PEREIRA, Jeane Ferreira. Efeito da composição bioquímica do plasma seminal de caprinos sobre os espermatozoides da cauda do epidídimo e ejaculado resfriados a 5º C. 2012. 48 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Zootecnia,Fortaleza-CE, 2012 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-29T13:55:37Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_jfpereira.pdf: 456808 bytes, checksum: 98257194240b5625e97a8337ee8c5779 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-29T13:55:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_jfpereira.pdf: 456808 bytes, checksum: 98257194240b5625e97a8337ee8c5779 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-29T13:55:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_jfpereira.pdf: 456808 bytes, checksum: 98257194240b5625e97a8337ee8c5779 (MD5) Previous issue date: 2012 / The present study was carried out to evaluate the effect of biochemical composition of seminal plasma (SP) on spermatozoa from caudal epididymis and ejaculated goat sperm, diluted in egg yolk-citrate (EYC) and egg yolk-tris (EYT). The ejaculates of 8 animals were collected in the morning and fresh semen was divided in order to obtain 4 treatments: EYC (washed ad no washed), EYT (washed ad no washed). On the same day, in the afternoon, the animals were orchidectomized to obtain spermatozoa from caudal epididymis, of which four aliquots of 100 L were removed. Two of them were added 120 L of autologous seminal plasma, consisted in other 4 treatments: EYC (spermatozoa from caudal epididymis with and without seminal plasma) e EYT (spermatozoa from caudal epididymis with and without seminal plasma). The seminal plasma was evaluated for biochemical composition. Samples of 8 treatments were analyzed for vigor, motility and sperm morphology, at 0 hour (fresh) and after 2 and 24 hours in storage at 5ºC. Data were analyzed with the statistic software SAS@. The following results were found. In grouping by the concentration of fructose and chlorides was observed a significant effect (p <0.05) independent of diluent and treatment, for ejaculated spermatozoa with minor defects and normal. From the potassium concentration was showed that only the vigor suffered group effect (p <0.05). In the spermatozoa from caudal epididymis, fructose was a significant effect for group interaction, treatment and time on motility, for the vigor there was a significant interaction effect between treatment and time and group effect, in the fructose and potassium concentrations, respectively. For the chloride concentration was observed a significant interaction between group and treatment on the occurrence of major defects, (p <0.05). After 24 hours of storage, the best values were observed in sperm without seminal plasma from caudal epididymis, however in the presence of seminal plasma, sperm from the ejaculate withstood better conservation (p <0.05). The addition of seminal plasma reduced seminal parameters of the sperm from caudal epididymis. The biochemical composition of seminal plasma of goats raised in northeastern Brazil interferes directly on the quality of cooled semen. / O objetivo do trabalho foi verificar o efeito da composição bioquímica do plasma seminal nos espermatozoides da cauda do epidídimo e do ejaculado caprino, diluídos em citrato-gema (CG) e tris-gema (TG). Os ejaculados de 8 animais foram coletados pela manhã e o sêmen fresco foi dividido de forma a se obter 4 tratamentos: CG (lavado e não lavado), TG (lavado e não lavado). No mesmo dia à tarde, os animais foram castrados para obtenção dos espermatozoides da cauda do epidídimo, dos quais foram retiradas quatro alíquotas de 100 L. Em duas delas foi adicionada 120 L de plasma seminal autólogo, constituindo assim outros 4 tratamentos: CG (espermatozoide da cauda do epidídimo com e sem plasma seminal) e TG (espermatozoide da cauda do epidídimo com e sem plasma seminal). O plasma seminal foi avaliado quanto à composição bioquímica. As amostras dos 8 tratamentos foram analisadas quanto ao vigor, motilidade e morfologia espermática, a 0 h (fresco) e após 2 e 24 h conservação a 5°C. Os dados foram analisados pelo SAS@. No agrupamento pela concentração de frutose e cloretos foi observado um efeito significativo (p<0,05) independente do diluidor e tratamento, para os espermatozoides ejaculados com defeitos menores e normais. A partir da concentração de potássio foi revelado que apenas o vigor sofreu efeito de grupo (p<0,05). Nos espermatozoides da cauda do epidídimo, a frutose constituiu efeito significativo para interação entre grupo, tratamento e tempo sobre a motilidade, já para o vigor foi observado um efeito significativo da interação entre tratamento e tempo e efeito de grupo, para as concentrações de frutose e potássio respectivamente. Para a concentração de cloretos, foi constatado um efeito significativo na interação entre o grupo e o tratamento sobre a ocorrência dos defeitos maiores, (p<0,05). Após a conservação por 24 horas, os melhores valores foram observados nos espermatozoides da cauda do epidídimo sem plasma seminal, no entanto na presença de plasma seminal, os espermatozoides do ejaculado suportaram melhor a conservação. A adição de plasma seminal reduziu os parâmetros seminais dos espermatozoides da cauda do epidídimo. A composição bioquímica do plasma seminal de caprinos criados no nordeste do Brasil interfere sobre a qualidade do sêmen resfriado.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-04-25T09:51:00Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 467608 bytes, checksum: 415cfc97bb8e785d82d9258a9338dec2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-25T09:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 467608 bytes, checksum: 415cfc97bb8e785d82d9258a9338dec2 (MD5) Previous issue date: 2015-11-19 / Análises seminais por meio da associação de sondas fluorescentes possibilitam a avaliação dos diversos compartimentos da célula espermática, simultaneamente, oferecendo um prognóstico mais acurado frente ao caráter subjetivo de alguns testes de rotina. Neste estudo foi utilizada a associação de três sondas fluorescentes com objetivo de avaliar a integridade da membrana plasmática (iodeto de propídio e Hoechst 33342) e o potencial de membrana mitocondrial (MitoTracker red), em sêmen fresco e descongelado de cão. Os resultados obtidos foram comparados aos resultados dos testes de rotina. Todos os testes demonstraram capacidade em detectar queda de qualidade seminal pós- descongelamento. A associação das sondas fluorescentes iodeto de propídio (IP), Hoechst 33342 (H33342) e MitoTracker red (CMXRos) mostrou-se eficaz na distinção de diferentes populações de espermatozoides em ejaculados descongelados de cão doméstico. Foram distintas 4 populações: IC (membrana plasmática íntegra e com potencial de membrana mitocondrial), IS (membrana plasmática íntegra e sem potencial de membrana mitocondrial), LC (membrana plasmática lesada e com potencial de membrana mitocondrial) e LS (membrana plasmática lesada e sem potencial de membrana mitocondrial). Esta associação permitiu também quantificar e qualificar as injúrias causadas às membranas plasmáticas das células espermáticas, pelo processo de congelamento/descongelamento, nesta espécie. Foi observada correlação (p<0,05) entre a coloração das sondas fluorescentes e a avaliação da motilidade espermática e teste hiposmótico. Desta forma, sugere-se a inclusão da combinação de sondas fluorescentes nos protocolos de análise de sêmen, como teste complementar aos testes convencionais, tornando mais precisa a avaliação das injúrias à célula espermática desta espécie. Entretanto, nem os testes de rotina e nem as sondas fluorescentes são hábeis em predizer a capacidade do espermatozoide de ligar-se ao ovócito, evento crucial para a fecundação. Assim, faz-se importante a adoção de testes de ligação entre espermatozoides e ovócitos nas pesquisas referentes à avaliação dos protocolos de congelamento/descongelamento do sêmen. Embora o status metabólico dos ovócitos, assim como o efeito fêmea, limitem a exatidão das interpretações, tem-se buscado substratos de ligação mais homogêneos e de mais fácil obtenção. Neste contexto, a membrana perivitelina do ovo de galinha (MPOG) tem se demonstrado eficiente na avaliação da capacidade de ligação do sêmen em diversas espécies. O teste de ligação de espermatozoides à MPOG apresenta comportamento semelhante aos resultados dos testes de rotina da avaliação do sêmen, assim como os testes com as sondas fluorescentes, apresentando diferença quando comparados sêmen fresco e sêmen descongelado (p<0,05). Neste estudo, o teste hiposmótico correlacionou-se positivamente com o número de espermatozoides ligados à membrana perivitelina da gema do ovo de galinha. O comportamento da MPOG e das sondas, entre os tratamentos, demonstraram sensibilidade da membrana em distinguir sêmens de diferentes potenciais de ligação (p < 0,05) nesta espécie. / Seminal analysis by means of the association of fluorescent probes allows for the simultaneous evaluation of several compartments of the spermatic cell, offering a more accurate prognostic when compared to the subjective character of some routine tests. In this study, the association of three fluorescent probes was used with the goal of evaluating the integrity of plasma membrane (propidium iodide and Hoechst 33342) and mitochondrial membrane potential (Mito Tracker red), in dog semen, both fresh and frozen. The attained results were compared to those of routine tests. All tests showed the capacity of detecting a drop in seminal quality after being unfrozen. The association of the fluorescent probes propidium iodide (IP), Hoechst 33342 (H33342) and Mito Tracker red (CMXRos) showed efficiency when differentiating sperm populations in the frozen semen of domestic dogs. There were four distinct populations: IC (intact plasma membrane and with mitochondrial membrane potential), IS (intact plasma membrane without mitochondrial membrane potential), LC (injured plasmatic membrane with mitochondrial membrane potential) and LS (injured plasmatic membrane without mitochondrial potential). This association also allows the quantification and qualification of the injuries caused on the sperm cell by the freezing/thawing process in this species. A correlation was observed between the coloring of the fluorescent probe and the evaluation of sperm motility and hypo- osmotic swelling test (p<0,05). However, the attained results with the probes showed a higher precision rate when detecting injuries to the spam cells thus suggesting the inclusion of the combination of fluorescent probes in semen analysis protocols, once evidence shows greater efficiency when compared to routine tests. Consequently, the inclusion of the combination of the fluorescent probes in the semen analysis is suggested as a complementary test, making the evaluation of the injuries to the spermatic cell of this species more precise. However, neither the routine tests nor the fluorescent probes are capable of predicting spermatozoon’s capability to bind to the oocyte, an crucial event to fecundation. Therefore, it is important to introduce biding assays between spermatic cells and oocytes in the research that refer to the evaluation of the freezing/ thawing semen protocols. Although the oocytes metabolic status, like the ‘’female effect’’, limit the accuracy of the interpretations, substrate binding that are more homogeneous and easier to obtain are being pursued. In this context, the perivitelline layer of the egg yolk has demonstrated to be efficient in evaluating the binding capacity of sperm in a number of species. The binding tests of sperm to the MPOG shows a behavior that is similar to the results obtained from semen’s routine evaluation tests, as well as the test with the fluorescent probes, presenting a difference when comparing fresh with unfrozen semen (p<0,05). In this study, the hypoosmotic test correlated positively to the number of spermatozoon connected to the perivitelline layer of the egg yolk. The behavior the MPOGs and that of the probes, between other treatments, demonstrated the membrane’s sensibility in distinguishing semen of different potential binding (p<0,05) in this species.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-04-25T10:13:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1390337 bytes, checksum: 8d3099a51770199af75e5456c99bc784 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-25T10:13:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1390337 bytes, checksum: 8d3099a51770199af75e5456c99bc784 (MD5) Previous issue date: 2015-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho foi realizado com intuito de relacionar os constituintes bioquímicos e proteômicos do plasma seminal de garanhões da raça Mangalarga Marchador com a criopreservação. Em ambos os estudos foram utilizados garanhões hígidos da raça Mangalarga Marchador, com idades entre quatro e 15 anos e peso entre 400 e 500 kg. As colheitas foram realizadas no período de junho a agosto de 2013, totalizando 77 amostras. No experimento 1, após as colheitas foram retirados 3 mL de sêmen para análises bioquímicas de cálcio, colesterol, glicose, magnésio, fósforo, proteína total, potássio e sódio. Em sequencia as amostras seminais foram diluídas na proporção 1:1 (sêmen/ diluente) e congeladas para realização dos testes de motilidade espermática total, vigor espermático, teste hiposmótico e teste supravital. Após o descongelamento, os ejaculados de cada animal foram separados em grupos de alta (> 40%) e baixa congelabilidade (< 40%). Não foram visualizadas diferenças nos parâmetros bioquímicos e seminais entre os animais (P>0,05), entretanto foram observadas diferenças na concentração de colesterol e glicose nos animais 1 e 3 (P<0,05), sendo a maior concentração no grupo de animais de baixa congelabilidade e correlação negativa entre o potássio e a motilidade constituintes espermática bioquímicos pós- do descongelamento. Concluiu-se plasma não seminal que os influenciam na congelabilidade seminal na raça Mangalarga Marchador. No experimento 2, após as análises físicas e morfológicas do sêmen, foram selecionados para o perfil proteômico, os plasmas seminais correspondente aos sêmen de maior e menor motilidade pós-descongelamento por animal. O perfil das proteínas foi avaliado pelo sistema SDS–PAGE e as proteínas identificadas por MALDI- TOF/ TOF, utilizando o software Mascot para a busca em banco de dados. O site do UniProt (SWISSPROT, NCBI, Equidae) foi consultado para identificação das proteínas e a validação dos resultados foi realizada pelo programa SCAFOLD. As amostras não validadas pelo SCAFOLD foram analisadas pelo programa flexAnalysis (BRUKER®) para identificação de espectros de MS2 identificados pelo software Mascot. Foi observado diferença significativa em relação a CRISP 3 no grupo de sêmen de baixa congelabilidade e não foram observadas diferenças entre a HSP 1, a calicreína e a motilidade pós- descongelamento entre os grupos de sêmen de alta e baixa congelabilidade . Conclui-se que a CRISP3 com baixa massa molecular (22- 30 kDa) pode ser utilizada como biomarcador de baixa congelabilidade e que a calicreína e a HSP1 não podem ser utilizadas como marcadores de congelabilidade na raça Mangalarga Marchador. / The aim of this study was evaluating biochemical and proteomic constituents of Marchador Mangalarga stallions seminal plasma by cryopreservation. Both studies were carried out on healthy Marchador Mangalarga stallions, ageing from four to 15 years old and weighting between 400 and 500 kg. The samples were collected from June to August 2013, totalizing 77 samples. In experiment 1 after collection, 3 ml total semen were taken for calcium cholesterol, glucose, magnesium, phosphorus, total protein, sodium and potassium biochemical analyses. Subsequently, semen samples were diluted on 1: 1 (semen / diluent) and frozen in order to perform motility, sperm vigor, hyposmotic and supravital tests. After thawing, the ejaculate from each animal was divided into high (>40%) and poor (<40%) freezability groups. No differences on biochemical and seminal parameters among animals (P>0.05) were reported but differences on cholesterol and glucose concentrations in animals 1 and 3 (P<0.05) were observed. Animals from the low freezability group showed higher concentration and negative correlation between potassium and sperm motility after freezing. It might be concluded that seminal plasma biochemical constituents did not affect Mangalarga Marchador seminal freezability. In experiment 2, after physical and morphological semen analyses, seminal plasma corresponding to higher and lower semen post freezing motility per animal were selected for the proteomic profile. Protein profile was assessed by SDS-PAGE system and proteins identified by MALDI-TOF / TOF using the Mascot software searching the database. The site UniProt (SWISSPROT, NCBI, Equidae) was checked out identifying proteins and validation results by scafold program were performed. No validated samples by scafold by flexAnalysis program (BRUKER®) were analyzed verifying the MS2 spectra identified by Mascot software. Significant difference in regarding to the CRISP 3 in lower freezability group was observed and no difference to the HSP 1 between high and low semen freezability groups, kallikrein and post-thaw motility was observed. It might be concluded that the CRISP3 low molecular weight (22- 30 kDa) might be used as biomarker low freezability biomarker, as well as, kallikrein and the HSP1 might not be used as markers on freezability tests Mangalarga Marchador.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-01T16:42:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 942255 bytes, checksum: 78707c68d18c95c144f96f780a8b1aa1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-01T16:42:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 942255 bytes, checksum: 78707c68d18c95c144f96f780a8b1aa1 (MD5) Previous issue date: 2015-12-04 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O objetivo deste trabalho foi desenvolver metodologia de conservação de sêmen de Prochilodus vimboides e Prochilodus lineatus, da bacia do rio Paraíba do Sul, a curto e a longo prazo. Os experimentos foram realizados na estação de piscicultura do Projeto Piabanha/PESAGRO–RJ e no Campo Experimental EPAMIG de Leopoldina, durante as piracemas de 2013/2014 e 2014/2015. Exemplares de Grumatã Prochilodus vimboides e Curimba Prochilodus lineatus foram induzidos com extrato bruto de hipófise de Carpa. Posteriormente, o sêmen foi coletado e suas características seminais avaliadas. No experimento de resfriamento o sêmen foi diluído na proporção 1:9 (v/v, sêmen: diluidor) em soluções compostas por NaCl 0,9%, NaCl 1,2%, glicose 5%, BTS 5% ou MIII 6%. Uma alíquota do sêmen foi mantida sem diluição (controle). A motilidade espermática foi ativada como solução de NaCl 0,29% e subjetivamente avaliada após 0, 1, 2, 3, 4 e 5 dias de armazenamento a 4-6oC. Na criopreservação do sêmen, foram utilizados os mesmos diluidores testados no resfriamento, porém combinados com três crioprotetores (dimetilsulfóxido-DMSO, Metilglicol e Etilglicol), na proporção 1:8:1 (sêmen:diluidor:crioprotetor). As amostras seminais diluídas foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, congeladas em botijão de vapor de nitrogênio líquido e posteriormente armazenadas em nitrogênio líquido. Após o descongelamento em banho- maria a 60°C por 8 segundos, a motilidade espermática foi subjetivamente estimada em percentagem. Além disso, avaliou-se o estresse oxidativo ocorrido nessas amostras. A concentração espermática observada para P. vimboides foi de 27,1±15,8 x 10 9 espermatozoides/mL e o volume seminal de 1,4±0,7 mL. Para P. lineatus foi observado concentração espermática de 20,4 ± 6,4 x 10 9 espermatozoides/mL e volume seminal de 2,0 ± 0,4 mL. No resfriamento, amostras diluídas em BTS preservaram a motilidade espermática acima de 30% por até 2 dias em temperaturas de 4-6oC para P. vimboides e até 5 dias para P. lineatus, sendo este diluidor o melhor entre os testados (P<0,05). No congelamento, amostras seminais diluídas nas criosoluções compostas por glicose 5%+Metilglicol, apresentaram as maiores motilidades espermáticas (60% ± 11,8%; P<0,05) para P. vimboides, pós-descongelamento. Também foi observado nessas amostras menores atividades de catalase e peroxidação lipídica (MDA; P<0,05) nas células espermáticas. Já em P. lineatus as amostras seminais diluídas nas criosoluções compostas por glicose 5%+DMSO (dimetilsufóxido) foram as que proporcionaram as maiores motilidades espermáticas (66,1%±4,0%; P<0,05) e menores atividades de SOD, catalase (CAT) e peroxidação lipídica (MDA; P<0,05). Portanto, o sêmen de P. vimboides pode ser resfriado por até 48 horas em solução diluidora de BTS 5% e criopreservado em criosolução composta por glicose 5% + Metilglicol. E o sêmen de P. lineatus pode ser resfriado por até 5 dias em solução de BTS 5% e criopreservado em criosolução composta por glicose 5% + DMSO, com sucesso. / The objective in this work was to develop a methodology of semen conservation of Prochilodus vimboides and Prochilodus lineatus, from Paraíba do Sul river basin, at short and long period. The experiments were realized in the station of fish culture of the project Piabanha/PESAGRO–RJ and in the experimental field EPAMIG from Leopoldina during the “piracemas” from 2013/2014 and 2014/2015. Specimes of Grumatã Prochilodus vimboides and Curimba Prochilodus lineatus were induced by pituitary extract from carp. After the semen was collected and their seminal characteristics were evaluated. In the cooling experiment, the semen was diluted in the proportion 1:9 (v/v, semen, diluting) in saline solutions of NaCl 0,9%, NaCl 1,2%, glucose 5%, BTS 5% or M III 6%. One semen aliquot was kept undiluted and was used as control. The sperm motility was activated with solution of NaCl 0,29% and subjectively evaluated after 0, 1, 2, 3, 4 and 5 days of storage at 4-6oC. In the semen cryopreservation, were used the same extenders tested in the cooling, however combined with three cryoprotectants (dimethyl sulphoxide – DMSO, methylglycol and ethylglycol), in the proportion of 1:8:1 (semen, extender, cryoprotectant). The seminal samples diluted were potted in containers of 0,5 mL, frozen in nitrogen liquid vapor container and then stored in liquid nitrogen. Sperm motility was subjectively evaluated after thawing at 60°C-water bath for 8 s. Beside this, was evaluated the oxidative stress in these samples. The spermatic concentration observed for P. vimboides was of 27,1±15,8 x 10 9 sperm/mL and the seminal volume of 1,4±0,7 mL. For P. lineatus was observed spermatic concentration of 20,4 ± 6,4 x 10 9 sperm/mL and the seminal volume of 2,0 ± 0,4 mL. In cooling, samples diluted in BTS maintained the spermatic motility above 30 % for as long as 2 days at 4-6oC for P. vimboides and as long as 5 days for P. lineatus, being this extender the better between those tested (P<0,05). In freezing, seminal samples diluted in the cryosolutions composed by glucose 5%+ Methylglycol, presented higher spermatic motility (60% ± 11,8%; P<0,05) for P. vimboides post-thaw. Was also observed in these samples low activity of catalase and lipid peroxidatiom (MDA; P<0,05) in the spermatic cells. In P. lineatus the seminal samples diluted in cryosolutions composed by glucose 5%+DMSO (dimethyl sulphoxide) were those that provided the higher spermatic motility (66,1%±4,0%; P<0,05) and lower activity of SOD, catalase (CAT) and lipid peroxidation (MDA; P<0,05). However, the semen of P. vimboides can be cooled for up to 48 hours in extender solution of BTS 5% and cryopreserved in cryosolution composed by glucose 5% + Methylglycol. The semen of P. lineatus can be cooled for up to 5 days in solution of BTS 5% and cryopreserved in cryosolution composed by glucose 5% +DMSO, with success.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-07-14T11:04:21Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1533229 bytes, checksum: 07bdbdac17ffe98732cd2e13d8ccb0f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T11:04:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1533229 bytes, checksum: 07bdbdac17ffe98732cd2e13d8ccb0f1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os principais desafios na criopreservação de sêmen de felinos de vida livre são desenvolver ou aprimorar uma metodologia eficiente na captura de indivíduos, desenvolver uma técnica mais prática e eficiente na coleta de sêmen com boa qualidade para criopreservação, e também desenvolver equipamentos de resfriamento e congelamento que sejam portáteis e que dispensem o uso de energia elétrica. Objetivou-se, portanto, por meio do presente trabalho adaptar uma metodologia de coleta farmacológica de sêmen e de um método de criopreservação de sêmen de onças pintadas e onças pardas que sejam viáveis para animais de vida livre, capturados por armadilhas de laço. Foram usadas armadilhas de laço compostas por um sistema catapulta, um sistema de contenção e um sistema de monitoramento, nas quais foram realizadas adaptações para melhor adaptação da técnica a três biomas brasileiros Caatinga, Pantanal e Mata Atlântica. O presente trabalho foi o primeiro a capturar onças pintadas e pardas na Caatinga, sendo que a unidade de avaliação do esforço de captura foi “laços-dia”, ou seja, o número de laços armados ao dia que resultou na captura de um animal. O esforço para captura de onça pintada foi de 30,3, 212,5 e 351 laços-dia/captura para o Pantanal, Caatinga e Mata Atlântica, respectivamente. Possivelmente a baixa taxa de captura na Mata Atlântica se deu pela soma de dois fatores: a baixa densidade populacional e a topografia da região, que limitou a área de captura. O mesmo não foi observado para a onça parda neste bioma, cujo esforço de captura foi de 144 laços-dia/captura, possivelmente devido à maior densidade desta espécie. O sucesso de captura (eventos de captura/dias de campanha) de onça pintada foi semelhante ao obtido por trabalhos que usaram cães farejadores, porém essa metodologia exige a manutenção de uma matilha treinada, além de conferir maior risco de acidentes tanto para o animal, quanto para a equipe. Para o estudo da coleta farmacológica de sêmen três onças pardas (Puma concolor) de cativeiro e onze onças pintadas (Panthera onca), sendo seis mantidas em cativeiro e cinco de vida livre, foram anestesiadas com a associação de Medetomidina (0,08- 0,1 mg/kg) e Ketamina (5 mg/Kg). Passados entre 20 e 40 minutos da indução anestésica a uretra dos animais foi sondada com uma sonda uretral estéril para gatos, por onde foi possível coletar ejaculado em todos os animais. Por meio desta técnica coletou-se em média 106,7 μL de sêmen nas onças pardas contendo 524,1 x 106 /mL e 347,2 μL nas onças pintadas contendo 2635,2 x 106 espermatozoides / mL. As avaliações de vigor, motilidade e patologia espermática demonstraram que a técnica não afeta a qualidade do sêmen em relação às demais metodologias usadas em felinos. Para o congelamento do sêmen foram utilizados animais mantidos em cativeiro (seis onças pintadas e três onças pardas). A etapa de resfriamento foi dividida em dois tratamentos, um com a metodologia convencional como uso de gelo e água (Resfriamento A) e a outra com material refrigerante reciclável congelado em nitrogênio líquido (Resfriamento B). Os resultados das avaliações de rotina (vigor, motilidade e teste hiposmótico), com sondas fluorescentes e de análise computadorizada do sêmen demonstraram que não houve diferença entre os dois tratamentos testados. Por meio do presente estudo foi possível desenvolver metodologias que viabilizaram a criopreservação de sêmen de onças pintadas e onças pardas de vida livre. Portanto, o uso de armadilhas de laço associada à coleta farmacológica de sêmen por cateterização uretral, com medetomidina, e resfriamento usando gelo reciclável congelado em nitrogênio líquido mostrou-se eficiente e seguro nas atividades propostas. / The major challenges for developing assisted reproduction technologies in wild felines consist on:improve or even develop capture methodologies that are more practical and more efficient; develop new methodologies to collect great quality freezable semen; and develop portable freezing devices that can be used without electric energy. We aimed to adapt a pharmacological method for semen collection and a cryopreservation method that are more efficient for wild animals, captured through a foot snare trap. We used foot snare trap made with a catapult system, a restrain system and a tracking system, in which some adaptations were made for matching the technique to three biomes Caatinga, Pantanal and Atlantic Forest. This is the first jaguar and cougar capture report at Caatinga. The jaguar capture rate was 30.3, 212.5 and 351snare-day/capture at Pantanal, Caatinga and Atlantic Forest, respectively. Possibly the low capture rate at Atlantic Forest was related to two factors: the low population density and the topography, which limited the capture area. However it was not observed for pumas at the same biome, whose capture rate was 144 snare-day/capture, possibly due to the higher density of this specie. The capture success (capture events/ expedition days) was similar to studies that used trailing hounds, however this method requires the maintenance of a trained pack, and confer increased risk for the animal and researchers. To study the pharmacological method for semen collection, three captive cougars and six captive and five wild jaguars were chemically restrained with a combination of medetomidine (0.08 to 0.1 mg/Kg) and Ketamine (5 mg/Kg). After the medetomidine administration – 20 to 40 minutes – the urethra was catheterized using a urinary tomcat catheter, through we could collect semen from all animals. Using this technique we could collect an average of 106.7 μL containing 524.1 sperm/mL from the cougars and 347.2 μL containing 2635.2 sperm/mL from the jaguars. The sperm motility, sperm progressive motility and sperm morphology analysis demonstrated that the methodology don`t affect the sperm quality comparing with other technologies used in felines. To study the cryopreservation protocol we used only captive animals (six jaguars and three cougars). The cooling step was divided into two treatments, one using a standardized method with ice and water (Cooling A) and the other one using a recyclable ice frozen in liquid nitrogen (Cooling B). All results from the routine analysis (sperm motility, sperm progressive motility, sperm morphology), the fluorescent probes and the computerized sperm analysis demonstrated that there was no difference between both treatments. Through this thesis it was possible to develop methodologies that make viable the semen cryopreservation from wild jaguars and cougars. For this purpose it is recommended the foot snare trap to capture the animals; in combination with the semen collection via urethral catheterization using a pharmacological method and the cryopreservation protocol using a recyclable ice frozen in liquid nitrogen at the cooling step.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-12-13T12:43:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 392063 bytes, checksum: 6d044775c102dc09c3ead37086d2b1f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-13T12:43:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 392063 bytes, checksum: 6d044775c102dc09c3ead37086d2b1f2 (MD5) Previous issue date: 2016-04-18 / Esse estudo foi conduzido para estabelecer o perfil nictemeral da excreção urinária de creatinina (CR), uréia (UR), nitrogênio total (NT) e derivados de purina (DP) e as relações UR:CR, NT:CR e DP:CR em vacas leiteiras, com objetivo de reduzir a coleta de 24 para 2h ou indicar o melhor horário para estimar esses compostos por meio de coletas de urina spot. Foram utilizadas quinze vacas Holandesas em sistema de confinamento total em baias individuais. O estudo foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado com três tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos consistiram de três níveis de produção diária: Alta (31,26 ±2,99 kg), média (22,86 ±1,57 kg) e baixa (14,16 ±0,75 kg). O período experimental teve duração de 27 dias, sendo 14 para adaptação dos animais às condições experimentais e 13 dias para coletas de amostras. As amostras spot de urina foram coletadas de 2h em 2h (2hSp) no 16° e 17° dia experimental. Do 22o ao 25o dia foram obtidas amostras totais de urina a intervalos de duas horas. Não houve diferença entre os horários de coleta e produção de leite (PL) para a excreção diária de creatinina, expressa em mg/kgPC e para relação DP:CR para coleta total de 2h em 2h (2hTL). Houve efeitos dos horários de coleta e PL sobre as relações UR:CR e NT:CR para coleta 2hTL. Os horários representativos para coleta 24h das coletas 2hTL foram 2, 4, 6, 8, 12, 18, 20 ou 24 h para relação UR:CR e 2, 4, 6, 8, 10, 16, 18, 22 ou 24 h para relação NT:CR. Não houve diferença entre os horários de coleta e PL para relação DP:CR em coleta 2hSp. Para as coletas 2hSp, os horários indicados para estimação da excreção de NT e UR, foram 10, 18 e 24 h. Conclui-se que a excreção de creatinina, expressa em mg/kgPC, e a relação DP:C não variam ao longo do dia, respaldando a recomendação de que a coleta spot de urina seja efetuada a qualquer horário do dia para estimar a excreção de DP diária. Para coletas de urina spot ou redução do tempo de coleta de 24 para 2h, com objetivo de estimar a excreção de compostos nitrogenados, recomenda-se os horários de 10h, 18h e 24h. Ressalta-se, finalmente, que apesar desses três horários individualmente estimarem adequadamente a produção de compostos nitrogenados e DP, recomenda-se que seja feita coleta nos três horários para reduzir a probabilidade de erros das estimativas. / This study was conducted to establish the diurnal profile of urinary excretion of creatinine (CR), urea (UR), total nitrogen (TN), and purine derivatives (PD) and the UR:CR, TN:CR, and PD:CR ratios in dairy cows, aiming to reduce the collection time from 24 h to 2 h or indicate the best time to estimate these compounds via spot urine collections. Fifteen Holstein cows were used in a total confinement system, housed in individual stalls. The study was undertaken as a completely randomized design with three treatments and five replications. Treatments consisted of three levels of daily milk yield: high (31.26±2.99 kg), medium (22.86±1.57 kg), and low (14.16±0.75 kg). The experimental period lasted 27 days, including 14 days for the adaptation of animals to the experimental conditions and 13 days for sample collections. Spot urine samples were collected every 2 h (2hSp) on the 16th and 17th experimental days. From the 22nd to the 25th days, total urine samples were obtained at two-hour intervals. There was no difference between collection times and milk yield (MY) for the daily excretion of creatinine, expressed in mg/kg BW, and for the PD:CR ratio for total collection performed every 2 h (2hTL). There was an effect of collection times and MY on the UR:CR and TN:CR ratios for 2hTL collection. The representative times for the 24-h collection of 2hTL collections were 2, 4, 6, 8, 12, 18, 20, or 24h00 for UR:CR ratio and 2, 4, 6, 8, 10, 16, 18, 22, or 24h00 for TN:CR ratio. There was no difference between collection times and MY for the PD:CR ratio in 2hSp collection. For 2hSp collections, the times indicated for the estimate of TN and UR excretion were 10, 18, and 24 h. In conclusion, creatinine excretion, expressed in mg/kg BW, and PD:CR ratio do not vary throughout the day, corroborating the recommendation that the spot urine collection should be performed at any time of the day to estimate the daily PD excretion. For spot urine collections or to reduce the collection time from 24 to 2 h aiming to estimate the excretion of nitrogen compounds, the times 10h00, 18h00, and 24h00 are recommended. Lastly, we stress that although these three times alone adequately estimate production of nitrogen compounds and PD, we recommend that collection be performed at all three times to reduce the error probability of estimates.

A antecipação da puberdade por meio da estimulação do macho poderá permitir que a primeira cobertura possa ser realizada mais cedo reduzindo assim os dias não produtivos de fêmeas suínas. No presente estudo, 417 fêmeas DB-DanBred foram estimuladas por 42 dias em dois tratamentos, BEAR, local específico de exposição das leitoas a diferentes machos, e BAIA, a exposição tradicional das leitoas na própria baia, em três idades diferentes de início de estímulo, 150, 170 e 200 dias. No sistema BEAR foram alojados quatro machos e as leitoas introduzidas nesta área permaneceram durante um período de 15 minutos, sendo os primeiros cinco minutos apenas em contato focinho com focinho e após um macho era solto na baia para uma estimulação por mais 10 minutos. No sistema BAIA o macho foi introduzido na baia de alojamento das fêmeas e tiveram 15 min de contato físico. Não houve diferença na porcentagem de entrada em estro em nenhum intervalo (10, 20, 30 e 45 dias) do início do estimulo e apresentação do estro quando comparados os dois sistemas, dentro de cada idade de início de estímulo. Porém a média do intervalo entre o início do estimulo e apresentação do estro foi significativamente menor quando o contato com o macho começou aos 200 dias em comparação com 150 e 170 dias de idade (14,6 ± 1,1 dias vs. 22,9 ± 1,4 e 20,0 ± 1,3 dias respectivamente, P <0,05). Da mesma forma, a proporção de fêmeas que atingiram a puberdade no período de 10 dias do início da exposição ao macho foi duas vezes maior em fêmeas que iniciaram o estímulo aos 200 dias de vida, quando comparadas com fêmeas que iniciaram os estímulos aos 150 e 170 dias. Em conclusão, os dados do presente estudo indicam que apesar da diferença de manejo de estimulação entre os sistemas BEAR e BAIA, não existe diferença na porcentagem de entrada em estro entre os dois sistemas. Além disso, é evidente que a sincronia da puberdade em fêmeas DB-DanBred é significativamente melhor quando a exposição ao macho é adiada para os 200 dias de idade. / The anticipation of puberty through stimulation of the boar can allow the first mating to be conducted earlier, thus reducing non-productive days of the female swine. In the present study, 417 DB-DanBred gilts were stimulated for 42 days in two treatments; BEAR, specific area of gilt exposure to different boars, and BAIA, traditional exposure of gilts in their own stall, at three different ages at the beginning of stimulation, 150, 170 and 200 days. In BEAR system four boars were housed and the gilts introduced in this area remained for 15 minutes, the first five minutes being just in snout to snout contact and then a boar was relaesed in the stall for stimulation for 10 more minutes. In BAIA system the boar was introduced in the lodging stall of the gilts and they had 15 minutes of physical contact. There was no difference in the estrus onset percentage at any interval (10, 20, 30 and 45 days) from the beginning of the stimulation and estrus presentation when comparing the two systems, within each age at the beginning of stimulation. However the average of the interval between the beginning of stimulation and presentation of estrus was significantly lower when the contact with the boar began at 200 days in comparison with 150 and 170 days of age (14.6 ± 1.1 days vs. 22.9 ± 1.4 and 20.0 ± 1.3 days respectively, P < 0.05). In the same way, the proportion of gilts that reached puberty within 10 days from the beginning of exposure to the boar was twice as high in gilts that began the stimulation at 200 days of age, when compared with gilts that began the stimulation at 150 and 170 days. In conclusion, the data of the present study indicate that, in spite of the stimulation management difference between BEAR and BAIA systems, a difference does not exist in the estrus onset percentage between the two systems. Furthermore, it is evident that timing of puberty in DB-DanBred gilts is significantly better when exposure to the boar is postponed to 200 days of age.

Este estudo avaliou a performance reprodutiva de primíparas suínas submetidas à inseminação artificial pós-cervical (IAPC) comparada à inseminação artificial cervical (IAC). A dificuldade na introdução do cateter, ocorrência de sangue ou refluxo durante a inseminação e o volume e o total de células refluídas até 60 minutos após a inseminação também foram avaliados. As fêmeas foram homogeneamente distribuídas, de acordo com a perda de peso na lactação, duração da lactação, número de leitões desmamados, intervalo desmame-estro e nascidos totais no parto anterior, em dois tratamentos: IAPC (n=165) com 1,5 x 109 células espermáticas em 45 ml e IAC (n=165) com 3 x 109 células espermáticas em 90 ml. Foi realizada ultrassonografia transabdominal em tempo real no momento em que as fêmeas apresentaram estro e 24 horas após a última inseminação. Não houve diferença entre os tratamentos na taxa de parto e no tamanho da leitegada (P > 0,05). O sucesso na passagem do cateter intra-uterino em todas as inseminações foi possível em 86,8% (165/190) das fêmeas inicialmente selecionadas para o tratamento IAPC. A dificuldade na introdução do cateter em pelo menos uma inseminação não afetou a performance reprodutiva das fêmeas do tratamento IAPC (P > 0,05). A ocorrência de sangramento durante a inseminação não afetou (P > 0,05) a taxa de parto em ambos os tratamentos, mas o tamanho da leitegada foi reduzido nos tratamentos IAC e IAPC (P ≤ 0,06). O percentual de espermatozoides presentes no refluxo foi maior no tratamento IAC que no IAPC (P < 0,01). Não foi observada diferença (P > 0,05) na taxa de parto e no tamanho da leitegada de acordo com o percentual de espermatozoides no refluxo (Baixo: ≤ 20% e Alto: >20%). É possível realizar a IAPC em primíparas suínas com doses contendo 1,5 x 109 células espermáticas sem causar prejuízos no desempenho reprodutivo. / The study evaluated the reproductive performance of primiparous sows submitted to post cervical insemination (PCAI) compared to cervical artificial insemination (CAI). Difficulty with catheter introduction, occurrence of bleeding or semen backflow during insemination, and volume and sperm cell backflow up to 60 min after insemination were also evaluated. Sows were homogenously distributed, according to body weight loss in lactation, lactation length, weaned piglets, weaning-to-estrus interval and total born in previous farrowing, in two treatments: PCAI (n= 165) with 1.5 x 109 sperm cells in 45 ml and CAI (n= 165) with 3 x 109 sperm cells in 90 ml. Transabdominal real time ultrasonography was performed at the moment of standing heat and 24 h after last insemination. There was no difference between treatments in farrowing rate and litter size (P > 0.05). Successful passage of the intrauterine catheter in all the inseminations was possible in 86.8% (165/190) of sows initially allocated to PCAI treatment. Difficulty of introducing the catheter in at least one insemination did not affect the reproductive performance of PCAI sows (P > 0.05). Bleeding during insemination did not affect (P > 0.05) the farrowing rate in both treatments, but litter size was reduced in CAI and PCAI sows (P ≤ 0.06). Percentage of spermatozoa present in backflow was greater in CAI than PCAI treatment (P < 0.01). No difference (P > 0.05) was observed in farrowing rate and litter size according to the percentage of spermatozoa in backflow (Low: ≤ 20%; High: > 20%). It’s possible to perform the PCAI in primiparous sows with doses containing 1,5 x 109 sperm cells without detrimental on reproductive performance.

O presente estudo avaliou o efeito do tratamento com altrenogest no desencadeamento do parto, no peso ao nascer (PN) e na sobrevivência dos leitões até o terceiro dia de vida. Três grupos controle foram formados: (i) fêmeas que pariram espontaneamente até o dia 114 de gestação (CONT<114); (ii) fêmeas que pariram espontaneamente no dia 114 ou mais (CONT≥114); (iii) fêmeas que foram induzidas ao parto utilizando clorprostenol e pariram partir do dia 114 de gestação (CONTCLOPR). Outro grupo de fêmeas foi tratado com altrenogest (Regumate®) por três dias (dia 111, 112 e 113 de gestação) e, dentro deste grupo, um subgrupo pariu espontaneamente (ALT) e o outro subgrupo recebeu altrenogest e foi induzido com cloprostenol no dia 114 (ALTCLOPR). Não houve diferença (p > 0,05) na duração do parto, PN, coeficiente de variação (CV) de PN, natimortos, mumificados, porcentagem de leitões leves e sobrevivência até o terceiro dia de vida entre fêmeas com ou sem tratamento com cloprostenol, em ambos os grupos controle (CONT≥114 vs CONTCLOPR) e nas fêmeas tratadas com altrenogest (ALT vs ALTCLOPR). Comparações foram realizadas levando em consideração apenas três grupos: fêmeas com parto precoce (CONT<114 – que pariram antes dos 114 de gestação, N=56), fêmeas que pariram no dia 114 ou mais de gestação (CONT≥114 – com ou sem tratamento com cloprostenol, N=103) e fêmeas tratadas com altrenogest (ALT, com ou sem tratamento com cloprostenol, N=105). Não houve diferença (p > 0,05) entre os grupos quanto à duração do parto, CV do PN e porcentagem de fetos natimortos e mumificados. Fêmeas do grupo CONT<114 tiveram um maior número de nascidos totais e menor PN do que fêmeas dos outros dois grupos (p < 0,05). Fêmeas do grupo CONT<114 tiveram maior porcentagem de leitões leves e menor taxa de sobrevivência dos leitões (p < 0,05) do que fêmeas do grupo ALT. Como conclusão, o tratamento com altrenogest provou ser um método eficiente para evitar partos precoces em fêmeas da ordem de parto entre 3 a 5, resultando ainda em leitões mais pesados ao nascimento. O tratamento com altrenogest associado a indução ao parto mostrou-se possível de ser realizado, não acarretando em efeito negativo no desempenho da fêmea e dos leitões. / This study investigated the effect of altrenogest treatment on the farrowing development of sows, and birth weight (BW) and piglet survival until the third day of life. Three control groups were used: (i) sows that farrowed spontaneously before 114 day of gestation (CONT<114); (ii) sows that spontaneously farrowed at 114 day of gestation (CONT≥114); (iii) sows that farrowed at 114 day with cloprostenol treatment (CONTCLOPR). Other sows were treated with altrenogest (Regumate®) for 3 days (days 111, 112 and 113 of gestation). Inside this group one subgroup gave birth spontaneously (ALT) and other subgroup received the treatment and after cloprostenol on day 114 (ALTCLOPR). There were no differences (p > 0.05) in farrowing duration, BW, coefficient of variation (CV) of BW, stillborn piglets, mummified foetuses, percentage of light piglets and survival until Day 3 between sows with and without cloprostenol treatment, in both control (CONT≥114 vs CONTCLOPR) and altrenogest-treated sows (ALT vs ALTCLOPR). Further comparisons were performed taking into account three groups: sows with early delivery (CONT<114 – farrowing before 114 days of gestation; n = 56), sows with longer gestation (CONT≥114 – with and without cloprostenol treatment sows; n = 103) and ALT sows (with and without cloprostenol treatment; n = 105). There were no differences (p > 0.05) between groups in farrowing duration, CV of BW, and percentages of stillborn piglets and mummified foetuses. Sows of CONT<114 group had a larger litter size and a lower BW than sows of the other two groups (p < 0.05). Sows of CONT<114 group had a higher percentage of lighter piglets and a lower piglet survival rate (p < 0.05) than ALT sows. In conclusion, altrenogest treatment proved to be an efficient method to avoid early parturition in 3–5 parity sows resulting in heavier piglets at birth. Altrenogest treatment associated with farrowing induction was possible to be made and it did not cause negative effect in sow and piglets performance.

Protocolos de sucesso para a maturação in vitro de oócitos de peixe são importantes, uma vez que é necessário para garantir uma fertilização bem sucedida, formação do zigoto, crescimento do embrião e seu completo desenvolvimento. Em algumas espécies, a eficiência deste processo ainda é muito baixa ou restrita a poucas substâncias que podem ser utilizadas. Assim, pesquisou-se a utilização de hormônios alternativos ao protocolo já existente para maturação in vitro de ovócitos de zebrafish. O objetivo foi avaliar a eficiência do extrato de hipófise de carpa (EHC), dos hormônios folículo estimulante (FSH) e luteinizante (LH) para fazer a maturação dos ovócitos estádio III de zebrafish. Os oócitos estádio III foram colocados em meio de cultivo Leibovitz modificado, suplementado com soro fetal bovino e adicionado o hormônio correspondente a seu tratamento (T1-controle; T2-16 μg/ml de EHC; T3- 32 μg/ml de EHC; T4- 48 μg/ml de EHC; T5- 64 μg/ml de EHC; T6- 80 μg/ml de EHC; T7- 0,5 μg/ml de FSH; T8- 0,5 μg/ml de LH e T9- 0,5 μg/ml de FSH e 0,5 μg/ml de LH). A taxa de maturação foi avaliada através da visualização da quebra da vesícula germinal (GVBD). Em todos os tratamentos houve maturação, embora o EHC tenha demonstrado taxas de maturação muito baixas (T2= 12,8%; T3=24,8%; T4=27%; T5=22,7%; T6=9,7%) e inferiores em relação a maior eficiência dos hormônios gonadotrópicos (T7=16%; T8=35%; T9=50%). Além disso foi possível verificar a viabilidade dos oócito através da fertilização in vitro do melhor tratamento (T9) com uma taxa de eclosão e desenvolvimento em larva de 60%. Os resultados da maturação in vitro utilizando estes indutores hormonais em oócitos estádio III de zebrafish mostraram-se promissores, e reforçam as perspectivas para o aprimoramento e uso desta técnica para produção in vitro de embriões viáveis. / Successful protocols for maturation of oocytes are important, as it is necessary for ensuring successful fertilization, zygote formation, embryo growth and full development. In some species the efficiency of in vitro maturation is still very low or is still restricted to a little amount of substances which can be used for the matter. Thus, we studied the use of alternative hormones to the existing protocol for in vitro maturation of zebrafish oocytes. The aim of this study was to evaluate the efficiency of the use of carp pituitary extract (CPE), the follicle stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) to oocyte maturation stage III of zebrafish. Oocytes stage III were placed in modified Leibovitz culture medium, suplemented with fetal bovine serum and added to the correnponding hormone treatment (T1-control; T2-16 g / ml of CHE; T3 32 g / ml of CHE, T4 - 48 g / ml of CHE; T5- 64 g / ml of CHE; T6- 80 g / ml of CHE; T7- 0.5 g / ml of FSH, T8 0.5 mg / ml of LH and T9- 0.5 g / ml of FSH and 0.5 mg / ml LH). The maturation rate was assessed by the germinal vesicle break down (GVBD). In all cases there was maturation, though the EHC has demonstrated fairly low maturation rate (T2= 12,8%; T3=24,8%; T4=27%; T5=22,7%; T6=9,7%) and lower in relation of the high efficiency presented by the gonadotropic hormones (T7=16%; T8=35%; T9=50%). In addition it was possible to verify the viability of the oocyte through IVF of the best treatment (T9) with a result of 60% of hatching and larvae development rate. The results of maturation in turn using this hormones in stage III oocytes of zebrafish proved promising, and enhance the prospects for improvement and use of this technique for in vitro production of viable embryos.