Orientador: José Antonio Dell'Áqua Junior / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: André Maciel Crespilho / Resumo: Muitas biotecnologias estão sendo desenvolvidas visando a conservação do material genético de garanhões de alto valor zootécnico. Dentre estas pode-se destacar a colheita de espermatozoides do epidídimo de animais que sofreram algum trauma ou enfermidade que impossibilitem a colheita do sêmen, óbito ou eutanásia. Porém essas células espermáticas não entram em contato com o plasma seminal, importante por conter proteínas que participam de processos relacionados à proteção e ligação dos espermatozoides aos reservatórios espermáticos na tuba uterina. Neste sentido, sugere-se que haja importantes alterações bioquímicas nas células espermáticas do epidídimo, objetivando-se assim com esta revisão, estudar as principais diferenças morfofuncionais entre os espermatozoides provenientes do epidídimo e do ejaculado / Abstract: Several biotechnologies are being developed aiming genetic material conservation of stallions with high zootechnical value, as we can highlight the harvest epididymis's sperm of animals who suffered trauma or illness that makes impossible the semen collection, death or euthanasia. However these sperm cells do not get in touch with seminal plasma, important whereas it has proteins that participate in processes related to the protection and binding of sperm to the sperm reservoir in the oviduct. In this sense, it suggests that there is significant biochemical changes in epididymal sperm, aiming with this review to study the main morphological and functional differences between the sperm from the epididymis and ejaculated / Mestre

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Frederico Ozanam Papa / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Aulus Cavalieri Carciofi / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Resumo: O objetivo desse projeto foi determinar a eficiência do uso de antioxidantes na prevenção de efeitos deletérios da congelação de sêmen em cães férteis e subférteis. Para isso foram executados dois experimentos: O primeiro teve como objetivo comparar os resultados da congelação do sêmen de cães férteis e subférteis, utilizando meio diluente a base de TRIS/gema de ovo/glicerol, com a adição ou não de antioxidantes (Catalase, Superóxido Dismutase e suas associações, ácido ascórbico, tocoferol e suas associações). O segundo experimento teve como objetivo comparar os resultados da congelação do sêmen de cães férteis e subférteis, suplementados com 500mg de vitamina C e E, por via oral, durante 60 dias. Foram utilizados 13 cães, sendo 7 considerados férteis e 6 classificados com subférteis. Os cães férteis apresentavam exame andrológico dentro dos padrões recomendados pelo CBRA; os subférteis apresentavam baixa concentração espermática (< 20x10 6 sptz/mL) e/ ou alto índice de patologias espermáticas (> 30%). O sêmen foi congelado em três momentos, antes do início da suplementação (M1), 30 (M2) e 60 dias (M3) após o início da suplementação oral. O sêmen foi coletado por manipulação digital do pênis e analisado para: motilidade, vigor, concentração e morfologia espermática. A congelação do sêmen foi realizada pelo método descrito por Chirinéa et al. (2006). A descongelação foi realizada a 70ºC por 8 segundos. Logo após as amostras foram avaliadas na análise computadorizada (CASA) e avaliação de integridade de membrana acrossomal e plasmática. Também foi analisada a taxa de peroxidação lipídica e antioxidantes: SOD, catalase, vitaminas C e E no plasma seminal. Pode-se concluir que a suplementação oral, no meio diluente ou a sua associação pode trazer benefícios para o processo de congelação/descongelação de cães... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this project was to determine the efficiency of antioxidants in preventing the deleterious effects of freezing semen in fertile and subfertile dogs. For this purpose two experiments were performed: The first aim was to compare the results of frozen semen of fertile and subfertile dogs, using the TRIS diluent / egg yolk / glycerol extender, with or without addition of antioxidants (Catalase, Superoxide dismutase and their associations, ascorbic acid, tocopherol and their associations). The second experiment aimed to compare the results of frozen semen of fertile and subfertile dogs supplemented with 500mg of vitamin C and E, orally for 60 days. We used 13 dogs, 7 were considered fertile and 6 classified as subfertile. The dogs had been considered fertile breeding soundness examination within the standards recommended by CBRA; the subfertile had lower sperm concentration (<20x10 6 sptz / mL) and / or high rate of sperm pathologies (> 30%). Semen was frozen in three stages, before the start of supplementation (M1), 30 (M2) and 60 days (M3) after the initiation of supplementation. Semen was collected by digital manipulation of the penis and analyzed for: motility, vigor, concentration and morphology. The frozen semen was performed by the method described by Chirinea et al. (2006). Thawing was performed at 70 ° C for 8 seconds. Soon after the samples were evaluated in the computerized analysis (CASA) and assessment of membrane integrity and acrosomal plasma. We also analyzed the rate of lipid peroxidation and antioxidants: SOD, catalase, vitamins C and E in seminal plasma. It can be conclude that oral supplementation, in the extender or your association can benefit the process of freezing / thawing of dogs. Especially for those with reproductive problems and may even, with oral therapy to reduce or eliminate this feature / Doutor

A criopreservação de sêmen é um processo de grande estresse celular, que impõe aos espermatozóides condições extremamente desfavoráveis à manutenção de sua viabilidade. Diversos estudos propõem que a produção excessiva de espécies reativas de oxigênio e a perda da capacidade antioxidante do sêmen potencializam os efeitos prejudiciais dessa biotécnica. O objetivo do presente estudo foi avaliar as atividades antioxidantes enzimáticas e não enzimáticas e a concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS), como indicador de lipoperoxidação do sêmen eqüino, durante a criopreservação. Quinze ejaculados de seis garanhões comprovadamente férteis da raça Crioula, foram submetidos a criopreservação, utilizando-se diluente comercial à base de citrato-Hepes, gema de ovo e leite. Foram avaliadas as atividades das enzimas catalase, glutationa peroxidase e superóxido dismutase; o potencial antioxidante total e a concentração de TBARS no sêmen fresco, diluído e congelado. Uma maior atividade das três enzimas estudadas foi observada no sêmen fresco em relação ao sêmen diluído e congelado (p<0,0001), não havendo diferença entre os dois últimos (p>0,05). Não houve diferença na atividade antioxidante não enzimática nas três fases estudadas (p>0,05). Não foi observada nenhuma associação tanto das defesas antioxidantes enzimáticas como das não enzimáticas com a qualidade do sêmen congelado. A queda na motilidade do sêmen congelado pode ser parcialmente explicada pelo aumento da peroxidação dos lipídios do sêmen. / Semen cryopreservation is a stressful procedure which exposes spermatozoa to harmful conditions leading to reduced cell viability. Several studies propose that reactive oxygen species overproduction and decreased antioxidant capacity of semen may increase the damaging effects of the technique. The aim of this work was to evaluate the enzymatic and nonenzymatic antioxidant activity, as well as the concentration of thiobarbituric acid reactive substances (TBA-RS) as and indicator of lipid peroxidation on equine semen during cryopreservation. Fifteen ejaculates from six fertile Criollo stallions were cryopreserved using a commercial extender (citrate-Hepes, egg yolk and skim milk). Activity of catalase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase; the total radical-trapping antioxidant potential and TBA-RS content was assessed in native semen, semen diluted in semen extender and thawed semen. All three enzymes showed higher activities in native semen than in diluted and thawed semen (p<0,0001). No difference was observed between diluted and thawed semen (p>0,05). The non-enzymatic defenses did not differ along cryopreservation process (p>0,05). There was not any association between semen quality and both enzymatics and non-enzymatics antioxidant defenses. The decreasing of spermatozoa motility might be partially explained by the increase in semen lipoperoxidation.

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Coorientador: Enilson Geraldo Ribeiro / Coorientador: Fábio Morato Monteiro / Coorientador: Flávia Fernanda Simili / Banca: André Maciel Crespilho / Banca: Roberta Carrilho Canesin / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Letícia Zoccolaro Oliveira / Resumo: As dietas enriquecidas com fontes de ácidos graxos poliinsaturados (AGPs) para touros jovens no período da puberdade a maturidade sexual podem exercer efeito positivo no desempenho reprodutivo. Além disso, selecionar animais jovens de melhor eficiência alimentar (baixo consumo alimentar residual - CAR) é muito importante para os programas de melhoramento genético. Dentro desse contexto, o objetivo do presente estudo foi avaliar os parametros reprodutivos de machos jovens da raça Nelore de baixa e alta eficiência alimentar suplementados com ácidos graxos (AGs) protegidos em regime de pastagem. Foram utilizados 48 machos jovens com média de 14,3±0,13 meses de idade e peso de 389,5±5,43 kg. O delineamento experimental foi inteiramente casualisado em arranjo fatorial 2 x 2 (CAR x suplementação) sendo, 24 animais baixo ou negativo CAR com ou sem suplementação com AGs e 24 alto ou positivo CAR com ou sem suplementação com AGs. As dietas experimentais foram isoproteicas. O período de suplementação foi de dezembro à outubro. Os animais foram mantidos em pastagem de capim-marandu, em lotação contínua e taxa de lotação fixa. As mensurações de características de crescimento, de consumo alimentar, concentrações plasmáticas de metabólitos e hormônios, avaliação andrológica e ultrassonografia testicular foram realizadas a cada 28 dias, dos 14 aos 24 meses de idade. A criopreservação espermática foi realizada na última colheita, momento em que os animais apresentavam 24 meses de idade. Após... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Diets enriched with sources of polyunsaturated fatty acids (PUFAs) for young bulls from puberty to sexual maturity may have a positive effect on reproductive performance. In addition, selecting young animals with better feed intake (low residual feed intake - RFI) is very important for breeding programs. Thus, the aim of this study was to evaluate the reproductive parameters of young Nelore bulls of low and high feed intake supplemented with PUFA in the pasture. The total of 48 young males were used with a 14.3±0.13 months of age and a weight of 389.5±5.43 kg. The experimental design were completely randomized in a factorial 2 x 2 (RFI x supplementation) being 24 animals high RFI with or without supplementation with PUFA and 24 animals low RFI with or without supplementation with PUFA. The diets were isoproteic. The supplementation period was from December to October and the animals were kept in Brachiaria brizantha cv. Marandu pasture in continuous stocking during the experimental period. The measurements of growth characteristics, feed intake, plasma concentrations of metabolites and hormones, andrological evaluation and testicular ultrasonography were performed every 28 days, from 14 to 24 months of age. Sperm cryopreservation was performed it the last collections, at which time the animals were 24 months old. After thawing, computer aided semen analysis (CASA), rapid thermoresistance sperm tests (TTR), integrity of the plasma membrane and acrosomal and in vitro embryo pro... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Denise Pereira Leme / Resumo: O presente estudo objetivou comparar diferentes curvas de congelação utilizando-se uma máquina com curvas programadas (TK3000®) com congelação em vapor de nitrogênio liquido, utilizando sêmen de garanhões de alta e baixa congelabilidade. Comparou-se a eficácia do período de estabilização do sêmen em diferentes sistemas de transporte refrigerado (Botutainer® e Equitainer®) em relação à estabilização feita em refrigerador Minitüb® previamente à congelação. No experimento I e II foram utilizados 4 garanhões com sêmen de alta congelabilidade. As amostras foram refrigeradas durante 20 minutos previamente à congelação em refrigerador Minitüb® (GM), Botutainer® (GB) e Equitainer® (GE). Não houve diferença entre os grupos quanto a motilidade total (MT) e motilidade progressiva (MP): GM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) demonstrando que os dispositivos podem ser utilizados como uma alternativa aos refrigeradores. Os valores de integridade de membrana plasmática (IMP%) foram GM(49,43a); GB(48,70a); GE(44,90b). No experimento II foram utilizadas 3 curvas programadas na TK3000® (C1, C2, C3) e a metodologia em caixa de isopor (GC). As comparações foram realizadas em relação ao GC e não apresentaram diferença significativa. Valores em porcentagem de MT, MP e IMP: GCxC1 (70 x 67,5; 35,7 x 32; 48,3 x 46); GCxC2 (63,3 x 67,66; 33,3 x 34,8; 45,4 x 48,3); GCxC3 (63,2 x 65; 32,2 x 32,4; 48,09 x 49,3). No teste de fertilidade, as inseminações foram realizadas com amostras congeladas com C2 e GC apresentando índices de prenhez de 65 e 60% respectivamente, sem diferença significativa. A TK3000® foi tão eficaz quanto à metodologia de congelação em caixa de isopor em relação à congelabilidade e fertilidade. Todas as curvas testadas foram eficientes na manutenção da viabilidade...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This present study compared freezing ratios in a programmable freezer (TK3000) performed by usual methodology, using good freezers and poor freezers stallions. The semen stabilization period efficiency was compared in cooled semen transport systems (Botutainer® e Equitainer®) in relation with Minitüb® fridge before the cryopreservation. Four good freezers stallions was used in experiments I and II. Samples were cooled during 20 minutes before the cryopreservation in a Minitüb® fridge (GM), Botutainer® (GB) and Equitainer® (GE). There was not difference between groups in relation with total motility (TM) and progressive motility (PM): CM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) showing that transport systems can be used as an alternative instead of fridges. Plasma membrane integrity (MPI%) values were CM (49,43a); GB (48,70a); GE (44,90b). Three frozen rations were used in experiment II in the TK3000® (C1, C2, C3) and the isothermic box (CG). Results from each freezing ratio were compared to the control group and no difference was observed. Percentage values from TM, PM and MPI were the following: CGxC1(70x67,5; 35,7x32; 48,3x46); CGxC2 (63,3x67,66; 33,3x34,8; 45,4x48,3); CGxC3 (63,2x65; 32,2x32,4; 48,09x49,3). In the fertility test, artificial inseminations were performed with C2 and GC frozen samples showing pregnancy rates of 65 and 60%, respectively, without significant difference. The TK3000® was as efficient as the isothermic box frozen methodology in relation to freezability and fertility. All freezing ratios were efficient in semen viability maintenance. Ten Mangalarga Marchador breed stallions were used in the experiment III. The samples were shared and frozen simultaneously in two programmable freezers with different ratios (G2 e G3) and in an isothermic box (CG). For the statistical analisys, semen ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Eunice Oba / Banca: Romildo Romualdo Weis / Resumo: Objetivou-se estudar os efeitos do extrato de lipoproteínas de baixa densidade sobre o sêmen ovino durante a refrigeração. Vinte amostras de 5 carneiros foram refrigeradas por 24 e 48 horas na geladeira para refrigeração Minitube, nos meios diluentes Glicina Gema Leite, Glicina Gema purificada Leite e Glicina Extrato Leite e submetidas a teste de exaustão (37ºC/240 minutos) sendo avaliados in vitro por meio das análises da cinética espermática computadorizada, da morfologia e da integridade da membrana plasmáticas. Após 24 e 48 horas de refrigeração, os meios Glicina Gema purificada Leite e Glicina Extrato Leite apresentaram resultados superiores ao meio Glicina Gema Leite, após o teste de exaustão, para o parâmetro de integridade de membrana plasmática. Para a integridade de acrossomo o meio Glicina Gema purificada Leite foi superior (P<0,05) em relação ao meio Glicina Gema Leite durante o teste de exaustão. Nos demais parâmetros estudados de cinética espermática e morfologia (cauda dobrada), não houveram diferenças significativas (P>0,05) entre os meios. Entre os momentos, houve diferença significativa (P<0,05) em todos os meios durante o teste de exaustão / Abstract: The objective was to study the effects of extract of low density lipoproteins on ovine semen during cooling. Twenty samples of five sheep were chilled for 24 and 48 hours in the refrigerator for cooling Minitube, in extenders Glycine Yolk Milk, Glycine purified Yolk Milk and Glycine Extract Milk and tested to exhaustion (37 ° C/240 min) were evaluated in vitro by means of computerized analysis of sperm kinetics, morphology and plasma membrane integrity. After 24 and 48 hours of refrigeration, the extenders Glycine purified Yolk Milk and Glycine Extract Milk showed better results than extender Glycine Yolk Milk, after the exhaustion test, for the parameter of membrane integrity. For the integrity of the acrosome through Glycine purified Yolk Milk was higher (P <0.05) than Glycine Yolk Milk during the exhaustion test. In other parameters of sperm kinetics and morphology, there were no significant differences (P> 0.05) among extenders. Between times, significant difference (P <0.05) in all extenders during the exhaustion test / Mestre

Orientador: Mateus José Rodrigues Paranhos da Costa / Coorientador: Lívia Carolina Magalhães Silva / Coorientador: Aline Cristina Sant'Anna / Banca: Paula Pimentel Valente / Banca: Luciandra Macedo de Toledo / Banca: Maria Imaculada Fonseca / Banca: Guilherme Borges Bond / Resumo: Os objetivos gerais com esta tese foram identificar os métodos mais adequados para avaliação de temperamento de bovinos da raça Girolando, além de entender suas relações com desempenho produtivo e reprodutivo. Para tanto, foram realizados dois estudos: a) Estudo 1- Avaliação do temperamento de touros da raça Girolando e sua relação com o desempenho reprodutivo. No qual, o objetivo foi caracterizar o temperamento de touros Girolando e estudar o efeito dessa característica na performance reprodutiva desses animais. Foram realizadas avaliações de temperamento e de desempenho reprodutivo em 281 touros submetidos ao Pré-teste de Progênie da GIROLANDO. Foram encontradas variações do temperamento dos animais ao longo do tempo e efeito significativo do grupo genético. Nenhuma das variáveis de performance reprodutiva foi significativamente afetada pelos indicadores de temperamento (VF, ITEMP e ET; P > 0,05 para todas as análises). Concluímos que os indicadores de temperamento utilizados são um bom indicador de temperamento em touros Girolando, já que permite a identificação objetiva dos touros com caráter indesejável e que causam dificuldades de manejo. Não foram encontradas associações do temperamento com a performance produtiva dos touros, estudos adicionais são necessários para aumentar o conhecimento sobre os mecanismos nos quais o temperamento dos touros pode afetar a reprodução. b) Estudo 2- Temperamento de vacas em lactação da raça Girolando e sua relação com a produção e o flu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this research was to identify and validate more appropriate methods for temperament evaluation of Girolando cattle, in addition to understanding their relationships with productive and reproductive performance. Two studies were performed: a) Study 1- Evaluation of the temperament of Girolando bulls and their relationship with reproductive performance; b) Study 2- Temperament of Girolando cows and its relationship with production and milk flow. In Study 1, the objective was to characterize the temperament of Girolando bulls and to study the effect of this trait on the reproductive performance of animals. To assessed the temperament and the reproductive performances of 281 bulls (participants of the pre- progeny test conducted by the Brazilian Girolando Breeders Association and Embrapa). Variations of the temperament of the animals were found over time and significant effect of the genetic group only for variable crush test (ET). None of the reproductive performance variables was significantly affected by the temperament indicators (VF, ITEMP and ET, P> 0.05 for all analyzes). We conclude that the temperament indicators used are a reliable indicator of temperament in Girolando bulls. No associations of temperament with the productive performance of the bulls were found, additional studies are necessary to increase the knowledge about the mechanisms in which the temperament of the bulls can affect the reproduction. In Study 2 the objective was to study how tempe... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O presente estudo visou verificar o efeito sobre alguns parâmetros da seleção por gradiente de Percoll® e da adição de plasma seminal do sêmen eqüino preservado a +4oC. O primeiro experimento avaliou a taxa de recuperação de espermatozóides após seleção por Percoll® em diferentes protocolos de centrifugação. Foram realizadas 5 coletas de sêmen de um garanhão. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração. Foram retiradas duas amostras de 4 mL, diluídas em leite desnatado UHT com concentrações de 50 e 100 x 106 espermatozóides por mL cada. Cada uma destas amostras foi dividida em 4 alíquotas de 1 mL, que foram então colocadas sobre Percoll® e submetidas a diferentes tempos e velocidades de centrifugação. V1 - 200 g (5 min) + 800 g (10 min); V2 - 800 g (10 min); V3 - 800 g (15 min); V4 - 800 g (20 min). Após esse processo, o sobrenadante foi desprezado e o pellet de cada alíquota ressuspendido com 0,5 mL de leite UHT. As 8 amostras foram novamente avaliadas para concentração, motilidade e vigor. O segundo experimento estudou o efeito da adição de plasma seminal de diferentes qualidades ao sêmen eqüino selecionado por gradiente de Percoll® e resfriado a +4°C por até 72 horas. Foram utilizados 40 ejaculados de 4 garanhões, sendo dois com boa qualidade de sêmen e dois com baixa qualidade de sêmen. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração e preparadas cinco frações de 100x106 espermatozóides, diluídas 1:1 (v/v) em EDTA-Glicose. Quatro delas, constituídas por 1mL a 2mL, foram depositadas sobre Percoll®. A fração restante foi centrifugada em tubo de vidro de 10 mL, sob as mesmas condições de tempo e velocidade das demais amostras. Foi realizada centrifugação por 5 minutos em 200 g, seguida de 10 minutos em 800 g. O sobrenadante foi descartado e o pellet ressuspendido com leite UHT desnatado compondo os seguintes tratamentos: Sp: 1,5 mL de leite UHT desnatado sem adição de plasma seminal; Hp: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal homólogo; Ap: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal do pool de alta qualidade; Bp: 1,425mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L plasma seminal do pool de baixa qualidade; Cc: foi centrifugada sem seleção por Percoll®, teve seu sobrenadante descartado e ressuspendida com 2 mL de leite UHT; C : uma amostra de sêmen diluído em leite UHT foi mantida como controle no processo de armazenamento. As amostras foram resfriadas a +4°C e examinadas a cada 24h até as 72 horas em relação à motilidade, funcionalidade de membrana (teste hiposmótico) e integridade de membrana (CFDA/PI). A seleção por gradiente descontínuo de Percoll® 90/45% mostrou-se efetiva na recuperação de espermatozóides com motilidades progressiva e total. A adição de 5% de plasma seminal ou a ausência de plasma não influenciaram os valores da motilidade das amostras selecionadas por gradiente de Percoll®. A seleção por Percoll não influenciou na percentagem de células com membrana plasmática funcional. Concentrações superiores a 2% de plasma seminal resultaram em decréscimo do número de células com membrana funcional, enquanto que as amostras sem plasma seminal apresentaram os melhores resultados e o grupo controle, que apresentava a maior percentagem de plasma, os piores. A utilização de Percoll® não separou células com alteração de membrana. A percentagem de células com membrana completamente íntegra foi significativamente maior nas amostras que sofreram processo de centrifugação, independentemente da seleção. O processo de seleção por Percoll® foi efetivo na recuperação de espermatozóides de eqüino com motilidade progressiva, mas não selecionou espermatozóides quanto à funcionalidade nem à integridade de membrana. Concentrações inferiores a 2% de plasma seminal melhoraram a funcionalidade de membrana. A ausência de plasma seminal melhorou os resultados de integridade das membranas plasmática e acrossomal; e a adição de plasma de alta qualidade não melhorou a motilidade de espermatozóides selecionados por Percoll®.

A criopreservação de sêmen é um processo de grande estresse celular, que impõe aos espermatozóides condições extremamente desfavoráveis à manutenção de sua viabilidade. Diversos estudos propõem que a produção excessiva de espécies reativas de oxigênio e a perda da capacidade antioxidante do sêmen potencializam os efeitos prejudiciais dessa biotécnica. O objetivo do presente estudo foi avaliar as atividades antioxidantes enzimáticas e não enzimáticas e a concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS), como indicador de lipoperoxidação do sêmen eqüino, durante a criopreservação. Quinze ejaculados de seis garanhões comprovadamente férteis da raça Crioula, foram submetidos a criopreservação, utilizando-se diluente comercial à base de citrato-Hepes, gema de ovo e leite. Foram avaliadas as atividades das enzimas catalase, glutationa peroxidase e superóxido dismutase; o potencial antioxidante total e a concentração de TBARS no sêmen fresco, diluído e congelado. Uma maior atividade das três enzimas estudadas foi observada no sêmen fresco em relação ao sêmen diluído e congelado (p<0,0001), não havendo diferença entre os dois últimos (p>0,05). Não houve diferença na atividade antioxidante não enzimática nas três fases estudadas (p>0,05). Não foi observada nenhuma associação tanto das defesas antioxidantes enzimáticas como das não enzimáticas com a qualidade do sêmen congelado. A queda na motilidade do sêmen congelado pode ser parcialmente explicada pelo aumento da peroxidação dos lipídios do sêmen. / Semen cryopreservation is a stressful procedure which exposes spermatozoa to harmful conditions leading to reduced cell viability. Several studies propose that reactive oxygen species overproduction and decreased antioxidant capacity of semen may increase the damaging effects of the technique. The aim of this work was to evaluate the enzymatic and nonenzymatic antioxidant activity, as well as the concentration of thiobarbituric acid reactive substances (TBA-RS) as and indicator of lipid peroxidation on equine semen during cryopreservation. Fifteen ejaculates from six fertile Criollo stallions were cryopreserved using a commercial extender (citrate-Hepes, egg yolk and skim milk). Activity of catalase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase; the total radical-trapping antioxidant potential and TBA-RS content was assessed in native semen, semen diluted in semen extender and thawed semen. All three enzymes showed higher activities in native semen than in diluted and thawed semen (p<0,0001). No difference was observed between diluted and thawed semen (p>0,05). The non-enzymatic defenses did not differ along cryopreservation process (p>0,05). There was not any association between semen quality and both enzymatics and non-enzymatics antioxidant defenses. The decreasing of spermatozoa motility might be partially explained by the increase in semen lipoperoxidation.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-09-08T16:56:50Z No. of bitstreams: 1 2008_DanieleOgaFutino.pdf: 344538 bytes, checksum: d57e476051f680fd9bf2ae927cc6d356 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2009-09-22T16:00:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_DanieleOgaFutino.pdf: 344538 bytes, checksum: d57e476051f680fd9bf2ae927cc6d356 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-22T16:00:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_DanieleOgaFutino.pdf: 344538 bytes, checksum: d57e476051f680fd9bf2ae927cc6d356 (MD5) Previous issue date: 2008-05 / A crescente demanda por biotécnicas reprodutivas em cães tem despertado grande interesse no desenvolvimento de protocolos de congelação de sêmen canino que, associados à correta identificação do momento ótimo para a inseminação, resultem em taxas de fertilidade próximas às da inseminação artificial com sêmen fresco ou resfriado. A grande vantagem da congelação do sêmen é a sua viabilidade por tempo indeterminado. O crioprotetor de eleição na congelação do sêmen canino é o glicerol, entretanto a busca por crioprotetores alternativos tem sido crescente. O presente trabalho objetivou comparar a eficiência da metil-formamida (MF) e da dimetil-formamida (DF) em relação ao glicerol (GL) como crioprotetores na congelação do sêmen canino. Para o experimento, foram utilizados pools de amostras de sêmen de cinco cães da Polícia Federal, coletadas por manipulação digital. Cada pool foi fracionado em três amostras, sendo cada uma delas submetida a um dos três crioprotetores, sempre à concentração final de 3% em diluidor Tris-gema. Cada tratamento foi repetido cinco vezes. O sêmen foi avaliado subjetivamente quanto à motilidade total e progressiva, vigor e morfologia logo após a coleta do sêmen, formação do pool, diluição, resfriamento e descongelação. As alíquotas foram resfriadas e equilibradas a 4°C por uma hora e meia e envasadas em palhetas de 0,5m?. Em seguida, procedeu-se a congelação, expondo-se as palhetas ao vapor de nitrogênio líquido por 15 minutos seguido de imersão e armazenamento no nitrogênio líquido. As palhetas foram acondicionadas em botijão criogênico por um período mínimo de sete dias antes da descongelação. A descongelação foi feita em banho-maria a 37°C durante um minuto, permanecendo a esta temperatura durante 30 minutos para a realização do teste hiposmótico (HOST). A longevidade espermática foi feita realizando-se o teste de termorresistência (TTR). A análise estatística foi realizada utilizando-se análises de variância (ANOVA) e teste PLSD de Fischer. As amostras de sêmen fresco apresentaram características físicas e morfológicas dentro da normalidade (93,60±7,60%, 90,40±8,70%, 4,8±0,44 e 90,25±3,17% para motilidade total, motilidade progressiva, vigor e morfologia normal, respectivamente). Após a descongelação, foram observadas diferenças significativas (P<0,05) entre GL e DF em relação à motilidade total e progressiva e vigor. Em relação à MF, não houve diferenças significativas em relação ao GL ou à DF em nenhum parâmetro avaliado. As médias para motilidade total, motilidade progressiva, vigor e morfologia normal na pós-descongelação foram 69,00±5,47%, 61,00±7,41%, 2,9±0,54% e 57,10±5,01% para o GL, 59,00±8,94%, 50,00±10,00%, 2,5±0,70 e 66,90±7,74% para a MF e 44,00±21,03%, 37,00±19,87%, 2,1±0,65 e 61,10±5,59% para a DF, respectivamente. No teste HOST o GL apresentou-se superior à MF e DF (57,80±12,47%, 35,80±18,47% e 34,40±9,40%, porcentagens médias de células com membranas íntegras para GL, MF e DF, respectivamente). Durante o TRT, não houve diferenças entre o GL e a MF e ambos mostraram-se superior à DF. De acordo com os resultados encontrados, pode-se concluir que a MF apresenta resultados semelhantes ao GL, e, portanto pode ser considerada uma alternativa como crioprotetor na criopreservação de sêmen canino. Testes comparando diferentes concentrações da MF são necessários visando seu melhor desempenho como crioprotetor. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Due to an increasing demand for canine reproductive biotechnologies, it has been crescent interests for improving freezing protocols employed for canine semen which, associated to a correct identification of optimal breeding time, results on fertility rates close to those achieved with artificial insemination with fresh or cooled semen. The unlimited viability of cryopreserved semen is the greatest advantage of this technique. Glycerol is the most commonly used cryoprotectant for dog sperm however the search for alternative cryoprotectants has increased. The aim of the present work was to compare the efficiency of methyl-formamide (MF), dimethyl-formamide (DF) and glycerol (GL) as cryoprotectants in canine semen cryopreservation. Five dogs were used in the experiment. Ejaculates were collected, pooled and divided into three aliquots and each one was submitted to one of the three cryoprotectants, with final concentration of 3% in egg yolk-TRIS extender. Treatments were repeated five times. Semen was subjectively evaluated for total and progressive motility, vigor and morphology immediately after each of the following procedures: semen collection, pool formation, dilution, chilling and freezing/thawing. Sperm membrane functional integrity was assessed by hypo-osmotic swelling test (HOST), ans longevity was assessed using the thermoresistance test (TRT). Fresh semen showed normal physical and morphological characteristics. After thawing, differences were observed between semen frozen using GL and DF regarding total and progressive motility and bigot (P<0.05) but not between MF and GL or MF and DF. Means for total motility, progressive motility, vigor and morphologically normal spermatozoa were respectively 69,00±5,47%, 61,00±7,41%, 2,9±0,54% e 57,10±5,01% for GL, 59,00±8,94%, 50,00±10,00%, 2,5±0,7 and 66,90±7,7% for MF and 4,00±21,03%, 37,00±19,87%, 2,1±0,65 and 61,10±5,59% for DF. On HOST, GL was superior to MF and DF (57,80±12,47%, 35,80±18,47% and 34,40±9,40%, respectively). During TRT, both GL and MF were superior to DF, with no differences between GL and MF. In conclusion, the use of MF as cryoprotectant showed results similar to GL, except on HOST, and can br considered as an alternative in canine semen cryopreservation. Further studies testing different concentrations of MF may improve its effects on cryopreservation of canine semen.