O Sarcoma de Ewing (ES) é um raro tumor de ossos e tecidos moles com uma característica translocação cromossomal, a fusão EWS/FLI-1, que atua sobre diversos processos oncogênicos. O desenvolvimento da resistência à quimioterapia é comum no tumor e continua como uma das principais causas na falha do tratamento. O objetivo desse estudo foi avaliar a expressão de genes após a indução de resistência em linhagens celulares de ES. Foi selecionado um conjunto de genes (CCAR1, TUBA1A, POLDIP2, SMARCA4 e SMARCB1) a partir da mineração da literatura em resistência tumoral para duas drogas utilizadas na terapia de ES, doxorrubicina e vincristina. Descrevemos a expressão de cada gene selecionado antes e após as linhagens SK-ES-1 serem submetidas a um protocolo de indução de resistência para ambos os fármacos, que obteve êxito ao induzir as células à resistência. A expressão relativa dos níveis de mRNA foi avaliada e foi encontrada em maior expressão para os genes SMARCA4, SMARCB1 e POLDIP2, e em menor expressão para os genes TUBA1A e CCAR1, quando comparadas às linhagens de controle não-resistentes de cada quimioterápico. Os resultados sugerem o envolvimento de mecanismos de reparo de dano ao DNA, remodelamento de cromatina via SWI/SNF, atividade de microtúbulos e atividade spliceossomal nos processos de resistência quimioterápica em ES. / Ewing Sarcoma (ES) is a rare bone and soft tissue tumor with a characteristic chromosomal translocation, the fusion protein EWS/FLI-1, that drives several oncogenic processes. The development of resistance to chemotherapy is common and remains as the main cause of treatment failure. The goal of this study was to evaluate the expression of selected genes in ES cell lines after induction of resistance. A set of genes (CCAR1, TUBA1A, POLDIP2, SMARCA4 and SMARCB1) was data mined from tumoral resistance literature for two drugs used in ES therapy, doxorubicin and vincristine. We describe the expression of each selected gene before and after SK-ES-1 cell lines were exposed to a drug resistance inducing protocol for doxorubicin and vincristine. Cell lines were successfully induced to be resistant to doxorubicin and vincristine. The relative mRNA expression levels were upregulated for genes SMARCA4, SMARCB1 and POLDIP2 and downregulated for genes TUBA1A and CCAR1, when comparing resistant and non-resistant ES cell lines for each drug. The results suggest involvement of repair pathways, SWI/SNF chromatin remodeling, microtubule and spliceosomal activity processes in drug resistance mechanisms in ES.

Introdução: o sarcoma de Ewing é um dos tipo mais agressivos de câncer pediátrico. Esse tipo de câncer é um tumor primitivo neuroectodérmico, grupo que inclui ainda outros tumores pediátricos como o meduloblastoma e o neuroblastoma. Apesar de avanços significativos desde o surgimento da quimioterapia, ainda há necessidade de aumento dos índices de cura, redução da toxicidade da quimioterapia e redução da resistência ao tratamento em pacientes com essa doença. Inibidores da acetilação de histonas (HDACIs ou HDIs) e bifosfonatos têm um futuro promissor no tratamento de câncer, especialmente quando utilizados conjuntamente ou em associação com outros agentes citotóxicos, como antineoplásicos clássicos. No entanto, os efeitos destes tratamentos combinados ainda não haviam sido devidamente estudados em Sarcoma de Ewing. Objetivos: este estudo se propôs a avaliar, in vitro, os efeitos do inibidor da acetilação de histonas, butirato sódico (NaB), do bifosfonato, zoledronato (ZA), da associação destes dois agentes e de combinações dos mesmos com antineoplásicos clássicos sobre a proliferação, viabilidade e sobrevivência celular em sarcoma de Ewing. Métodos: as linhagens celulares de sarcoma de Ewing, SK-ES-1 e RD-ES, foram tratadas com NaB, ZA, doxorrubicina, etoposídeo ou vincristina e com diferentes combinações destes agentes. O crescimento tumoral in vitro, incluindo parâmetros de proliferação e viabilidade celular, foi analisado pelos métodos de contagem celular por exclusão com azul de tripan e MTT. Os efeitos tardios (sobrevivência) também foram estudados através da determinação da formação de colônias (ensaio colonogênico). Resultados: a combinação de NaB e ZA teve um efeito citotóxico sinérgico 72h após o tratamento, persistindo durante 10-14 dias após o tratamento, em ambas as linhagens celulares testadas. Todas as combinações entre NaB ou ZA e os antineoplásicos clássicos testados apresentaram efeitos citotóxicos sinérgicos 72h após os tratamentos em ambas linhagens celulares, com a exceção das seguintes associações: NaB + VCR e ZA + Doxo, que apresentaram apenas efeito aditivo nas células RD-ES, quando comparados com cada um dos agentes em monoterapia. Estes efeitos “agudos” observados em ambas as linhagens celulares de sarcoma de Ewing foram confirmados pelo ensaio clonogênico. Conclusão: os dados obtidos sugerem que o uso combinado de bifosfonatos e HDIs e a associação destes agentes com quimioterápicos clássicos representam promissoras alternativas no tratamento de sarcoma de Ewing e proporcionam a base para novos estudos. / Background: Ewing sarcoma, often referred to as Ewing’s sarcoma family tumors, is a peripheral primitive neuroectodermal tumor. Ewing sarcoma is the second most common solid bone and soft tissue malignancy of children and young adults. Despite significant advances in cancer chemotherapy, there is still need for increased rates of cure, reduction of toxicity of chemotherapy and reduced resistance to treatment in patients with this disease. Histone deacetylase inhibitors (HDACIs or HDIs) and bisphosphonates have a promising future in the treatment of cancer as targeted anticancer drugs, especially when used together or in combination with other cytotoxic agents. However, the effects of these combined treatments have not yet been properly evaluated in Ewing sarcoma. Objective: In the present study, we evaluated the in vitro cytotoxic effects (on cellular proliferation, viability, and survival) elicited by the co-treatment of sodium butyrate (NaB) and zoledronic acid (ZA) alone or in combination with three anti-cancer drugs strongly recommended to treat Ewing sarcoma (doxorubicin, etoposide and vincristine) in two human cell lines. Methods: two Ewing sarcoma cell lines, SK-ES-1 and RD-ES, were treated with NaB, ZA, doxorubicin, etoposide, vincristine and with different combinations of these drugs. The proliferation and cell viability were analyzed by counting cell in a hemocytometer, by exclusion of trypan blue and by MTT assay. The survival and proliferation of cells were also studied by clonogenic assay. Results: our results demonstrate that the combination of NaB and ZA has a synergistic cytotoxic effect at 72h after treatment, persisting for 10-14 days post-treatment, in both cell lines tested. All combinations between NaB or ZA and classical antineoplastic drugs demonstrated a synergistic cytotoxic effect at 72h post-treatment in SK-ES-1 and RD-ES cells, with the exception of NaB plus VCR, and ZA plus Doxo, which showed only an additive effect in RD-ES cells when compared to each agent alone. These acute effects observed in both Ewing sarcoma cells were confirmed by the clonogenic assay. Conclusion: These data suggest that HDIs and bisphosphonate co-treatment in combination with classical chemotherapeutic drugs is a promising therapeutic venue the treatment of Ewing sarcoma, and provide a basis for further study in this field.

INTRODUÇÃO: Os tumores da família do sarcoma de Ewing (TFSE) compreendem um espectro de neoplasias de células neuroectodérmicas dos ossos e partes moles de comportamento biológico agressivo e prognóstico reservado, caracterizadas por translocações envolvendo um dos genes da família TET/FET e um dos genes da família ETS, mais comumente EWSR1 e FLI1. Com o avanço da medicina personalizada, cresce a demanda por biomarcadores em TFSE que tenham valor como fatores prognósticos e potencial para futuras terapias-alvo específicas. Este estudo propôs biomarcadores, incluindo proteínas relacionadas à supressão tumoral, proliferação celular, metabolismo energético, atividade imune, vias de reparo do DNA e células tronco. MÉTODOS: A expressão imuno-histoquímica dos biomarcadores MTAP, p16, STAG2, p53, USP22, PTEN, RKIP, Ciclina D1, MCTs (1, 2 e 4), CD147, CA IX, GLUT1, BRACHYURY, PD-L1, OCT4 e SALL4 foi analisada em uma série bem caracterizada de 113 TFSE através de amostras em tissue microarrays (TMA). Os perfis de expressão foram então associados aos parâmetros clínico-patológicos dos pacientes e à sobrevida global para uma análise do impacto no prognóstico. RESULTADOS: A hiperexpressão de p53 mostrou associação estatisticamente significativa com menor sobrevida global (p < 0,001), doença metastática no diagnóstico (p = 0,017) e idade acima de 20 anos (p = 0,04). A perda de expressão de MTAP (p = 0,039) e de Brachyury (p = 0,008) também se associaram significativamente com menor sobrevida global. Em relação às características clínicas dos pacientes, doença metastática no diagnóstico e etnia não-branca foram associados a um pior prognóstico. CONCLUSÕES: Os biomarcadores p53, MTAP e Brachyury foram identificados como fatores independentes relacionados ao prognóstico. A utilização destes biomarcadores como fator prognóstico nos TFSE pode auxiliar na estratificação de risco dos pacientes e até mesmo estimular o desenvolvimento de drogas-alvo específicas / INTRODUCTION: The Ewing sarcoma family of tumors (ESFT) comprises a spectrum of neoplasms of neuroectodermal cells of the bones and soft tissues with an aggressive biological behavior and poor outcome, characterized by translocations involving one of the genes of the TET/FET family and one of the genes of the ETS family, most commonly EWSR1 and FLI1. With the progress of personalized medicine, there is a great demand for biomarkers in ESFT that could have prognostic values and the potential for future targeted therapies. This study proposed the evaluation of protein expression of different classes of biomarkers, including proteins related to tumor suppression, cell proliferation, energy metabolism, immune activity, DNA repair pathways and stem cells. METHODS: Immunohistochemical expression of the biomarkers MTAP, p16, STAG2, p53, USP22, PTEN, RKIP, Cyclin D1, MCTs (1, 2 and 4), CD147, CA IX, GLUT1, BRACHYURY, PD-L1, OCT4 and SALL4 was analyzed in a well-characterized series of 113 ESFT in a tissue microarray (TMA) platform. Expression profiles were then associated with patients\' clinical-pathological parameters and overall survival for analysis of the prognostic impact. RESULTS: p53 hyperexpression showed a statistically significant association with lower overall survival (p <0.001), metastatic disease at diagnosis (p = 0.017) and age over 20 years (p = 0.04). Loss of MTAP (p = 0.039) and Brachyury (p = 0.008) were also significantly associated with lower overall survival. Regarding the clinical characteristics of the patients, metastatic disease at diagnosis and non-white ethnicity were associated with a worse prognosis. CONCLUSIONS: The biomarkers p53, MTAP and Brachyury were identified as independent factors related to the prognosis. The use of these biomarkers as a prognostic factor in ESFT may aid in the risk stratification of patients and even stimulate the development of specific targeted drugs

Introdução: o sarcoma de Ewing é um dos tipo mais agressivos de câncer pediátrico. Esse tipo de câncer é um tumor primitivo neuroectodérmico, grupo que inclui ainda outros tumores pediátricos como o meduloblastoma e o neuroblastoma. Apesar de avanços significativos desde o surgimento da quimioterapia, ainda há necessidade de aumento dos índices de cura, redução da toxicidade da quimioterapia e redução da resistência ao tratamento em pacientes com essa doença. Inibidores da acetilação de histonas (HDACIs ou HDIs) e bifosfonatos têm um futuro promissor no tratamento de câncer, especialmente quando utilizados conjuntamente ou em associação com outros agentes citotóxicos, como antineoplásicos clássicos. No entanto, os efeitos destes tratamentos combinados ainda não haviam sido devidamente estudados em Sarcoma de Ewing. Objetivos: este estudo se propôs a avaliar, in vitro, os efeitos do inibidor da acetilação de histonas, butirato sódico (NaB), do bifosfonato, zoledronato (ZA), da associação destes dois agentes e de combinações dos mesmos com antineoplásicos clássicos sobre a proliferação, viabilidade e sobrevivência celular em sarcoma de Ewing. Métodos: as linhagens celulares de sarcoma de Ewing, SK-ES-1 e RD-ES, foram tratadas com NaB, ZA, doxorrubicina, etoposídeo ou vincristina e com diferentes combinações destes agentes. O crescimento tumoral in vitro, incluindo parâmetros de proliferação e viabilidade celular, foi analisado pelos métodos de contagem celular por exclusão com azul de tripan e MTT. Os efeitos tardios (sobrevivência) também foram estudados através da determinação da formação de colônias (ensaio colonogênico). Resultados: a combinação de NaB e ZA teve um efeito citotóxico sinérgico 72h após o tratamento, persistindo durante 10-14 dias após o tratamento, em ambas as linhagens celulares testadas. Todas as combinações entre NaB ou ZA e os antineoplásicos clássicos testados apresentaram efeitos citotóxicos sinérgicos 72h após os tratamentos em ambas linhagens celulares, com a exceção das seguintes associações: NaB + VCR e ZA + Doxo, que apresentaram apenas efeito aditivo nas células RD-ES, quando comparados com cada um dos agentes em monoterapia. Estes efeitos “agudos” observados em ambas as linhagens celulares de sarcoma de Ewing foram confirmados pelo ensaio clonogênico. Conclusão: os dados obtidos sugerem que o uso combinado de bifosfonatos e HDIs e a associação destes agentes com quimioterápicos clássicos representam promissoras alternativas no tratamento de sarcoma de Ewing e proporcionam a base para novos estudos. / Background: Ewing sarcoma, often referred to as Ewing’s sarcoma family tumors, is a peripheral primitive neuroectodermal tumor. Ewing sarcoma is the second most common solid bone and soft tissue malignancy of children and young adults. Despite significant advances in cancer chemotherapy, there is still need for increased rates of cure, reduction of toxicity of chemotherapy and reduced resistance to treatment in patients with this disease. Histone deacetylase inhibitors (HDACIs or HDIs) and bisphosphonates have a promising future in the treatment of cancer as targeted anticancer drugs, especially when used together or in combination with other cytotoxic agents. However, the effects of these combined treatments have not yet been properly evaluated in Ewing sarcoma. Objective: In the present study, we evaluated the in vitro cytotoxic effects (on cellular proliferation, viability, and survival) elicited by the co-treatment of sodium butyrate (NaB) and zoledronic acid (ZA) alone or in combination with three anti-cancer drugs strongly recommended to treat Ewing sarcoma (doxorubicin, etoposide and vincristine) in two human cell lines. Methods: two Ewing sarcoma cell lines, SK-ES-1 and RD-ES, were treated with NaB, ZA, doxorubicin, etoposide, vincristine and with different combinations of these drugs. The proliferation and cell viability were analyzed by counting cell in a hemocytometer, by exclusion of trypan blue and by MTT assay. The survival and proliferation of cells were also studied by clonogenic assay. Results: our results demonstrate that the combination of NaB and ZA has a synergistic cytotoxic effect at 72h after treatment, persisting for 10-14 days post-treatment, in both cell lines tested. All combinations between NaB or ZA and classical antineoplastic drugs demonstrated a synergistic cytotoxic effect at 72h post-treatment in SK-ES-1 and RD-ES cells, with the exception of NaB plus VCR, and ZA plus Doxo, which showed only an additive effect in RD-ES cells when compared to each agent alone. These acute effects observed in both Ewing sarcoma cells were confirmed by the clonogenic assay. Conclusion: These data suggest that HDIs and bisphosphonate co-treatment in combination with classical chemotherapeutic drugs is a promising therapeutic venue the treatment of Ewing sarcoma, and provide a basis for further study in this field.

Objetivo: Avaliar o desempenho diagnóstico da ressonância magnética (RM) na avaliação da presença de reação periosteal (RP) em sarcomas primários de ossos longos, utilizando a radiologia convencional (RC) como padrão de referência. Materiais e Métodos: Estudo retrospectivo com aprovação do Comitê de Ética Institucional. A partir do Sistema de Informática da Radiologia (RIS) e do Sistema de Arquivo de Imagens do HCRP identificamos retrospectivamente os casos de 42 pacientes consecutivos (idade média de 22 anos, sendo 20 homens, 22 mulheres) que realizaram tratamento de osteossarcoma ou sarcoma de Ewing no HCRP e cujos exames de RM e RC estavam disponíveis para reavaliação. Foram incluídos apenas casos de tumores de ossos longos e com confirmação histopatológica. Três radiologistas musculoesqueléticos avaliaram retrospectivamente a presença ou ausência de RP e identificaram para cada caso a ausência ou presença de cada um dos padrões de RP agressiva nas imagens da RC e da RM: Triângulo de Codman, multilamelada e espiculada. A classificação dos Radiologistas foi realizada de forma independente e às cegas em relação ao diagnóstico definitivo e em relação as demais avaliações realizadas. As leituras das imagens de RM e RC realizadas pelo mesmo observador tiveram um intervalo de pelo menos três meses entre elas. Usamos as leituras dos três observadores para avaliar a confiabilidade interobservador por meio do coeficiente Kappa. Finalmente uma análise consensual das leituras realizadas pelos três observadores tanto para a RC quanto para a RM foi utilizada para calcular o desempenho diagnóstico da ressonância magnética na detecção de RP e na classificação de cada padrão agressivo de RP. O radiologista com maior tempo de experiencia fez a classificação consensual da presença ou ausência de cada subtipo de reação periosteal nos casos em que houve discordância entre os observadores. 8 Resultados: A concordância interobservador para a detecção de RP foi quase perfeita para a RC e substancial a quase perfeita para a RM. A concordância interobservador para a classificação dos diferentes padrões de RP foi moderada a substancial para a presença do triângulo de Codman. A avaliação dos padrões de RP multilamelada e espiculada foi menos consensual entre os radiologistas tanto para RC quanto para a RM. O diagnóstico por RM e RC e a classificação de cada RP agressiva foram estatisticamente associadas com o diagnóstico por RC (p <0,05). A RM mostrou alta especificidade e valor preditivo negativo elevado, mas moderada sensibilidade na detecção de reações periosteais quando comparada com a RC. Conclusão: Nossos resultados sugerem que a detecção de RP por meio da RM e da RC apresenta alta reprodutibilidade. A RM mostrou alta especificidade e sensibilidade moderada para a identificação de RP em comparação com a RC. No entanto, a reprodutibilidade da classificação em diferentes padrões de RP agressivas foi relativamente baixo, tanto para RC quanto para RM em relação às RPs multilameladas e espiculadas. / Objective - To evaluate the diagnostic performance of magnetic resonance imaging (MR) assessing the presence of periosteal reaction (PR) in primary long bone sarcomas using conventional radiography (CR) as the reference standard. Materials and methods After institutional board approval, we retrospectively reviewed the MRI and conventional radiographies of 42 consecutive patients (mean age 22 years, 20 men, 22 women). We included only cases of osteosarcoma or Ewings sarcoma in the long bones with histopathological confirmation. Three experienced musculoskeletal radiologists retrospectively evaluated the presence or absence of periosteal reaction and each pattern of aggressive periosteal reaction in radiographs and MR imaging: Codman triangle, multi layered and spiculated. Radiologists classification was blinded and independent. The readings of the MR images and CR performed by the same observer had an interval of at least three months between them. We use the readings of three observers to assess the interobserver reliability through the Kappa coefficient. Finally a consensus analysis of readings performed by the three observers for both CR and MR was used to calculate the diagnostic performance of MR in detecting PR and classification of each PR aggressive pattern. The radiologist with greater experience made the consensus score of the presence or absence of each periosteal reaction subtype where there was disagreement among observers. 10 Results The interobserver agreement for the detection of PR was almost perfect for the CR and substantial to almost perfect for the MR. The interobserver agreement for the classification of different patterns of PR was moderate to substantial for the presence of Codman triangle. The evaluation of PR multilammelated standards and spiculated was less consensus among radiologists as well for CR as to MR. The diagnostic and the classification of each aggressive PR with MR imaging and with CR were statistically associated with the diagnosis by CR (p <0.05). MR showed high specificity and high negative predictive value, but moderate sensitivity in detecting periosteal reactions when compared to the CR. Conclusions Our results suggest that detection of PR through MR and CR has high reproducibility. MRI showed high specificity and moderate sensitivity for the identification of PR compared to CR. However, the reproducibility of the classification into different patterns of aggressive PRs was relatively low for both CR and for MR regarding the multilamellated and spiculated PRs.

A ressecção ampla do trajeto de biópsia junto ao tumor faz parte da técnica cirúrgica oncológica para evitar os riscos de implante de células tumorais e recidiva local e/ou sistêmica da doença. O objetivo deste estudo foi verificar se havia risco de contaminação por células neoplásicas no trajeto da biópsia. Realizou-se um estudo prospectivo dos trajetos de biópsias de pacientes operados por tumores musculoesqueléticos malignos no Instituto de Ortopedia e Traumatologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo no período de abril de 2006 a abril de 2007. Foram estudados por histopatologia 25 casos. Houve implante de células neoplásicas em 32% dos trajetos. Quando foram correlacionados os resultados dos estudos dos trajetos e o uso de quimioterapia neo-adjuvante (p=0,19) não houve significância, mostrando que mesmo com esse tratamento o risco de implante existe. As alterações histológicas mais comuns foram: fibrose acentuada, componente inflamatório leve e neovascularização acentuada. Sugerimos a ressecção tradicional oncológica do trajeto junto com a peça / Wide resection of biopsy tracts to tumors forms part of oncological surgical techniques because of the risk of tumor cell implantation and local and/or systemic disease recurrence. The aim of this study was to investigate the risk of seeding by neoplastic cells along biopsy tracts. This was a prospective histopathological study on biopsy tracts in 25 patients who underwent operations due to malignant musculoskeletal tumors, at the Institute of Orthopedics and Traumatology, School of Medicine of the University of São Paulo, between April 2006 and April 2007. Neoplastic cells were found implanted in 32% of the tracts. Correlation of the results from studying the tracts with the use of neoadjuvant chemotherapy did not present significant findings. This shows that, even with chemotherapy, the risk of implantation exists. The most common histological abnormalities in positive cases were classified as severe fibrosis, mild inflammatory component and severe neovascularization. We suggest that oncological resection of the tract should be carried out together with excision of the specimen

Chick embryo fibroblasts and rat kidney cells infected in vitro with Rous Sarcoma viruses were treated with 3-deazaguanine (3-DG). The findings revealed that 3-DG inhibited virus-induced cellular transformation. Degree of inhibition is dependent on concentration and frequency of media change. 3-DG at the concentrations tested will not reverse transformed cells to the untransformed state and does not have marked effect on replication of viruses. Upon removal of 3-DG, its effect was shown to be reversible. Cell growth was generally retarded in medium containing 3-DG. When xanthosine and inosine were added to the medium, cell growth was unaffected, but it increased in guanosine.

Yes / KSHV is the causative agent of commonly fatal malignancies of immuno-compromised individuals, including primary effusion lymphoma (PEL) and Kaposi's sarcoma (KS). A hallmark of all herpesviruses is their biphasic lifecycle – viral latency and the productive lytic cycle, and it is well established that reactivation of the KSHV lytic cycle is associated with KS pathogenesis. Therefore, a thorough appreciation of the mechanisms that govern reactivation is required to better understand disease progression. The viral protein, replication and transcription activator (RTA), is the KSHV lytic switch protein due to its ability to drive the expression of various lytic genes, leading to reactivation of the entire lytic cycle. While the mechanisms for activating lytic gene expression have received much attention, how RTA impacts on cellular function is less well understood. To address this, we developed a cell line with doxycycline-inducible RTA expression and applied SILAC-based quantitative proteomics. Using this methodology, we have identified a novel cellular protein (AT-rich interacting domain containing 3B, ARID3B) whose expression was enhanced by RTA and that relocalised to replication compartments upon lytic reactivation. We also show that siRNA knockdown or overexpression of ARID3B led to an enhancement or inhibition of lytic reactivation, respectively. Furthermore, DNA affinity and chromatin immunoprecipitation assays demonstrated that ARID3B specifically interacts with A/T-rich elements in the KSHV origin of lytic replication (oriLyt), and this was dependent on lytic cycle reactivation. Therefore, we have identified a novel cellular protein whose expression is enhanced by KSHV RTA with the ability to inhibit KSHV reactivation.

Objective: Epithelioid sarcoma (ES) presents unique clinical features in comparison to other sarcoma subtypes. Data regarding the benefits of chemotherapy are very limited. Combination regimens using gemcitabine and docetaxel (Gem/Doce) have proven to be effective, especially in uterine and nonuterine leiomyosarcoma. Yet, there is no available data on the efficacy of Gem/Doce in ES. Methods: A retrospective analysis of the three participating institutions was performed. Twenty-eight patients with an ES diagnosis presented at one of the participating institutions between 1989 and 2012. Of this group, 17 patients received chemotherapy. Results: Patients’ median overall survival (OS) after the beginning of palliative chemotherapy was 21 months, and the 1-year OS was 87%. Twelve patients received Gem/Doce with a clinical benefit rate of 83%. The median progression-free survival (PFS) was 8 months for all patients receiving Gem/Doce. The best response was complete remission in 1 patient and partial remission in 6 patients. All 6 patients receiving Gem/Doce as a first-line treatment showed measurable responses with a median PFS of 9 months. Conclusions: In this retrospective study, Gem/Doce was an effective chemotherapeutic regimen for ES. Prospective studies are needed to better assess the effects of this combination drug therapy.

Introdução: Os sarcomas uterinos constituem uma forma rara de neoplasia maligna que compreende cerca de 3% de todos os canceres uterinos. Os fatores de risco são pouco conhecidos e as formas de tratamento escassas, sendo o papel da quimioterapia e radioterapia limitado. Nesse contexto, torna-se importante a compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos no processo de carcinogênese, tanto para diagnóstico e prognóstico mais precisos, quanto para ampliar os avanços terapêuticos. Um dos mecanismos moleculares envolvidos no desenvolvimento de canceres é a regulação da expressão gênica por microRNAs (miRNAs), que são pequenas moléculas de RNAs não-codificantes que desempenham papéis importantes em várias vias biológicas. Alterações na expressão de miRNAs podem acarretar em diversas doenças incluindo o câncer. Poucos trabalhos foram realizados, até o momento, no sentido de esclarecer a regulação ou expressão de miRNAs nos sarcomas uterinos. Objetivo: Avaliar a expressão de miRNAs relacionados ao desenvolvimento de tumores em amostras de carcinossarcomas e sarcomas do útero. Métodos: Foram selecionadas 100 amostras incluindo: 56 leiomiossarcomas (LMS), 24 carcinossarcomas (CS), 18 sarcomas do estroma endometrial (SEE) e 2 adenossarcomas (AS). O RNA total de amostras incluídas em parafina foi obtido e utilizado para realização da síntese de cDNA. As reações de PCR em Tempo Real foram realizadas utilizando o Kit miScript SYBR Green PCR (Qiagen) para análise a partir de 84 sequências de miRNAs já descritos na literatura para outros tipos de cânceres. Foram analisados dados clínicos como idade, sintomas principais, uso de contraceptivo oral, estado menopausal, terapia de reposição hormonal, tabagismo, tratamento cirúrgico, tratamento adjuvante, metástase, grau histológico, recorrência, óbito e estadiamento. Os resultados foram tabulados nos softwares SPSS e GraphPad Prism 5.01. Resultados: Observamos miRNAs que apresentaram diferentes perfis de expressão nos tumores, em comparação com o tecido referência (miométrio). Dentre 42 miRNAs que apresentaram diferenças de expressão nos sarcomas e carcinossarcomas uterinos, 6 destacaram-se por apresentar diferenças significativas entre os tipos histológicos: miR-96-5p (p < 0,001; LMSxCS), miR-205-5p (p=0,016; CSxSEE), miR-181a-5p (p=0,010; CSxLMS), miR-135b-5p (p=0,018; CSxLMS), miR-183-5p (p=0,012; CSxLMS) e miR-193b-3p (p=0,008; CSxLMS). Diversas associações entre a hiper ou hipoexpressão dos miRNAs com as variáveis clínicas coletadas foram constatadas. A expressão de 12 miRNAs foram associadas com sobrevida global e 3 com sobrevida câncer específica. Maior expressão de miR-335-5p, miR-301a-3p e miR-210-3p foi encontrada em amostras de pacientes que realizaram tratamento adjuvante e desenvolveram metástase ou recidiva, para as quais observamos a expressão de miR-138-5p, miR-146b-5p e miR-218-5p associada com maior sobrevida livre de doença. Conclusão: Em conjunto, os resultados sugerem que a caracterização dos miRNAs possui papel promissor para fins diagnóstico, prognóstico e até terapêuticos nos sarcomas e carcinossarcomas uterinos / Introduction: The uterine sarcomas are a rare form of malignancy comprising about 3% of all uterine cancers. Risk factors are not well known and the treatment forms are scarce, being the role of chemotherapy and radiotherapy limited. In this context, it becomes important the comprehension of the molecular mechanisms involved in the carcinogenesis process, as for more accurate diagnosis and prognosis, as to broaden the therapeutic advances. One of the molecular mechanisms involved in cancer development is the regulation of gene expression by microRNAs (miRNAs), which are small molecules of non-coding RNAs that play important roles in some biological pathways. Alterations in miRNA expression could result in some diseases, including cancer. Few studies were performed until present time, to clarify the miRNAs regulation or expression in uterine sarcomas. Objective: To evaluate the expression of miRNAs related to development of tumors in carcinosarcoma and uterine sarcomas samples. Methods: 100 samples were evaluated including: 56 leiomyosarcomas (LMS), 24 carcinosarcomas (CS), 18 endometrial stromal sarcomas (ESS) and 2 adenosarcomas (AS). The total RNA from paraffin-embedded samples were obtained and used to cDNA synthesis. The real time PCR reactions, was performed using the miScript SYBR Green PCR Kit (Qiagen) for analysis of 84 sequences already described in literature in other types of cancer. Were analyzed clinical data such as age, main symptoms, oral contraceptive use, menopausal status, hormone replacement therapy, smoking, underlying pathology, surgical treatment, adjuvant treatment, metastasis, histological grade, recurrence, death and staging. The results were tabulated in the SPPS and Graphpad Prism 5.01. Results: We observed miRNAs that showed different expression profiles in tumors compared to the reference tissue (myometrium). Among 42 miRNAs that showed different expression in uterine sarcomas and carcinosarcomas, 6 stood out for showing significant differences among the histological types: miR-96-5p (p < 0,001; LMSxCS), miR-205-5p (p=0,016; CSxSEE), miR-181a-5p (p=0,010; CSxLMS), miR-135b-5p (p=0,018; CSxLMS), miR-183-5p (p=0,012; CSxLMS) e miR-193b-3p (p=0,008; CSxLMS). Many associations between overexpression or hypoexpression of miRNAs with the clinical variables collected were found. The expression of 12 miRNAs were associated with cancer-specific survival and 3 with disease-free survival. It were also found, increased expression of miR-335-5p, miR-301a-3p and miR-210-3p in samples of patients who underwent adjuvant treatment and developed metastasis or recurrence, and correlation analysis showed that the expression of miR-138-5p, miR-146b-5p and miR-218- 5p are associated with higher disease-free survival of treated patients. Conclusion: The results suggest that the characterization of miRNAs have a promising role for purposes of diagnosis, prognosis and therapeutic for the uterine sarcomas and carcinosarcomas