Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-15Bitstream added on 2014-06-13T19:00:31Z : No. of bitstreams: 1 demant_car_dr_botfca.pdf: 567683 bytes, checksum: 020907ed10052d4741c5f2e1c5861dfb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A mamona pode ser utilizada para mais de 700 finalidades diferentes, porém a sua toxidez é o limitante principalmente para o uso restrito da torta originada após a extração do óleo. Para as análises utilizou-se um organismo com o modo de reação a medicamentos e toxinas semelhante ao ser humano, o nematóide Caenorhabditis elegans, o qual tem sido amplamente utilizado pela indústria farmacêutica. O trabalho teve inicio com ensaios preliminares os quais se utilizaram culturas de C. elegans. Estas foram expostas às toxinas que foram colocadas em pequenas cavidades no meio de cultura, porém, devido à falta de praticidade do método, à difícil leitura e sua degradação pela E. coli, passou-se a realizar os testes em placas de 24 poços transparentes contendo apenas água, o nematóide e a toxina. Os resultados mostraram que o teste utilizando placas de 24 poços para exposição do nematóide, e a extração feita através da homogeneização, seguida por banho-maria seguida por centrifugação se mostrou eficiente para medir a ricina sendo semelhantes aos obtidos pelos testes de radioimunodifusão e Elisa, testes bastante específicos, porém de custo mais elevado. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver um bioensaio para quantificar a ricina tóxica da mamona, pois a relação entre as análises realizadas por diferentes métodos de quantificação existentes, nem sempre refletem a toxidez real, podendo ocorrer que sementes analisadas por estes métodos, apresentem menor teor de ricina, embora sejam mais tóxicas do que outras sementes que tenham maior teor de ricina quando analisada pelo método. Isto se deve aos métodos empregados que medem além da ricina o RCA Ricinus Communis Aglutimina, um composto menos tóxico do que a ricina pura. / The castor oil can be used to 700 different products but its toxicity limits mainly the use of the castor bean cake, the product you have after extract the oil. The present reseach developed a bioassay to quantify the ricin content on castor bean seed because the relationship between the analyses performed by different quantifying methods not always reflect the actual toxicity, witch can occur that seeds analysed by these methods have lower ricin levels although are more toxic than other seeds, because when it test not only the ricin but also the complex ricin + RCA Ricinus Communis Algutimin is measured and the RCA is less toxic than the pure ricin. That is why it was used an organism that has similarities in the way the human body reacts to drugs and toxin, choosing to use the Caenorhabditis elegans that has been used to the pharmaceutical industry. This assay started with preliminary assays using C. elegans colonies that were exposed to the toxins placed in small holes did in the media , but it was hard to read and the E. coli degradation, the method changed to the 24 well plates with water, nematode and the ricin. The results showed the method is efficient to measure ricin and very similar to the radio-imuno-diffusion and the Elisa, very specific tests, but expensive with some operational problems.

PAIM, Luciano Brandão. Ação antiinflamatória da lectina de semente de dioclea violacea na artrite induzida por zymosan. 2006. 60 f. Dissertação (Mestrado em Medicina)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2006. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-10-27T11:58:50Z No. of bitstreams: 1 2006_dis_lbpaim.pdf: 458324 bytes, checksum: 139be3c869a62099de5ec35e9415148e (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-11-01T13:25:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_dis_lbpaim.pdf: 458324 bytes, checksum: 139be3c869a62099de5ec35e9415148e (MD5) / Made available in DSpace on 2011-11-01T13:25:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_dis_lbpaim.pdf: 458324 bytes, checksum: 139be3c869a62099de5ec35e9415148e (MD5) Previous issue date: 2006 / Plant-derived lectins inhibit neutrophil chemotaxis, probably through a competitive mechanism with endogenous selectins for a glycosidic residue in the membrane of endothelial cells, leukocytes or in components of the extracellular matrix. We investigated the effects of a lectin isolated from Dioclea violacea (Dviol) seeds in the zymosan-induced arthritis (Azy). Wistar rats (180 a 220g) received an intraarticular (i.a.) injection of 1 mg zymosan (Zy) into the right knee. The hyperalgesia was evaluated with the test for articular incapacitation, measured as the paw elevation time (PET) in s/1min. Cell influx (IC) was assessed in the joint exudate, obtained 6 h after injection of the Zy, through washing and aspiration of the joint. Groups were pretreated 30min before the Zy with Dviol (1 - 30 µg; i.a. ou 1 - 10mg/kg; e.v.), and were compared to non-treated groups (NT), that received the Zy and the vehicle. Others groups received only Dviol (0,3 - 30µg; i.a. and the naïve animals (NV) received just saline i.a. The i.v. administration of Dviol (6mg/kg) significantly reduced the hyperalgesia (p<0.01) (PET= 14,08 ± 1,4) as compared to NT (PET= 36,06 ± 3,3). The i.v. injection of Dviol inhibited IC (18.266,7 ± 1.890,1; 14.633,3 ± 3.207,2; 2.790 ± 503,3 e 120 ± 37,4 cells/mm3 for the 1, 3, 6, and 10mg doses of Dviol, respectively). Dviol given i.a. isolated (30µg) increased PET (15,5 ± 0,9) significantly, as compared to NV. Dviol i.a. isolated (0,3 - 30 µg) significantly increased IC (3.600 ± 676; 4.958,3 ± 1037,2 e 8.350 ± 1.511,5 cells/mm3 for 0,3, 3 e 30 µg, respectively), as compared to NV (858,3 ± 389,5 cells/mm3). Dviol (10 µg i.a.) given 30min before the Zy significantly inhibited the hyperalgesia (PET = 20,15 ± 2,2) (p<0.01), as compared to NT (TSP= 9,9 ±1,2). Dviol i.a. (1, 10, and 30μg) significantly reduced IC (18.266,7 ± 1.890,1; 11.366,7 ± 2.883,7 e 19.866,7 ± 1.783,4 cells/mm3, respectively), as compared to NT. The i.v. administration of Dviol (6 mg/kg) + manose reversed the inhibitory action of Dviol in the hyperalgesia (PET= 38,4 ± 4,4) (P<0.01) and in the IC (15200 ± 1829,7 cells/mm3) of the AZy, as compared to Dviol (6mg/kg; i.v.) (TEP= 14,08 ± 1,4 and IC= 2.790 ± 503,3 cells/mm3). The results demonstrate, for the first time, that the lectin isolated from Dviol has anti-inflammatory effect in an experimental arthritis model. This effect appears to be prominently due to the coupling of Dviol to intrarticular polysaccharide residues. However, we can not exclude that coupling to protein residues may be also involved in this mechanism. / Lectinas de origem vegetal inibem quimiotaxia neutrofílica, provavelmente por ação competitiva com selectinas endógenas por um sítio glicosídico na membrana de células endoteliais, leucócitos ou em componentes da matrix extracelular. Exploramos os efeitos de lectina isolada de sementes de Dioclea violacea (Dviol) na artrite induzida por zymosan (Azy). Ratos Wistar (180 a 220g) receberam injeção intra-articular (i.a.) de zymosan (Zy) (1mg) no joelho direito. A hiperalgesia foi avaliada pelo teste de incapacitação articular, medido pelo tempo de suspensão da pata (TSP) em s/min. O influxo celular (IC) foi medido no lavado articular, obtido 6 h após a injeção do Zy, por lavagem e aspiração da articulação. Grupos foram pré-tratados (30 min) antes do Zy com Dviol (1 - 30 µg; i.a. ou 1 - 10mg/kg; e.v.), sendo comparados ao grupo não-tratado (NT), que recebeu apenas Zy e o veículo. Outros grupos receberam apenas Dviol (0,3- 30 µg) i.a. e o grupo Naive, apenas salina i.a. A administração de Dviol (6mg/kg; e.v.), reduziu significantemente (p<0,01) a hiperalgesia (TSP= 14,08 ± 1,4) quando comparado ao NT (TSP= 36,06 ± 3,3). A injeção endovenosa de Dviol inibiu o IC (18.266,7 ± 1.890,1; 14.633,3 ± 3.207,2; 2.790 ± 503,3 e 120 ± 37,4 células/mm3 para 1, 3, 6 e 10mg de Dviol, respectivamente) quando comparados ao NT (37.583,3 ± 6.007,2 células/mm3). A administração i.a. de apenas Dviol (30 µg) aumentou significativamente o TSP (15,5 ± 0,9), em relação ao NV. Dviol i.a. isolada (0,3 a 30; µg), aumentou significantemente o IC (3.600 ± 676; 4.958,3 ± 1037,2 e 8.350 ± 1.511,5 células/mm3 para lectina 0,3; 3 e 30, respectivamente), comparado ao NV (858,3 ± 389,5 células/mm3). Dviol (10 µg; i.a.), 30 min antes da injeção do Zy, inibiu significantemente a hiperalgesia (TSP = 20,15 ± 2,2) (p<0,01), em relação ao NT (TSP= 35,9 ± 2,7). Dviol i.a. (1, 10 e 30μg) reduziu significantemente o IC (18.266,7 ± 1.890,1; 11.366,7 ± 2.883,7 e 19.866,7 ± 1.783,4 células/mm3, respectivamente), comparado ao NT. A administração e.v. de Dviol (6 mg/kg) + manose (0,1M), reverteu a inibição da Dviol na hiperalgesia (TSP= 38,4 ± 4,4) (P<0,01) e no IC (15200 ± 1829,7 células/mm3) da AZy, em relação a Dviol (6mg/kg;e.v.) (TSP= 14,08 ± 1,4 e IC= 2.790 ± 503,3 células/mm3). Os resultados demonstram, de maneira inédita, que a lectina de semente de Dviol tem ação antiinflamatória em artrite experimental. Esse efeito parece ser prioritariamente associado à ligação da Dviol a sítios de polissacarídeos intra-articulares, embora não possamos descartar que a ligação a domínios protéicos possa estar envolvida nessa ação.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Universidade Federal de Goiás, Universidade Federal do Mato Grosso, Universidade Federal do Mato Grosso do Sul, Universidade Federal da Grande Dourados— Programa em Rede Multi-Institucional do Pró-Centro-Oeste de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biodiversidade, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-04-16T16:47:20Z No. of bitstreams: 1 2017_NatáliaLimadeSousa.pdf: 4533724 bytes, checksum: f1543f615e181c2847084a1bdbff8c2a (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-08T19:50:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_NatáliaLimadeSousa.pdf: 4533724 bytes, checksum: f1543f615e181c2847084a1bdbff8c2a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-08T19:50:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_NatáliaLimadeSousa.pdf: 4533724 bytes, checksum: f1543f615e181c2847084a1bdbff8c2a (MD5) Previous issue date: 2018-05-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / A mamona é uma oleaginosa pertencente à Família Euphorbiaceae com distribuição mundial, porém mais cultivada em regiões tropicais e subtropicais. Tem grande importância na indústria principalmente devido ao seu óleo de grande aplicabilidade em medicamentos, cosméticos e lubrificantes. Seu subproduto de maior importância é a torta empregada na recuperação de solos devido ao alto teor de nitrogênio, e por conter alto teor de proteínas poderia ser empregada na alimentação animal. Porém seu uso como ração é inadequado devido à presença da ricina, uma proteína tóxica e de difícil eliminação. Para gerar plantas de mamona biodetoxificadas por meio da engenharia genética foi utilizada a técnica de RNA interferente para silenciar o gene da ricina nas sementes (com a intenção de silenciar também a RCA120, uma aglutinina muito similar a ricina), por Agrobacterium tumefaciens ou biobalística. Utilizando transformação via A. tumefaciens não foi possível obter plantas transgênicas, provavelmente por causa do baixo número de embriões transformados. Por outro lado, foram obtidos sete explantes transgênicos por meio de biobalística, sendo a maioria do tipo mosaico com apenas a epiderme transgênica. Porém, a linhagem TB14S-5D, apresentou todos os tecidos transgênicos e transferiu os transgenes para a progênie. Essa linhagem apresentou níveis indetectáveis de ricina no ensaio ELISA, em ensaio de hemaglutinação de hemácias não apresentou reação de aglutinação demostrando que a RCA120 também foi silenciada. O ensaio realizado com nematoides não ocorreu como esperado, pois o extrato de proteína da planta não transgênica não causou a morte da cultura como deveria, talvez por um mecanismo de defesa do próprio animal. Em ensaio com células IEC-6 e camundongos os extratos da planta transgênica não apresentaram toxidez. Os resultados mostram que a planta gerada tem potencial para que sua torta seja usada como alimento animal, gerando uma fonte renda maior para o produtor e um manejo mais seguro. / Castor bean is an oilseed plant that belongs to Euphorbiaceae family with worldwide distribution, but mainly cultivated in tropical and sub-tropical regions. It has great importance in industry due to its oil content of great applicability in medicines, cosmetics and lubricants. Castor bean cake is the most important sub-product mainly used in soil recovery due to the high nitrogen content. Besides, it contains high protein content that could be used in animal feed. However, its use as animal feed is inadequate due to the presence of ricin, an extremely toxic and difficult to eliminate protein. To generate biodetoxified castor bean plants by genetic engineering, the RNAi technique was used to silence the ricin gene in castor bean seeds (also intending to silence the RCA120, that is a strong agglutinin very similar to ricin) by Agrobacterium tumefaciens or biolistic. It wasn’t possible to generate transgenic plants through genetic transformation by A. tumefaciens probably because of the low number of transformed embryos. Still it was possible to generate seven transgenic explants by genetic transformation via biolistic, however most explants were mosaic with only the epidermis being transgenic. The transgenic line TB14S-5D presented all tissue being transgenic and transferred the transgenes to progeny. This line had undetectable levels of ricin by ELISA, in a red blood cell hemagglutination test it did not present agglutination reaction showing that RCA120 was also silenced. The nematode assay did not occur as expected because the protein extract from the non-transgenic plant did not cause the death of the culture as it was expected, perhaps by a defense mechanism of the animal itself. Furthermore the transgenic plant extracts showed no toxicity to IEC-6 cells and mice. The results show that the cake of the plant generated can be used as animal feed, generating a higher source income for the producer and safer handling.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:58:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EleniseBBA.pdf: 2555564 bytes, checksum: 204e9e7884310336d7433cc3d80fd571 (MD5) Previous issue date: 2007-01-24 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / It?s been motivating motivated by the current rulers as an energy solution the use of the biodiesel as source of energy, that doesn't damage the environment and promotes the development of the areas where the base plant are grown. The process of production of the biodiesel, starting from the castor oil plant and its derivers, generates a known product as castor oil plant pie that has been used as fertilizer. Once disintoxicated, it can serve as animal ration, because it contains high content of proteins, presenting larger joined value. The disintoxication process, can be obtained through the process of drying the pie with the construction and use of models of dryers capable to elevate the temperature of the castor oil plant pie to approximately 60?C.In this temperature the product tends to eliminate the ricina, with the aid of an aqueous solution of hydroxide of calcium, or still reach higher temperatures to make the disintoxication without a chemical treatment. It was made a bibliographical research about known processes of disintoxication of the castor oil plant pie from the autoclave use to the drying direct exposure to the sun. Starting from the state of the art and identification of the object, it was chosen solar dryers to eliminate the ricina. It was applied two types of solar dryers: the one of solar direct exposure, and the one with concentrador. The castor oil plant pie was separated in samples, with measurement of its initial mass, codified and placed in the dryers. The results were presented in graphs and tables forms, with the values of temperatures noticed. It was noticed the variations of temperature and the relationships analyzed related with the ricina content eliminated from the pie. The analysis of the ricina content was accomplished by Embrapa - Campina Grande, by eletroforese method. The analysis of the result of considering the content of ricina of the samples. It was observed that, we obtained lower rate of ricina in samples that had larger drying time and average value temperature above 60?C. Comparing with the ones submitted to higher temperatures and in a shorter period of time. It was possible to evaluate the efficiency of the dryers in the desintoxication process of the samples, as well as the type of more appropriate dryer for the drying pie process. Finally, it was concluded that the solar dryer with concentrador presents higher values temperatures than the direct exposure one. So, it?s being more opportune applied in the castor oil plant pie drying process. However, more than one hour for drying time is needed / O uso do biodiesel como fonte de energia, que n?o danifica o meio ambiente e promove o desenvolvimento das regi?es que plantam as mat?rias primas para sua fabrica??o, ? uma alternativa energ?tica incentivada pelos atuais governantes. O processo de fabrica??o do biodiesel, a partir do ?leo de mamona e seus derivados, gera um subproduto conhecido como torta de mamona que vem sendo utilizada como adubo. Desintoxicada ela poder? servir como ra??o animal, tendo em vista o alto teor de prote?nas, apresentando, assim, maior valor agregado. A desintoxica??o pode ser obtida por meio do processo de secagem da torta com a constru??o e utiliza??o de modelos de secadores capazes de elevar a temperatura da torta de mamona a aproximadamente 60?C. Ao atingir essa temperatura, o produto tende a eliminar a ricina, com o aux?lio de uma solu??o aquosa de hidr?xido de c?lcio ou ainda atingir temperaturas maiores para realizar a desintoxica??o sem o tratamento qu?mico. Realizou-se um levantamento bibliogr?fico quanto aos processos conhecidos para a desintoxica??o da torta de mamona que v?o desde o uso de autoclave at? a secagem ao sol. A partir do estado da arte e identifica??o do objeto optou-se eliminar a ricina por meio de secadores solares, sendo utilizados dois tipos de secadores o solar de exposi??o direta e o solar com concentrador. A torta de mamona foi separada em amostras, com medi??o de sua massa inicial, codificada e colocada nos secadores. Os resultados apresentados sob a forma de gr?ficos e tabelas, com valores de temperaturas, permitiram que fossem analisadas suas varia??es e as rela??es com o teor de ricina eliminado da torta. A an?lise do teor de ricina foi realizada pela Embrapa -Campina Grande, pelo m?todo de eletroforese. No resultado da an?lise do teor de ricina das amostras, observou-se que aquelas que tiveram maior tempo de secagem e valor de temperatura em m?dia acima de 60?C apresentavam uma menor taxa de ricina em compara??o com as submetidas a maiores temperaturas por um curto per?odo de tempo, assim foi poss?vel avaliar a efici?ncia dos secadores na desintoxica??o das amostras, bem como o tipo de secador mais apropriado para o processo de secagem da torta. Conclui-se, finalmente, que o secador solar com concentrador apresenta valores de temperaturas mais elevados quando comparado com o de exposi??o direta, sendo ent?o mais oportuno na secagem da torta de mamona, por?m ? necess?rio um tempo superior a 1 hora de secagem

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-29Bitstream added on 2014-06-13T19:52:24Z : No. of bitstreams: 1 penteado_msx_me_botfca.pdf: 2342181 bytes, checksum: a7406f91460a51ad9cadd5d5778971e5 (MD5) / Neste trabalho é apresentado todo o desenvolvimento do Sistema Aton, sistema automatizado de aquisição e tratamento de dados para radiometria solar, bem como as necessidades e carências que levaram a sua construção. Em sua metodologia, são implementadas soluções para problemas rotineiros identificados na Estação de Radiometria Solar da UNESP de Botucatu - SP. O sistema Aton é um software com ambiente gráfico simplificado ao operador inicialmente desenvolvido para operar em plataforma Windows Vista de 32 Bits. O programa pode ser usado em estações meteorológicas e climatológicas e também como suporte na medição e avaliação da disponibilidade de radiação solar. O programa foi desenvolvido em módulos com rotinas de controle de qualidade de dados, de cálculo e estimativa de efemérides solares. São apresentados detalhes da operação do software com uma descrição completa de todos os módulos contendo as rotinas e técnicas usadas. Os módulos desenvolvidos permitem a importação automatizada da partição temporal instantânea e cálculo das energias das partições horária, diária e média mensal. Como as componentes de irradiância solar estão relacionadas ao sensor de qual se origina suas medidas, o sistema Aton estoca separadamente uma partição instantânea, horária,diária e média mensal para cada sensor da estação de radiometria solar em banco de dados, o que agiliza a recuperação de informações e mantém flexibilidade para alterações na estação de radiometria solar. O sistema resolve ainda o problema interpretação de dados em arquivos com layout variável causado por alterações na estrutura da estação solarimétrica no período de 28 de fevereiro de 1999 até 31 de agosto de 2008. / In this work was presented all development in Aton System, acquisition automatizated system and datas treatment to solar radiometric, as well as the needs and lacks that took your construction. In your methodology, were implemented solutions to routine problems identified in the Solar Radiometric Station at UNESP from Botucatu-SP. The Alton system is one software with graphic enviroment simplified to the operator initially developed to operate in Windows Vista platform of 32 Bits. The program can be used in meteorologic and climatologic stations and also like measuring and assessment support of solar radiation availability. The program was developed in modules with routines of datas, calculus and estimate of solars event control quality. Were presented details of the software operation with a complete description of all the modules containing the used routines and techniques. The modules developed allow the automated importing of the instantaneous time partition and energies calculus of the hourly, dairly and monthly average partition. As the radiance solar components are related to the sensor of which comes their measures, the Aton system store separately one instantaneous hourly, dairly and monthly average partition for each sensor solar radiometric station in databases, that streamline the information´s recovery and keep flexibility to changes in the solar radiometric station. The system still solve the datas interpretation problem in files with variable layout caused by changes in the solarimetric station structure in the period from February 28th,1999 to August 31st, 2008.

Resumo: A mamona pode ser utilizada para mais de 700 finalidades diferentes, porém a sua toxidez é o limitante principalmente para o uso restrito da torta originada após a extração do óleo. Para as análises utilizou-se um organismo com o modo de reação a medicamentos e toxinas semelhante ao ser humano, o nematóide Caenorhabditis elegans, o qual tem sido amplamente utilizado pela indústria farmacêutica. O trabalho teve inicio com ensaios preliminares os quais se utilizaram culturas de C. elegans. Estas foram expostas às toxinas que foram colocadas em pequenas cavidades no meio de cultura, porém, devido à falta de praticidade do método, à difícil leitura e sua degradação pela E. coli, passou-se a realizar os testes em placas de 24 poços transparentes contendo apenas água, o nematóide e a toxina. Os resultados mostraram que o teste utilizando placas de 24 poços para exposição do nematóide, e a extração feita através da homogeneização, seguida por banho-maria seguida por centrifugação se mostrou eficiente para medir a ricina sendo semelhantes aos obtidos pelos testes de radioimunodifusão e Elisa, testes bastante específicos, porém de custo mais elevado. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver um bioensaio para quantificar a ricina tóxica da mamona, pois a relação entre as análises realizadas por diferentes métodos de quantificação existentes, nem sempre refletem a toxidez real, podendo ocorrer que sementes analisadas por estes métodos, apresentem menor teor de ricina, embora sejam mais tóxicas do que outras sementes que tenham maior teor de ricina quando analisada pelo método. Isto se deve aos métodos empregados que medem além da ricina o RCA Ricinus Communis Aglutimina, um composto menos tóxico do que a ricina pura. / Abstract: The castor oil can be used to 700 different products but its toxicity limits mainly the use of the castor bean cake, the product you have after extract the oil. The present reseach developed a bioassay to quantify the ricin content on castor bean seed because the relationship between the analyses performed by different quantifying methods not always reflect the actual toxicity, witch can occur that seeds analysed by these methods have lower ricin levels although are more toxic than other seeds, because when it test not only the ricin but also the complex ricin + RCA Ricinus Communis Algutimin is measured and the RCA is less toxic than the pure ricin. That is why it was used an organism that has similarities in the way the human body reacts to drugs and toxin, choosing to use the Caenorhabditis elegans that has been used to the pharmaceutical industry. This assay started with preliminary assays using C. elegans colonies that were exposed to the toxins placed in small holes did in the media , but it was hard to read and the E. coli degradation, the method changed to the 24 well plates with water, nematode and the ricin. The results showed the method is efficient to measure ricin and very similar to the radio-imuno-diffusion and the Elisa, very specific tests, but expensive with some operational problems. / Orientador: Maurício Dutra Zanotto / Coorientador: Dick Auld / Banca: Rogério Peres Soratto / Banca: Mirina Luiza Myczkowski / Banca: Tammy Aparecida Manabe Kiihl / Banca: José Geraldo Carvalho do Amaral / Doutor

The manufacturing process of biodiesel from castor oil produces a byproduct known as pie or meal, which has anti-nutritional characteristics that only allow its use as fertilizer. If there is a chance to detoxify the pie, it can be used as animal feed with high protein content, increasing its value. There are detoxification processes physical, chemical, biological and combined processes. The possibility of physical treatment by the solar dryer becomes attractive because the process tends to raise the temperature of the bran to about 60 ° C, temperature that eliminates the ricin, a lethal toxin that represents approximately 1.5% of the bran. In the present work was made a review of the literature about the known processes for the detoxification of castor bean meal, ranging from the use of autoclave until the sun drying. After the review, was defined as an object to eliminate the toxin ricin, the solar dryer of indirect exposure. Initially, the castor bean meal were separated into samples and measuring their mass. The initial moisture content and water activity of the samples were identified and these were placed in electric and solar dryers. The results of drying experiments are presented in the form of graphs and tables, with values of temperature, percentage of dry matter, acidity, total moisture, and protein content of ricin eliminated. The results of drying experiments are presented in the form of graphs and tables, with the values of temperatures, percentage of dry matter, acidity, total moisture, and protein content of ricin eliminated. These data allowed us to observe the optimum conditions of treatment depending on the quality of ricin, concluding that the solar dryer of indirect exposure eliminates part of ricin, but not entirely, because it takes approximately 95 ° C and 6.5 hours of drying to complete elimination of toxin. / O processo de fabricação do biodiesel, a partir do óleo de mamona, gera um subproduto conhecido como torta ou farelo, que possui características antinutricionais que só possibilitam sua utilização como adubo. Se houver a possibilidade de destoxicar o farelo, ele poderá servir como ração animal, com alto teor de proteínas, aumentando o seu valor agregado. Existem processos de destoxicação físicos, químicos, biológicos e processos combinados. A possibilidade de fazer o tratamento físico com o secador solar se torna atraente, pois o processo tende a elevar a temperatura do farelo a aproximadamente 60°C, temperatura que elimina a ricina, uma toxina letal que representa aproximadamente 1,5% do farelo. No presente trabalho realizou-se um levantamento bibliográfico quanto aos processos conhecidos para a destoxicação do farelo de mamona, que vão desde o uso de autoclave até a secagem ao sol. Após a revisão, foi definido como objeto eliminar a toxina ricina por meio de secador solar de exposição indireta. Inicialmente, os farelos de mamona foram separados em amostras, com medição de sua massa, umidade e atividade de água iniciais identificadas e colocadas nos secadores elétrico e solar. Os resultados dos ensaios de secagem estão apresentados sob a forma de gráficos e tabelas, com valores de temperaturas, percentual de massa seca, acidez, umidade total, proteínas e teor de ricina eliminado. Esses dados permitiram observar as condições ótimas de tratamento em função do teor de ricina, concluindo que o secador solar de exposição indireta elimina a ricina, mas não totalmente, pois são necessários aproximadamente 95°C e 6,5 horas de secagem para eliminação completa da toxina.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Este trabalho foi conduzida com o objetivo de avaliar o efeito de metodos alternativos de destoxificacao da torta de mamona sobre o consumo, digestibilidade, parametros ruminais e sanguineos em ovinos. Foram utilizados 20 ovinos, sendo 10 machos inteiros e 10 femeas todos mesticos de Morada Nova, com peso vivo medio em torno de 17 Â} 1,02kg e idade media de 7 meses. Para o ensaio de digestibilidade e para os dados de parametros sanguineos o delineamento utilizado foi o de blocos inteiramente casualizados com quatro repeticoes, sendo os blocos de acordo com o sexo do animal. O delineamento utilizado para os dados dos parametros ruminais foi em blocos ao acaso em esquema de parcelas subdivididas, tendo nas parcelas as dietas e nas sub-parcelas os tempos de coleta (0, 2, 5 e 8h pos-prandial) com quatro repeticoes. Foi utilizado como volumoso o feno do capim tifton-85. As racoes foram fornecidas diariamente em duas refeicoes, coletando-se no dia seguinte as sobras, fezes e a urina, apenas no ultimo dia. O periodo experimental teve duracao de 22 dias, sendo 21 dias para o ensaio de digestibilidade e no 22 dia fez-se a coleta de sangue e liquido ruminal. Na avaliacao do consumo e digestibilidade in vivo nao houve diferenca entre os tratamentos (P>0,05) para o consumo de materia seca (CMS), materia organica (CMO), extrato etereo (CEE), proteÃna bruta (CPB), fibra em detergente neutro (CFDN), fibra em detergente acido (CFDA), hemicelulose (CHEM), celulose (CCEL), carboidratos totais (CT) e carboidratos nao fibrosos (CCNF) em g/dia, %PV, e g/kg0,75. Quanto ao efeito de sexo, houve maior consumo de matÃria seca dos machos em relacao as femeas quando o consumo foi expresso em g/dia e g/kg0,75. Maiores consumos de fibra em detergente neutro (FDN), fibra em detergente acido (FDA), hemicelulose (HEM) e celulose (CEL) para os machos em relacao as femeas (P<0,05) foram observados quando expressos em g/dia com medias de 385,28 e 333,22 g de FDN, 176,54 e 153,07 g de FDA, 208,74 e 180,15 g de HEM, e 149,33 e 128,53 g de CEL para machos e femeas respectivamente. Nao foram observados efeitos (P>0,05) dos metodos alternativos de destoxificacao da torta de mamona na DMS, DMO, DPB, DFDA, DCEL, DCT e DCNF com medias de 67,13%, 68,23%, 66,94%, 46,78%, 61,20%, 68,36% e 82,84% respectivamente. A digestibilidade do extrato etereo (DEE) foi superior na dieta com torta de mamona tratada com calcario calcitico (CC) quando comparada aquela tratada com fosfato monobicalcico (FOS). A digestibilidade da FDN foi superior (P<0,05) na dieta que recebeu torta de mamona nao tratada (NT) em relacao a dieta CC. Ja para a digestibilidade da HEM os tratamentos NT e aquele que recebeu torta de mamona tratada com ureia (UR) foram superiores ao tratamento CC. Nao foi verificado efeito dos metodos alternativos de destoxificacao da torta de mamona sobre o consumo de energia bruta (CEB), energia digestivel (CED), energia metabolizavel (CEM), balanco energetico (BE), nutrientes digestiveis totais (NDT), consumo de nutrientes digestÃveis totais (CNDT) e digestibilidade da energia bruta (DEB) com medias de 348,06 g/kg0,75, 215,12 g/kg0,75, 202,43 g/kg0,75, 1,97 Mcal/dia, 66,76%, 541,45 g/dia e 64,75%, respectivamente. Os machos apresentaram maiores valores (P<0,05) de CED, CEM e BE que as femeas. O balanÃo de nitrogenio foi superior para o tratamento que recebeu torta de mamona autoclavada (ACL) com media de 7,72 em relacao aos tratamentos UR (6,06) e FOS (5,76). A relacao nitrogÃnio retido/nitrogenio consumido foi superior para os tratamentos ACL (46,12%) e CC (44,43%) em relacao ao tratamento FOS (35,18%). Os balancos energetico e nitrogenado foram positivos para todos os tratamentos. Na avaliacao dos parametros ruminais, o pH variou de 6,43 a 6,92. O tratamento FOS apresentou valores de pH maiores que os tratamentos NT e CC. A alimentacao promoveu reducao nos valores de pH. As concentracoes de N-NH3 foram influenciadas pelos tempos de coletas, apos o fornecimento das racoes. Entre os tempos de coleta, o tempo duas horas pos-prandial foi superior aos demais tempos. Entre os tratamentos, observa-se que CC e UR apresentaram maiores valores de N-NH3 que NT e os tratamentos FOS e ACL obtiveram valores intermediarios. Nao houve diferenca significativa (P>0,05) entre os valores medios de ureia e creatinina plasmatica entre os cinco tratamentos, sendo que as concentracoes sericas de ureia variaram de 26,08 a 42,45 mg/dL e as de creatinina variaram de 0,63 a 0,73 mg/dL. Nao houve influencia dos tratamentos sobre as hemacias, hemoglobina, hematocrito, volume globular medio (VCM), concentracao de hemoglobina globular media (CHCM), segmentados, linfocitos e leucocitos, cujos valores medios encontrados foram de 7,72 106/&#956;l, 10,33 g/dl, 30,65 %, 39,63 &#956;m3, 33,66 %, 44,20 %, 3635,0 /&#956;l, e 7370,0 /&#956;l, respectivamente. Os valores de Eosinofilos apresentaram superioridade para a dieta FOS (3,50%) em relacao a dieta CC (0,50%). Houve diferenca (P<0,05) para os valores de monocitos entre os tratamentos, com a dieta que recebeu torta de mamona tratada com ureia (UR) apresentando superioridade em relacao aos demais. Houve efeito de sexo (P< 0,05) apenas para a variavel Neutrofilos Segmentados com valores medios de 49,30 e 39,10 para machos e femeas, respectivamente. A torta de mamona nao tratada do ponto de vista nutricional pode ser utilizada nas dietas de ovinos como alimento proteico alternativo participando em ate 8% da racao total, sem ocasionar grandes reducoes no consumo e digestibilidade, apresentando ainda valores de perfil hematologico dentro da faixa considerada normal para a especie ovina. / This study was conducted to evaluate the effect of alternative methods of detoxification of castor cake on intake, digestibility, ruminal parameters and blood in sheep. We used 20 sheep, 10 males and 10 females all crossbred ( Morada Nova var. Red x  without defined breed), with average weight around 17  1.02 kg and mean age of 7 months. For the digestibility data and blood parameters were used a randomized complete block design with four replications, being blocks according to the sex of the animal. The design used for data ruminal parameters was randomized blocks in split plots, having in the parcels the diets and in the sub-parcels the harvest times (0, 2, 5 and 8 hours postprandial) with four replications. Were the roughage used grass hay Tifton-85. Diets were fed in two meals daily, collecting in the day after, the remains, faeces and urine. The experimental period lasted 22 days being 21 days for the digestibility trial and 22 th day made to collect blood and rumen fluid. In the assessment of intake and digestibility in vivo was not different (P> 0.05) for dry matter intake (DM), organic matter (OM), ether extract (EE), crude protein (CP), neutral detergent fiber (NDF), acid detergent fiber (ADF), hemicellulose (HEM), cellulose (CEL), total carbohydrates (TC) and non-fiber carbohydrates (CNF) (in g/day, %LW, g/kg 0,75 ). Regarding the effect of sex, there was a higher dry matter intake of males compared to females when intake was expressed in g/day and g/kg 0,75 Higher intakes of NDF, ADF, HEM and CEL for. males over females (P <0.05) were observed when expressed as g/day with averages of 385.28 and 333.22 g NDF, 176.54 and 153.07 g of FDA, 208.74 and 180.15 g of HEM, and 149.33 and 128.53 g of CEL for males and females respectively. There was no effect (P>0.05) of the alternative methods of detoxification of castor cake in DMD, OMD, CPD, ADFD, CELD, TCD and NFCD with averages of 67.13%, 68.23%, 66.94 %, 46.78%, 61.20%, 68.36% and 82.84% respectively. The digestibility of EE was higher in diet containing castor bean cake treated with limestone (CC) than for treated with phosphate monodicalcium (FOS). The digestibility of NDF was higher (P <0.05) for the diet that received castor bean cake non untreated (NT) in relation to diet CC. As for the digestibility of the HEM the treatments NT and UR were superior to treatment CC. There was no effect of alternative methods of detoxification of castor bean meal on intake of gross energy (GEI), digestible energy intake (DEI), metabolizable energy (MEI), energy balance (EB), total digestible nutrients (TDN), consumption of total digestible nutrients (CTDN) and digestibility of gross energy (GED) with averages of 348.06 g/kg 0,75 , 215.12 g/kg 0,75 , 202.43 g/kg 0,75 , 1.97 Mcal/day , 66.76% 541.45 g/day and 64.75% respectively. Males had higher values (P <0.05) of DEI, MEI and EB than females. Nitrogen balance was higher for the treatment it received castor bean cake autoclaved (ACL) with a mean of 7.72 compared to treatments UR (6.06) and FOS (5.76). The relationship nitrogen retained/nitrogen intake was higher in ACL treatments (46.12%) and CC (44.43%) compared to the FOS treatment (35.18%). The energy and nitrogen balances were positive for all treatments. In assessing ruminal parameters, the pH ranged from 6.43 to 6.92. Treatment FOS had pH values higher than the treatments NT and CC. The Feeding caused a reduction in pH. The concentrations of N-NH3 were influenced by time of collection, after the xii supply of rations. Among the collection time, the time two hours postprandial was higher than the other times. Among the treatments, it is observed that CC and UR showed higher values of NH3-N and that NT and the treatments ACL and FOS had intermediate values. There was no significant difference (P> 0.05) between mean values of urea and serum creatinine among the five treatments, being that values serum concentrations of urea ranged from 26.08 to 42.45 mg / dL and creatinine ranged from 0.63 to 0.73 mg / dL. There was no influence of treatments on the red blood cells, hemoglobin, hematocrit, packed cell volume (MCV), hemoglobin concentration globular (MCHC), neutrophils, lymphocytes and leukocytes. With average values of 7.72 x106/Âl, 10.33 g/dl, 30.65% 39.63 Âm3, 33.66% 44.20%, 3635.0 /Âl, and 7370.0 /ul, respectively. The values of Eosinophils presented superior for the FOS diet (3.50%) compared with the CC diet (0.50%). There were differences (P<0.05) for the values of monocytes among the treatments, with the UR treatment presenting superiority over the others. The effect of the sex was Significant (P <0.05) for the variable segmented neutrophils with average values of 49.30 and 39.10 for males and females, respectively. The castor cake not treated in the nutritional point of view can be used in the diets of sheep as an alternative protein source participating in up to 8% of the total ration, without causing large reductions in consumption and digestibility, introducing yet values of hematological profile within the range considered normal for the sheep.

Pulchellina é uma proteína inativadora de ribossomo (RIP) isolada de sementes de Abrus pulchellus fragmento que codifica a cadeia A da pulchellina (PAC) foi clonado e inserido no vetor pGEX-5X para expressar a cadeia A recombinante (rPAC) como uma proteína de fusão em Escherichia coli. A análise da seqüência de aminoácidos mostrou que a rPAC apresenta uma alta identidade seqüencial (&#62 86%) com a cadeia A da abrina-c. A habilidade que a rPAC possui para depurinar rRNA em ribossomos de levedura também foi demonstrada em testes in vitro. Objetivando verificar a atividade tóxica do produto heterólogo, nós promovemos a associação in vitro da rPAC com a cadeia B recombinante da pulchellina (rPBC). Ambas as cadeias foram incubadas na presença de um sistema de redução/oxidação, originando um heterodímero ativo (rPAB). O rPAB apresentou uma massa molecular aparente de aproximadamente 60 kDa, similar a pulchellina nativa. As atividades tóxicas do rPAB e da pulchellina nativa foram comparadas através da injeção intraperitonial em camundongos, usando diferentes diluições de cada proteína. O rPAB foi capaz de matar 50% dos animais testados com doses de 45&#956g.kg-1. Nossos resultados mostraram que o heterodímero recombinante apresenta tanto toxicidade quanto um padrão conformacional similar a pulchellina nativa. Estudos usando cultura de tecidos também foram realizados com o objetivo de investigar a presença da pulchellina em calos obtidos a partir de sementes de A. pulchellus. Segmentos de cotilédones de sementes imaturas foram inoculados em meio MS suplementado com diferentes concentrações de auxina, citocinina e sacarose para promover a indução dos calos. A expressão da pulchellina nos calos foi monitorada através de RT-PCR e testes de atividade biológica. Os calos obtidos após 35 dias foram congelados, macerados e submetidos a extração de RNA total e proteínas. Um fragmento específico de DNA que codifica a cadeia A da pulchellina foi amplificado a partir do RNA total sugerindo a síntese da proteína nos calos. Isto foi confirmado no extrato bruto de calos, que mostrou atividade hemaglutinante contra sangue de coelho e uma alta toxicidade quando injetado via intraperitoneal em camundongos.O extrato bruto também foi submetido à cromatografia de afinidade em coluna de Sepharose-4B. A fração retida na coluna apresentou duas bandas protéicas quando analisadas em gel de poliacrinamida, sob condições desnaturantes, apresentando um padrão similar ao obtido com a pulchellina de semente. / Pulchellin is a type 2 ribosome-inactivating protein (RIP) isolated from seeds of the Abrus pulchellus tenuiflorus plant. The DNA fiagment encoding Pulchellin A-chain (PAC) was cloned and inserted in pGEX-5X to express the recombinant pulchellin Achain (rPAC) as a fusion protein in Escherichin coli. The deduced amino acid sequence analyses of the rPAC presented a high sequential identity (&#62 86%) with the A-chain of abrin-c. The ability of the rPAC to depurinate rRNA in yeast ribosome was also demonstrated in vitro. Intending to validate the toxic activity we promoted the in vitro association of the rPAC with the recombinant pulchellin binding chain (rPBC). Both chains were incubated in the presence of a reducedloxidized system, yielding an active heterodimer (rPAB). The rPAB showed an apparent molecular mass of about 60 D a similar to the native pulchellin. The toxic activities of the rPAB and native pulchellin were compared by intraperitoneal injection in mice using different dilutions. The rPAB was able to kill 50% of the tested mice with doses of 45&#956g.kg-1. Our results indicated that the recombinant heterodimer presented toxic activity and a conformational pattern similar to pulchellin. Studies using tissue cultures were also performed to investigate the presence of the pulchellin in callus established from seed explants of A. pulchellus. Cotyledon segments of immature seeds were inoculated in basal medium MS supplemented with different concentrations of auxin, citokinin and sucrose in order to determine the best callus induction. The pulchellin expression was monitored in callus cultures by RT-PCR and biological activity. The calli obtained aRer 35 days were freeze dried, macerated and submitted to extraction of total RNA and proteins. A specific DNA fragment codifying the A-chain pulchellin was amplified from callus RNA suggesting the synthesis of the protein. This was confirmed in the calli crude extract that showed haemagglutinating activity against rabbit blood cells and a high intraperitoneal toxicity to mice. The crude extract was also submitted to affinity chromatography on a Sepharose-4B column. The retained protein, showed to be composed by two main bands in polyacrylamide gel electrophoresis, in denaturating conditions, with a similar pattern to the results obtained with seeds pulchellin.

Il ricino (Ricinus communis L.) è una tra le dieci principali colture oleaginose a livello mondiale. La ricina, eliminata nei processi industriali per la produzione di olio di ricino, costituisce un rischio sia per lo sfruttamento della pianta come biomassa per la generazione di biocarburanti vegetali di seconda generazione, sia per la possibilità di ottenere scorie tossiche dalla lavorazione del materiale. L’utilizzo di tecniche di mutagenesi chimica, associata ad AFLP e metodiche di sequenziamento bersaglio specifiche (TILLING) hanno dimostrato la possibilità di ottenere e riconoscere, in tempi relativamente brevi e in modo specifico, mutazioni nel genoma d’interesse. A partire da una popolazione monovarietale di ricino, sono stati messi a punto diversi trattamenti (basati su EMS ed MNU), al fine di ottenere una popolazione mutagenizzata chimicamente al cui interno ricercare piante prive, o con un contenuto ridotto, di ricina nel seme e di conseguenza caratterizzate da un maggior valore agronomico ed economico. In seguito all’autoimpollinazione delle piante sopravvissute, analisi AFLP e di sequenziamento sulle generazioni successive hanno mostrato come le piante tendano ad accumulare variazioni nel loro genoma rispetto alla generazione precedente. Dall’analisi di sequenza di circa 1 Mb del gene per la ricina nella popolazione mutagenizzata non è emerso nessun cambiamento nella sequenza nucleotidica, in accordo con i risultati di altri studi in cui si è visto come la frequenza di mutagenesi possa variare con la specie considerata. / Castor (Ricinus communis L.) is one of the ten major oil crops worldwide. Ricin, eliminated in industrial processes for the production of castor oil, constitutes a risk to both the exploitation of the plant as a biomass to generate second-generation biofuels, both for getting toxic waste from the processing of the material. The use of chemical mutagenesis techniques, AFLP and methods associated with specific target sequences (TILLING) have demonstrated the ability to obtain and recognize, in a relatively short time, and specifically, mutations in the genome of interest. Starting from a population of castor-variety, have been developed different treatments (based on EMS and MNU), in order to obtain a chemically mutagenized population of plants with a reduced content of ricin in the seed and therefore characterized by a greater agronomic and economic value. After self-pollination of the survived plants, AFLP analysis and sequencing showed how plants tend to accumulate changes in their genome than the previous generation. A sequence analysis of about 1 Mb of the gene for ricin in mutagenized populations has revealed no change in the nucleotide sequence, in agreement with results of other studies in which we have seen that the frequency of mutation may vary with the species under consideration.