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El semen de alpaca post-descongelación ha sido usado para inseminación artificial sin el éxito esperado, a pesar de usar diversos protocolos de criopreservación y criopreservantes para mantenerlo viable por un tiempo prolongado. Sin embargo, para elaborar un buen criopreservante es necesario conocer que parámetros bioquímicos del plasma seminal se ven afectados tras su descongelación. De allí que el objetivo del estudio fue determinar y comparar las características bioquímicas del plasma seminal de alpacas en fresco y post-descongelado. Se realizó en los laboratorios de Farmacología y Toxicología Veterinaria y Reproducción Animal de la FMV-UNMSM. Se realizó en 4 alpacas adultas, bajo las mismas condiciones de crianza. Se usó un electroeyaculador digital (Electrojac) y se colectó en tubos Falcón de 10 ml, se centrifugó a 3000 rpm por 30 minutos, para la separación del plasma seminal. Una parte se analizó en fresco y la otra parte se almacenó en nitrógeno líquido por 1 mes para su posterior descongelamiento y análisis bioquímico. Se hizo análisis cinético y fotocolorimétrico de niveles de glucosa, colesterol-total, colesterol-HDL, triglicéridos, proteínas-totales, albúmina, calcio, fosfatasa alcalina, ALT y γ-GT, usándose kits específicos (FAR, Italia), y un analizador bioquímico (SINOWA, China). Este procedimiento se realizó 1 vez por semana por 4 semanas. Las diferencias entre los valores bioquímicos en fresco y post-descongelado fueron evaluadas por T-Student pareado con un nivel de confianza del 95%. Sólo los valores de triglicéridos en plasma seminal de alpacas se modificaron debido al proceso de congelación/descongelación lo que se debería a la labilidad de estas moléculas a dichos procesos, los valores de triglicéridos (mg/dL) fueron 44.12±7.38 y 27.31±4.65 en fresco y postdescongelación, respectivamente. Se concluye que tras la descongelación del plasma seminal, únicamente los niveles de triglicéridos en plasma seminal se modifican, lo que supondría tomar en consideración este componente cuando se realice la formulación de criopreservantes.

Sperm survival in frozen semen appears to be determined largely by the amount of intracellular enzymes during freezing and thawing. Data is presented to show the effects of different diluents, temperature and glycerol as well as egg yolk concentrations, on glutamic-oxaloacetic-transaminase release. Summary in Chinese and in English

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Thesis (M. Sc.) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv.

Bromus sterilis L. (barren brome) spreads rapidly in many European regions. In the Czech Republic, its importance has increased dramatically over the past 10 years. Barren brome is reported as a problem weed in winter crops such as winter wheat, winter barley and oil seed rape, in vineyards and in other cultivated places. Barren brome has been becoming troublesome weed of winter cereals mainly in reduced soil tillage systems. The factors, that are important for its spreading and adaptability under different environmental conditions, are dormancy and germination. Optimal timing for seed germination varies with respect to natural conditions and it is determining for plant development. These traits are adapted to different conditions and habitats; therefore the dormancy and germination response patterns to those conditions vary significantly. Recently there are not many information available on germination behaviour, therefore this study was focused on seeds of barren brome and its characteristics, which were collected in different regions of the Czech Republic. Seeds were investigated under different temperatures, light regimes and water stress in a wide range of conditions. The following characteristics of seeds were studied the dormancy, the dynamics of germination, the temperature optimum, the age of seeds and dynamics of emergence from different depths and persistence in the soil profile under field conditions. Dormancy and germination are influenced by external conditions. The dormancy of seeds barren brome is very short or missing. The germination is influenced by light; the seeds germinated better under darkness than under light regime. The primary dormancy of B. sterilis was short and the seeds needed only three weeks for after-ripening. The seeds of B. sterilis showed broad ecological valence to hydrothermal factors germinating in the wide range of 3 to 35 °C. The temperature optimum is 5-23°C. The germination was only slightly influenced in an environment with low water potential. Germination was limited under water stress only at lower temperatures under 10°C. The response to light at various temperatures showed that seeds germinated better in darkness in all temperatures regimes, than in alternating light regime, especially at lower temperatures. The emergence declined significantly with burial depth (under 40 mm). The seeds were not able to survive in the soil seed bank for a longer time and fall seeds lost viability after 1 year burial in soil profile. These results may be of value for development of predictive models and understanding period when weed control may be most feasible.

A busca de estratégias eficientes para a manutenção de espécies em risco de extinção tem impulsionado a comunidade científica a pesquisar alternativas para a preservação de material genético, com intuito de formação de bancos de genoma e aplicação de biotécnicas reprodutivas. Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos de dois protocolos diferentes de resfriamento pré-congelamento para a criopreservação de sêmen de jaguatirica (n=3), gato-do-mato-pequeno (n=4) e gato doméstíco (n=15). Apenas seis amostras de sêmen de jaguatirica, sete de gato-do-mato-pequeno e treze amostras de gato doméstico apresentaram características qualitativas e quantitativas para serem submetidas aos dois métodos de resfriamento. Estas amostras foram processadas e diluídas em meio crioprotetor, com 4% de glicerol e divididas em duas alíquotas submetidas ao método rápido (30 min a 4°C) ou lento (= 2 horas a 4°C) de resfriamento e, em seguida congeladas. Após o descongelamento as amostras foram avaliadas para índice de motilidade, percentual de células com acrossoma intacto e de células viáveis. Ovócitos de gatas domésticas maturados in vitro foram utilizados para avaliar a capacidade de ligação espermática à zona pelúcida, em ensaios de ligação competitiva in vitro. Os espermatozóides criopreservados pelos dois métodos, diferenciados entre si pelo uso de corante vital, competiram pela ligação à zona pelúcida dos mesmos ovócitos, em iguais condições de tratamento. O índice médio da motilidade espermática, pós-congelamento, foi de aproximadamente 50% para todas as espécies nos dois métodos de resfriamento. O percentual de células com acrossoma intacto, para a jaguatirica, foi de aproximadamente 20% nos dois métodos de resfriamento enquanto o gato-do-mato-pequeno apresentou 30,8% de células com acrossoma intacto no método de resfriamento rápido e 33,4% no método lento. Para o gato doméstico, o percentual de células com acrossoma intacto foi de 33,4% e 32,7% nos métodos de resfriamento rápido e lento, respectivamente. O sêmen do gato-do-mato-pequeno sofreu a menor redução no percentual de células viáveis com 51,2% no método de resfriamento rápido e 44% no método lento. A jaguatirica apresentou os menores índices entre as três espécies com 24% de células viáveis no método rápido e 27,4% no método lento, e o gato doméstico apresentou 28,6% e 28,2% de células viáveis nos métodos rápido e lento, respectivamente. O número médio de espermatozóides ligados por ovócito foi maior (p < 0,05) para o resfriamento lento do sêmen de gato-do-mato-pequeno (5,8 +- 0,9) do que para o resfriamento rápido (2,7 +- 0,4). Já o resfriamento rápido proporcionou melhores resultados na taxa de ligação espermática para a jaguatirica (8,5 +- 1,3) (p < 0,01) e para gato doméstico (4,3 +-0,9) (p< 0,05), enquanto o método de resfriamento lento proporcionou 2,5 +- 0,3 espermatozóides de jaguatirica e 1,4 +- 0,2 espermatozóides de gato doméstico ligados por ovócito. As diferentes respostas entre as espécies podem ser devidas a características espermáticas espécie-específicas e individuais. Os resultados permitiram inferir que os protocolos de criopreservação devem ainda ser aperfeiçoados e adaptados à cada espécie e que o ensaio de ligação espermática competitiva foi eficiente na detecção de diferenças na função espermática entre tratamentos, o que não foi possível com as avaliações espermáticas de rotina

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-26Bitstream added on 2014-06-13T20:46:11Z : No. of bitstreams: 1 crespilho_am_dr_botffmvz.pdf: 1224891 bytes, checksum: 5f6cd3bb0ea028b0690772b9a9bf8493 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do estudo foi comparar a efetividade de três diluidores empregados para criopreservação e refrigeração do sêmen bovino em relação aos padrões de motilidade, integridade de membrana plasmática e acrossomal, índice de peroxidação lipídica e fertilidade nos programas de inseminação artificial em tempo-fixo (IATF). No Trabalho científico número 1 foi comparado a viabilidade e fertilidade pós-descongelação proporcionada pelos diluidores Tris-frutose (TRIS, Controle) e Botu-Bov® (BB), ambos contendo 20% de gema de ovo como fonte de lipoproteínas, frente à diluição em Botu- Bov®-Lecitina de Soja (meio BB-L) apresentando 1% de lecitina em substituição ao produto de origem animal. No Trabalho 2 foram avaliados os mesmos diluentes quando utilizados para a refrigeração do sêmen bovino por 48 horas a 5°C. Já no Trabalho número 3 foi avaliada a taxa de concepção na inseminação artificial (C/IA) proporcionada pelo sêmen bovino refrigerado por 24 horas em meio Botu-Bov® em comparação ao sêmen convencionalmente criopreservado no mesmo diluidor. Os meios TRIS e BB a base de gema de ovo foram mais efetivos na manutenção da viabilidade espermática pósdescongelação, conferindo melhores resultados de C/IA (P<0,05) em relação ao meio BBL. No entanto, quando utilizado o sêmen na forma líquida e refrigerado (Trabalho número 2) foi observada uma maior proteção contra o estresse oxidativo proporcionado pelo diluidor a base de lecitina de soja, resultando em maior probabilidade de prenhez quando comparado às amostras refrigeradas em TRIS ou BB, alcançando índice de concepção similar ao obtido com o sêmen congelado. A utilização do sêmen bovino refrigerado por 24 horas levou ao aumento da C/IA de vacas submetidas a IATF quando comparado ao sêmen congelado em meio Botu-Bov®. Conclui-se que embora a lecitina de soja represente... / The aim of this study was to compare three different extenders used for cryopreservation of bovine semen, based on the results obtained during the cooling storage and post-thaw evaluation for motility patterns, integrity of plasmatic and acrossomal membranes, lipid peroxidation rate, as well as conception rate after fixed-time artificial insemination (FTAI). In Paper.1, the efficiency of Tris-Fructose extender (TRIS, control group), Botu-Bov® extender (BB), both containing 20% of egg yolk, and Botu-Bov®-Lecithin extender (BBL), which has 1% of soy lecithin instead of egg yolk, were compared in cryopreservation of bovine semen. In Paper.2, ejaculates from different bulls were cooled to 5°C for 48 hours using the same extenders of Paper.1. In Paper.3 the fertility trial was conducted either with frozen-thawed semen or cooled semen for 24 hours in the BB extender. The egg yolk extenders, TRIS and BB, demonstrated significant differences on the viability and the fertility of frozen-thawed bovine semen when compared to BB-L (P<0.05). However, the use of lecithin instead of egg yolk on semen extender resulted in a greater protection against oxidative stress; moreover, this extender improved the conception rates, reaching the results obtained in FTAI programs with frozen-thawed semen. The use of cooled bovine semen at 5°C for 24 hours improves the conception rate of Nelore cows submitted to FTAI. Although soy lecithin is an interesting alternative source of phospholipids in the elaboration of chemically defined extenders and decrease the risk of microbiological contamination, the egg yolk semen extenders are more effective in preserving the viability and fertility of frozen-thawed bovine semen. However, there was a higher production of free radicals in cooled semen with the use of egg yolk based extenders, resulting in lower conception rates when compared to frozen-thawed... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T18:46:35Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_ces_dr_botfmvz.pdf: 1119134 bytes, checksum: 2a9658153aec069a334942b772885d58 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente estudo objetivou identificar o perfil eletroforético seminal, as características do espermograma e fertilidade in vitro, do sêmen de touros proveniente dos períodos pré e pós-indução do processo degenerativo testicular por insulação. Para isso, foram selecionados quatro animais da raça Nelore, com idade entre trinta e trinta e seis meses. Amostras de sêmen foram colhidas três dias antes (P0) da indução do processo degenerativo e, sete (P7), quatorze (P14) e vinte e um (P21) após a retirada do insulto testicular com cinco dias de duração. Para a análise dos dados foram considerados três experimentos: 1) efeito dos períodos experimentais (P0, P7, P14 e P21) sobre o espermograma e perfil eletroforético do plasma seminal e membrana plasmática dos espermatozóides; 2) efeito dos períodos experimentais e seleção espermática por gradiente de Percoll sobre as características seminais e 3) fertilidade in vitro e associação com características seminais oriundas do período pré e pósinsulto testicular. No experimento 1, os espermogramas foram avaliados por métodos convencionais, coloração de Fuelgen para estimativa do percentual de fragmentação nuclear (FN) e, perfil eletroforético do plasma seminal e espermatozóides por SDSPAGE a 12,5%... / The study was conducted to evaluate the seminal gel electrophoresis profile, spermogramme characteristics and in vitro fertility rate, of semen obtained before and after induction of the testicular degenerative process by scrotal insulation. Four Nelore bulls, between thirty and thirty-six months of age, were subjected to a five days scrotal insult. Semen samples were collected three days (P0) before scrotal insulation and seven (P7), fourteen (P14) and twenty-one (P21) days after the removal of the testicular insult. Three experiments were considered for data analysis: 1) effect of the experimental periods (P0, P7, P14 and P21) on the spermogramme and seminal plasma and plasmatic membrane of spermatozoa gel electrophoresis profile; 2) effect of the experimental periods and sperm selection by Percoll gradient on the seminal characteristics; and 3) in vitro fertility rate and association with seminal characteristics from periods before and after testicular insult. In the experiment 1, the spermogrammes were evaluated by conventional methods beside in the Fuelgen stain for nuclear fragmentation (NF) and proteins profile by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE, 12,5%)...