Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:30Z : No. of bitstreams: 1 000846057_20170327.pdf: 263652 bytes, checksum: 108c987b7002f95370d568dcefddbd17 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-31T12:19:18Z: 000846057_20170327.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-31T12:20:21Z : No. of bitstreams: 1 000846057.pdf: 955739 bytes, checksum: c0b1f415f6242a93590cb11b950f1198 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Candida albicans, presente nos biofilmes orais, é a principal responsável pela estomatite protética. Normalmente essa infecção é assintomática, porém, quando os sinais e sintomas estão presentes podem causar sangramento das mucosas, edema local, ardor ou outras sensações dolorosas. Os medicamentos tópicos, como a nistatina e o miconazol, têm sido utilizados, entretanto, o efeito diluente da saliva, movimentação da língua e da musculatura bucal reduzem a dose desses agentes a concentrações subterapêutica, além do alto índice de recorrência da infecção. Assim, é importante a procura por novos antifúngicos, que sejam eficientes e não tóxicos. A cavidade bucal é constantemente banhada de saliva, um fluido biológico com potente atividade antifúngica e bacteriana. Com o recente progresso na análise do proteoma salivar, o número de proteínas salivares identificado aumentou consideravelmente. A Histatina 5 gerada proteoliticamente a partir de Hst-3, durante a maturação dos grânulos nas glândulas salivares das parótidas tem sido extensivamente estudada devido a sua maior ação fungicida sua notável ação contra a C. albicans. Métodos baseados em medidas da atividade metabólica e viabilidade celular, como o ensaio de redução do sal XTT (hidróxido de 2,3-bis (2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil) -5 - [(fenilamino) carbonil] -2H-tetrazólio ) e contagem de unidades formadoras de colônia (UFC) tem sido utilizados para a avaliação de novos medicamentos capazes de inibir a formação do biofilme. Por serem feitos separadamente, esses ensaios demandam tempo, alto custo e variabilidade entre as amostras. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar inicialmente, i) os efeitos do sal XTT e os demais compostos utilizados para realizar o ensaio de redução de XTT, sobre a viabilidade celular dos biofilmes de C. albicans e S. Mutans; ii) avaliar o potencial da histatina...(Resumo completo clicar acesso eletrônico) / Candida albicans, present in oralbiofilms, is primarily responsible for denture stomatitis. Usually the infection is asymptomatic, but when signs and symptoms are present it can cause mucosal bleeding, swelling, burning or other painful sensations. Topical drugs such as miconazole and nystatin have been used, however, the diluent effect of saliva, the tongue and oral muscles movements reduce the dose of these agents to subtherapeutic concentrations, besides the high rate of recurrence of the infection. Thus, it is important to search for new antifungals, which are efficient and non-toxic. The oral cavity is constantly in presence of saliva, a biological fluid with potent antifungal and bacterial activity. With the recent progress in analysis of saliva proteome, the number of identified salivary proteins has increased considerably. The histatin-5 generated proteolytically from Hst-3, during maturation of the granules in the salivary glands of the parotid has been extensively studied due to their greater fungicidal action his remarkable action against C. albicans. Methods based on measurements of metabolic activity and cell viability as reduction assay salt XTT (2,3-bis hydroxide (2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl) -5 - [(phenylamino) carbonyl] - 2H-tetrazolium) and counting of colony forming units (CFU) have been used for the exploration of new drug potential on inhibitory development of biofilm. The associations between the metabolic activities experiments with counting CFU are labor-intensive processes that need to be done separately. This study aimed to evaluate initially i) the effects of XTT salt and other compounds used to make the XTT reduction assay on cell viability of biofilms of C. albicans and S. mutans; ii) evaluate the potential of histatin 5 in protecting the human oral epithelium against C. albicans and iii) identify the heterotypic complexes formed between the histatin 5, a natural...(Complete abstrat electronic access below)

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-04-05T18:13:15Z No. of bitstreams: 1 2017_ElisaCançadoPortoMascarenhas.pdf: 3785190 bytes, checksum: dacd35ecdbfd2e11c871abca02b55626 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-04-24T22:23:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ElisaCançadoPortoMascarenhas.pdf: 3785190 bytes, checksum: dacd35ecdbfd2e11c871abca02b55626 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-24T22:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_ElisaCançadoPortoMascarenhas.pdf: 3785190 bytes, checksum: dacd35ecdbfd2e11c871abca02b55626 (MD5) Previous issue date: 2018-04-24 / O câncer de mama é a segunda neoplasia mais diagnosticada no mundo, sendo a principal causa de morte relacionada ao câncer entre as mulheres. Sua detecção precoce oferece a promessa de um tratamento menos agressivo e aumento na sobrevida. Nesse cenário, surgem os estudos com biomarcadores, sendo a saliva cada vez mais reconhecida como um excelente veículo diagnóstico, uma vez que pode ser coletada de forma simples e não invasiva. Nesse contexto, esse trabalho propõe-se a avaliar a expressão proteica do CA 15.3 na saliva e no sangue de pacientes com câncer de mama e de controles saudáveis. Assim, avaliou-se as concentrações séricas de CA 15.3 pelo ensaio de eletroquimioluminescência, quanto as concentrações salivares de CA 15.3 por ensaios de quimioluminescência e ELISA. O trabalho também correlacionou os níveis de CA 15.3 séricos e salivares com o estadiamento e com o perfil molecular do câncer de mama. A validação diagnóstica foi realizada, determinando sua sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e acurácia. Os resultados mostraram que as concentrações séricas e salivares de CA 15.3 não foram capazes de discriminar pacientes saudáveis de pacientes portadoras de câncer de mama. A associação entre os níveis séricos e salivares do CA 15.3 com o perfil molecular e com estadiamento foi negativa. Ainda, o desempenho do método de ELISA para quantificação do CA 15.3 salivar foi superior quanto à sensibilidade, VPP, VPN e acurácia comparativamente ao método de quimioluminescência. Porém, a quimioluminescência das amostras de saliva mostrou melhor desempenho quanto à especificidade em comparação ao método ELISA. Não foi observada correlação entre os níveis séricos e salivares de CA 15.3. Esse estudo confirmou a presença do CA 15.3 na saliva, podendo a mesma ser usada em estudos futuros com esse propósito. No entanto, não foi possível comprovar a utilização do biomarcador CA 15.3 na saliva para finalidade diagnóstica. Futuras investigações devem incluir maior número de pacientes e ampliação dos ensaios e biomarcadores para responder a essa pergunta, bem como, sua utilização para fins prognósticos e monitoramento de tratamento deve ser avaliada em estudos longitudinais. / Breast cancer is the second most diagnosed neoplasia in the world and the leading cause of cancer-related death in women. Its early detection offers the promise of a less aggressive treatment and increases survival’s chance. In this scenario, the research with biomarkers appear and saliva is increasingly being recognized as an excellent mean of diagnosis, once it can be collected in a simple and non-invasive way. In this context, this work proposes to evaluate the protein expression of CA 15.3 in saliva and blood of patients with breast cancer and healthy controls. Therefore, CA 15.3 serum concentrations were evaluated through electrochemiluminescence assay and CA 15.3 salivary concentrations per chemiluminescence and ELISA assay. The work also correlated the serum and salivary levels of CA 15.3 with the staging and the molecular profile of the breast cancer. The diagnosis validation was made in order to determine its sensitivity, specificity, PPV, NPV, and accuracy. The results showed that the serum and salivary concentrations of CA 15.3 were not able to distinguish healthy patients from the ones with breast cancer. The association of the serum and salivary levels of CA 15.3 with the molecular profile and the staging was negative. Still, the performance of ELISA assay for quantification of salivary CA 15.3 was higher for sensitivity, PPV, NPV, and accuracy when comparing to chemiluminescence assay. However, the chemiluminescence of the saliva samples showed a better performance in terms of specificity when comparing to ELISA assay. No correlation between serum and salivary levels of CA 15.3 was observed. This study confirmed the presence of CA 15.3 in saliva and it can be used in future researches with this purpose. However, it was not possible to prove the use of the biomarker CA 15.3 in saliva for diagnosis purposes. Future investigations must include a bigger number of patients and an expansion of the tests and biomarkers in order to answer this question. As well as, their use for prognostic purposes and treatment monitoring must be evaluated in longitudinal studies.

A saliva desempenha um importante papel na manutenção das condições fisiológicas da cavidade bucal. As reduções na quantidade de saliva são conhecidas por aumentar o risco de doenças bucais. Xerostomia ou percepção de boca seca é reconhecida como um importante fator de risco para doenças dentárias. Além disso, é uma condição debilitante que tem impactos sobre a qualidade de vida dos portadores. Este estudo objetiva traçar o perfil do paciente com esta sintomatologia, investigando a relação com idade, hipossalivação, síndrome de ardência bucal, sintomas depressivos, ansiedade, transtornos de sono, dor crônica, doenças sistêmicas e utilização de medicamentos de uso contínuo. Um total de 34 pacientes recrutados no ambulatório de estomatologia do HCPA e da FO/UFRGS com queixa de boca seca por pelo menos três meses foram incluídos. Pacientes com doenças sistêmicas não compensadas e aqueles que haviam sofrido radiação na região de cabeça e pescoço foram excluídos. Um questionário sócio-demográfico estruturado e escalas validadas para xerostomia, ardência bucal, sintomas depressivos, ansiedade, dor crônica e transtornos de sono foram aplicados. Em seguida foram realizadas medidas de fluxo salivar espontâneo e estimulado pelo método de expectoração salivar. Exames laboratoriais foram solicitados para avaliação de hemograma e taxas de glicose, vitamina B12, ferritina e ácido fólico. A análise estatística descritiva foi obtida utilizando-se o SPSS 18.0. A correlação entre hipossalivação e dados quantitativos foi determinada utilizando um modelo de regressão multivariada. Valores de P inferiores a 0,05 foram considerados significativos. A amostra final demonstrou predominância de mulheres (27), não fumantes, a média de idade foi de 56,88±2,58. Doenças sistêmicas compensadas estiveram presentes em 73,52%, 82,35% utilizavam medicações sendo as mais prevalentes antidpressivos, ansiolíticos e antidepressivos. Hipossalivação foi encontrada em 55,9% sendo negativamente correlacionada com a gravidade do distúrbio do sono no IQSP (β = -0,531, IC95%, 0,404-0,855) e positivamente correlacionada com o escore de ardência bucal na EAV (β = 0,26, 95% CI, 1, 002-1,678) p<0,05 que esteve presente em 73,52% dos pacientes. Em resumo, estes resultados demonstram que, embora não tenha sido encontrada associação significativa entre características sócio-demográficas e xerostomia e/ou hipossalivação, pacientes com xerostomia são predominantemente mulheres no período peri - menopausa, residentes em áreas urbanas que utilizam diferentes grupos de medicamentos. É importante salientar que estes resultados são provenientes de um estudo transversal que não permite determinar riscos absolutos. Para tanto, é importante o desenvolvimento de estudos longitudinais que permitam estabelecer esta relação. / Saliva plays an important role in maintaining the physiological conditions of the oral cavity. The reductions in the amount of saliva are known to increase the risk of oral diseases. Xerostomia or perception of dry mouth is recognized as an important risk factor for dental disease. Furthermore, it is a debilitating condition that impacts on the patients’quality of life. The aim of this study was to investigate factors associated with xerostomia and its relationship with age, hyposalivation, burning mouth syndrome, depressive symptoms, anxiety, sleeping disorders, chronic pain, systemic diseases and chronic drug use. A total of 34 patients enrolled in the dental clinic of Hospital de Clínicas de Porto Alegre and FO/UFRGS complaining of dry mouth for at least three months were included. Patients with unbalanced systemic diseases and those undergoing radiation treatment to the head and neck were excluded. A questionnaire concerning socio-demographic data, depressive symptoms, anxiety, sleep disturbances, xerostomia, burning mouth and chronic pain was applied. Measures of salivary flow rates were obtained using the spit method. Blood was tested to determine concentrations of glucose, vitamin B12, ferritin, and folate and for hemogram. The correlation of hyposalivation and quantitative data was determined using a multivariate regression model. P values less than 0.05 were considered to be significant. The results showed that mean age of 56.88±2.58. Hyposalivation was found in 55.9% being negatively correlated with the severity of sleep disturbance on PSQI (β=-0.531, 95% CI, 0.404-0.855) and positively correlated with the Burning mouth score on VAS (β = 0.26, 95% CI, 1, 002 to 1.678) p <0.05and was presented in 73.5% of patients. In summary, these results demonstrate that, although no significant association between sociodemographical characteristics and xerostomia and /or hyposalivation, patients with xerostomia are predominantly women in the perimenopausal, living in urban areas that use different groups of drugs. Importantly, these results are from a cross-sectional study and does not allow determining absolute risks. Therefore, it is important to develop longitudinal studies needed to establish this relationship.

Não há concordância em relação ao número total e intervalo entre as aplicações do verniz de clorexidina (CLX) a 1%. Além disso, os resultados quanto ao período de redução dos níveis de estreptococos do grupo mutans (EGM) na saliva ou biofilme dental são controversos. O objetivo do presente trabalho foi avaliar, através de um estudo clínico randomizado e controlado, o efeito de diferentes posologias do verniz de CLX a 1% nos níveis de EGM. Pacientes com níveis de EGM ≥ 105 UFC/ml saliva, 11-16 anos, foram distribuídos em 4 grupos: grupo A (n=14): 1 aplicação do verniz de CLX; grupo B (n=14): 1 aplicação diária do verniz CLX, em 3 dias consecutivos; grupo C (n=15): 3 aplicações do verniz CLX com intervalo de 4 dias entre cada aplicação; grupo D (n=12): 1 aplicação diária do verniz placebo, em 3 dias consecutivos. Amostras de saliva e biofilme dental foram coletadas no início do estudo e 1, 4 e 8 semanas após o término das aplicações e foram cultivadas para avaliação dos níveis de EGM e bactérias totais. Os dados foram avaliados através do teste ANOVA (medidas repetidas) e teste de Tukey. Após 1 semana, observou-se uma leve redução nos níveis salivares de EGM nos grupos A, B e C (-0,70; -0,90; -0,41 log10 UFC/ml saliva; respectivamente), significativa somente nos grupos A e B (p < 0,05). Não foram observadas diferenças nos níveis salivares de EGM entre os grupos experimentais nos diferentes períodos do experimento. No biofilme dental, 1 semana após o término do tratamento, foi observado um aumento significativo nos níveis de bactérias totais em todos os grupos experimentais e uma redução significativa nos níveis de EGM apenas no grupo A. O verniz de CLX a 1% resultou em uma leve e curta redução nos níveis de EGM. Este estudo demonstrou que repetidas aplicações do verniz de clorexidina a 1% não aumentam o seu efeito na redução dos níveis de EGM.

Orientador: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Coorientador: Juliano Pelim Pessan / Banca: Robson Frederico Cunha / Banca: Douglas Roberto Monteiro / Banca: Marília Afonso Rabelo Buzalaf / Banca: João Carlos Silos Moraes / Resumo: Este estudo avaliou o efeito do trimetafosfato de sódio (TMP) e hexametafosfato de sódio (HMP) associados ou não ao fluoreto (F) na dissolução e estrutura da hidroxiapatita (HA). Para tanto, o estudo foi dividido em três subprojetos. Nos subprojetos 1 e 2, o pó de HA sintética (n=6) foi tratado com soluções contendo entre 0 e 10% de TMP associado a 0, 100, 250, 500 (Subprojeto 1) e a 0, 1100, 4500 e 9000 ppm F (Subprojeto 2), sendo submetido a um ciclo de pH. As concentrações de F alcáli- e ácido solúvel, cálcio (Ca) e fósforo (P) foram determinadas na HA, e as de P e F no sobrenadante. As amostras foram analisadas pela espectroscopia no infravermelho (FTIR), difração de Raios-X (DRX) e espectroscopia de energia dispersiva (EDX). No Subprojeto 3, discos de HA foram empregados para avaliar a taxa de dissolução da mesma utilizando o sistema pHstat. Estes foram tratados com soluções contendo 1100 ppm F, 1 e 8% de HMP ou TMP e 1100 ppm F associado com 1 e 8% de HMP ou TMP, totalizando 9 grupos (n=8). A influência da película salivar também foi avaliada. Discos de HA foram mantidos em saliva humana previamente ao tratamento com água deionizada e 1100 ppm F associado com 1 e 8% de HMP ou TMP, totalizando 5 grupos (n=8). A taxa de dissolução pós-tratamento foi determinada a partir de 3 medidas consecutivas a cada 30 min. Os dados foram submetidos a ANOVA, teste de Student-Newman-Keul's e coeficiente de correlação de Pearson (Subprojetos 1 e 2) e a ANOVA e testes de Fisher e Holm-Sidak (Subprojeto 3) (α=0,05). Valores de proporção Ca/P maiores foram observados para as soluções fluoretadas quando comparados à solução sem F e TMP, sendo os mesmos dependentes da proporção F:TMP (p<0,05). A deposição do F álcali-solúvel foi diretamente relacionada com as concentrações de TMP nas soluções... / Abstract: This study evaluated the effect of sodium trimetaphosphate (TMP) and sodium hexametaphosphate (HMP) associated or no with fluoride (F) on the structure and dissolution of hydroxyapatite (HA). For this purpose, the study was divided into three subprojects. In Subprojects 1 and 2, synthetic HA powder (n=6) was treated with solutions containing TMP varying at 0-10% associated with 0, 100, 250, 500 (Subproject 1) and 0, 1100, 4500 and 9000 ppm F (Subproject 2) and submitted to a pH cycle. Afterwards, alkali- and acid soluble F, Ca and P were determined in/on HA, and P and F in the supernatants. Samples were analyzed by infrared spectroscopy (FTIR), X-ray diffraction (XDR) and energy-dispersive X-ray spectroscopy (EDX). In Subproject 3, HA discs were used to assess the dissolution rate of HA using a pHstat system. HA discs were treated with 1100 ppm F, 1% and 8% of HMP or TMP and 1100 ppm F associated with 1% and 8% of HMP or TMP, totaling 9 groups (n=8). The influence of a salivary pellicle on HA dissolution was also assessed. HA discs were kept in pooled human saliva before treatment with deionised water and 1100 ppm F associated with 1% and 8% of HMP or TMP, totaling 5 groups (n=8). The post-treatment dissolution rate was determined from three consecutive 30-min assays. Data were submitted to ANOVA, Student-Newman-Keuls' test and Pearson's correlation coefficient (Subprojects 1 and 2), and to ANOVA and Fisher and Holm- Sidak methods (Subproject 3) (α=0.05). Ca/P ratios values were higher for the fluoride solutions when compared with the no F and TMP groups and dependent of the F:TMP ratio used (p<0.05). The overall trend was that alkali-soluble F deposition was directly related to TMP concentrations in the treatment solutions, while acidsoluble incorporation was inversely related to TMP... / Doutor

Carrapatos são ectoparasitos hematófagos que causam grandes impactos na saúde pública e na produção animal devido à sua capacidade vetorial e também pelos distúrbios associados diretamente ao parasitismo. O carrapato Rhipicephalus microplus é considerado o parasito mais importante de bovinos na América Latina e Oceania. Os carrapatos permanecem fixados ao hospedeiro por um longo período de tempo, e a saliva representa um fator crucial na relação parasito-hospedeiro. Os carrapatos secretam na saliva um conjunto de moléculas com atividades que modulam as respostas de defesa do hospedeiro frente ao parasitismo, tais como as reações do sistema hemostático e do sistema imune inato e adaptativo. Considerando a importância econômica do carrapato R. microplus, e o papel da saliva no parastismo, pouco se sabe sobre a composição proteica da saliva desse parasito. Os objetivos desse trabalho são caracterizar o proteoma da saliva do carrapato R. microplus em diferentes momentos da fase de alimentação no hospedeiro bovino e caracterizar três serpinas salivares. Neste sentido, este estudo foi organizado em três partes. Primeiramente, fizemos uma análise proteômica da saliva de fêmeas adultas em dois estágios de ingurgitamento, compreendendo fêmeas parcialmente ingurgitadas e fêmeas totalmente ingurgitadas. Num segundo momento, analisamos mais a fundo a variação dos componentes proteicos salivares das fêmeas, expandindo a análise proteômica para nove fases de ingurgitamento do parasito. Esses dados mostraram que a saliva de R. microplus é uma amostra proteica complexa, com variação nos diferentes tempos de alimentação. Entre as classes de proteínas identificadas, podemos citar proteínas relacionadas com metabolismo de heme e ferro; proteínas relacionadas com processos de oxidação e detoxificação; enzimas como as serino-proteases, cisteíno-proteases, metaloproteases; inibidores de proteases da família das serpinas, cistatinas, TIL e Kunitz; peptídeos antimicrobianos; e famílias de proteínas específicas e conservadas em carrapatos. A terceira parte do trabalho objetivou a caracterização de três serpinas que foram identificadas na saliva (RmS-3, RmS-6 e RmS-17). Essas proteínas foram expressas em Pichia pastoris e foram utilizadas em ensaios de caracterização funcional contra um painel de 16 proteases relacionadas com os sistemas de defesa do hospedeiro, revelando um perfil de inibição sobre proteases pró-inflamatórias e prócoagulantes. Os dados apresentados neste trabalho contribuem para o entendimento do papel de proteínas salivares durante o parasitismo pelo carrapato R. microplus. / Ticks are hematophagous ectoparasites with worldwide distribution impacting on public health and animal production due to their vectorial capacity and also for disorders associated directly to parasitism. The tick Rhipicephalus microplus is considered the most important parasite of cattle in Latin America and Oceania. As hematophagous ectoparasites which remain attached to the host for a long period of time, the saliva of ticks represent a crucial factor in host-parasite relationship. The tick saliva comprises an arsenal of molecules with activities modulating the host defense responses trigged against tick feeding, such as the reactions of the hemostatic system, the innate immune system and the adaptive immune system. Considering the economic importance of the tick R. microplus, little is known about the protein composition of the saliva of this parasite. The aims of this study were to characterize the R. microplus tick saliva proteome at different feeding times, and to characterize three salivary serpin that were identified in the saliva of this parasite. Thus, this study was organized into three parts. Firstly, we conducted a proteomic analysis of female saliva in two developmental stages of adult tick feeding, including partially engorged and fully engorged females. Secondly, we analyzed in depth the variation of salivary protein components, expanding proteomics analysis to nine stages of tick feeding. These data showed that the R. microplus saliva is a complex protein sample, with variations in different feeding times. Among the classes of identified proteins, we can mention proteins related to heme and iron metabolism; proteins related to oxidation and detoxification processes; enzymes such as serine proteases, cysteine proteases, metalloproteases; proteases inhibitors belonging to serpin family, cystatins, TIL, and Kunitz; antimicrobial peptides; and families of tick-specific and conserved proteins. The third part of the study aimed to characterize three serpins that have been identified in saliva (RmS-3, RmS-6 and RmS-17). These proteins were expressed in Pichia pastoris and were used for functional characterization against a panel of 16 host proteases related to defense systems. Results revealed an inhibition profile for pro-inflammatory and pro-clotting proteases. The data presented here contributes to understanding the role of salivary proteins into tick-host relationship.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina,2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-10-17T09:46:53Z No. of bitstreams: 1 2011_CiroDaviCordeiro.pdf: 3713229 bytes, checksum: a14347ffe78d400f239544c332dd71c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2011-10-18T11:21:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_CiroDaviCordeiro.pdf: 3713229 bytes, checksum: a14347ffe78d400f239544c332dd71c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-18T11:21:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_CiroDaviCordeiro.pdf: 3713229 bytes, checksum: a14347ffe78d400f239544c332dd71c5 (MD5) / Os triatomíneos são insetos hematófagos transmissores da doença de Chagas ao homem. Durante a picada, injetam saliva que contém moléculas com ações fisiológicas diversas. O estudo destas moléculas tem ajudado a elucidar como os insetos inibem mecanismos de defesa do hospedeiro em seu favor. Além disso, a caracterização dos componentes salivares pode produzir conhecimento útil para produção de novas drogas. Encontrou-se recentemente evidências de que existem quinases na saliva de Triatomíneos. Neste estudo,foram identificadas e seqüenciadas regiões codificadoras de arginina quinase(AK) e nucleosídeo difosfato quinase da glândula salivar de Triatoma infestans.A AK foi clonada, expressa em bactéria e utilizada em imunização para produção de anticorpos específicos. Ensaios de Western blot permitiramconfirmar a presença de AK na saliva de T. infestans, Panstrongylus megistuse Rhodnius neglectus, na forma de dímeros. Em contrapartida, identificou-se AK monomérica na glândula salivar. A enzima tem potencial alergênico que pode contribuir para reações de hipersensibilidade causada pela picada de triatomíneos. Ainda não se sabe se a AK exerce papel funcional na hematofagia, mas a diferença entre a proteína citosólica e secretada indica que pode haver valor adaptativo para os dímeros de AK salivar. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Triatomines are haematophagous insects that transmit Chagas’ disease tohuman populations. During blood feeding, they inject saliva composed of physiologically active molecules. The research of saliva’s molecules provided better understanding of insect’s adaptations to inhibit host’s defenses mechanisms. Besides, molecular characterization may provide useful knowledge to new drugs development. Recent evidences indicated the possibility that kinases could be secreted by triatomine’s salivary glands. This research identified and sequenced coding regions of arginine kinase (AK) and nucleoside diphosphate kinase from salivary glands of Triatoma infestans. AKwas cloned, expressed on bacteria and used in immunizations to specificantibody production. Through western blot assays we confirmed dimeric AKsecretion in saliva of T. infestans, Panstrongylus megistus and Rhodniusneglectus. However, monomeric AK was identified on the salivary glands. Theenzyme is a potential allergenic that could contribute to hypersensibility reactions associated to triatomines’ bites. Although the role of AK inhaematophagy is still unknown, the difference observed between the cytosolicand secreted AKs indicates that the dimeric AK in saliva may have an adaptive value to the bug.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-05-06T12:27:16Z No. of bitstreams: 1 2013_MartaCarolinaDeusdaraRosa.pdf: 5650381 bytes, checksum: b0f8d3a33003d27e38c48565e316d0d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-07T10:37:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MartaCarolinaDeusdaraRosa.pdf: 5650381 bytes, checksum: b0f8d3a33003d27e38c48565e316d0d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-07T10:37:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MartaCarolinaDeusdaraRosa.pdf: 5650381 bytes, checksum: b0f8d3a33003d27e38c48565e316d0d4 (MD5) / A saliva do artrópode hematófago Rhodnius prolixus contém atividade apirásica (EC 3.6.1.5) que facilita a hematofagia inibindo a agregação plaquetária, no hospedeiro vertebrado, induzida por ADP. Este trabalho descreve a purificação de proteínas que representam membros da família das apirases da saliva de R. prolixus. O conteúdo das glândulas salivares foi injetado numa coluna Superdex 200 10/300 GL e eluída com o tampão (25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM NaCl, 5.0 mM CaCl2) no fluxo de 0,5 ml/min. Os picos eluídos foram monitorados a 280 nm em cromatografia líquida rápida de proteínas (FPLC). As frações contendo atividade foram reunidas e submetidas à cromatografia de afinidade (coluna Hi-Trap Blue-Sepharose). Após eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), as bandas foram visualizadas por coloração com nitrato de prata. O zimograma revelou bandas proteicas entre 60 e 130 kDa que exerceram atividade apirásica. Os resultados sugerem que pode ocorrer um arranjo oligomérico entre as apirases salivares de R. prolixus. As apirases purificadas da saliva de R.prolixus são capazes de clivar nucleotídeos di- e trifosfato de maneira cálcio dependente. A purificação destas enzimas permitirá a caracterização mais detalhada de sua relação estrutura/atividade. / The saliva of the haematophagous arthropod Rhodnius prolixus contains apyrase (EC 3.6.1.5) activity that facilitates blood-feeding by inhibiting the ADP-induced aggregation of the host platelets. We report here the purification of proteins that likely represent the R. prolixus members of the apyrase family. Salivary glands content was injected into the Superdex 200 10/300 GL column and eluted with a buffer (25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM NaCl, 5.0 mM CaCl2) at a flow rate of 0.5 ml/min. The eluted peaks were monitored at 280 nm on fast protein liquid chromatography. The fractions containing activity were pooled and subjected to affinity chromatography (Hi- Trap Blue-Sepharose column). Following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, protein bands were detected with silver staining. As revealed by zymography, protein bands between 60 and 130 kDa exerted ATPase activity. The results suggest that oligomeric assembly among R. prolixus members with apyrase activity may occur. The purified R. prolixus apyrases are capable of cleaving nucleotide tri- and diphosphates in a calcium-dependent manner. The purification of these enzymes will allow more detailed characterization of their structure/activity relationship and it is plausible that they might be promising therapeutic molecules to target disorders of platelet aggregation.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / El uso de gomas de mascar se encuentra actualmente muy masificado en la población. Sus beneficios para la salud oral son conocidos ya que corresponde a un método efectivo, tanto físico como mecánico, de remoción de restos alimenticios y limpieza del diente. Sin embargo, sólo es secundario al cepillado dental. Masticar chicle, incrementa el flujo salival, incrementa el pH de la saliva y sirve como vehículo para la entrega y liberación de medicamentos. En la literatura no se describen gomas de mascar que presenten en su composición antisépticos y aceites esenciales, por esto en laboratorio de química de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile, se formuló un chicle que cuenta con Alcanfor (aceite esencial), p-Clorofenol y Peróxido de Hidrógeno, como antisépticos. Se realizó un ensayo clínico para medir efectos y seguridad de estos preparados en recuentos microbianos, evaluar y comparar parámetros químicos salivales, como: flujo salival, pH y capacidad amortiguadora de la saliva. Se usaron chicles con xilitol y clorhexidina a modo de agentes comparativos. Los resultados del estudio muestran que el uso de chicles medicados en base a Alcanfor, p-Clorofenol y Peróxido de Hidrógeno NO modifica parámetros químicos salivales como pH, Capacidad Amortiguadora y Velocidad de flujo salival, ni reduce el número de S. mutans, después de su uso durante un período de 7 días. Las gomas de mascar con clorhexidina fueron las únicas que redujeron en forma significativa el recuento cuantitativo de S. mutans en un período de 7 días, pero al mismo tiempo produjeron una disminución significativa de la Velocidad de Flujo Salival, hecho que amerita una mayor investigación. Los Acontecimientos Adversos registrados luego de masticar las tres gomas de mascar fueron tinciones dentarias, dolor o molestias musculares en zona de cabeza y cuello; y molestias y/o ruidos en ATM. Estas últimas se produjeron en mayor porcentaje para los chicles con Clorhexidina y Xilitol respectivamente. No se reportaron acontecimientos adversos como irritación de mucosas o piel, ni algún tipo de lesión para ninguna de las tres gomas de mascar.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción. La Diabetes Mellitus es una enfermedad metabólica caracterizada por una hiperglicemia crónica causada por la acción o producción deficiente de la insulina. En el curso de esta enfermedad y de acuerdo al grado de descompensación metabólica expresada en valores de hemoglobina glicosilada (HbA1c), surgen complicaciones sistémicas y manifestaciones orales. Dentro de estas últimas, se encuentran las alteraciones de parámetros cuantitativos y cualitativos salivales, afectando la calidad de vida de los pacientes e incrementando la susceptibilidad a desarrollar patologías orales como caries y candidiasis oral. Existe escasa evidencia que relacione características salivales en diabéticos con sus niveles de HbA1c, por lo que el objetivo de este estudio fue comparar la velocidad de flujo salival, pH salival, concentración de proteínas en saliva y presencia de xerostomía entre sujetos con Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2) compensados (Hb1Ac < 7%) y descompensados metabólicamente (Hb1Ac ≥ 7%). Metodología. Este trabajo incluyó a 50 voluntarios con DM2, pertenecientes a la Asociación De Diabéticos de Chile (ADICH), de los cuales 25, correspondían a descompensados metabólicamente (grupo experimental) y los otros 25, a compensados (grupo control). Se realizó una ficha clínica que incluía el cuestionario para la xerostomía y se tomaron muestras salivales en las cuales se analizaron la velocidad de flujo salival, pH salival y concentración total de proteínas en saliva. Resultados. La concentración total de proteínas en saliva fue mayor en diabéticos descompensados que en compensados, con diferencias estadísticamente significativas. Por otro lado, para la comparación de velocidad de flujo salival, pH salival y xerostomía, no se encontraron diferencias significativas entre ambos grupos de estudio. Conclusiones. En este trabajo, la concentración total de proteínas salivales fue significativamente mayor en sujetos con DM2 con valores de HbA1c ≥ 7%, en comparación con sujetos con HbA1c < 7%, lo que podría ser un indicador de descompensación metabólica en diabéticos o de disfunción de glándulas salivales. Sin embargo, son necesarios más estudios futuros para esclarecer el verdadero rol de la saliva en el diagnóstico y control de la DM2.