Endometritis was diagnosed in 65% of the evaluated animals, being characterized by the presence of PMNs, distribution of the endometrial glands in agglomerations and the presence of fibrosis in endometrial and periglandular tissue during the histological evaluation. In the reproductive clinical examination, 32.5% of the animals were positive for evaluation of the perineum conformation; 52.5% for examination of palpation and ultrasonography; 25% for vaginoscopy examination; and 37.5% for the examination of the cervix. In the laboratory tests, 17.5% were positive for evaluation of the efflux of the LGV; 52.5% for uterine cytology examination; and 62.5% for uterine culture, with Staphylococcus spp. being the most isolated bacteria, followed by Escherichia coli, Enterobacter spp. and Citrobacter spp., all susceptible to sulfa / trimethoprim, enrofloxacin and florfenicol. Comparing the exams for the diagnosis of endometritis, palpation and ultrasonography showed the best results among the clinical exams, however, it was inferior to the laboratory exams of cytology and uterine culture, the latter being with greater sensitivity and specificity for endometritis. The use of multiple results from different exams has also proved to be an effective alternative for the diagnosis of endometritis. Under the conditions under which the study was carried out, the most practical and efficient sampling technique for culture and uterine cytology examinations was CC. The LFBE technique did not prove to be as efficient as the others. It was concluded that endometritis is the main cause of recipient mares with reproductive problems, and that gynecological examination is essential for the diagnosis of these animals, using as many tests as possible or palpation and ultrasonography as screening for besides the fact that the commercial collector was the most practical and efficient method for the collection of samples for endometrial culture and cytology exams.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-04-06T12:24:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1482140 bytes, checksum: 9201f01dc50666d82670b03afe532241 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-06T12:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1482140 bytes, checksum: 9201f01dc50666d82670b03afe532241 (MD5) Previous issue date: 2017-03-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste estudo foi avaliar o crescimento testicular e biometria testicular in vivo e post-morten em bovinos de raça Nelore e mestiços Nelore x Aberdeen Angus, alimentados com diferentes dietas (Silagem de cana de açúcar/bagaço de cana, cana de açúcar in natura e silagem de milho) criados em confinamento imediatamente após a desmama (oito meses de idade) até o término da fase de terminação (15 meses). Foram utilizados 112 tourinhos da raça Nelore e mestiços Nelore x Aberdeen Angus (nos três experimentos) com idade média entre oito a nove meses e peso corporal de 230 a 270 kg. Este estudo foi conduzido em três fases. Nos experimentos 1 e 2, o manejo dos animais foi conduzido em seis baias coletivas, e no experimento 3 o manejo dos animais foi conduzido em baias individuais. Nas duas primeiras fases experimentais o manejo foi em baias equipadas com sistema de porteiras eletrônicas (tipo Calan Gate) que permitiam acesso ao cocho individualmente. Em todas as baias a água foi fornecida ad libitum. Foram realizadas medidas de biometrias testiculares, perímetro escrotal (PE), comprimento do testículo esquerdo (CTE) e direito (CTD), largura do testículo esquerdo (LTE) e direito (LTD), em todos os animais e realizadas em intervalos de 28 dias durante o período experimental e após o abate. Após a obtenção das gônadas, foram coletados dois fragmentos testiculares por animal e acondicionados em solução fixadora de Bouin por 18 horas, os fragmentos foram transferidos e acondicionados em álcool 70 %. Posteriormente, os fragmentos testiculares foram submetidos ao processo de desidratação em soluções alcoólicas em concentrações crescentes e sucessivas por 60 minutos cada. Após a desidratação, os fragmentos foram embebidos em xilol e incluídos em parafina. Posteriormente, com auxílio de um micrótomo, realizou-se os cortes dos fragmentos com 4 μm de espessura e montados em lâminas histológicas e procedeu-se a coloração com hematoxilina / eosina e as lâminas montadas com Entellan. No Experimento I, durante a fase de crescimento dos tourinhos alimentados com silagem de cana de açúcar, houve diferença dos valores médios do peso corporal dos animais do tratamento de alto desempenho na fase de crescimento em relação aos valores obtidos no tratamento com baixo desempenho na fase de crescimento (p<0,05), e na fase de terminação utilizando bagaço de cana de açúcar, os valores médios para peso corporal e biometrias testiculares post-morten dos animais não apresentaram diferença entre os tratamentos (p>0,05). Analisando o diâmetro tubular e altura do epitélio seminífero na fase de crescimento não se verificou diferença entre os valores médios dos animais nos diferentes tratamentos (p>0,05). Porém, ao comparar as fases de crescimento e fase de terminação verificou-se diferença entre os valores médios dos diâmetros dos túbulos seminíferos (p<0,05), sendo maiores na fase de terminação. Os valores médios da altura de epitélio seminífero dos animais no tratamento de baixo desempenho na fase de crescimento e alto desempenho na fase de terminação (BA) foram maiores que os valores apresentados pelos tourinhos em fase de crescimento (p<0,05). Houve diferença no peso corporal do tratamento de alto desempenho na fase de crescimento em relação aos demais tratamentos (p<0,05). Não houve diferença dos valores médios para perímetro escrotal na idade de 10 – 11 meses de idade para os tourinhos da raça Nelore nos tratamento de alto desempenho na fase de crescimento e alto desempenho na fase de terminação (AA) e médio desempenho na fase de crescimento e alto desempenho na fase de terminação (MA). O tratamento BA diferiu do tratamento AA na mesma idade (p<0,05). Na fase de terminação houve diferença aos 16 – 17 meses de idade em relação aos demais tratamentos (p<0,05). No experimento II, não houve diferença entre peso corporal e biometrias testiculares post-morten (p>0,05). Com relação aos diâmetros dos túbulos e altura dos epitélios seminíferos, não houve diferença entre as médias obtidas nos diferentes tratamentos (p>0,05). Houve diferença para peso corporal no tratamento B quando comparados com o tratamento C para os animais de 11 – 12 e acima de 13 meses de idade (p<0,05). Houve diferença do perímetro escrotal dos tourinhos da raça Nelore acima dos 13 meses de idade em relação aos 9 – 10 e 11 – 12 meses de idade do tratamento da dieta convencional, suprimento de 100 % das exigências de Ca, P e microminerais (A), dieta convencional para suprir 100 % das exigências de microminerais, e sem adição de calcário e fosfato bicálcico (C) e dieta convencional sem adição de calcário, fosfato bicálcico e premix micromineral (D). No experimento III, os animas do tratamento com 14% PB apresentaram maiores valores médios do peso corporal em relação aos animais dos tratamentos com 10% de PB e as médias obtidas dos animais submetidos à dieta de mantença com 12% de PB não diferiu dos animais submetidos às dietas com 10 e 14 % de PB (p>0,05). Os valores médios obtidos para biometrias testiculares post-morten nos animais dos tratamentos com 10, 12 e 14% de PB foram superiores aos valores obtidos para os animais do tratamento de mantença com 12 % de PB (p<0,05). Houve interação significativa do peso corporal com faixa etária. O peso corporal dos tratamentos 10, 12 e 14 % de proteína bruta para os tourinhos da raça Nelore e Nelore x Aberdeen Angus foi maior quando comparados com os tourinhos do tratamento de mantença. Os valores médios para peso corporal dos tratamentos 12 e 14 % de proteína bruta para os tourinhos da raça Nelore não diferiram entre si (p>0,05), porém as médias obtidas para os animais do tratamento com dieta de mantença diferiram das demais médias obtidas em outros tratamentos avaliados (p<0,05). A interação da faixa etária com a raça para peso corporal diferiram para os tourinhos da raça Nelore e Nelore x Aberdeen Angus aos 14 e 16 meses de idade, quando comparados aos demais faixas etária (p<0,05). O perímetro escrotal dos tratamentos 10, 12, 14 % e de mantença não diferiram quando avaliados pela faixa etária (p>0,05). A faixa etária de 14 – 16 meses de idade dos tratamentos com dietas de 12, 14% e de mantença diferiu quando comparada com as outras faixas etárias (p<0,05). Porém, não se observou diferença do índice gonadossomático obtido para os animais nas diferentes dietas (p>0,05). Analisando o efeito dos grupamentos genéticos, os valores obtidos para peso corporal, comprimento do testículo esquerdo, largura do testículo esquerdo, volume testicular esquerdo, comprimento do testículo direito, largura do testículo direito e volume testicular foram superiores para os tourinhos mestiços Nelore x Aberdeen Angus em comparação aos tourinhos da raça Nelore (p<0,05). Outras características post-morten como, volume testicular direito, peso testicular com e sem epidídimo não se mostraram diferentes entre os grupamentos genéticos (p>0,05). Houve diferença no diâmetro dos túbulos seminíferos e altura de epitélio seminífero em animais alimentados com 14% de PB (p<0,05). No entanto, não houve diferença (p>0,05) dos valores médios obtidos nos animais dos tratamentos com 10, 14% de PB e a dieta de mantença (12 % de PB). Houve interação dos grupos genéticos com peso corporal (p<0,05). Os valores médios para peso corporal dos animais nos tratamentos com 10 e 12% de PB foram maiores nos animais mestiços Nelore x Aberdeen Angus que às obtidas para tourinhos da raça Nelore (p<0,05). Quando comparados à concentração de proteína bruta em relação ao peso corporal dos tourinhos da raça Nelore e mestiços Nelore x Aberdeen Angus, os valores médios obtidos foram maiores para os animais dos tratamentos com 10, 12 e 14 % de PB quando comparados aos animais do tratamento com dieta de mantença com 12 % de PB (p<0,05). O índice gonadossomático para os animais do tratamento de mantença com 12 % de PB foi maior para os tourinhos mestiços Nelore x Aberdeen Angus que os índices obtidos para os animais da raça Nelore (p<0,05). No segundo capítulo: o objetivo deste estudo foi comparar oito modelos não lineares para descrever a curva de crescimento do perímetro escrotal (PE) em função da idade em touros da raça Nelore em manejo extensivo. Nas análises foram utilizadas 32.635 mensurações do perímetro escrotal provenientes de 12974 touros da raça Nelore com idade entre 18 a 170 meses. Foram avaliados os modelos não-lineares Logístico, Brody, Gompertz, Richards, Von Bertalanffy, Tanaka, Exponencial negativo e Janoschek e seus parâmetros obtidos pelo método iterativo de Gauss-Newton usado para a estimação dos parâmetros para cada modelo não-linear, usando o Proc NLIN do Statistical Analysis System. O modelo Brody foi escolhido para análise dos efeitos do local de origem e do ano de nascimento dos animais sobre os parâmetros A e k. Os modelos de Richards e de Janoschek não convergiram. O parâmetro A (assíntota) foi similar para os modelos Logístico (39,87), Brody (39,95), Gompertz (39,91), Von Bertalanffy (39,92) e Exponencial negativo (39,65). O modelo Logístico estimou o maior valor para o parâmetro B (1,25), seguido do modelo Gompertz (1,00), Brody (0,80), Von Bertalanffy (0,31) e Tanaka (0,20). O parâmetro k (taxa de maturidade) apresentou a maior estimativa para o modelo Logístico (0,00264), seguido pelo modelo Gompertz (0,00245), Von Bertalanffy (0,00238) e Brody (0,00226). O modelo Tanaka estimou o ponto de inflexão aos 596 dias de idade com 31,03 cm de perímetro escrotal. O modelo Tanaka teve as melhores estimativas de ajuste dentre os modelos avaliados. O maior R 2 foi observado pelo modelo Tanaka (0,432). Os modelos assintóticos apresentaram valores médios semelhantes de R 2 . Todos os modelos não-lineares apresentaram valores semelhantes de soma de quadrados dos erros (ESS), erro médio de predição (APE) e desvio absoluto médio (MAD). O local e ano de nascimento mostraram efeito significativo sobres os parâmetros A e k. Em forma geral, todos os modelos apresentaram alguma tendência de sub ou superestimar o perímetro escrotal. Os resultados obtidos permitiram concluir que o modelo de Brody foi o mais adequado para descrever o perímetro escrotal em função da idade de touros da raça Nelore criados em manejo extensivo. / The objective of this study was to evaluate testicular growth and testicular biometry in vivo and postmortem in Nellore and Nellore x Aberdeen Angus crossbred bovine fed with different diets (Sugarcane silage / sugarcane bagasse, sugar cane in natura and corn silage) created in feedlot immediately after weaning (eight months old) until the end of the finishing period (15 months). A total of 112 Nellore and Nellore x Aberdeen Angus crossbreds bulls were used (in the three experiments) with mean ages between eight and nine months and with body weights between 230 to 270 kg. This study was conducted in three phases. In experiments 1 and 2, the management of the animals was conducted in six collective pens, and in experiment 3 the management of the animals was conducted in individual pens. In the first two experimental phases, the management was in pens equipped with electronic gate system (Calan Gate type) that allowed access to the trough individually. The water was supplied ad libitum in all the pens. Measurements of testicular biometrics, scrotal circumference (SC), left testicular length (LTL) and right (RTL), left testicle width (LTW) and right width (RTW) of all the animals were performed at 28-day intervals during the experimental period and after slaughter. After obtaining the gonads, two testicular fragments were collected per animal and stored in Bouin fixative solution for 18 hours; the fragments were transferred and conditioned in 70% alcohol. Subsequently, the testicular fragments were submitted to the dehydration process in alcoholic solutions in increasing and successive concentrations each 60 minutes. After dehydration, the fragments were soaked in xylol and embedded in paraffin. Then, with a microtome, the sections were cut with 4 μm thickness and mounted on histological slides and stained with hematoxylin / eosin and coverslips assembled with Entellan. In Experiment I, during the growth period of bulls fed with sugarcane silage, there were differences in the body weight mean values of the animals with high performance treatment in the growth period in relation to the values obtained in the treatment with low performance in the same period (p <0.05), and in the finishing period using sugar cane bagasse, the body weight and postmortem testicular biometrics mean values of the animals did not show any difference between the treatments (p> 0.05). Analyzing the tubular diameter and height of the seminiferous epithelium in the growth period there was no difference between the mean values of the animals in the different treatments (p> 0.05). However, when comparing the growth and finishing period, there was a difference between the mean values of the seminiferous tubule diameters (p <0.05), being higher in the finishing period. The seminiferous epithelium height mean values of the animals in the treatment with low performance in the growth period and high performance in the finishing period (BA) were higher than the values presented by the bulls in the growth period (p <0.05 ). There was a difference in the body weight of the high performance treatment in the growth period in relation to the other treatments (p <0.05). There was no difference in mean values for scrotal circumference at the age of 10 - 11 months old for Nellore bulls in high performance treatment during the growth period and high performance in the finishing period (AA) and average performance in the growing period and high performance in the finishing period (MA). The BA treatment differed from the AA treatment at the same age (p <0.05). There was a difference in the finishing period at 16 - 17 months of age in relation to the other treatments (p <0.05). In experiment II, there was no difference between body weight and postmortem testicular biometries (p> 0.05). Regarding the tubule diameter and height of the seminiferous epithelium, there was no difference between the means obtained in the different treatments (p> 0.05). There was a difference in body weight in treatment B compared to treatment C for 11-12 and over 13 months of animals age (p <0.05). There was a difference in the scrotal circumference of Nellore bulls above 13 months of age in relation to the 9 - 10 and 11 - 12 months of conventional diet treatment, 100% supply of Ca, P and micromineral requirements (A), conventional diet to supply 100% of the requirements of microminerals, and without the addition of limestone and dicalcium phosphate (C) and conventional diet without the addition of limestone, dicalcium phosphate and premix micromineral (D). In experiment III, the animals of the treatment with 14% CP presented higher body weight means values compared to those with 10% of CP and the means obtained from the animals submitted to the maintenance diet with 12% of CP did not differ from the animals submitted to diets with 10 and 14% CP (p> 0.05). The postmortem testicular biometry mean values in the animals treated with 10, 12 and 14% CP were higher than the values obtained for the maintenance treatment animals with 12% CP (p <0.05). There was a significant interaction between ages with body weight. The body weight of the 10, 12 and 14% crude protein treatments for Nellore and Nellore x Aberdeen Angus bulls was higher when compared to the maintenance treatment. The body weight mean values of 12 and 14% crude protein treatments for Nellore bulls did not differ among them (p> 0.05), but the mean values obtained for the treatments with maintenance diet differed from the other means obtained in the other evaluated treatments (p <0.05). The interaction between age and race for body weight differed for Nellore and Nellore x Aberdeen Angus bulls at 14 and 16 months of age, when compared to the other age treatments (p <0.05). The scrotal circumference of 10, 12, 14% and maintenance treatments did not differ when evaluated by age treatment (p> 0.05). The age range of 14 - 16 months treatments with 12, 14% and maintenance diets differed when compared to the other age treatment (p <0.05). However, there was no difference in the gonadosomatic index (GSI) obtained for the animals in the different diets (p> 0.05). Analyzing the effect of genetic groups, the values obtained for body weight, left testicle length, left testicle width, left testicle volume, right testicle length, right testicle width and testicular volume were higher for Nellore x Aberdeen Angus crossbred bulls compared to Nellore bulls (p <0.05). Other postmortem characteristics such as, right testicular volume, testicular weight with and without epididymis were not shown to be different among genetic groups (p> 0.05). There was a difference in the diameter of the seminiferous tubules and height of seminiferous epithelium in animals fed with 14% CP (p <0.05). However, there was no difference (p> 0.05) in the mean values obtained in 10, 14% CP and the maintenance (12% CP) treatments. There was an interaction of genetic groups with body weight (p <0.05). The body weight mean values of the animals with 10 and 12% CP treatments were higher in Nellore x Aberdeen Angus crossbred animals than those obtained for Nellore bulls (p <0.05). When compared the crude protein concentration in relation to the body weight of the Nellore and Nellore crossbreds bulls, the mean values obtained were higher for the animals treated with 10, 12 and 14 % CP when compared to the treatment animals with maintenance diet 12% CP (p <0.05). The gonadosomatic index for the maintenance treatment 12% CP was higher for Nellore x Aberdeen Angus crossbred bulls than the Nellore bulls (p <0.05). In the second chapter: The objective of this study was to compare eight nonlinear models to describe the growth curve of the scrotal circumference (SC) as a function of age in Nellore bulls in extensive management. In the analysis, 32,635 scrotal circumference measurements were performed from 12,974 Nellore bulls with a mean age of 18 months up to 170 months of age. The nonlinear models Logistic, Brody, Gompertz, Richards, Von Bertalanffy, Tanaka, Negative Exponential and Janoschek and their parameters obtained by the Gauss-Newton interactive method were used to estimate the parameters for each nonlinear model, and were evaluated using Proc NLIN from the Statistical Analysis System. The Brody model was chosen to analyze the effects of the origin place and the birth year of the animals on the parameters A and k. The Richards and Janoschek models did not converge. The A parameter (asymptote) was similar for Logistic (39.87), Brody (39.95), Gompertz (39.91), Von Bertalanffy (39.92) and Negative Exponential (39.65) models. The logistic model estimated the highest value for B parameter (1,25), followed by the Gompertz (1,00), Brody (0,80), Von Bertalanffy (0,31) and Tanaka (0,20) models. The k parameter (maturity rate) presented the highest estimate for the logistic model (0.00264), followed by the Gompertz (0.00245), Von Bertalanffy (0.00238) and Brody (0.00226) models. The Tanaka model estimated the inflection point at 596 days of age with 31.03 cm of scrotal circumference. The Tanaka model had the best fit estimates among the evaluated models. The highest R 2 was observed by the Tanaka model (0.432). The asymptotic models presented similar R 2 mean values. All nonlinear models presented similar values of error sum of squares (ESS), average prediction error (APE) and mean absolute deviation (MAD). The place and year of birth showed a significant effect on the parameters A and k. In general, all the models presented some tendency to sub or overestimate the scrotal perimeter. The results obtained allowed the conclusion that the Brody model was the most adequate to describe the scrotal circumference according to the age of Nellore bulls raised in extensive management.