Resumo não disponível

O experimento avaliou o uso do meio TCM-199 suplementado com: SVE, SEE e SFB (meio indefinido); BSA (meio semi-definido) e PVA (meio definido); na presença ou ausência de hormônios (FSH e hCG) na maturação in vitro de oócitos bovinos nas condições do Laboratório de Embriologia e Biotécnicas de Reprodução da UFRGS. Complexos cumuli-oophorus (CCOs), em número total de 1458, foram aleatoriamente distribuídos em doze tratamentos, maturados por 24 h em atmosfera de 5% CO2, em ar e 100% umidade relativa em estufa a 39°C. A fecundação nos doze tratamentos foi realizada mediante exposição dos CCOs maturados aos espermatozóides (1x106/mL), previamente capacitados, durante 20 h. O cultivo foi realizado em fluído sintético de oviduto modificado (SOFaa) acrescido de 10% SVE a 39°C, 100% de umidade relativa do ar e 5% CO2, 5% O2 e 90% N2. Na presença de hormônios os meios indefinidos (SVE: 63,6%, 70/110; SEE: 53,4%, 70/131 e SFB: 56,0%, 75/134) apresentaram maior eficiência em proporcionar suporte à primeira divisão embrionária, em comparação ao meio definido (PVP: 50,6%, 45/89). Os CCOs maturados em meio indefinido suplementado com SVE e hormônios apresentaram maior competência em fecundar e suportar o desenvolvimento embrionário até o estádio de blastocisto após sete dias de cultivo (27,3%, 30/110).

Tese (Doutorado)—Universidade Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-08-21T11:52:14Z No. of bitstreams: 1 2012_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 4964531 bytes, checksum: 9d463cc52f0602d4161f0a4808dbf390 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-08-21T11:52:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 4964531 bytes, checksum: 9d463cc52f0602d4161f0a4808dbf390 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-21T11:52:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 4964531 bytes, checksum: 9d463cc52f0602d4161f0a4808dbf390 (MD5) / A avaliação de embriões produzidos in vitro (PIV) no estágio pós-eclosão é uma importante ferramenta para verificar a qualidade de embriões PIV. É justamente nessa fase, em que ocorre a maior perda embrionária. Para avaliar os embriões nesse estágio, esse trabalho propõe a utilização do sistema de cultivo pós-eclosão (PHD). Esse sistema é um método alternativo que pode auxiliar na avaliação do potencial de desenvolvimento dos embriões sem a necessidade de transferi-los para receptoras. Mas, para utilizar esse sistema na rotina é necessário verificar sua eficiência. Portanto, esse trabalho teve por objetivo avaliar a viabilidade do sistema PHD através de avaliações morfológicas e moleculares de embriões produzidos nesse sistema. Esse trabalho foi composto de três estudos. O primeiro visou validar o sistema PHD no laboratório e verificar o melhor protocolo para realizar esse sistema. Para isso, túneis de agarose foram construídos com água Milli-Q ou com solução fosfato salina (PBS) foram utilizados para o desenvolvimento dos embriões PIV. O segundo trabalho, após a escolha do melhor protocolo, objetivou avaliar o comportamento de embriões produzidos in vivo e in vitro de D7 cultivados no sistema PHD até D14. E finalmente, o último trabalho, verificou a eficiência do sistema PHD para o cultivo de embriões PIV até D14 comparado à transferência múltipla para o útero de receptoras. Durante o período de cultivo, os embriões foram mensurados e avaliados quanto à qualidade morfológica do trofoblasto e botão embrionário. Além disso, o perfil molecular foi avaliado pela quantificação da expressão de genes relacionado com qualidade do embrião, SLC2A1, SLC2A3, G6PD, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSOD , HSP70, IFNT, nos embriões de D7 e D14. Quanto ao primeiro trabalho observou-se que o melhor protocolo para o sistema PHD foi quando se utilizou a água Milli-Q para a construção dos túneis, pois nesse os embriões tiveram um maior crescimento durante o cultivo. No segundo, trabalho verificouse que apesar da baixa taxa de crescimento os embriões in vivo tiveram desenvolvimento semelhante no sistema PHD do que os in vitro. E quando se comparou os embriões totalmente in vitro com os totalmente in vivo, verificou-se que os in vitro eram menores, mas a maioria da expressão dos genes foi semelhante entre os grupos (SLC2A3, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSO , IFNT). E, no último trabalho, o principal resultado foi que os embriões in vitro cultivados até D14 no útero de receptoras foram semelhantes ao grupo controle (totalmente in vivo), mas esses dois tipos de embriões foram diferentes dos cultivados no sistema PHD, principalmente, em relação à porcentagem de embriões crescidos/recuperados, ao tamanho e a expressão gênica. Porém, verificou-se a possibilidade de embriões PIV se desenvolverem nos túneis de agarose. Concluiu-se que o sistema PHD ainda não está apto para se utilizado na rotina, principalmente, devido à baixa porcentagem de embriões que se desenvolvem. Portanto, investimentos em métodos para que ele se torne menos seletivo e dê condições para o desenvolvimento de embriões de boa qualidade que se desenvolveria normalmente em ambiente uterino seriam de grande valia. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The evaluation of in vitro-produced embryos (IVP) in the post hatching stage is an important tool to verify the quality of IVP embryos, as is in this phase that most embryonic loss occurs. In the order to evaluate the embryos at this developemental stage, the present study proposes the use of the post-hatching development (PHD) system. This system is an alternative method which may help to evaluate the developmental potential of embryos without transfering them to a recipient’s uterus. However, to use this system routinely in the laboratory, it is necessary to verify its efficiency. Therefore, this study aimed to evaluate the viability of the PHD system using morphological and molecular evaluations of embryos produced in this system. This study was conducted in three different studies. The first was designed to validate the PHD system in the laboratory and to determine the best testing protocol. Agarose tunnels were subsequently constructed either with Milli-Q water or with phosphate buffer saline (PBS) and IVP embryo development was evaluated. Sencondly, after selecting the best protocol, we aimed to evaluate the behavior of in vivo and in vitro embryos in the PHD system from Day (D)7 through D14. Finally, in the third study, we verified the efficiency of the PHD system and multiple transfer protocol for culture IVP embryos until D14. During the culture period, embryos were measured and evaluated for morphological quality of the embryonic trophoblast and embryonic disc. The molecular profile was determined by quantification of the expression of genes related to embryo quality, such as SLC2A1, SLC2A3, G6PD, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSOD, HSP70, IFNT, in D7 and D14 embryos, using qPCR. In the first study, we concluded that the best protocol was when agarose tunnels were constructed with Milli-Q water, as embryos demonstrade a greater increase in size. In the second study, we found in vivo embryos presented a lower development rate in the PHD system, when compared morphologically to the in vitro embryos. On comparison of the completely in vitro embryos with completely in vivo embryos, it was found that in vitro embryos were smaller than the in vivo embryos, but most of the genes had similar expression between the groups (SLC2A3, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSOD, IFNT). In the last study, we concluded that IVP embryos cultured until D14 in a recipients uterus were similar to control group (completely in vivo), and both were different from embryos cultured in the PHD system. Although the PHD system is inefficient we demonstrated that it can be used to develop IVP embryos. It was concluded that the PHD system is not yet able to be routinely used, especially due to the low percentage of embryos that develop in it. Therefore, an investment into this method, it can become less selective and provide conditions for the develop of good quality embryos that would normally development in uterine conditions, would be of great value.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ecologia, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-04-24T13:10:15Z No. of bitstreams: 1 2012_NeanderMarcelHeming.pdf: 4497537 bytes, checksum: c62a0d779607594874ab500cd1c761df (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-04-25T12:54:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_NeanderMarcelHeming.pdf: 4497537 bytes, checksum: c62a0d779607594874ab500cd1c761df (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-25T12:54:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_NeanderMarcelHeming.pdf: 4497537 bytes, checksum: c62a0d779607594874ab500cd1c761df (MD5) / A biologia reprodutiva das aves tem um papel fundamental no desenvolvimento da teoria de história de vida. As estratégias de história de vida das aves da região Neotropical diferem notavelmente de seus correspondentes da região Neártica. A América Austral e Neotropical (AAN) possui mais de 30% de toda a diversidade de aves mas a falta de estudos detalhados sobre a biologia das espécies dificulta o teste de hipóteses. Por meio de uma extensa revisão de literatura buscamos registros de tamanho de ninhada, medidas de ovos, massa de ovos e períodos de incubação e de ninhego de todas as espécies de Fluvicolinae. Esta é a segunda maior subfamília dentre os tiranídeos, com 132 espécies. A subfamília Fluvicolinae possui a distribuição mais ampla dentre todos os tiranídeos, ocorrendo desde o extremo sul da América do Sul até o extremo norte da América do Norte além de outras características que fazem desta subfamília um grupo ideal para comparações geográficas e ecológicas. No primeiro capítulo testamos se a quantidade de informação existente é explicada por características dos países e das espécies. Procuramos dados reprodutivos de Fluvicolinae em cerca de 2500 publicações, sendo que 302 publicações, desde 1838 até 2012, continham dados desta subfamília. A quantidade de publicações por país foi positivamente relacionada com o número de universidades, riqueza de espécies de Fluvicolinae e área de cada país e negativamente relacionada com a riqueza total de espécies de cada país. As publicações continham registros de 4751 tamanhos de ninhada, 3952 medidas de ovos, 1152 massas de ovos, 349 períodos de incubação e 285 períodos de ninhego em todo o Novo Mundo. A quantidade de registros de tamanho de ninhada das espécies foi positivamente relacionada com o potencial de amostragem das espécies (porcentagem da área total de distribuição da espécie em cada país multiplicada pelo número de instituições de ensino superior existente no país) e o tamanho da área reprodutiva. Soluções para que se consiga reverter este quadro estão no aumento do número de 2 instituições acadêmicas ao longo da AAN, estabelecimento e melhora de redes de cooperação e pesquisa internacionais e da distribuição de recursos para a educação de forma mais uniforme em todas as regiões. Nos dois capítulos seguintes testamos hipóteses relacionadas com os padrões geográficos de número e volume de ovos. A observação de que as ninhadas aumentam com a latitude levou à formulação de hipóteses relacionando o padrão com a disponibilidade de alimento e a predação de ninhos. Entretanto, a variação latitudinal no tamanho de ninhada ainda é uma questão não resolvida por três razões principais. Primeiro, após o surgimento da hipótese de sazonalidade a hipótese da duração do dia raramente foi testada e a limitação de alimento por meio da densidade populacional foi amplamente aceita como o mecanismo para a variação no tamanho de ninhada. Segundo, embora a limitação de alimento seja amplamente aceita como o maior determinante de tamanho de ninhada, a evidência é basicamente baseada em populações locais. Terceiro, muitos dos padrões de história de vida são baseados no conhecimento biológico do hemisfério norte, que possui menos de 25% de toda a biodiversidade de aves do planeta. Desse modo, analisamos o tamanho de ninhada de Fluvicolinae em ampla escala geográfica com os objetivos de: (1) testar as hipóteses de Lack (1947) e Ashmole (1963) lado a lado, e (2) comparar os hemisférios sul e norte das Américas para testar quais fatores influenciam o tamanho de ninhada ao longo de cada um dos hemisférios. A hipótese de duração do dia e sazonalidade (DDS) explicou 28% da variação total no tamanho de ninhada e ambas as variáveis foram significativas (p < 0,05). De acordo com a regressão parcial a variação explicada compartilhada pelas duas variáveis foi de 17%. A duração do dia explicou 25% no total e 8% sozinha de toda a variação no tamanho de ninhada. A sazonalidade explicou 20% no total e 3% sozinha de toda a variação no tamanho de ninhada. O modelo com as variáveis ecológicas e ambientais explicou 44% da variação total no hemisfério norte e apenas 17% no hemisfério sul. Além disso o tamanho de ninhada teve um aumento menos pronunciado no hemisfério sul do que no hemisfério norte. É notável que o mecanismo de duração do dia proposto por Lack (1947) 3 não tenha sido investigado pela maior parte dos pesquisadores. Além disso, a grande quantidade de variação não explicada no hemisfério sul da América reforça a visão de que os mecanismos precisam ser revisitados para melhorar nossa compreensão sobre como as estratégias de histórias de vida são moldadas. O fato de as aves dos dois hemisférios estarem sujeitas a condições ambientais antagônicas, com a relação latitude e tamanhos de ninhada ser menor no hemisfério sul em relação ao hemisfério norte, é uma grande oportunidade para compreender melhor as estratégias de história de vida. No terceiro capítulo analisamos a variação no volume de ovos, pois o tamanho de postura da maioria das espécies de aves varia muito pouco ao longo de toda a América Austral e Neotropical (AAN). Sabendo-se que vários fatores podem estar relacionado com o volume dos ovos das aves, a investigação deste parâmetro reprodutivo é uma alternativa interessante para se entender as estratégias de história de vida destes organismos. Neste capítulo avaliamos a variação geográfica no volume de ovos de Fluvicolinae e testamos as hipóteses de relacionadas com variáveis ecológicas. Obtivemos 762 registros dos quais 437 foram geo-referenciados, pertencentes a 86 espécies e 31 gêneros das 132 espécies e 38 gêneros de Fluvicolinae. O volume dos ovos tendeu a aumentar em direção ao sul da América do Sul e o padrão foi mantido após controlar pela massa corporal. O modelo explicou 87,4% de toda a variação no volume dos ovos, sendo que o tamanho corporal explicou 83,9% da variação no volume dos ovos. Dos 16,1% da variação residual no volume de ovos (não explicados pela massa corporal), 21,7% (3,5% do total) foram explicados pelos preditores ecológicos utilizados na análise e 78,3% (12,6% do total) não foram explicados. A tendência de aumento no volume de ovos em direção ao sul da América do Sul é um padrão bastante interessante. O número de ovos por ninhada tende a aumentar em direção ao norte do hemisfério norte e este padrão tem sido amplamente discutido. No entanto, este padrão não se repete no hemisfério sul, o que tem chamado a atenção dos pesquisadores. Portanto, considerando-se o tamanho de ninhada menos variável nos passeriformes da América Austral e 4 Neotropical em relação aos da região Boreal, o tamanho dos ovos pode explicar outra fração das estratégias de história de vida no hemisfério sul. Levando em conta a baixa quantidade de variação explicada pelos preditores utilizados neste estudo, a coleta de informações sobre períodos de desenvolvimento poderá ajudar a responder algumas das questões sobre as estratégias de história de vida das aves da América Austral e Neotropical. Portanto, para promover o desenvolvimento da ornitologia da América Austral e Neotropical, os pesquisadores desta região tem um grande número de parâmetros de história de vida de várias espécies para documentar. Além disso, se os parâmetros forem colocados dentro do contexto teórico, além de contribuir para o desenvolvimento da ornitologia Neotropical, os pesquisadores na AAN tem uma oportunidade única de promover o avanço da teoria de história de vida.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Natália Cristina Ramos dos Santos (nataliaguilera3@hotmail.com) on 2009-10-16T13:56:17Z No. of bitstreams: 1 Dissert_ReginaldoVieiradeSouxa.pdf: 671043 bytes, checksum: 847820a52781eb05975638a844332018 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-06-23T22:07:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert_ReginaldoVieiradeSouxa.pdf: 671043 bytes, checksum: 847820a52781eb05975638a844332018 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-23T22:07:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert_ReginaldoVieiradeSouxa.pdf: 671043 bytes, checksum: 847820a52781eb05975638a844332018 (MD5) Previous issue date: 2007-06 / Com o aprimoramento das técnicas de reprodução assistida, a produção de embriões in vivo (TE) e in vitro (PIV), tem crescido consideravelmente e por conseqüência, a demanda por metodologia eficaz de identificação do sexo desses embriões. Este trabalho teve por objetivo avaliar um sistema de identificação do sexo (Diagnóstico pré-implantacional do sexo) de embriões bovinos produzidos em programas comerciais de TE e PIV. Os embriões produzidos in vivo (n=609) foram coletados de animais das raças Holandesa e Jersey, sete dias (D7) após a Inseminação Artificial (IA) nos estágios de mórula compacta (Mc), blastocisto inicial (Bi), blastocisto (Bl) e blastocisto expandido (Bx). Os embriões foram divididos em dois grupos: Grupo TE-B, constituído por embriões biopsiados e Grupo TE-C, constituído por embriões intactos (controle). Para o experimento de produção in vitro, foram utilizados embriões de bovinos da raça Gir (n=318), nos estágios de blastocisto inicial Bi, Bl e Bx, em D-6,5. Os embriões foram divididos em dois grupos: Grupo PIV-B, constituído por embriões biopsiados e Grupo PIV-C, constituído por embriões intactos (controle). Os embriões dos Grupos TE-B (n=380) e PIV-B (n=91) foram submetidos à micromanipulação por microssecção para retirada da biopsia. Os embriões biopsiados foram cultivados até o final do processo de identificação do sexo e então transferidos para receptoras síncronas. Os embriões do Grupo TE-C (n=229) e PIV-C (n=227) foram transferidos íntegros para receptoras síncronas no mesmo momento dos biopsiados. As receptoras foram submetidas à ultra-sonografia aos 30 (TE) e 60 (TE e PIV) dias após as inovulações para diagnóstico de gestação e confirmação do sexo, respectivamente. Para a identificação do sexo dos embriões biopsiados, as respectivas biopsias foram submetidas às técnicas de PCR e eletroforese em gel de agarose. Na reação, foram utilizados 2 pares de oligonucleotídeos iniciadores (primers), sendo um específico para o cromossomo Y e o outro para um gene autossômico (controle da reação que amplifica uma seqüência de DNA específica em ambos os sexos). Para a comparação das taxas de gestação aos 60 dias, entre os grupos e respectivos controles, foi utilizado o teste do quiquadrado (χ2) e não houve diferenças entre os grupos, com TE-B =206/380 (54,21%), TE-C = 128/229 (55,89%); PIV-B =24/91 (26,37%) e PIV-C=45/227 (19,82%). Das gestações confirmadas que tiveram suas respectivas biopsias submetidas à sexagem, 133 do Grupo TE-B, e 20 do Grupo PIV-B, foram avaliadas por ultra-sonografia aos 60 dias após as inovulações sendo que 124 (93,23%) e 19 (95%), respectivamente, tiveram sexo coincidente com aquele atestado pela PCR. O resultado deste trabalho indicou que o procedimento de retirada de biopsia de embriões produzidos in vivo e in vitro não interfere na viabilidade dos mesmos, e que a metodologia utilizada é viável para identificação do sexo dos embriões em programas comerciais de transferência de embriões. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / With the advance of the assisted reproductive techniques, the use of in vivo (ET) and in vitro embryo production (IVP) has increased considerable, which has lead to a demand for an efficient method for embryo sexing. The present study aimed to evaluate the effect of the micromanipulation of ET and IVP embryos on their viability and to test, in field conditions, a methodology embryo sexing. In vivo produced embryos (n=609) were collected from Holstein and Jersey females. Embryo at compact morula (Mc), initial blastocyst (Bi), blastocyst (Bl) and expanded blastocyst (Bx) stage on Day 7 post insemination (D-7) were allocated into two groups: Group ET-B, biopsied embryos and Group ET-C, intact embryos (control). For the in vitro production experiment embryos of Gir breed females were used (n=318) at the initial blastocyst (Bi), blastocyst (Bl) and expanded blastocyst (Bx) stage at Day 6,5 post insemination. Embryos were distributed into two groups: Group IVP-B, biopsied embryos and Group IVP-C, intact embryos (control). Embryos from both groups ET-B (n=380) and IVP-B (n=91) were submitted to micromanipulation by section, for biopsy removal. Biopsied embryos were cultured until the end of the process of sex identification and then were transferred for synchronized recipients. Embryos from the groups ET-C (n=229) and IVP-C (n=227) were transferred intact to the synchronized recipients. All the recipients were evaluated by ultrasonography 30 (ET) and 60 (ET, IVP) days after inovulation, for pregnancy and sex identification. For embryo sex identification the biopsies were submitted to PCR and agarose gel electrophoresis. In the PCR reaction 2 primers were used, one specific for Y chromosome and the other for a bovine autossomic gene. To compare pregnancy rates at 60 days between the groups and their respective controls a Chi-square(χ2) analysis was used. No differences were observed for pregnancy rates between groups, being ET-B = 206/380 (54.21%), ET-C = 128/229 (55.89%); IVP-B = 24/91 (26.37%) and IVP-C = 45/227 (19.82%). Of the confirmed pregnancies that had their biopsies (ET-B = 133 and IVP-B = 20) submitted to sex identification, 124 (93.23%) and 19 (95%) had the same sex in the PCR reaction and in the ultrasonography evaluation at 60 days. The results of the present study indicated that biopsy removal did not affect the viability of the in vivo and in vitro embryos. In addition, the methodology used for embryo sex identification is suitable to be used in embryo transfer commercial programs.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Raquel Viana (tempestade_b@hotmail.com) on 2010-03-30T14:20:06Z No. of bitstreams: 1 2009_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 533514 bytes, checksum: 9cda08d9e438cdb3a1719ae60d8ca5bb (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-18T04:34:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 533514 bytes, checksum: 9cda08d9e438cdb3a1719ae60d8ca5bb (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-18T04:34:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 533514 bytes, checksum: 9cda08d9e438cdb3a1719ae60d8ca5bb (MD5) Previous issue date: 2009 / Técnicas de preparação de sêmen são usualmente utilizadas na produção in vitro de embriões (PIV) bovinos visando melhorar a qualidade espermática após o descongelamento. Dentre estas técnicas, a centrifugação em gradiente de Percoll tem sido a mais utilizada. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito de diferentes velocidades, tempo de centrifugação e volume de Percoll nas características espermáticas, na produção e sexo de embriões bovinos. Foram descongeladas amostras de sêmen de quatro touros, que foram submetidas a três diferentes procedimentos no gradiente de Percoll : T1 – 4 mL (volume final) de Percoll 45%:90%, centrifugados por 20 minutos a 700 g; T2 – 800 μL (volume final) de Percoll 45%:90% centrifugados por 20 minutos a 700 g e T3 – 800 μL (volume final) de Percoll 45%:90% centrifugados por por 5 minutos a 5000 g. A avaliação espermática da motilidade, morfologia, integridade de acrossoma, membrana e cromatina, foi realizada antes e após a passagem pelo Percoll. Para a PIV foram utilizados 1194 ovócitos maturados in vitro, sendo a taxa de clivagem avaliada em D2 (48h) e a taxa de blastocisto avaliada no dia 7 após fecundação (D7). Os blastocistos em D7 (n=360) foram congelados para determinação do sexo. Os dados do desenvolvimento embrionário e avaliação espermática foram analisados pela ANOVA considerando o efeito de touro, tratamento e interação touro x tratamento (P<0,05). Para analisar o sexo dos embriões utilizou-se o teste 2 com freqüência esperada de 50:50 (P<0,05). A comparação entre os tratamentos e touro também verificada pelo teste 2. Todos os tratamentos com o Percoll melhoraram significativamente a proporção de espermatozóides móveis. Não houve efeito do tratamento em nenhuma característica espermática avaliada (P>0,05), entretanto, observou-se efeito de touro. A taxa de clivagem e blastocito também não foi afetada pelos tratamentos com o Percoll. Entretanto, foi observado diferenças entre touros (P<0,05). A taxa de clivagem e blastocisto foi melhor para o touro 1 (86 ± 1,6a% e 47 ± 2,6c%) seguido do touro 2 (86 ± 2,1a% e 39 ± 6,6c%) e touro 3 (65 ± 5,9b% e 17 ± 4,1d%). O touro 4 apresentou baixa produção total de blastocisto (n=5), sendo eliminado da análise. A proporção macho:fêmea foi semelhante em todos os tratamentos para os touros 2 e 3. Apenas o touro 1 no T1 apresentou uma maior porcentagem de embriões machos (61%) em relação aos embriões do sexo feminino (39%). Quando apenas os tratamentos foram considerados, independentes dos touros, não foi verificado diferença na proporção macho:fêmea entre T1 (55:45 %), T2 (45:55 %) e T3 (44:56 %). Os resultados mostraram que a utilização de diferentes velocidades, tempo de centrifugação e volume de Percoll não influenciou a taxa de blastocisto e a relação macho:fêmea. Entretanto, para o touro 1 foi observado um desvio para produção de embriões machos quando se utilizou o T1. Esses resultados sugerem a possibilidade de utilizar um menor volume de Percoll por um período de tempo mais curto, diminuindo assim o custo e o tempo para a realização da fecundação in vitro. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Techniques for sperm selection are usually used for bovine in vitro embryo production (IVP) to improve semen quality after thawing. Among these techniques Percoll gradient has been the most used. The aim of this study was to evaluate the effect of different volumes of Percoll, time and force of centrifugation on sperm quality, embryo development and sex of IVP bovine embryos. Frozen-thawed semen from four bulls were submitted to three different Percoll procedures: T1 - 4 mL (final volume) of Percoll 45%:90%, centrifuged for 20 minutes at 700 g, T2 - 800 μL (final volume) of Percoll 45%:90% centrifuged for 20 minutes at 700 g and T3 - 800 μL (final volume) of Percoll 45%:90% centrifuged for 5 minutes at 5000 g. Semen was evaluated before and after Percoll treatment for sperm total motility, morphology, integrity of acrosome, membrane and chromatin. A total of 1194 oocytes were matured, fetilized and cultured in vitro, cleavage rate was valued on D2 and blastocyst rate on D7 after in vitro insemination. The blastocysts in D7 (n=360) were frozen for posterior sex determination. Data from embryo development and sperm characteristic were analyzed by ANOVA considering the effect of bull, treatment and interaction bull x treatment (P <0.05). The ratios were compared with the expected ratio 1:1 by  2 test (P<0.05). All Percoll methods significantly improved the proportion of motile spermatozoa. No effect of treatment was detected in any of the sperm characteristic (P>0.05), however bull-related differences were observed in all parameters tested. Similarly, cleavage and blastocyst rate were not affected by Percoll procedure (P>0.05). However, there was a difference among bulls (P<0.05). Sire 4 had very low embryos production (n=5), and was eliminated from the analysis. Higher rates of cleavage and blastocyst were observed for bull 1 (86 ± 1.6 a % and 47 ± 2.6 c%) and bull 2 (86 ± 2.1a % and 39 ± 6.6c %) showed than for bull 3 (65 ± 5.9b % and 17 ± 4.1d %). The proportion of male:female embryos was similar in all treatments for bulls 2 and 3. Only bull 1 in the T1 presented a greater percentage of male (61%) than female embryos (39%). When only treatments were considered, independent of bulls, no difference was found in proportion male:female (%) among T1 (55:45), T2 (45:55) and T3 (44:56). The results showed that the use of different speed, time of centrifuge and volume of Percoll gradient did not influence the rate of blastocyst and the male:female ratio. However, for bull 1 it was observed a higher production of male embryos when T1 was used. These results suggest the possibility of using a lower volume of Percoll for a shorter period of time, thus reducing the cost and time to perform the in vitro fertilization.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Ecologia, 2011. / Submitted by Rafael Barcelos Santos (rafabarcelosdf@hotmail.com) on 2011-07-05T20:32:51Z No. of bitstreams: 1 2011_RaphaelIgordaSilvaCorreaDias.pdf: 1796097 bytes, checksum: ffaf4c060d8ace1e176586bb40508a47 (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-05T22:02:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_RaphaelIgordaSilvaCorreaDias.pdf: 1796097 bytes, checksum: ffaf4c060d8ace1e176586bb40508a47 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-05T22:02:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_RaphaelIgordaSilvaCorreaDias.pdf: 1796097 bytes, checksum: ffaf4c060d8ace1e176586bb40508a47 (MD5) / Reprodução cooperativa é observada em aproximadamente 9% das aves e é definida como sendo um sistema em que mais de dois indivíduos auxiliam na criação dos filhotes em uma única tentativa reprodutiva. Esses sistemas são geralmente compostos por pares socialmente monogâmicos que são auxiliados por filhotes produzidos em estações anteriores. Nesse estudo, o sistema social e de acasalamento do pica-pau-do-campo (Colaptes campestris campestris) foi avaliado, utilizando-se técnicas tradicionais de marcação e observação, assim como, análises genéticas e modelagem estatística. O estudo revelou que o pica-pau-do-campo é uma espécie cooperativa facultativa, que apresenta um sistema reprodutivo variável, incluindo casais monogâmicos e grupos com poliginia simultânea. Adicionalmente, foi detectada a ocorrência de estratégias reprodutivas alternativas como são os casos da reprodução comunitária (i.e. mais de uma fêmea pondo ovos no mesmo ninho) em alguns grupos poligínicos e do parasitismo de ninho intra-específico. Algumas evidências sugerem que restrições ecológicas, especialmente em termos de dispersão, juntamente com traços de história de vida, devem ter favorecido a evolução da reprodução cooperativa na espécie, embora a seleção de parentesco aparente ter um papel importante no sistema. O estudo revelou também que a produtividade na espécie é diretamente afetada pela presença de auxiliares no grupo, mas que fatores climáticos podem ser determinantes para a qualidade dos filhotes produzidos. Em relação à influência dos auxiliares no investimento parental, os resultados sugerem que a espécie apresenta tanto uma redução compensatória quanto um efeito aditivo. Entretanto, foi observado que os auxiliares apresentam um investimento superior em filhotes mais aparentados com os mesmos. Esse estudo revelou que o pica-pau-do-campo apresenta componentes comportamentais de alta complexidade que faz dele um modelo para futuros estudos testando diferentes hipóteses relacionadas com a evolução da reprodução cooperativa. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cooperative breeding is found in approximately 9% of bird species and is defined as a system wherein more than two individuals help to rear the offspring during a single breeding attempt. These systems are generally composed by socially monogamous pairs assisted by offspring produced in previous years. In this study, the social and mating systems of the campo flicker (Colaptes campestris campestris) were evaluated, using traditional techniques of banding and observation, as well as through genetic analysis and statistical modeling. The study revealed that the campo flicker is a facultative cooperative breeder with a variable mating system that includes monogamous pairs and groups with simultaneous polygyny. Additionally, the occurrence of alternative mating strategies was detected and included cases of joint-nesting (i.e. more than one female laying eggs in the same nest) in some polygynous groups and intra-specific nest parasitism. Some evidence suggests that ecological constraints, especially in terms of dispersal, in addition to life-history traits, must have favored the evolution of cooperative breeding in the species, although kin selected benefits must have an important role in the system. Results showed that the productivity in the species is directly affected by the presence of auxiliaries in the group, but that climatic factors may be crucial in determining the quality of fledglings. Relative to the influence of auxiliaries upon parental investment, results suggest that the species presents both a compensatory reduction as well as an additive effect. However, auxiliaries invested more in offspring to which they were genetically related. This study revealed that the campo flicker presents behavioral components of high complexity, which suggests that this species is a good model for future studies testing different hypotheses related to the evolution of cooperative breeding.

Apesar dos avanços nos procedimentos de maturação, fecundação e cultivo in vitro a porcentagem de embriões produzidos capazes de se desenvolver até o estágio de blastocisto ainda é reduzida. Segundo Gilchrist et al. (2010) um dos principais fatores que afeta esta taxa de desenvolvimento embrionário é a incompetência do oócito em realizar a maturação. Com o objetivo de aumentar esta eficiência, têm-se estudado a interação entre fatores secretados pelos oócitos e a maturação oocitária. O objetivo deste experimento foi determinar as taxas de clivagem e de desenvolvimento embrionário até blastocisto, a partir de dois procedimentos de adição às gotas de MIV de oócitos desnudos (ODs). Os complexos Cummuli oócitos (CCOs) foram obtidos mediante punção de folículos com diâmetro entre 2 e 8 mm. Os CCOs que apresentaram cummulus compacto e citoplasma homogêneo foram selecionados para maturação e desnudamento. Os CCOs foram maturados em gotas de 50μL de meio de maturação (Meio TCM 199 modificado) sob óleo mineral e incubados a 38,5 oC em estufa com atmosfera de 5% de CO2 em ar e umidade relativa saturada. Aqueles selecionados para serem desnudos, permaneceram em TCM Holding [Meio 199 modificado]. Os oócitos foram desnudos com o auxilio de uma pipeta de vidro estirada em fogo. Os CCOs permaneceram 9 horas em meio de maturação quando foram colocados em cocultivo, respeitando-se a densidade de 0,5 ODs/μL. Parte dos CCOs foram postos nas gotas de maturação onde se encontravam os ODs (Grupo 1) e outra parte recebeu os ODs em suas gotas de maturação (Grupo 2). Os grupos Controle 50μL e Controle 100μL permaneceram em meio de maturação. Todos os grupos, experimentais e controles, permaneceram em maturação por 24 horas. A fecundação com sêmen reaquecido foi realizada durante 20 horas nas mesmas condições atmosféricas da maturação. As estruturas foram cultivadas em SOFm em gotas de 80μL, sob óleo mineral e foram mantidas a 38,3ºC em estufa de cultivo com atmosfera de 5% O2, 5% CO2 , 90% N2 e umidade relativa saturada. As taxas de clivagem foram avaliadas em D2 enquanto as taxas de blastocisto foram avaliadas em D7. Foram realizadas seis repetições. Os resultados foram analisados aplicando-se o teste do Qui-quadrado, para P<0,05. As taxas de clivagem não diferiram entre os grupos (C 100μL: 68,53%; C 50μL: 69,56%; G 1: 66,19%; G 2: 68,05%). Porém comparação das taxas de blastocisto obtidas entre os grupos houve diferença significativa. O grupo 2 mostrou-se superior quando comparado ao grupo controle de 50μL (23,38% e 13,04%, respectivamente).Os demais grupos não diferiram entre si (C 100μL: 14,60%; G1: 18,30%). Os resultados nos permitem concluir que a adição de ODs que secretaram FSOs ao meio de maturação não alterou as taxas de clivagem, mas promoveu maiores taxas de desenvolvimento embrionário ao estágio de blastocisto quando os ODs foram adicionados às gotas que já continham os CCOs. / In vitro maturation of oocytes, fertilization and development of blastocysts has been achieved in several species, however the rate of blastocyst development is still limited. According Gilchrist et al. (2010) this efficiency is limited by the oocyte competence. To improve these results, some research groups have studied the interaction among factors secreted by oocytes and oocyte maturation. The aim of our experiments was to determine the cleavage and blastocyst rates, from two procedures of addition of denuded oocytes (DOs) to IVM droplets medium. The Cumulli-oocyte complexes (COC) were recovered by aspiration of 2 to 8mm follicles using a 18 G needle. Oocytes with a compact Cumulus cells (CC) and homogeneous cytoplasm were selected for maturation and denudation. The COC were matured in 50 μL drops in TCM199 medium modified under mineral oil at 38.5oC in an humidified atmosphere of 5% CO2 in air. Denuded oocytes were generated by removing CCs from COCs by repeated passage of the oocytes through a fire-pulled glass pipette. The COCs remained 9 hours in IVM when they were placed in co-culture, respecting the density of 0.5 DOs/μL. COCs were randomly allocated into 2 treatment groups during IVM: group 1, COCs were placed into maturation medium droplets in which there were the DOs; group 2, DOs received the COCs into their maturation medium droplet. All groups, experimental and control, remained into IVM medium for 24 hours. Fertilization was performed with frozen-thawed semen and the oocytes were incubated with sperm for 20 hours into the same atmospheric conditions of IVM. The presumptive zigots were in vitro cultured (IVC) in SOFm in an humidified atmosphere 5% O2, 5% CO2 e 90% N2. Cleavage rates were evaluated in D2 while the blastocyst rates were evaluated in D7 after insemination. Six replicates were realized.The results were analyzed applying the chi-square, for P ≤ 0.05. The cleavage rates did not differed among the groups C 100μL: 68.53%; C 50μL: 69.56%; G 1: 66.19%; G 2: 68.05%). However, there was a significant difference on blastocyst rate. Group 2 was better than control group 50μL (23.38% e 13.04%, respectively). The other groups did not differ from each other (C 100μL: 14.60%; G1: 18.30%). In conclusion, the addition of FSOs to maturation medium did not modified the cleavage rates, but promotes more efficiently embryo development rates to the blastocyst stage when DOs are added to the drops that already contained the COCs.

Resumo não disponível

O experimento avaliou o uso do meio TCM-199 suplementado com: SVE, SEE e SFB (meio indefinido); BSA (meio semi-definido) e PVA (meio definido); na presença ou ausência de hormônios (FSH e hCG) na maturação in vitro de oócitos bovinos nas condições do Laboratório de Embriologia e Biotécnicas de Reprodução da UFRGS. Complexos cumuli-oophorus (CCOs), em número total de 1458, foram aleatoriamente distribuídos em doze tratamentos, maturados por 24 h em atmosfera de 5% CO2, em ar e 100% umidade relativa em estufa a 39°C. A fecundação nos doze tratamentos foi realizada mediante exposição dos CCOs maturados aos espermatozóides (1x106/mL), previamente capacitados, durante 20 h. O cultivo foi realizado em fluído sintético de oviduto modificado (SOFaa) acrescido de 10% SVE a 39°C, 100% de umidade relativa do ar e 5% CO2, 5% O2 e 90% N2. Na presença de hormônios os meios indefinidos (SVE: 63,6%, 70/110; SEE: 53,4%, 70/131 e SFB: 56,0%, 75/134) apresentaram maior eficiência em proporcionar suporte à primeira divisão embrionária, em comparação ao meio definido (PVP: 50,6%, 45/89). Os CCOs maturados em meio indefinido suplementado com SVE e hormônios apresentaram maior competência em fecundar e suportar o desenvolvimento embrionário até o estádio de blastocisto após sete dias de cultivo (27,3%, 30/110).