Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:11Z : No. of bitstreams: 1 000829196.pdf: 397092 bytes, checksum: ae8c06f67bfaa9d589934981c550dd81 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A hipertensão arterial representa um fator de risco sistêmico para várias doenças incluindo redução da massa óssea por aumentar a reabsorção e diminuir a formação óssea. Considerando que a formação óssea é resultante da atividade de osteoblastos, o objetivo deste estudo foi avaliar as características fenotípicas e genotípicas de células osteoblásticas diferenciadas de CTMs (células-tronco mesenquimais) de SHR. A partir de medulas ósseas de fêmures de SHR, CTMs foram obtidas por adesão ao plástico de cultura de células e diferenciadas em osteoblastos por cultura em meio osteogênico até que atingissem a subconfluência. Em seguida, as células foram subcultivadas na densidade de 2x104 células/poço em placas de 24 poços. Células obtidas de Wistar foram utilizadas como controle. Para a avaliação das respostas celulares foram realizados ensaios de proliferação celular, atividade de fosfatase alcalina (ALP), formação de matriz mineralizada e expressão gênica dos marcadores osteoblástico: 1) runt-related transcription fator 2 (RUNX2), 2) Osterix (OSX), 3) Fosfatase alcalina (ALP), 4) Proteína óssea morfogenética 2 (BMP2); 5) Sialoproteína óssea (BSP), 6) Osteocalcina (OC), 7) Osteopontina (OPN), 8) e Colágeno (COL), além dos receptores β1 e β2 adrenérgicos. Os dados foram comparados pelo teste ANOVA seguido do teste de Tukey, e o nível de significância adotado foi de 5% (p≤0,05). Células osteoblásticas de SHR apresentaram alterações no fenótipo osteoblástico, exibindo, em todos os períodos avaliados, menor proliferação celular, atividade de ALP e formação de matriz mineralizada. A expressão gênica de todos os marcadores ósseos também foi menor em SHR quando comparado com Wistar na maioria dos períodos avaliados. A expressão gênica do receptor β2 adrenérgico foi maior em SHR em todos os períodos avaliados e não foi detectada... / Hypertension is a systemic risk factor for several diseases including reduction of bone mass by increasing bone resorption and reducing bone formation. Considering that bone formation results from osteoblast activity, the aim of this study was to assess the phenotypic and genotypic characteristics of osteoblastic cells differentiated from MSCs of SHR. Bone marrow was harvested from SHR femurs and MSCs were selected by adherence to plastic cell culture and differentiated into osteoblasts by culturing in osteogenic medium until subconfluence. Then, the cells were subcultured at a density of 2x104 cells / well in 24 well plates. Cells from Wistar rats were used as control. Cells responses were evaluated by assaying proliferation, alkaline phosphatase activity (ALP), mineralized matrix formation and the gene expression of the osteoblastic markers: runt-related 1) runt-related transcription fator 2 (RUNX2), 2) Osterix (OSX) 3) Alkaline phosphatase (ALP), 4) Bone morphogenetic protein 2 (BMP2); 5) Bone sialoprotein (BSP), 6) Osteocalcin (OC), 7) Osteopontin (OPN), 8) and Collagen type 1 alpha (COL), in addition to the gene expression of β1 and β2 adrenergic receptors. Data were compared by ANOVA followed by Tukey test and the level of significance was 5% (p ≤ 0.05). SHR derived osteoblasts showed changes in osteoblastic phenotype, exhibiting in all periods reduced cell proliferation, ALP activity and mineralized matrix formation. The gene expression of all bone markers was also lower in SHR compared with Wistar in many periods. The gene expression of the β2 adrenergic receptor was greater in SHR in all periods and it was not detected the expression of β1receptor either in SHR or Wistar. Based on these results, we conclude that osteoblasts differentiated from SHR MSCs exhibit reduced or delayed in the differentiation process. We also suggest...

Submitted by LUIZ HENRIQUE NATALI null (luhnatali@hotmail.com) on 2016-08-30T19:05:39Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO completa.pdf: 1855365 bytes, checksum: e1aaabe0f34e47039840d7783425d449 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-08-31T16:37:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 natali_lh_me_araca.pdf: 1855365 bytes, checksum: e1aaabe0f34e47039840d7783425d449 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T16:37:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 natali_lh_me_araca.pdf: 1855365 bytes, checksum: e1aaabe0f34e47039840d7783425d449 (MD5) Previous issue date: 2016-08-01 / A hipertensão arterial é frequentemente associada à prejudicada sensibilidade do barorreflexo (SBR). Em ratas espontaneamente hipertensas (SHR), a gravidez reduz a pressão sanguínea, e este efeito tem sido associado ao aumento da biodisponibilidade de óxido nítrico (NO). O aumento da biodisponibilidade do NO tem sido associado a uma SBR restaurada em animais hipertensos. Por isso, testamos a hipótese de que a gravidez melhora a SBR em SHR. Foram realizados experimentos em ratas Wistar e SHR não prenhas (NP) e prenhas (P), sendo dez virgens e dez prenhas em cada grupo, para avaliar a modulação autonômica cardíaca e vasomotora, a SBR em condições basais (espontânea) e após a administração de doses de fenilefrina (FE) e nitroprussiato de sódio (NPS). Séries temporais com valores de intervalo de pulso (IP) e de pressão arterial sistólica (PAS) foram geradas e tiveram espectros calculados pela Transformada Rápida de Fourrier. Em seguida, os espectros foram integrados em bandas de baixa (LF) e alta freqüência (HF), e os poderes das bandas foram tomadas como índices de modulação autonômica cardiovascular. Observamos reduzida pressão arterial média em ratas Wistar prenhas (W-P) e SHR prenhas (SHR-P) quando comparado com ratas NP, no entanto, a frequência cardíaca basal não foi alterada. Em SHR-NP, a análise espectral revelou modulação autonômica cardiovascular alterada quando comparado com os outros grupos (banda de alta LF do espectro PAS e banda de alta HF dos espectros IP). No entanto, em SHR-P os parâmetros autonômicos foram encontrados semelhantes aos observados em ratas Wistar-NP, sugerindo que a prenhez restaurou as alterações na modulação autonômica. A SBR espontânea não foi alterada em SHR-P quando comparado com W-P. A prenhez reduziu a SBR durante situações de hipotensão no grupo Wistar. A SBR avaliada após a administração de FE ou NPS foi menor em SHR-NP em comparação com Wistar-NP, e não se alterou pela prenhez. Em conclusão, a gravidez não melhorou as SBR em SHR, mas normalizou a alterada modulação vasomotora simpática e a modulação parassimpática cardíaca observados em SHR-NP. / Hypertension is frequently associated to impaired baroreflex sensitivity (BRS). In spontaneously hypertensive rats (SHR), pregnancy reduces blood pressure, and this effect has been associated to increased nitric oxide (NO) availability. Increased NO bioavailability has been linked to improved BRS in hypertensive animals. Therefore, we tested the hypothesis that pregnancy improves the BRS in SHR. Experiments were performed to evaluate the vasomotor and cardiac autonomic modulation, and the BRS at baseline conditions (spontaneous) and after phenylephrine (PE) and sodium nitroprusside (SNP) administrations in female non-pregnant (NP) and pregnant (P) Wistar rats and SHR. Time series with pulse interval (PI) and systolic arterial pressure (SAP) values were generated and had spectra calculated by Fast Fourier Transform. Next, spectra were integrated into low (LF) and high frequency (HF) bands, and the powers of the bands were taken as indexes of cardiovascular autonomic modulation. Reduced mean arterial pressure was observed in Wistar pregnant (W-P) and SHR pregnant (SHR-P) when compared to NP matched rats, however the heart rate was not altered. In SHR-NP, spectral analysis revealed altered cardiovascular autonomic modulation when compared to the other groups (high LF band of the SAP spectra and high HF band of the PI spectra). However, in SHR-P the autonomic parameters were found similar to those observed in Wistar-NP, suggesting that pregnancy prevented changes in autonomic modulation. Spontaneous BRS was not altered in SHR-P when compared to W-P. Pregnancy reduced the BRS during hypotension in Wistar group. BRS assessed with PE and SNP administration was found lower in SHR-NP as compared to Wistar-NP, and it was not altered by pregnancy. In conclusion, pregnancy did not improve the BRS in SHR but normalized altered sympathetic vasomotor modulation and parasympathetic cardiac modulation in SHR.

Submitted by SIMONE REGINA POTJE null (simonepotje@hotmail.com) on 2017-01-20T14:12:22Z No. of bitstreams: 1 Tese Final Potje et al., 2017.pdf: 2363609 bytes, checksum: 76652ad37a98422f380b06f5e4c841b9 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-24T18:03:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 potje_sr_dr_araca.pdf: 2363609 bytes, checksum: 76652ad37a98422f380b06f5e4c841b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-24T18:03:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 potje_sr_dr_araca.pdf: 2363609 bytes, checksum: 76652ad37a98422f380b06f5e4c841b9 (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O TERPY promove efeito hipotensor de maior magnitude em ratos hipertensos (SHR e 2R-1C) do que em ratos normotensos (Wistar e 2R). Foi demonstrado anteriormente que o endotélio prejudica o efeito vasodilatador do TERPY em aorta de Wistar. No entanto, observamos que o endotélio melhora os efeitos vasodilatadores do TERPY em aorta de SHR. Vasos sanguíneos de menor calibre, tais como as artérias de resistência, estão associadas ao controle da resitência vascular periférica e da pressão arterial. Nossa hipótese é que o TERPY induz relaxamento nas artérias mesentéricas de resistência em SHR e que as células endoteliais modulam positivamente o efeito do TERPY nestes vasos sanguíneos. Portanto, o nosso objetivo foi avaliar o efeito vasodilatador do TERPY em anéis com e sem endotélio de artéria mesentérica de ratos SHR, o seu mecanismo de relaxamento e a participação da NOS sobre esse efeito. e a Nossos resultados mostraram que o TERPY induziu um efeito vasodilatador dependente da concentração em anéis de artérias mesentéricas (2º e 3º ramos) de SHR e de ratos Wistar. A potência do TERPY foi maior em anéis intactos do que em anéis sem endotélio em artérias mesentéricas de SHR, mas em Wistar o endotélio prejudicou o efeito do TERPY. Nas artérias mesentéricas sem endotélio de SHR, o efeito do TERPY é dependente da atividade da guanilato ciclase solúvel e de canais para potássio. Nas artérias mesentéricas intactas de SHR, o efeito de TERPY depende da atividade de eNOS, mas não é dependente das atividades de nNOS, iNOS ou da via da ciclooxigenase. O TERPY promove a fosforilação da eNOS nos resíduos de serina1177 e aumenta a concentração de óxido nítrico em células endoteliais isoladas de artérias mesentéricas de SHR. Nossos resultados mostraram que a guanilato ciclase solúvel, os canais para potássio e a eNOS estão envolvidos no efeito vasodilatador estimulado pelo TERPY nas artérias de resistência mesentérica de SHR. Numa segunda parte deste estudo, avaliamos o mecanismo de ação de TERPY e seu efeito sobre a atividade da eNOS em células endoteliais. As células HUVEC, WT-HEK e HEK-eNOS foram tratadas com TERPY em diferentes tempos (0 a 60 minutos). Foram analisados por Western blotting o efeito do TERPY sobre a fosforilação de eNOS, monômero e dímero da eNOS e sobre monômero e oligômero de caveolina-1. Também foi avaliado o efeito do TERPY na interação eNOS/Cav-1 através de co-imunoprecipitação. As alterações induzidas pelo TERPY sobre as concentrações de espécies reativas de oxigênio e peroxinitrito em células endoteliais foram medidas usando sonda DHE e biossensor 7-CBA, respectivamente. A concentração de óxido nítrico (NO) foi avaliada por sonda DAF-FM e sensor Cooper. O TERPY promoveu desacoplamento e disfunção da eNOS, dependente de BH4. A desestabilização dos oligômeros da caveolina-1 foi induzida pelo TERPY. Consequentemente, o TERPY reduziu a interação eNOS/Cav-1 e promoveu ativação da eNOS. Nossos resultados mostraram que a atividade da eNOS pode ser regulada de duas maneiras diferentes pelo TERPY. O TERPY promove desacoplamento e fosforilação da eNOS, promovendo uma estratégia diferente para a regulação da atividade desta enzima. As moléculas químicas ou biológicas como o TERPY que regulam a atividade da eNOS e aumentam a produção e a biodisponibilidade de NO teriam ações terapêuticas importantes para o tratamento de doenças vasculares associadas a hipertensão. / CNPq: 141323/2013-2

Orientador: Cristina Antoniali Silva / Coorientador: Adalberto Luiz Rosa / Banca: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Banca: Márcio Mateus Beloti / Banca: Mário Taba Júnior / Banca: Natália Marcumini Pola / Resumo: A hipertensão arterial representa um fator de risco sistêmico para várias doenças incluindo redução da massa óssea por aumentar a reabsorção e diminuir a formação óssea. Considerando que a formação óssea é resultante da atividade de osteoblastos, o objetivo deste estudo foi avaliar as características fenotípicas e genotípicas de células osteoblásticas diferenciadas de CTMs (células-tronco mesenquimais) de SHR. A partir de medulas ósseas de fêmures de SHR, CTMs foram obtidas por adesão ao plástico de cultura de células e diferenciadas em osteoblastos por cultura em meio osteogênico até que atingissem a subconfluência. Em seguida, as células foram subcultivadas na densidade de 2x104 células/poço em placas de 24 poços. Células obtidas de Wistar foram utilizadas como controle. Para a avaliação das respostas celulares foram realizados ensaios de proliferação celular, atividade de fosfatase alcalina (ALP), formação de matriz mineralizada e expressão gênica dos marcadores osteoblástico: 1) runt-related transcription fator 2 (RUNX2), 2) Osterix (OSX), 3) Fosfatase alcalina (ALP), 4) Proteína óssea morfogenética 2 (BMP2); 5) Sialoproteína óssea (BSP), 6) Osteocalcina (OC), 7) Osteopontina (OPN), 8) e Colágeno (COL), além dos receptores β1 e β2 adrenérgicos. Os dados foram comparados pelo teste ANOVA seguido do teste de Tukey, e o nível de significância adotado foi de 5% (p≤0,05). Células osteoblásticas de SHR apresentaram alterações no fenótipo osteoblástico, exibindo, em todos os períodos avaliados, menor proliferação celular, atividade de ALP e formação de matriz mineralizada. A expressão gênica de todos os marcadores ósseos também foi menor em SHR quando comparado com Wistar na maioria dos períodos avaliados. A expressão gênica do receptor β2 adrenérgico foi maior em SHR em todos os períodos avaliados e não foi detectada... / Abstract: Hypertension is a systemic risk factor for several diseases including reduction of bone mass by increasing bone resorption and reducing bone formation. Considering that bone formation results from osteoblast activity, the aim of this study was to assess the phenotypic and genotypic characteristics of osteoblastic cells differentiated from MSCs of SHR. Bone marrow was harvested from SHR femurs and MSCs were selected by adherence to plastic cell culture and differentiated into osteoblasts by culturing in osteogenic medium until subconfluence. Then, the cells were subcultured at a density of 2x104 cells / well in 24 well plates. Cells from Wistar rats were used as control. Cells responses were evaluated by assaying proliferation, alkaline phosphatase activity (ALP), mineralized matrix formation and the gene expression of the osteoblastic markers: runt-related 1) runt-related transcription fator 2 (RUNX2), 2) Osterix (OSX) 3) Alkaline phosphatase (ALP), 4) Bone morphogenetic protein 2 (BMP2); 5) Bone sialoprotein (BSP), 6) Osteocalcin (OC), 7) Osteopontin (OPN), 8) and Collagen type 1 alpha (COL), in addition to the gene expression of β1 and β2 adrenergic receptors. Data were compared by ANOVA followed by Tukey test and the level of significance was 5% (p ≤ 0.05). SHR derived osteoblasts showed changes in osteoblastic phenotype, exhibiting in all periods reduced cell proliferation, ALP activity and mineralized matrix formation. The gene expression of all bone markers was also lower in SHR compared with Wistar in many periods. The gene expression of the β2 adrenergic receptor was greater in SHR in all periods and it was not detected the expression of β1receptor either in SHR or Wistar. Based on these results, we conclude that osteoblasts differentiated from SHR MSCs exhibit reduced or delayed in the differentiation process. We also suggest... / Doutor

Orientador: Horácio Faig Leite / Banca: Raquel Guedes Fernandes / Banca: Janete Dias Almeida / Resumo: Este trabalho analisou a ação local do alendronato sódico no processo de reparação óssea em fêmures de ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Foram utilizados quarenta ratos machos e quarenta fêmeas, para a confecção de um defeito ósseo de 2,5mm de diâmetro. De acordo com o material utilizado, criaram-se quatro grupos: controle (C), amido (Am), alendronato 1mol (A1) e alendronato 2mol (A2). Os animais do grupo C não tiveram seus defeitos ósseos preenchidos. Após o período de sete e 21 dias, os animais foram sacrificados. Foi realizada a análise histológica e histomorfométrica e os dados submetidos à análise estatística ANOVA. Aos sete dias, encontrava-se tecido conjuntivo com hemorragia e infiltrado inflamatório ocupando a área do defeito em todos os grupos experimentais e, em alguns grupos, focos de matriz osteóide. Os animais dos grupos A1 e A2 apresentavam uma rede de fibrina no tecido conjuntivo. Aos 21 dias, as trabéculas ósseas fechavam praticamente toda a extensão do defeito nos grupos C e Am. No grupo A1 de animais machos, observavam-se trabéculas que se irradiavam do interior da medula óssea até a área do defeito. Nos demais grupos A1 e A2 constatava-se apenas a presença de tecido conjuntivo, com deposição de fibras colágenas e mínima deposição de matriz osteóide. Um achado histológico marcante foi a formação de tecido ósseo extra-cortical subperiosteal nos animais dos grupos A1 e A2. O estudo concluiu que, neste modelo experimental, a administração local do alendronato sódico não contribuiu para o processo de reparação óssea nas concentrações molares utilizadas. / Abstract: This study evaluated the local action of alendronate sodium on bone repair in spontaneously hypertensive rats (SHR). A bone defect of diameter 2,5mm was created in forty males and forty females. Four groups were created according to the treatment received: control (C), amido (Am), alendronate 1mol (A1) and alendronate 2mol (A2). The C group did not have their defect filled in with any material. The animals were sacrificed seven and 21 days after the surgical procedure. Histological and histomorfometric analyses were performed and the results submitted to ANOVA statistical analysis. On the seventh day, all groups presented a connective tissue with hemorrhage and inflammatory cells in the bone defect. In some groups osteoid matrix was observed. In A1 and A2 groups, the animals also presented a fibrin deposition. After 21 days, a formation of bone trabeculae was observed closing the superficial extension of the bone defect in C and Am groups. On male rats of group A1, the trabeculae formation projected from inside the bone medulla to the defect site, without completely closing it. In the others animals of groups A1 and A2, bone trabeculae were not observed in the defect site. It was only observed a deposition of dense collagen fibers and minimal osteoid matrix. An important histological feature found in this study was the formation of extra-cortical subperiosteal bone in the animals of A1 and A2 groups. The study concluded that the local administration of alendronate sodium did not contribute for the bone repair, in this experimental model. / Mestre

Orientador: Cristina Antoniali Silva / Coorientador: Lusiane Maria Bendhack / Banca: Ana Paula Couto Davel / Banca: Irina Theodora Szazs / Resumo: O efeito hipotensor do TERPY é aumentado em SHR em comparação com ratos normotensos Wistar (WST), mas o seu relaxamento em anéis de aorta sem endotélio não difere entre os grupos. Trabalhamos com a hipótese de que o desacoplamento da óxido nítrico sintase (NOS) ou espécies reativas de oxigênio (EROs) podem prejudicar a biodisponibilidade de óxido nítrico (NO) liberado pelo TERPY e NPS (nitroprussiato de sódio) em seus efeitos hipotensores e vasodilatadores em SHR. Avaliamos o efeito do L-NAME (inibidor da NOS), da APOCININA (bloqueadora da NOX) e do TEMPOL (mimético da superóxido dismutase) na resposta hipotensora e na vasodilatação induzida pelos doadores de NO, TERPY e NPS, em aortas de WST e SHR. L-NAME aumentou o efeito hipotensor do TERPY em WST, mas não em SHR. Este efeito não foi alterado pelo TEMPOL, mas foi aumentado pela APOCININA em ambos os grupos. Essas drogas não alteraram o efeito hipotensor do NPS. A remoção do endotélio ou incubação com L-NAME diminuiu a potência do TERPY na aorta de SHR e aumentou na aorta de WST. TEMPOL e APOCININA aumentaram a potência do TERPY em aortas de WST e de SHR. Estes efeitos são independentes do endotélio em SHR e sensíveis ao endotélio em WST. A presença do endotélio e a incubação com TEMPOL ou APOCININA aumentou a potência do NPS em aortas de WST e SHR. Em conclusão, o efeito hipotensor do TERPY é prejudicado pela NOS em WST e pela NOX em WST e SHR. Por outro lado, o efeito hipotensor do NPS é semelhante em WST e SHR, que é independente da NOS e de EROs. Em aortas, EROs derivadas do endotélio prejudicam o relaxamento do TERPY em anéis de aorta de WST e SHR, e EROs liberadas a partir de células do músculo liso vascular (CMLV) também participam dessa resposta apenas em aortas de SHR / Abstract: The hypotension of TERPY is increased in SHR compared to Wistar (WST) rats, but its relaxation in denuded aortic rings is not different. We hypothesized that NO-synthase uncoupling or reactive oxygen species (ROS) could impair the NO bioavailability released from TERPY and SNP in their hypotensive and vasorelaxant effects in SHR. We evaluated the effect of the inhibitors L-NAME (NO-synthase) and APOCYNIN (NOX), and TEMPOL (superoxide dismutase mimetic) in the hypotensive effect and aorta vasodilatation induced by NO-donors in WST and SHR. L-NAME increased TERPY's hypotensive effect in WST, but not in SHR. This effect was not altered by TEMPOL, but it was increased by APOCYNIN in both groups. These drugs did not alter the SNP's hypotensive effect. Endothelium removal, or L-NAME, decreased the potency of TERPY in SHR aorta and increased it in WST aorta. TEMPOL and APOCYNIN increased the potency of TERPY in WST and SHR aortas. These effects are endothelium independent in SHR, and endothelium dependent in WST. Endothelium, TEMPOL and APOCYNIN increased the potency of SNP in aortas of WST and SHR. In conclusion, TERPY's hypotensive effect is impaired by NOS in WST and by NOX activity in WST and SHR. Otherwise, the hypotensive effect of SNP is similar in WST and SHR, which is independent of NOS and ROS. In aortas, ROS derived from endothelium impairs the relaxation of TERPY in aortic rings of WST and SHR, but ROS from vascular smooth muscle also participates in this response in SHR aorta / Mestre

Orientador: Cristina Antoniali Silva / Banca: Carlos Renato Tirapelli / Banca: Fernando Silva Carneiro / Resumo: As enzimas NAD(P)H oxidases ou família NOX tem sido considerada a principal fonte de espécies reativas de oxigênio (ERO) em vários tipos celulares. O aumento da biodisponibilidade de ERO e do sinal redox (estresse oxidativo) têm sido associados ao início e ou progressão de doenças crônicas como a hipertensão. Inibidores da NAD(P)H oxidase, como a apocinina, foram desenvolvidos e seus efeitos anti-hipertensivos têm sido estudados. O objetivo deste estudo foi verificar se o tratamento crônico com apocinina previne o desenvolvimento da hipertensão, da disfunção endotelial e da hipertrofia ventricular esquerda em Ratos Espontaneamente Hipertensos (SHR) e avaliar os possíveis mecanismos envolvidos nestes efeitos. Para isto, ratos normotensos Wistar e SHR foram tratados com apocinina (30 mg/kg/dia, diluída na água de beber) da quarta até a décima semana de vida. Foram realizados experimentos in vivo para avaliação de valores basais de pressão arterial (média - PAM, sistólica - PS e diastólica - PD), freqüência cardíaca (FC) e as respostas às drogas hipotensoras, acetilcolina (ACh) e nitroprussiato de sódio (NPS) e pressoras, fenilefrina (Phe) e angiotensina II (ANGII). Experimentos in vitro foram realizados para determinar se o tratamento com apocinina promove alterações na concentração citosólica de cálcio intracelular ([Ca2+]), de óxido nítrico ([NO]) e de espécies reativas de oxigênio ([ERO]) nas células endoteliais (citometria de fluxo), estimuladas ou não com acetilcolina; na expressão proteica (Western Blotting) de enzima óxido nítrico sintase endotelial... / Abstract: The enzymes NAD(P)H oxidases or family NOX has been considered the main source of reactive oxygen species (ROS) in various cell types. Increased ROS bioavailability and altered redox signaling (oxidative stress) have been implicated in the onset and/or progression of chronic diseases, including hypertension. NAD(P)H oxidase inhibitors, such as apocynin were developed and their antihypertensive effects have been studied. The aim of this study was to determine whether chronic treatment with apocynin prevents the development of hypertension, endothelial dysfunction and left ventricular hypertrophy in spontaneously hypertensive rats (SHR) and to evaluate the mechanisms involved in these effects. Normotensive Wistar rats and SHR were treated with apocynin (30 mg/kg/day, diluted in the drinking water) from the fourth to the tenth week of life. The studies in vivo were performed to assess baseline blood pressure (mean arterial pressure - MAP, systolic - SBP, and diastolic blood pressure - DBP), heart rate (HR) before and after the administration of acetylcholine (ACh), sodium nitroprusside (SNP), phenylephrine (Phe) and angiotensin II (ANG II). We performed experiments in vitro to determine whether the treatment with apocynin causes changes in: cytosolic concentration of intracellular calcium ([Ca2+]), nitric oxide ([NO]), and reactive oxygen species ([ROS]) in endothelial cells (flow cytometry) stimulated or not with acetylcholine; protein expression (Western blotting) of enzyme endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and of soluble guanylate cyclase... / Mestre

Orientador: Jose Antonio Rocha Gontijo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T09:09:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ciampone_Silmara_M.pdf: 1811942 bytes, checksum: fd75802fbe1b7948423532336096de22 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A hipertensão arterial é um dos principais fatores de risco para a alta morbidade e mortalidade cardiovascular. A prevalência mundial é estimada em 1 bilhão de indivíduos. No Brasil estima-se que essa prevalência esteja entre 20 a 44% da população, sendo 17 milhões de brasileiros portadores da patologia, acarretando um custo anual de 11 bilhões de reais para o tratamento da hipertensão. Com isso, a importância de estratégias não medicamentosas para a prevenção da patologia tem sido amplamente discutida. Dentre as várias condutas não farmacológicas utilizadas, a prática regular de atividade física é reconhecida pela literatura mundial como uma das intervenções mais importantes de prevenção e tratamento da hipertensão arterial. Diante da problemática exposta, o objetivo deste trabalho foi averiguar os efeitos da atividade física programada, com diferentes intensidades e duração do treinamento, sobre a pressão arterial sistêmica, a filtração glomerular, a manipulação renal de sódio e a expressão de angiotensina II através de seus receptores AT1 e AT2 e de suas vias de sinalização: JAK 2, STAT3, ERK 1-2 e SOCS-3, em rins de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e Wistar Kyoto (WKY). Os ratos foram divididos em 2 grupos SHR e WKy e depois subdivididos em sedentários e exercício, aleatoriamente. Os animais tiveram livre acesso a água e a comida. A atividade física aeróbia crônica foi realizada através de um treinamento diário com sobrecarga progressiva. Os animais foram pesados diariamente durante todo o período experimental. A aferição da pressão arterial foi realizada ao final de cada semana, ao longo das 10 semanas de treinamento, em todos os grupos. O estudo da função renal dos animais foi feito nas 2a e 10a semana de treinamento que correspondeu a 8º e 16º semana de vida, respectivamente. Os resultados mostraram que o exercício físico aeróbio promoveu significativa atenuação da pressão arterial em animais hipertensos (p < 0, 0001). Essa relevante resposta pressórica nos animais treinados pode estar relacionada à menor expressão renal dos receptores AT1 e sua subseqüente via de sinalização. Uma das hipóteses para esse acontecimento é a menor ativação da via JAK-2 apresentada por esses animais quando comparados ao grupo sedentário. A modificação do receptor e da resposta intracelular de sinalização do sistema renina-angiotensina pode ter ocasionado aumento significativo da fração de excreção de sódio (FE Na%), principalmente, nos segmentos distais do nefro. Este aumento na excreção tubular de sódio, prioritariamente no segmento espesso da alça de Henle, promoveu também maior excreção urinária de potássio. Concomitantemente, houve aumento das vias de sinalização STAT-3, ERK-1-2 e SOCS-3 nos animais hipertensos treinados. Os animais WKy não apresentaram modificações significativas nos parâmetros de massa corporal total e pressão arterial, além de não ocorrer significativas modificações na função renal e nas vias de sinalização como resposta ao treinamento crônico. Esses resultados mostraram que a atividade física aeróbia crônica promoveu positivas modificações nas respostas intracelulares em animais com níveis iniciais altos de pressão arterial. / Abstract: Progressive exercise training should be considered a valuable therapeutic choice in cardiovascular disease including arterial hypertension. Original observations, regarding the effects of long-term exercise training on blood pressure, renal sodium handling and renal renin-angiotensin-aldosterone (RAS) intracellular pathways in Okamoto-Aoki rats compared with appropriate age-matched WKy control subjects, arise from this study. The current study confirms that the initial body weight was slightly but significantly lowers in SHR and that SHR grew less rapidly over the observation period, and significant differences were observed after the age of 8 weeks only between TWKy and SWKy subgroups. As shown in Figure 1, tail arterial pressure (in mmHg) in SSHR was higher than in TSHR from 6 to 16 weeks of age. No significant difference of the blood pressure levels was observed at same period of time to SWKy and TWKy. Also, the continuous increased blood pressure in SHR was blunted and significantly reduced by long-term swim training exercise over a 6-wk period (between the age of 6-wk and 16-wk old). The novelty of the present investigation shows, at first time, a pronounced increase in fractional urinary sodium excretion in TSHR rats compared with SSHR age-matched group. The enhanced FENa and FEK at 16-wk-old TSHR was accompanied by an increase in FEPPNa and occurred despite significant decreased CCr, consequently fall in the sodium filtered load, and unchanged FEPNa. Furthermore, the immunoblotting analysis in the current study also unprecedentedly demonstrates a decreased expression of AT1R and signaling protein expression in the entire kidney of TSHR rats, compared to that observed in SSHR. Conversely, the expression of the AT2R in both, sedentary or training SHR and, signaling proteins in 16-wk-old TWKy compared with the SWKy age-matched group were unchanged. The present study might indicate that, also in the kidney, long-term exercise exerts a modulator effect on AngII receptor expression. Although the precise mechanism responsible for the subsequentlyenhanced sodium excretion response in TSHR rats is still unclear, the current data suggest that changes in renal functions are conducive to reduction hydroelectrolyte tubule reabsorption, and that this might attenuate the established adult hypertension. In fact, it is plausible to suppose that the present study supports the association of increasing natriuresis, reciprocal changes in renal AngII receptors and intracellular pathway protein with the fall of blood pressure levels found in TSHR compared with age-matched SSHR rats. / Mestrado / Medicina Experimental / Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador: Marilda Mazzali / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T09:11:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nicolielo_RenatoLuizCursino_M.pdf: 2896438 bytes, checksum: 3df4ea3bde6ce115708b78e7b010be98 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Hiperuricemia é associada ao desenvolvimento de remodelamento vascular e hipertensão arterial em modelos experimentais. Por outro lado, o uso de agentes redutores dos níveis de ácido úrico (hipouricemiantes) proporciona a normalização pressórica e proteção contra o desenvolvimento de doença renal. Objetivo: Determinar o efeito de agentes hipouricemiantes sobre a pressão arterial de animais SHR. Métodos: ratos machos SHR e WKY, com 4 semanas de idade, acompanhados durante 9 semanas. Os animais SHR foram tratados com alopurinol (SHRALP) ou benzbromarona (SHRBENZ). Pressão arterial de cauda, função renal e histologia renal foram comparados aos animais SHR não tratados (SHRCT) e aos controles normotensos WKY (WKYCT). Pressão arterial de cauda foi medida no período inicial e semanalmente até o sacrifício. Resultados: Tratamento com agentes hipouricemiantes reduziu a PA em animais SHR, com melhor controle no grupo SHRALP (SHRCT 214±7,7; SHRALP 164±3,5; SHRBENZ 179±2,3 mmHg, p<0,05). O tratamento foi associado com redução significativa dos níveis de ácido úrico comparado aos controles SHR (SHRCT 1,6±0,6; SHRALP 0,9±0,2*; SHRBENZ 1,0±0,4* mg/dl, *p<0.05). A função renal permaneceu inalterada em todos os grupos durante o acompanhamento. Análise histológica dos fragmentos renais mostrou redução significativa do percentual de arteríolas pré-glomerulares remodeladas nos animais tratados, em comparação aos controles SHR (84,3±8,5%SHRCT; 66,4±20,1%SHRALP*; 71,6±15,3% SHRBENZ* p<0,05). Espessamento de arteríolas pré-glomerulares, quantificada por método de captura de imagem computadorizada mostrou redução significativa da área de parede arteriolar nos animais tratados em comparação aos SHR não tratados (SHRCT). A espessura arteriolar do grupo SHRALP foi compatível a dos animais controles WKY. Conclusão: O uso de agentes hipouricemiantes foi associado com redução de PA e de remodelamento vascular de arteríolas préglomerulares em animais SHR. Como esses animais já apresentam nível sérico de ácido úrico mais elevado que os WKY com 4 semanas de vida, apesar de níveis pressóricos normais, intervenção em idades mais precoces talvez possa prevenir o desenvolvimento de hipertensão arterial e remodelamento vascular nestes animais. / Abstract: Hyperuricemia is associated with vascular remodeling and hypertension in experimental models, and use of uric acid (UA) lowering agents is associated with BP normalization and protection of renal disease. Aim: To determine the effect of UA lowering agents on BP in SHR animals. Methods: Male SHR and WKY rats, 4 weeks old, were followed for 9 weeks. SHR animals received allopurinol (SHRALP) or benzbromarone (SHRBENZ) and BP, renal function, and renal histology were compared to untreated SHR (SHRCT) and WKY controls (WKYCT). Blood pressure was measured at baseline and every week until sacrifice. Results: Treatment with UA lowering agents reduced BP in SHR, with better control in SHRALP group (SHRCT 214±7.7, SHRALP 164±3.5, SHRBENZ 179±2.3 mmHg, p<0.05). Treatment was associated with a significant reduction in serum UA levels compared to SHRCT (SHRCT 1.6±0.6, SHRALP 0.9±0.2*, SHRBENZ 1.0±0.4* mg/dl, *p<0.05). Renal function remained unchanged in all groups. Histological analysis showed a significant reduction in vascular remodeling in SHR treated with UA-lowering agents compared to SHRCT (84.3±8.5%SHRCT, 66.4±20.1%SHRALP*, 71.6±15.3% SHRBENZ* p<0.05). Pre-glomerular arterial thickness, measured by computer assisted analysis, showed a reduction in arteriolar wall area in SHR treated compared to SHRCT. Arteriolar thickness in SHRALP group was comparable to WKYCT. Conclusion: The use of UA lowering agents was associated with a reduction in BP and pre glomerular arteriolopathy in SHR. As SHR rats already had higher UA than WKY controls at 4 weeks of life, despite normal BP, an earlier intervention might prevent the development of hypertension and vascular remodeling in these animals. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-04-01T20:14:11Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Andrade Mourão - 2015.pdf: 2000857 bytes, checksum: 1da1abfc4f16d1970615dc3393d09323 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-04T14:50:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Andrade Mourão - 2015.pdf: 2000857 bytes, checksum: 1da1abfc4f16d1970615dc3393d09323 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T14:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Andrade Mourão - 2015.pdf: 2000857 bytes, checksum: 1da1abfc4f16d1970615dc3393d09323 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Studies have demonstrated that neurons in the median pre-optic nucleus (MnPO) play a key role in the organization of cardiovascular responses induced by changes in circulating volume mostly through their projections to the paraventricular nucleus (PVN) of the hypothalamus. PVN in turn, projects to the rostroventrolateral medulla (RVLM) one of the main generators nucleus of vascular sympathetic, renal and cardiac activity. However, the autonomic response of blocked of the MnPO and central pathways and / or mechanisms involved in these responses remains unknown. The present study sought to determine the involvement of the MnPO in cardiovascular and autonomic regulation in Wistar (WT) and spontaneously hypertensive rats (SHR). For these, rats of the lineages WT (n = 6) and SHR (n = 6), weighing between 250 and 300g were anesthetized with urethane (1.2 g / kg, iv.) after induction with halothane (2% in O2 100%). The right femoral artery and vein were cannulated for recording of mean arterial pressure (MAP), and infusion of drugs, respectively. Heart rate (HR) was calculated as instantaneous frequency signal electrocardiogram (ECG). The animals were positioned in a stereotaxic apparatus, and instrumented for recording renal sympathetic nerve activity (RSNA). The nanoinjections of saline (NaCl; 150 mM), kynurenic acid (glutamate receptor antagonist; 50 mM) and muscimol (GABA agonist; 4 mM) were also performed. As expected, saline nanoinjections did not change the values of MAP (WT: 0.4 ± 0.2 mmHg; SHR: 0.2 ± 0.4 mmHg), HR (WT: 0.7 ± 0.9 bpm; SHR, 1.1 ± 1.4 bpm) and RSNA (WT: 0.4 ± 0.2%; SHR: 0.2 ± 1.3%). In WT (n=6) rats, the blockade of the MnPO with muscimol promoted fall in MAP (-17.0 ± 1.2 mmHg), bradycardia (-55,4 ± 12,3 bpm) and reduces in RSNA (-37.5 ± 3.9 %). The muscimol nanoinjections into the MnPO in SHR (n=6) promoted hypotension (-31.6 ± 5.0 mmHg), bradycardia (-18.3 ± 7.2 bpm), and renal sympathoinhibition (-54.4 ± 6.2 %). The changes in cardiovascular and autonomic parameters were evaluated in WT and SH rats submitted to sinoartic denervation. In normotensive rats, the inhibition of the MnPO by muscimol promoted decrease of MAP in innervated rats (n=6) and denervated (-19.4 ± 1.9 vs. 20.9 ± 4.3 mmHg, respectively; 3min; n=6), which was maintained throughout the experimental period (13.5 ± 2.0 vs. 22.5 ± 4.3 mmHg, 30 min). Also did not evidenced differences in RSNA in WT innervated (-23.0 ± 1.5%; 3min) and denervated (-21.0 ± 4.9%; 3min) rats. In denervated hypertensive rats (n=5), the blocked of MnPO resulted in progressive decrease in MAP (-31.1 ± 6.7, ± 9.7 and -38.7 ± 7.1 -44.7 mmHg, respectively 3, 15 and 30 min after MnPO blockade). The changes observed in the HR (-1.3 ± 3.3; -21.5 ± 12.6 and -24.9 ± 12.2 bpm, respectively 3, 15 and 30 min after MnPO blockade) and RSNA (-16.4 ± 8.8; -37.3 ± 10.1 and -45.1 ± 8.7%, respectively 3, 15 and 30 min after MnPO blockade) also followed this pattern of response. Finally to identify the involvement of glutamatergic neurotransmission in the MnPO on the cardiovascular and autonomic control, nanoinjections of kynurenic acid were performed in this nucleus. The glutamatergic blockade promoted decrease in MAP (WT: -18.2 ± 4.1 mmHg; SHR: -21.0 ± 2.5 mmHg), bradycardia (WT: -7.1 ± 1, 9 bpm; SHR: -9.0 ± 6.0 bpm) and renal simpathoinhibition (WT: -19.7 ± 2.4%; SHR: -24.7 ± 2.4%) in normotensive and hypertensive rats. In summary, the results obtained on this study demonstrated that acute blockade of MnPO reduces blood pressure (BP), confirming recent data that indicate that this nucleus participates of tonic control on BP. Our data suggest the involvement of MnPO the tonic regulation of sympathetic activity in WT and SHR. In addition, suggest the participation of this nucleus in increased sympathetic activity and consequent arterial blood pressure in SHR. The results demonstrated that aortic and carotid afferent participates in the modulation of autonomic and cardiovascular responses induced by blockade the MnPO in SHR. Furthermore, our data suggest that glutamatergic neurotransmission in the MnPO is important for the tonic regulation of BP, HR and RSNA thus, bringing new evidence that this nucleus participates of the autonomic and cardiovascular control. / Estudos têm demonstrado que os neurônios do núcleo pré-óptico mediano (MnPO) desempenham um importante papel na regulação cardiovascular e hidromineral, principalmente, por meio de suas projeções para o núcleo paraventricular (PVN) do hipotálamo. O PVN, por sua vez projeta-se para a região rostroventrolateral do bulbo (RVLM) um dos principais núcleos geradores da atividade simpática vascular, renal e cardíaca. Todavia, as respostas autonômicas frente a inibição do MnPO, bem como vias centrais e/ou mecanismos envolvidos nessas respostas permanecem desconhecidos. O presente estudo buscou determinar a participação do MnPO na regulação autonômica e cardiovascular em ratos wistar (WT) e espontaneamente hipertensos (SHR). Para tanto, ratos das linhagens WT e SHR, pesando entre 250 e 350g foram anestesiados com uretano (1,2 g/kg, iv.) após a indução com halotano (2% em O2 100%). A artéria e veia femorais direitas foram canuladas para o registro da pressão arterial média (PAM), e a infusão de drogas, respectivamente. A frequência cardíaca (FC) foi calculada como frequência instantânea do sinal de eletrocardiograma (ECG). Os animais foram posicionados em um aparelho estereotáxico e instrumentalizados para registro da atividade nervosa simpática renal (ANSR), e nanoinjeções (100nl) de soro fisiológico (NaCl; 150mM); ácido quinurênico (antagonista glutamatérgico; 50mM) e muscimol (agonista gabaérgico; 4mM) no MnPO. Como esperado, as nanoinjeções de soro não alteraram os valores da PAM (WT: 0,4 ± 0,2 mmHg; SHR: 0,2 ± 0,4 mmHg), FC (WT: 0,7 ± 0,9 bpm; SHR; 1,1 ± 1,4 bpm) e da ANSR (WT: 0,4 ± 0,2 %; SHR: -0,2 ± 1,3 %).Em ratos WT (n=6), o bloqueio farmacológico do MnPO com muscimol promoveu queda na PAM (-17,0 ± 1,2 mmHg), bradicardia (-55,4 ± 12,3 bpm) e redução na ANSR (-37,5 ± 3,9 %). As nanoinjeções de muscimol no MnPO dos SHR (n=6) promoveram hipotensão (-31,6 ± 5,0 mmHg), bradicardia (-18,3 ± 7,2 bpm), e simpatoinibição renal (-54,4 ± 6,2 %). As variações dos parâmetros autonômicos e cardiovasculares induzidas pela inibição do MnPO também foram avaliadas em ratos WT e SHR submetidos à desnervação dos aferentes sinoaórticos. Nos ratos normotensos, a inibição do MnPO com muscimol promoveu queda na PAM nos ratos inervados (n=6) e desnervados (-19,4 ± 1,9 vs. -20,9 ± 4,3 mmHg, respectivamente; 3min; n=6), sendo esta mantida por todo período experimental (-13,5 ± 2,0 vs. -22,5 ± 4,3 mmHg; 30min). Também não foram evidenciadas diferenças na redução da ANSR nos ratos WT inervados (-23,0 ± 1,5 %; 3min) e desnervados (-21,0 ± 4,9 %; 3min). Nos ratos hipertensos desnervados (n=5), o bloqueio do MnPO promoveu uma progressiva redução na PAM (-31,1 ± 6,7; -38,7 ± 9,7 e -44,7 ± 7,1 mmHg; respectivamente 3, 15 e 30 min após o bloqueio do MNPO). As alterações promovidas na FC (-1,3 ± 3,3; -21,5 ± 12,6 e -24,9 ± 12,2 bpm; respectivamente 3, 15 e 30 min após o bloqueio do MNPO) e ANSR (-16,4 ± 8,8; -37,3 ± 10,1 e -45,1 ± 8,7 %; respectivamente 3, 15 e 30 min após o bloqueio do MNPO) também seguiram esse padrão de resposta. Por fim para identificarmos a participação da neurotransmissão glutamatérgica no MnPO sobre o controle cardiovascular e autonômico, nanoinjeções de ácido quinurênico foram realizadas neste núcleo. O bloqueio glutamatérgico no MnPO promoveu queda na PAM (WT: -18,2 ± 4,1 mmHg vs. SHR: -21,0 ± 2,5 mmHg), bradicardia (WT: -7,1 ± 1,9 bpm vs. SHR: -9,0 ± 6,0 bpm e simpatoinibição renal (WT: -19,7 ± 2,4 % vs. SHR: -24,7 ± 2,4 %). Em conjunto, os resultados obtidos nesse estudo demonstraram que o bloqueio agudo do MnPO reduz a pressão arterial (PA), corroborando com dados recentes que indicam que esse núcleo participa do controle tônico da PA. Nossos dados sugerem o envolvimento do MnPO na regulação tônica da atividade simpática em WT e SHR. Ademais, sugerem a participação desse núcleo no aumento da atividade simpática e consequente hipertensão arterial observada em SHR. Os resultados evidenciaram ainda, que os aferentes aórticos e carotídeos participam na modulação das respostas autonômicas e cardiovasculares induzidas pelo bloqueio do MnPO em SHR. Além disso, nossos dados sugerem que a neurotransmissão glutamatérgica no MnPO é importante para a regulação tônica da PA, FC e ANSR trazendo assim novas evidências de que esse núcleo participa do controle autonômico e cardiovascular.