O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho reprodutivo de fêmeas suínas inseminadas com a técnica intra-uterina (IAU) ou tradicional (IAT), considerando o refluxo de sêmen após a IA, as taxas de retorno ao estro e de parto, além do número de leitões nascidos. As fêmeas do grupo IAU foram inseminadas com doses de 1,5 bilhão de espermatozóides em 60 ml de volume e as do grupo IAT com 3 bilhões em 90 ml. A passagem do cateter de IAU através da cérvix foi possível em 97,4% das fêmeas. Houve presença de sangue no cateter, após a realização da IAU, em 9,5% das fêmeas em pelo menos uma das inseminações, e estas apresentaram retorno ao estro superior ao das fêmeas sem sangramento (P<0,05). Foi coletado o refluxo no momento e até duas horas após a inseminação. Apesar do percentual de volume refluído ter sido maior (P<0,05) na IAU (75,4%) do que na IAT (62,7%), o percentual de espermatozóides presentes no refluxo foi semelhante (22,7 e 23,0%, respectivamente). Foi realizado diagnóstico de retorno ao estro a partir do 18º dia e diagnóstico de gestação por ultra-sonografia transcutânea entre o 21º e 23º dias após a inseminação. Não houve diferença (P>0,05) nas taxas de retorno ao estro (3,6% e 4,3%), de prenhez aos 21-23 dias (99,5% e 97,2%), de parto ajustada (94,9% e 94,4%) e no tamanho da leitegada (11,6 e 11,8 leitões) entre IAU e IAT, respectivamente. Independentemente do número de espermatozóides da dose inseminante, a perda por refluxo, superior ou inferior a 20% do total infundido, não influenciou a taxa de parto e o número de leitões nascidos. O desempenho reprodutivo de fêmeas suínas de ordem de parto dois a quatro, inseminadas pela técnica intra-uterina, com doses de 1,5 bilhão de espermatozóides, foi semelhante àquele observado com a inseminação tradicional cervical com doses de 3 bilhões de espermatozóides.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-06-25T13:29:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1372442 bytes, checksum: 3068f373d5ea48eec7b669ecf2b0ed43 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-25T13:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1372442 bytes, checksum: 3068f373d5ea48eec7b669ecf2b0ed43 (MD5) Previous issue date: 2009-05-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi substituir as soluções de manipulação de embriões bovino em uso na rotina de TE por meios mais simples e estáveis e, que possam ser armazenados em temperatura ambiente. Na primeira etapa experimental, foram utilizados embriões de camundongas nos estádios de blastocisto inicial (Bin), mórula compacta grau I (McI) e II (McII), distribuídos aleatoriamente em três tratamentos, de acordo com o meio de manutenção: T1 - PBS modificado (Controle); T2 (MD1) e T3 (MD2). Os embriões foram mantidos durante quatro horas no meio de manutenção e, posteriormente cultivados em meio TCM 199. Após o término do tempo de cultivo, os embriões de cada tratamento foram separados aleatoriamente em amostras para avaliação da taxa de clivagem e morfometria, aspectos ultra-estruturais, detecção de apoptose celular e quantificação de expressão gênica de Hsp70.3. A taxa de desenvolvimento dos embriões após manutenção por quatro horas nos meios de manipulação foi inferior (P<0,05) para os embriões do Controle, quando comparada com os embriões do MD1 e MD2, diferença esta não observada (P>0,05) após o cultivo in vitro. Contudo, os embriões McII do MD2 tiveram um maior desenvolvimento (P<0,05), quando comparado com embriões do Controle e MD1, indicando o efeito benéfico do enriquecimento do meio MD2. Não foi verificada diferença (P>0,05) entre tratamentos no diâmetro celular, nuclear, nucleolar, na relação núcleo:nucléolo, no número de células e na percentagem de células apoptóticas. Quanto à expressão gênica de Hsp70.3, foi verificado diferença entre tratamentos (P<0,001), em embriões Bin, McI e McII após manutenção e, posterior cultivo in vitro. Na segunda etapa experimental, foram testados dois meios de manipulação utilizados para coleta e manipulação de embriões, MD1 e MD2 e como controle o PBS modificado, usualmente empregado nas rotinas de TE nas diferentes espécies animais. A transferência dos embriões bovino foi realizada a fresco, ou seja, os embriões coletados de uma determinada doadora foram inovulados no período máximo de quatro horas nas receptoras. Foram coletados e transferidos apenas os embriões de qualidade I e II. Foram utilizados 58 receptoras de embriões, distribuídas aleatoriamente em três tratamentos: T1 – PBS modificado (Controle); T2 (MD1) e T3 (MD2). As taxas de gestação observadas foram: Controle = 47,4% (9/19); MD1= 47,4% (9/19) e MD2 = 55,0% (11/20). Estes resultados demonstram que o uso de diferentes meios de manipulação não influenciou nas taxas de gestação (P>0,05). Deste modo, conclui-se que os meios de manipulação MD1 e MD2 podem ser utilizados nas rotinas de TE, em substituição a solução PBS modificado. / This work aimed substitutes the usually used manipulation solution of bovine embryos on ET routines for more simple and stable medias which could be stored at room temperature. In the first experimental stage, the mice embryos used in the experiment were all at early blastocyst (Bin), compact morula grade I (McI) and II (McII), randomly assigned in three treatments: T1 – modified PBS (Control); T2 (MD1) and T3 (MD2). In each treatment the embryos were kept in manipulation media for four hours. Finishing the manipulation period, the embryos were classified according the development stage and quality. Following, embryos were cultured in modified TCM 199. After the culture period, the embryos were being evaluated accordingly quality and development stage. Following were randomly selected embryo in each treatment and separated in samples to cleavage rate and morphometric, ultra- structural evaluation, cellular apoptosis and genetic expression quantification of Hsp70.3. The development rate for Bin, McI and McII after maintenance for four hours in manipulation media between was lower for Control (P>0.05) when compared with MD1 and MD2. However, after in vitro culture, was not observed difference (P>0.05) on embryo development rate among Control, MD1 and MD2. Moreover, McII from MD2 had a higher development (P<0.05), when compaired with Control and MD1, indication a beneficial effect when MD2 is supplemented. It was not verified difference (P>0.05) among the treatments in relation the nucleus, nucleolus, cell diameter and on total cell number cellular and apoptosis rate. In relation of embryo morphometry (diameter), there was no difference (P>0.05) between the treatments, using embryos Bin, McI and McII after maintenance followed by in vitro culture. Otherwise, genetic expression of Hsp70.3 had difference in Bin, McI and McII after maintenance followed by in vitro culture among the treatments (P<0.001). In the second experimental stage, it was tested three different manipulation media, which were used to recovery and manipulation of the embryos. The control treatment used was the modified PBS, usually used in ET routines in different animal species. The bovine embryos were transferred freshly, i.e., they were recovered from a identified donor and transferred within less than four hours to the recipient cow. Just embryos at quality I and II were recovered and transferred. Were used 58 recipient cows randomly assigned for one of the three treatments: T1 – modified PBS (Control); T2 (MD1) and T3 (MD2). As result we observed the following pregnancy rates: Control = 47.4% (9/19); MD1 = 47.4% (9/19) and MD2 = 55.0% (11/20), which did not differ among them (P>0.05). Therefore, the manipulation media MD1 and MD2 can be used on ET routines to substitute the PBS modified solution. / Termo de autorização não encontrado, numeração das páginas em algarismos romanos difere da numeração do índice. E-mail enviado aos interessados em 25-06-2018.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-06-28T16:55:35Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1148332 bytes, checksum: 74696fa31ad64b873b9c041356bb1c2a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-28T16:55:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1148332 bytes, checksum: 74696fa31ad64b873b9c041356bb1c2a (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O reprodutor tem grande importância na cadeia produtiva por possuir maior potencial de difusão do seu material genético dentro do rebanho que as fêmeas que produzem apenas uma cria por ano, em manejo de monta natural. Entretanto, este potencial somente se torna real quando os machos apresentam boa qualidade seminal, resultando em menores taxas de não retorno ao estro. Não há duvidas da importância da morfologia espermática na fertilidade de touros. Entre as anomalias espermáticas identificadas nos ejaculados de bovinos, a aplasia segmentar da bainha mitocondrial (ASBM) é classificada como defeito espermático maior, comprometendo a fertilidade dos reprodutores, pelo fato dos ejaculados apresentarem baixa motilidade e vigor espermático. Este estudo teve como objetivo estudar a fisiopatologia de ejaculados com altos porcentuais da patologia espermática ASBM, utilizando como base o exame andrológico e análise espermática por citometria de fluxo. Portanto, os touros foram divididos em dois grupos: o primeiro foi o grupo controle com morfologia espermática normal (n = 3) e o segundo foi o grupo com morfologia anormal (n = 3) com alta porcentagem de SAMS. Cinco ejaculados foram coletados de cada animal. Ejaculados de touros com ASBM apresentaram baixa motilidade (P<0,05), baixo potencial mitocondrial (P<0,05), maior porcentagem de espermatozoides com fragmentação do DNA (P<0,05), baixa integridade da membrana plasmática e acrossomal (P<0,05) e alta porcentagem de espermatozoides com desorganização da bicamada lipídica ou fluidez da membrana (P<0,05) em comparação aos touros com morfologia espermática normal. Além de possuir baixa porcentagem de viabilidade espermática, sêmen com alta porcentagem de ASBM pode estar sofrendo apoptose, possivelmente devido ao estresse oxidativo. Esses resultados indicam que touros com alta porcentagem desta patologia espermática são inférteis e sugere também que esta anomalia espermática seja de origem genética na raça estudada. / Bulls are of great importance in the productive chain because they have a higher potential for diffusion of genetic material within the herd than females that produce only one calf per year in natural mating management. However, this potential is only possible when males present good seminal quality, resulting in lower rates of non- return to estrus. There is no doubt about the importance of sperm morphology in bull fertility, among the sperm anomalies identified in bovine ejaculates, the segmental aplasia of the mitochondrial sheath (SAMS) is classified as a major sperm defect, compromising the reproductive fertility; ejaculates with presence of this anomaly show low sperm motility and sperm vigor. This study aimed to understand the pathophysiology of ejaculates with high percentage of spermatozoa with SAMS, using Breeding Soundness Evaluation and sperm analysis by flow cytometry. Therefore, the bulls were divided in two groups: The first one was the control group with normal sperm morphology (n=3) and the second was the abnormal one (n=3) with high percentage of SAMS. Five ejaculates were collected from each animal. Bulls with SAMS exhibited poor motility (P<0.05), low mitochondrial membrane potential (P<0.05), a high percentage of sperm with DNA fragmentation (P<0.05), low acrosome and plasma membrane integrity (P<0.05), and high membrane fluidity (P<0.05) in comparison with bulls that have a normal morphology; in addition to have a low percentage of viability, sperm with a high percentage of SAMS may be undergoing apoptosis. These findings indicate that bulls with this sperm pathology are infertile; furthermore, it suggests there is a putative genetic basis for this sperm defect in this breed.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-05-31T12:03:46Z No. of bitstreams: 1 Anna Kelly de Lima Pontes Venancio.pdf: 1035454 bytes, checksum: 3e71ac64c4a92627a7ead6a5f6bc4e4a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-31T12:03:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anna Kelly de Lima Pontes Venancio.pdf: 1035454 bytes, checksum: 3e71ac64c4a92627a7ead6a5f6bc4e4a (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / Aiming to evaluate the different levels of alfalfa hay on morphometric and qualitative parameters of the testicular parenchyma and serum testosterone levels in sheep (Ovisaries) of mixed breeds, 40 sheep were used in growth, with average body weight of 26 ± 1.85 kg to approximately eight months of age. The animals were subjected to 100 days confinement (with 44 days for adaptation to management and 56 days for the administration of the experimental diets). The treatments consisted of four levels of alfalfa hay: 0%, 20%, 40% and 60%, so was maintained proportion of 60% forage for all diets. At the end of the experiment, blood collection was performed for serum testosterone measurement and weighing of animals. After slaughter, the complex testicle-epididymis were removed and individually weighed, after we calculated the GSI. Histological sections were obtained (4 mm) of testicle, which were stained with hematoxylin-Phloxine and Toluidine Blue, mounted with entelan and analyzed morphologically and morphometrically in optical microscope. The body weight, scrotal circumference and IGS showed no statistical difference neither regression effect. Among the tubular parameters, height and epithelium area suffered decreasing linear effect. The volumetric ratio, the tunic, the individual volumes and the total Leydig cells as well as blood vessels suffered increasing linear regression effect. In sperm production there was also much effect regression as statistical difference, besides the regression suffered by the rounded number of spermatids per section. Thus, it was concluded that the inclusion of alfalfa a ratio above 20% is not recommended for breeding sheep because it compromises the testicular parenchyma. / Objetivando-se avaliar os diferentes níveis de feno de alfafa sobre os parâmetros morfométricos e qualitativos do parênquima testicular e níveis séricos de testosterona em ovinos (ovis aries) sem raça definida, foram utilizados 40 carneiros em crescimento, com peso corporal médio inicial de 26 ± 1,85 kg e oito meses de idade aproximadamente. Os animais foram submetidos ao confinamento de 100 dias(sendo 44 dias para adaptação ao manejo e 56 dias para a administração das dietas experimentais). Os tratamentos foram compostos por quatro níveis de feno alfafa: 0%, 20%, 40% e 60%, de modo que foi mantida proporção de 60% de volumoso para todas as rações. Ao final do confinamento, foi realizada a coleta de sangue para dosagem de testosterona sérica e pesagem dos animais. Após o abate, os complexos testículo-epidídimo foram removidos e pesados individualmente, logo após foi calculado o índice gonadossomático. Foram obtidos cortes histológicos (4 μm) do testículo, os quais foram corados em Hematoxilina-Floxina e Azul de Toluidina, montados com Entelan e analisados morfologicamente e morfometricamente em microscópio Óptico.O peso corporal, biometria testicular e IGS não apresentaram diferença estatística nem efeito de regressão. Dentre os parâmetros tubulares, a altura e área de epitélio sofreram efeito linear decrescente. Na proporção volumétrica,a túnica própria, os volumes total e individual das células de Leydig,assim como os vasos sanguíneos sofreram efeito de regressão linear crescente. Na produção espermática também houve tanto efeito de regressão quanto diferença estatística, além da regressão sofrida pelo número de espermátides arredondadas por secção. Desta forma, foi possível concluir que a inclusão de alfafa numa proporção acima de 20% não é recomendada para ovinos reprodutores, pois compromete o parênquima testicular.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-09T12:37:22Z No. of bitstreams: 1 Maria Juliana Gomes Arandas.pdf: 1607375 bytes, checksum: 0ece5341cf134190f4db4eabfdb13ed5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-09T12:37:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Juliana Gomes Arandas.pdf: 1607375 bytes, checksum: 0ece5341cf134190f4db4eabfdb13ed5 (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / Bats have several peculiar reproductive aspects that have evolved to fit the distinct ecological and environmental conditions, however remains one of the least known groups with respect to reproductive biology, especially in the Northeast of Brazil. It is known that phyllostomid reproductive patterns may have variable, which include: seasonally monstrous, seasonally polyestrous, aseasonally polyestrous and seasonally bimodal polyestry. Thus, the present study evaluated the reproductive patterns and spermatogenic activity and ovarian of bats Artibeus lituratus and Carollia perspicillata in South Mata of Pernambuco. Therefore, animals were collected by mist nets (12X 3 m) from September 2008 to October 2009, between 17:00 and 05:00. The specimens were classified according to the reproductive stage, as: (1) pregnant, (2) lactating, (3) pregnant and lactating, or (4) inactive (5) active if testes were descended, (6) or inactive if testes were not descended. For histological analysis, 10 males were randomly selected adults, (n = 5) and in the rainy season (n = 5) in the dry season and 10 adult females, of which (n = 5) and in the rainy season (n = 5) in the dry season for each species, totaling 40 individuals. Results indicated that both species have a greater proportion of females than males, suggesting that the formation of harems. The reproductive pattern displayed by both species was bimodal polyestry, with a peak in the dry season and another in the rainy season. A. lituratus presented reproductive peaks in the months of March and October and C. perspicillata for the months of March and October-November. The spermatogenesis in testing specimens were descended or tests were not descended and ovarian activity continued throughout the year. / Os morcegos apresentam diversos aspectos reprodutivos peculiares que evoluíram a fim de se ajustar as distintas condições ecológicas e ambientais, entretanto permanecem um dos grupos menos conhecidos com relação à biologia reprodutiva, principalmente no Nordeste do Brasil. Sabe-se que os morcegos filostomídeos podem apresentar padrões reprodutivos variáveis, como a monoestria sazonal, poliestria assazonal, poliestria sazonal e poliestria bimodal sazonal. Assim, a presente pesquisa avaliou os padrões reprodutivos e as atividades espermatogênica e ovariana dos morcegos Artibeus lituratus e Carollia perspicillata na Mata Sul de Pernambuco. Para tanto, os animais foram coletados por rede de neblina (12X 3 m) de setembro de 2008 a outubro de 2009, entre as 17:00 e 05:00h. Os espécimes foram classificados de acordo ao estágio reprodutivo, como: (1) fêmeas grávidas; (2) fêmeas lactantes; (3) fêmeas grávidas e lactantes; (4) fêmeas inativas; (5) machos ativos e (6) machos inativos. Para a análise histológica, foram selecionados aleatoriamente 10 machos adultos, sendo (n=5) na estação chuvosa e (n=5) na estação seca e 10 fêmeas adultas, sendo (n=5) na estação chuvosa e (n=5) na estação seca para cada espécie, totalizando 40 indivíduos. Os resultados indicaram que ambas as espécies apresentam uma proporção de fêmeas maior do que os machos, sugerindo que o sistema de acasalamento é do tipo políginico. O padrão reprodutivo apresentado por ambas às espécies foi poliéstrico bimodal, com um pico na estação seca e outro na estação chuvosa, sendo que A. lituratus apresentou picos reprodutivos para os meses de março e outubro e C. perspicillata para os meses de março e outubro-novembro, bem como a espermatogênese em indivíduos com testículos descendentes ou não descentes e atividade ovariana contínua durante todo o ano.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-06-13T12:59:49Z No. of bitstreams: 1 Thais Castelo Branco Chaves.pdf: 1439056 bytes, checksum: b10cd01b8668251dcde94f9823c9119a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T12:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thais Castelo Branco Chaves.pdf: 1439056 bytes, checksum: b10cd01b8668251dcde94f9823c9119a (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The development of technologies applied to aquaculture contributes significantly to the expansion of this segment. Reproductive biotechnologies in carcinicultre have been improved over the years, but still have many issues to be explored. This study aimed to collaborate with knowledge of reproductive characteristics and suggests a new approach to sperm cryopreservation of penaeid shrimps with the vitrification method. The first chapter presents an updated literature review comprising the main topics on penaeids males reproduction. The second chapter provides the first description, by scanning electron microscopy, of the spermatophore and spermatozoa of the pink shrimp Farfantepenaeus subtilis, which presented similar features of Farfantepenaeus subgenre, highlighting the peripheral positioning of sperm mass, near the outer cuticle of the spermatophore. In the third chapter it was evaluated the cadaveric sperm viability in the white shrimp Litopenaeus vannamei stored for up to 96 hours at different temperatures (26, 4 and -18°C). Sperm kept at 4°C showed excellent conditions for up to 96 hours of storage. Meanwhile the worst conditions were found in sperm kept at -18°C that presented high mortality rates for all tested periods. In the fourth chapter we aimed to develop a sperm cryopreservation protocol in the white shrimp Litopenaeus vannamei by vitrification method. The most appropriate cryoprotectants to vitrification were selected by toxicity tests. Thus methanol and lecithin, intra and extracellular cryoprotectants respectively, were used singly or in combination. After vitrification the sperm was stored in liquid nitrogen for up to 120 days. The high sperm viability rates observed suggests that vitrification method is efficient for L.vannamei sperm cryopreservation. In the fifth chapter, females were inseminated with sperm cryopreserved by vitrification method. The efficiency of the method was evaluated by fertilization and hatching nauplii rates. As sperm viability, the fertilization rate was satisfactory in all treatments. However, only the control group had nauplii hatching. Therefore, by comparing the fertilization and hatching rates, it is suggested that some unknown factor is interrupting embryo development. / O desenvolvimento de tecnologias aplicadas à aquicultura colabora significativamente com a expansão deste segmento. Na carcinicultura as biotécnicas reprodutivas vêm sendo aprimoradas ao longo dos anos, mas ainda apresenta muitas lacunas a serem exploradas. Objetivou-se com o presente trabalho colaborar com o conhecimento das características reprodutivas, além de sugerir uma nova abordagem para a criopreservação do sêmen de camarões peneídeos, com o método de vitrificação. O primeiro capítulo apresenta uma revisão de literatura atualizada abordando os principais tópicos sobre a reprodução de machos de peneídeos. O segundo capítulo traz uma descrição inédita, por microscopia eletrônica de varredura, do espermatóforo e espermatozoide do camarão-rosa Farfantepenaeus subtilis, os quais apresentaram características similares aos dos membros do gênero Farfantepenaeus, onde se destaca o posicionamento periférico da massa espermática, próxima à cutícula externa do espermatóforo. O terceiro capítulo teve como objetivo avaliar a viabilidade do sêmen cadavérico em camarões da espécie Litopenaeus vannamei armazenados por até 96h em diferentes temperaturas (26, 4 e -18ºC). O sêmen mantido a 4ºC apresentou condições excelentes por até 96h de armazenamento. Enquanto que a pior condição foi encontrada a -18ºC, onde foram observadas altas taxas de mortalidade em todos os períodos testados. No quarto capítulo objetivou-se desenvolver um protocolo de criopreservação do sêmen do camarão L.vannamei, por vitrificação. Através de testes de toxicidade foram selecionados os crioprotetores mais adequados à técnica. Metanol e lecitina, crioprotetores intra e extracelulares, respectivamente, foram utilizados combinados ou não. Após vitrificação, o sêmen foi estocado em nitrogênio líquido por até 120 dias. As altas taxas de viabilidade espermática observadas sugerem a eficiência do método de vitrificação para a criopreservação do sêmen do camarão L.vannamei. No quinto capítulo, objetivou-se avaliar a eficiência do método de vitrificação através das taxas de fertilização em fêmeas inseminadas artificialmente. Assim como a viabilidade espermática, a taxa de fertilização foi satisfatória em todos os tratamentos. Portanto, diante dos resultados satisfatórios de fertilização, sugere-se que o método de vitrificação pode ser eficiente para criopreservação do sêmen do camarão peneídeo L. vannamei.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-16T14:31:59Z No. of bitstreams: 1 Edivaldo Rosas.pdf: 659763 bytes, checksum: 489e95ded0734db81a8a937256c893d6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-16T14:31:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Edivaldo Rosas.pdf: 659763 bytes, checksum: 489e95ded0734db81a8a937256c893d6 (MD5) Previous issue date: 2008-02-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The use of molecular biology in animal reproduction to identifying the sex genetic allows the producer has better reproductive planning, facilitating the coordination of actions aimed at rationalizing production and profitability. The objective of this study was to determine methods for the identification of the sex of the goats and sheep, using different concentrations of DNA (150, 100, 50, 1, 0.5, 0.2 and 0.1 ng) extracted from blood of both sexes, as a possibility for application in sexing embryos pre-implantating, sperm and animals pseudo-hermaphrodites. It was performed polymerase chain reaction (PCR) multiplex for the SRY gene (116bp) found in the Y chromosome, the gene for Aml-X (300pb) found on the X chromosome, in addition the sequences corresponding to genes ZFX / ZFY containing 445 and 447bp respectively. The use of these methods presented showed accuracy of 100% in samples of blood goat and sheep, in low concentrations, at least 0.2ng (SRY/Aml-X) and 1.0ng (SRY/ZFXZFY), which suggests the feasibility of the technique for determining sexual in these species. / A utilização de ferramentas moleculares na identificação do sexo genético permite ao produtor um melhor planejamento reprodutivo, elevando o valor dos animais avaliados e facilitando a coordenação de ações que visem racionalizar produção e lucratividade. Objetivou-se com o presente estudo determinar métodos que permitam a identificação do sexo genético das espécies caprina e ovina, utilizando diferentes concentrações de DNA (150, 100, 50, 1, 0,5, 0,2 e 0,1ng) extraído de sangue de ambos os sexos, como uma possibilidade de aplicação em exames embrionários pré-implantacionais, sexagem espermática e identificação do sexo em animais pseudo-hermafrotidas. Foram realizadas reações em cadeia da polimerase (PCR) multiplex para o gene SRY (116pb) encontrado no cromossomo Y, para o gene Aml-X (300pb) encontrado no cromossomo X, além das seqüências correspondentes aos genes ZFX/ZFY que contêm 445 e 447pb respectivamente. A utilização destes métodos apresentou acurácia de 100% nas amostras de sangue caprino e ovino, com eficiência em quantidades de DNA de até 0,2ng (SRY e Aml-X) e 1,0ng (SRY e ZFX/ZFY), o que sugere a viabilidade da técnica para determinação sexual embrionária destas espécies.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-13T14:58:32Z No. of bitstreams: 1 Juliana Costa da Conceicao.pdf: 363191 bytes, checksum: 9e96d043be0eefd3f7d841fad954142b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-13T14:58:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Costa da Conceicao.pdf: 363191 bytes, checksum: 9e96d043be0eefd3f7d841fad954142b (MD5) Previous issue date: 2011-07-13 / The aim of this study, divided into two trials was to evaluate the beneficial effect of retinoids (retinol - RT; retinoic acid - RA) and growth factor (IGF-I) on in vitro production of goat embryos, and to evaluate apoptosis through the activity of enzymes of group II caspases and DNA fragmentation by TUNEL assay. In the first experiment, divided into three groups (CG, GRT and GAR), was evaluated apoptosis of goat oocytes and embryos undergo maturation in vitro in culture medium with or without RT and HR. The second experiment was divided into two treatments, the treatment was first investigated the efficiency of both retinoids distributed in oocytes in TCM 199, and the second treatment was investigated the efficacy of RT, RA, or IGF-I of zygotes in KSOM medium using the same means in conjunction with the monolayer of oviduct cells (MCO). A total 4320-cumulus-oocyte complex obtained by aspiration from follicles (2-6 mm in diameter) ovarian animals slaughtered in abattoirs were selected for IVM and incubated in TCM 199 at 39 º C in air with 5% CO2 for 24 hours. Thereafter, the oocytes were processed through mDM and exposed to sperm for 18 hours. Presumptive zygotes were placed in drops of KSOM medium enriched with RT, RA, or IGF-I. At the end of the 10th day of co-culture blastocysts were prepared for the location of characteristic changes of apoptosis using the reagent PhiPhiLux-G1D2 and solutions of 4% paraformaldehyde and Phosphate-Buffered Saline + 1 mg / ml polyvinylpyrrolidone . In the first experiment, the activity of caspase enzymes did not differ (P> 0.05) between oocytes in the CG (7,20±0,91), GRT (6,60±0,68) and the GAR (7,30±0,67) and between the GRT and the GAR. The oocytes and blastocysts positive for TUNEL assay were higher (P <0.05), respectively, in the CG (8,20±0,78; 8,70±1,05) than in GRT (5,60±0,52; 4,80±0,51 ) and the GAR (6,40±0,69; 5,40±0,69), no difference (P> 0.05) between the GRT and the GAR. Zygotes GC had lower (P <0.05) capacity development to the blastocyst stage (5.32 ± 0.81) than those of the GRT (7.94 ± 0.93) and GAR (7.36 ± 1.02), no difference (P> 0.05) between the GRT and the GAR.In the second experiment, the results showed that the groups of oocytes and embryos treated only with retinoids produced fewer blastocysts (P <0.05) than in groups of oocytes and embryos treated with retinoids associated with IGF-I. As to the blastocyst positive for apoptosis, is assessed by the activity of enzymes caspazes or DNA fragmentation, there was no difference (P> 0.05) between groups. It is concluded that the addition of retinoids to oocytes maturation medium reduced apoptosis and cell association of retinoids with IGF-I is beneficial and can be recommended to enhance in vitro production of goat embryos. / O objetivo deste estudo, dividido em dois experimentos, foi avaliar o efeito benéfico dos retinóides (retinol – RT; ácido retinóico – AR) e do fator de crescimento (IGF–I) na produção in vitro de embriões caprinos, bem como avaliar a apoptose através da atividade das enzimas caspases do grupo II e da fragmentação de DNA pelo teste de TUNEL. No primeiro experimento, dividido em três grupos (GC, GRT e GAR), foi avaliado a apoptose de oocitos e embriões caprinos submetidos à maturação in vitro em meio de cultivo contendo ou não RT e AR. O segundo experimento foi dividido em dois tratamentos, sendo no primeiro tratamento foi investigada a eficiência de ambos os retinóides nos oocitos distribuídos em meio TCM 199, e no segundo tratamento foi investigado a eficácia do RT, AR ou IGF-I dos zigotos em meio KSOM utilizando-se os mesmos meios em conjunto com a monocamada de células de oviduto (MCO). Um total 4320 oócitos-cumulus-complexo obtidos por aspiração de folículos (2-6 mm de diâmetro) ovarianos de animais abatidos em matadouro foram selecionados para MIV e incubados em TCM 199 a temperatura de 39º C em ar com 5% de CO2 durante 24 horas. Ao final deste período, os oocitos foram processados em meio mDM e expostos aos espermatozóides por 18 horas. Os presumíveis zigotos foram depositados em gotas do meio KSOM enriquecidos com RT, AR ou IGF-I. Ao final do 10º dia da co-cultura os blastocistos foram preparados para a localização das alterações características da apoptose utilizando-se o reagente PhiPhiLux-G1D2 e as soluções de paraformaldeído a 4% e de Phosphate-Buffered Saline + 1 mg/mL de Polivinilpirrolidona. No primeiro experimento, a atividade das enzimas caspases não diferiu (P > 0,05) entre os oócitos do GC (10,32%), do GRT (8,08%) e do GAR (8,45%), bem como entre a do GRT e do GAR. Os oócitos e blastocistos positivos para o teste de TUNEL foram maiores (P < 0,05), respectivamente, no GC (11,46%; 9,22%) do que no GRT (6,86%; 5,45%) e no GAR (7,41%; 6,12%), não existindo diferença (P > 0,05) entre os do GRT e do GAR. Os zigotos do GC apresentaram menor (P < 0,05) capacidade de desenvolvimento até o estádio de blastocito (5,32 ± 0,81) do que aqueles dos GRT (7,94 ± 0,93) e GAR (7,36 ± 1,02), não existindo diferença (P > 0,05) entre os do GRT e do GAR. Já no segundo experimento, os resultados mostraram que os grupos de oócitos e embriões tratados somente com retinóides produziram menos blastocistos (P < 0,05) do que nos grupos de oócitos e embriões tratados com retinóides associados ao IGF-I. Quanto aos blastocistos positivos para apoptose, seja avaliada pela atividade das enzimas caspazes ou pela fragmentação do DNA, não foi verificada diferença (P > 0,05) entre os grupos experimentais. Conclui-se que a adição de retinóides ao meio de maturação de oocitos diminui a atividade apoptótica celular e a associação dos retinoides com o IGF-I é benéfica e pode ser recomendada para aumentar a produção in vitro de embriões da espécie caprina.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-13T16:09:33Z No. of bitstreams: 1 Karen Mascaro Goncalves da Silva.pdf: 349376 bytes, checksum: df0b08aa2b38c52538bbf3e08f2e8413 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-13T16:09:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karen Mascaro Goncalves da Silva.pdf: 349376 bytes, checksum: df0b08aa2b38c52538bbf3e08f2e8413 (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / To evaluate the effect of the season in the sperm quality of the equine semen and the use of antioxidant substances in the extender before and after thawed, three experiments was performed. In the Exp. 1, in natura semen of three Mangalarga Marchador stallions, in the breeding season (BS) and not breedii station (NBS), which had been frooze in machine using comrnercial extender FR.5 (Tris-egg yolk with glicerol 5%). After thawed at 37 'C for 30 sec.. the samples had been evaluated to volume (Vo),concentration (Co), total motility (TM) and progressive motility (MP), vigor (v), acrossomal (Aci) and DNA (DNAi) integrity, in BS and NBS, as well as proteins of sperm membrane of in natura semen. The Vo and the Co at NBS were higher than BS.TM and PM in the in natura semen in the BS were higher (P<0.05) than those at NBS. On the thawed semen. there was no difference at BS and NBS. In the same way, the V at in nahrra semen was higher (P<0.05) in the samples collect at BS. After thawing, there was no significant variation and the values were lower than to those at in natura semen. The Aci analysis was similar on in natura semen at two stations. The sperm cells have intact DNA at in natura samples, on both seasons, with values similar on the thawed semen at BS and NBS. It was observed 33 spots on the in natura semen at BS and 46 spots at NBS referring to sperm membrane proteins on the semen pool of each stdlion. The 36 to 97 kDa proteins were present only at BS. It was obsewed that the spots of membrane proteins of the three stallions were concentrated between 4 and 6 iso-electric points. On the Exp. 2, it was analysed the effect of the antioxidants on the fieezing INRA82-HEPES, on stallions of different breeds classified as fertile and subfertile.It was used INRA82-HEPES without antioxidants (TI), supplemented with 120 mM of Trolox (T2) or 2 mM of Phvate (T3). The thawed samples were evaluated according to PM, membrane integrity (Mi), Aci and DNAi, membrane stability (MS) and mitochondrial membrane potential (AY). It was observed that the fertile animals had higher TM and PM in relation to the subfertile animals, independent of the antioxidant addition. To comparing the sperm parameters of the stallions, in accordance with fertiíity and antioxidant substance addition, it was observed that the phvate addition pmvided results higher (P<0.05) than those of Trolox in TM. In the Exp. 3, it was observed the use of antioxidants after semen thawing on the same stallions and freezing technique of Exp. 1. After thawing, it was used the treatments: T1= 150 pL of semen + 150 pL of Tris (Control); T2= 150 pL of semen + 150 pL of Tris + 120 p W m L of Trolox; T3= 150 pL of semen + 150 pL of Tris + 3,5 mM of Pentoxyfiline; T4= 150 pL of semen + 150 pL of Tris + 3,5 mM of Pentoxyfiline + 120 pM/rnL of Tmlox, and the samples were analyzed at 0, 60 and 120 minutes of incubation (37 "C) according to TM, PM, Aci and DNAi. Significant dserences (P~0.05)w as seen due tothe incubation time period on TM and PM at 120 min., however no difference was seen in the treatment x time incubation interaction. Based on the results we hypothethized that proteins with molecular weights between 97 and 36 kDa can be possible fertility L pointers of sperm quality; the phvate addition improve TM of fertile and sub-fertile I stallions and the Trolox addition at extender after thawing of the equine semèn preserve I the TM and PM of the sperm cells submitted to incubation (37 'C) during 120 minutes. / Para avaliar o efeito da esta60 do ano na qualidade espermática do sêmen eqüino e uso de antioxidantes na diluiqão antes e depois da congelaqão, foram realizados três experimentos. No Exp. 1, colheu-se amostras de sêmen de três garanhóes da raça Mangalarga Marchador, na estação reprodutiva (ER) e estação não reprodutiva (ENR), as quais foram congeladas em máquina de congelação utilizando o diluidor comercial FR5 (Tris-gema com glicerol a 5%). Após descongelação a 37 "C por 30 segundos, as amostras foram avaliadas quanto a volume (Vo), concentração (Co), motilidades total (MT) e progressiva (MP), vigor (V), acrossoma (Aci) e DNA @NA) integ;os, na ER e ENR, assim como proteínas de membrana espermática do sêmen in natura. O VO e a CO na ENR foram maiores do que na ER. A MT e MP no sêmen in natura colhidos na ER foram superiores (P<0,05) aqueles da ENR. No sêmen descongelado, não se constatou diferença significativa entre as estações do ano. Da mesma forma, o V do sêmen in natura foi superior (P<0,05) nas amostras colhidas na ER. Após a descongelação, não houve variação significativa e os valores foram inferiores aqueles evidenciados in natura. Não houve diferença significativa para Aci, apresentando porcentual médio no sêmen descongelado semelhante ao in natura, nas duas estações, assim como na avaliação do DNA. Foram encontrados 33 e 46 pontos protéicos no sêmen in nattrra na ER e ENR, respectivamente, referentes as proteinas de membrana espermática do pool de sêmen de cada garanhão. A maioria das proteínas de 97 a 36 kDa estiveram presentes apenas na ENR. Observou-se também que os pontos protéicos de membrana dos três garanhões concentraram-se entre os pontos isoelétricos 4 e 6. No Exp. 2, analisou-se o efeito da aqão de antioxidantes ao diluidor de congelaqão INRA82-HEPES, sendo utilizados animais de raças distintas classificados como férteis e subférteis. Utilizou-se INRA82-HEPES sem antioxidantes (TI), acrescido de 120 mM de Trolox (T2) ou 2mM de Pimvato (T3). As amostras descongeladas foram avaliadas quanto a MP, integridade de membrana (Mi), Ai e DNAi, estabilidade membranar (EM) e potencial de membrana mitocondrial (AY) logo após a descongelação. Observou-se que os animais férteis apresentaram superioridade nas MT e MP em relação aos animais sub-férteis, independente da adição de antioxidante. Ao se comparar os parâmetros espedticos dos garanhões, de acordo com a fertilidade e a adiqão de substâncias antioxidantes, constatou-se que a adição do Piruvato proporcionou resultados superiores (P<0,05) aqueles obtidos com Trolox na MT. No Exp. 3, avaliou-se o uso de antioxidantes após a congelação do sêmen dos mesmos garanhões do Exp. 1, usando a mesma técnica de congelação. Após descongelação, utilizaram-se os tratamentos: T1= 150 pL de sêmen + 150 pL de Tris (Controle); T2= 150 pL de sêmen + 150 pL de Tris + 120 pIWmL de Trolox; T3= 150 pL de sêmen + 150 pL de Tris + 3,5 mM de Pentoxifilina e T4= 150 pL de sêmen + 150 pL de Tris + 3,5 mM de Pentoxifilina + de 120 pMImL Trolox, e asamostras foram analisadas aos 0,60 e 120 minutos de incubação (37 'C) quanto a MT, MP, Aci e DNAi. Em função do tempo de incubação das amostras verificaram-se diferenças (P<0,05) na MT e MP aos 120 minutos, porém na interação tratamento x tempo não foi constatada qualquer significância. Por conseguinte, julga-se que as proteínas entre 97 e 36 kDa podem ser possíveis indicadores de qualidade espermática; a adição de Piruvato melhora a motilidade total em garanhões férteis e subférteis; e a adição de Trolox ao diluente utilizado após a descongelaflo do sêmen equino preserva a MT e MP das células espermáticas submetidas a incubação a 37 'C durante 120 minutos.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-05-24T13:16:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1295210 bytes, checksum: 4ce6920b272a35167656916056179c03 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-24T13:16:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1295210 bytes, checksum: 4ce6920b272a35167656916056179c03 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Plantas medicinais dominam a farmacologia por proverem várias fontes de remédios e assim, a mesma espécie de planta pode ter compostos que melhoram e compostos que prejudicam a espermatogênese. Dianthus caryophyllus apresenta ação antibiótica, antifúngica, antiviral, antioxidativa, sedativa e tranquilizante. Teve ação no controle da pressão arterial em ratos e possível efeito antiurolítico, porém nenhum estudo foi feito para avaliar seus efeitos na reprodução. Assim, esse estudo visou avaliar o efeito do extrato aquoso da flor de Dianthus caryophyllus (EADC) nos testículos de camundongos Balb/c, além da resposta de enzimas antioxidante à planta. Quarenta e oito animais foram distribuídos aleatoriamente em seis grupos experimentais (n=8): G1 (Controle), G2 (Viagra), G3, G4, G5 receberam diariamente 10, 20, 40 mg/kg de EADC, respectivamente, e o G6 recebeu EADC 40mg/kg em dias alternados. Foram realizadas análises morfométricas e estereológicas do parênquima testicular, avaliação de alterações estruturais do tecido, atividade das enzimas catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa S-transferase (GST), além da concentração de malondialdeido (MDA) e de óxido nítrico (ON) nos testículos. Houve redução do diâmetro, proporção, volume e área do lúmem tubular, aumento da proporção e área de epitélio seminífero em todos os grupos tratados com a planta, sendo que o diâmetro tubular reduziu apenas em G5. Houve redução da proporção de túbulos seminíferos normais e aumento de vacúolos em todos os grupos. No intertúbulo houve aumento de tecido conjuntivo em G5. A proporção de células de Leydig aumentou apenas em G6, assim como o volume das células de Leydig por grama de testículo no mesmo grupo. O número de células de Leydig por testículo aumentou apenas em G6, enquanto por grama de testículo houve aumento em G5 e G6. Quanto à volumetria dos componentes, houve aumento do volume de tecido conjuntivo em G4, G5 e G6. Houve aumento de CAT em G5 e G6 e de MDA em todos os grupos tratados. Pode-se inferir que houve aumento da produção espermática em todos os grupos, no intertúbulo nota-se mais efeitos em Leydig e tecido conjuntivo principalmente nos grupos G5 e G6 e que a planta gera estresse oxidativo. / Medicinal plants dominate pharmacology by providing various sources of medicines and thus, the same plant species may have components that improve and impair spermatogenesis. Dianthus caryophyllus has antibiotic, antifungal, antiviral, antioxidative, sedative and tranquilizing actions. It had action in controlling blood pressure in rats and possible antiurolithic effects, but no study was done to evaluate its effects on reproduction. The aim of this study was evaluate the effect of the aqueous extract of the Dianthus caryophyllus flowers (AEDC) on the testis of Balb/c mice and the antioxidant enzyme response to the plant. 48 animals were randomly distributed in six experimental groups (n = 8): G1 (Control), G2 (Viagra), G3, G4, G5 received daily 10, 20, 40 mg / kg AEDC respectively and G6 40 G / AEDC 40mg / kg every other day. Morphometric and stereological analyzes of the testicular parenchyma, evaluation of tissue structural alterations, activity of catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione S-transferase (GST), and malondialdehyde (MDA) and oxide nitric oxide (ON) in the testicles. There was a reduction in the diameter, proportion, volume and area of the tubular lumen, increase in the proportion and area of seminiferous epithelium in all groups treated with the plant, and reduction of tubular diameter only in G5. There was a reduction in the proportion of normal seminiferous tubules and increase of vacuoles in all groups. In the intertubular compartment there was reduction in the proportion of lymphatic space as well as increase of connective tissue in all the treated groups. The proportion of Leydig cells increased only in G6, as did the volume of Leydig cells per gram of testis in the same group. The number of Leydig cells per testis increased only in G5, while per gram of testis there was increase in G5 and G6. In the volumetry of the components, there was an increase of only connective tissue in G4, G5 and G6. There was an increase in CAT in G5 and G6 and in MDA in all treated groups. It can be concluded that there was an increase in sperm production in all groups, in the intertubular compartment there were more effects in Leydig and connective tissue, especially in the G5 and G6 groups, and that the plant generates oxidative stress.