Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Nutrição, Programa de Pós-Graduação em Nutrição Humana, 2013. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2013-11-08T13:59:08Z No. of bitstreams: 1 2013_AzedehMehdad_Parcial.pdf: 27955 bytes, checksum: 2cf96db59023ea965c566deee017ce8e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-11T12:51:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_AzedehMehdad_Parcial.pdf: 27955 bytes, checksum: 2cf96db59023ea965c566deee017ce8e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-11T12:51:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_AzedehMehdad_Parcial.pdf: 27955 bytes, checksum: 2cf96db59023ea965c566deee017ce8e (MD5) / Evidências indicam que a sobrecarga de ferro, hiperglicemia e resistência à insulina são biologicamente interligadas. O excesso de ferro na dieta é considerado um fator de risco para diabetes devido à ação oxidante deste íon. Este estudo foi desenhado para verificar o impacto da restrição e suplementação dietética de ferro na captação de glicose ativada pela insulina em ratos adultos e aparentemente saudáveis. Para tanto, 20 ratos foram distribuídos em três grupos e alimentados com a dieta controle AIN-M 93 contendo ferro em três concentrações: 35 mg/Kg (dieta controle, adequada em ferro), 10 mg/kg (dieta restrita em ferro) ou 350 mg/kg de ferro (dieta suplementada com ferro). Após 12 semanas de dieta, os ratos foram sacrificados, o sangue foi coletado para análises hematimétricas, o fígado e o músculo esquelético da perna foram coletados para determinação das concentrações de glicogênio, ferro, estado oxidativo, níveis de transcritos do receptor de insulina (Insr), do transportador de glicose 4 (Glut4) e do supressor de tumor 53 (Tp53). Os ratos alimentados com a dieta restrita em ferro apresentaram valor médio de glicemia em jejum com tendência à redução, apresentaram redução significativa na, concentração de glicogênio hepático com concomitante aumento no músculo esquelético, em relação ao grupo controle. Além disso, a restrição de ferro, resultou em um aumento de duas vezes na expressão de transcrito de Insr e um aumento de 4 vezes na expressão de transcritos de Glut-4 no músculo esquelético. Tanto a restrição de ferro quanto a suplementação de ferro induziram uma diminuição na expressão de transcrito de p53. Embora a restrição de ferro não afetasse o estado corporal de ferro dos ratos, observouse um aumento na atividade de NADPH oxidase hepática e também, um aumento nos níveis de oxidação de proteínas no músculo. A suplementação crônica com ferro aumentou a concentração de ferro sérico e hepático e resultou em níveis elevados de danos oxidativos no fígado e no músculo esquelético. A suplementação de ferro não afetou a captação de glicose ou o conteúdo de glicogênio. Assim, a restrição dietética de ferro pode melhorar a síntese de glicogênio muscular e a captação de glicose ativada pela insulina através de downregulation de p53. No entanto, o papel central de ferro na função biológica não deve ser subestimado. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Mounting evidence suggests that high body iron stores, hyperglycaemia and insulin resistance are biologically intertwined. The excess dietary iron is thought to be a risk factor of diabetes due to the prooxidant feature of iron. This investigation was designed to test the impact of dietary iron restriction and supplementation on functional outcome in adult, healthy rats. Twenty rats were fed diets containing either 10 mg / Kg (iron-restricted diet) or 350 mg /Kg (iron-supplemented diet) of elemental iron for 78 days compared with the control rats that were fed AIN-M 93 diet (35mg/kg). Then, rats were euthanized and blood samples was collected to hematological analysis, and liver and skeletal muscles were dissected out, for iron , glycogen and stress markers determination, and to evaluate the transcription of Insr, Glut-4 and Tp53. Fasting blood glucose values trended toward a decrease through the iron-restricted diet, moreover, hepatic glycogen content decreased with concomitant increases in skeletal muscle. In addition, dietary iron restriction resulted in a twofold increase in mRNA expression of Insr and fourfold increase in Glut4 expression in skeletal muscle. The p53 mRNA levels in iron-restricted group as well as in iron-supplemented group were decreased. Although the dietary iron restriction did not affect body iron status, it caused hepatic low oxidative damages; however, high liver NADPH oxidase activity and increased levels of protein oxidation in muscle were observed. Chronic feeding of high iron diet increases serum and hepatic iron and resulted in elevated levels of stress markers in liver and skeletal muscle. Dietary iron supplementation did not affect either glucose uptake or glycogen content. Thus, dietary iron deprivation may improve insulin-stimulated muscle glycogen synthesis and glucose uptake through the down-regulation of p53; nevertheless, the pivotal role of iron in the biological function should not be underestimated.

Resumo não disponível

A resistência insulínica (RI) é um importante componente da síndrome metabólica e do diabetes melito (DM). Apesar de importante nos pacientes diabéticos, a sua relevância como preditor de doença arterial coronariana (DAC) em pacientes normoglicêmicos ainda não é conhecida. Neste estudo avaliamos a resistência insulínica pelo teste de HOMA-IR e por testes baseados no Teste Oral de Tolerância à Glicose (TOTG) como preditores de doença coronariana significativa em pacientes não obesos, sem diabetes melito e com glicemia perto do normal encaminhados para coronariografia. Com essa finalidade, realizamos um estudo de casos e controles com 55 pacientes não diabéticos, normoglicêmicos encaminhados para coronariografia por suspeita clínica de doença arterial coronariana. DAC foi classificada pela presença ou não de estenose de 50% ou mais em algum vaso epicárdico. O TOTG foi realizado com dosagem de glicemia e insulinemia nos tempos 0, 30, 60, 90 e 120 minutos após 75g de glicose com intuito de calcular os testes de resistência insulínica (HOMA-IR e os índices de Stumvoll-ISI, Matsuda e OGIS) Resultados: pacientes com DAC tiveram uma prevalência significativamente maior de HOMA-IR acima do percentil 75 (valor>4.21) quando comparados aos pacientes sem DAC (PR:1.78; 95%CI:1.079-2.95; p=0.024). Os índices de sensibilidade insulínica não obtiveram relação significativa com a presença da DAC. Em conclusão, a resistência insulínica avaliada pelo HOMA-IR é um preditor significativo de DAC e deveria ser avaliado em estudos longitudinais como potencial estratificador de risco coronariano.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3119_1.pdf: 2321356 bytes, checksum: 49c75aa223017a3b43c4f8a9e2b19c91 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / A Resistência à Insulina (RI), além de provocar alterações no metabolismo dos carboidratos, pode promover anormalidades no metabolismo lipídico, que apresentam uma forte relação com o desenvolvimento de doenças cardiovasculares (DCVs). Esses distúrbios lipídicos ainda não estão bem definidos, podendo elevar o risco de eventos coronarianos em uma determinada população. As razões triglicerídio (TG)/HDL-colesterol (HDL-c), não-HDL-colesterol (não-HDL-c)/HDL-c, Colesterol Total (CT)/HDL-c (Castelli I) e LDL-colesterol (LDL-c)/HDL-c (Castelli II) têm sido utilizadas como instrumentos para acessar o risco de surgimento de DCVs. O diagnóstico de RI é de alta complexidade para ser avaliado e, na região Nordeste do Brasil, atualmente não há levantamento epidemiológico nem indicações de sua contribuição para o risco de DCVs. Os objetivos deste trabalho consistem em pesquisar a prevalência de RI utilizando o método QUICKI (Índice para Checagem da Sensibilidade à Insulina), estabelecer o ponto de corte de QUICKI adequado à população do Nordeste do Brasil, avaliar a influência de RI sobre os índices lipídicos e sua relação com o risco de evento coronariano, acessado pelo clássico Escore de Risco de Framingham, além da relação com distúrbios da Síndrome Metabólica X. Foram coletadas amostras sanguíneas de 7128 voluntários (2124 homens e 5004 mulheres) normoglicêmicos, bem como foram aferidos seus níveis pressóricos, quantificados os parâmetros antropométricos e bioquímicos, tais como: Glicemia (G) e concentrações séricas de CT, HDL-c e TG, por metodologia enzimática; LDL-c e VLDLcolesterol (VLDL-c), através da equação de Friedewald; insulina plasmática (I), através de ensaio imunoenzimático de micropartículas (MEIA). O QUICKI foi construído para cada indivíduo e o ponto de corte adotado foi o do 25° percentil. Testes de &#61539;2, t de student, ANOVA, regressão logística, correlação de Pearson e testes z de comparação foram realizados (p < 0,05). Os dados foram apresentados como média ± erro padrão da média. Os pontos de corte encontrados foram 0,349 e 0,343 para homens e mulheres, respectivamente. A prevalência de RI foi 31,3% na população total, não havendo diferença significativa entre os sexos. Indivíduos que tiveram RI apresentaram níveis séricos de CT, LDL-c, VLDL-c, não-HDL-c e TG significativamente (p<0,0001) maiores que os indivíduos sem RI. Similarmente, foi observado aumento significativo (p<0,0001) nos índices de CT/HDL-c, LDL-c/HDL-c, TG/HDL-c e não-HDL-c/HDL-c. Contudo, observou-se redução significativa (p<0,0001) nos níveis de HDL-c nos indivíduos resistentes à insulina. Correlações negativas (p<0,0001) foram encontradas entre QUICKI e os índices lipídicos. A comparação entre os coeficientes de correlação demonstrou que VLDL-c (r = -0,279; p<0,0001), TG (r = -0,255; p<0,0001) e TG/HDL-c (r = -0,241; p<0,0001) foram os mais fortemente correlacionados com RI. Avaliação de regressão logística demonstrou uma razão de chance de 1,7 (p<0,0001) para alto risco de morte por evento coronariano em 10 anos em indivíduos com RI em comparação a insulino-sensíveis. Adicionalmente, foi observado que a razão de chance para a presença associada de quatro distúrbios metabólicos (hipertensão arterial sistêmica, obesidade, hipertrigliceridemia e baixos níveis de HDL-c) foi de 11,7 (p<0,0001). Estes resultados sugerem que um terço da população do Nordeste do Brasil apresenta RI e alto risco cardiovascular representado pela correlação de RI com anormalidades lipídicas

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-14T17:39:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO_Versão Final com Ficha CCS.pdf: 4315685 bytes, checksum: 2ed39004011a2dc695f7b76af5a78a9f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T17:39:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO_Versão Final com Ficha CCS.pdf: 4315685 bytes, checksum: 2ed39004011a2dc695f7b76af5a78a9f (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / CAPES / Com o objetivo de identificar a prevalência de resistência à insulina (RI) em adolescentes e sua associação com variáveis cardiometabólicas e com o consumo alimentar, foi conduzido um estudo de delineamento transversal de base escolar com 1081 adolescentes de 12 a 17 anos provenientes de amostragem complexa do ―Estudo de Riscos Cardiovasculares em Adolescentes‖ (ERICA). Na presente casuística foi avaliada uma subamostra da população total de adolescentes incluídos no ERICA, sendo englobados todos os estudantes elegíveis que estavam matriculados no turno da manhã das escolas analisadas na cidade do Recife, capital do Estado de Pernambuco. A coleta dos dados foi possível a partir do uso de questionários englobando perguntas referentes a variáveis demográficas, socioeconômicas e comportamentais, além de parâmetros antropométricos, bioquímicos e do consumo alimentar, os quais foram obtidos por profissionais devidamente capacitados. A presença da RI foi diagnosticada com uso do Homeostatic Model Assessment for Insulin Resistance (HOMA-IR), sendo confirmada quando HOMA-IR > Percentil 75 da distribuição. Para ajuste do delineamento amostral complexo inerente ao ERICA, todas as análises estatísticas foram realizadas no STATA versão 14.0, a partir do módulo “Survey”. Partindo-se de um modelo hierárquico de determinação da RI pré-definido, realizou-se a análise bivariada para verificar a associação entre a RI e as variáveis independentes por meio da regressão de Poisson simples. Nesta ocasião, as associações que apresentaram p<0,20 foram ajustadas com modelos de análise multivariada pela regressão de Poisson com ajuste robusto da variância, sendo consideradas estatisticamente significativas as variáveis com p≤0,05. A amostra final foi representativa para 99.221 adolescentes de 12 a 17 anos, matriculados no turno da manhã de escolas públicas e privadas do município estudado. A idade mediana foi de 14 anos (Intervalo interquartílico=13-16), havendo 50,4% de indivíduos do sexo masculino e 67,6% em estágio púbere da maturação sexual. A RI foi evidenciada em 25,3% dos adolescentes. Após ajustes estatísticos, as variáveis que se associaram significativamente com o índice HOMA-IR no modelo final foram: faixa etária, IMC por idade, triglicerídeos, HDL-Colesterol e o menor consumo alimentar de gordura saturada. No presente estudo, observou-se uma prevalência importante de RI na população analisada e o índice HOMA-IR se associou significativamente com variáveis cardiometabólicas e do consumo alimentar. A condução de pesquisas com adolescentes, envolvendo a temática abordada, permite a implementação de estratégias que incentivam a promoção da saúde desse grupo populacional pouco estudado e a identificação dos fatores de risco passíveis de modificação mais associados com a RI. / In order to identify the prevalence of insulin resistance (IR) in adolescents and its association with cardiometabolic variables and dietary intake, a cross-sectional school-based study of was carried-out with 1081 adolescents aged 12 to 17 years from the complex sample of the "Study of Cardiovascular Risk in Adolescents" (ERICA). It was evaluated a subsample of the total population of adolescents included in ERICA, which encompassed all eligible students who were enrolled in the morning shift of the schools analyzed in Recife, capital of Pernambuco. Data collection was possible through the use of questionnaires covering questions regarding demographic, socioeconomic and behavioral variables, and anthropometric parameters, biochemical and food intake, which were obtained by properly trained professionals. The presence of IR was diagnosed with use of the Homeostatic Model Assessment Insulin Resistance (HOMA-IR), and confirmed when HOMA-IR> 75th percentile of the distribution. For adjustment of the sampling design inherent to ERICA, all statistical analyzes were performed using STATA version 14.0, with the "Survey" module. Starting from a predefined hierarchical model for determining IR, bivariate analysis was used to assess the association between IR and the independent variables by Poisson regression. On this occasion, the associations with p <0.20 were adjusted with multivariate analysis models using Poisson regression with robust variance adjustment, which considered statistically significant variables with p≤0.05. The final sample was representative for 99,221 adolescents aged from 12 to 17 years, enrolled in the morning shift of public and private schools in the studied city. The median age was 14 years (interquartile range = 13-16), with 50.4% of males and 67.6% of individuals on pubertal stage of sexual maturation. The IR was found in 25.3% of adolescents. After statistical adjustments, the variables that were significantly associated with HOMA-IR index in the final model were age, BMI for age, triglycerides, HDL-cholesterol and saturated fat food intake. In the present study, there was an important prevalence of IR in the analyzed population and HOMA-IR index was significantly associated with cardiometabolic variables and dietary intake. The conduct of researches with adolescents using this selected theme, allows the implementation of strategies that encourage health promotion in this population group, which is less studied, and the identification of risk factors associated with the IR.

Orientadores: Mario Jose Abdalla Saad, Licio Augusto Velloso / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T23:40:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_ElianaPereirade_D.pdf: 1282393 bytes, checksum: 3f0af814a8ad75f3abbde4e9d917c3c1 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O substrato-1 do receptor de insulina (IRS-1) desempenha função importante na conexão entre os receptores de insulina (IR) e do fator de crescimento insulina-like-1 (IGF-1R), e as moléculas que participam das etapas subseqüentes da transdução dos sinais gerados pelos respectivos ligantes. No presente estudo, utilizou-se um oligonucleotídeo antisense para o IRS-1 (AS IRS-1), com a finalidade de inibir a expressão dessa proteína in vivo e avaliar as conseqüências desse bloqueio em diferentes tecidos de ratos Wistar. O tratamento com AS IRS-1 durante três dias reduziu a expressão desta proteína em cerca de 80%, 75% e 65% (p<0,05) respectivamente em fígado, músculo esquelético e tecido adiposo, sendo tal efeito acompanhado por uma redução de 40% (p<0,05) na constante de decaimento de glicose durante o teste de tolerância à insulina (ITT), por uma redução de 78% (p<0,05) no consumo de glicose durante o clamp euglicêmico-hiperinsulinêmico e por um aumento de 90% (p<0,05) nos níveis basais de insulina plasmática. Os efeitos metabólicos produzidos pelo AS IRS-1 foram acompanhados pela redução significativa da fosforilação induzida por insulina da Akt [Ser473] em fígado (85%, p<0,05), músculo esquelético (40% p<0,05) e tecido adiposo (85%, p<0,05), e uma redução significativa da fosforilação em tirosina da ERK induzida por insulina em fígado (20%, p<0,05) e músculo esquelético (30%, p<0,05). Entretanto, o tratamento com AS IRS-1 promoveu aumento (60%, p<0,05) da fosforilação da ERK em tirosina induzida por insulina em tecido adiposo. Por fim, em ratos tratados com AS IRS-1 por oito dias, observou-se um aumento de 100% (p<0,05) da massa relativa de tecido adiposo epididimal e um aumento de 120% (p<0,05) da expressão do receptor nuclear PPAR?. Portanto, a inibição da expressão de IRS-1 em ratos leva resistência à insulina acompanhada pela ativação de uma via de sinalização relacionada ao crescimento celular, exclusivamente em tecido adiposo branco / Abstract: Insulin receptor substrate-1 (IRS-1) has an important role as an early intermediary between the insulin and IGF-1 receptors and downstream molecules that participate in the insulin and IGF-1 signal transduction. We employed an antisense oligonucleotide (IRS-1 AS) to inhibit whole-body expression of IRS-1 in vivo and evaluate the consequences of short-term inhibition of IRS-1 in Wistar rats. Four days treatment with IRS-1 AS reduced the expression of IRS-1 by 80, 75 and 65% (P<0.05) in liver, skeletal muscle, and adipose tissue, respectively. This was accompanied by a 40% (P<0.05) reduction in the constant of glucose decay during an insulin tolerance test, a 78% (P<0.05) reduction in glucose consumption during a hyperinsulinemic-euglicemic clamp, and a 90% (P<0.05) increase in basal plasma insulin levels. The metabolic effects produced by IRS-1AS were accompanied by a significant reduction in insulin-induced [Ser473] Akt phosphorylation in liver (85%, P<0.05), skeletal muscle (40%, P<0.05), and adipose tissue (85%, P<0.05) and a significant reduction in insulin-induced tyrosine phosphorylation of ERK in liver (20%, P<0.05) and skeletal muscle (30%, P<0.05). However, insulin-induced tyrosine phosphorylation of ERK was significantly increased (60%, P<0.05) in adipose tissue of IRS-1 AS treated rats. Moreover, in rats treated with IRS-1 AS for 8 days, a 100% increase (P<0.05) in relative epididymal fat weight and a 120% (P<0.05) increase in nuclear expresssion of peroxisome proliferator-activated receptor-? were observed. Thus, acute inhibition of IRS-1 expression in rats leads to insulin resistance accompanied by activation of a gowth-related pathway exclusively in white adipose tissue / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientadores : Mario Jose Abdalla Saad, Kleber Gomes Franchini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T02:03:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ueno_Mirian_D.pdf: 20363732 bytes, checksum: 328908d192d887aa94bc1cd29fde51d2 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A resistência à insulina, definida como uma resposta biológica subnormal a uma determinada concentração de insulina, é componente essencial da fisiopatologia ou etiopatogenia de importantes doenças como diabetes tipo 2, obesidade e hipertensão arterial. Em humanos e em modelos animais, a hiperinsulinemia produzida por "clamp" normoglicêmico por 3 a 5 dias é capaz de induzir resistência à insulina A insulina, ao se ligar à subunidade a de seu receptor heterotetramérico, dá inicio a uma série de ações imediatas e tardias, metabólicas e promotoras de crescimento. Tais eventos ocorrem através da estimulação da subunidade f3transmembrana do receptor, que se autofosforila e ativa a fosforilação de substratos endógenos intracelulares, conhecidos como substratos do receptor de insulina ou IRSs. Os principais substratos do receptor de insulina são o IRS-1 e IRS-2, que quando fosforilados em tirosina se ligam e ativam proteínas com porção SH2, como a PI 3-quinase. A ativação destas proteínas desencadeia a ativação de duas serina-quinases importantes que são a AKT e as ERKs (112), que são essenciais, respectivamente, para os efeitos metabólicos e de controle gênico do hormônio. Neste estudo investigamoso nível protéico e grau de fosforilação em tirosina do receptor de insulina, dos substratos 1 e 2 do receptor (IRS-1 e IRS-2), a associação deles com a enzima PI 3-quinase, o grau de fosforilação em serinaftreonina da AKT e a fosforilação das ERKs (112)em tecido hepático, muscular, cardíaco, adiposo, e em ilhotas de Langerhans isoladas de ratos submetidos ao clamp hiperinsulinêmico normoglicêmico por cinco dias (Ri5). A infusão de insulina por cinco dias induziu aumento dos níveis séricos de insulina de jejum e reduziu em cerca de 40% a utilização de glicose mediada pela insulina. No tecido hepático, a hiperinsulinemia crônica induziu, após estímulo agudo com insulina, redução do grau de fosforilação do receptor de insulina, do IRS-2, da associação deste substrato com a PI 3-quinase e da fosforilação da AKT. Não observamos diferença nos níveis protéicos do IR e de seus substatos (1 e 2), da fosforilação do IRS-1 e sua associação com a PI 3-quinase, e da fosforilação das ERKs (112), em ratos Ri5 comparado aos controles. Quando estudamos o tecido muscular, após estímulo agudo com insulina, observamos uma diminuição significativa no grau de fosforilação do receptor de insulina, do IRS-l, na associação deste substrato com a PI 3-quinase e na fosforilação da AKT em ratos Hi5, em relação aos controles. Entretanto, a hiperinsulinemia crônica não alterou os níveis protéicos do IR, IRS-I, IRS-2, a fosforilação do IRS-2, a associação IRS-2/PI 3-quinase e a fosforilação das ERKs. o tecido cardíaco de ratos Hi5 apresentou resultados similares ao músculo esquelético, com redução do nível protéico e fosforilação do IRS-I, da associação deste substrato com a PI 3-quinase e da fosforilação da AKT, após estímulo agudo com insulina. Não houve diferença no nível protéico e grau de fosforilação do receptor de insulina e do IRS-2, na associação IRS-2/PI 3-quinase, e na fosforilação das ERKs, entre os grupos controle e Ri5. A hiperinsulinemiacrônica por cinco dias não alterou o nível protéico e grau de fosforilação do receptor de insulina no tecido adiposo, comparado aos controles, mas induziu aumento do nível protéico, grau de fosforilação e associação com a PI 3-quinase dos substratos 1 e 2 do receptor de insulina. No estudo da AKT, observamos aumento da fosforilação no estado basal dos ratos do grupo Hi5. Também não foi observada alteração do grau de fosforilação das ERKs. As ilhotas de Langerhans isoladas de ratos Ri5 apresentaram, como no tecido adiposo, aumento do nível protéico, grau de fosforilação e associação com a PI 3-quinase dos IRS-l e -2, sem alterar o nível protéico e grau de fosforilação do receptor de insulina e das ERKs. Em resumo, os resultados do nosso estudo demonstraram que a infusão crônica de insulina por 5 dias induziu resistência a esse hormônio, com diminuição de transmissão do sinal de insulina em fígado, músculo e coração, e incremento dessas vias em tecido adiposo e ilhotas. No fígado, a menor fosforilação/ativação da AKT foi conseqüente à menor fosforilação do IRS-2, e em músculo esquelético e cardíaco à menor fosforilação do IRS-l. Em tecido adiposo e ilhotas, os dois substratos do receptor de insulina, IRS-l e IRS- 2 aumentaram seus níveis e grau de fosforilação. A hiperinsulinemia crônica por 5 dias modulou especificamente os efeitos metabólicos do hormônio, através da AKT, sendo que a via mitogênica, através das ERKs (112)não sofreu regulação em nenhum tecido estudado dos animaisRiS. A regulação tecido-específica das vias de transmissão do sinal de insulina em ratos que receberam infusão desse hormônio por 5 dias, contribui para explicar os mecanismos moleculares de resistência à insulina nestes animais, e sugere também modelos de regulação que podem estar presentes na instalação de obesidade, hiperinsulinemia e resistência à insulina / Abstract: Insulin resistance, defined as subnormal response to a given concentration of insulin, is an important component in the pathophysiology of diseases with high prevalence in the population as obesity, diabetes mellitus type 2 and hypertension. The chronic euglycemic hyperinsulinemiafor as 3-5 days can induce insulinresistance. Insulin initiates its growth and metabolic promoting effects by binding to its receptor at the plasma membrane, which has tyrosine-kinase activity, and is able to autophosphorylates and phosphorylates cytoplasmatic proteins called insulin receptor substrates (IRSs). The main substrates ofinsulin receptor are IRS-l and IRS-2, which when phosphorylated in tyrosine bind and activate several proteins, including phosphatidylinositol (PI) 3-kinase. These initial steps lead to the activation of two serineltreonina kinases - AKT and the ERK family(1/2) ofMAPK. In this study we investigated the levels and phosphorylation of the insulin receptor, IRS-l and IRS-2, their association with PI 3-quinase, and the phosphorylation of AKT and ERKs (1/2) in liver, muscle, heart, adipose tissue and in isolated pancreatic islets ofrats with chronic euglycemichyperinsulinemia for 5 days (Ri5). The 5 days of euglycemic hyperinsulinemia increased the fasting plasma insulin concentration and decreased the whole-body insulin-mediated glucose disposal. Rowever, the insulin secretion in response to glucose in isolated islets was increased in hiperinsulinemicrats compared to controls. In liver of Ri5 rats there was a decrease of insulin-stimulated receptor autophosphorylation, without change in the insulin receptor protein levels. The chronic hyperinsulinemia did not change the protein leveI, the phosphorylation status of IRS-l and its association with PI 3-kinase, although there was a decrease in the phosphorylation of IRS-2, its association with PI 3-kinase and the phosphorylation of AKT in this tissue. The IRS-2 protein leveI and the phosphorylation of ERKs (1/2) were similar in Ri5 and control rats. Chronic insulin infusion for 5 days did not significantly change the levei of IR, IRS-l and IRS-2 protein in musc1e.Afier stimulation with insulin, phosphorylation of the insulin receptor, IRS-l, the association IRS-l/PI 3-kinase and the phosphorylation AKT were reduced in Ri5 rats compared to the controls. Rowever, there was no change in the insulin-stimulated IRS-2 phosphorylation, IRS-2/PI 3-kinase association and phosphorylation ofERKs (1/2). The protein leveI and the insulin-stimulated autophosphorylation of the insulin receptor were similar in the heart in both the Ri5 and control rats. Following stimulation with insulin, the chronic hyperinsulinemia induced a decrease in the IRS-l protein leveI, and as in muscle, also decreased the IRS-l phosphorylation, the IRS-l/PI 3-kinase association and phosphorylation of AKT, without changing the leveI, the phosphorylation of IRS-2, its association with PI 3-kinase, and the phosphorylation of ERKs (112), compared to the controls. In the adipose tissue, the chronic hyperinsulinemia did not change the protein leveI and the phosphorylation status of insulin receptor, before and afier stimulation with insulin. In contrast, there was an increase in the IRSs protein levels, phospholylation and association with PI 3-kinase before and afier stimulation with insulin, in the Ri5 rats compared to the controls. Basal AKT phosphorylation was higher in Ri5 rats compared to control group. There was no change in ERKs (112)phosphorylation in the adipose tissue of Ri5 rats compared to the controls. Similarly, no significant change occurred in the protein levei and phosphorylation of the insulin receptor in isolated islets ttom Ri5 rats when compared tothe controls. Rowever, the chronic hyperinsulinemia increased the protein levels, phospholylation and associations with PI 3-kinase of the IRS-l and 2, after stimulation with insulin, compared to the controls. The insulin-stimulated phosphorylation of ERK was similar in isolated islets in both the Ri5 and control rats. In summary, our results demonstrated that 5 days of euglycemic hyperinsulinemia induced insulin resistance, with a decrease in insulin signal transductional in tiver, muscle and heart, and an increase in these pathways in adipose tissue and isolated islets. In tiver, the reduced phosphorylation/ativation of AKT was consequence of reduced IRS-2 phosphorylation, and in muscle and heart due to reduced IRS-I phosphorylation. In adipose tissue and islets, the protein levels and phosphorylation status of the two insulin receptor substrates, IRS-I and IRS-2, were increased. The chronic hyperinsulinemia modulated specifically the metabotic pathway through AKT. However, the mitogenic pathway, through ERKs (112) did not undergo regulation in neither of tissues studied ITomanimalsHi5. The tissue-specific regulation of insulin signal transductional pathways in rats with chronic insulin infusion during 5 days, contribute to explain the molecular mechanisms of insulin resistance in these animals, and also suggest models of regulation which can be present in the early stages of obesity, hyperinsulinemiaand insulinresistance / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T16:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zecchin_HenriqueGottardello_M.pdf: 28934250 bytes, checksum: db4e45dda12195dad37965b91fd18adc (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Estudos epidemiológicos demonstram forte associação entre resistência à insulina, hipertensão e morbidade cardiovascular. A insulina, além de seus efeitos metabólicos, exerce efeitos cardiovasculares mediados pelo sistema nervoso simpático e pela via do óxido nítrico (NO). Recentemente foi descoberto que, em situações normais, a insulina ativa a produção de NO em células endoteliais em cultura através de um mecanismo dependente da fosfatidilinositol (PI) 3-quinase, com ativação da Akt e subseqüente fosforilação da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS ou NOS3) em resíduos de serina. As ações da insulina no sistema cardiovascular estão reduzidas em diversos estados de resistência à insulina, porém o mecanismo através do qual ocorre manutenção da pressão arterial normal e ausência de doença cardiovascular em alguns modelos animais de resistência à insulina ainda não foi estudado. Neste estudo, usando técnicas de imunoprecipitação e immunoblotting, examinamos in vivo a regulação das proteínas envolvidas na transmissão do sinal de insulina no músculo esquelético e na aorta torácica de ratos obesos envelhecidos (12 meses de idade), os quais apresentaram resistência à insulina mas não desenvolveram doença cardiovascular, comparando-os com ratos jovens (2 meses de idade). As vias envolvidas na transmissão intracelular do sinal de insulina tiveram comportamentos diferentes nos tecidos estudados. Os ratos com 12 meses de idade apresentaram redução significativa na transmissão do sinal de insulina pela via da PI 3-quinase no músculo esquelético, com níveis teciduais e graus de ativação normais da MAP quinase. Na aorta, entretanto, a via da PI 3-quinase / Akt mostrou-se preservada, levando à ativação normal da óxido nítrico sintase endotelial; as isoformas ERK1/2 da MAP quinase apresentaram maiores graus de fosforilação e níveis teciduais nos animais com 12 meses, tanto na ausência quanto após estímulo com insulina, em comparação aos animais jovens. A redução na ativação da via da PI 3-quinase / Akt pela insulina no músculo esquelético de ratos com 12 meses de idade pode ter contribuído para o fenótipo de resistência à insulina apresentado por este modelo animal. No vaso, entretanto, apesar do aumento da quantidade e ativação da MAP quinase, a preservação da via da PI 3-quinase pode ter contribuído para evitar a aterosclerose e hipertensão arterial sistêmica no rato obeso e envelhecido / Abstract: The association between insulin resistance, hypertension and cardiovascular morbidity has been well established. However, the mechanism by which there is maintenance of normal blood pressure and absence of cardiovascular disease despite insulin resistance in some animal models is not c1ear. Besides its metabolic effects, insulin is able to act in cardiovascular system direct1y in vascular cells promoting the increase in amino acid transport, glycogen synthesis, DNA synthesis, gene expression, nitric oxide release and regulation of mRNA expression of matrix proteins. Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of its receptor, resulting in the phosphorylation of its cytosolic substrates IRSs and Shc, which bind differentially to various downstream signaling proteins, such as phosphatidylinositol 3-kinase (pI 3-K). Recently, it has been demonstrated that insulin is able to stimulate NO production in cultured endothelial cells through a PI 3-K pathway, activating the serine/threonine protein kinase Akt and subsequently phosphorylating and activating the endothelial nitric oxide synthase (eNOS I NOS3). As is the case for other growth factors, insulin also stimulates the mitogen-activated protein (MAP) kinase extracellular signal-regulated kinase (ERK), which is critical in mitogenic response. The insulin resistance of type 2 diabetes, obesity and aging is characterized by defects at many levels, with decreases in receptor concentration and kinase activity, in concentration and phosphorylation of IRS-l and -2, in PI 3-K activity, in glucose transporter translocation and in the activity of intracellular enzymes in muscle, liver and adipocytes. In the present study, the insulin signaling pathways in skeletal muscle and thoracic aortae from 2- and 12-month-old rats - which have insulin resistance but do not develop cardiovascular disease - have been analysed using immunoprecipitation and immunoblotting technics. The 12-month-old normotensive rats showed marked insulin resistance, which parallels the reduced effects of this hormone in insulin signaling cascade in muscle. In aorta, hosphatidylinositol (PI) 3-kinase / Akt pathway was preserved, leading to a normal activation of endothelial nitric oxide synthase; however, mitogen-activated protein (MAP) kinase isoforms showed higher levels and activation in middle-aged rats, both in the basal state and afier stimulation with insulin, when compared to young rats. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Gil Guerra Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:29:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Armani_MariaClaudiadeAraujo_M.pdf: 1132841 bytes, checksum: 51ca74c9d7fbd1a4c8865bbd097a8e68 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Objetivo: Avaliar a resistência insulínica e o perfil lipídico das pacientes com síndrome de Turner (ST) e correlacionar com a idade, o cariótipo, e a presença de hipertensão arterial sistêmica, de obesidade e de desenvolvimento puberal. Casuística e Métodos: Estudo transversal de 35 pacientes com ST sem uso prévio de anabolizantes ou hormônio de crescimento, com avaliação de idade, cariótipo, pressão arterial, desenvolvimento puberal, estatura, peso, IMC, cintura (C), quadril (Q), C/Q. Foram feitas dosagens séricas basais em jejum de colesterol total, HDL, triglicérides, insulina e glicose, e cálculos de LDL, índices de HOMA e QUICKI, e relação entre glicose e insulina (G/I). Foi feita análise descritiva dos dados, e aplicados o teste de Mann-Whitney em relação aos grupos de cariótipo e puberdade e o de Spearman. Resultados: A idade variou de 5 a 43 anos, sendo 10 acima dos 20 anos. Dezessete com cariótipo 45,X e 6 com aberrações estruturais; não se observaram diferenças das variáveis em relação aos cariótipos. Quinze eram impúberes e 20 púberes; os triglicérides e o HOMA foram significativamente maiores na puberdade, e a G/I menor. Sete com estatura normal, 8 com IMC > 25 Kg/m2 (6 entre 25 e 30 e 2 maior que 30), 19 com C/Q > 0,85. O colesterol foi de 180 + 42 mg% (Média + 1DP, 4 acima de 240); o HDL de 57 + 16 mg%; o LDL de 99 + 34 mg%; os triglicérides de 108 + 96 mg% (2 acima de 200); o HOMA de 1,01 + 0,71; o QUICKI de 0,4 + 0,04 e a G/I de 23,5 + 12,1 (2 abaixo de 7,0). Conclusões: Neste estudo foram observadas poucas alterações no perfil lipídico da ST independentemente da faixa etária, do cariótipo, da hipertensão arterial e da obesidade. A resistência insulínica não foi observada neste estudo com a freqüência descrita na literatura / Abstract: Objective: To evaluate the insulin resistance and lipid profile of patients with Turner Syndrome (TS), and to check the influence of age, karyotype, presence of systemic arterial hypertension, obesity and pubertal development. Casuistic and Methods: A transversal study of 35 TS patients without previous use of anabolic steroid or growth hormone, with evaluation of age, karyotype, blood pressure, pubertal development, height, weight, BMI, waist (W), hip (H), and W/H (waist-to-hip ratio). Fasting blood was collected to determine the levels of total cholesterol, high-density lipoprotein, triglycerides, insulin and glucose, followed by the estimate of low-density lipoprotein, HOMA and QUICKI indexes, and relation between glucose and insulin (G/I) was made. A descriptive analysis was done and data were examined by Mann-Whitney test for pubertal and karyotype groups, and Spearman test. Results: The age varied from 5 to 43 years; 10 were above 20 years old. Seventeen had a 45,X karyotype and 6 structural aberrations; differences of the variables in relation to the karyotypes were not observed. Fifteen were nonpubertal and 20 pubertal; triglycerides and HOMA were significantly higher in puberty, while G/I was lower. Seven had normal height, 8 had BMI > 25 Kg/m2 (6 between 25 and 30 and 2 > 30), and 19 W/H > 0.85. The cholesterol level was 180 + 42 mg% (Mean + 1SD, 4 above 240); HDL 57 + 16 mg%; LDL 99 + 34 mg%; triglycerides 108 + 96 mg% (2 above 200); HOMA 1.01 + 0.71; QUICKI 0.4 + 0.04 and G/I 23.5 + 12.1 (2 below 7.0). Conclusions: This sample shows that a few patients with TS had changes in lipid profile independent of age, karyotype, hypertension and obesity. The frequency of insulin resistance in this study was lower than described in literature / Mestrado / Pediatria / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Jose Barreto Campello Carvalheira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:37:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_AdilsonRoberto_D.pdf: 4239605 bytes, checksum: e6350c7d3440e57b1e135fc1ec5f604b (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A insulina é um hormônio anabólico com efeitos metabólicos potentes. Os eventos que ocorrem após a ligação da insulina ao seu receptor são específicos e estritamente regulados. Definir as etapas que levam à especificidade deste sinal representa um desafio para as pesquisas bioquímicas. Todavia, podem resultar no desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para pacientes que sofrem de estados de resistência à insulina, inclusive o diabetes mellitus tipo 2. O receptor de insulina pertence a uma família de receptores de fatores de crescimento que têm atividade tirosina-quinase intrínseca. Após a ligação da insulina, o receptor sofre autofosforilação em múltiplos resíduos de tirosina. Isto resulta na ativação da quinase do receptor e conseqüente fosforilação em tirosina de uma família de substratos do receptor de insulina (IRSs). De forma similar a outros fatores de crescimento, a insulina usa fosforilação e interações proteína-proteína como ferramentas essenciais para trasmitir o sinal em direção ao efeito celular final, tais como translocação de vesículas contendo transportadores de glicose (GLUT4) do pool intracelular para a membrana plasmática, ativação da síntese de glicogênio e de proteínas e transcrição de genes específicos. Um grande número de estudos tem investigado as vias de transmissão do sinal da insulina em modelos animais, utilizando ratos anestesiados. Nesses estudos, diferentes tipos de anestésicos tem sido utilizados, entre os quais o tiopental sódico, o pentobarbital sódico e o éter dietílico. Durante uma anestesia de longa duração com tiopental, há relatos de diminuição do glicogênio hepático e de significativa elevação dos níveis plasmáticos de glicose, ácido láctico e aminoácidos, de forma que o tiopental tem sido alvo de inúmeros estudos na tentativa de identificar os mecanismos envolvidos na gênese da hiperglicemia. Em testes orais e intravenosos uma pronunciada intolerância à glicose foi observada em diversas espécies animais, quando o tiopental foi utilizado como anestésico. Vários estudos com ilhotas pancreáticas isoladas indicam que essa intolerância ocorre devido a um defeito na secreção de insulina, que se manifesta principalmente frente a altas concentrações de glicose. Isso ocorreria em função da ação inibitória direta do tiopental sobre os canais de potássio. Desta forma, quando ilhotas pancreáticas são expostas a altas concentrações de glicose, não se observa a resposta secretória característica. Na anestesia com pentobarbital, a maioria dos autores refere discreta ou nenhuma modulação do metabolismo da glicose, porém, há relatos de uma inibição do transporte facilitativo mediado por GLUT-1, o que deve interferir na captação cerebral de glicose, independente dos níveis plasmáticos. o éter provoca aumento da atividade do sistema nervoso simpático, com liberação de adrenalina, semelhante a uma reação de stress, produzindo glicogenólise hepática e muscular, aumentando acentuadamente a glicemia. Entretanto, a literatura apresenta dados controversos, que mostram que durante a anestesia com éter as concentrações de glicogênio hepático e muscular são semelhantes àquelas observadas quando os animais são decapitados. A elucidação desses achados laboratoriais depende da caracterização dos efeitos diretos desses anestésicos sobre os mecanismos moleculares da sinalização da insulina, que ainda são desconhecidos. No presente estudo, foi investigado o efeito do tiopental sódico, do pentobarbital sódico e do éter dietílico na taxa de desaparecimento da glicose, na fosforilação do IR, IRS-1 e IRS-2, na associação dos IRSs com a PI 3-quinase e na ativação da Akt e do ERK (MAPK) no fígado e no músculo de ratos. A determinação dos níveis de fosforilação do IR, IRS-l e IRS-2, assim como a quantificação da associação das proteínas IRSs com a PI 3-quinase e a ativação da Akt e do ERK (MAPK) foram realizadas através de imunoprecipitação com anticorpos específicos, seguidos de immunoblotting. Os níveis plasmáticos de glicose foram mais altos nos animais anestesiados com éter dietílico. A insulina estimulou a fosforilação em tirosina do IR, IRS-l e IRS-2, a associação desses substratos com a PI 3-quinase e a ativação da Akt e da ERK (MAPK), de modo semelhante nos 3 grupos avaliados, tanto no fígado como no músculo. Em resumo, os dados do presente estudo mostram que em modelos animais de avaliação da sinalização insulínica, quando a anestesia geral se faz necessária, o tiopental, o pentobarbital e o éter podem ser empregados, mas os riscos potenciais de incêndio e explosões e a reação de stress característica da anestesia com o éter, colocam os dois agentes barbitúricos como opções mais seguras / Abstract: Not informed. / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica