O objetivo, deste estudo foi investigar o comportamento dos hormônios esteróides 17β-Estradiol (E2), 17α-hidroxiprogesterona (17α-OHP), Testosterona (T) e 11-Ketotestosterona (11-KT), em piracanjuba Brycon orbignyanus de diferentes sexos e idades, na estação reprodutiva, e nas fêmeas submetidas à reprodução induzida. Os animais utilizados no trabalho, eram criados em piscicultura comercial, mantidos em 3 viveiros, separados por lotes de diferentes idades. A coleta dos animais, consistiu de quatro machos e cinco fêmeas (48 meses), identificados através do dimorfismo sexual da espécie, e as demais idades, (12 e 24 meses), coletaram-se, 20 peixes de cada idade, para identificação do sexo através de histologia. Já o experimento de caracterização dos esteróides sexuais na reprodução induzida, foram coletadas cinco fêmeas, selecionadas através das características com: abdome abaulado, papila urogenital, saliente e avermelhada. Após captura, os peixes foram transportados ao laboratório, onde houve coleta de sangue, para quantificação do perfil plasmático de E2, 17α-OHP, T e 11-KT. Posteriormente, os animais foram abatidos e suas gônadas coletadas e fixadas, a fim de que fosse realizada análise histológica para identificação do sexo. Na reprodução induzida, foi coletado sangue em dois momentos: pré-indução (PI) e pós-extrusão (PE). O nível plasmático de E2 nos machos de 12 meses destaca sua ação no processo de proliferação e renovação das espermatogônia observado em machos imaturos. Nas fêmeas o E2 apresentou os maiores níveis (P<0,05) nos animais de 48 meses, confirmando assim, sua principal função na estimulação do processo de vitelogênese, e maturação final do oócito. Quanto aos andrógenos T e 11-KT, os maiores níveis (p<0,05) foram observados nos peixes adultos (48 meses), permitindo afirmar que estes atuam como feedback negativo, do FSH e feedback positivo do LH, fundamental no processo de maturação final e liberação dos gametas, além de regular o comportamento reprodutivo. O resultado da 17α-OHP, sugere que, nas idades estudadas, é indispensável por participar como precursor dos principais esteróides (T, E2 e 11-KT), além da 17α,20β dihydroxy-4-pregnen-3-one (17α,20β-DHP), essencial no estágio final de maturação, e desova na reprodução induzida. / The objective of this study was to investigate the physiological behavior of steroid hormones 17β-Estradiol (E2), 17α-hydroxyprogesterone (17α-OHP), testosterone (T) and 11-Ketotestosterone (11-KT) in Brycon orbignyanus with different sex and ages on the reproductive season and in females submitted to induced reproduction. The animals used in the study were kept in three ponds on a commercial fish farming, separated by lots with different ages. The sampling of animals consisted of the collection of four males and five females (48 months) identified by the sexual dimorphism of the specie. In the other groups (12 and 24 months), 20 fish of each age were collected for identification of sex through histology. In the experiment with characterization of the sexual steroids in the induced reproduction, were collected five females selected through the following characteristics: bulging abdomen and prominent reddish genital papilla. After capture, the fish were transported to the laboratory, where blood was collected for quantification of the plasma profile of E2, 17α-OHP, T and 11-KT Subsequently, the animals were slaughtered and their gonads were collected and fixed for histological analysis. In the induced females, blood was collected at two moments: pre-induction (PI) and post-extrusion (PE). The plasma profile of E2 is fundamental in immature males, highlighting its action in the process of proliferation and renewal of spermatogonia, observed in males of 12 months. In females E2 presented the highest levels (P <0.05) in animals at 48 months, thus confirming its main function in the stimulation of the vitellogenesis process and final oocyte maturation. The highest levels (p <0.05) of T and 11-KT androgens were observed in adult fish (48 months), allowing to affirm that they are acting as FSH negative feedback and LH positive feedback, fundamental in the final maturation and release of the gametes, besides regulating the reproductive behavior of the fish. The results of 17α-OHP suggest this hormon is fundamental in the studied ages because it is a precursor of the main steroids (T, E2 and 11-KT) and 17α, 20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (17α, 20β-DHP), essential in the final stage of maturation and spawning in induced reproduction.

A espécie em estudo (Brycon orbignyanus) vem apresentando um declínio populacional importante nos últimos anos em função de interferências antrópicas. Por este motivo, populações naturais na bacia do rio Uruguai são praticamente inexistentes, e os estoques mantidos em cativeiro apresentam razões sexuais desproporcionais e perdas importantes de variabilidade genética, o que prejudica o uso desta espécie em programas de conservação. Esta tese tem como objetivo principal avaliar parâmetros populacionais e reprodutivos de Brycon orbignyanus sob condições de cativeiro visando a aplicabilidade deste conhecimento em programas de conservação. Com isso, objetivou-se no primeiro experimento avaliar as flutuações na razão sexual ao longo do desenvolvimento ontogenético e os diferentes padrões morfológicos de crescimento entre os sexos. Quinhentos exemplares foram amostrados de uma piscicultura comercial e os dados biométricos foram registrados para a realização de uma regressão linear entre peso e comprimento. A partir do teste Qui-Quadrado (χ²) foi possível observar que a razão sexual apresentou desproporções nas classes de comprimento superiores. Os machos e fêmeas apresentaram crescimento alométrico positivo (b=3,35 e b=3,44), enquanto indivíduos sexualmente indiferenciados apresentaram alometria negativa (b=2,96) O objetivo do segundo estudo foi descrever os processos de diferenciação sexual, afim de definir o período termossensível. Após eutanásia dos animais, as gônadas foram coletadas e fixadas em solução formaldeído tamponado 4%. Os cortes seriados (3μm) foram corados com Azul de Toluidina e analisados por microscopia de luz. Os primeiros sinais de diferenciação sexual foram observados apenas aos 323 dias após a fertilização (DAF) e, aos 730 DAF todos os indivíduos já estavam diferenciados sexualmente. O objetivo do terceiro estudo foi descrever o ciclo reprodutivo de machos de B. orbignyanus, a fim de se estabelecer uma escala de maturação para machos desta espécie. Para isto, exemplares da espécie foram coletados periodicamente em uma estação de piscicultura comercial. Assim como no experimento anterior, as gônadas foram coletadas e fixadas para análise histológica. As análises das imagens foram obtidas através de microscópio óptico e a descrição das fases reprodutivas seguiu recomendações de Brown-Peterson et al. (2011). Foram estabelecidas 5 fases reprodutivas de acordo com as características macroscópicas dos testículos, presença e distribuição das células espermatogênicas e variações no índice gonadossomático. Os primeiros indivíduos aptos à reprodução foram observados aos 435 DAF. / The species under study (Brycon orbignyanus) has undergone a important population decline in the last years due to anthropic interferences. For this reason, natural populations in the Uruguay River basin are practically non-existent, and stocks kept in captivity suffer from disproportionate sex ratios, and significant losses of genetic variability, impairing the use of this species in conservation programs. The main objective of this thesis is to evaluate the population and reproductive parameters of Brycon orbignyanus under captive conditions aiming the applicability of this knowledge in conservation programs. Thus, the objective of the first experiment was to evaluate the fluctuations in sexual ratio along the ontogenetic development and the different morphological patterns of growth between the sexes. Five hundred specimens were sampled from commercial fish farming and biometric data were recorded for a linear regression between weight and length. From the chi-square test (χ²) it was possible to observe that the sex ratio showed disproportions in the upper length classes. Males and females showed positive allometric growth (b = 3.35 and b = 3.44), while sexually undifferentiated individuals showed negative allometry (b = 2.96). The objective of the second experiment was describe the processes of sexual differentiation, in order to define the thermosensitive period After euthanasia of the animals, the gonads were collected and fixed in 4% buffered formaldehyde solution. Serial sections (3 μm) were stained with Toluidine Blue and analyzed by light microscopy. The first signs of sexual differentiation were observed only at 323 days after fertilization (DAF), and at 730 DAF all individuals were already sexually differentiated. The objective of the third experiment was to describe the reproductive cycle of B. orbignyanus males, in order to establish a maturation scale for males of this species. For this, specimens were collected periodically in a commercial fish farm. As in the previous experiment, the gonads were collected and fixed for histological analysis. The images were obtained through an optical microscope and analyzed according to the description of the reproductive phases suggested by Brown-Peterson et al. (2011). Five reproductive phases were established according to macroscopic characteristics of the testes, presence and distribution of spermatogenic cells and variations in the gonadosomatic index. The first individuals able to reproduce were observed at 435 DAF.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-12-04T12:19:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CocultivoEmbrioesBovinos.pdf: 1514173 bytes, checksum: 3a720fb9e7e5105e7d7ca80b17a04e2d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-12-04T12:56:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CocultivoEmbrioesBovinos.pdf: 1514173 bytes, checksum: 3a720fb9e7e5105e7d7ca80b17a04e2d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-04T12:56:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CocultivoEmbrioesBovinos.pdf: 1514173 bytes, checksum: 3a720fb9e7e5105e7d7ca80b17a04e2d (MD5) Previous issue date: 2014 / A produção in vitro de embriões (PIV) é uma biotecnologia utilizada para aumentar o potencial reprodutivo de animais geneticamente superiores, os embriões produzidos in vitro são de qualidade inferior aos produzidos in vivo, por isso técnicas tentam melhorar os índices de embriões produzidos in vitro. Uma técnica é o sistema de co-cultivo com células somáticas que removem metabólitos tóxicos e protegem contra o stress oxidativo. As células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (CTA) são células multipotentes que segregam fatores de crescimento e citocinas. As células-tronco foram utilizadas em co-cultivo in vitro de embriões bovinos em diferentes concentrações com o objetivo de melhorar o protocolo de PIVE. CTAs foram submetidas à diferenciação em três linhagens mesenquimais, e foi realizada a imunofenotipagem de marcadores específicos de membrana das CTMs. A taxa de clivagem foi avaliada no segundo dia após a fertilização e taxa de blastocistos no sétimo dia, quando foram armazenados para contagem do número total de células e expressão gênica. Os resultados foram analisados por ANOVA, Teste-t e pós-teste de Fisher, adotando um nível de significância de 5%. O tratamento do co-cultivo com CTAs influenciou significativamente a formação de blastocisto, o número total de células de embriões e a expressão gênica correlacionada a pluripotência e metabolismo de carboidratos. Estes resultados mostraram aumento da taxa de produção e qualidade dos embriões produzidos in vitro em co-cultivo com CTAs em relação ao co-cultivo com células da granulosa. Os resultados deste trabalho indicam também que a presença constante de CTAs em co-cultivo é superior ao condicionamento com CTAs. Os efeitos verificados das CTAs podem ocorrer através de fatores solúveis ou via exossomos secretados pelas CTAs. Estudos futuros são necessários para esclarecer a possível via causadora dos efeitos positivos verificados neste trabalho pelas CTAs em co-cultivo. / The in vitro embryo production (IVP) is a biotechnology used to increase the reproductive potential of genetically superior animals, embryos produced in vitro are inferior in quality when compared in vivo. Techniques trying improve the rates of in vitro produced embryos. One technique is the co-culture system using somatic cells that remove toxic metabolites and protect against oxidative stress. Mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (CTA) are multipotent cells that secrete growth factors and cytokines. The stem cells were used in in vitro co-culture of bovine embryos at different concentrations in order to improve the protocol PIVE. CTAs underwent differentiation into three mesenchymal lineages, and was performed immunophenotyping of specific membrane markers of MSCs. The cleavage rate was assessed on the second day after fertilization and blastocyst rate on the seventh day when they were stored for counting the total number of cells and gene expression. The results were analyzed by ANOVA, T-test and post-test of Fisher, adopting a significance level of 5%. Treatment of co-cultivation with CTAs significantly influenced the formation of the blastocyst, the total number of cells in embryos and correlated gene expression pluripotency and carbohydrate metabolism. These results showed increased production rate and quality of embryos produced in vitro co-culture with CTAs compared to co-culture with granulosa cells. These results also indicate that the constant presence of CTAs in co-culture is superior to conditioning with CTAs. Checked the effects of CTAs can occur through soluble factors or via exosomes secreted by CTAs. Future studies are needed to clarify the possible cause for positive effects observed in this work by the CTAs in co-cultivation.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T14:14:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EfeitoMeioCondicionado.pdf: 921361 bytes, checksum: 836f42e4214b67273644ea066034ca71 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:40:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EfeitoMeioCondicionado.pdf: 921361 bytes, checksum: 836f42e4214b67273644ea066034ca71 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:40:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EfeitoMeioCondicionado.pdf: 921361 bytes, checksum: 836f42e4214b67273644ea066034ca71 (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / As células tronco são conhecidas por suas propriedades de auto-renovação, diferenciação em diversas linhagem celulares e capacidades imunomoduladores, além de expressarem um grande número de moléculas de adesão, as proteínas de matriz extracelular, citocinas e receptores para fatores de crescimento, permitindo interações com demais células. Podem ser isoladas de vários tecidos, porém as células-tronco adultas derivadas do estroma do tecido adiposo (MSC-ad) apresentam como vantagens a facilidade de isolamento, alto rendimento e baixa morbidade. Baseado nisso, a hipótese deste trabalho é verificar se o uso de meio condicionado pelas MSC-ad na maturação in vitro tem efeito sobre a as taxas de desenvolvimento de embriões bovinos. Para tanto, foi feito o isolamento e em seguida o cultivo de MSC-ad de origem bovina que se estendeu até a passagem três (P3) em meio de cultivo DMEM, suplementado com bicarbonato de sódio, 10% Soro fetal bovino (SFB), 50μl/mL de gentamicina. Quando os cultivos atingiram a confluência de 70% o meio foi substituído por TCM199 suplementado com 0.2 mM de piruvato, 50 μl/ml de gentamicina e 10% de SFB (meio de MIV). As MSC-ad foram condicionadas com meio TCM199 suplementado pelo período de 0 (Grupo CONTROLE), 24 (grupo COND-24h), 48 (grupo COND-48h) e 72 horas (grupo COND-72h), sendo que ao fim de cada período, o meio sobrenadante foi retirado, filtrado, aliquotado e congelado a -200 C. O meio foi descongelado somente no dia da MIV, e suplementado com 0,5 μl de PMSG (concentração 7UI/Ml) e 0,5 μl de HCG. Ovários de abatedouro foram puncionados para obtenção de complexos cumulus oophurus (CCOs) que foram maturados por 24 horas em microgotas de meios condicionados sob óleo mineral e incubados em estufa a 5% de CO2 com 38,5° C. A avaliação da maturação nuclear foi feita com 22 horas, em seguida realizada a ativação partenogenética somente dos oócitos que exibiam corpúsculo polar com concentração em 50 μM de ionomicina por 5 minutos, inativação com TCM199-Hepes saturado com 0,03g de BSA, seguida de incubação por 3 horas em microgotas de 2mM de 6-DMAP. Após esse período as partenogêneses foram transferidas para migrogotas de meio de cultivo in vitro. As taxas de desenvolvimento foram avaliadas no segundo e sétimo dia após a ativação. Os resultados foram analisados por ANOVA e pós-teste de Fisher adotando nível de significância de 5%. Para os grupos experimentais CONTROLE, COND-24h, COND-48h e COND-72h, obtivemos os seguinte 14 resultados, respectivamente: 83.7, 77.7, 81,4 e 76.1% de maturação nuclear; 87.5, 86,9, 74 e 80.3% de clivagem e 23.8, 27.5, 18 e 19.6% de formação de blastocisto. Não houve diferença estatística entre os grupos experimentais condicionados (p>0.05). Porém, as taxas de blastocisto foram menores quando comparadas ao meio de MIV fresco (42.1%) (p<0.05). Isto sugere que o condicionamento ou o congelamento do meio afetou a sua eficiência. Estudos futuros deverão ser realizados para avaliar os níveis dos fatores de crescimento, citocinas e quimiocinas secretadas no meio de MIV. / Stem cells are known for their property of self-renewal, differentiation into various cell lineages and immunomodulatory capabilities, in addition to express a large number of adhesion molecules, extracellular matrix proteins, cytokines and growth factor recptors, allowing interactions with other cells. They can be isolated from various tissues, but adult stem cells derived from adipose tissue stroma (MSC-d) have the advantage of being easely isolated, high yield and low morbidity. Based on this, the study hypothesis is to verify the effect of MSC-ad conditioned medium use in in vitro maturation on development rates of bovine embryos. To this end, bovine MSC ad were isolated then cultivated until the passage three (P3) in DMEM culture medium, supplemented with sodium bicarbonate, 10% fetal bovine serum (FBS), 50mL / mL gentamicin. When cultures reached 70% confluency, the medium was replaced with TCM199 supplemented with 0.2 mM pyruvate, 50 ul / ml gentamicin and 10% FBS (IVM medium). The MSC-ad were conditioned with medium TCM199 supplemented for a period of 0 (Control Group), 24 (COND-24 group), 48 (COND-48h group) and 72 hours (COND group-72h), wherein the end of each period, the supernatant medium was removed, filtered, aliquoted and frozen at -20 0 C. The medium was thawed only on MIV day, and supplemented with 0.5 uL of PMSG (concentration 7 IU / ml) and 0.5 uL of HCG. Slaughterhouse ovaries were punctured to obtain oophurus cumulus complexes (COCs) were matured for 24 hours in microdrops of conditioned mediums under mineral oil them incubated in an incubator at 5% CO 2 at 38.5 ° C. Nuclear maturation assessment was performed with 22 hours, then held 15 parthenogenetic activation of only oocytes that exhibited polar body concentration of at least 50 uM ionomycin for 5 minutes, inactivation with TCM199-Hepes 0.03g saturated with BSA, followed by incubation for 3 hours microdroplets 2mM 6-DMAP. After this period, the parthenogenesis were transferred as microdrops to a culture medium in vitro. development rates were evaluated in the second and seventh days after activation. The results were analyzed by ANOVA and Fisher's post-test adopting a significance level of 5%. For groups: Experimental CONTROL, COND-24, COND-48h and 72h-COND, we obtained the following results respectively: 83.7, 77.7, 81.4 and 76.1% of nuclear maturation; 87.5, 86.9, 74 and 80.3 and 23.8% cleavage, 27.5, 18 and 19.6% of blastocyst formation. There was no statistical difference between condinioned experimental groups (p<0.05). However, blastocyst rates were lower when compared with fresh IVM medium (42.1%) (p<0.05). This suggests that the efficiency was affected by the conditioning of the medium or freezing. Future studies should be conducted to assess the levels of growth factors, cytokines and chemokines secreted in IVM medium.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-05T11:48:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PolimorfismosGeneOsteopontina.PDF: 512218 bytes, checksum: 778ee81294f6547b26545b2516f0d00f (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-09T21:55:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PolimorfismosGeneOsteopontina.PDF: 512218 bytes, checksum: 778ee81294f6547b26545b2516f0d00f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T21:55:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PolimorfismosGeneOsteopontina.PDF: 512218 bytes, checksum: 778ee81294f6547b26545b2516f0d00f (MD5) Previous issue date: 2012-09-24 / Este trabalho teve como objetivo identificar polimorfismos neste gene e associar os mesmos aos parâmetros de fertilidade de búfalos criados de forma extensiva. Foram utilizados 306 machos bubalinos, acima de 18 meses de idade, criados em duas propriedades, uma no estado do Amapá e outra no estado do Pará. Os resultados obtidos para a extração de DNA através de pêlos foram de excelente quantidade, com concentração maior que 50ng/l. Ambos pares de primers amplificaram as regiões específicas do gene da osteopontina. Foram identificados 3 polimorfismos do tipo SNP para a região amplificada pelo primer OS4 (5`UTR) e 4 polimorfismos do tipo SNP para a região amplificada pelo primer OS9 (éxon 5 ao éxon 6). Os polimorfismos foram nas posições 1478, 1513 e 1611 na região amplificada pelo OS4 e nas posições 6690, 6737, 6925 e 6952 na região amplificada pelo OS9. Para todas as características estudadas foram encontrados SNPs significativos a 5%. Para circunferência escrotal, o SNP 6690; para volume testicular, o SNP 6737; para a concentração, o SNP 6690; para motilidade, o SNP 6690 e para patologia espermática, o SNP 6690. Estando os polimorfismos do SNP 6690 relacionado com quatro características. Para a característica CE o genótipo AA foi associado (P<0,05) com os animais que apresentaram maior média de circunferência escrotal, maior média de concentração espermática, maior média de motilidade e menor número de patologias totais. Entretanto, para a característica volume testicular, os animais que apresentaram maior volume estão correlacionados com a presença do genótipo GG, para o SNP 6737. Isso indica que o gene da osteopontina pode influenciar as características reprodutivas em machos bubalinos. / Because the osteopontin gene can influence the fertility of water buffaloes, the aim of this work was to identify polymorphisms in this gene and associate them with fertility parameters of animals kept under extensive grazing. We used 306 male buffaloes older than 18 months, bred on two farms, one in the state of Amapá and the other in the state of Pará. We identified three SNP for the region amplified by the primer OS4 (5`UTR) and four SNP polymorphisms for the region amplified by the primer OS9 (exon 5 to exon 6). The polymorphisms were in positions 1478, 1513 and 1611 in the region amplified by OS4 and positions 6690, 6737, 6925 and 6952 in the region amplified by OS9. We calculated correlations with the traits scrotal circumference and volume and sperm motility, concentration and pathology. There were SNPs for all the traits studied at 5% significance: for circumference, SNP 6690; for volume, SNP 6737; for concentration, SNP 6690; for motility, SNP 6690; and for pathology, SNP 6690. Therefore, SNP 6690 was related to four traits. The AA genotype of SNP 6690 presented the highest averages for scrotal circumference, sperm concentration and motility and the lowest total number of pathologies. However, for the scrotal volume trait, the animals with the largest volume were correlated with the presence of the GG genotype of SNP 6737. This indicates that the osteopontin gene is important because it can have a substantial influence on the reproductive traits of male buffaloes.

Resumo:Influências ambientais, como a nutrição, durante a fase inicial da gestação de fêmeas bovinas podem ter impacto no desenvolvimento fetal e consequentemente na vida adulta. O desenvolvimento dos ovários dos fetos é estabelecido durante o início da gestação. Testamos a hipótese de que a restrição e/ou excesso de nutrientes ingeridos por vacas durante os primeiros 60 dias da gestação interfere no desenvolvimento corporal e transcriptoma ovariano dos fetos. Vinte e uma vacas Nelore uníparas foram submetidas a inseminação artificial com sêmen sexado (fêmea) de um único touro e alocadas individualmente em diferentes dietas. A dieta do grupo controle atendeu as exigências de mantença para a categoria animal (100%), e a dos grupos de alta e baixa ingestão a 180% e 60% dos requerimentos de mantença, respectivamente. Amostras de sangue venoso foram colhidas para quantificação de progesterona, LH, insulina e leptina. Aos 60 dias de gestação oito fetos foram removidos por colpotomia (acesso via vaginal), pesados, os ovários dissecados e pesados. Os ovários (um de cada par) foram submetidos ao RNA-Seq. Observou-se que o status nutricional materno durante os primeiros 60 dias de gestação influenciou: o perfil hormonal de progesterona, insulina e leptina, que foi menor nos animais do grupo de baixa ingestão; a relação peso ovariano/peso corporal dos fetos do grupo de alta ingestão que foi maior comparada aos demais; o padrão de expressão gênica nos ovários entre os fetos dos grupos controle, alta e baixa ingestão. Concluímos que mudanças na nutrição materna durante os primeiros 60 dias de gestação podem alterar o desenvolvimento fetal e o perfil transcriptômico dos ovários fetais / Abstract:Environmental influences such as nutritional restriction during early gestation may impair fetal development and compromise functions in adulthood. Ovarian development occurs during early gestation. We hypothesized that restriction or excess of nutrients ingested by cows during the first 60 days of pregnancy affects fetal body weight and ovarian development. Fifty uniparous Nelore cows were subjected to Timed Artificial Insemination with sexed semen (female) of a single bull and individually allocated on different diets. The diet used for the control group met the maintenance requirements and the groups with high and low either 180% or 60% of maintenance, respectively. Venous blood samples were collected for plasma progesterone, LH, insulin and leptin quantification. At 60 days of gestation, eight fetuses were removed by colpotomy (accessed through the vagina), weighed, ovaries were dissected and weighed. One fetal ovary (of each pair) was used for transcriptional analysis by RNA-seq. It was observed that maternal nutritional status during the first 60 days of gestation: 1) progesterone, insulin and leptin levels which were lower in the group with low; 2) the relative ovarian weight / body weight of fetuses in the high intake group was higher compared to the others groups; 3) ovarian gene expression patterns differedbetween control, high and low groups. Thus, we conclude that changing maternal nutrition during the first 60 days of gestation affects the development and transcriptomic profile of fetal ovaries / Orientador:Guilherme De Paula Nogueira / Banca:Daniel de Jesus Cardoso de Oliveira / Banca:Flávia Lombardi Lopes / Banca:Alexandre Mendonça Pedroso / Banca:Juliana Regina Peiró / Doutor

A expressão do gene Kiss1 é essencial para o controle neuroendócrino da reprodução, pois esses neurônios regulam a atividade dos neurônios que secretam o hormônio liberador de gonadotrofinas, e portanto, o ciclo ovulatório. Em roedores sazonais, o aumento da síntese de melatonina durante o inverno é responsável pela inibição das funções reprodutivas, fato que é acompanhado pela diminuição da expressão desse gene. Devido à importância dos neurônios Kiss1 no desenvolvimento do sistema reprodutivo, o presente estudo investigou a participação da melatonina na regulação da expressão do gene Kiss1 e sua influência na reprodução, em um modelo animal não sazonal. Concluimos que condições de dias curtos (que possivelmente aumentam o período de circulação de melatonina) alteram parâmetros de amadurecimento sexual em fêmeas e, assim como o tratamento com melatonina, afetam o tamanho das gônadas de camundongos machos, mas que esses efeitos não alteram o número de neurônios que expressam o gene Kiss1 e não são suficientes para inibir a reprodução das fêmeas. / The expression of Kiss 1 gene is essential for the neuroendocrine control of reproduction, as these neurons regulate the activity of neurons that secrete gonadotropin-releasing hormone, and therefore the ovulatory cycle. In seasonal rodents, the increase in melatonin synthesis during winter is responsible for the inhibition of reproductive functions, a fact that is accompanied by decreased expression of this gene. Because of the importance of Kiss1 neurons in the development of the reproductive system, the present study investigated the involvement of melatonin in the regulation of expression of Kiss1 gene and its influence on reproduction in a non-seasonal animal. We conclude that short-day conditions (which possibly increase the period of melatonin circulation) alter sexual maturation parameters in females, and as well as melatonin treatment, affect the size of the gonads of male mice, but these effects do not change the number neurons expressing the Kiss1 gene and are not sufficient to inhibit the reproduction of female mice.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-23Bitstream added on 2014-08-13T18:00:35Z : No. of bitstreams: 1 000758023_20160523.pdf: 340042 bytes, checksum: 9282dceda721f0696e2c05e88b75c33d (MD5) Bitstreams deleted on 2016-05-23T16:38:29Z: 000758023_20160523.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-23T16:39:07Z : No. of bitstreams: 1 000758023.pdf: 922794 bytes, checksum: bee1fddc26f377d60fa6ac89017b5dc1 (MD5) / O crescimento folicular em bovinos ocorre em um padrão de ondas que pode variar de 2 a 3 por ciclo estral e caracteriza-se pelo crescimento sincrônico de um grupo de folículos antrais, onde apenas um se tornará dominante. A quantidade de folículos recrutados é variável entre os animais, porém apresenta alta repetibilidade entre os indivíduos. Animais Bos indicus apresentam maior quantidade de folículos recrutados por onda que animais Bos taurus. Objetivou-se com o presente trabalho, (1) identificar fêmeas das raças Nelore (Bos indicus) e Aberdeen Angus (Bos taurus), que possuam elevado ou reduzido número de folículos recrutados por onda e relacionar o número de folículos à concentração plasmática do hormônio anti-mulleriano (AMH); (2) relacionar o numero de folículos antrais à fertilidade de fêmeas Nelore e; (3) determinar se o tratamento superestimulatório altera as concentrações plasmáticas de AMH em vacas Nelore. No experimento 1, contagem do numero de folículos antrais das fêmeas Nelore (n=20) e Angus (n=30) foi feita por duas avaliações ultrassonográficas (US). Considerando a média  EPM da contagem de folículos antrais de cada raça, as novilhas foram classificas em alta contagem folicular (ACF; n= 9 novilhas Nelore e 15 Angus) ou baixa contagem folicular (BCF; n= 11 novilhas Nelore e 15 Angus). O AMH foi mensurado por Elisa em uma amostra de sangue coletada durante a ultima US. No experimento 2, foram utilizadas novilhas da raça Nelore (n=86) submetidas a um protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF). As novilhas foram classificadas (avaliação US no D0 da IATF) em 3 grupos: ACF (>40 folículos; n=29), intermediário (ICF;>20 e <40 folículos; n=34) e BCF (<20 folículos; n=23). No experimento 3, foram utilizadas 20 vacas da raça Nelore de ICF e ACF. Os animais foram separados pela contagem folicular e distribuídos em 2 grupos: Grupo controle IATF (n=9) e grupo P36 (superestimuladas ... / In bovines follicular development happens in a wave pattern that can vary from two to three waves per estral cycle with a group of follicles growing simultaneously but with only ano becoming the dominat follicle. The number of recruited follicle is highly variable between animal; however it is highly repeatable within an animal. Bos indicus animals present greater number of follicles per wave than Bos taurus animals. The objective of the present study was 1) identify animals from the Nelore and Abeerden Angus breed that have high or low number of follicles recruited per follicle wave and relate the number of follicles with AMH concentration; 2) to relate the number of antral follicles with the fertility of Nelore females; 3) to determine if the superstimulatory treatment alters the plasmatic concentrations of AMH. In experiment 1 the follicle count in Nelore and Angus heifers was done through two ultrasound examinations (US). Considering the mean + SEM of the follicle count in each breed, the heifers were grouped in high (HFC) or low (LFC) follicle count. Plasmatic AMH was measured in a blood smple drawn at the last US. In Experiment 2, there were used Nelore heifers submitted to a TFAI protocol. Heifers were grouped in HFC (>40 follicles), intermediary (>20 an <40 follicle) and LFC (<20 follicle). In experiment 3, Nelore cows with high and intermediary follicles counts were used. Animals were separated in control TFAI group and P36 group. Blood samples for AMH measurement were collected on day 5 (P36) and on day 8 (TFAI and P36). Result from experiment 1 were analyzed using ANOVA. Experiment 2 was analyzed using a logistic regression and experiment 3 was ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-23Bitstream added on 2014-06-13T19:43:47Z : No. of bitstreams: 1 albuquerque_vb_dr_botfm.pdf: 1170783 bytes, checksum: 22ffeeb5255c44c090a0b2b369ecc8db (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivou-se investigar a utilização da morfina em diferentes doses associada à ropivacaína ou à levobupivacaína pela via peridural de cadelas submetidas à OSH eletiva. Utilizou-se 48 cadelas hígidas, adultas, de diferentes raças e com peso médio de 9,8±4,1kg. Decorridos 20 minutos da pré-medicação com acepromazina (0,05mg/kg) e midazolam (0,2mg/kg) os animais foram submetidos à anestesia peridural e distribuídos aleatoriamente em seis grupos distintos, sendo: GRM0,15= ropivacaína + morfina (0,15 mg/kg), GRM0,2= ropivacaína + morfina (0,2 mg/kg), GL= levobupivacaína (0,3mL/kg), GLM0,1= levobupivacaína + morfina (0,1 mg/kg), GLM0,15= levobupivacaína + morfina (0,15 mg/kg) e GLM0,2= levobupivacaína + morfina (0,2 mg/kg). Em cada momento experimental foram aferidos os parâmetros: frequência e ritmo cardíaco; frequência e variáveis respiratórias; variáveis hemogasométricas obtidas de amostras de sangue arterial, glicemia e lactato sanguíneos; índice biespectral; pressão arterial sistólica, média e diastólica; temperatura retal; dosagem sérica de cortisol, morfina, levobupivacaína e ropivacaína; além da avaliação não-paramétrica do período de latência e duração da levobupivacaína e escores de analgesia pós-operatória. Os dados foram submetidos à ANOVA e comparados pelos testes de Kruskal-Wallis, Friedman, Dunn e Tukey (p< 0,05). Concluiu-se que o incremento na dose de morfina pela via peridural permitiu a realização de cirurgias de OSH eletivas, com mínimos efeitos sobre as variáveis cardíacas, respiratórias, hemogasométricas e do cortisol sérico em cadelas sob infusão contínua de propofol; os efeitos colaterais observados foram mínimos e sem comprometimento clínico das pacientes, tendo desaparecido até o momento da alta dos animais. As curvas séricas acompanharam o período hábil dos fármacos, sendo suas concentrações praticamente nulas ao... / The aim of this study was to investigate the use of morphine in various doses associated with ropivacaine or levobupivacaine for epidural in bitches undergoing elective ovariohysterectomy. Were used 48 healthy dogs, adults, of different breeds and average weight of 9.8 ± 4.1 kg. After 20 minutes of premedication with acepromazine (0.05 mg / kg) and midazolam (0.2 mg / kg) the animals underwent epidural anesthesia and randomized into six distinct groups, as follows: GRM0,15 ropivacaine + morphine = 15 (0.15 mg / kg), GRM0, 2 = ropivacaine + morphine (0.2 mg / kg), GL = levobupivacaine (0.3 mL / kg), GLM0, 1 = levobupivacaine + morphine (0.1 mg / kg), GLM0 , 15 = levobupivacaine + morphine (0.15 mg / kg) and GLM0, 2 = levobupivacaine + morphine (0.2 mg / kg). At each experimental time parameters were measured: heart rate and rhythm, rate and variable respiratory; haemogasometric variables obtained from arterial blood samples, blood glucose and lactate, bispectral index, systolic, mean and diastolic pressure, rectal temperature, serum concentrations of cortisol, morphine, bupivacaine and ropivacaine; beyond he evaluation of the latency period and duration of levobupivacaine and scores of postoperative analgesia. Data were submitted to ANOVA and compared by Kruskal-Wallis, Friedman, Tukey and Dunn (p<0.05). It was concluded that the increase in the dose of epidural morphine allowed for OSH elective surgery, with minimal effects on cardiac variables, respiratory, blood gas and serum concentrations of cortisol in dogs under continuous rate infusion of propofol; the side effects were observed minimum and no clinical consequences of patients, and disappeared by the time of higher animals. The serum curves followed the reasonable period of drugs, their concentrations near zero at the end of the epidural block. Levobupivacaine, when used alone for epidural in bitches, had sensory block (463 ± 173 minutes) ...

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-31Bitstream added on 2015-04-09T12:48:24Z : No. of bitstreams: 1 000815948.pdf: 466028 bytes, checksum: 6d558034e621d063e564ffdd55327e17 (MD5) / Para avaliar os efeitos de dietas alimentares utilizando fontes de gordura protegida (Megalac® ou linhaça) associada superestimulação hormonal sobre os parâmetros da aspiração folicular em cabras foram utilizadas 18 cabras da raça Anglo-Nubiano, clinicamente saudáveis e aptas a reprodução. Os animais foram divididos e alojados aleatoriamente em 3 grupos experimentais com 6 animais cada, sendo um grupo controle (C), com dieta utilizando-se o óleo de soja fonte de gordura alimentar, um grupo com dieta utilizando-se MEGALAC® (M) como fonte de gordura protegida, um grupo com dieta alimentar utilizando-se semente de linhaça (L) como fonte de gordura protegida. Todos os animais foram submetidos a ultrassonografia transretal para a avaliação da quantidade e do diâmetro folicular imediatamente antes da aspiração folicular por vídeo laparoscopia, os oócitos obtidos foram maturados in vitro e avaliados quanto a sua capacidade de maturação, para a uma melhor avaliação da resposta dos animais a dieta e ao procedimento de aspiração folicular foi coletada amostras de sangue de todos os animais para avaliação hematológica e da bioquímica sérica. Não houve diferença no escore de condição corporal e no ganho de peso dos animais. No exame ultrassonográfico foi notada diferença no diâmetro dos folículos observados entre o primeiro (4,29 ± 0,06) e o segundo (3,69± 0,07) ultrassom o diâmetro dos folículos considerados aspiráveis pelo ultrassom também diminuiu do primeiro (5,05 ± 0,06) para o segundo (4,71 ± 0,13) ultrassom. Notou-se uma maior média de folículos observados (28,4 ± 4,17) e aspirados (26,8 ± 4,12) e oócitos recuperados (10,9 ± 1,37) no Grupo C na. As análises sanguíneas não mostrou diferença entre grupos, porém parâmetros sofreram alterações no período pós operatório com retorno a normalidade nos momentos seguintes / To evaluate the effects of diet with protected fat (Megalac® or linseed) associated with ovarian super-stimulation on an follicular aspiration parameters, 18 anglo-nubian goats, in perfect health, were used. The animals were divided in 3 experimental groups with 6 individuals per group, one control group, under a diet without protected fat with an ovarian super-stimulation protocol, one group under a diet with MEGALAC® and under an ovarian super-stimulation protocol, one group under a diet with linseed and under an ovarian super-stimulation protocol. All the animals were submitted to an ultrasound evaluation immediately before the laparoscopic ovum pick up (LOPU), all the obtained oocytes were classified and in vitro maturated and evaluate as their ability to mature, to evaluate the responses of the animals, certified health and security of the diet and LOPU, blood samples were taken for evaluation of cell blood count, serum biochemistry profile. During the ultrasound exams were noticed a decrease in follicles diameter from the first(4,29 ± 0,06, mm) to second(3,69± 0,07, mm) ultrasound, and in viable follicles diameter from the first(5,05 ± 0,06, mm) to second (4,71 ± 0,13, mm) ultasound. Animals from the group C had more follicles observed (28,4 ± 4,17) and aspired (26,8 ± 4,12) and more oocytes recovered (10,9 ± 1,37), were noticed a decrease in number of thoses parameters in all groups from comparing the first LOPU with the second. Blood analyses did not shown any difference between gropus, however were significant changes on the post-surgical period, with a soon return to normality